SU1291602A1 - Method of rejecting easily induced lysogeneous strains of mesophilic lactic streptococci - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к сыроде- ланию, может быть использовано в селекции МОЛОЧНО-КИСЛЫХ бактерий, включаемых в состав заквайок дл  сыров, и позвол ет упростить оценку легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезо- фильных МОЛОЧНО-КИСЛЫХ стрептококков. Исследуемые штаммы культивируют до логарифмической фазы роста, ресуспен- дируют в солевом раствореj облучают . УФ-излучением дозой 25 Дж-м и куль- тивируют в питательном бульоне при оптимальной температуре. О фаголизисе культур суд т по их ростовой реакции в течение 2-3 ч после облучени , оцениваемой по временному иймененик (снижению) оптической плотности. 1 з.п.ф-лы, 2 ил. с (О (ЛThe invention relates to cheese making, can be used in the selection of MILK-ACID bacteria included in cheese quiches, and allows to simplify the evaluation of easily induced lysogenic strains of mesophilic MILK-ACID streptococci. The studied strains are cultivated to the logarithmic growth phase, resuspended in saline solution and irradiated. UV radiation dose of 25 J-m and cultured in nutrient broth at the optimum temperature. Phagolysis of cultures is judged by their growth response within 2-3 hours after irradiation, as assessed by temporary change (decrease) in optical density. 1 hp ff, 2 ill. c (O (L

Description

Изобретение относитс  к сыроделию и может быть использовано в селекции мезофильных молочно-кислых стрептококков , включаемых в состав заквасок дл  сыров.The invention relates to cheese making and can be used in the selection of mesophilic lactic streptococci included in the starter for cheeses.

Целью изобретени   вл етс  создание более простого способа легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков.The aim of the invention is to create a simpler method of easily inducible lysogenic strains of mesophilic lactic acid streptococci.

Предлагаемый способ заключаетс  в следующем.The proposed method is as follows.

Клетки исследуемой культуры мезофильных молочно-кислых стрептококков наход щиес  в начале логарифмической фазы роста (3-4-часова  бульонна  культура), отдел ют от питательной среды, суспендируют в стерильном солевом растворе с рН 6,8-7,2, облучают УФ-излучением дозой 25 Дж-м , помещают в питательный бульон и инкубируют при температуре, оптимальной дл  роста культуры (25°С дл  штаммов вида С. creraoris и 30°С дл  штаммов вида S. lactis и S. lactis subsp. di acetylactis). В процессе инкубации регистрируют рост культуры по изменению величины оптической плотности контролируемой смеси (или интенсив- ности светорассе ни ) во времени.The cells of the studied culture of mesophilic lactic streptococci at the beginning of the logarithmic growth phase (3-4 hours broth culture) are separated from the nutrient medium, suspended in sterile saline solution with a pH of 6.8-7.2, irradiated with UV radiation a dose of 25 Jm, placed in nutrient broth and incubated at a temperature that is optimal for culture growth (25 ° C for strains of the species C. creraoris and 30 ° C for strains of the species S. lactis and S. lactis subsp. di acetylactis). During the incubation, the growth of the culture is recorded by the change in the optical density of the controlled mixture (or light scattering intensity) with time.

В период от 1,0 до 2,5 ч от начала инкубации облученных клеток (в зависимости от штаммовой специфичности ) у легкоиндуцируемых лизогенных культур при указанной дозе УФ-облу- чени  наблюдаетс  временное уменьшение или торможение оптической плотности (или светорассе ни ), св занное с лизисом определенной части клеточной попул ции под действием индуцированного умеренного фага, ta- кие культуры не следует включать в состав заквасок дл  сыродели  как потенциально опасные с точки зрени  продукции бактериофагов.In the period from 1.0 to 2.5 h from the start of incubation of irradiated cells (depending on the strain specificity), at easily indicated lysogenic cultures, at the indicated dose of UV irradiation, a temporary decrease in optical density (or light scattering) is observed; with the lysis of a certain part of the cell population under the action of induced moderate phage, such cultures should not be included in the starter culture for the cheese making industry as potentially dangerous from the point of view of bacteriophage production.

