SU1412288A1 - Strain of bacteria brevibacterium flavum producent l-serine - Google Patents

Description

(46) 07,12.91. Бюл. № 45 1(46) 07,12.91. Bul No. 45 1

(21)4094083/13(21) 4094083/13

(22)18,07.86(22) 18.07.86

(7) Всесоюзный иаучно-исследователь- екий институт генетики и селекции промьшшенных -микроорганизмов (72) Э.А. Буриков, Н,И. Щданова, В.Г« Ясиновский, Л.Ф. Козырева, А.К. Соколов, Н.В. Алафаева,(7) All-Union Scientific and Research Institute of Genetics and Selection of Industrial Microorganisms (72) E.A. Burikov, H, and. Shdanova, V.G. “Yasinovsky, L.F. Kozyrev, A.K. Sokolov, N.V. Alafayev,

А.Ф. цева (53) (56)A.F. target (53) (56)

Юолни, Н.Г, Демина и Н.Ф. Рум н663 .15(088.8)Yuoli, N.G., Demina and N.F. Room n663 .15 (088.8)

Патент Англии № 1226786, кп. С 2 Р 13/06, 1971.Patent of England No. 1226786, CP. C 2 R 13/06, 1971.

Патент США 3843441, 14л. С 12 Р 13/06, 1974.U.S. Patent 3,843,441,14l. C 12 P 13/06, 1974.

(54)ШТАММ БАКТЕРИЙ BREVIBACTERIUM FLAVUM-ПРОДУЦЕНТ L-СЕРИНА (57) Изобретение относитс  к микробиологической промьшшенности и касаетс  нового штамма - продуцента аминокислоты L-серина, который может быть использован как пишева  добавка, компонент питательных смесей леди- цинского назначени , а также в фарма) цевтической и косметической промьшлен- HocTti. Цель изобрете ш  - огтамм бактерий - продуцент L-серина,обладающий способностью к более высокому накопле- Kvao аминокислоты в культуральной жидкости . Штамм Brevibacterium flawun ВКПМ В-3559 получен путем селекции с использованием К-метил-Н-нитро-Н- иитрЪэогуанидина, а в качестве селек-. тивных факторов 1,5 мг/мл 8-азаадени- на, 15 1Г/мл « -метий-серинаи 20МГ/МП д 0-метилсерина. Штамм после 72 ч ферментации способен накапливать в культуральной жидкости до 15 г/л L-серн- на. 1 табл.(54) STRAIN BACTERIUM BREVIBACTERIUM FLAVUM-PRODUCER L-SERINA (57) The invention relates to the microbiological industry and relates to a new strain - the producer of the amino acid L-serine, which can be used as a food additive, a component of nutritious mixtures of lady's purpose, and also Pharma) Pharmaceutical and Cosmetic Industry - HocTti. The purpose of the invention w - bacteria bacterium - producing L-serine, which has the ability to a higher accumulation of Kvao amino acids in the culture fluid. The Brevibacterium flawun VKPM B-3559 strain was obtained by selection using K-methyl-N-nitro-N-i-tb-neoguanidine, and as selection. Factors of 1.5 mg / ml 8-azaadenine, 15 1G / ml "-methium-serine and 20MG / MP g 0-methyl serine. After 72 hours of fermentation, the strain is able to accumulate up to 15 g / l of L-hern in culture liquid. 1 tab.

«"

СПSP

Изобретение отиоснтсп к микробио логической промышленности и касаетс  нового штамма - продуцента амииокис лоты L-сернпа, который может быть нспользопап как пищева  добавка, компонент питательных смесей медицине- кого и азиаченп , .а также в фармацев тнческсй и косметической ироньштенHOCTIS ,The invention of the microbial industry is related to the new strain - the producer of amyioxides of the L-sernpa, which can be used as a food additive, a component of the nutritional mixtures of medicine and Asia, and also in pharmaceutical and cosmetic medicine and cosmetics.

Цель изобретепи  - бактс рий - продуцент L--cepHiia, обладающий способностьн} к более накоплению аминокислоты в культуральной жидкости.The purpose of the invention is bacterium producing L-cepHiia, which is capable of increasing the accumulation of amino acids in the culture fluid.

