SU582772A3 - Method of preparing deacetoxycephalosporinc - Google Patents

Description

II

Изобретение относитс  к микробиологической проьвлаленности, а именно производству антибиотиков.This invention relates to microbiological severity, namely the production of antibiotics.

Известен способ получени  деацетоксицефалоспорина С химическим путем 1 .A known method of producing deacetoxycephalosporin C by chemical means is 1.

Однако такой способ сложен и трудоемок .However, this method is complicated and time consuming.

С целью упрощени  способа получени  деацетоксицефалоспорина С формулыIn order to simplify the method of producing deacetoxycephalosporin C of the formula

бb

О ИOh and

Сй-(П1,)з-с4т-АSy- (P1,) z-s4t-A

ТШоTsho

ШзShz

соои.soy.

штамм - продуцент пенициллина N , относ пдайс  к роду Ceph,atosporlum Emertcettopsis, Scopula гСорьСь , Paecitomy sesили В1Ке1его«рогс1strain - producer of penicillin N, belongs to the genus Ceph, atosporlum Emertcettopsis, Scopula gSor, Paecitomy ses or B1Ke1e "Hogs1"

культивируют в аэробных услови х на питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли, а затем из культуральной жидкости выдел ют целевой продукт.cultivated under aerobic conditions on a nutrient medium containing sources of nitrogen, carbon and mineral salts, and then the desired product is isolated from the culture fluid.

Из рода dephaEosporLum. выбирают штаммыFrom the genus dephaEosporLum. choose strains

dephatospoKuTTi Korda NRR-t.dephatospoKuTTi Korda NRR-t.

Cepkatosporcum chrysogftnum ЯССCepkatosporcum chrysogftnum YASS

Cepttatosporium up,NRRLCepttatosporium up, NRRL

CephaEosporium sp. NR.KLCephaEosporium sp. NR.KL

CepKatosporiom 6p.NR.TlbCepKatosporiom 6p.NR.Tlb

daphatosporCum sp, NRB.LdaphatosporCum sp, NRB.L

CepKci ospDritjm ьр. NR.R.L.CepKci ospDritjm lp. NR.R.L.

Ce.ph.a ObporCuni sp. fyfRRLCe.ph.a ObporCuni sp. fyfRRL

CupKaCosporCum sp. NR.R.LCupKaCosporCum sp. NR.R.L

CeptiatobporLUTn. bp. NRRtCeptiatobporLUTn. bp. NRRt

CepKatosf orium sp, NR.KL,CepKatosf orium sp, NR.KL,

CcpKatospoKum bp.Kft.RbCcpKatospoKum bp.Kft.Rb

Из рода EmerCcettopstsрают штамм fcJ:From the genus EmerCcettopstsraut strain fcJ:

bmerLce op«is sp. NRE.U bmerLce op "is sp. NRE.U

5446, Emericef otisis sp. 5713, Emari-ct opsrs sp. NRfib 5714 или Emerice opSS sp. NRRt. 5717.5446, Emericef otisis sp. 5713, Emari-ct opsrs sp. NRfib 5714 or Emerice opSS sp. NRRt. 5717.

Из рода ScoputaT-LOps.LS выбирают Штамм ScoputariopsiS ер. NRRb 5715, из рода PacCLfomifces выбирают штамм: РагссЕотпусез carriftusFrom the genus ScoputaT-LOps.LS, choose the Strain ScoputariopsiS er. NRRb 5715, from the genus PacCLfomifces, select the strain: Carriftus strain

NRRL. 5711, а из рода DLHeteгоЕроч а выбираиот штамм DLfteterospora cKEaiTiLdospara NRRb 5728.NRRL. 5711, and from the genus DLHetegoEroch and choose the strain DLfteterospora cKEaiTiLdospara NRRb 5728.

Предлагаемые штаммы известны, описаны в литературе и их используютThe proposed strains are known, described in the literature and they are used

дл  получени  пенициллина N (цефалоспорина Ы ).for the preparation of penicillin N (cephalosporin L).