Пример. Вы вление легкоиндуцируемых лизогенных культур тур- бидиметрическим методом с помощью фотоэлектрокалориметра. Пробирку со стерильным бульоном, приготовлен- ным из обезжиренного молока, гидро- лизованного панкреатином (среда БГМ) инокулируют 1 мл 18-часовой культуры производственного штамма S.lactis 94 и инкубируют 3 ч при . Клетки собирают центрифугированием (10 мин при 5000 об/мин ) и ресуспендируют в стерильном физиологическом растворе до плотности попул ции около 5 Example. The discovery of easily inducible lysogenic cultures by the turbidimetric method using a photoelectrocalimeter. A tube of sterile broth prepared from skimmed milk hydrolyzed with pancreatin (HMD medium) is inoculated with 1 ml of an 18-hour culture of the production strain S. lactis 94 and incubated for 3 hours at. The cells are harvested by centrifugation (10 min at 5000 rpm) and resuspended in sterile saline to a population density of about 5

00

1515

00

5five

5 five

п P

, г g

30thirty

3535

.мл . 9 мл полученной суспензии в стерильной чашке Петри (диаметр 93 мм) подвергают УФ-облучению дозой 25 посто нном перемешивании с помощью магнитной мешалки. Источником УФ-излучени  служит бактерицидна  лампа БУВ-15.ml 9 ml of the obtained suspension in a sterile Petri dish (diameter 93 mm) is subjected to UV irradiation with a dose of 25 constant stirring using a magnetic stirrer. The source of UV radiation is the bactericidal lamp BUV-15.

Аналогичным образом готов т и облучают клеточные суспензии производственных штаммов S.lactis 350, S.cre- moris 49 и S.lactis subsp. diacety- lactis 625 . Сразу после облучени  2 мл клеточной суспензии смешивают с 2 мл среды БГМ двойной концентрации в- стерильной оптической кювете (длина оптического пути 10 мм) с крьш1кой, инкубируют 3 ч при 25 С (S. crenoris) или при 30°С (остальные штаммы стрептококков). Через каждые 15 мин инкубации измер ют оптическую плотность полученной смеси с помощью электрофотоколори-- метра КФК КЛ 4,2 (перед каждым измерением смесь в кюветах перемешивают с помощью магнитной мешалки).Similarly, cell suspensions of the production strains S.lactis 350, S.cremoris 49 and S.lactis subsp. diacety-lactis 625. Immediately after irradiation, 2 ml of the cell suspension is mixed with 2 ml of BGM medium of double concentration in a sterile optical cuvette (optical path length 10 mm) with a crush, incubated for 3 hours at 25 ° C (S. crenoris) or at 30 ° C (other strains of streptococci) ). Every 15 min of incubation, the optical density of the mixture obtained is measured using an electrical photocolorimeter CPK CL 4.2 (before each measurement, the mixture is mixed in cuvettes using a magnetic stirrer).

На фиг. 1- представлены полученные графики изменени  оптической плотности облученных культур в зависимости от времени инкубации. Из представленных графиков видно, что штаммы S. lactis 94 и S.cremoris 49 легко индуцируютс , а штаммы S.lactis 350 иS.lactis subsp. diacetylactis 625 не индуцируютс  при данной дозе УФ-излу- ченй . Таким образом, штаммы S.lactis 94 и S.cremoris 49 не рекомендуетс  включать в состав заквасок дл  сыродели .FIG. 1 shows the graphs obtained for the change in the optical density of the irradiated cultures as a function of the incubation time. From the presented graphs it can be seen that the strains of S. lactis 94 and S.cremoris 49 are easily induced, and the strains of S. lactis 350 and S. lactis subsp. diacetylactis 625 is not induced at a given dose of UV radiation. Thus, the strains S.lactis 94 and S.cremoris 49 are not recommended to be included in the starter composition for cheese making.

П р и м е р 2. Вы вление легкоин-т дуцируемых лизогенных культур с помощью автоматизированной оптической установки, разработанной в Алтайском филиале ВНИИМС. Суспензию клеток исследуемых молочно-кислых стрептококков S.lactis (индивидуальные штаммы 94 и 350), приготовленную и облученную УФ-излучением, как указано в примере 1, смешивают с равным объемом среды БГМ двойной концентрации,- помещают в стерильную оптическую кювету , расположенную в термостатиро-- ванном блоке и оснащенную устройством , обеспечивающим непрерывное перемешивание культуральной среды, и инкубируют 3 ч при . В процессе инкубации через каждые 3 мин провод т автоматическое измерение оптической плотности смеси с помощьюPRI mme R 2. Detection of easily injected lysogenic cultures using an automated optical installation developed at the Altai branch of VNIIMS. Cell suspension of the investigated lactic acid streptococci S.lactis (individual strains 94 and 350) prepared and irradiated with UV radiation, as indicated in example 1, is mixed with an equal volume of BGM double concentration medium, placed in a sterile optical cell located in a thermostat - bath unit and equipped with a device that provides continuous mixing of the culture medium, and incubated for 3 hours at. In the process of incubation, every three minutes, the optical density measurement of the mixture is carried out automatically using

