SK6495A3 - Method of microorganism killing - Google Patents

Abstract

A surface germicidal composition comprises a dyestuff which is capable of photo-dynamic inactivation of micro-organisms. The dyestuff preferably generates singlet oxygen on exposure to light and is substantive to microorganisms, conveniently being selected from the group comprising Rose Bengal, Erythrosin B and phthalocyanin sulphonates. The composition may optionally include other ingredients such as one or more surfactants (for cleaning purposes) and/or one or more solvents.

Description

Oblasť technikyTechnical field

Tento vynález sa týka germicidnych prípravkov, zvlášť na povrchové použitie, t.j. prípravkov, ktoré sú schopné rozrušovať alebo inaktivovať mikroorganizmy, najmä mikroorganizmy naviazané na povrchu.The present invention relates to germicidal compositions, in particular for topical use, i. preparations capable of disrupting or inactivating microorganisms, in particular surface-bound microorganisms.

V širšom poňatí vynález poskytuje povrchový germicídny prípravok s obsahom farbiva, ktoré je schopné fotodynamicky inaktivovať mikroorganizmy.In a broader sense, the invention provides a surface germicidal dye-containing preparation capable of photodynamically inactivating microorganisms.

Doterajší stav techniky a podstata vynálezuBACKGROUND AND SUMMARY OF THE INVENTION

Odporúča sa použiť farbivo, ktoré vyvíja singletový kyslík pri expozícii svetla. Pri absorpcii svetelnej energie sa molekula farbiva konvertuje do energeticky vyššieho alebo vzbudeného stavu (S^») zo svojho východzieho elektrónového stavu (S_o). Elektrónové špiny sú párové a tak sú tieto v singletovom štádiu v zmysle spektroskopie, obsahujúc jednoduchý energetický stupeň v magnetickom poli.It is recommended to use a dye that develops singlet oxygen when exposed to light. The absorption of light energy a dye molecule is converted into energy or exited state (S ^ ') from its electronic ground state (S _o). Electron dirt is paired and so they are in the singlet stage in terms of spectroscopy, containing a simple energy stage in the magnetic field.

Vzbudené štádium je krátkodobé a môže strácať energiu pri návrate do východzieho štádia množstvom spôsobov: emisiou kvanta svetla ako fluorescenciou; vnútornou konverziou, pretože energia je degradovaná na teplo; zrážkou s molekulou odlišnej látky (zhášacia fluorescencia).The aroused stage is short-lived and can lose energy when returning to the initial stage in a number of ways: by emission of quantum light as fluorescence; by internal conversion, since energy is degraded to heat; collision with a different substance molecule (quenching fluorescence).

Krátkodobé singletové štádium môže tiež podstúpiť proces nazývaný intersystémové skríženie na dlhšie trvajúce vzbudené štádium, tripletové štádium. Štádium je označené termínom tripletové, pretože elektrón na vyššom energetickom stupni nie je ďalej spinovo párovaný s elektrónom na nižšom stupni a vzbudené štádium má tri energetické hladiny v magnetickom poli.The short term singlet stage may also undergo a process called intersystem crossover to a longer lasting aroused stage, the triplet stage. The stage is termed triplet because the electron at the higher energy stage is no longer spin-paired with the electron at the lower stage and the aroused stage has three energy levels in the magnetic field.

Interakcia vzbudeného tripletového štádia s molekulárnym kyslíkom vo východzom štádiu, ktorý existuje normálne v tripletovom štádiu, regeneruje východzí stav farbiva, keď2 že energia je prenesená na kyslík, ktorý je podporovaný k elektronicky vzbudenému singletovému štádiu. To znamená, že za ideálnych podmienok jednoduchá molekula fotosenzibilizátora môže viacnásobne obnovovať svoju vlastnú koncentráciu singletového kyslíka.The interaction of the aroused triplet stage with molecular oxygen at the starting stage, which normally exists at the triplet stage, regenerates the initial dye state when energy is transferred to oxygen, which is promoted to the electronically aroused singlet stage. This means that, under ideal conditions, a single photosensitizer molecule can repeatedly recover its own concentration of singlet oxygen.

Singletový kyslík je vysoko reaktívny a fotocitlivý, oxidačný proces touto cestou je známy ako fotooxidácia typuSinglet oxygen is highly reactive and photosensitive, the oxidation process in this way is known as photooxidation type

II. Fotooxidácia typu II je nezávislá na fotosenzibilizátore použitom na obnovu singletového kyslíka. Dôležitým znakom fotosenzibilizátora je, aby mal vysoký kvantový výťažok tripletovej formácie, čo predstavuje, že ideálne, tripletové štádium, by malo byť utvorené pre každý absorbovaný fotón. Intersystémové skríženie na tripletové štádium je uľahčené v prítomnosti ťažkých atómov v molekule.II. Type II photooxidation is independent of the photosensitizer used to recover singlet oxygen. An important feature of the photosensitizer is that it has a high quantum yield of the triplet formation, which means that ideally, the triplet stage should be formed for each photon absorbed. Intersystem cross-linking to the triplet stage is facilitated in the presence of heavy atoms in the molecule.

Fotooxidácia ktorejkoľvek vitálnej zložky organizmu môže mať za následok smrť buniek, bielkovina, polypeptid, aminokyseliny, lipidy s alylovými vodíkmi, tokoferoly, cukry a celulóza.Photooxidation of any vital component of the body can result in cell death, protein, polypeptide, amino acids, allylic hydrogen lipids, tocopherols, sugars, and cellulose.

V súčasnosti sa dáva prednosť farbivám zahrňujúcim bengálsku ružovú (červená kyselina 94, Index farieb č. 45440), Erytrozín B (červená kyselina 51, Index farieb č. 45430)Currently preferred dyes include Bengal pink (red acid 94, Color Index No. 45440), Erythrosine B (red acid 51, Color Index No. 45430)

- a sulfonáty ftalokyanínu, ako ftalokyanínsulfonát hlinitý (APS), ftalosulfonát zinočnatý (ZPS).and phthalocyanine sulfonates such as aluminum phthalocyanine sulfonate (APS), zinc phthalosulfonate (ZPS).

-í Bengálska ružová a Erytrozín B sú známe farbivá v potravinárstve (Bengálska ružová je potravinárska červeň č. 105 a Erytozín B je potravinárska červeň č. 14), a Erytrozín B je na zozname farbív EEC povolený pre použitie v kozmetických prípravkoch, takže tieto dve farbivá sú dobre vhodné na použitie v prípravkoch určených na použitie v domácnosti. Možno používať zmesi farbív a v niektorých prípadoch môže byť požadované, aby v zmesi bolo farbivo, ktoré zostane viditeľné na konci fotodynamického procesu.- Bengal pink and Erythrosine B are known dyes in the food industry (Bengal pink is food red No. 105 and Erythosin B is food red No. 14), and Erythrosine B is included in the EEC dyes list for use in cosmetic products, so the two the colorants are well suited for use in household preparations. Mixtures of dyes may be used and in some cases it may be desirable to have a dye in the mixture that remains visible at the end of the photodynamic process.

Koncentrácia farbiva v prípravku nie je ohraničená a typicky až do 100 ppm, dobré výsledky sa získali s koncentráciami v rozmedzí lOppm až 20ppm. Nižšie koncentrácie, až do lppm by mali tiež vykazovať významné výsledky.The dye concentration in the formulation is not limited and typically up to 100 ppm, good results were obtained with concentrations ranging from 10ppm to 20ppm. Lower concentrations up to 1ppm should also show significant results.

Singletový kyslík má krátku životnosť a preto krátku dĺžku dráhy rozptylu, takže kvôli účinnosti musí byť fotosenzitívne farbivo vyvíjajúce singletový kyslík v blízkosti cieľového substrátu. Preferované farbivá sú preto priamymi farbivami pre mikroorganizmy, t.j. schopné naviazania, typicky väzbou na bunkový proteín na povrchu organizmu alebo na iné bunkové zložky , ako napríklad bunkové tuky.Singlet oxygen has a short lifetime and therefore a short scattering path length, so for efficiency the photosensitive dye developing singlet oxygen must be close to the target substrate. Preferred dyes are therefore direct dyes for microorganisms, i. capable of binding, typically by binding to a cell protein on the surface of an organism or other cellular components, such as cell fats.

Preferované vyššie uvedené farbivá vyvíjajú singletový kyslík po expozícii svetla a sú priame pre proteín a tak sú schopné naviazať sa na mikroorganizmy prostredníctvom bunkového proteínu. Takýmto spôsobom je možné cielené usmrcovanie organizmov a teda germicídny účinok.The preferred dyes mentioned above develop singlet oxygen upon exposure to light and are direct to the protein and thus are capable of binding to microorganisms via the cellular protein. In this way, targeted killing of organisms and hence germicidal effect is possible.