Предлагаелие штаммы культинируют при перемешивании в колбах емкостью 1 л и получают небольшое количество деацетоксицефалоспорина С. Дл  получени  большого количества штамдвл культивируют в ферментерах больших размеров в услови х глубокой аэробной ферментации.The product strains were cultured with stirring in 1 L flasks and a small amount of deacetoxycephalosporin C was obtained. To obtain a large amount of strain, they were cultivated in large-size fermenters under conditions of deep aerobic fermentation.

Дл  получени  деацетоксицефалоспорина С споры организма выдерживают на косом агаре. Споры с косого нэгара используют дл ( прививки растворителей среды небольшого объема. Вегетационную среду выдерживают в термостате до получени  обнльной ратущей культуры микроорганизма. Эту вегетационную среду затем используют в качестве прививочного материала дл  ферментационной среды, примен емой в больших количествах.To obtain deacetoxycephalosporin C, the body spores are kept on oblique agar. Spores from oblique nagar are used for (grafting medium-volume solvent solvents. The vegetation medium is kept in a thermostat until the culture of the microorganism is replenished. This vegetation medium is then used as a grafting material for the fermentation medium used in large quantities.

В некоторых случа х дополнительно ввод т вегетационную среду в качестве прививочного материала дл  ферментационной среда. Такую вторичную вегетационную среду обычно используют, если объем ферментационной среды значительно больше объема первой вегетационной среды. Вегетационную среду большого объема затем внос т с подход щей концентрацией микроорганизма дл  инициировани  начинающейс  ферментации в ферментерах больших размеров . Вегетационна  Среда может имет такой же состав, как и ферментационна  или оиа может содержать дополнительные компоненты дл  роста и развити  микроорганизмов.In some cases, the vegetative medium is additionally introduced as a graft material for the fermentation medium. Such a secondary vegetation medium is usually used if the volume of the fermentation medium is significantly greater than the volume of the first vegetation medium. A large-volume vegetation medium is then introduced with a suitable concentration of the microorganism to initiate the beginning fermentation in large-sized fermenters. The vegetation environment may have the same composition as the fermentation medium or it may contain additional components for the growth and development of microorganisms.

Образование деацетоксицефалоспорина С происходит при рН от 6,2 до 8,0, предпочтительно рН €,5-7,5.The formation of deacetoxycephalosporin C occurs at a pH of from 6.2 to 8.0, preferably a pH of 5-7.5.

Культивацию веДут при температуре 30-35 с. Оптимальный выход деацетоксицефалоспорина С происходит при температуре 26°С.Cultivation is carried out at a temperature of 30-35 s. The optimal yield of deacetoxycephalosporin C occurs at a temperature of 26 ° C.

Максимсшьный выход деацетоксицефалоспорина С при культивировании штамма в больших емкост х происходит в течение 4-7 дней, но если культивирование велут в колбах емкостью 1л, то штамм растет гораздо быстрее и продуцирование деацетоксицефалоспорина С происходит за 2-3 дн .The maximum yield of deacetoxycephalosporin C during the cultivation of the strain in large containers occurs within 4-7 days, but if the cultivation is given in 1 l flasks, the strain grows much faster and the production of deacetoxycephalosporin C occurs in 2-3 days.

Бели рН ферментативной-среды достигает 8,0 или выше, то это неблагопри тно вли ет на выход деацетоксицефашоспорина С, поэтому необходимо контролировать врем  и значение рН ферментационной среды в процессе ферментации . рН среды понижают добавлением в ферментационную среду подход щей кислоты или подход щего буфера.If the pH of the enzyme medium reaches 8.0 or higher, this adversely affects the yield of deacetoxycephasosporin C, therefore it is necessary to control the time and pH value of the fermentation medium during the fermentation process. The pH of the medium is lowered by adding a suitable acid or a suitable buffer to the fermentation medium.