управл ющей программы компьютера с одновременной выдачей данных на циф- ропечать. Полученные таким образом результаты измерений оптической плот- ности культур S.lactis 94 и 350 пред- 5 ставлены в виде графиков на фиг.2. Они не отличаютс  от результатов, полученных ручным способом дл  соответствующих штаммов мезофильных мо- лочно-кислых стрептококков (пример 1)ЛОcomputer control program with simultaneous data output on digital printing. The results of measurements of the optical density of S.lactis 94 and 350 cultures obtained in this way are presented in the form of graphs in Fig. 2. They do not differ from the results obtained manually for the corresponding strains of mesophilic dairy-acid streptococci (Example 1) LO

П р и м е р 3. Приготовление за- квасочной комбинации и сухого бактериального препарата. Производственные штаммы мезофильных молочнокислых стрептококков S.lactis 94, S.lactis 5 198, S.lactis 203, , S.cremoris 49 S.lactis subsp. diacetylactis 407, S.lactis subsp. diacetylactis 625, вход щие в состав заквасочной комбинации , провер ют предлагаемым спосо бом на наличие легкоиндуцируемого лизогенного состо ни . Штаммы S.lactis 94 и S.cremoris 49, оказавшиес  легкоиндуцируемыми лизогенными стрептококками (примеры 1 и 2), исключают из состава закваски дл  сыров как потенциально опасные в отношении продукции бактериофага на производстве. Взамен их в состав заквасочной комбинации ввод т биологически совмес- тимые штаммы S.lactis 350 и S.cremoris ЗМ-5, аналогичные по производственно ценным свойствам исключенным штаммам, но не дающие реакции фаголицируемых лизогенных штаммов мезофи ных молочно-кислых стрептококков, представл ющих потенциальную опасность дл  сыродели , не требуетс  личи  дорогосто щего электронного микроскопа и проведени  сложных и трудоемких операций, св занных с злектронно-микроскопическим исслед ванием бактериальных клеток. Приме нение простого, широко используемо в микробиологической практике опти ческого метода контрол  роста куль тур и проста  дешева  аппаратура (ф тоэлектрокалориметр любой марки) по вол ют упростить процесс отбраковки При этом по вл етс  возможность ав матизации способа, что облегчает эк плуатацию соответствующей аппаратурPRI me R 3. Preparation of a leavening combination and a dry bacterial preparation. Production strains of mesophilic lactic streptococci S.lactis 94, S.lactis 5 198, S.lactis 203,, S.cremoris 49 S.lactis subsp. diacetylactis 407, S.lactis subsp. The diacetylactis 625, included in the starter combination, is tested by the proposed method for the presence of an easily induced lysogenic state. Strains S.lactis 94 and S.cremoris 49, which turned out to be easily induced by lysogenic streptococci (examples 1 and 2), are excluded from the composition of the ferment for cheeses as potentially dangerous for the production of bacteriophage in production. Instead of them, biologically compatible strains S.lactis 350 and S.cremoris ZM-5 are introduced into the starter combination, similar in terms of production valuable properties to the excluded strains, but not giving the reaction of phagolyzable lysogenic meso streptococcal strain presenting potential danger to the cheese maker; it does not require a high-cost electron microscope and complex and laborious operations associated with electron microscopic examination of bacterial cells. The use of a simple, widely used in microbiological practice, optical method of controlling the growth of cultures and simple cheap equipment (photoelectric calorimeter of any brand) will simplify the process of rejection. This makes it possible to automate the method, which facilitates the operation of the corresponding equipment.

