SU1411669A1 - Method of determining resistivity of erythrocytes - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, точнее к гематологии и экспериментальной медицине, предназначено дл  вы влени  распределени  эритроцитов по резистентности. Цель изобретени  - упрощение и ускорение способа при более точном вы влении распределени  эритроцитов по резистентности. Способ осуществл ют на установке, состо щей из кюветы 1 измерени , расположенной между фотоприемником 2 и монохромато- ром 3. Устройство имеет спектрофотометр 4 на пути проход щего света от :источника 5 света. Кювета измерени  имеет термостат в и магнитную мешал- ку 7. Блок 8 подачи гемолизирующего агента соединен с кюветой измерени  капилл рной линией 9. Графопостроитель 10 подключен к выходу блока 8 подачи и через дифференциатор 11 к ВЫХОДУ фотоприемника 2. К суспензии эритроцитов добавл ют гемолизирую- щий агент непрерьшно с посто нной скоростью в соответствии с концентрацией и видом гемолитика, смесь перемешивают и фотометрируют, преобразуют световое излучение в электрический ток, который дифференцируют и регистрируют . Определение резистентности ведут в координатах объем гемолити ка - дифференцированный электрический ток. 2 ил. (ЛThe invention relates to medicine, more specifically to hematology and experimental medicine, intended to reveal the distribution of erythrocytes in resistance. The purpose of the invention is to simplify and accelerate the method with a more accurate determination of the distribution of red blood cells in resistance. The method is carried out on an installation consisting of a measurement cuvette 1 located between the photodetector 2 and the monochromator 3. The device has a spectrophotometer 4 in the path of transmitted light from: the source 5 of the light. The measurement cuvette has a thermostat and a magnetic stirrer 7. The hemolyzing agent supply unit 8 is connected to the measurement cell by capillary line 9. The plotter 10 is connected to the output of the supply unit 8 and, through the differentiator 11, to the OUTPUT of the photodetector 2. To the erythrocyte suspension, add hemolyzing agent uninterruptedly at a constant speed in accordance with the concentration and type of hemolytic, the mixture is mixed and photometric, the light radiation is converted into electric current, which is differentiated and recorded. The determination of resistance is carried out in terms of the volume of hemolytic ka - differential electric current. 2 Il. (L

Description

О5O5

Изобретейие относитс  к области медицины, преимущественно к гематологии и экспериментальной медицине, и может использоватьс  дл  вы влени  распределени  эритроцитов по резис- тентности.The invention relates to the field of medicine, primarily to hematology and experimental medicine, and can be used to determine the distribution of red blood cells by resistance.

Цель изобретени  - упрощение и ускорение способа при более точном вы влении распределени  эритроцитов по резистентности.The purpose of the invention is to simplify and accelerate the method with a more accurate determination of the distribution of red blood cells in resistance.

На фиг.1 показана блок-схема установки дл  осуществлени  способа; на фиг.2 крива  распределени  эриг троцитов.Figure 1 shows a block diagram of an installation for implementing the method; Fig. 2 is a distribution curve for erig trocytes.

Схема СОСТРОИТ из кюветы 1 измере - ни , котора  расположена между фотоприемником 2 и монохроматором 3 спектрофотометра А на пути проход ще го света от источника 5 света. Кювет 1 измерени  снабжена термостатом 6 и магнитной мешалкой 7. Блок 8 подач гемолизирующего агента соединен с кюветой 1 измерени  капилл рной линией 9. Графопостроитель 10 подключе к выходу блока 8 подачи и через дифференциатор 11 - к выходу фотоприем- инка 2.The scheme is constructed from a measurement cell 1, which is located between the photodetector 2 and the monochromator 3 of the spectrophotometer A in the path of the transmitted light from the source 5 of the light. The measurement cuvette 1 is equipped with a thermostat 6 and a magnetic stirrer 7. The hemolyzing agent supply unit 8 is connected to the capillary line 9 of the measurement 9. The plotter 10 is connected to the output of the supply unit 8 and through the differentiator 11 to the photoreceiver output 2.

Блок 8 подачи гемолизирующего аге та выполнен на основе промьшшенного дозатора ДАЖ-115-1.The unit 8 for the supply of the hemolyzing agent is made on the basis of the industrial dispenser DAJ-115-1.