Штамм получен из штамма дикого типа Brevibacterium flavura АТСС 14067 в результате ступенчатой селекции е использованием- в качестве t-гутагенноThe strain obtained from the wild-type strain Brevibacterium flavura ATCC 14067 as a result of stepwise selection e using as a t-mutagenic

15 Рост на МПА -ши агаре Хоттингара; через 3-5 суток роста прк 30°С образуют колонии диаметром f-iM,кремовые ,, поверхность гладка , юрма выпукла , край ровный, структура одно2515 Growth on MPA —shi agar Hottingara; after 3-5 days of growth prc 30 ° C form colonies with a diameter of f-iM, cream, the surface is smooth, the jurma is convex, the edge is smooth, the structure is one25

го фактора к-мет-.ш-М-нитро-Ы-нитрозо- 20 родна . При iiocese штрихом через 3-еfactor k-met-.ш-М-nitro-Н-nitroso-20. With iiocese stroke through 3rd

гуанидина (-НГ), а в качестве селекguanidine (-NG), and as selek

тивных факторов - аналогов пуринов .,tive factors - analogues of purines.,

и серина: 8-азааденипа, й-метип-се- and serine: 8-aza-adenip, y-meti-se-

рина и 0-матнлсернна в концентраци хrin and 0-miter in concentrations

1,5 мг/мл, 15 мг/мл и 20 мг/мл соот- ветстаенно. На четвертом этапе селекции клетки родительского штамма,, обработан ша НГ, выселнь на минимальную среду с повышенным содержанием . фосфата (KHjPO), содержащую аланин1.5 mg / ml, 15 mg / ml and 20 mg / ml respectively. At the fourth stage of selection, the cells of the parent strain, are treated with sha NG, evicted to a minimal environment with a high content. phosphate (KHjPO) containing alanine

н качестве источника углерода. На.n as a carbon source. On.

этом этапе вьиепен штамм 15604 и иAt this stage, the strain 15604 and

дальнейшем его естестренпый вариантfurther its natural option

1560А-15 (схема селекции).1560A-15 (selection scheme).

Схема селекции ггродуцентов Breeding scheme

рина;rina;

30thirty

3535

суток рост умеранный край гладкий, поверкность матова  плотна ,, и.зет желто 2;ремовый. При посеве уколом рост в глубине агара слабый,  а поверхности умеренный,days, the growth of a moderate edge is smooth, the mattness of the mat is dense, and yellow 2; removy. When sowing a spike, growth in the depth of the agar is weak, and the surface is moderate,

Рост на минеральной среде с глюкозой биотиног и через 3-е сугок пр  30 С обрпэушгс  округльчв KoiiO i5-iH диаметром 2 ;-ff-i, край ровный структура однородна , консистенци  гестообра .-uan,, полерк-- ность ггадкйл, цвет ло.пзний желто-- креповый. Рост штриха через 2-е суток умкркм Пз1Й5 поверхносг:;- матова , желто-кремоного цвета,Growth on the mineral medium with glucose biotinog and after the 3rd sugok pr 30 C obrpeushgs round KoiiO i5-iH with diameter 2; -ff-i, the edge is smooth, the structure is homogeneous, consistency is consistent. .zpny yellow-- crepe. The growth of the stroke after 2 days umkrkm Pz1Y5 surface:; - matt, yellow-cremonic color,

Физнолого-биохими ескне признаки.Biofeedback biochemistry signs.

лзб - lzb -

НГNg

fri метнл серин j 15 мг/млfri methnl serine j 15 mg / ml

-9606-9606

НГ О-метил- серин,NG O-methyl-serine,

20 МГ/МПг20 MG / MPg

П351P351

...ЛЕ™. а.паннн в качестве нс- точнкка уг- лерода. по вышенн ое содержание фосфата... LE ™. A.pannn as a carbon unscraper. higher phosphate content

...-J ISSOA...- J ISSOA

- без мутагена- without mutagen

15604-15.15604-15.

Щтамм хран т и столбиках полужидкого (0,7%) агара под слоем назепн- новогл масла nin; температуре 2-4 С или в лиоф1шьном состо нии в запа н- ных ампулах при комнатной температуре .Shtamma is also stored in columns of semi-liquid (0.7%) agar under a layer of nased oil of nin; at a temperature of 2–4 ° C or in a lyophilized state in sealed ampoules at room temperature.

Штагда В. flavinTi генетика 1560 -15 депонирован Всесоюзной коллекцией проьтышленньк микроорган-измов под номером СКГШ В-3559 и имеет следующую культура л ь 0-морфологическую и физиолого-биохимическую характеристику .The Stagda B. flavinTi genetics 1560 -15 was deposited with the All-Union collection of industrial microorganisms under the number of SKGSH B-3559 and has the following culture l 0-morphological, physiological and biochemical characteristics.

Культурально-корфологические прк-знаки .Cultural and Corfological prk signs.

Морфологи  клеток : гслеткк оваль ные раамером 1,0-1,8 х 0,5-0,,8 мк, неподв1ет.11ые, грамположнтельные, спор не образуют.Cell morphology: the cell is oval with a raamer of 1.0-1.8 x 0.5-0, 8 microns, uncontrolled, gram-positive, do not form spores.