Tiež je výhodné použiť farbivo, ktoré sa po pôsobení svetla vybieli. Použitím foto-bieliaceho farbiva, ktoré je pre mikroorganizmy priame, je možné viditeľne usudzovať, že sú prítomné mikroorganizmy. Keďže sa farbivo vybieli, foto-dynamický účinok spôsobuje usmrtenie alebo inaktiváciu mikroorganizmov. V prítomnosti nízkych hladín svetla, tak bieliaca, ako aj fotodynamická aktivita sa prejavuje pomalšie, zatiaľčo pri vyšších intenzitách svetla pôsobia obidva procesy rýchlejšie. Teda, v závislosti na relatívnych rýchlostiach bieliacej a foto-dynamickej aktivity, prítomnosť • viditeľného farbiva naznačuje používateľovi, že foto-dynamická inaktivácia akýchkoľvek prítomných mikroorga4 nizmov je nekompletná.It is also advantageous to use a dye which has been bleached upon exposure to light. By using a photo-bleaching dye, which is direct to microorganisms, it can be visibly concluded that microorganisms are present. As the dye is whitened, the photo-dynamic effect causes the killing or inactivation of the microorganisms. In the presence of low levels of light, both bleaching and photodynamic activity are slower, while at higher light intensities, both processes act faster. Thus, depending on the relative rates of bleaching and photo-dynamic activity, the presence of a visible dye indicates to the user that photo-dynamic inactivation of any microorganisms present is incomplete.

Fotodynamická inaktivácia mikroorganizmov v suspenzii farbivami, ako bengálska ružová, je známa. Viď napríklad Journal of Applied Bacteriology 1985, (58), s. 391-400, Photochemistry and Photobiology 1988, (48), s. 607-612 (Necker et al.), a Shokuhin Eiseigaku Zasshi 1962, 10 (5), s.Photodynamic inactivation of microorganisms in suspension by dyes such as Bengal pink is known. See, for example, Journal of Applied Bacteriology 1985, (58), p. 391-400, Photochemistry and Photobiology 1988, (48), p. 607-612 (Necker et al.), And Shokuhin Eiseigaku Zasshi 1962, 10 (5), p.

344-347. Akokoľvek, teraz sa zistilo, že vhodné farbivá sú schopné foto-dynamickej inaktivácie mikroorganizmov na povrchoch a toto je základom predkladaného vynálezu. Je dobre známe, že mikroorganizmy sú oveľa viac citlivé na biocídy vo svojom planktónovom alebo suspendovanom stave: oveľa ťažšie sa inaktivujú ak sú prichytávané na povrchy, čo predstavuje ich obvyklý alebo uprednostnený stav. Mikroorganizmy sú normálne na povrchoch vo forme biofilmov, ktoré sú včlenené do matrice extracelulárneho materiálu. Tento extracelulárny materiál môže byť niekedy označený v literatúre ako adhezin. Preto nie je obvyklé, aby proces, ktorý pôsobí na mikroorganizmy v ich planktónovom štádiu, pôsobil na povrchovo naviazaných organizmoch bez potreby modifikácie. Povrchovo naviazané mikroorganizmy predstavujú dôležitý a podstatný prameň kontaminácie v domácnostiach, v inštitucionálnych a premyselných prostrediach, a predkladaný vynález môže umožniť cielený germicídny účinok na takéto mikroorganizmy.344-347. However, it has now been found that suitable dyes are capable of photo-dynamic inactivation of microorganisms on surfaces and this is the basis of the present invention. It is well known that microorganisms are much more sensitive to biocides in their plankton or suspended state: they are much more difficult to inactivate when attached to surfaces, representing their usual or preferred state. Microorganisms are normally on surfaces in the form of biofilms that are incorporated into a matrix of extracellular material. This extracellular material can sometimes be referred to in the literature as adhesin. Therefore, it is not usual for a process that acts on the microorganisms at their plankton stage to act on surface-bound organisms without modification. Surface-bound microorganisms represent an important and essential source of contamination in households, institutional and industrial environments, and the present invention may allow a targeted germicidal effect on such microorganisms.

Prípravky podľa predkladaného vynálezu sú zvlášť vhodné na použitie na tvrdých povrchoch v domácnosti a v priemysle, ako sú sklo, plasty, keramické a kovové povrchy. Prípravky sú zvlášť účinné na použitie na povrchoch, ktoré môžu zachytávať zeminu, ktorá je potencionálne kontaminovaná baktériami na povrchových nerovnostiach, na miestach spojov a v iných relatívne ohraničených oblastiach.The compositions of the present invention are particularly suitable for use on hard surfaces in the home and industry, such as glass, plastic, ceramic and metal surfaces. The compositions are particularly effective for use on surfaces that can retain soil that is potentially contaminated with bacteria on surface irregularities, joints, and other relatively delimited areas.

Prípravok je výhodne kyslej povahy, t.j. má pH v rozmedzí 3 až 5, t.j. pH asi 4, keďže sa zistilo, že kyslé prípravky majú podstatne zvýšenú účinnosť protiThe composition is preferably of an acidic nature, i. it has a pH in the range of 3 to 5, i. a pH of about 4, since it has been found that the acidic preparations have a substantially improved anti-potency activity

Gram-negatívnym (G-) mikroorganizmom, v porovnaní s neutrálnymi prípravkami. Zdá sa, že účinnosť proti Gram-pozitívnym • (6+) mikroorganizmom nie je významne ovplyvnená pH. Prípravky sa môžu jednoducho acidifikovať použitím relatívne sla* bých organických kyselín, ako je kyselina octová.Gram-negative (G-) microorganism compared to neutral preparations. The efficacy against Gram-positive (6+) microorganisms does not appear to be significantly affected by pH. The formulations can be easily acidified using relatively weak organic acids, such as acetic acid.

Necker et al. (vyššie) uvádzajú prehľad, ktorý je v rozpore s tvrdením, že penetrácia bengálskej ružovej sama o sebe cez bunkovú stenu je základom pre inaktiváciu. Uvádzajú, že ich vlastné výsledky podporujú hypotézu o penetrácii farbiva primárne na báze rozdielnej inaktivácie G+ a Gdruhov. Obal G- baktérií má ďalšiu vonkajšiu membránu zloženú v podstate z lipopolysacharidu, ktorý Necker et al. označujú ako bariéru pre potenciálne toxické látky. Možným vysvetlením je, množstvo bielkoviny exponovanej v bunkových membránach je veľmi rozdielne u G+ a G- druhov, väčšie u G+ ako u G-, s väzbovou afinitou k farbivu, ktorá sa mení podľa pH. Koncentrácia farbiva naviazaného na bunkovú stenu by preto mohla byť funkciou pH. Táto interpretácia by mohla vysvetľovať naše zistenia v rozdieloch v miere usmrcovania podía pH (ale nie zjavnú rezistenciu G+ druhov B. subtilis a B. megaterium).Necker et al. (above) provide an overview that contradicts the claim that penetration of Bengal pink itself through the cell wall is the basis for inactivation. They report that their own results support the hypothesis of dye penetration primarily based on different G + and Gdruh inactivation. The G-bacterial sheath has another outer membrane composed essentially of a lipopolysaccharide by Necker et al. as a barrier to potentially toxic substances. A possible explanation is that the amount of protein exposed in cell membranes is very different in G + and G- species, greater in G + than in G-, with dye binding affinity that varies according to pH. The concentration of dye bound to the cell wall could therefore be a function of pH. This interpretation could explain our findings in differences in pH killing rates (but not the apparent G + resistance of B. subtilis and B. megaterium species).

Nie je žiadny rozdiel medzi druhom B. subtilis tvoriacim endospóry a S. aureus , ktorý endospóry netvorí, pokiaľ ide o ich citlivosti voči fotodynamickému účinku bengálskou ružovou v neprítomnosti endospór. Zjavné rozdiely, ktoré ukázali naše štúdie sú podľa predpokladu zapríčinené prítomnosťou endospór u B.subtilis a B. megaterium. ktoré sú jasne viac rezistentné na singletový kyslík ako vlastné baktérie. Spóry prežívajú expozíciu voči bengálskej ružovej a svetlu a následne klíčia, aby vytvorili početné kolónie. Je známe, že spóry sa ťažko farbia a pravdepodobne nevykazujú afinitu voči bengálskej ružovej za žiadnych z použitých podmienok. V literatúre sa objavuje málo údajov o toxicite singletového kyslíka na spóry. Zo štúdií o možno menej rezistentných konídiách Neurospora crassa (Photochem Photobiol., 33, 349 (1981) je singletový kyslík z tohto aspektu účinný.There is no difference between endospore-forming B. subtilis and S. aureus, which does not form endospores in terms of their sensitivity to the bengal pink photodynamic effect in the absence of endospores. The apparent differences shown by our studies are believed to be due to the presence of endospores in B.subtilis and B. megaterium. which are clearly more resistant to singlet oxygen than native bacteria. The spores survive exposure to Bengal pink and light and then germinate to form numerous colonies. It is known that spores are difficult to stain and probably do not show affinity for Bengal pink under any of the conditions used. There is little data on spore toxicity of singlet oxygen in the literature. From studies of possibly less resistant Neurospora crassa conidia (Photochem Photobiol., 33, 349 (1981)), singlet oxygen is effective in this aspect.

