SU1055770A1 - Способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса - Google Patents
Способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса Download PDFInfo
- Publication number
- SU1055770A1 SU1055770A1 SU823476167A SU3476167A SU1055770A1 SU 1055770 A1 SU1055770 A1 SU 1055770A1 SU 823476167 A SU823476167 A SU 823476167A SU 3476167 A SU3476167 A SU 3476167A SU 1055770 A1 SU1055770 A1 SU 1055770A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- enzyme
- carrier
- immobilized
- protein
- activity
- Prior art date
Links
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
ПОЛУЧгаМЯ ИГОЮБИЛИЭОВАННОГО ГБЮЩЕЯЛЮЛАЗНОГО КЭМПЛЕКСА путед4 ковгшентного св зывани ферментного препарата с HepacitBOpHhAM носнтеле, о т л ч а ю ц и и с тем/ что, с целью повышени выхода целевого продукта и комплексного использовани исходного сырь , и польч зупт ферментный препарат AsperglCtuS higer 15, содержащий ксиланазу,арабиигиэу , галАктаназу и маннаназу, а в качестве носител используют бензохйноновый силохром при соот- .:НОй1еиии носитель:фермент - lt
Description
СП
сд 41
о
Изобретение относитс к получению иммобилизованных ферментов, например гёмицеллголаэного комплекса.
Гемицеллюлазы используютс при гидролизе гемйцеллюлозны:с компонен- тов растительной ткани,,Продукты гидролиза вл ютс исходным сырьем дл производства фурфурола, этилового спирта, кормовых дрожжей, кристаллической ксилозы, триоксиглутаровой кислоты, п тиатомного спирта ксилита, метилглиоксал , эритроновой :и глицериновой кислоты, глицерина , гликол , пропиленгликол и целого р да органических соединений. Иммобилизаци гемицеллюлазы обеспечивает создание более эффективных гидролизующих ai eHTOB,
Известен способ иммобилизации ксилаказы совместно с В-ксилозидазой и ферментом, разрушающим урановые кислоты, на пористом стекле с помощью глутарового альдегида Y) .
Недостатком способа вл етс низ кий выход иммобилизованной ксиланазы - 10%.
,Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту вл етс способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса путем ковалентного св зывани ферментного препарата с нерастворимым носителем, в качестве которого,идпользугот сополимер ангидрида малеиновой. кислоты и бутандиолг. дивинилэфира в среде 6 ,05 М фосфатного буфера, рН 7, при соотношении носи- тель:фермент « 1:0,5. Св зываетс 50% от вз того количества белка, Ксиланазна активность полученногй, иммобилизованного препарата 58-59% от исходной активности 2J .
Недостатками способа вл ютс большие потери фермента, так как ковалентное .св зывание фермента с носителем осуществл етс через ангидридные группы, которые крайне неустойчивы в водных растворах, а также низкий выход по активности (58-59% от исходной).
Цель изобретени - повышение выхода целевого продукта и комплексное использование исходного сырь .
Поставленна цель достигаетс предлагаемым способом получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса, эаключа ицимс. в ковалентном св зываний ферментного препарата с нерастворимым носителем, с использованием ферментного препарата AspergifKus niger 15, содержащего ксилана эу, арабиназу, галактаназу и маннаназу , причем в качестве носител используют бензохиноновый силохром при соотношении носитель:фермент 1:(0,02 - Of03) и процесс провод т в 0,1 М ацетатном буфере при рН 4,05 ,0.
Дл иммобилизации используют технологический препарат Asp. nlger, содержащий 4 фермента с достаточно высокой активностью.
Иммобилизаци предлагаемым способом обеспечивает сохранение всех 4 ферментных, активностей, крометого по отношению к арабиназной, галактаназной и манианазной активност м наблюдаетс повышение активности за счет очистки препарата в процессе иммобилизации.