Рост на МПА -ши агаре Хоттингара; через 3-5 суток роста прк 30°С образуют колонии диаметром f-iM,кремовые ,, поверхность гладка , юрма выпукла , край ровный, структура однородна . При iiocese штрихом через 3-еGrowth on MPA —shi agar Hottingara; after 3-5 days of growth prc 30 ° C form colonies with a diameter of f-iM, cream, the surface is smooth, the jurma is convex, the edge is smooth, the structure is uniform. With iiocese stroke through 3rd

5five

00

5five

00

00

. при. at

суток рост умеранный край гладкий, поверкность матова  плотна ,, и.зет желто 2;ремовый. При посеве уколом рост в глубине агара слабый,  а поверхности умеренный,days, the growth of a moderate edge is smooth, the mattness of the mat is dense, and yellow 2; removy. When sowing a spike, growth in the depth of the agar is weak, and the surface is moderate,

Рост на минеральной среде с глюкозой биотиног и через 3-е сугок пр  30 С обрпэушгс  округльчв KoiiO i5-iH диаметром 2 ;-ff-i, край ровный структура однородна , консистенци  гестообра .-uan,, полерк-- ность ггадкйл, цвет ло.пзний желто-- креповый. Рост штриха через 2-е суток умкркм Пз1Й5 поверхносг:;- матова , желто-кремоного цвета,Growth on the mineral medium with glucose biotinog and after the 3rd sugok pr 30 C obrpeushgs round KoiiO i5-iH with diameter 2; -ff-i, the edge is smooth, the structure is homogeneous, consistency is consistent. .zpny yellow-- crepe. The growth of the stroke after 2 days umkrkm Pz1Y5 surface:; - matt, yellow-cremonic color,

Физнолого-биохими ескне признаки.Biofeedback biochemistry signs.

Отношение к источ1;икам углерода: хорошо растет на глюкозеs мальтозе, сахарозе, рамнозе, фруктозе, ; 5акките5 сорбите; не растет па арабинозе, лактозе .Relation to sources; Ikam carbon: grows well on glucose maltose, sucrose, rhamnose, fructose,; 5kkite5 sorbit; does not grow pas arabinose, lactose.

Отношение к КСТОЧНИКБМ азота: ycвaивae азот акц-.спкГ ньт с полей м Ш ЧРЕины, гйту не ра; ;к1теает.Attitude to KSTOCHNIKBM nitrogen: ycvaivae nitrogen ats-.spcG nt from the fields of the W of the CREIN, gyu not ra; ; k1teat.

Рост в жидкой среда с глюкозой в присутствии 8-аззаден:.ша (см, таблицу ) ,Growth in a liquid medium with glucose in the presence of 8-azzaden: .sh (cm, table),

АэробAerobe

Растет npv: тетжературе 37 С и ни;9:еGrows npv: tetrahura 37 C and neither; 9: e

Оптимальна  гемпеоатура роста 28-30 С,Optimal hemopoeatura growth 28-30 C,

растет при рИ в д/лап л оне ч,grows with rI in d / paw one h,

Практткеское нопользовапп-в лагаемого штаклз-продуцента 1,серина осуществл ют следук|;д м обраг-юм.The practical use in the lagged shtakl-producer 1, serine is carried out following the following;

Кзшьтуру В- flavutn BKIIfi, B-355S выратщшают в тече.ииз 24-36 чKzshuturu B-flavutn BKIIfi, B-355S grow over time from 30-36 hours

на «гариэова} нои предеon “Garieova} Noi Pre

3I3I

тингера, затем высеивают в предварительно простерилизованние вместе с посевной средой колбы дл  выращивани посевного материала. После засева культуры колбы устанавливают на круговую качалку и культивируют при 220 240 об/мин при 28-30°С.They are then sown in a pre-sterilized flask for growing seed together with the seed medium. After seeding the culture of the flask set on a circular rocking chair and cultured at 220 240 rpm at 28-30 ° C.

Готовьй посевной материал внос т в колбы с ферментационной средой, со }1ержащей источники углерода (сахар иЛ1 сахарозу), азота, ростовых факторов, минеральные соли и витамины (биотин, дестиобиотин, тиамин).Preparing seed material is introduced into flasks with a fermentation medium containing carbon sources (sugar and L1 sucrose), nitrogen, growth factors, mineral salts and vitamins (biotin, destiobiotin, thiamine).

Бее компоненты среды стерилизуют под давлением, рН среды довод т до заданного уровн  до и после стерилизации .Bare components of the medium are sterilized under pressure, the pH of the medium is adjusted to a predetermined level before and after sterilization.

Ферментацию провод т на круговой качалке (Z20-2AO об/мин) при 28-32 СThe fermentation is carried out on a circular rocking chair (Z20-2AO rpm) at 28-32 ° C.