Prípravok môže ľubovoľne obsahovať ďalšie ingrediencie, ako jednu alebo viac povrchovo aktívnych látok, z dôvodov čistiacich účinkov a/alebo jedno alebo viac rozpúšťadiel.The composition may optionally contain other ingredients, such as one or more surfactants, for cleaning purposes and / or one or more solvents.

- Povrchovo aktívna látka je výhodne alkoxylovaná, výhodnejšie etoxylovaná, napríklad je vo forme etoxylovaných al* koholov. Alkohol má výhodne 4 až 15 uhlíkových atómov, je v nerozvetvenej alebo rozvetvenej konfigurácii a jeho HLB hodnota, hydrofilno-1 ipofi Iná rovnováha, je v rozmedzí 10 až 14, napríklad 12.The surfactant is preferably alkoxylated, more preferably ethoxylated, for example in the form of ethoxylated alcohols. The alcohol preferably has 4 to 15 carbon atoms, is in a straight or branched configuration, and its HLB value, hydrophilic-ipofi Other equilibrium, is in the range of 10 to 14, for example 12.

Komerčne je dostupná široká paleta vhodných povrchovoaktívnych látok, jednou z nich je látka známa pod obchodným názvom Imbentin 91-35, od fy Kôlb , je to neionóvý alkoholetoxylát, ktorý má v priemere 5 molov etylénoxidu na 1 mol alkoholu.A wide variety of suitable surfactants are commercially available, one of which is known under the trade name Imbentin 91-35, from Kolb, a nonionic alcohol ethoxylate having an average of 5 moles of ethylene oxide per mole of alcohol.

Možno tiež použiť primárne etoxysulfáty.Primary ethoxy sulfates may also be used.

Ak sa požaduje, môžu sa tiež použiť zmesi povrchovoaktívnych látok.Mixtures of surfactants may also be used if desired.

Povrchovoaktívna látka je výhodne neiónová alebo aniónová, alebo zmes oboch typov.The surfactant is preferably nonionic or anionic, or a mixture of both types.

Výhodné aniónové povrchovoaktívne látky pre tento účel zahrňujú primárne alkylsulfáty (PAS), výhodne sodnú soľ dodecylsulfátu (SDS). Komerčné zmesi obsahujúce podstatný podiel dodecylsulfátu, napríklad Empicol LX, sú zvlášť výhodné. Dodecylsulfát je známy denaturačný prostriedok bielkovín, je vhodný na odstránenie bielkovín z povrchov a je biocídny.Preferred anionic surfactants for this purpose include primary alkyl sulfates (PAS), preferably sodium dodecyl sulfate (SDS). Commercial mixtures containing a substantial proportion of dodecyl sulfate, for example Empicol LX, are particularly preferred. Dodecyl sulfate is a known protein denaturant, is suitable for removing proteins from surfaces and is biocidal.

Prípravok je s výhodou podstatne zbavený katiónovej povrchovoaktívnej látky, ale môže obsahovať menšie množstvo katiónového germicídu.The formulation is preferably substantially free of cationic surfactant, but may contain minor amounts of cationic germicide.

Povrchovo aktívna látka predstavuje množstvo v rozmedzí 0,05 až 2,5 % vztiahnuté na celkovú hmotnosť prípravku, typicky 0,5 % až 1,5 %, napríklad 0,7 % vztiahnuté na hmotnosť neiónovej povrchovoaktívnej látky, s ľubovoľným množstvom do 0,2 % vztiahnuté na hmotnosť aniónovej povrchovoaktívnej látky.The surfactant is an amount in the range of 0.05 to 2.5% based on the total weight of the formulation, typically 0.5% to 1.5%, for example 0.7% based on the weight of the nonionic surfactant, with any amount up to 0, 2% based on the weight of anionic surfactant.

Rozpúšťadlo je s výhodou polárne a s nerozvetveným alebo rozvetveným reťazcom C2 až C5 alkoholu, ako etanol, butanol, izopropanol (propan-2-ol) (IPA), N-butoxypropan-2-ol (propylénglykol n-butyléter), 2-butoxyetanol (etylénglykol monobutyléter). V súčasnosti je výhodným rozpúštadlom IPA.The solvent is preferably polar and straight or branched chain C2 to C5 alcohol such as ethanol, butanol, isopropanol (propan-2-ol) (IPA), N-butoxypropan-2-ol (propylene glycol n-butyl ether), 2-butoxyethanol ( ethylene glycol monobutyl ether). Currently, the preferred solvent is IPA.

Možno tiež použiť dvojsýtny alkohol, ako etylénglykol, s vodou miešateľné étery, ako dimetoxyetán.A dihydric alcohol such as ethylene glycol, water miscible ethers such as dimethoxyethane may also be used.

Zmesi rozpúšťadiel možno použiť, ak je to vhodné, napríklad zmesi etanolu a N-butoxypropan-2-olu.Mixtures of solvents may be used, if appropriate, for example mixtures of ethanol and N-butoxypropan-2-ol.

Rozpúšťadlo je výhodne prítomné v rozmedzí množstva 2 až 20 % hmotn. z celkovej hmotnosti prípravku.The solvent is preferably present in an amount of 2 to 20% by weight. of the total weight of the preparation.

Aspoň niektoré z týchto rozpúšťadiel, napríklad etanol, oslabujú bunkové steny mikroorganizmov, zvyšujúc ich premeabilitu a tým sa mikroorganizmy stávajú citlivejšími na penetráciu singletového kyslíka. Toto predstavuje zvyšovanie usmrcovacieho účinku farbiva na mikroorganizmy.At least some of these solvents, such as ethanol, weaken the cell walls of the microorganisms, increasing their premeability, making the microorganisms more sensitive to the penetration of singlet oxygen. This represents an increase in the killing effect of the dye on microorganisms.

Zistilo sa, že začlenenie povrchovoaktívnej látky môže znižovať foto-dynamický účinok farbív, pravdepodobne solubiLizáciou farbiva a zabraňovaním adsorpcie na bunkovú stenu, a použitie rozpúšťadla môže tiež znižovať foto-dynamický účinok farbív, možno kompetiticiou o singletový kyslík. Av šak, sa zistilo, že v trojzložkových prípravkoch, obsahujúcich farbivo, povrchovoaktívnu látku a rozpúšťadlo, je zníženie foto-dynamického účinku na farbivá menšie, ako by sa dalo očakávať od kombinovaných účinkov povrchovoaktívnej látky a rozpúšťadla. Povrchovoaktívna látka a rozpúšťadlo majú teda spolu synergický účinok, výsledkom ktorého je zníženie redukcie fotodynamického účinku farbiva.It has been found that the incorporation of a surfactant can reduce the photo-dynamic effect of dyes, presumably by solubilizing the dye and preventing adsorption to the cell wall, and the use of a solvent can also reduce the photo-dynamic effect of dyes, possibly by singlet oxygen competition. However, it has been found that in the three-component formulations containing the colorant, surfactant and solvent, the reduction in the photo-dynamic effect on the colorants is less than would be expected from the combined effects of the surfactant and the solvent. Thus, the surfactant and the solvent together have a synergistic effect resulting in a reduction in the reduction of the photodynamic effect of the dye.

Vo výhodnom uskutočnení teda predkladaný vynález poskytuje povrchovo čistiaci a germicídny prípravok, obsahujúci farbivo, ktoré je schopné foto-dynamicky inaktivovať mikroorganizmy, ďalej obsahujúci povrchovoaktívnu látku a rozpúšťadlo .Thus, in a preferred embodiment, the present invention provides a surface-cleaning and germicidal composition comprising a colorant capable of photo-dynamically inactivating microorganisms further comprising a surfactant and a solvent.

Prípravok môže obsahovať množstvo ľubovoľných zložiek, ktoré zahrňujú:The composition may contain a number of any ingredients including:

1. Detergentové aktivátory, výhodne chelátové činidlá kovov, ako napríklad kyselina etyléndiaminotetraoctová (EDTA). U chelátov zahrňujúc EDTA) sa vyžaduje, aby permeabilizovali bunkové steny, t.j., aby zvyšovali citlivosť organizmov voči biocídom.Detergent activators, preferably metal chelating agents, such as ethylenediaminotetraacetic acid (EDTA). Chelates (including EDTA) are required to permeabilize cell walls, i.e., to increase the sensitivity of organisms to biocides.