Присутствие деацетоксицефалоспорина С в ферментационном бульоне определ ют хроматографией, а также посредством биоавтографов. В качествеThe presence of deacetoxycephalosporin C in the fermentation broth is determined by chromatography, as well as by means of bioautographs. As

определ ющего организма дл  биоавтографов используют Pseudomonos бойласмгеижdefining organism for bioautographs use pseudomonos boylsmgeij

Стерильный воздух пропускают через культуральную среду дл  повышени  выхода деацетоксицефалоспорина С. Объем воздуха, проход щего через культуральную среду, составл ет 0,2 об.ч. воздуха и 1 мин на 1 объел) культуральной среды.Sterile air is passed through the culture medium to increase the release of deacetoxycephalosporin C. The volume of air passing through the culture medium is 0.2 ob.h. air and 1 min per 1) culture medium.

Дл  извлечени  деацетокбицефапо0 спбрина С из ферментационной среды обрабатывают весь ферментационный бульон крроткое врем  в кислой среде дл  разложени  некоторых из сопутствующих примесей.In order to extract deacetobbitfaco spbrin C from the fermentation medium, the entire fermentation broth is treated during short time in an acidic medium to decompose some of the accompanying impurities.

66

Деацетоксицефалоспорин ; С отдел ют от других компонентов ферментационной среды хроматографией на ионообменной смоле, а затем очищают хроматогра ей на целлюлозе или силика0 геле с последующим рсаждением и перекристаллизацией .Deacetoxycephalosporin; C is separated from the other components of the fermentation medium by chromatography on an ion exchange resin, and then purified by chromatography on cellulose or silica gel, followed by precipitation and recrystallization.

Сначала отфильтрованный ферментационный бульон подвергают предварительной очистке экстракцией органиs ческим растворителем, не смешивающимс  с водой, например н -бутанолом или амилацетатом, с целью удалени  примесей. Экстрагированный бульон подвергают очистке хроматографией First, the filtered fermentation broth is pre-purified by extraction with an organic solvent that is not miscible with water, for example n-butanol or amyl acetate, in order to remove impurities. Extracted Broth Purified by Chromatography

0 на активированном угле, и колонну промывают водой дл  удалени  водо-. растворимых окрашенных примесей и водорастворимых неорганических веществ . Продукты ферментации затем элюируют из угл  50%-ной смесью ацетона с водой.0 on activated carbon, and the column is washed with water to remove water. soluble colored impurities and water-soluble inorganic substances. The fermentation products are then eluted from the coal with a 50% acetone / water mixture.

Элюат концентрируют до водной фазы , которую затем хроматографируют над основной анионообменной смолой. Смолы используют гидроксильного, ацетатного или формиатного типа, полистирольные смолы типа четвертичного аммони  или других подход щих типов. Концентрированный злюат, поступающий из колонны с активированным углем , выливают на анионообменную смолу , после чего смолу промывают водой Деацетоксицефалоспорин С злюируют из обменной смолы в виде соли с подход щим слабым основанием, например, The eluate is concentrated to an aqueous phase, which is then chromatographed over a basic anion exchange resin. Resins use hydroxyl, acetate or formate type, polystyrene resin type of quaternary ammonium or other suitable types. Concentrated liquate coming from an activated carbon column is poured onto an anion exchange resin, after which the resin is washed with water. Deacetoxycephalosporin C is peeled from the exchange resin as a salt with a suitable weak base, for example,

0 при использовании колонны со смолой ацетатного типа в качестве элюирующего растворител  примен ют водный раствор ацетата натри  в концентрации Hi или менее. Дл  предот6 вращени  образовани  избытка неорганической соли (ацетатнатри ) в злюате из Ьбменной колонны, концентраци  ацетата натри  должна быть 0,10 ,5 н.0 When using an acetate type resin column, an aqueous solution of sodium acetate at a concentration of Hi or less is used as the eluting solvent. To prevent the formation of an excess of the inorganic salt (acetate) in the zlute from the exchange column, the concentration of sodium acetate should be 0.10, 5 n.