Содержание L-серина в культураль- ной жидкости определ ют методом тонкслойной хрс матогр фии на пластинах Silufol в системе растворителей: ацетон, изопроланол, 25% аммиак, вод ( ,2:0,8) li методом бумажной хромато графии в системе; бутанол, уксусна  кислота, вода (4:1:1).The content of L-serine in the culture fluid was determined by thin-layer XCR mathematics on Silufol plates in the solvent system: acetone, isoprolanol, 25% ammonia, water (, 2: 0.8) and paper chromatography in the system; butanol, acetic acid, water (4: 1: 1).

После отделени  биомассы нативнын раствор пропускают через сульфокати онит, на котором нар ду с серином сорбируютс  и сопутствующие аминокислоты , которые при последующем элго ировании аммиачным раствором также переход т в элюат.After separation of the biomass, the native solution is passed through sulfonic acid, on which, along with serine, the accompanying amino acids are also sorbed, which, during subsequent elgoing with ammonia solution, also pass into the eluate.

С целью отделени  конечного про,- дукта от глутаминовой кислоты фракции злюата, содержащие серин и сопутствующие аминокислоты, пропускают через колонку с анионитом ЭДЭ-10П в ацетатной форме (предварительно обработанный уксусной кислотой).In order to separate the final product, glutamic acid from the glutamic acid, the fractions of serum containing serine and related amino acids are passed through a column with anion exchanger EDE-10P in acetate form (pretreated with acetic acid).

Достигаемый при этом положитель- , ный эффект обуслоЕшен селективной сорбцией глутаминовой кислоты на анионите ЭДЭ-10П и ацетатной форме. Известные в практике ионные формы анионита, примен емые дл  разделени  нейтральных и кислых аминокислот, не позвол ют решить поставленную задачу отделени  серина от глутаминовой кислоты , так как анионит в ОН-форме сорбирует все наход щиес  в растворе аминокислоты, а анионит в СI-форме или с анионами друт их минеральньтх кис лот их вообще не сорбирует.The positive effect achieved in this case is due to the selective sorption of glutamic acid on the EDE-10P anion exchanger and the acetate form. The ionic forms of anion exchangers known in practice, used for the separation of neutral and acidic amino acids, do not solve the problem of separating serine from glutamic acid, since the anion exchange resin in the OH form absorbs all the amino acids in solution, and the anion exchange resin in the CI form or with anions, their mineral acids are not absorbed by mineral acids.

Дл  отделени  серина от нейтраль- аминокислот, Т.ЧКИХ как аланин.To separate the serine from the neutral amino acids, T. CCHIKH as alanine.

JQ Jq

J5 J5

2020

2525

ЗО 35ZO 35

Q Q

4545

00

5five

глицин, примен етс  I cpeкpиcT nлl1:. l- ци  из 20-30%-ного растрора этанола ,glycine, applied I llll :. l- qi from 20-30% ethanol raster,

Выход кристаллического сермтта и ) ферментационного раствора составл ет 30-65%, чистота конечного продукта не менее 991,The yield of crystalline serum and) fermentation solution is 30-65%, the purity of the final product is not less than 991,

Пример 1. Культуру штамма В, flavum ВКГШ В 3559 выращивают 24 ч на агаризованной среде Хоттин- гера, затем петлей высевают в колбы е 1Костью 250 мл, содержащие 15-30 мл посевной среды. В качестве посевной среды используют бульон Хоттингера, содержащий 0,3% сахарозы.Example 1. The culture of strain B, flavum HCG B 3559 is grown for 24 hours on Hottinger agar medium, then looped into flasks e with a bone of 250 ml containing 15-30 ml of inoculum. As a sowing medium using Hottinger broth containing 0.3% sucrose.