Ксиланаза иммобилизуетс с сохранением 89% активности от исходной (по 4-0-метилглюкуроноксилану), арабиназа - с сохранением 113% активности от исходной (по арабинану), галактаназа - с сохранением 114% активности от исходной (по галактану), маннаназа - с сохранением 142% активности от исходной (по галактоманнану ) .
Силохром, активированный П -бензохиноном , вл етс электронноакцепторным соединением и легко вступает в реакции с нуклеофильными реагентами . Схема реакции следующа ;
О
Силохром П n-J-VHi-гемицеллюлаза- ,
силохром-NH f| -гемицеллюлаза
В результате высокой реакциониоспособности хинойОв реакци ковалеитного св зывани фермента с носителем происходит быстро и с небольшими потер ми фермента.
Продолжительность реакции св зывани 2 ч. Св зываетс до 80% от вз того количества белка.
Hk данном носителе хорошо иммобилизуютс все компоненты гемицеллюлазного комплекса. Услови иммобилизации и свойства носител обеспечивают сохранение вьасоких активностей иммобилизованного препарата. Св зывание большей, чем балластных белков, части белков-ферментов-обеспечивает Ъовышенную активность иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса по сравнению с соответствующими активност ми в исходном препарате .
Способ осуществл ют следук цим образом.
При контактировании раствора ферментного пр парата Asp. niger 15 с бемзохинонбвым силохромом при весовых соотношени х носитель:фермент. (0,02 - 0,03) в среде 0,1 М ацетатного буфера (рН 4-5) получают имобилизованный ферментный препарат | . с ксилаиазной активностью не менее 89% от исходной} арабиноэидаэной 113% , галактозИдаэной - 114%, маннозидазной - 142% от исходной активности . - . 5
В результата имеет Место более комплексное использование исходного сырь .
Пример 1. К0,5г бензохиноинового силохрома прибавл ют раст- tO вор 0,05 г ферментного препарата гемицеллюлазы в 2. мл 0,1 М ацетатного буфера, рН 4,6. Весовое соотношение носитель 5 белок 1«0,02. Используют геммицеллюлазный препарат из 15 AspergiBeus niger ISvc содержанием белка 20% и ксиланазной активностью 0,985 ед/мг белка, арабиназной 0 ,194 ед/мг белка, галактаназной0 ,081 ед/мг белка, Маннаназной - 20 0,026 ед/мг белка.
Внадерживают 2 ч при и отфильтровывают . Промывают мл 1 Н раствора NaC8 и 2 5 мл ацетатного, буфера.25
Полученный препарат иммобилизованной гемицеллюлазы содержит 1-6 мг белка на г носител (80%.выход по белку).
Активность препарата: ксиланазна - 0,88.0 ед/мг белка (89,3% от исходной); арабиназна - 0,220 ед/мг белка (113,4% от исходиой); галактаназна - 0,093 ед/мг белка (114,8% от исходно) ,маннаназна - 0,037 ед/мг белка (142,3% от исходной). 35
Пример 2. К2г бензохиноинового силохрома прибавл ют раствор 0,30 г ферментного препарата гемицеллюлазы из AspergiC6us niger 15 в 8 мл 0,1 М ацетатного буфера, рН 5,0.40 Отношение носитель: белок 1:0,03.
Выдерживают 2 ч при 20с и отфильтровывают . Промывают 330 мл 1 М раствора NaC и 2 15 мл ацетатного -, буфера. Полученный препарат иммоби- 45 изованной гемицеллюлазы содержит 24 мг белка на г носител ( выхода ) .
Активность иммобилизованной ге- { ицеллюлазы: ксиланаз на - 0,883 ед/Mv CQ белка (89,7% от исходной); арабиназна - 0,221 ед/мг белка (113,9% от сходной); галактаназна 0 ,092 ед/мг белка (114,9%от исходной ); маннаназна - 0,037 -ед/мг белка (142,7% от исходной).
Примерз. К 1г бензохиноин ового силохрома прибавл ют раствор ,125 г ферментного препарата гемицеллкшаза из Г AsperglCEus niger 15 4 МП 0,1 М ацетатного буфера рН 4 60 (отношение 1:0,025).