2. Elektrolyt ako pufer alebo soľ, napríklad Na2S04, ktorý sa zúčastňuje na naväzovaní farbiva na bielkovinu podporením pohybu farbiva z vodnej fázy do soli bielkoviny. Elektrolyt je spoločne prítomný v rôznych vyrobených prípravkoch farbív, komerčne dostupných, hoci, ak je to potrebné, možno pridať ďalší elektrolyt. Celkové množstvo elektrolytu v prípravku by sa vo všeobecnosti malo pohybovať v rozmedzí od 0 do 1 % hmotn., výhodne okolo 0,1 %.2. An electrolyte as a buffer or salt, for example Na 2 SO 4, which participates in the binding of the dye to the protein by promoting the movement of the dye from the aqueous phase to the protein salt. The electrolyte is co-present in various manufactured dye preparations commercially available, although additional electrolyte may be added if necessary. The total amount of electrolyte in the formulation should generally be in the range of 0 to 1% by weight, preferably about 0.1%.

3. Vonné látky.3. Fragrances.

4. Zahusťovadlá.4. Thickeners.

Prípravok je vo forme izotropného, jednofázového preparátu a používa sa hlavne ako germicíd, s možnosťou využitia aj čistiacich schopností, na tvrdých povrchoch, so širokým spektrom aplikácií, zahŕňajúc domácnosti, napríklad povrchy v kuchyni a kúpeľni, vrátane záchodovej misy, v inštirúciach, ako sú školy, nemocnice, apod.., v priestoroch závodov, tovární, úradov, hotelov, apod.The preparation is in the form of an isotropic, single-phase preparation and is mainly used as a germicide, also capable of utilizing cleaning capabilities, on hard surfaces, with a wide range of applications, including households such as kitchen and bathroom surfaces, including toilet bowl, in institutions such as schools, hospitals, etc., in the premises of factories, factories, offices, hotels, etc.

Pre použitie v domácnosti je prípravok výhodne uspôso bený na aplikáciu zo spreja, je vhodne adjustovaný v zásobníku, napríklad s ručne ovládaným ventilom alebo s dávkovačom aerosólu. Výhodne je zásobník neprístupný prechodu svetla.For domestic use, the formulation is preferably adapted for spray application, suitably adjusted in a container, for example with a manually operated valve or aerosol dispenser. Preferably, the container is inaccessible to light transmission.

Pri použití je prípravok aplikovaný na povrchu, ktorý má byť ošetrený bežným spôsobom, napríklad spreiovanim z vhodného dávkovača, utieraním pomocou nosiča, ako je látka alebo špongia, alebo vyliatím zo zásobníka, apod. Tento spôsob, najmä pri čistení v priemysle, by mohol byť nasledovaný expozíciou svetelnému zdroju, napríklad bielemu svetelnému zdroju ako napríklad kremíková halogénová výbojka alebo fLuoresvenčný zdroj denného svetla. Spôsob by mohol predstavovať alternatívu oproti použitiu nebezpečnej germicídnej radiácie, napríklad z nízkotlakovej ortuťovej výbojky emitujúcej rezonančné žiarenie pri 254 nm. Takéto žiarenie je nebezpečné pre nechránený zrak. Za týmto vo všeobecnosti nasleduje oplachovací krok, napríklad utieraním s nosičom, aplikáciou prúdu tečúcej vody, apod.In use, the composition is applied to a surface to be treated in a conventional manner, for example by spraying from a suitable dispenser, wiping with a carrier such as a cloth or sponge, or spilling from a container, etc. This method, especially in industrial cleaning, could be followed by exposure to a light source, for example a white light source such as a silicon halogen lamp or a fluorescent daylight source. The method could represent an alternative to the use of hazardous germicidal radiation, for example from a low pressure mercury lamp emitting resonant radiation at 254 nm. Such radiation is dangerous to exposed eyes. This is generally followed by a rinsing step, for example by wiping with a carrier, applying a flow of running water, and the like.

V ďalšom, vynález teda poskytuje spôsob usmrcovania baktérií na povrchu, zahrňujúci aplikáciu prípravku na povrch, podľa vynálezu.Thus, in another aspect, the invention provides a method of killing bacteria on a surface comprising applying the composition to a surface according to the invention.

Prehľad obrázkov na výkresochBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Vynález bude ďalej opísaný ilustračne na nasledovných prik Ladoch a pomocou údajov, ktoré sprevádzajú obrázky, v ktorých:The invention will now be described, by way of illustration, with the following examples of Ladies and with reference to the figures in which:

Obr. 1 znázorňuje dva pásové diagramy log (redukcia) hodnôt, znázorňujúcich letálny účinok bengálskej ružovej a svetla na rôzne mikroorganizmy v suspenzii pri pH 4 a pH 7, na obr. la sú znázornené výsledky pre Gram-pozitívne mikroorganizmy a na obr. lb výsledky pre G-negatívne organizmy a pre kvas inky;Fig. 1 shows two band diagrams of log (reduction) values showing the lethal effect of Bengal pink and light on various microorganisms in suspension at pH 4 and pH 7; FIG. 1a shows the results for Gram-positive microorganisms; and FIG. 1b results for G-negative organisms and for yeast;

Obrázok 2 predstavuje pár grafov log (redukcia) versus pH vyjadrujúcich biocídny účinok bengálskej ružovej a svetla naFigure 2 presents a few log (reduction) versus pH graphs expressing the biocidal effect of Bengal pink and light on

S.aureus a E. coli ako funkciu pH, na obr. 2a sú vyjadrené výsledky po 20 minútach expozícii svetla, na obr. 2b výsled ky po 60 minútovej expozícii;S. aureus and E. coli as a function of pH; Fig. 2a shows the results after 20 minutes of light exposure; 2b results after 60 min exposure;

Obrázok 3 predstavuje pár grafov podobných tým na obr. 2, s tým rozdielom, že bengálska ružová je nahradená Erytrozínom B;Figure 3 shows a few graphs similar to those of Figure 3. 2, except that the Bengal pink is replaced by Erythrosine B;

Obrázok 4 predstavuje dva pásové diagramy log (redukcia) znázorňujúcich fotohygienický účinok rôznych kombinácií bengálskej ružovej (RB), Imbentinu C91-35 (AE), izopropanolu (IPRA) a Empikolu LX (PAS), pričom obr. 4a vyjadruje výsledky získané bez expozície svetla a obr. 4b výsledky získané s expozíciou svetla;Figure 4 is two band diagrams of logs (reduction) showing the photohygienic effect of different combinations of Bengal pink (RB), Imbentin C91-35 (AE), isopropanol (IPRA) and Empicol LX (PAS); 4a shows the results obtained without light exposure, and FIG. 4b results obtained with light exposure;

Obrázok 5 predstavuje grafické znázornenie adsorpcie bengálskej ružovej u E. coli s adsorbovaným množstvom (nanomoly) versus rovnovážna koncentrácia (mikromoly / 1), s výsledkami pri pH 4 znázornenými štvorčekmi a s výsledkami pri pH 7 znázornenými krížikmi;Figure 5 is a graphical representation of Bengal pink adsorption in E. coli with adsorbed amount (nanomoles) versus equilibrium concentration (micromoles / L), with results at pH 4 shown by squares and with results at pH 7 shown by crosses;

Obrázok 6 predstavuje dvojicu grafov podobných tým na obr. 5, ktoré vyjadrujú účinok elektrolytu, pričom obr. 6a znázorňuje výsledky pri pH 4 a obr. 6b výsledky pri pH 7, výsledky bez aditíva vyjadrujú štvorčeky, výsledky so sulfátom sodným (1%) vyjadrujú krížiky a výsladky so sulfátom sodným (5%) znázorňujú dvojité krížiky;Figure 6 shows a pair of graphs similar to those of Figure 1. 5, which show the effect of an electrolyte, and FIG. 6a shows the results at pH 4 and FIG. 6b results at pH 7, no additive results in squares, sodium sulfate (1%) results in crosses, and sodium sulfate (5%) results in double crosses;

Obrázok 7 vyjadruje dvojicu grafov podobných tým na obr. 5, ktoré znázorňujú účinok povrchovoaktívnej látky, pričom obr. 7a predstavuje výsledky pri pH 4 a obr. 7b výsledky pri pH 7, výsledky bez aditíva znázorňujú štvorčeky, výsledky s ne-iónovou povrchovoaktívnou látkou (0,7%) (NI) vyjadrujú štvorčeky a výsledky s PAS (0,7%) predstavujú dvojité štvorčeky ;Figure 7 shows a pair of graphs similar to those of Figure 1. 5 showing the effect of a surfactant, and FIG. 7a shows the results at pH 4 and FIG. 7b results at pH 7, no additive results show squares, results with non-ionic surfactant (0.7%) (NI) represent squares, and results with PAS (0.7%) represent double squares;