После засева культуры колбы устанавливают на круговую качалку и ры- рашивают посевной материал при 220 240 об/мин в течение 24 ч при . Готовый посетзной материал в количестве 10% (по объему) внос т в колбы емкостью 250 мл, содержащие 15 мл ферментационной среды следующего состава , г/л: сахароза - 120; (NH)SO - 25; КНеРО - 0,4; - 0,4; мел - 35,0; кукурузный экстракт - 4,0; биотин или дестиобиотин - 150 мкг/л; тиамин - 100 мкг/л; водопроводна  вода - остальное. Все компоненты среды стерилизуют вместе при 0,5 атм в течение 30 мин. Ферментацию провод т на указанной вьше качалке при 28°С. После 96 ч культивировани  в культуральной жидкости образуетс  14,5 г/л L-серина, а также ала- нип, глицин и глутаминова  кислота. Выделе1П-1е кристаллического L-серина провод т следующим образом: 380 МП культуральной жидкости с концентрацией серина 14,5 г/л, содержащей также 6,3 г/л глутаминовой кислоты , 2,6 г/л аланина и 1 г/л глицина, после отделени  биомассы пропускают через колонку с сульфокатионитом . КУ-2-8 в Н-форме. Сорбированные аминокислоты после промывки катионита водой элюируют 2н раствором аммиака. Затем элюат пропускают через колонку с анионитом ЭДЭ-10П в ацетатной форме дл  отделени  тлутаминовой кислоты . Раствор, пропущенный через анионит , выпаривают под вакуумом. К упа- ренному раствору добавл ют при перемешивании 1 объем этанола. Выпавшие кристаллы отдел ют фильтрованием и промывают спиртом. Затем провод т перекристаллизацию из расттзора полученных кристаллов в 24%-ном растворе этанола. В результате получают 3,6 гAfter seeding the culture, the flasks are placed on a circular rocking chair and the seed is felled at 220–240 rpm for 24 hours at. The finished viscose material in the amount of 10% (by volume) is introduced into 250 ml flasks containing 15 ml of fermentation medium of the following composition, g / l: sucrose - 120; (NH) SO - 25; KERO - 0.4; - 0.4; chalk - 35.0; corn extract - 4.0; biotin or destiobiotin - 150 µg / l; thiamine, 100 μg / l; tap water - the rest. All components of the medium are sterilized together at 0.5 atm for 30 minutes. Fermentation is carried out on the above rocking chair at 28 ° C. After 96 hours of cultivation, 14.5 g / l of L-serine, as well as alanip, glycine and glutamic acid, are formed in the culture fluid. The selection of 1P-1e of crystalline L-serine is carried out as follows: 380 MP of culture fluid with a serine concentration of 14.5 g / l, also containing 6.3 g / l of glutamic acid, 2.6 g / l of alanine and 1 g / l of glycine after separation of the biomass is passed through a sulfonic cation exchange column. KU-2-8 in the H-form. Sorbed amino acids after washing the cation exchanger with water are eluted with 2N ammonia solution. Then, the eluate is passed through a column with EDE-10P anion exchange resin in an acetate form to separate the tlutamic acid. The solution passed through the anion exchange resin is evaporated under vacuum. With the stirring, 1 volume of ethanol is added to the evaporated solution. The precipitated crystals are separated by filtration and washed with alcohol. Then, recrystallization of the obtained crystals in a 24% ethanol solution from the rattzor is carried out. The result 3.6 g

кристгитпчпског о пеществг с содержа- ием серииа не метгее. 99,0%.Christgitpchg about the content of the series not metgee. 99.0%.

П р и м ер 2. Посевной материал культуры шташ- а В. flavuui выращипа от Кик D ггрлмкрц I;, но ВКПМ В-3559 на посевной среде следующего состава, г/л: сахароза - 20,0; ( 7, кукуруз шй экстракт - 30,0; HgSO,j| х X 7НО-- 3,0; МИЛ - 5;.0; дестибнотии 50 ь;кг/л; .водопроводна   ода - ос- тпльпое. pii сред ь до стерилизации ,пспод 7т раствором NaOll до 8.,0-0,2. Бее К(3мпоие1 ты среды стериализуют «мосте при 0,8 Rm г- тегченна 30 мни. ГотоЕыГг посенг{ой материал внос т в кол5-р1 1 ствс 0/1 (по объеь у) в колбы снкость о 750 tu 5 содержапше 20 кл фермк 1тац1 011 Шй среды следующего со Example 2. Sowing material culture shtash-a B. flavuui cultivated from Kik D ggrlmkrts I; but VKPM B-3559 on the sowing medium of the following composition, g / l: sucrose - 20.0; (7, corn syru extract - 30.0; HgSO, j | x X 7NO-- 3.0; MIL - 5; .0; destibnotia 50 b; kg / l;. Water pipe - osploe. Pii middle b prior to sterilization, pspod 7t with NaOll solution up to 8., 0-0.2. Bore K (3 times the medium sterilizes the bridge at 0.8 Rm g-tagged for 30 minutes. ReadyYouGG posseng {th material is added to col 5-p1 1 cfs 0/1 (by volume y) in flasks of about 750 tu 5 containing 20 cl of ferms 1tats1 011 Shy of the medium of the next

22882288

дуюш,его составаblowing his composition

г/л: сахар 00;g / l: sugar 00;

кукурузный экстракт 5; (N11)504. 13| 0,5; ligSO 0,5; тиамин i,5. дестиобиотии 3, пеногаснтель 1; мел 30J вода остальное,corn extract 5; (N11) 504. 13 | 0.5; ligSO 0.5; thiamine i, 5. Destiobiotia 3, foam agent 1; chalk 30J water the rest,