ОABOUT

При использовании обменной смолы формиатного или другого подход щего типа используют соответствующую соль в 1 н, растворе вкачестве растворител  дл  элюировани , например, When using a formate or other suitable type of exchange resin, use the corresponding 1N salt as a solvent for elution, for example,

5 формиатаммони . Многочисленные фракции собиргкот, и фракции, содержащие деацетоксицеФалоспооинС, соедин ют5 formate ammonium. Numerous fractions of sobirkkot, and fractions containing deacetoxyFalospoinS, combine

Соединенные элюаты хроматографируют над активированным углем дл  удалени  избытка неорганических солей , например, ацетата натри , примен емого в виде элюирующего раствора. Колонну с активированным углем проживают водой дл  удалени  неорганических водорастворимых солей, и деацетоксицефалоспорин С элюируют из колонны 50%-ной смесью ацетата с водой. Элюат упаривают досуха или упаривают до удалени  ацетона, а концентрированный водный раствор лиофилизируют и получают деацетоксицефалоспорин С в виде неочищенного твердого продукта.The combined eluates are chromatographed over activated carbon to remove excess inorganic salts, such as sodium acetate, used as an elution solution. The activated carbon column is rescued with water to remove inorganic water-soluble salts, and deacetoxycephalosporin C is eluted from the column with a 50% mixture of acetate and water. The eluate is evaporated to dryness or evaporated to remove acetone, and the concentrated aqueous solution is lyophilized and deacetoxycephalosporin C is obtained as a crude solid.

Неочищенный продукт деацетоксицефалоспорина С подвергают дальнейшей очистке хроматографией над целлюлозо или силикагелем или над другим подход щим неионным адсорбентом. Деацетоксицефалоспорин С элюируют из колонны растворителем, содержащим ацетонитрил и воду (80:20), и собирают многочисленные фракции. Фракции, содержащие деацетоксицефалоспорин С, определ ют бумажной хроматографией, соедин ют и концентрируют до небольшого объема или досуха. Высококонцентрированный водный остаток или сухой остаток раствор ют затем в минимальном количестве изопропилового спирта, и спиртовой раствор выливают в большое количество диэтилового эфира.The crude product of deacetoxycephalosporin C is further purified by chromatography over cellulose or silica gel or over another suitable non-ionic adsorbent. Deacetoxycephalosporin C is eluted from the column with a solvent containing acetonitrile and water (80:20), and numerous fractions are collected. Fractions containing deacetoxycephalosporin C are determined by paper chromatography, combined and concentrated to a small volume or to dryness. The highly concentrated aqueous residue or dry residue is then dissolved in a minimum amount of isopropyl alcohol, and the alcohol solution is poured into a large amount of diethyl ether.

Очищенный деацетоксицефалоспорин получают в виде соли, соответствующей водному элюирующему средству, примен емому дл  элюировани  анионообменной смолы. Например, при-использовании ацетата натри  в качестве элюирующего средства получают деацетоксицефалоспорин С в виде мононатриевой соли.Purified deacetoxycephalosporin is obtained in the form of a salt corresponding to an aqueous eluting agent used to elute the anion exchange resin. For example, using sodium acetate as an eluent, deacetoxycephalosporin C is obtained as a monosodium salt.

Деацетоксидефалоспорин С в форме соли отфильтровывают и высушивают.. Соль деацетоксицефалоспорина С можно превратить в свободную кислоту, например , пропусканием через катионообменную смол .The deacetoxydephalosporin C in the form of a salt is filtered and dried. The salt of deacetoxycephalosporin C can be converted into a free acid, for example, by passing through a cation exchange resin.

Хроматографию дл  идентификации деадётоксицефалоспорина С в неочищенных ферментационных бульонах или во фракци х элюатов смол осуществл ют на хроматографической бумаге ватман 1 по восход щему методу. Система растворителей, примен ема  дл  про влени , состоит из ацетонитрила и воды (80:20 об.ч.); камера насыщена парами растворител  следующего состава: п -пропанол - пиридин уксусна  кислота.-ацетонитрил-вода в соотношении 45:30:9:40:36 (об.ч.), С целью упрощени  хроматографии испытуемый образец предварительно обрабатывают пенициллиназой.Chromatography to identify deadetoxycephalosporin C in untreated fermentation broths or in the fractions of eluates of the resins is carried out on Whatman paper on a chromatographic paper using an upstream method. The solvent system used for the development consists of acetonitrile and water (80:20 v.p.); the chamber is saturated with solvent vapors of the following composition: p-propanol - pyridine acetic acid.-acetonitrile-water in the ratio 45: 30: 9: 40: 36 (parts by volume). To simplify chromatography, the test sample is pre-treated with penicillinase.