Obrázok 8 predstavuje dvojicu grafov podobných tým na obr. 5, ktoré znázorňujú účinok rozpúšťadla pri pH 4 , výsledky bez aditíva vyjadrujú malé štvorčeky, výsledky pre 10% IPA vyjadrujú krížiky , výsledky pre 0,7% Imbentin dvojité krížiky a výsledky pre 10% IPA a 0,7% Imbentin vyjadrujú veľké štvorčeky;Figure 8 shows a pair of graphs similar to those of Figure 1. 5 showing solvent effect at pH 4, no additive results in small squares, 10% IPA results in crosses, 0.7% Imbentin results in double crosses and 10% IPA and 0.7% Imbentin results in large squares;

Obrázok 9 graficky znázorňuje log (redukcia) versus expozičný čas (min.) a vyjadruje účinok pH na rýchlosť usmrcovania E, coli bengálskou ružovou, výsledky pri pH 4 sú vyjadrené štvorčekmi a výsledky pri pH 7 krížikmi; aFigure 9 graphically depicts log (reduction) versus exposure time (min) and expresses the effect of pH on the killing rate E, bengal coli, results at pH 4 are indicated by squares and results at pH 7 by crosses; and

Obrázok 10 predstavuje graf podobný tomu na obr. 9 a vyjadruje účinik elektrolytu pri pH 7 na rýchlosť usmrcovania E. coli bengálskou ružovou, výsledky bez elektrolytu vyjadrujú štvorčeky a výsledky so sulfátom sodným vyjadrujú krížiky.Figure 10 is a graph similar to that of Figure 10. 9 and expresses the effect of the electrolyte at pH 7 on the bengal pink E. coli killing rate, the results without the electrolyte show squares and the results with sodium sulfate indicate crosses.

Príklady uskutočnenia vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Experimentálne postupyExperimental procedures

Príprava inokulaPreparation of inoculum

Nasledovné mikroorganizmy ( vo všeobecnosti každý z národnej zbierky typizovaných kultúr (TCTC) alebo z americkej zbierky typizovaných kultúr) boli použité na opísané experimenty :The following microorganisms (generally each of the National Collection of Standardized Cultures (TCTC) or the American Collection of Standardized Cultures) were used for the experiments described:

Baktérie:bacteria:

Staphvlococcus aureus Staphvlococcus aureus NCTC 6538 NCTC 6538 (G+) (G +) Escherichia coli Escherichia coli NCTC 8196 NCTC 8196 (G-) (G) Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa NCTC 5940 NCTC 5940 (G-) (G) Enterobacter sp. Enterobacter sp. NCTC 3281 NCTC 3281 (G-) (G) Klebsiella sd. Klebsiella sd. ATCC 11677 ATCC 11677 (G-) (G) Bacillus subtilis Bacillus subtilis NCTC 6432 NCTC 6432 (G+) (G +) Bacillus megaterium Bacillus megaterium NCTC 7581 NCTC 7581 (G+) (G +)

Kvasinky:yeast:

Candida albicansCandida albicans

Organizmy rástli inkubáciou vo výživnom bujóne pre baktérie cez noc pri 37 °C (28 °C pre Ps. aeruginosa) a alebo v SABS bujóne (SABS je Sabourandov dextrózny agar, s tekutým médiom v prípade SABS bujónu, od Oxoid Ltd.) pri 28 C pre kvasinky. Kultúry boli izolované vákuovou filtráciou za použitia 0,45 gm filtra Millipore a boli premyté štvrtinovou koncentráciou Ringerovho roztoku pred resuspendovaním v Ringerovom roztoku (10 ml). Organizmy v suspenzii boli vypočítané sériovým riedením a nanesené na výživný agar (baktérie) alebo na SABS agar (kvasinky) a celkový životaschopný počet (TVC) bol vyjadrený ako dekadický logaritmus počtu jednotiek tvoriacich kolónie (CFU) v ml. Experimenty sa vykonávali pri pH 7, pokiaľ nebolo špecifikované inak.Organisms were grown by incubation in bacteria nutrient broth overnight at 37 ° C (28 ° C for Ps. Aeruginosa) or in SABS broth (SABS is Sabourand's dextrose agar, with liquid medium in the case of SABS broth, from Oxoid Ltd.) at 28 ° C. C for yeast. The cultures were isolated by vacuum filtration using a 0.45 gm Millipore filter and were washed with a quarter concentration of Ringer's solution before resuspending in Ringer's solution (10 mL). Organisms in suspension were calculated by serial dilution and plated on nutrient agar (bacteria) or SABS agar (yeast) and total viable count (TVC) was expressed as the decimal logarithm of the number of colony forming units (CFU) in ml. The experiments were performed at pH 7 unless otherwise specified.

1) Disková metóda agarovej difúzie1) Agar diffusion disk method

Pripravili sa vodné roztoky s obsahom 100 ppm farbiva.Aqueous solutions containing 100 ppm dye were prepared.

• Alikvotné množstvá (10ml) každého roztoku farbiva boli sterilizované v sklenených univerzálnych ampulkách so závitom.• Aliquots (10ml) of each dye solution were sterilized in threaded glass universal ampoules.

* Antibiotické testovacie disky (13 mm z BDH) boli tiež sterilizované. Všetky organizmy vyrástli cez noc v nutričnom alebo SABS bujóne (10 ml).* Antibiotic assay discs (13 mm from BDH) were also sterilized. All organisms were grown overnight in nutritional or SABS broth (10 ml).

Pre každý mikroorganizmus boli dve živné agarové platne (SABS pre kvasinky) naočkované kultúrou vyrastenou cez noc (10μ1), aby sa dosiahol rast pokrývajúci celú platňu. Použitím aseptickej techniky bol disk s antibiotikom ponorený do roztoku prvého farbiva a bol umiestnený na povrch naočkovanej agarovej platne. Toto sa opakovalo s ďalšími dvoma roztokmi farbiva, aby sa získali tri disky na duplikátoch platní .For each microorganism, two nutrient agar plates (SABS for yeast) were inoculated with overnight culture (10μ1) to achieve whole plate growth. Using aseptic technique, the antibiotic disc was immersed in the first dye solution and placed on the surface of an inoculated agar plate. This was repeated with two additional dye solutions to obtain three discs on duplicate plates.

z každého páru duplikátov platní bola okamžite do inkubátora pri vhodnej teplote s minimálnou svetla. Zostávajúce platne boli umiestnené na svetelnej skrinky na 3 hod. Osvetlenie zo svetelnej skrinky predstavovalo difúzne biele svetlo priemernej intenzity 4 000 luxov z fluorescenčných trubíc denného svetla (2x 15 wattov, Exal X-ray Accessories Ltd, Hemel Hempstead).from each pair of duplicate plates was immediately placed in an incubator at a suitable temperature with minimal light. The remaining plates were placed in light boxes for 3 hours. Lighting from the light box was diffuse white light with an average intensity of 4000 lux from fluorescent daylight tubes (2x 15 watts, Exal X-ray Accessories Ltd, Hemel Hempstead).

Intenzity svetla boli merané na povrchu difuzéra za použitia svetlometra Megatron DA10. Po expozícii boli platne cez noc inkubované a potom sa hodnotili na inhibíčne zóny okolo disku.Light intensities were measured on the diffuser surface using a Megatron DA10 headlamp. After exposure, the plates were incubated overnight and then evaluated for the inhibition zones around the disc.

Použitím tohto postupu sa získali nasledovné výsledky:Using this procedure, the following results were obtained:

Príklad 1 (Disková metóda)Example 1 (Disk method)

Výsledky pre vodné roztoky farbiva bengálskej ružovej, Erytrozínu B a ftalokyanínsulfonátu hliníka (APS) (100 ppm) naResults for aqueous solutions of Bengal pink dye, Erythrosine B and aluminum phthalocyanine sulfonate (APS) (100 ppm) per

Jedna umiestnená expozíciou vrchnú časť agare pri pH po expozícii svetla 180 minút, ako je opísané vyššie, sú zosumarizované v tab. 1. Výsledky v tabuľke sú vyjadrené ako rozdiel ( v mm) medzi polomerom čírej inhibíčnej zóny ( plocha bez bakteriálneho rastu na rozotrenej agarovej platni) a polomerom disku. Teda, čím vyššia hodnota, tým účinnejšie usmrcovanie baktérií.One placed by exposure to the upper part of the agar at pH after light exposure for 180 minutes as described above is summarized in Tab. 1. The results in the table are expressed as the difference (in mm) between the radius of the clear inhibition zone (area without bacterial growth on the ground agar plate) and the radius of the disc. Thus, the higher the value, the more effective the killing of bacteria.

