SU1314251A1 - Method of fixing specimens of biological tissues for histological investigation - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к гистологии . Цель изобретени  - улучшение качества фиксации тканей. Образцы биологических тканей обрабатывают жидкостью, содержащей формалин, лед ную уксусную кислоту, этиловый спирт и галаскорбин. Затем осуществл ют обработку материала по известным методикам. Способ позвол ет лучше сохранить р д микроструктур и повышает сродство к красител м.This invention relates to histology. The purpose of the invention is to improve the quality of tissue fixation. Samples of biological tissues are treated with a liquid containing formalin, glacial acetic acid, ethyl alcohol and galascorbine. Then, the material is processed by known methods. The method allows better retention of a number of microstructures and increases the affinity for dyes.

Description

1 one

Изобретение относитс  к медицине а именно к гистологии.This invention relates to medicine, namely histology.

Цель изобретени  - улучшение качества фиксации тканей.The purpose of the invention is to improve the quality of tissue fixation.

Способ осуществл ют путем обработки образцов биологических тканей в течение 1-5 сут при 15-25°С жидкостью , содержащей формалин, лед ну уксусную кислоту и 96%-ный этиловый спирт, а также галаскорбин при следующем соотнощении компонентов, мас.%:The method is carried out by processing biological tissue samples for 1-5 days at 15-25 ° C with a liquid containing formalin, ice and acetic acid and 96% ethyl alcohol, as well as galascorbine at the following ratio of components, wt.%:

Галаскорбин 3-5Galascorbine 3-5

Формалин3-5Formalin 3-5

Этиловый спиртEthanol

96%32-5296% 32-52

Лед на  уксусна Acetic acid ice

кислотаОстальноеAcid Remaining

По окончании фиксации материал обрабатывают по известным методикам обезвоживают в 96%-ном и 100%-ном спирте, заключают в парафин, изготавливают срезы, окрашивают известными методами окраски.At the end of fixation, the material is processed by known methods and dehydrated in 96% and 100% alcohol, enclosed in paraffin, sections are made, and stained with known coloring methods.

Дополнительное улучшение, окраски достигают обработкой полученных после указанной фиксации гистологических срезов 1-2%-ным водным растворо четырехокиси осми  в течение 5 мин при 15-25 0, после чего окрашивают по известным методикам.An additional improvement, staining is achieved by processing the histological sections obtained after the specified fixation with a 1-2% aqueous solution of osmium tetroxide for 5 min at 15-25 0, and then stained by known methods.

П р и мер. Кусочки органов и тканей толщиной 0,3-0,5 см фиксируют в течени е 1-5 сут при 15-25°С методом погружени  в фиксирующей жидкости , приготовленной следующим образом ,Pr and measures. Pieces of organs and tissues 0.3-0.5 cm thick are fixed for 1-5 days at 15-25 ° C by immersion in fixing fluid prepared as follows,

4 г галаскорбина раствор ют в 47,5 мл лед ной уксусной кислоты до полного растворени , добавл ют 3,6 мл концентрированного формалина и 52 мл 96%-ного этилового спирта. -Объем фиксатора должен в 7-10 раз превышать объем фиксируемого материала . Оптимальный срок фиксации 3 сут. Фиксацию провод т в плотно закрывающихс  емкост х. Хорошо про- фиксированные кусочки приобретают коричневый оттенок в св зи с под- кращиваюпдам эффектом галаскорбина. Повторно фиксатор не используют. По ле фиксации кусочки, не промыва  в воде, обезвоживают в двух порци х этилового спирта в течение суток, заключают в парафин и приготавливают срезы толщиной 3-10 мк по известным методикам.4 g of galascorbine is dissolved in 47.5 ml of glacial acetic acid until completely dissolved, 3.6 ml of concentrated formalin and 52 ml of 96% ethyl alcohol are added. -The volume of the lock should be 7-10 times the amount of material to be fixed. The optimal fixation period is 3 days. The fixation is carried out in tightly closed containers. Well-fixed pieces acquire a brown tint due to the underlaying effect of galascorbine. Re-lock does not use. After fixation, the pieces, not rinsing in water, are dehydrated in two portions of ethyl alcohol during the day, enclosed in paraffin wax, and sections of 3-10 microns thick are prepared by known methods.

Окраску депарафинированных срезов провод т по известным методикамColoring of the dewaxed sections was carried out according to known methods.

