0000
со ел Изобретение относитс к микробиологической пpo 1ышлeннocти, а именно к способам выделени биомассы микроорганизмов из культуральной жидкости, полученной при культивиро вании микроорганизмов. Известен способ выделени биомас сы микроорганизмов из культуральной жидкости, предусматривающий добавление белкового щелочного экстракта в качестве коагул та l . Коагул нтом служит щелочной экстракт сои. Недостатком способа вл етс невысока степень выделени биомассы . Цель изобретени - увеличение степени выделени . Указанна цель достигаетс тем, что при способе выделени биомассы микроорганизмов из культуральной жидкости, предусматривающем добавление белкового щелочного экстракта используют щелочной экстракт микроорганизмов в концентрации 0,005-0,5 выделение ведут при температуре 40-90 0 и рН смеси 5-8 или 2-4 дл дрожжей или бактерий соответственно при этом щелочной экстракт получают путем обработки сгущенной до 10-25% суспензии микроорганизмов избытком гидроокиси натри при 80-90°С в течение 1-2 ч. Способ осуществл ют следующим образом. Концентрируют суспензию микроорганизмов, полученную при выр щивании клеток микроорганизмов в водной питательной среде, в прйсутс ВИИ сврбо дного кислорода, содержащу источники углерода, подход щие дл ассимилировани клетками микроорганизмов , а также азота, фосфора и др гих необходимых дл роста клеток микроорганизмов питательных веществ В качестве источника углерода могут быть использованы различные виды углерод- и углеводородсодержащего сырь , например, И -парафизы нефти нефт ные дистилл ты, спирты, природ ный газ, а также продукты гидролизного производства, например маласса В раздел емую суспензию добавл ю щелочной экстракт микроорганизмов в количестве 0,005-0,5% в зависимости от вида микроорганизмов и их начальной(Концентраций в суспензии. В дро сжевую суспензию добавл ют аммиачную воду или щелочь до рН 5-8, рН бактериальной суспензии довод т до значений 2-4 добавлением фосфорной кислоты. Полученную смесь нагревают до 40-90с, причем дл сохранени питательных свойств готового продукта врем нагревани не должно превы шать 5-8 мин, и подают на сепарацию Дл получени щелочного экстракта суспензию микроорганизмов, например тех, которые содержатс в ко центрируемой суспензии, либо другой культуры с содержанием биомассы АСВ нагревают до температуры 80-90 С, добавл ют щелочь/ обычно гидрат окиси натри , до достижени рН 10-12 и выдерживают полученную смесь при данной температуре в течение 1-2 ч. Выделение биомассы путем добавлени щелочного экстракта микроорганизмов можно проводить как из культуральной жидкости, полученной после выращивани микроорганизмов с содержанием биомассы 0,5-3,0% АСВ, так и после предварительного сгущени ее до 3,0-8,0% АСВ. Наиболее целесообразно концентрировать суспензию с начальным содержанием биомассы 3,0-5,0% АСВ. В этом случае степень концентрировани .достигает 5-7 раз. При .большей начальной концентрации биомассы в культуральной жидкости степень концентрировани снижаетс , а при меньшей не удаетс достигнуть такой концентрации биомассы в сгущенной суспензии, при которой эту суспензию можно подавать на сушку, то есть до 20-25% АСВ. Пример. К 500 мл суспензии Микроорганизмов, полученной в результате выращивани дрожжей Candida duilliermondii на питательной среде с нормальными парафинами нефти и содержащей биомассу в количестве 3% АСВ, добавл ют аммиачную воду до установлени рН культуральной жидкости 7,2, а также смесь продуктов щелочной экстракции в количестве 0,01 вес.%, полученную путем обработки сгущенной до 15% АСВ суспензии тех же дрожжей избытком гидроокиси натри при температуре в течение 1,5 ч. Затем смесь нагревают до 65°С и сепарируют.в отстойной центрифуге с фактором разделен и 10000. Содержание биомассы в сгущенной суспензии составл ет 20,5% АСВ, т.е. степень концентрировани 6,8. Пример2. К 500 мл суспензии микроорганизмов, полученной в результате выращивани дрожжей Candid utilis на питательной среде с этиловым спиртом в качестве источника углерода и содержащей биомассу в количестае 3,5% АСВ, добавл ют аммиачную воду до установлени рН культуральной жидкости 7,1, а также смесь продуктов щелочной экстракции в количестве 0,2 вес.%, полученную таким же образом, как в примере 1. Затем смесь нагревают до 65°С и сепарируют в отстойной центрифуге с фактором разделени 1000. Содержание биомассы в сгущенной суспен-. зии составл ет 22% АСВ, т.