Agarová disková difúzna metóda označila bengálsku ružovú za viac účinnú ako štrukturálne podobný Erytrozín B. Je presvedčivé pripísať toto poradie rozdielu v kvantovom výťažku pre tvorbu singletového kyslíka. V metanole je kvantový výťažok pre tvorbu singletového kyslíka 0,76 pre bengálsku ružovú v porovnaní s 0,6 pre Erytrozín B. Akokoľvek možno očakávať, že sa množstvo ďalších faktorov môže podieľať na zistených rozdieloch, ako napríklad difúzna rýchlosť farbiva alebo rozdiely vo väzbe farbiva na agarový gél alebo diskový materiál.The agar disk diffusion method has identified Bengal pink as more effective than the structurally similar Erythrosine B. It is convincing to attribute this order of difference in quantum yield to the formation of singlet oxygen. In methanol, the quantum yield for singlet oxygen formation is 0.76 for Bengal pink compared to 0.6 for Erythrosine B. However, many other factors can be expected to contribute to the observed differences, such as diffusion dye velocity or dye bond differences for agar gel or disc material.

Zvláštnym rysom výsledkov získaných pomocou diskovej metódy je jasné rozlíšenie v citlivosti Gram-pozitívnych (G+) a Gram-negatívnych (G-) organizmov voči fotodynamickému účinku, prinajmenšom pri pH 7. Možné príčiny relatívnej rezistencie G-organizmov sú diskutované inde.A particular feature of the results obtained by the disk method is a clear distinction in the sensitivity of Gram-positive (G +) and Gram-negative (G-) organisms to the photodynamic effect, at least at pH 7. Possible causes of the relative resistance of G-organisms are discussed elsewhere.

2) Povrchový test Testovacie roztoky2) Surface Test Test solutions

Bengálska ružová (20 ppm) v pufri pH 4 a:Bengal pink (20 ppm) in pH 4 buffer and:

1. Bez prídavnej látky1. No additive

2. Etanol (10 % obj.) a Imbentin C91-35 (0,7%).2. Ethanol (10% v / v) and Imbentin C91-35 (0.7%).

3. Propan-2-ol (10 % obj.) a Imbentin C91-35 (0,7%).3. Propan-2-ol (10% v / v) and Imbentin C91-35 (0.7%).

Ako kontrola bol použitý roztok chlórnanu sodného (0,125%).Sodium hypochlorite solution (0.125%) was used as a control.

Stanovenie počtu organizmov adherovaných na podklad v Petriho miskeDetermination of the number of organisms adhering to the substrate in a Petri dish

Mikroorganizmus, napríklad S. aureus. suspenzia (0, 5 ml) bol pridaný k roztoku (100 ml) štvrtinovo silného Ringerovho roztoku a stanovil sa priemer cfu per ml (TVC). Podie ly týchto roztokov (20 ml) boli napipetované do sterilných Petriho misiek a nechali sa 5 hod. pri izbovej teplote cez noc. Potom sa inokulum prenieslo pipetou do sterilnej fľašky a priemer cfu per ml , ktorý zostal v suspenzii, bol Stanovený. Počet organizmov (ako cfu) na cm adherovaný na Petriho misku bol vypočítaný z rozdielu koncentrácií roztokov.A microorganism such as S. aureus. a suspension (0.5 ml) was added to a solution (100 ml) of a quarter strength Ringer's solution and the cfu per ml (TVC) was determined. Aliquots of these solutions (20 ml) were pipetted into sterile Petri dishes and left for 5 hours. at room temperature overnight. Then, the inoculum was pipetted into a sterile bottle and the diameter of cfu per ml remaining in the suspension was determined. The number of organisms (as cfu) per cm adhered to the Petri dish was calculated from the difference in solution concentrations.

Testovacia metódaTest method

Bakteriálne suspenzie v štvrtinovej sile Ringerovho roztoku (20ml) boli napipetované do sterilných plastických Petriho misiek, ktoré sa nechali stáť pri izbovej teplote 5 hod. Inokulum bolo potom odstránené, misky sa premyli jedenkrát Ringerovým roztokom jemným rozvírením rukou a roztok bol vyliaty. Párové bakteriálne kontaminované platne boli opracované testovacími roztokmi. Podiel testovacieho roztoku (20 ml) bol vliaty do jednej misky a roztok bol dekantovaný o 30 sekúnd. Miska bola premytá pufrom pri pH 4, umiestnená na svetelnej skrinke na 20 minút. V oddelenom experimente bol roztok v druhej miske exponovaný na svetelnej skrinke 20 minút predtým, ako bol dekantovaný a miska bola premytá pufrom pH 4. Obidva experimenty sa opakovali.Bacterial suspensions in a quarter strength of Ringer's solution (20ml) were pipetted into sterile plastic Petri dishes, which were allowed to stand at room temperature for 5 hours. The inoculum was then removed, the dishes were washed once with Ringer's solution by gently swirling the hands and the solution was discarded. Paired bacterially contaminated plates were treated with test solutions. An aliquot of the test solution (20 ml) was poured into one dish and the solution was decanted for 30 seconds. The plate was washed with buffer at pH 4, placed in a light box for 20 minutes. In a separate experiment, the solution in the second dish was exposed to the light box 20 minutes before it was decanted and the dish was washed with pH 4 buffer. Both experiments were repeated.

Po expozícii svetla bola jedna z párových platní prevrstvená tryptónovo-sójovým agarom s obsahom 1% glukózy 0,015 % neutrálnou červeňou ochladenou na asi 50°C. Ďalšie párové platne sa farbili 0,01% akridínovou oranžou 30 sek., boli premyté a hodnotoli sa mikroskopicky ( Nikon Optiphot mikroskopom vybaveným lOOx apochromatickým imerzným objektívom, lOx okulárom a fluorescenčným prídavným zariadením s B2-A kombinovaným filtrom/dichroickým zrkadlom a super vysokotlakovou ortuťovou lampou. Navrstvené platne boli inkubované pri 37 °C 48 hodín, pokiaľ vyrástli kolónie adherentných baktérií, ktoré neboli usmrtené. Kol=onie vychytávali neutrálnu červeň a boli viditeľné a spočítateľné v agare na povrchu misky. (AMR MacKenzie a R L Rivera - Calderon, Agarová vrstviaca metóda na meranie adherencie Staphvlococcus epidermidis na 4 plastické povrchy, Appl. Environ. Mic14 robiol., 50, 1322 (1985).)After exposure to light, one of the paired plates was overlaid with tryptone-soy agar containing 1% glucose with 0.015% neutral red cooled to about 50 ° C. Additional paired plates were stained with 0.01% acridine orange for 30 sec, washed and evaluated microscopically (Nikon Optiphot microscope equipped with 100x apochromatic immersion objective, 10x eyepiece and fluorescent attachment with B2-A combined filter / dichroic mirror and super high pressure mercury The stacked plates were incubated at 37 ° C for 48 hours until colonies of adherent non-killed bacteria had grown up, collecting neutral red and visible and counted in agar on the plate surface (AMR MacKenzie and RL Rivera-Calderon, Agar). Layering method for measuring adherence of Staphvlococcus epidermidis to 4 plastic surfaces, Appl. Environ. Mic14 robiol., 50, 1322 (1985).

Platne farbené akridínovou oranžou boli hodnotené a fotografované. Počet farbených baktérií bol spočítaný v zornom poli (zhluky počítané ako 1), ktoré bolo predtým stanovené odfotografovaním škály mikrometra.Plates stained with acridine orange were evaluated and photographed. The number of stained bacteria was counted in the field of view (clusters counted as 1), which was previously determined by taking a micrometer scale photograph.

Príklad 2 (Povrchový test)Example 2 (Surface Test)

Povrchové testy kontrolných experimentov používajúcich epifluorescenčnú mikroskopiu, ako je opísané vyššie a suspenznú depléciu poskytli podobné hodnoty pre počet baktérií (s. aureus), ktoré sa prichytili k povrchu plastickej misky (rádovo 1 milión na cm ).Surface tests of control experiments using epifluorescence microscopy as described above and suspension depletion yielded similar values for the number of bacteria (S. aureus) adhered to the surface of the plastic dish (of the order of 1 million per cm).

V protiklade povrch s pozitívnymi kontrolami (roztok chlórnanu sodného, 30 sekúnd) znižoval počet prežívajúcich baktérií na nulu. Výsledky pre fotodynamicky inaktivované baktérie sú zosumarizované v tab. 2 ako dekadický logaritmus redukcie (log redukcia) prežívajúcich baktérií pred a po expozícii, t.j. log (východzí počet) - log (konečný počet).In contrast, the positive control surface (sodium hypochlorite solution, 30 seconds) reduced the number of surviving bacteria to zero. The results for photodynamically inactivated bacteria are summarized in Tab. 2 as the decimal logarithm of the reduction (log reduction) of surviving bacteria before and after exposure, i. log (default count) - log (final count).

