SU423304A3 - - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ(54) METHOD OF OBTAINING

ПОЛИПЕПТИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ СВОЙСТВОМ ПОНИЖАТЬ СОДЕРЖАНИЕ КАЛЬЦИЯ В КРОВИPOLYPEPTIDES possessing the property of lowering the content of calcium in blood

Смесь перемешивают, отдел ют верхний слой бутанольный, а нижний еще 4 раза экстрагируют смесью бутанола, уксусной кислоты, воды и пиридина (6:1:9: 0,25). Объединенный экстракт упаривают под вакуумом, остаток обрабатывают эфиром и раствор ют в 4 мл 0,2М раствором апетата аммони  (рН 4,7). Раствор пропускают через колонку (2Х Х80 см), заполненную сефадексом-75, и элюируют 0,2 М раствором ацетата аммони  со скоростью 12 мл/час. Элюат собирают фракци ми но 4 мл, причем активный пренарат содержитс  во фракци х с 63 но 82. Эти фракции собирают, концентрируют под вакуумом и Лиофильно высушивают. Получают 2,1 мг активного нрепарата (24 ед/мг).The mixture was stirred, the butanol layer of the upper layer was separated, and the lower layer was extracted 4 more times with a mixture of butanol, acetic acid, water, and pyridine (6: 1: 9: 0.25). The combined extract is evaporated under vacuum, the residue is treated with ether and dissolved in 4 ml of a 0.2M ammonium apetate solution (pH 4.7). The solution is passed through a column (2 × X80 cm) filled with Sephadex-75 and eluted with a 0.2 M solution of ammonium acetate at a rate of 12 ml / hour. The eluate is collected with fractions of 4 ml, and the active prenarate is contained in fractions with 63 but 82. These fractions are collected, concentrated under vacuum and lyophilized. Obtain 2.1 mg of active drug (24 U / mg).

Пример 2. Ткани, включающие полую вену , прилегающую к пищеводу, и перикардиальную мембрану, собранные примерно у 3000 угрей, подвергают обезвоживанию и обезжириванию , как это описано в примере 1, и нолучают 255 г, сухого вещества. 225 г этого вещества экстрагируют при перемешивании в течение 2 час при комнатной температуре 2 л 0,2 н. сол ной кислоты, содержащей 960 г мочевины   35 г цистина. Экстракт вливают в 4 л смеси ацетона и уксусной кислоты (1 : 1), а затем в смесь, содержащую 56 мл 1 М раствора хлористого натри  и 6 л ацетона, и центрифугируют 15 мин, при 9000 об/мин. Освобожденный от нримесей раствор вливают в 10 л эфира, не содержащего перекисных соединений , неремешивают, отдел ют вынавший препарат центрифугированием. После лиофильного высушивани  получают 17,8 г препарата (1 ед/мг), который подвергают очистке , как в примере 1.Example 2. Tissues, including the vena cava, adjacent to the esophagus, and the pericardial membrane, collected from about 3000 eels, are dehydrated and defatted, as described in Example 1, and 255 g of dry matter are obtained. 225 g of this substance is extracted with stirring for 2 hours at room temperature with 2 l 0.2 n. hydrochloric acid containing 960 g of urea 35 g of cystine. The extract is poured into 4 liters of a mixture of acetone and acetic acid (1: 1), and then into a mixture containing 56 ml of 1 M sodium chloride solution and 6 liters of acetone, and centrifuged for 15 minutes at 9000 rpm. The solution, freed from impurities, is poured into 10 liters of ether containing no peroxide compounds, unmixed, the inhaled preparation is separated by centrifugation. After freeze drying, 17.8 g of the preparation (1 U / mg) is obtained, which is purified as in Example 1.

Угорь, используемый в качестве исходного сырь , предварительно выращивалс  в течение 10-17 суток в морской ил  аналогичной соленой воде.The eel, used as a raw material, was pre-grown for 10-17 days in sea sludge from similar salt water.

Предмет изобретени Subject invention

Способ получени  полипептидов, обладающих СВОЙСТВОМ понижать содержание кальци  ,в крови, из животного сырь  путем обработки смесью гидрофильного органического растворител  и воды, экстракции смесью сол ной кислоты, мочевины и цистина, добавлени  водного раствора хлористого натри  и ацетона с последующей очисткой и высушиванием , отличающийс  тем, что, с целью расширени  сырьевой базы, обработке подвергают перекардиальную мембрану и(или) ткань, включающую полую вену, примыкающу к пищеводу угрей.The method of obtaining polypeptides with the PROPERTY to lower the calcium content in the blood from animal raw materials by treating with a mixture of hydrophilic organic solvent and water, extraction with a mixture of hydrochloric acid, urea and cystine, adding an aqueous solution of sodium chloride and acetone, followed by purification and drying that, in order to expand the raw material base, the treatment is subjected to a percardial membrane and / or tissue, including a vena cava, adjacent to the esophagus esophagus.