Дл  получени  желаемой скорости подачи гемолизирующих агентов в консрукцию дозатора внесены следующие изменени :The following changes have been made to obtain the desired hemolyzing agent feed rate:

используют синхронньй двигатель РД-09 с редуктором, который имеет 1,75 об/мин;use synchronous engine RD-09 with gear, which has 1.75 rev / min;

на корпусе дозатора закреплен кронштейн с .держателем шприца от дозатора да-10; on the case of the dispenser is fixed a bracket with a syringe holder from the dispenser yes-10;

на ведущем валу подъемника поршн  (на который подаетс  усиление от двигател ) закреплены дополнительные валики дл  ременной передачи с диа- метром 35 и 20 мм;Additional rollers for belt transmission with diameters of 35 and 20 mm are mounted on the drive shaft of the piston lift (to which the reinforcement from the engine is supplied).

с подъемником поршн  шприца состыкован реохорд типа ППМЛ-ИЗ (св зан с самописцем).with a syringe piston lifter, a PPML-IZ-type reichord is connected (associated with a recorder).

В результате модификаций блок по- дачи гемолизирующих агентов позвол ет дозировать гемолизирующее веществ с малыми скорост ми подачи (0,05, 0,10, 0,22, 0,45, 0,90, 1,35, 1,80 мл/мин), легко и быстро замен т гемолизирующий агент путем замены шприца с гемолитиком, регистрировать израсходованный объем гемолитика на самописце.As a result of modifications, the unit for supplying hemolyzing agents makes it possible to dose hemolyzing substances with low flow rates (0.05, 0.10, 0.22, 0.45, 0.90, 1.35, 1.80 ml / min ), the hemolyzing agent can be easily and quickly replaced by replacing a hemolytic syringe, and record the amount of hemolytic used on the recorder.

Дл  дифференцировани  сигнала, полученного от ФЭУ, используют лабораторный прибор настольного типа дл  дифференцировани  сигналов со следующими основными параметрами прибора: входной сигнал 0-2В, выходной сигнал 0-100 нВ, максимальное врем  дифференцировани  360 с.To differentiate the signal received from the PMT, a bench-type laboratory instrument is used to differentiate the signals with the following basic parameters of the instrument: input signal 0-2V, output signal 0-100 nV, maximum differentiation time 360 s.

Приме р. Берут кровь в количег стве 0,1 мл из пальца больного с дефицитом B,j на антикоагул торе (гепарин 25 Ед/мл). Из цельной крови выдел ют эритроциты путем центрифугировани  (3000 об/мин, 5 мин на центрифуге ОПН-3) и промывают три раза физраствором. Разбавл ют суспензию эритроцитов до оптической плотности D 0,7 при длине волны 71 670 нм. Помещают суспензию в кювету 1 измерени  (длина оптического пути 20 мм) в количестве А мл и включают термостат 6 и магнитную мешалку 7 j вьшод т стрелку измерительного пишущего графопостроител  10 на нулевую отметку и при посто нной температуре t , непрерьшно перемешива , в кювету 1 измерени  блоком 8 подачи добавл ют 0,01 М HCt, приготовленный на физиологическом растворе с посто нной скоростью 0,625 мл/мин, В результате воздействи  гемолизирующего агента эритроциты разрзтпаютс , рассе ние света на эритроцитах умень - шаетс , вследствие чего увеличиваетс  коэффициент пропускани  суспензии на Я 670 нм, что отражаетс  в увеличении сигнала, сн того с фотоприемника 2. Этот сигнал дифференцируетс  дифференциатором 11 и подаетс  на Y координате графопостроител  10. Дифференциал (прирост) сигнала пропорционален числу разрушенных эритроцитов в единицу времени, т.е. скорости разрушени  эритроцитовPrimer p. Blood is taken in a quantity of 0.1 ml from a patient's finger with a B, j deficiency on an anticoagulant (heparin 25 U / ml). Red blood cells were isolated from whole blood by centrifugation (3000 rpm, 5 min in an OPN-3 centrifuge) and washed three times with saline. The suspension of erythrocytes is diluted to an optical density of D 0.7 at a wavelength of 71,670 nm. The suspension is placed in the measurement cuvette 1 (optical path length 20 mm) in an amount of A ml and the thermostat 6 and the magnetic stirrer 7 j are inserted into the arrow of the measuring writing plotter 10 at the zero mark and at constant temperature t, continuously mixing, in the cuvette 1 measurement the feed unit 8 adds 0.01 M HCt prepared in saline at a constant rate of 0.625 ml / min. As a result of the effect of the hemolyzing agent, the erythrocytes are broken, the light scattering on the erythrocytes decreases, and as a result The transmittance of the suspension is measured at I 670 nm, which is reflected in the increase in the signal removed from the photodetector 2. This signal is differentiated by the differentiator 11 and is fed to the Y coordinate of the plotter 10. The differential (gain) of the signal is proportional to the number of destroyed red blood cells per unit time, i.e. . erythrocyte destruction rate

