SU1703690A1 - Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека - Google Patents
Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека Download PDFInfo
- Publication number
- SU1703690A1 SU1703690A1 SU864065414A SU4065414A SU1703690A1 SU 1703690 A1 SU1703690 A1 SU 1703690A1 SU 864065414 A SU864065414 A SU 864065414A SU 4065414 A SU4065414 A SU 4065414A SU 1703690 A1 SU1703690 A1 SU 1703690A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- size
- gene
- interferon
- pvn22
- plasmid
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 title claims abstract description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims description 17
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 5
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 claims 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 abstract 1
- 241000702315 Escherichia virus phiX174 Species 0.000 abstract 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101150033202 thr gene Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/78—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Pseudomonas
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии , генной инженерии, микробиологической и медицинской промышленности и представл ет собой сконструированную in vitro плазмиду. обеспечивающую биосинтез лейкоцитарного интерферона человека, и штамм Pseudomonas sp. - продуцент лейкоцитарного интерферона, содержащий эту плазмиду. Целью изобретени вл етс повышение выхода интерферона сг-П человека . Рекомбинантна плазмидна ДНК pVN 22. кодирующа синтез интерферона с:-И человека, состоит из и НтсПП-фр&г- ментов плазмиды pAYC37. Штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) ВКМВ-3480 - продуцент интерферона а-|1 человека. 2 с.п. ф-лы. 1 ил.
Description
Изобретение относитс к биотехнологии , генной инженерии, микробиологической и медицинской промышленности и представл ет собой сконструированную in vitro плазмиду, обеспечивающую биосинтез лейкоцитарного интерферона человека, и штамм Pseudomonas sp. - продуцент лейкоцитарного интерферона. содержащий эту плазмиду.
Цель изобретени - повышение выхода интерферона а -И.
На чертеже показана схема конструировани плазмиды pVN 22.
П р и м е р 1. Конструирование плазмиды pVN22.
0.2 мкг ДНКплазмиды pAYC37(Plasmid. 14, 118-125, 1985) и 1 мкг ДНК известной плазмиды pVN 609 расщепл ют рестрикта- зами EcoRI и Hindlll в следующих услови х:
6 мМ трис-CI, рН 7.6. 6 мМ MgCl2, 6 мМ 2-меркаптоэтанола и 50 мМ NaCI; EcoRI - 2 ед. активности, Hindl.ll - 2 ед. активности; обьем реакционной смеси 30 мкл. Реакцию провод т 40 мин при 37°С и останавливают прогреванием в течение 15 мин при 65°С. Затем провод т смешивание полученных фрагментов с помощью ДНК-лигазы фага Т4. Лигирование провод т при 12-14°С в течение 120 мин, после чего такую смесь трансформацией ввод т в E.coli C600.
Трансформацию провод т следующим образом. Ночную культуру E.coli C600 в 500 раз развод т жидкой средой LB (7) и раст т на качалке с аэрацией при 37°С до достижени культурой клеток оптической плотности 0,4-0,6 ед. при 550 нм. Затем суспензию клеток охлаждают в лед ной бане , собирают центрифугированием,суспенXI
О
GJ о ю о
дируют в лед ном растворе 0,1 М CaCl2, после чего суспензию на 30 мин помещают в лед ную баню. Затем клетки собирают центрифугированием и ресуспендируют в 1/20 первоначально объема клеточной сус- пензии. К 100 мкл приготовленных таким образом клеток добавл ют 30 мкл раствора ДНК после лигировани и после тщательного перемешивани полученную смесь составл ют на 30 мин в лед ной бане, затем провод т прогревание смеси, помеща п ро- бу в вод ной термостат с температурой 42°С на 4-5 мин, после чего пробу снова помещают на 20 мин в лед ную баню.
Затем суспензию в дес ть раз развод т средой LB и на 2,0-2.5 ч помещают в термостат 37°С. Така длительна инкубаци необходима дл про влени устойчивости к стрептомицину. После подращивани 10- 50 мкл клеточной культуры высевают на ага- ризованную LB-среду, содержащую в качестве селективных маркеров стрептомицин (100 мкг/мл) и эмпициллин (100 мкг/мл).
