SU1045127A1

SU1045127A1 - Способ определени антиокислительной активности вещества

Info

Publication number: SU1045127A1
Application number: SU813369746A
Authority: SU
Inventors: Владимир Владимирович Мирончик; Сергей Николаевич Черенкевич; Александр Константинович Говорун
Original assignee: Белорусский научно-исследовательский институт кардиологии
Priority date: 1981-12-25
Filing date: 1981-12-25
Publication date: 1983-09-30

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВА путем исследовани хемилюминесценции модельной системы, отличающийс тем, что, с целью повышени точности и ускорени способа , раствор исследуемого вещества ввод т в 21,3 ММ этанол-буферный . раствор олеиновой кислоты рН 7,5 и добавл ют инициатор - ионы двухвалентного железа, после чего регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции и по снижению величины ее светосуммы посде добавлени исследуемого вещества определ ют антиокислительную активность вещества ,i

Description

Изобретение относитс к фармако логии и может быть использовано как в практической фармакологии,так и в научных медицинских и биохимических исследовани х.

Известен способ определени антиокислительной активности веществ путем спектрофотометрического измерени продуктов реакции взаимодействи липидов с субстра-том, включающий приготовление реактивов , поочередное приготовление опытных и контрольных проб, их термостатирование и инкубацию, построение калибровочной кривой ij .

Однако указанный способ не обеспечивает быстроту ос1гществлени , а отсутствие химической стойкости р да реактивов (этанольные растворы перекиси водорода и иодата кали ) существенно снижает точность определени антиркислительной активности.

Известен способ определени антиокислительной активности веществ путем исследовани хемилюминесценции .модельной системы, включающей митохондрии в изучаемое вещество в присутствии ионов двухвалентного железа 2j . .

Известный способ не вл етс достаточно точным и быстрым по выполнению . Неточность способа обусловлена, с одной стороны, трудностью определени истинного значени угла наклона условной пр мой начальной стадии медленной вспышки хемилюминесденции в св зи с тем, что зависимость интенсивности хемилюминесцендии от времени не вл етс линейной, а с другой стороны, нестабильностью используемой модели суспензии митЛхондрий, приготовление, которойсв зано с методическими трудност ми их выделени . При этом приготовление суспензии митохондрий занимает не . менее 40-50 мин,а регистраци медленной вспышки хемилюминесценции в зависимости от концентрации антиоксидантов осуществл етс от 30 до 60 мин.

Цель изобретени - повь иение точности и ускорение способа измерений антиокислительной активности вещества .

Указанна цель достигаетс тем, что, согласно способу определени антиокислительной активности вещества путем исследовани хемилюминесценции модельной системы,раствор исследуемого вещества ввод т в 21,3 мМ этанол-буферный раствор олеиновой кислоты рН 7,5 и добавл ют инициатор - ионы двухвалентного железа, после чего регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции и по снижению величины ее светосуммы после добавлени исследуемого воцества определ ют антиокислительную активность вещества.

Способ осуществл ют следующим образом.

Готов т модельную систему с конечной концентрацией олеиновой кислоты 21,3 мМ и рН 7,5. Олеиновую кислоту в количестве 319,3 мМ растеор ют в 4 мл этанола и прибавл ют 7 мл 20 мМ раствора- . Затем тщательно перемешивают, довод т рНмодельнрй системы до 7,5 .-10 н.раствором КОН.К О,8 мл приготовленной модельной системы добавл ют 0,2 мл раствора исследуемого- антиоксиданта (в этаноле или фосфатном буфере) и перенос т кювету в. установку дл

измерени сверхслабых свечений. В данную кювету быстро ввод т 1 мл 2 Юраствора FeSO 7 и регистрируют на самописце или с помощью интенсиметра в течение 3-5 с быстРУ вспьшку хемилюминесценции.Затем провод т контроль аналогично опыту, только вместо раствора анти- оксиданта добавл ют 0,2 мл его растворител . Определ ют светосуммубыстрой вспышки, вычисл ют процент снижени ее по сравнению с контроле-м и данные занос т в протокол исследовани .

Измерение хеми.люминесцеиции провод т с. помощью установок дл измерени сверхслабых световых потоков , работающих в режиме счета фотонов .

Расчет, При комнатной температуре в течение 5 с регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции при добавлении инициатора - ионов двухвалентного желе.за - в кювету с модельной системой, содержащей исследуемый антиоксидант,, и производ т измерение ее интенсивности (число импульсов NQ), затем измер ют интенсивность хеми.шоминесценции в контроле (число импульсов N. ) . Если, например , N(,5000, а N, 7500, то величи-ну антиокислительной активности (АСА) определ ют по формуле

--(-..,oo% 33,,.

АОА

Если шумовой фон хемилюмпнесцентной установки относительно высок, то с целью повышени точности измерени АОА веществ провод т учет вклада шумовых импульсов фотоумножител в измер емую величину. Если дл хемилюминесцентной установки за 5 с зарегистрировано число шумовых импульсов , то АОА вычисл етс по формуле

. , No-Ny / 5000-адО

-й ;Г°-Гт15 :) ° Пример . Проведено определение антиокислительнсй активности р да антиоксидантов. Липидорастворимый антиоксидан - oi -токоферол - раствор ют в этаноле перед введением в модельную систему, а водорастворимые антиоксиданты - аскорбинова

кислота, никотинова кислота и КАДФ в фосфатном буфере.

Антиокислительна активность некоторых антиоксидантов, определ ема предлагаемым способом,при убывании их концентрации в модельной системе представлена в таблице.

Ход работы по предлагаемому способу занимает 6-8 мин, что дает выигрыш во времени по сравнению с известными способами в 5-7 раз.

Минимальные концентрации антиокси- о дантов, определ емые предлагаемым способом, составл ют в среднем 510 г вещества. Так, дл ot-токосферола определ ема по предлагаемому способу концентраци 1,210м, а по способу - прототипу 0,.

Предлагаемый способ позвол ет определить антиокислительную активность не только липидораст-воримых но и водорастворимых антиоксидантов, а также обеспечивает высокую чувствительность , хорошую воспроизводимость ., быстр и прост в исполнении.

Claims

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВА путем исследования хемилюминесценции модельной системы, отличающий с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, раствор исследуемого вещества вводят в 21,3 мМ этанол-буферный раствор олеиновой кислоты pH 7,5 и добавляют инициатор - ионы двухвалентного железа, после чего регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции и по снижению величины ее светосуммы по еде добавления исследуемого вещества определяют антиокислительную активность вещества.

I