SU1648978A1 - Method of detection of escherichia virulence - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и касаетс  вы влени  вирулентности эшерихий. Цель изобретени  - повышение точности способа Выделенные штаммы патогенных эшерихий засевают секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с м сопептонным агаром, инкубируют в термостате при 37 ± 0,2°С в течение 16-20 ч. На выросшие культуры внос т пипеткой 4-5 см раствора азурэозина по Романовскому , дополнительно разведенного V10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и учитывают наличие темно-синего или черного окрашивани  роста вирулентных штаммов. Способ дает совпадающие результаты со способами Н1у, CFA, ККП (соответственно гемолиз в среде с 5% эритроцитов, d-маннозорезистентна  гемаглютмнзци , кератоконьюнктиваль- на  проба). 1 таблThis invention relates to medical microbiology and concerns the detection of the virulence of Escherichia. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method. The isolated strains of pathogenic Escherichia are seeded in sectors of 6-8 strains per dish with m seppepton agar, incubated in a thermostat at 37 ± 0.2 ° C for 16-20 hours. pipette 4-5 cm of the azureosin solution according to Romanovsky, additionally diluted with V10 distilled water. After 1-2 minutes, the paint is drained and take into account the presence of dark blue or black staining for the growth of virulent strains. The method gives the same results with the methods H1y, CFA, CCP (respectively, hemolysis in the medium with 5% of red blood cells, d-mannose-resistant hemagglutmism, keratoconjunctival sample). 1 tab

Description

Изобретение относитс  к медицинской микробиологии и касаетс  вы влени  вирулентности эшерихий.This invention relates to medical microbiology and concerns the detection of the virulence of Escherichia.

Цель изобретени  - повышение точности способа.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method.

Способ осуществл етс  следующим образом .The method is carried out as follows.

Выделенные штаммы патогенных эшерихий различных серогрупп засевают секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с м сопептонным агаром (МПА) Дл  получени  более четкого результата МПА осветл ют путем фильтрации в гор чем виде через ватно-марлевый фильтр, последующего отстаивани  и декантировани .The isolated pathogenic Escherichia strains of different serogroups are seeded with sectors of 6-8 strains per plate with m of septon agar (MPA). To obtain a more accurate result, MPA is clarified by hot filtration through a cotton gauze filter, followed by settling and decanting.

Посевы в чашках инкубируют в термостате при 37 ± 0,2°С в течение 16-20 ч, т.е. до получени  четкого роста по штриху. На выросшие культуры осторожно, не каса сь штриха посева и поверхности питательной среды, внос т пипеткой 4-5 см3 раствора азурэозина по Романовскому, разведенногоCrops in the plates are incubated in a thermostat at 37 ± 0.2 ° C for 16–20 h, i.e. until a clear increase in stroke. Carefully, without touching the sowing line and the surface of the nutrient medium, with a pipette, add 4-5 cm3 of an azureosin solution according to Romanovsky, diluted

1:10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и при наличии темно- синего ( или черного) окрашивани  колоний культуру относ т к вирулентной.1:10 distilled water. After 1-2 minutes, the paint is discarded and, in the presence of dark blue (or black) colony staining, the culture is considered virulent.

Колонии и штриховой рост невирулентных штаммов патогенных эшерихий остаютс  бесцветными или окрашенными лишь по кра м в светло-зеленоватый или голубоватый оттенок.The colonies and stroke growth of the non-virulent pathogenic Escherichia strains remain colorless or colored only marginally in a light greenish or bluish tint.

Дл  учета степени выраженности виру- лентности используют следующую систему:To account for the severity of virulence, the following system is used:

4+ - черное окрашивание (резко выраженна  реакци );4+ - black staining (pronounced reaction);

3+ - темно-синее окрашивание (выраженна  реакци );.3+ - dark blue staining (pronounced reaction) ;.

2+ - синее окрашивание (положительна  реакци );2+ —blue staining (positive reaction);

1+ - зеленовато-голубоватое окрашивание всего штриха или колонии (слабо выраженна  реакци ;1+ - a greenish-bluish coloration of the entire stroke or colony (mild reaction;

±- слабое окрашивание по краю штриха или колонии (сомнительна  реакци );± - faint staining along the edge of the line or colony (questionable reaction);

соwith

сwith

оabout

4 004 00

ю VJyu vj

0000

- отсутствие окрашивани  роста (отрицательна  реакци ).- no growth staining (negative reaction).

Вирулентными штаммами считают лишь те, которые дают реакцию не менее чем на 2 плюса.Virulent strains are considered only those that give a reaction of at least 2 pluses.

Данным способом изучена вирулентность 167 штаммов патогенных эшерихий, выделенных из различных источников. По- ложительйый результат вы влен в 26,9±3.2% культур.In this way, the virulence of 167 pathogenic Escherichia strains isolated from various sources was studied. A positive result was found in 26.9 ± 3.2% of the cultures.

В таблице приведены сравнительные данные по вы влению вирулентности эшерихий предлагаемым способом и трем  другими: Hly, CFA и ККП.The table shows the comparative data on the detection of the virulence of Escherichia by the proposed method and three others: Hly, CFA and PCF.

Как видно из приведенных данных, предлагаемый способ дал совпадающие ре- з|гльтаты со статистически несущественными различи ми (t 0,8-1,8).As can be seen from the above data, the proposed method gave coinciding results | with the statistically insignificant differences (t 0.8–1.8).

Совпадающие результаты предлагаемого метода с трем  другими достигают 46,7%, а при сравнении с шестью другими способами (культур клеток и др) - до 77,78%.The matching results of the proposed method with three others reach 46.7%, and when compared with six other methods (cell cultures, etc.) - up to 77.78%.

00

5five

00

5five

У 60 штаммов совпадение положительных результатов наблюдают по 3-4 способам , а в 18% - по 5-6. У остальных 22 % было совпадение по 2 способам или вообще не вы влено такового.In 60 strains, the coincidence of positive results is observed in 3-4 ways, and in 18% - 5-6. The remaining 22% had a coincidence in 2 ways, or none at all.

Преимущества предлагаемого способа заключаютс  в его экспрессности (3-5 мин), простоте, экономичности, четкости результатов , высокой чувствительности, воспроизводимости на простой питательной среде (МПА), доступной дл  любой бактериологической лаборатории.The advantages of the proposed method consist in its rapidity (3-5 minutes), simplicity, efficiency, clarity of results, high sensitivity, reproducibility on a simple nutrient medium (MPA), available for any bacteriological laboratory.

Claims (1)

Формула изобретени Invention Formula Способ определени  вирулентности эшерихий, включающий выращивание чистой культуры на плотной питательной среде, отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности способа, на выросшую культуру нанос т стандартный раствор азу- рэозина по Романовскому в разведении 1:10 дистиллированной водой на 1-2 мин, затем краску удал ют и при наличии черного или темно-синего окрашивани  колоний культуру относ т к вирулентной.A method for determining the virulence of Escherichia, including growing a pure culture on a dense nutrient medium, characterized in that, in order to increase the accuracy of the method, a standard solution of azureazin according to Romanovsky is applied to the grown culture at a dilution of 1:10 with distilled water for 1-2 minutes, the paint is then removed and, in the presence of black or dark blue staining of the colonies, the culture is considered virulent.