Príklad 3Example 3

Zloženie: bengálska ružová (20ppm), neiónová povrchovoaktívna látka (Imbentin C91-35, 0,7%), propán-2-ol (10%) (pH 4).Ingredients: Bengal pink (20ppm), nonionic surfactant (Imbentin C91-35, 0.7%), propan-2-ol (10%) (pH 4).

Experimentálny postup zodpovedá tomu, ktorý bol opísaný predtým, s výnimkou, že povrchové prichytenie baktérií vyžadovalo, aby boli v exponenciálnej fáze rastu. Toto sa dosiahlo inkubáciou v nutričnom bujóne (pre baktérie) alebo v SABS bujóne (pre kvasinky) v plastickej Petriho miske 3 hodiny. V príklade 2 sa suspenzia nerastúcich baktérií v Ringerovom roztoku nechala jednoducho stáť 5 hodín. Toto sa osvedčilo pre S. aureus , ale nie pre iné baktérie. Výsledky vyjadruje tab. 3.The experimental procedure corresponds to that previously described, except that the surface attachment of the bacteria required them to be in the exponential phase of growth. This was achieved by incubation in nutrient broth (for bacteria) or SABS broth (for yeast) in a plastic Petri dish for 3 hours. In Example 2, a suspension of non-growing bacteria in Ringer's solution was allowed to stand for 5 hours simply. This has worked well for S. aureus, but not for other bacteria. The results are shown in Tab. Third

Predchádzajúca skúsenosť s použitím epifluorescenčnej mikroskopie naznačuje, že kde sa získal splývajúci rast,možno tento považovať za ekvivalentný východzej povrchovej hustote životaschopných mikróbov radovo 1 mil./ cm^. Povrchová plocha použitých Petriho misiek bola asi 57 cm^, takže opracovávanie vo všetkých prípadoch redukovalo hladinu povrchovej kontaminácie o najmenej 5 radov amplitúdy (log 5).Previous experience using epifluorescence microscopy suggests that where confluent growth has been obtained, this can be considered equivalent to an initial surface density of viable microbes of the order of 1 million / cm 2. The surface area of the Petri dishes used was about 57 cm 2, so that the treatment in all cases reduced the surface contamination level by at least 5 rows of amplitude (log 5).

Vykonávanie povrchových testov je obtiažnejšie v porovnaní so suspenznými testami a z tohoto dôvodu väčšina expe* rimentov bola prevádzaná v suspenzii, aby sa demonštroval účinok za meniacich sa podmienok.Surface tests are more difficult to perform than suspension tests and for this reason most experiments were carried out in suspension to demonstrate the effect under varying conditions.

3) Suspenzný test3) Suspension test

Príprava roztokovPreparation of solutions

Zásobné roztoky boli pripravované navažovaním a boli sterilizované ( s výnimkou tých, ktoré obsahovali rozpúšťadlo) :Stock solutions were prepared by weighing and sterilized (except for those containing solvent):

Bengálska ružová (0,2 %) v propan-2-ole (95 %)Bengal pink (0.2%) in propan-2-ol (95%)

Neiónová povrchovoaktívna látka (Imbentin C91-35, 14 %) (niekedy označovaná skratkou AE, pre alkohol etoxylát) Aniónová povrchovoaktívna látka (Empicol LX, 14 %) (niekedy označovaná ako PAS) « pufer pH 4 (kyselina citrónová (0,0,1 M, 307 ml) + dihyd.rofosforečnan sodný (0,2 M, 193 ml) • pufer pH 7 (ortodihydrofosforečnan sodný (0,4 M, 468 ml) + dodekahydrát ortohydrofosforečnanu dvoj sodného, (0,4M, 732 ml)Nonionic surfactant (Imbentin C91-35, 14%) (sometimes abbreviated as AE, for alcohol ethoxylate) Anionic surfactant (Empicol LX, 14%) (sometimes referred to as PAS) «buffer pH 4 (citric acid (0,0, 1 M, 307 ml) + sodium dihydrogen phosphate (0.2 M, 193 ml) • buffer pH 7 (sodium ortho-phosphate (0.4 M, 468 ml) + disodium orthophosphate dodecahydrate (0.4M, 732 ml)

Pufre pH 5, 6, 8, 9 boli pripravené , ako uvádza CRC Handbook of Chemistry and physics, 8-36, 73. vyd., CRC Press (1992-1993)Buffers pH 5, 6, 8, 9 were prepared as reported by the CRC Handbook of Chemistry and Physics, 8-36, 73rd Ed., CRC Press (1992-1993)

Konečné koncentrácie v testovacích roztokoch boli typicky :Final concentrations in the test solutions were typically:

bengálska ružová - 20 ppm etanol - 10,0 % obj./na celkový objem povrchovoaktívna látka - 0,7 % hmotn./na celkový objemBengal pink - 20 ppm ethanol - 10.0% v / v total surfactant - 0.7% w / v total volume

V niektorých prípadoch boli použité rozdielne koncentrácie podľa špecifikácie.In some cases, different concentrations were used as specified.

Testovacia metódaTest method

Testovacie roztoky boli doplnené v sterilných Petriho miskách do hĺbky 5 mm (30ml). Ku každému roztoku bola pridaná suspenzia mikroorganizmu (0,3 ml) a bola jemne vmiešaná. Ak mala byť v testovacom roztoku zahrnutá bengálska ružová, bola pridaná až nakoniec, aby sa minimalizovala expozícia svetla. Roztoky boli alebo exponované na svetelnej skrinke, umiestnenej v tme (podmienky zníženej svetelnej expozície) alebo boli nechané na laboratórnom stole. Priemerná intenzita na povrchu rozptylovača svetelnej skrinky bola 4 000 luxov a bola meraná svetlmetrom Megatron DA 10 (od fy Megatron Ltd.). Po špecifikovaných expozičných časoch, boli spočítané prežívajúce baktérie, ako jednotky tvoriace kolónie (cfu/ml) s následnou inkubáciou po sérii riedení a naočkovaní na agar. Stanovil sa dekadický logaritmus počtu baktérií zostávajúcich ako cfu/ml) a bol porovnaný s počtom pred expozíciou ako log ( východzí počet) - log (konečný počet). Čím je hodnota vyššia, tým je väčšie usmrcovanie baktérií.Test solutions were made up in sterile Petri dishes to a depth of 5 mm (30 ml). A microorganism suspension (0.3 ml) was added to each solution and gently mixed. If Bengal Pink was to be included in the test solution, it was added only at the end to minimize light exposure. The solutions were or exposed to a light box placed in the dark (reduced light exposure conditions) or left on a laboratory table. The average intensity on the surface of the light box diffuser was 4000 lux and was measured with a Megatron DA 10 (from Megatron Ltd.). After the specified exposure times, surviving bacteria were counted as colony forming units (cfu / ml) followed by incubation after a series of dilutions and inoculated on agar. The decimal logarithm of the number of bacteria remaining as cfu / ml was determined and compared to the pre-exposure count as log (baseline) - log (finite count). The higher the value, the greater the killing of the bacteria.

Suspenzné testy boli vykonávané proti množstvu organizmov za rôznych podmienok, aby sa fotodynamický účinok voči záberu mikroorganizmov optimalizoval, vrátane Gram - negatívnych organizmov a kvasiniek. Výstupné výsledky sú zosumarizované v zodpovedajúcich tabuľkách. V týchto tabuľkách sú výsledky vyjadrené ako dekadický logaritmus pomeru počiatočného počtu jednotiek formujúcich kolónie k ich počtu po expozícii, log (redukcia). Použitím tohto označenia, hodnota 0 predstavuje, že po expozícii nedošlo k žiadnym zmenám v počte organizmov. Označenie + pred číslom log redukcie naznačuje, že sa nezistil žiadny rast mikroorganizmov (t.j. totálne usmrtenie).Suspension tests were performed against a variety of organisms under various conditions to optimize the photodynamic effect against microorganisms, including Gram-negative organisms and yeast. The output results are summarized in the corresponding tables. In these tables, the results are expressed as the decimal logarithm of the ratio of the initial number of colony-forming units to their number after exposure, log (reduction). Using this designation, a value of 0 indicates that there were no changes in the number of organisms after exposure. The designation + before the log reduction number indicates that no growth of microorganisms (i.e. total killing) was detected.