кторна плазмида pAYC37 не способ- н 1 восстановлении дать трансформан- TL 1 такой среде, так как не обладает устойчивостью к стрептомицину. Промотор, с которого происходит экспресси стрепто- мицинустойчивости, у pAYC37 отсутствует. При клонировании промотор-содержащего фрагмента с интерфероном а -Ц из pVN 609 в pAYC37 происходит восстановление устойчивости к стрептомицину, что позвол ет легко отбирать клоны, содержащие искомые плазмиды. Из таких клонов щелоч- ным методом выдел ют плазмидную ДНК и анализируют структуру плазмид с помощью рестриктаз HindlJJ и EcoR в указанных услови х . Анализ получаемых фрагментов провод т с помощью электрофореза в 1 %-ном агарозном геле в стандартном трис-борат- ном буфере с последующим прокрашивани- ем гел бромистым этидием, что позвол ет увидеть фрагменты ДНК в длинноволновом ультрафиолете. Идентифицирована плазмида pVN 22.
П р и м е р 2. Получение штамма Pseudomonas sp. 31 (pVN 22), продуцирующего интерферон а-П.
Дл введени плазмиды pVN 22 в Pseudomonas sp. 31 примен ют две последовательные конъюгации. Сначала в штамм E.coll C600 (pVN 22) конъюгацией ввод т плазмиду R751, котора обеспечивает устойчивость к триметаприму.
Высев конъюгатов производ т на минимальную агаризованную солевую среду Адамса, содержащую следующие компоненты: глюкоза 4 мг/мл: тиэмингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; лейцин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл; стрептомицин 75 мкг/мл; триметаприм 75 мкг/мл. В этих услови х вырастают только конью- гаты E.coli C600 (R 751, pVN 22). Затем провод т конъюгацию между E.coli C600(R 751. pVN 22) и Pseudomonas sp. 31 с дефектным геном thr А. Конъюгэты вырастают на минимальной агаризованной солевой среде следующего состава: глюкоза 4 мг/мл; тиамингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 200 мкг/мл, триметаприм 75 мкг/мл. Температура роста конъюгантов 30°С. Штамм-донор СбОО (R 751, pVN 22), помимо треонина, нуждаетс еще и в лейцине, поэтому на такой среде не вырастает. В результате получен штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22), содержащий плазмиду, котора обеспечивает синтез интерферона а-11.
Штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) характеризуетс следующими признаками.
Морфологические признаки. Клетки пр мые палочковидные длиной 3-5 мк, гра- мотрицательные, неспороносные.
Культуральные признаки. Клетки хорошо растут на простых питательных средах. На м сопептонном агаре через 24 ч роста при 25-30° образуют крупные колонии с неровным краем (диаметр 3-4 мм), поверхность шероховата , цвет светло-зеленый. При росте на бульоне Хоттингера или М 9 с добавками казаминокислот образуетс равномерна муть. Через 24 ч роста на бульоне Хоттингера с аэрацией культура приобретает светло-зеленый цвет и слегка опалесци- рует.
Физиолого-биохимические признаки. Клетки Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) растут при 10-35° с оптимумом 30°С при рН 6,7- 7,5. Источники углерода: глюкоза, арабино- за. Источники азота: соли аммони , мочевина, могут быть также аминокислоты, пептон, триптон и т.п.
Устойчивость к антибиотикам. Клетки Pseudomonas sp. 31(pVN 22) обладают устойчивостью к 400-500 мкг/мл стрептомицина и 150-200 мкг/мл ампициллина.
Стабильность плазмиды в штамме. При поддержании клеток Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) в течение 6 мес на агаризованной среде, содержащей ампициллин и стрептомицин в соответствующих концентраци х, не наблюдаютс потери или перестройки плазмиды.
П р и м е р 3. Культивирование Pseudomonas sp. 31 (pVN 22).
Штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) вы- ращивгют при 28°С с течение 14 ч на скошенной агаризованной стандартной среде
Хоттингера, содержащей антибиотики: ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 150 мкг/мл. Триметаприм в среду не добавл етс , так как наличие плазмиды R751 на продукцию интерферона не вли ет. Вы- росшую на кос ках биомассу используют дл приготовлени посевного материала. Дл этого клетки перенос т в колбы Эрлен- мейера объемом 750 мл со 100 мл указанной среды, но без агара и выращивают на качал- ке при перемешивании (240 об/мин) в тече- ние нескольких часов при 280C 0-Ds50 посевной культуры должна быть равна приблизительно 1,0-2,5. Ферментацию провод т в ферментере, оснащенном системами дл регулировани температуры, рН, скорости перемешивани и аэрации, датчиком дл измерени парциального давлени растворенного кислорода.
Посевную культуру внос т в количестве 5% в ферментер с указанной средой. Раст т клетки до оптической плотности в стандартных услови х 2-4 при рН 6,7-6,9 и температуре 28±0,5°С. Провод т интенсивную аэрацию и перемешивание. Режим, аэра- ции и перемешивани подбирают так, что рост культуры не лимитируетс концентрацией растворенного кислорода, дл чего значение парциального давлени кислорода поддерживают на уровне 5-10% от насы- щени . Дл стабилизации рН используют аммиачную воду. Рост биомассы контролируют по изменению оптической плотности культуральной среды. После окончани ферментации активность интерферона состав- л ет2,5 х 109 МЕ/л.