Пример 1. Отделенные споры штаммов Сгр|га ospOT-ium &р. NRRL 5445, Cepka QsporCum ch.rySQgenum АТСС 14 615, pT4ericeetopsi.s sp. NR-RL 5446 и Emarice-EEopSLS sp. NRRLExample 1. Separated spores of Cr | ha ospOT-ium & p. NRRL 5445, Cepka QsporCum ch.rySQgenum ATCC 14 615, pT4ericeetopsi.s sp. NR-RL 5446 and Emarice-EEopSLS sp. NRRL

5447 no отдельности прививают на косой агар со средой следующего состава , %:5447 no separately grafted on oblique agar with medium of the following composition,%:

Лактоза1,000Lactose1,000

Глицерин1,000Glycerin1,000

Соевый пептон0,250Soy Peptone0,250

Растворимые высушенные кукуруза и солод0,250Soluble dried corn and malt0,250

Гептагидрат сульфата магни 0,050 Гептагидрат сульфата двухвалентного железа 0,001 Карбонат кальци  0,200 Раствор микроэлементов О ,625 Агар 2,000 Вода Остальное Косой агар термостатируют 7 дней при температуре . Зрелые культуры заливают стерильной дистиллированной водой и осторожно соскабливают стерильной палочкой дл  получени  споровой суспензии.Magnesium sulphate heptahydrate 0.050 Ferrous sulphate ferrous sulfate 0.001 Calcium carbonate 0.200 Trace element solution O, 625 Agar 2,000 Water Remaining Oblique agar is incubated for 7 days at a temperature. Mature cultures are poured with sterile distilled water and gently scraped with a sterile stick to obtain a spore suspension.

Полученные споровые суспензии примен ют дл  прививки двух отдельных стерильных вегетационных сред следующего состава,%:The resulting spore suspensions are used for grafting two separate sterile vegetation media of the following composition,%:

Соева  мука2,000Soya flour2,000

Солодовый экстракт2,000Malt Extract2,000

Кукурузный экстракт0,500Corn extract0,500

Гептагидрат сульфата магни 0,025 Монокалийфосфат0,100 Дикалийфосфат0,050 Дигидрат хлорида кальци 0,010 Раствор микроэлементов0 ,625 Вода ОстальноеMagnesium sulfate heptahydrate 0.025 monopotassium phosphate0,100 dipotassium phosphate0.050 calcium chloride dihydrate 0.010 trace element solution0.625 water Remaining

Перед автоклавированием довод т рН среды до 6,5. Привитые вегетационные среды термостатируют 48 ч при 26С с применением вращающегос  аппарата дл  взбалтывани . Затем эти среды используют в качестве прививочного материала дл  ферментационной среды при соотношении 1% вегетационной среды на 1 об.ч. ферментационной. Примен екие дл  этой цели среды имеют следующий состав, %:Adjust the pH to 6.5 before autoclaving. The grafted vegetation medium is thermostated for 48 hours at 26 ° C using a rotating agitator. These media are then used as a graft material for the fermentation medium, at a ratio of 1% of the growing season to 1 part by volume. fermentation. The media used for this purpose have the following composition,%:

Сахароза4,0Sucrose4.0

Глицерин1,0Glycerin1,0

Глутамат натри 0,5Sodium glutamate 0.5

Арахисова  мука2,0Peanut Flour2.0

Гексагидрат двойного сульфата аммони  и двухвалентного железа0,3 Нитрат кали 2,0Hexahydrate of double ammonium sulfate and ferrous iron0.3 Potassium nitrate 2.0