е. степень концентрировани 6,3. П р и м е р 3. К 500 мл суспензии /микроорганизмов, полученной в результате выращипани дрожжей Candida lipolytica, на питательной среде с нефт ными дистилл тами в качестве источника углерода и содержащей био массу в количестве 4% АСВ, добавл ю аммиачную воду до установлени рН культуральной жидкости 7,4 и смесь продуктов щелочной экстракции в количестве 0,5 вес.% полученную пут обработки сгущенной до 12% АСВ суспензии тех же дрожжей избытком гидр окиси при в течение 1,5 ч. Затем смесь нагревают до и сепар руют в отстойной центрифуге с факто ром разделени 1,000. Содержание био массы в сгущенной суспензии составл ет 24% АСВ, т.е. степень концентрировани 6,0. Пример 4. К500МЛ суспен .зии микроорганизмов, полученной при выращивании бактерий Myсосоecus Sp. Д-5 на питательной среде с нормальными парафинами нефти и содержащую биомассу в количестве 2;8%, добавл ют фосфорную кислоту до установлени рН среды 3,0, а также смесь продуктов щелочной экстракции в количестве 0,05 вес.%, полученную путем обработки сгущенной до 12% АСВ суспензии тех же бактерий избытков гидроокиси натри при в течение 1,5 ч. Затем смесь нагревают до в течение 5 мин и сепарируют в отстойной центрифуге с фактором разделени 1000. Содержание биомассы в сгущенной суспензии составл ет 19,8% АСВ, т.е. степень концентрировани 7,1. Пример 5. К 500 мл суспензии микроорганизмов, полученной при выращивани смешанной бактериальной К2||льтуры 1-70 на природном газе и содержащей биомассу в количестве 2,5%, добавл ют фосфорную кислоту до установлени рН культуральной среды 2,5, а также смесь продуктов щелочной экстракции в количестве JO,25%, полученную таким же образом, как и в примере 1. Затем смесь нагревают до в течение 5 мин и сепарируют на отстойной ценр фуге с фактором разделени g 1000. Содержание биомассы в сгушенной биомассе 18% АСВ, т.е. степень концентрировани 7,2. Таким образом, описанный способ , выделени биомассы с использованием щелочного экстракта микроорганизмов в качестве коагул нта позвол ет достичь высокой степени концентрировани микроорганизмов..The invention relates to microbiological activity, namely to methods for isolating the biomass of microorganisms from the culture fluid obtained by cultivating microorganisms. A known method for isolating the biomass of microorganisms from the culture fluid is to add a protein alkaline extract as a coagulant l. Coagulum is an alkaline soy extract. The disadvantage of this method is the low degree of biomass release. The purpose of the invention is to increase the degree of excretion. This goal is achieved by using an alkaline extract of microorganisms at a concentration of 0.005-0.5 at a temperature of 40-90 0 and a pH of a mixture of 5-8 or 2-4 dl. For the method of isolating the biomass of microorganisms from the culture fluid, which involves adding a protein alkaline extract. In this case, yeast or bacteria, respectively, an alkaline extract is obtained by treating a suspension of microorganisms, thickened to 10-25%, with an excess of sodium hydroxide at 80-90 ° C for 1-2 hours. The method is carried out as follows. Concentrate the suspension of microorganisms, obtained by growing the cells of microorganisms in an aqueous nutrient medium, in the field of the Institute of Thermodynamic Oxygen, containing carbon sources suitable for the assimilation of microorganisms by the cells, as well as nitrogen, phosphorus and other nutrients necessary for the growth of microorganism cells. a carbon source, various types of carbon and hydrocarbon containing raw materials can be used, for example, oil parafysis, oil distillates, alcohols, natural gas, as well as products hydrolysis production, such as Malassa. To the splittable suspension, add alkaline extract of microorganisms in an amount of 0.005-0.5% depending on the type of microorganisms and their initial (Concentrations in the suspension. Ammonia water or alkali is added to the core to pH 5-8 The pH of the bacterial suspension is adjusted to a value of 2-4 by adding phosphoric acid. The mixture is heated to 40-90 s, and to preserve the nutritional properties of the finished product, the heating time should not exceed 5-8 minutes, and fed to the separation. For example, a suspension of