,dU dNdU dN

at - dt «at - dt "

N - число разрушенных эритроцитов; и - сигнал, поступающий в дифференциатор от фотоумножител ) ..|Одновременно на X координате графопостроител  10 регистрируетс  объем гемолизирующего агента, поступающего в суспензию эритроцитов. Таким образом, на графопостроителе происходит запись дифференциальной кривой гемолиза вN is the number of destroyed red blood cells; and - the signal arriving at the differentiator from the photomultiplier.) | At the same time, the X coordinate of the plotter 10 records the volume of the hemolyzing agent entering the erythrocyte suspension. Thus, the plotter records the differential hemolysis curve in

.-dN „V dN координатах Js Д 7Г -.число.-dN „V dN coordinates Js Д 7Г -.number

разрушенных эритроцитов, за единицу времени, измеренное в произвольныхdestroyed red blood cells per unit of time, measured in arbitrary

единицах; V - объей гемолизирующего агента, мл. Завершению процесса гемолиза соответствует возвращение стрелки графопостроител  на нулевую линию, units; V is the volume of the hemolyzing agent, ml. The completion of the hemolysis process corresponds to the return of the arrow of the plotter to the zero line,

Как видно из кривой, на фиг.2 разрушение эритроцитов происходит по группам. На графике отчетливо выдел ютс  3 группы эритроцитов, раз- личных по резистентности. Группа I составлена из самых нестойких эритроцитов , которые с посто нной скоростью разрушаютс  в области 0,7-1,8 мл; II - эритроциты, разрушаемые в облас- ;ти 1,8-3,1 мл; III - эритроциты, разрушаемые в области 3,2-3,6 мл.As can be seen from the curve, in figure 2 the destruction of red blood cells occurs in groups. The graph clearly distinguishes 3 groups of erythrocytes of different resistance. Group I is made up of the most unstable red blood cells, which are destroyed at a constant rate in the region of 0.7-1.8 ml; II - erythrocytes, destroyed in the region of 1.8-3.1 ml; III - red blood cells, destroyed in the region of 3.2-3.6 ml.

Та же суспензи  эритроцитов была i исследована известным способом. По графику, имеющему вид одиночного пика , нельз  выделить группы эритроцитов , различные по резистентности, что доказьшает большую разрешающую способность предлагаемого способа. The same erythrocyte suspension was i investigated in a known manner. According to the schedule, which has the form of a single peak, it is impossible to isolate groups of red blood cells that are different in resistance, which proves the high resolution of the proposed method.

Claims (1)

Предлагаемый способ позвол ет сократить врем  определени  до - 3- 5 мин против /v 60-70 мин в известном способе. Формула изобретени The proposed method makes it possible to reduce the determination time to - 3-5 minutes against / v 60-70 minutes in the known method. Invention Formula Способ определени  резистентности эритроцитов путем добавлени  к суспензии эритроцитов гемолизирующего агента , перемешивани  смеси, фотометрйро- вани , преобразовани  светового излучени  в электрический ток. и его регистрации , о тличающийс  тем, что, с целью упрощени  и ускорени  способа при более точном вы влении распределени  эритроцитов по ре- зистентности, гемолизирующий агент добавл ют непрерывно с посто нной скоростью в соответствии с концентрацией и видом гемолитика, электрический ток дифференцируют, а резистент- ность определ ют в координатах объем гемолитика - дифференцированный электрический ток.A method for determining erythrocyte resistance by adding a hemolyzing agent to a suspension of erythrocytes, mixing the mixture, photometric measuring, and converting light radiation into electric current. and registering it, different from the fact that, in order to simplify and speed up the method with a more accurate determination of the distribution of erythrocytes over resistance, the hemolyzing agent is added continuously at a constant rate in accordance with the concentration and type of hemolytic, the electric current is differentiated, and Resistance is determined in terms of hemolytic volume - differential electric current. Д24 КD24 K Фиг.11