SU1383191A1 - Устройство дл вертикального электрофореза высокомолекул рных соединений - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к лабораторной технике, используемой в биологии и медицине дл  электрофоретичес- кого разделени  сложных высокомолекул рных соединений. Цель изобретени  - повьшение качества разделени  высокомолекул рных соединений. Цель изобре ..тени  достигаетс  одновременным ох- лаждением верхнего буферного раство-г ра и пластин гел , а также стабилизацией значений рН верхнего буферного раствора. В предлагаемом устройстве верхний сосуд дл  буферного раствора . помещен в корпус блока охлаждени  на вертикальную перегородку таким образом , что хладагент циркулирует в промежуточном объеме между верхним сосудом дл  электродного буферного раствора и стенками гелевых камер. При проведении длительного электрофорети- ческого разделени  молекул с низкой скоростью миграции, а также при высоковольтном электрофорезе электрод верхнего электродного сосуда помещен в буферный рэствор емкости, вводимой дополнительно в сосуд дл  верхнего электродного буферного раствора. Это позвол ет стабилизировать значени  . рН верхнего электродного буферного сосуда. Изобретение позвол ет предотвратить искривление фронта электрофо- ретического разделени  высокомолеку- л рньпс соединений, улучшить четкость полос электрофореграмм и сохранить биологическую активность термолабиль- ных молекул. 1 з.п. ф-лы, 3 ил. § (Л со 00 со ;о

Description

1 1

Изобретение относитс  к лабораторной технике, в частности к устройствам дл  электрофореза на вертикальной пластине гел , и может быть использовано в биологии и медицине.

Цель изобретени  - повышение качества разделени  высокомолекул рных соединений за счет предотвращени  искривлени  фронта электрофоретичес- кого разделени  высокомолекул рных соединений, улучшени  четкости полос электрофореграмм, сохранени  биологической активности термолабильных молекул и стабилизации значений рН верхнего электродного буферного раствора.

На фиг.1 изображено устройство дл  вертикального электрофореза высо комолекул рных соединений, общий вид на фиг.2 - разрез А-А на фиг.1; на фиг.З - разрез Б-Б на фиг.1.

Устройство содержит нижний сосуд 1 дл  буферного раствора, выполненный в виде пр моугольной камеры с крьшкой 2 и токовводом 3, в которой на подставках 4 установлена внутренн   часть 5, состо ща  из верхнего сосуда 6 дл  буферного раствора и геле- |вых. камер 7 с блоком 8 охлаждени .

Верхний сосуд 6 дл  буферного раствора помещен внутри корпуса блока 9 охлаждени . Дно верхнего сосуда дл  буферного раствора соединено с дном корпуса 9 вертикальной перегородкой 10,, котора  раздел ет камеру охлаждени  на две полости 11, сообщающиес  между собой полостью 12 в промв - жутке торцовой стенки корпуса блока 9 охлаждени . Дл  ввода и вывода хлсщагеНта в полости 11 имеютс  штуцера 13. Боковые стенки 14 блока ох- ла вдени , выполненные из стекла, служат внутренними стенками гелевым .камерам 7.

Наружные стенки 15 гелевых камер могут быть выполнены как из стекла, так и из плексигласа. Они имеют горизонтальные щелевые отверсти  16, закрытые во врем  работы планками 17 с помощью прижимного приспособлени  18, выполненного в виде планки с прижимными винтами 19..

Прокладка 20 задает толщину гелевым камерам.

Наружные стенки гелевых камер дл  прочности снабжены планками 21, поджимаемыми с помощью, например, винтов 22.

Q 15

20

25

30

35

40

5

0

5

1912

Устройство снабжено дополнительно емкостью 23 дл  буферного раствора, выполненной в виде пр моугольного сосуда . Емкость 23 вводитс  в верхний сосуд дл  буферного раствора (при необходимости) и делит его на две части (фиг.З). Платиновые электроды 24 помещены на дне верхнего сосуда дл  буферного.раствора или емкости 23 и в углублении 25 корпуса 9, Дл  осуществлени  электрического контакта с буферным раствором в емкости 23 и буферным раствором верхнего сосуда 6 имеютс  мостики 26 из фильтровальной бумаги.

Устройство работает следующим образом .