142512142512

например гематоксилином и эозином, азур-эозином, крезил-виолетом по Нисслю, галлоцианином по Эйнарсону, железным гематоксилином по Гейденг гайну, с сокращением сроков выдержки в красител х в 2-10 раз и более раз по сравнению с прин тыми, контролиру  визуально достаточность прокрашивани , или -после депарафинироJO вани  и промывки в воде срезы вначале обрабатывают 1-2%-ным водным раствором четырехокиси осми  в течение 5 мин при 15-25 С, промывают в воде 1 мин и затем окрашивают поfor example, hematoxylin and eosin, azure-eosin, cresyl-violet according to Nissl, gallocyanin according to Einarson, iron hematoxylin according to Heidengain, with a reduction in the aging time in dyes by 2-10 times or more compared to accepted ones; , or after vanishing and washing in water, the sections are first treated with a 1-2% aqueous solution of osmium tetroxide for 5 minutes at 15-25 ° C, washed in water for 1 minute and then stained by

15 известным методикам. При окраске протравными красител ми предпочтительно использовать 2%-ный раствор четырехокиси осми , при окраске Другими красител ми - 1%-ный. 20 Сравнительное исследование проводили на образцах тканей 0,3 - 0,5 см из головного мозга, сердца, печени, почек и легких. Образцы из каждого органа обрабатыва25 ли раздельно по известному и предлагаемому способам фиксации. Все последующие этапы подготовки материала к исследованию проводились тождественно .15 known techniques. When staining with mordant dyes, it is preferable to use a 2% solution of osmium tetroxide, and when staining with other dyes, it is preferable to use a 1% solution. 20 A comparative study was performed on tissue samples of 0.3-0.5 cm from the brain, heart, liver, kidneys and lungs. Samples from each organ were processed separately according to the known and proposed methods of fixation. All subsequent stages of preparation of the material for the study were carried out identically.

30 Варианты фиксатора, в которых соотношени  ингредиентов выход т за пределы предлагаемого диапазона, дают менее эффективные результаты, В частности, увеличение концентра ,5 ции галаскорбина приводит к грубозернистой фиксации.30 Fixer options in which the ratios of ingredients go beyond the proposed range give less effective results. In particular, an increase in the concentration of galascorbine 5 leads to coarse-grained fixation.

Предлагаемый способ в более полном объеме обеспечивает стабилизацию и сохранение в ткан х белков и .The proposed method more fully ensures stabilization and preservation in the tissues of proteins and.

Q нуклеиновых кислот, эффективнее предохран ет ткани от возникновени  артефактов, св занных с заключением образцов в парафин (в частности, разрывов ткани), лучше сохран ет некото 5 рые легко разрушающиес  микростур- туры, например щеточную каемку эпители  извитых канальцев почки, повышает сродство к красител м, что позвол ет сокращать врем  окраски в 10 и более раз, повышает прочность св зывани  тканевых структур с красител ми , что преп тствует быстрому выцветанию срезов, а также позвол ет вы вл ть с помощью обычных общегис55 тологических окрасок (гематоксилином и эозином, азур-эозином) р д микроструктур, которые при фиксации по известному способу вы вл ютс  только при использовании специальныхQ nucleic acids, more effectively protects tissues from artifacts associated with the conclusion of samples in paraffin (in particular, tissue breaks), better retains some easily destroyed microsturtures, for example, the brush border of the convoluted tubule of the kidney, increases the affinity for dyes, which allows to reduce the dyeing time by a factor of 10 or more, increases the strength of the binding of tissue structures to dyes, which prevents the sections from fading rapidly, and also makes it possible to identify colors (hematoxylin and eosin, azure-eosin) are a series of microstructures that, when fixed by a known method, are detected only when using special

313142514313142514

методов окрасок, например тигроид с целью улучшени  качества фиксации нервных клеток и поперечную исчер- тканей, фиксатор дополнительно, со- ченность кардиомиоцитов,держит галаскорбин при следующихstaining methods, for example, tigroid, in order to improve the quality of fixation of nerve cells and transverse stripping, the fixative additionally, the cardiomyocyte content, keeps galascorbin in the following

соотношени х компонентов, мас.%:the ratio of components, wt.%:

Claims (1)

Формула изобретени  Галаскорбин 3-5 Способ фиксации образцов биоло- Формалин3-3The invention claims Galascorbine 3-5 Method of fixing samples of bio-Formalin3-3 гических тканей дл  гистологического Спирт этиловый 96% 32-52 исследовани  путем обработки их жид- Лед на  уксусна  костью, содержащей формалин, лед ную кислотаОстальноеtissues for histological ethyl alcohol 96% 32-52 studies by treating them with liquid and ice acetic bone containing formalin, ice acid уксусную кислоту и спирт этиловый, О при этом фиксацию провод т в течение от.личающийс  тем, что, 1-5 сут при 15-25 С,acetic acid and ethyl alcohol, O, while the fixation is carried out for a period differing from the fact that, 1-5 days at 15-25 ° C,