рН срсгды перед дойайле 1нем мела допод т NaOH до 7,6-7,8. Ферментацию провод т п фермелгтере с рабочим об-ье10 мои л. Реж1Ш ферментации; аэрирование культуральной жидкости Of5.sj/мин при постолином персие1, {твани-и 800 об/г.ин и температуре 30 32 С. рН статкрова- SSHH к первые 40 ч культивировани The pH of the srgsga before doyle 1nem chalk provides NaOH to 7.6-7.8. Fermentation is carried out in a farmergtere with a working area of 10 l. Rezh1Sh fermentation; aeration of the culture liquid Of5.sj/min with postoline persie1, {tvani-800 rev / g and 30 32 C. pH of the bed – SSHH for the first 40 hours of cultivation

J5 па уровне 6,5-7jO осуществл ют путем подачи в культуральиую жидкость подпитки п вид  смес  сахара ц аммиач- Юй воды ггри коице 5трацш1 Е смеси 420 г/л и массовом соотношенииJ5 at the level of 6.5–7 jO is carried out by feeding into the culture liquid a make-up n kind of a mixture of sugar and ammonia-water of a water of 5 kg of E mixture 420 g / l and a mass ratio

ставй, г/nl сахар-сырец кубичский им-20 сахар;азот - ., Прь- этом потрейл 1Юрт )1ЫЙ - 130J ( 30 30sO; KIljPO - 0,51 MsSD -7HjO - 0,5; кукурузный экстракт - 5jO; мел - 4,05 дестиобиотии - 200 мкг/л; тиамип -. 100 нкг/л; иодопросрдн   вода - ос- 25 талыгое.put, g / nl raw sugar cubic im-20 sugar; nitrogen -., this is rubbed 1 Yurt) 1YI - 130J (30 30sO; KIljPO - 0.51 MsSD -7HjO - 0.5; corn extract - 5jO; chalk - 4.05 dystobiotic - 200 µg / l; thiamip - 100 nkg / l; and interrogated water - 25 talygoy.

Dee KO№ Oiis;i r ji среды с терилиэуют кмЕСта при 0,5 атм в течение 30 мин. Фе D ip тт Vit o ;гровод т isa качалке пр:- :10 , ;. ч: в примере 1. После 72 ч в кульууральиой жидкости накапливаетс  1 5 5-0 с ерика , ,Dee KO No. Oiis; i r ji of the medium with tertiary km EST at 0.5 atm for 30 min. Fe D ip tt Vit o; guided t isa rocking pr: -: 10,;. h: in example 1. After 72 h, 1 5 5-0 s eric accumulates in the culture fluid,

Бищелепкп кристаллического L-серн- на гфонод т,, как j-s в примере 1 из 380 м культуральной жи/ах ости с центрацие1г серина 5,0 г/л, содержащей такжр 12 f/.JT 1 лутамииозой кислоты, 5 J, 3 г/л аланипа и 1 г/л глицина. В ре- г ультате получают 2,8 г кристалличес30Bischleep crystalline L-chyrnum gfonod t, as js in example 1 of 380 m of culture vein / ay awn with centration of serine 5.0 g / l, containing also 12 f / .JT 1 lutamiois acid, 5 J, 3 g / l alanip and 1 g / l glycine. In reg u ultae, 2.8 g of crystalline 30 are obtained.

3535

етс  т-ш поднитки. После ДО ч фepмe Iтaди ; подлитку отключают и далее р1 -статирование на уровне 5,0- 6,5 осуществл ют за счет имеющегос  в среде мела. Фермента закакч;ша- ют через 73 ч лосле тасева аппарата, когда коицентраиик сахара в культу- ральлой снижаетс  до нул , . Концентраци  L-сйркна в культураль- ной Ж1ЩКОСТИ достигает 4,5 г/л.ts shitnits. After BEFORE Farm, Go; the tiling is turned off, and then the p1 stating at the level of 5.0-6.5 is carried out at the expense of the chalk in the environment. Enzyme zakakch; shake after 73 h in the Los apparel apparatus, when the coicentration of sugar in the culture is reduced to zero,. The concentration of L-syrkna in the culture area reaches 4.5 g / l.

Выделение Ъ серина нрозодпт из 380 f-U7 культур:и;ьной ;;;вдкости с концентрацией серии . 4,5 г/л, содержащей также {0,5 г/л глутаминовой кислоты , 8 г/л a.v fi niaa и S г/л глицина. Выделение серинз до стадии перекрис- таллизац:п прово;,ЯТ5 как описано в примере 1. Перекристаллизацию серина провод т из 30%--ного раствора этанола. Б результате получает 1,7 г кристаллов с содержанием L-серина ке менее 99%.Selection of serine nrozodpt b from 380 f-U7 cultures: and; dy ;;; with a concentration of a series. 4.5 g / l, containing also {0.5 g / l glutamic acid, 8 g / l a.v fi niaa and S g / l glycine. Separation of the serains to the recrystallization stage: n wire;, JT5 as described in Example 1. Serine is recrystallized from a 30% ethanol solution. The result is 1.7 g of crystals with an L-serine ke content of less than 99%.