Карбонат,кальци  0,3Calcium Carbonate 0.3

Вода ОсаальноеOsaal water

При ферментации большого количества продукта используют поверхностноактивные вещества или антивспениватели . Перед стерилизацией довод т рН среды до 6,5, Затем непривитые ферментационные среды термостатируют 5 дней при 26°С и при перемешивании. Во врем  ферментации через ферментационные среды пропускают воздух со скоростью 1/2 объема на 1 объем культуральной среды в 1 мин. Конечное значение рН ферментационных сред 7,5. 15 л полученного бульона подкисл ют до рН 2 серной кислотой. Подкисленные цельные бульоны перемешивают 1 ч при комнатной температуре, после чего подщелачивают до рН 6,0 раствоDOM гидроокиси натри .During the fermentation of a large amount of product, surface active substances or antifoaming agents are used. The pH of the medium is adjusted to 6.5 before sterilization. Then the unvaccinated fermentation medium is incubated for 5 days at 26 ° C and with stirring. During the fermentation, air is passed through the fermentation medium at a rate of 1/2 volume per 1 volume of culture medium per minute. The final pH of fermentation media is 7.5. 15 liters of the resulting broth are acidified to pH 2 with sulfuric acid. The acidified whole broths are stirred for 1 hour at room temperature, then alkalinized to pH 6.0 with sodium hydroxide solution.

Бульоны отфильтровывают, и водный фильтрат экстрагируют п -бутанолом дл  удалени  нерастворимых веществ в суспензии. Затем водные фазы пропускают через колонны, заполненные активированным углем, и колонны про1ллвают дистиллированной водой. Элюаты прокивных вод отбрасывают. Далее колонны элюируют 50%-ным водным ацетоном . Элюатн упаривают под вакуумом до водной фазы, которую хроматографируют в колоннах, заполненных полистирольной смолой, содержащей группы четвертичного аммони  и ацетатного типа. Колонны сначала промывают водо и промывные воды удал ют.The broths are filtered off and the aqueous filtrate is extracted with p-butanol to remove insoluble substances in suspension. The aqueous phases are then passed through columns filled with activated carbon, and the columns are distilled water. The eluate prokivnyh waters discarded. Next, the columns are eluted with 50% aqueous acetone. The eluate is evaporated under vacuum to an aqueous phase, which is chromatographed in columns filled with polystyrene resin containing quaternary ammonium and acetate type groups. The columns are first washed with water and the washings are removed.

Активные продукты ферментации элюируют из колонны 0,15 н. раствором ацетата натри . Многочисленные фракции собирают, и фракции, содержащие деацетоксицефалоспорин С, соедин ют.Active fermentation products elute from the column with 0.15 n. sodium acetate solution. Numerous fractions are collected and fractions containing deacetoxycephalosporin C are combined.

Присутствие деацетоксицефалоспорина С во фракци х элюатов определ ю хроматографией восход щим методом с применением бумаги ватман № 1.The presence of deacetoxycephalosporin C in eluate fractions was determined by chromatography using an upstream method using Whatman paper.

В качестве элюирующего растворител  примен ют смесь ацетонитрила с водой (80:20). На дно хроматографической камеры наслаивают смесь растворителей , содержащую 300 мл раствора состава, %: п -пропанол 37,5, пиридин 25, уксусна  кислота 7,5, вода .30, который разбавл ют до 100 мл ацетонитрилом .A mixture of acetonitrile and water (80:20) is used as the eluting solvent. A mixture of solvents containing 300 ml of the composition solution,%: p-propanol 37.5, pyridine 25, acetic acid 7.5, water 30, which is diluted to 100 ml with acetonitrile, is layered on the bottom of the chromatographic chamber.

Деацетоксицефалоспорин С определ ют также при помощи микроорганизма вида Pseudomo-nou bofancearcumПолученные фракции деацетоксицефалоспорина С после хроматографии соедин ют. Объединенные фракции абсорбируют на колонне, заполненной активированным углем. Колонну сиачаЛс промывают дистиллированной водой дл  удалени  растворимых неорганических веществ, например ацетата натри , а затем элюируют 50%-ным водным раствором ацетона. упармвают под вакуумом досуха. Получают неочищенный твердый препарат натриевой соли деацетоксицефапоспорина С, который очищают хроматографией на колонне, заполненной целлюлозой,.Deacetoxycephalosporin C is also determined by the microorganism Pseudomo-nou bofancearcum. The obtained fractions of deacetoxycephalosporin C after chromatography are combined. The combined fractions are absorbed on a column filled with activated carbon. The column is washed with distilled water to remove soluble inorganic substances, for example sodium acetate, and then eluted with 50% aqueous acetone. vacuum under vacuum. A crude solid preparation of the deacetoxycetafaposporin C sodium salt is obtained, which is purified by chromatography on a column filled with cellulose.