Таким образом, создана плазмида, обеспечивающа синтез нового вида человеческого лейкоцитарного интерферона GT-I1 и способна реплицироеатьс во мно-
гих грамотрицательных бактери х. С помощью полученной плазмиды создан штамм - продуцент интерферона и -11 с активностью до 2,5 х 109 МЕ/л культуральчой жидкости.
Использование интерферона а-11 в качестве добавки к смеси других, уже известных лейкоцитарных интерферонов, также получаемых микробиологическим синтезом , позвол ет приблизить лечебный эффект такого комбинированного препарата интерферонов к действию природных лейкоцитарных интерферонов плазмы крови. В дальнейшем возможно и самосто тельное применение интерферона а-11.
Claims (2)
1. Рекомбинантна плазмиднэ ДНК pVN 22, кодирующа синтез интерферона человека, имеет размер 10,85 т.п.о. и состоит из следующих элементов:
EcoRJ-HindfII-фрагмента плазмиды р AYC 37 размером 9,45 т.п.о.; Hindlll-EcoRt- фрагмента размером 1,4 т.п.о., внутри которого расположены; участок ДНК и рВР322 диаметром 0,03 т.п.о.: регул торна область гена D фага уэх 174 размером 0,22 т.п.о.; ген интерферона а -11 размером 0.50 т. п.о.,-участок геномн ой ДНК человека размером 0,65 т.п.о.; генетические маркеры: ген Ар14, обеспечивающий устойчивость к ампициллину; ген StrR, обеспечивающий устойчивость к стрептомицину; уникальные участки узнавани следующих ре- стриктаз; HindlTl - 0; EcoRl - 1,4 т.п.о.. BamHf - 10,82 т п.о.
2. Штамм Pseudomonas sp. ВКПМ В- 3480 - продуцент интерферона а- человека .
EcoRI
EcoRI
Hindi EcoRI
Bom HI
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU864065414A SU1703690A1 (ru) | 1986-04-30 | 1986-04-30 | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
| DE19873790221 DE3790221T1 (ru) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | |
| CH11/88A CH673469A5 (ru) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | |
| JP62503287A JPH01500960A (ja) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | ヒト白血球インターフェロンα‐Ｉ１の生合成をコードする組換えプラスミドＤＮＡ ｐＶＮ２２及びそれを含むヒト白血球インターフェロンα‐Ｉ１の生産体であるシュードモナスＳＰ．３１（ｐＶＮ２２）菌株 |
| GB8729559A GB2199830B (en) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | Recombinant plasmid dna pvn22, coding for biosynthesis of human leukocyte interferon -i1 and strain pseudomonas sp. 31 (pvn22) |
| US07/163,967 US4988622A (en) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | Recombinant plasmid DNA pVN 22 coding biosynthesis of human leukocyte interferon alpha-I1 and strain Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) - producer of human leukocyte interferon alpha-I1 containing same |
| PCT/SU1987/000052 WO1987006613A1 (en) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | RECOMBINANT PLASMID DNA pVN22, CODING FOR BIOSYNTHESIS OF HUMAN LEUCOCYTE INTERFERON alpha-I1 AND STRAIN PSEUDOMONAS sp. 31 (pVN22) - PRODUCER OF HUMAN LEUCOCYTE INTERFERON alpha-I1 CONTAINING IT |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU864065414A SU1703690A1 (ru) | 1986-04-30 | 1986-04-30 | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1703690A1 true SU1703690A1 (ru) | 1992-01-07 |
Family
ID=21236928
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU864065414A SU1703690A1 (ru) | 1986-04-30 | 1986-04-30 | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4988622A (ru) |
| JP (1) | JPH01500960A (ru) |
| CH (1) | CH673469A5 (ru) |
| DE (1) | DE3790221T1 (ru) |
| GB (1) | GB2199830B (ru) |
| SU (1) | SU1703690A1 (ru) |
| WO (1) | WO1987006613A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6089741A (en) * | 1996-08-19 | 2000-07-18 | Cogent Light Technologies, Inc. | Apparatus and method for coupling high intensity light into low temperature optical fiber |
| FR2825716B1 (fr) | 2001-06-11 | 2004-09-24 | Genodyssee | Nouveaux polynucleotides et polypeptides de l'ifn alpha 7 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0072541A3 (en) * | 1981-08-14 | 1984-04-18 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Human leukocyte interferons, process for their microbial production, intermediates therefor and compositions containing them |
| US4748233A (en) * | 1982-03-23 | 1988-05-31 | Bristol-Myers Company | Alpha-interferon Gx-1 |
| SU1364343A1 (ru) * | 1984-07-13 | 1988-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Способ получени человеческого лейкоцитарного интерферона альфа-2 |
-
1986
- 1986-04-30 SU SU864065414A patent/SU1703690A1/ru active