Выдерживают 2 ч при и отильтровывают . Промывают 3-15 мл 1 М, аствора NaCB и 2-10 мл ацетатного уфера.65
Полученный препарат иммобилизованной гемицеллюлаэы содержит 20 мг белка на г носител (выход 80%).
. Активность иммобилизованной гемицеллюлазы: ксиланазна - 0,886 ед/мг белка (90% от исходной); арабиназна - 0,219 ед/мг белка (119% от исходной),галактаназна - 0,093 ед/мг белка (115%.от исходной); маннаиаэна - 0,038 ед/мг белка (146,1% от исходной.
Определение гемицеллюлазных активностей .
Ксилан.азна активность.
К 5 мг 4-0-метилг юкуропоксилана добавл ют 1 мл 0,1 М ацетатного буфера , рН 4,2. Навеска влажного иммобилизованного фермента 5 мг (содержание сухих веществ 30%). Инкубаци 30 мин при 40с. Реакцию останавливают 15-минутным кип чением на вод ной бане. Редуцирующие сахара определ ют по методу Сомоги-Нельсона.
Арабиназна активность.
К 5 мг арабинана добавл ют 1 мл 0,1 ацетатного буфера, рН 4,2. Навеска иммобилизованного фермента ;5 мг. Инкубаци 30 мин при 4-0°С, Реакцию останавливают 15-минутнь1М ки:п чением на вод ной бане. Редуцирующие сахара определ ют по методу Сомоги-Нельсона ,
Галактаназна активность.
К 5 мг галактана (из белого люцина ) добавл ют 1 мл 0,1 М ацетатного буфера, рН 4,2. Навеска И1и№1обилизованного фермента 5 мг. Инкубаци 30 мин при-40с. Реакцию останавливают 15-минутным кип чением на ifoaaной бане. Редуциру о|дие сахара определ ют по методу Сомоги-Нельсона.
Маннаназна активность.
К 5 мг галактоманнана (из сем н ;люцерны) добавл ют 1 мл 0,1 И ацетатного буфера, рН 4,2. Навеска иммобилизованного фермента 5 мг« Инкубгщи 30 мин при .-Реакцию останавливают 15-минутным кип ченией на вод аОй бане. Редуцирук цие сахара определ ют п-о методу Сомоги-НельсонаЗа единицу активности принимеиот такое количество фермента, которое катализирует образование 1 мкмоль эквивалента ксилозы за 1 мин при данных услови х. Технико-эконокшческий эффект преД лагаемого изобретени заключаетс в экономии и комплексном испольэо 9ании ферментного препарата, т.е. в св зывании четырех компонентов с высоким выходом, а также в повышении выхода ксилоназы.
Высокие показатели всех актицносfей иммобилизованной гемицеллюлаэы . вл ютс предпосылкой практического использовани иммобилизованного препарата.
5 10557706
Иммобилизованный препарат теми-использованы в качестве источника
целлюлаэы можно примен ть дл осаха-.углеводородов дл выращивани корривани растительных отходов, вмовЫх дрожжейf в микробиологической
частности дл осахаривани водораст-промышленности. Ксилоза легко может
воримых олигосахаридов - отходов пробыть превращена в ксилит и Фурфурол,
изводства целлюлозы, с получением широко примен емые в фармацевтическсилозы , арабинозы и маннозы. Этикой и химической промышленносмоносахариды в дальнейшем могут бытьти.