Антибиотик элюируют из колонны с целлюлозой смесью раствооителей, содержащей ацетонитрил и воду (80:20). Многочисленные фракции собирают, и при использовании хроматографической систелвл, описанной выше, фракции, в которых обнаружен цефалоспорин С, соедин ют. Соединенные фракции концентрируют досуха, а сухой остаток, содержащий деацетоксицефалоспорин С раствор ют в минимальном количестве изопропанола. Спиртовой раствор выливаиот в эфир, количество которого превышает в 20 раз объемное количество изопропанола. При перемешивании образуетс  осадок натриевой соли деацетоксицефалоспорина С. Его отфильтровывают и высушивают на воздухе . Получают 126 мг антибиотика в виде натриевой соли.The antibiotic is eluted from the cellulose column with a mixture of solvents containing acetonitrile and water (80:20). Numerous fractions are collected, and using the chromatographic system described above, the fractions in which cephalosporin C is detected are combined. The combined fractions are concentrated to dryness, and the dry residue containing deacetoxycephalosporin C is dissolved in a minimum amount of isopropanol. The alcohol solution is poured into ether, the amount of which is 20 times the volume of isopropanol. When stirred, a precipitate of the deacetoxycephalosporin C sodium salt is formed. It is filtered and dried in air. 126 mg of antibiotic are obtained in the form of sodium salt.

Пример2. По методике, описанной в примере 1, споры EmcriceftopSLS ьр. NRRL 5714 культивируют на вегетационной среде. Культуральна  среда, примен ема  дл  прививки продуцирующей среды имеет следующий состав, %:Example2. According to the method described in example 1, the controversy EmcriceftopSLS lp. NRRL 5714 cultivated in a growing environment. The culture medium used for grafting the production medium has the following composition,%:

Растворимый крахмал 1,0 Декстроза4,0Soluble starch 1.0 Dextrose4.0

Соева  крупа1,0Soyeva krupa1,0

Карбонат кальци  0,5 Антивспениватель 0,1 ВодаОстальноеCalcium carbonate 0.5 Antifoam 0.1 Water Else

Перед автоклавированием и прививкой довод т рН продуцирующей среды до 6,5. Ферментацию провод т 5 дней при 26°С. Деацетоксицефалоспорин С извлекают и выдел ют согласно примеру 1.The pH of the production medium was adjusted to 6.5 before autoclaving and grafting. Fermentation is carried out for 5 days at 26 ° C. Deacetoxycephalosporin C is recovered and recovered according to Example 1.

При мер 3. Аналогично примеру 1 споры ScopyCarCopsis ьр- NRRU 5715 культивируют на вегетационной среде, описанной в примере 1. Вегетационную среду примен ют дл  прививки ферментационной среды, состав которой также описан в примере 1.Example 3. Analogously to Example 1, ScopyCarCopsis LR-NRRU 5715 spores are cultivated on the vegetative medium described in Example 1. The vegetation medium is used for grafting fermentation medium, the composition of which is also described in Example 1.

Ферментацию осуществл ют 5 дней при , и деацетоксицефалоспорин С извлекают из ферментационной среды согласно примеру 1.Fermentation is carried out for 5 days at, and deacetoxycephalosporin C is removed from the fermentation medium according to example 1.

П РИМ е р 4. Аналогично примеру 1 провод т культивирование и ферментацию POWiEom у с es с получением деацетоксицефалоспорина С.P RIM e p. Analogously to Example 1, POWiEom y es was cultivated and fermented to obtain deacetoxycephalosporin C.

П р и м е р 5. По той же методике культивировани  и выделени , а также с использованием среды, описанной в примере J, выраЕцивают DeKeterospOY-a ckCawy dnapo Ca с получением деаиетоксицефалоспорина С.EXAMPLE 5. DeKeterospOY-a ckCawy dnapo Ca was obtained using the same method of cultivation and isolation, as well as using the medium described in Example J, to produce deaietoxycephalosporin C.