microorganisms, such as those contained in a centered suspension, or another culture containing biomass of ACB is heated to a temperature of 80-90 ° C, alkali / usually sodium hydroxide is added until the pH reaches 10-12 and the mixture is kept at this temperature within 1-2 hours. The extraction of biomass by adding an alkaline extract of microorganisms can be carried out both from the culture fluid obtained after growing microorganisms with a biomass content of 0.5-3.0% DIA, and after its thickening to 3.0-8.0% DIA. It is most advisable to concentrate the suspension with an initial biomass content of 3.0-5.0% DIA. In this case, the degree of concentration reaches 5-7 times. With a higher initial biomass concentration in the culture fluid, the concentration decreases, and with a lower concentration, the biomass concentration in the thickened suspension can be achieved, at which this suspension can be applied for drying, i.e. up to 20-25% DIA. Example. To 500 ml of the suspension of microorganisms obtained by growing the Candida duilliermondii yeast on a nutrient medium with normal paraffins of oil and containing biomass in an amount of 3% ACB, add ammonia water to the pH of the culture liquid 7.2, as well as a mixture of alkaline extraction products in the amount 0.01 wt.%, Obtained by treating a suspension of the same yeast, thickened to 15% DIA, with excess sodium hydroxide at a temperature for 1.5 hours. Then the mixture is heated to 65 ° C and separated. In a settling factor centrifuge, it is divided and 10,000. The biomass content in the thickened suspension is 20.5% DIA, i.e. degree of concentration 6.8. Example2. To 500 ml of a suspension of microorganisms, obtained as a result of growing Candid utilis yeast on a nutrient medium with ethyl alcohol as a carbon source and containing biomass in the amount of 3.5% DIA, add ammonia water until the pH of the culture liquid is set to 7.1, and the mixture alkaline extraction products in an amount of 0.2 wt.%, obtained in the same manner as in example 1. The mixture is then heated to 65 ° C and separated in a settling centrifuge with a separation factor of 1000. The biomass content in the condensed slurry. SIA accounts for 22% of the DIA, i.e. degree of concentration 6.3. Example 3 To a 500 ml suspension / microorganism obtained by growing the Candida lipolytica yeast on a nutrient medium with oil distillates as a carbon source and containing a bio mass of 4% DIA, add ammonia water to adjusting the pH of the culture liquid 7.4 and the mixture of alkaline extraction products in an amount of 0.5 wt.% obtained by processing a suspension of the same yeast thickened to 12% ACB with an excess of hydroxide during 1.5 hours. The mixture is then heated before and separated. in a settling centrifuge with a separation factor 1,000. The biomass content in the thickened suspension is 24% DIA, i.e. degree of concentration 6.0. Example 4. K500ML Suspension of microorganisms obtained by growing bacteria Mycosoecus Sp. D-5 in a nutrient medium with normal paraffins of oil and containing biomass in an amount of 2; 8%, phosphoric acid is added to establish a pH of 3.0, and also a mixture of alkaline extraction products in an amount of 0.05 wt.%, Obtained by processing the suspension of the same bacteria, condensed to 12% ACB, of excess bacteria sodium hydroxide for 1.5 hours. Then the mixture is heated to within 5 minutes and separated in a settling centrifuge with a separation factor of 1000. The biomass content in the thickened suspension is 19.8% ACB i.e. the degree of concentration is 7.1. Example 5. Phosphoric acid was added to 500 ml of a suspension of microorganisms obtained by growing mixed bacterial K2 || Luty 1-70 on natural gas and containing 2.5% biomass until the pH of the culture medium was adjusted, as well as the mixture alkaline extraction products in an amount of JO, 25%, obtained in the same manner as in example 1. Then the mixture is heated to within 5 minutes and separated at a settling center with a separation factor g 1000. Biomass content in a dried biomass of 18% ACB, those. degree of concentration 7.2. Thus, the described method of extracting biomass using an alkaline extract of microorganisms as a coagulant allows a high degree of concentration of microorganisms to be achieved ..