-
1987
- 1987-04-29 US US07/163,967 patent/US4988622A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-04-29 JP JP62503287A patent/JPH01500960A/ja active Pending
- 1987-04-29 CH CH11/88A patent/CH673469A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-04-29 DE DE19873790221 patent/DE3790221T1/de not_active Withdrawn
- 1987-04-29 GB GB8729559A patent/GB2199830B/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-29 WO PCT/SU1987/000052 patent/WO1987006613A1/ru active Application Filing
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Авторское свидетельство СССР N: 1464471,30.09.86. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB8729559D0 (en) | 1988-02-03 |
| DE3790221T1 (ru) | 1988-06-23 |
| GB2199830B (en) | 1990-07-04 |
| GB2199830A (en) | 1988-07-20 |
| JPH01500960A (ja) | 1989-04-06 |
| US4988622A (en) | 1991-01-29 |
| CH673469A5 (ru) | 1990-03-15 |
| WO1987006613A1 (en) | 1987-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0946711B1 (en) | Improved expression vectors | |
| JP2564506B2 (ja) | 異種タンパク質の製造方法 | |
| JPH0665305B2 (ja) | 組換えｄｎａ含有宿主細胞の安定化法 | |
| US6773899B2 (en) | Phage-dependent superproduction of biologically active protein and peptides | |
| AU2001284914A1 (en) | Phage-dependent Superproduction of Biologically Active Protein and Peptides | |
| HU194316B (en) | Process for preparing alpha-l human leukocyte interferone | |
| JPH05503002A (ja) | クローン化されたヘモグロビン遺伝子の発現による細胞増殖の促進 | |
| US7229792B2 (en) | Method of producing recombinant proteins | |
| SU1703690A1 (ru) | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека | |
| JP2658716B2 (ja) | 新規微生物及びそれを用いるｄ−ビオチンの製法 | |
| EA015498B1 (ru) | Способ получения г-ксф человека | |
| JP3325597B2 (ja) | ポリペプチドの製法 | |
| RU2153535C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк psav27, кодирующая синтез растворимого стрептавидина из streptomyces avidinii, и бактериальный штамм escherichia coli - продуцент растворимого стрептавидина из streptomyces avidinii | |
| ES2281822T3 (es) | Vectores de expresion, celulas huesped transformadas y procedimiento de fermentacion para la produccion de polipeptidos recombinantes. | |
| RU2303063C2 (ru) | ШТАММ Escherichia coli BL21 (DE3)[pAYC-ET-(hIFN-α2b)-IacI]-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО АЛЬФА-2b ИНТЕРФЕРОНА И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ | |
| US5147789A (en) | Stabilized expression vectors containing lambda pl promoter and the gene for the CI434 repressor, plasmids containing the vectors, hosts containing the plasmids and related methods | |
| RU2313576C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ КЛОНИРОВАННЫЙ ГЕН Ace VIBRIO CHOLERAE И ШТАММ ESCHERICHIA COLI-ПРОДУЦЕНТ ACCESSORY CHOLERAE ENTEROTOXIN VIBRIO CHOLERAE | |
| RU2787531C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА PET32a-TNF-Thy, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО БЕЛКА α-ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ - ТИМОЗИН АЛЬФА 1, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)/PET32A-THF-Thy - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy | |
| SU1703693A1 (ru) | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ - @ 2-19, кодирующа синтез интерлейкина-2 человека, способ ее конструировани @ штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент интерлейкина-2 человека | |
| RU2326168C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pIF TREN, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli-ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b ЧЕЛОВЕКА | |
| US20090104656A1 (en) | System for the Inducible Expression of Recombinant Proteins in Cyanobacteria | |
| RU2165455C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pSS5, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО АЛЬФА-2b ИНТЕРФЕРОНА, ШТАММ ESCHERICHIA COLI SS5 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО АЛЬФА-2b ИНТЕРФЕРОНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b | |
| RU2326169C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pA3GF, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА | |
| EP0281104A1 (en) | Novel plasmids | |
| RU2045575C1 (ru) | Рекомбинатная плазмидная днк ppr - tgatg - hil - 1 beta - tsr, обеспечивающая синтез рекомбинантного интерлейкина-1 и штамм escherichia coli - продуцент рекомбинантного интерлейкина-1 бета человека |