Claims (2)

1. Способ получени  деацетоксицефалоспорина С формулы1. A method for producing deacetoxycephalosporin C of the formula О НHE HOOC-CH-(CH2)3-C-i ЯНдHOOC-CH- (CH2) 3-C-i YaND соонsoon отличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа, штамм продуцент пенициллина К , относ щийс  к роду depkatosporCuTn ,characterized in that, in order to simplify the method, the strain producing penicillin K, belonging to the genus depkatosporCuTn, ScopyfartopsCa, EmftrictpeopsilS, Paeci fonriMces .DLheterospora культивируют в аэробных услови х на питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли , а затем из культуральной жидкости выдел ют целевой продукт.ScopyfartopsCa, EmftrictpeopsilS, Paeci fonriMces .DLheterospora is cultivated under aerobic conditions on a nutrient medium containing sources of nitrogen, carbon and mineral salts, and then the desired product is separated from the culture fluid. 2. Спсооб ПОП.1, о тли ч а rota и и с   тем, что из рода Ceph.atoSporLumвыбирают штамм;2. Fsoba POP.1, about aphids and rota and with the fact that a strain is selected from the genus Ceph.atoSporLum; Korda NRRL Korda NRRL 5445, cKrysog-enum 5445, c.Krysog-enum ATCC 14615, sp. fJRRL 5712, sp klRRL 5716, 6p NRRL 718,ATCC 14615, sp. fJRRL 5712, sp klRRL 5716, 6p NRRL 718, CeptiaEosporiutn sp, KRRL5719,CeptiaEosporiutn sp, KRRL5719, CepfiaEosportum sp. NR.RL5720,CepfiaEosportum sp. NR.RL5720, Cephatosporiom sp. HRRL5721,Cephatosporiom sp. HRRL5721, CepfiaEasporLum sp.HRRu5722,CepfiaEasporLum sp.HRRu5722, Ccphaeosportum sp WRRL5723,Ccphaeosportum sp WRRL5723, Cephatosporium 6p NRRL5724 илиCephatosporium 6p NRRL5724 or C ephaEobpOTium sp. NRRU5725,C ephaEobpotium sp. NRRU5725, из рода Erne rice sis выбивают штамм:from the genus Erne rice sis knock out the strain: EmerCcegfopSLS sp. NRRb5446,EmerCcegfopSLS sp. NRRb5446, EmerLcetEopSLs sp. NRRL5447,EmerLcetEopSLs sp. NRRL5447, EmericettopSLS sp. NRRL,5713,EmericettopSLS sp. NRRL, 5713, EmerCceftopSLS sp. NRRL5714 илиEmerCceftopSLS sp. NRRL5714 or EmericeEtopsLS sp. NRRL5717,EmericeEtopsLS sp. NRRL5717, из рода ScDpuEartopsis выбирают штамм ScopufariopSLS sp. NRRU 5715, из рода PaecilEoTnyces выбирают штамм Paecuiomyces carTi«us NRRL 5711, из рода DLKettrospora выбирают штамм DihetCi ospo ra tWamydospora NRRL5728.from the genus ScDpuEartopsis choose the strain ScopufariopSLS sp. NRRU 5715, from the genus PaecilEoTnyces, choose the strain Paecuiomyces carTi "us NRRL 5711, from the genus DLKettrospora choose the strain DihetCi ospora tWamydospora NRRL5728. Приоритет no пунктам и признакамPriority no to items and features. 26.04.72 по п, 1 и по признакам п. 2, касающимс  использовани  штаммов 5445, 14615, 5446, 5447;04/26/72 according to claim 1 and on the grounds of paragraph 2 regarding the use of strains 5445, 14615, 5446, 5447; 09. 04 .,73 по остальным признакам п.2.09. 04., 73 for the rest of signs p. 2. Источники информации, прин тые в внимание при экспертизе:Sources of information taken into account in the examination: 1. Патент США 3124576, кл. 260-243, 1964.1. US patent 3124576, CL. 260-243,1964.