Claims (1)
- 754) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОГО ГЕМИЦЕЛЛЮЛАЗНОГО КОМПЛЕКСА путем ковалентного связывания ферментного препарата с нерастворимым носителем, о т л и ч а ю щи й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и комплексного использования исходного сырья, испольг зуют ферментный препарат AspergiCtuS Higer 15, содержащий ксйланаэу,арабиназу, галактанаэу и маннаказу, а в качестве носителя используют бензохиноновый силохром при соот- :ношении носитель:фермент - lt(0,Q20,03), причем процесс проводят в ;0,1 И ацетатном буфере при pH 4,05,0.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823476167A SU1055770A1 (ru) | 1982-07-23 | 1982-07-23 | Способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU823476167A SU1055770A1 (ru) | 1982-07-23 | 1982-07-23 | Способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1055770A1 true SU1055770A1 (ru) | 1983-11-23 |
Family
ID=21024282
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU823476167A SU1055770A1 (ru) | 1982-07-23 | 1982-07-23 | Способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1055770A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0676145A1 (fr) * | 1994-04-07 | 1995-10-11 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Hydrolyse de café avec une bêta-mannanase immobilisée |
-
1982
- 1982-07-23 SU SU823476167A patent/SU1055770A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Патент ООА 4275159, кл. С 12 N 11/18, С 12 N 9/14, 1981. 2. PauEd Sinner М., Dletrichs Н. Untersuchungenj ц ber tyrSgergebundene Xyfanasen. - Hotzfecachung, 1974, 28, 3, S. 106-113. Tl4) * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0676145A1 (fr) * | 1994-04-07 | 1995-10-11 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Hydrolyse de café avec une bêta-mannanase immobilisée |
| US5714183A (en) * | 1994-04-07 | 1998-02-03 | Nestec Sa | Hydrolysis of the galactomannans of coffee extract with immobilized beta-mannanase |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bissett et al. | Immobilization of Aspergillus beta-glucosidase on chitosan | |
| Kierstan et al. | The immobilization of microbial cells, subcellular organelles, and enzymes in calcium alginate gels | |
| FI106265B (fi) | Menetelmä ksylitolin valmistamiseksi ksyloosia sisältävistä seoksista | |
| CN100352945C (zh) | 发酵产品的生产 | |
| FI61718B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av xylos genom enzymatisk hydrolys av xylaner | |
| AU2017239834B2 (en) | Method for producing xylo-oligosaccharide | |
| EA031037B1 (ru) | Способ получения сахарного продукта из лигноцеллюлозного материала | |
| JPH05503844A (ja) | キシリトールおよびエタノールの同時生産方法 | |
| EP0143490B1 (en) | Process for the preparation of oligosaccharides-containing products from biomass, oligosaccharides-containing products and their use | |
| Huwig et al. | Laboratory procedures for producing 2-keto-D-glucose, 2-keto-D-xylose and 5-keto-D-fructose from D-glucose, D-xylose and L-sorbose with immobilized pyranose oxidase of Peniophora gigantea | |
| Sundstrom et al. | Enzymatic hydrolysis of cellulose to glucose lung immobilized β‐glucosidase | |
| US4013514A (en) | Preparing a reactor containing enzymes attached to dialdehyde cellulose | |
| Han et al. | Production of sodium gluconate from delignified corn cob residue by on-site produced cellulase and co-immobilized glucose oxidase and catalase | |
| US4908311A (en) | Process for enzymatic preparation of cellooligosaccharides | |
| Lemmel et al. | Fermentation of xylan by Clostridium acetobutylicum | |
| SU1055770A1 (ru) | Способ получени иммобилизованного гемицеллюлазного комплекса | |
| CN109055441B (zh) | 一种利用毕赤酵母固态废弃物高效发酵生产丁醇的方法 | |
| US3047471A (en) | Method of refining amyloglucosidase | |
| Shambe et al. | Acid and enzymic hydrolysis of chaotropically pretreated millet stalk, acha and rice straws and conversion of the products to ethanol | |
| JPS63226294A (ja) | セロビオ−スの製造法 | |
| WO2000061721A1 (fr) | Procede d'obtention de cultures d'$i(a. niger) et leurs utilisations pour la production d'acide ferulique et d'acide vanillique | |
| US4226937A (en) | Method using glucoamylase immobilized on porous alumina | |
| Mortensson-Egnund et al. | α-L-fucosidase from a soil bacterium | |
| SU767208A1 (ru) | Способ получени глюкозы | |
| Donaghy et al. | Measurement of feruloyl/p-coumaroyl esterase by capillary zone electrophoresis |