ьсого пещаст а мрпеи 99,0%.The cave and marpei is 99.0%.

:одержаииеь- н: obyatee

3. Культуру ВК.П-М как3. Culture VK.P-M as

8-35398-3539

13 npUMi13 npUMi

нроду- , цыращи ре S .nroduo-, chi re S.

П р « м е iisirra И-. i iavs an вают v.a кослках; Затнм суспензию клеток, смытых с агйра, виоспт в колбы емт хОстью 750м; с 60 мл жидкой среды следующего со-. гтак.. г/л; сахар 30: кукурузньй з :стрш т 2П; (Nlb)SO. 7; Ог4; ligSO,: 71120 0,4; дестчобиотин 5, ; тиамн 5,0-10 ; мел 5; вода остальное.P r «m e iisirra i-. i iavs an va va koslkah; Zatm suspension of cells washed from the ayra, viospt in flasks with a capacity of 750m; with 60 ml of the liquid medium of the following co. gtak .. g / l; sugar 30: corn s: psht 2P; (Nlb) SO. 7; Og4; ligSO: 71120 0.4; childbotin 5,; Tiam 5.0-10; chalk 5; water the rest.

Поссй1-;уго среду перед добавлением мала одЕслачинаютНаОИ до рИ /,6-7,8.Possi1-; the medium, before addition, add little to an ionic oxide to the pH /, 6-7.8.

Посевном материал выращивают иа круго.. ;й. качалке при 28-3 0 С в таче- Пие 25 30 м. Г(5тоБЬ Й пэсенной мате- риа;т в количес тпе 8-10% (по объес-гу) inioc iT в ферментационную среду елеSowing material is grown both round ..; nd. rocking chair at 28-3 0 С in tache- Pie 25 30 m. G (5TOBI PESEN MATERIAL; t in a quantity of 8-10% (by volume) inioc iT into the fermentation medium

5 five

00

5five

00

э uh

00

етс  т-ш поднитки. После ДО ч фepмe Iтaди ; подлитку отключают и далее р1 -статирование на уровне 5,0- 6,5 осуществл ют за счет имеющегос  в среде мела. Фермента закакч;ша- ют через 73 ч лосле тасева аппарата, когда коицентраиик сахара в культу- ральлой снижаетс  до нул , . Концентраци  L-сйркна в культураль- ной Ж1ЩКОСТИ достигает 4,5 г/л.ts shitnits. After BEFORE Farm, Go; the tiling is turned off, and then the p1 stating at the level of 5.0-6.5 is carried out at the expense of the chalk in the environment. Enzyme zakakch; shake after 73 h in the Los apparel apparatus, when the coicentration of sugar in the culture is reduced to zero,. The concentration of L-syrkna in the culture area reaches 4.5 g / l.

Выделение Ъ серина нрозодпт из 380 f-U7 культур:и;ьной ;;;вдкости с концентрацией серии . 4,5 г/л, содержащей также {0,5 г/л глутаминовой кислоты , 8 г/л a.v fi niaa и S г/л глицина. Выделение серинз до стадии перекрис- таллизац:п прово;,ЯТ5 как описано в примере 1. Перекристаллизацию серина провод т из 30%--ного раствора этанола. Б результате получает 1,7 г кристаллов с содержанием L-серина ке менее 99%.Selection of serine nrozodpt b from 380 f-U7 cultures: and; dy ;;; with a concentration of a series. 4.5 g / l, containing also {0.5 g / l glutamic acid, 8 g / l a.v fi niaa and S g / l glycine. Separation of the serains to the recrystallization stage: n wire;, JT5 as described in Example 1. Serine is recrystallized from a 30% ethanol solution. The result is 1.7 g of crystals with an L-serine ke content of less than 99%.

П р и м е р А. Посевной мзтгриап готов т, как в примере ., и внос т в ферментационную среду следующего состава, г/л г сахар 60; кукурузный экстракт 5; С1 Ш)80 10; КК,,Р04 0,5; HgSO -7K20 0,5; тиамин ; дсстиобиотин 3, пеногаситель 3; вода остсльиое.EXAMPLE A. A seed plant is prepared as in the example, and added to a fermentation medium of the following composition, g / l g sugar 60; corn extract 5; C1 W) 80 10; KK ,, Р04 0,5; HgSO -7K20 0.5; thiamine; dstiobiotiin 3, antifoam 3; water is cool.

рН среды довод т с помощью КаОН ,до 7,6-7,8.The pH of the medium was adjusted with CaOH to 7.6-7.8.