I В зависимости от способа Лормиро- вани  стартовых лунок в гел х (с помощью прорезани  или полимеризации) примен ютс  разные наружные съемные стенки 15. При формировании стартовых щелей с помощью прорезани  гел  (фиг.2) примен ют наружные съемные . боковые стенки 15 с горизонтальным щелевым отверстием 16, закрывающимс  планкой 17, В таком случае гелеобра- зующа  смесь заливаетс  в вертикальные гелевые камеры 7 до уровн  верхнего кра  выступа и полимеризуетс . Если необходимо исследовать материал в полиакриламидном геле с различными градиентами пористости, гелеобразую- ща  смесь заливаетс  в вертикальные гелевые камеры 7 на 0,5-1,0 см ниже уровн  окна горизонтального щелевого отверсти  16 с последующим наслоением воды на поверхность гелеобразую- щей смеси. После полимеризации сепарирующего гел  гелеобразующа  смесь, формирующа  концентрирующий гель, заливаетс  до уровн  верхнего кра  выступа. .

Внесение материала дл  анализа проводитс  через горизонтальное щелевое отверстие 16. В сформированные стартовые щели (с помощью стальных или тефлоновых ножей) внос т одинаковые по размерам кусочки бумаги, например, типа ватман 3 ММ, пропитанные исследуемым материалом. Дл  ви- зуальной оценки процесса электрофоре- тического разделени  в стартовые щели помещают кусочки бумаги, смочен- . . ные индикаторным красителем, например бромфеноловым синим.После закрыти  щелевого отверсти  16 планкой 17 с прижимным устройством 18 внутренНИИ сборный блок 5 помещают на подставки 4 нижнего сосуда I дл  буферного раствора. Заливают буферные растворы в соответствующие сосуды, к штуцерам 13 присоедин ют шланги дл  подачи и отвода хладагента, а токо- провод соедин ют с источником питани  (не показан).

Дл  ввода исследуемого материала через верхний край гел  (фиг.З) примен ют сборные наружные боковые стенки , состо щие из стекла, прокладки 20 с прорез ми дл  креп щих болтов и прижимной планки 21. Последовательность формировани  гел  така  же, как и при применении наружных стенок из плексигнала с горизонтальными щелевыми рТверст-и ми. В гелеобразующую смесь, образующую концентрирующий гель, погружают гребенки, формирующие стартовые лунки дл  внесени  исследуемого материала. После полимеризации концентрирующего гел  гребенки удал ютс , и исследуемые материалы , смешанные с сахарозой в известных соотношени х, внос тс  в сформированные стартовые лунки с помощью специальных шприцов или пипеток через слой буферного раствора. Дл  визуальной оценки электрофоретического процесса в стартовые лунки таким же образом вноситс  индикаторный краситель .,

Режим электрофоретического разделени  высокомолекул рных биологических соединений зависит от вида используемого гел  и характера исследуемого материала. После окончани  электрофореза отключают источник питани , прекращают подачу хладагента, выливают буферный раствор из верхнего резервуара 5 и удал ют наружные съемные стенки 15. Пластины гел  вы

нимают и подвергают дальнейшей обработке в зависимости от цели и .задачи исследовани  по известным методикам.

Предлагаемое устройство предотвращает искривление фррнта электрофоретического разделени  высокомолекул рных соединений, улучшает четкость полос электрофореграмм и сохран ет биологическую активность термолабильных молекул (например, белков и ферментов ) в таких гел х, как полиакрил- амидный, крахмальный и агарозньп, и дает возможность одновременного разделени  катионных и анионных компонентов исследуемого материала.

Предлагаемое устройство может найти широкое применение в биологии и медицине.

Claims (2)

1.Устройство дл  вертикального электрофореза высокомолекул рных соединений , содержащее верхний и нижний сосуды дл  буферного раствора с электродами , сообщающиес  с ними две вертикальные гелевые камеры с горизонтальными щелевыми отверсти ми и блок охлавд ени  с входными и выходными отверсти ми, отличающеес  тем, что, с целью повьшени  качества разделени  высокомолекул рных соединений , верхний сосуд дл  буферного раствора расположен в блоке охлаждени  с опорой на вертикальную перегородку , раздел ющую блок охлаждени  на две полости.

2.Устройство по П.1, отличающеес  тем, что верхний электродный буферный сосуд содержит дополнительную емкость дл  буферного раствора, в которой размещен электрод .

lO

ss

ss

Nb 4 s sX.-CsS

- vV

IQ|

-L

4V 4 чУ V. V vy V4 4V v

V Y

x

IST

Т

I Q

I

A2 Pi7 Г5 / /X

W

Фиг.З