Claims (2)

1. Способ отбраковки легкоиндуци руемых лизо.генных штаммов мезофильн молочно-кислых стрептококков, заклю чающийс  в культивировании бактерий до достижени  ими логарифмической ф зы роста, отборе проб после культив ровани  и последующей оценке культу дл  вы влени  пригодных дл  дальней шего использовани , отличающийс  тем, что, с целью упроще ни  оценки, культуру стрептококков после отбора помещают в солевой рас вор с рН 6,8-7,2 и облучают УФ-излу1. A method for rejecting easily inducible lyso gene-induced mesophilic strains of lactic acid streptococci, cultivating bacteria until they reach a logarithmic growth phase, taking samples after cultivation, and then evaluating the cult to detect suitable for further use, distinguished by that, for the purpose of simpler assessment, the culture of streptococci, after selection, is placed in a salt solution with a pH of 6.8-7.2 and irradiated with UV radiation зиса при УФ-облучении дозой 25 Дж-м 35 чением дозой 25 Дж-.м , после чего В производственной лаборатории -биопрепаратов Алтайского филиала ВНЙИМСа на основе указанной заквасочной комбинации выработали партиюUV radiation at a dose of 25 Jm 35 with a dose of 25 Jm., after which, in the production laboratory, biopreparations of the Altai branch of VNYIMS developed a batch based on this starter combination помещают в питательный бульон и инк бируют при оптимальной температуре роста, оценива  ее развитие по изме нению оптической плотности полученнplaced in nutrient broth and incubated at the optimum growth temperature, assessing its development by changing the optical density obtained сухого бактериального препарата № 3М.40 го раствора, а отбраковку осуществПрепарат разослан на сыродельные заводы Западной Сибири и Казахстана дл  использовани  при производстве твердых сычужных сыров с низкой температурой второго нагревани .the dry bacterial preparation No. 3M.40 of the solution, and the rejection is carried out to the cheese factories of Western Siberia and Kazakhstan for use in the production of hard rennet cheeses with a low second heating temperature. Преимущество способа заключаетс  в том, что дл  вы влени  легкоиндуцируемых лизогенных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков, представл ющих потенциальную опасность дл  сыродели , не требуетс  наличи  дорогосто щего электронного микроскопа и проведени  сложных и трудоемких операций, св занных с злектронно-микроскопическим исследованием бактериальных клеток. Применение простого, широко используемого в микробиологической практике оптического метода контрол  роста культур и проста  дешева  аппаратура (фо- тоэлектрокалориметр любой марки) позвол ют упростить процесс отбраковки. При этом по вл етс  возможность автоматизации способа, что облегчает эксплуатацию соответствующей аппаратуры.The advantage of the method lies in the fact that to detect easily inducible lysogenic strains of mesophilic lactic streptococci, which present a potential hazard to the cheesemaker, does not require an expensive electron microscope and complex and time-consuming operations associated with electronic microscopic examination of bacterial cells. The use of a simple, widely used in microbiological practice, optical method of controlling the growth of crops and simple, cheap equipment (photoelectrocalorimeter of any brand) simplifies the rejection process. In this case, it becomes possible to automate the method, which facilitates the operation of the corresponding equipment. 5 20 Формула изобретени  5 20 Formula of invention 1. Способ отбраковки легкоиндуцируемых лизо.генных штаммов мезофильных молочно-кислых стрептококков, заключающийс  в культивировании бактерий до достижени  ими логарифмической фазы роста, отборе проб после культивировани  и последующей оценке культур дл  вы влени  пригодных дл  дальнейшего использовани , отличающийс  тем, что, с целью упрощени  оценки, культуру стрептококков после отбора помещают в солевой раствор с рН 6,8-7,2 и облучают УФ-излучением дозой 25 Дж-.м , после чего 1. A method for rejecting easily inducible lyso-gene strains of mesophilic lactic acid streptococci, which consists in cultivating bacteria until they reach the logarithmic growth phase, sampling after cultivation, and subsequent evaluation of the cultures for detection of further suitable for use, which, in order to simplify assessment, the culture of streptococci after selection is placed in a saline solution with a pH of 6.8-7.2 and irradiated with UV radiation at a dose of 25 J-m, after which помещают в питательный бульон и инкубируют при оптимальной температуре роста, оценива  ее развитие по изменению оптической плотности полученноplaced in nutrient broth and incubated at the optimum growth temperature, assessing its development by the change in optical density obtained л ют по результату сравнени  измеренного значени  по отношению к заданному значению.based on the result of the comparison of the measured value with respect to the specified value. 2. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что в качестве параметра оценки используетс  светорассе ние полученного раствора.2. A method according to claim 1, characterized in that light scattering of the obtained solution is used as an evaluation parameter. hi ) )J id is ko i5 4t j Врем , V Фие.)hi)) J id is ko i5 4t j Time, V Fieu.) fo Ж jfWWsrmr,. врем , мин Фив. 2fo F jfWWsrmr ,. time min Thebes. 2