Ферментадию провод т в ферментере с рабочим объемом 0,5 л при следующем режиме: аэрирование культураль- пой жидкости 0,5 л/мин при посто н- . иом перемешивании 900 об/мин к темпе ратуре 30-32 С. рН-статирование з-пер вые 40 ч культивировагщ  на уровнеThe enzyme is carried out in a fermenter with a working volume of 0.5 l under the following mode: aeration of the culture liquid of 0.5 l / min at constant n. Stirring at 900 rpm to a temperature of 30-32 C. pH-setting for the first 40 hours of cultivation at the level of

б,,О ос;лцестзл ют путем подачи подпитки в культуральную ж дкость в пиде смеси сахара и аъадиачной воды при концентрации сахара в снеси 455 г/п и массовом соотношении сахар: 5азот 28:1. При этом потребл етс  540-350 мл подпитки. Далее производ т смену сахароаммиачной подпитки на раствор КаОН, который подают автомат1 чески в аппарат при том же уроэке рН-стагировапил до конца ферментации (35-40 мл).b ,, oz; freeze by feeding feed into the culture tank in the pide of a mixture of sugar and adiadiac water at a sugar concentration in the carry 455 g / n and a mass ratio of sugar: 5 = 28: 1. At the same time, 540-350 ml of feed is consumed. Next, the sugar ammonia feed is changed to a solution of NaOH, which is fed automatically into the apparatus at the same pH pH stagirovapil until the end of fermentation (35-40 ml).

Ферментацию заканчивают через 72 ч после засева аппарата, когда концентраци  сахара а культуральной жкд; кости с -ипг.аетс  до кул . Накопление 1-,с.ерйма в купьтуральной жидкости 50,2 г/л. .. Fermentation is finished 72 hours after seeding the apparatus, when the concentration of sugar is in the cultured liquid crystal; bones with igg.aets to kul. Accumulation of 1-, s.yrama in kuptsuralnoy liquid 50.2 g / l. ..

Выделение 7..серина провод т из 30Q мл культуральной жидкости с конIsolation of 7 .. serine is carried out from 30Q ml of culture liquid with

центрацией сертша 10,2 г/л, содержащей также 10 г/п глут миковрй кислоты и 6 г/л аланила. Выделение серина до стадии пергкрнстгшлизации провод т как описано в примере 1 , У - рекристзй лизацию провод т из 20% пото водного раствора этанола. Б результате получают 1,2 г .криста. поц с содаижаинем L-серина не менее 95%,the concentration of the certificate is 10.2 g / l, which also contains 10 g / p glutonic acid and 6 g / l of alanyl. The separation of serine to the stage of pergrone expansion is carried out as described in Example 1, Y - recrystallization is carried out from a 20% aqueous solution of ethanol. The result is 1.2 g. Crista. prz with sodazhinaem L-serine at least 95%,

Получентгиш pt ayjibTav - п&идатель- ствуют о том, чтс с-помощью В. flsvuffl ВKIM В 3559 можно получать болеэ высокие уровни содерг7;ани  1,-се- рт нг -j культуральной жидкости, а таклй npe:-(apa .vbi а, шокйслоты высокой степени .The recipient pt ayjibTav - p & are about what you can get with B. flsvuffl BKIM In 3559 you can get more high levels of content; 7; , high level shock acids.

Ф о р к у л I s 3. о б р е т S и и  F o rk u l I s 3. about b p e s and u

Шта№ бактерий Вг€;Ч ;;,Ь  1;ег1гт1 fla- r-ura ВКШ-5, S--3559 - продуце Г: ь-серика.The number of bacteria Вг €; Ч ;;, Ь 1; Ег1гт1 fla-r-ura VKSH-5, S - 3559 - producer G: b-series.

Claims (1)

Ф о р м у л <? и з . о б р е т е н и яFor r m u l <? and s. about i Штамм бактерий Brevlbacterivra fla’uffi ЗКПМ 3--3559 - продуцент L-серина.Bacterial strain Brevlbacterivra fla’uffi ZKPM 3--3559 - producer of L-serine. *wra»e»»».* wra »e» »». ШтаммStrain S. flavumS. flavum Концентрация 8-ззааденина в ростовойсреде, мг/мл I оThe concentration of 8-zzaadenin in the growth medium, mg / ml I about Оптическая плотность iOptical density i ί <ί < -to·—fr.-to · —fr. i < .i <. i Оптическая j Ai Optical j A I плотность JI density J АТСС 14067 · 0,67ATCC 14067 0.67 67 ' 0_;20 3067 '0 _; 20 30 ВКПМ В-3559 0,38VKPM B-3559 0.38 100 ' 0,39100 '0.39 102 0,41 >03102 0.41> 03