Príklad 4Example 4

Suspenzné testy sa vykonávali, ako je opísané vyššie, z dôvodu, aby preukázali letálny účinok bengálskej ružovej a svetla na mikroorganizmy v suspenzii; najmä synergizmus nízkeho pH a etanolového rozpúšťadla. Testy boli vykonávané s bengálskou ružovou (20 ppm) samostatne alebo s etanolom (10 % obj./celkový objem, s expozíciou svetla 20 minút (svetelná skrinka). Výsledky vyjadrené ako hodnoty log (redukcia) uvádza tab. 4.Suspension tests were performed as described above to demonstrate the lethal effect of Bengal pink and light on the microorganisms in suspension; in particular the synergism of low pH and ethanol solvent. Tests were performed with Bengal pink (20 ppm) alone or with ethanol (10% v / v volume, with light exposure of 20 minutes (light box). Results expressed as log values (reduction) are shown in Table 4.

Dlhšie expozičné časy ( 60 a 100 minút) zvyšujú účinnosť voči Gram negatívnym organizmom, zvlášť pri pH 7.Longer exposure times (60 and 100 minutes) increase efficacy against Gram negative organisms, especially at pH 7.

Bude zrejmé, že účinnosť voči Gram negatívnym organizmom je výrazne zvýšená pri pH 4 v porovnaní s pH 7.It will be appreciated that the efficacy against Gram negative organisms is significantly increased at pH 4 compared to pH 7.

Príklad 5Example 5

Suspenzné testy boli vykonávané, ako je uvedené vyššie, pri pH 4 a pH 7, aby sa preukázal letálny účinok bengálskej ružovej (20 ppm) a svetla (20 minútová expozícia na svetelnej skrinke) u rôznych Gram-pozitívnych a Gram-negatívnych mikroorganizmov a kvasiniek v suspenzii, a výsledky vyjadrené ako log (redukcia) sú uvedené na obr. la a lb, obr. la uvádza výsledky pre Gram-pozitívne mikroorganizmy a obr. lb výsledky pre Gram-negatívne mikroorganizmy a kvasinky.Suspension tests were performed as above at pH 4 and pH 7 to demonstrate the lethal effect of Bengal pink (20 ppm) and light (20 minute light box exposure) in various Gram-positive and Gram-negative microorganisms and yeasts. in suspension, and the results expressed as log (reduction) are shown in FIG. 1a and 1b, FIG. 1a shows the results for Gram-positive microorganisms and FIG. 1b results for Gram-negative microorganisms and yeast.

Príklad 6Example 6

Suspenzné testy boli vykonávané, ako je uvedené vyššie, v rozmedzí rôznych pH, aby sa preukázal biocídny účinok bengálskej ružovej (20 ppm) a svetla na S. aureus (G+) a E. coli (G-) ako funkcia pH a výsledky vyjadrené ako log (redukcia) sú graficky znázornené na obr. 2a (expozičný čas 20 minút) a 2b (expozičný čas 60 minút). Na obrázkoch krížiky ukazujú výsledky pre kontrolu (G-), dvojité krížiky pre E. coli. obrátené trojuholníky ukazujú výsledky pre S. aureus.Suspension tests were performed as above in the range of different pH to demonstrate the biocidal effect of Bengal pink (20 ppm) and light on S. aureus (G +) and E. coli (G-) as a function of pH and results expressed as log (reduction) are shown graphically in FIG. 2a (exposure time 20 minutes) and 2b (exposure time 60 minutes). In the figures, crosses show results for control (G-), double crosses for E. coli. inverted triangles show results for S. aureus.

Podobné suspenzné testy sa vykonávali, aby sa preukázal biocídny účinok Erytrozínu B a svetla na S. aureus a E. coli ako funkcia pH, a výsledky sú graficky znázornené na obr. 3a a 3b, ktoré sú inak identické s obr. 2a a 2b. Tieto ukazujú, že Erytrozín B účinkuje podobne ako bengálska ružová, čo sa týka jeho fotobiocídneho profilu s pH.Similar suspension tests were performed to demonstrate the biocidal effect of Erythrosin B and light on S. aureus and E. coli as a function of pH, and the results are graphically depicted in FIG. 3a and 3b, which are otherwise identical to FIGS. 2a and 2b. These show that Erythrosine B works similarly to Bengal pink in terms of its photobiocidal profile with pH.

Príklad 7Example 7

Ďalšie suspenzné testy boli vykonávané, ako je uvedené vyššie pri pH 7 za použitia nasledovných roztokov: Neiónová povrchovoaktívna látka Imbentin C91-35 (0,7%) Imbentin C91-35 (0 až 7 %) s bengálskou ružovou (100 ppm) Aniónová povrchovoaktívna látka Empicol LX (0,7%) Empicol LX s bengálskou ružovou (100 ppm)Additional suspension tests were performed as above at pH 7 using the following solutions: Non-ionic surfactant Imbentin C91-35 (0.7%) Imbentin C91-35 (0 to 7%) with Bengal pink (100 ppm) Anionic surface-active Empicol LX (0.7%) Empicol LX with Bengal pink (100 ppm)

Imbentin C91-35, Empicol LX ( oidva 0,7%) a bengálska ružová (100 ppm).Imbentin C91-35, Empicol LX (0.7%) and Bengal pink (100 ppm).

Výsledky sú vysvetlené v tabuľke 5. V tab. termín tma označuje podmienky redukcie svetelnej expozície lepšie ako totálna tma , kvôli praktickým problémom zabránenia nejakej svetelnej expozície.The results are explained in Table 5. the term darkness refers to light exposure reduction conditions better than total darkness, due to the practical problems of avoiding any light exposure.

V tabuľke termín svetlo označuje výsledky, ktoré sú priemerom niektorých pokusov prevádzaných v časových rozmedziach (20 minút, 1 hodinu, 3 hodiny) v štatisticky navrhnutom experimente.In the table, the term light indicates the results that are the average of some experiments performed over time (20 minutes, 1 hour, 3 hours) in a statistically designed experiment.

Výsledky získané podobne pre E. coli pri pH 7 sú graficky znázornené v stĺpcových diagramoch na obr. 4. Na tomto obrázku je PAS použitá skratka pre Empicol LX, IPA je skratka pre izopropanol a AE je skratka pre Imbentin C91-35. Tento obrázok reprezentuje priemerné údaje pre AE 0,7%, PAS 0,7%, IPA 10%.Results obtained similarly for E. coli at pH 7 are graphically shown in the bar graphs of FIG. 4. In this figure, PAS is an abbreviation for Empicol LX, IPA is an abbreviation for isopropanol, and AE is an abbreviation for Imbentin C91-35. This figure represents mean data for AE 0.7%, PAS 0.7%, IPA 10%.

Príklad 8Example 8

Ďalšie suspenzné testy boli vykonávané pri pH 4 pre E. coli za použitia jednej alebo viacerých nasledovných látok: bengálska ružová 40 ppm, povrchovoaktívna látka 0,7% (Imbentin C91-35 alebo Empicol LX), IPA (izopropanol) 10%. Výsledky vyjadruje tab. 6.Additional suspension tests were performed at pH 4 for E. coli using one or more of the following: pink rose 40 ppm, surfactant 0.7% (Imbentin C91-35 or Empicol LX), IPA (isopropanol) 10%. The results are shown in Tab. 6th

Nasledujúce príklady zahrňujú suspenzné testy vykonávané vo všeobecnosti, ako je opísané vyššie, ale pri pH 4. Bengálska ružová, ak bola použitá, bola v koncentrácii 20 ppm, hoci v niektorých prípadoch kontrolné roztoky bez bengálskej ružovej boli exponované svetlom a tieto výsledky sú uvedené v stĺpci s označením Žiadna bengálska ružová.The following examples include suspension tests performed generally as described above, but at pH 4. Bengal pink, if used, was at a concentration of 20 ppm, although in some cases control solutions without Bengal pink were exposed to light and these results are shown in column labeled No Bengal Pink.

Príklady 9, 10, 11 a 12 použili Gram pozitívny organizmus S. aureus, a príklady 13 a 14 Gram negatívny organizmus E. coli.Examples 9, 10, 11 and 12 used the Gram positive organism of S. aureus, and Examples 13 and 14 the Gram negative organism of E. coli.

Ďalšie použité reagensy sú uvedené v príkladoch. Vo všetkých týchto príkladoch boli vzorky exponované 20 minút na svetelnej skrinke. Priemerná intenzita na povrchu difuzéra bola 4 000 luxov meraných svetlometrom Megatron DA 10 (od fy Megatron Ltd.).Other reagents used are exemplified. In all these examples, samples were exposed for 20 minutes in a light box. The average intensity at the diffuser surface was 4000 lux as measured by the Megatron DA 10 (from Megatron Ltd.).

Príklad 9Example 9

Suspenzné testy sa vykonávali s použitím bengálskej ružovej , etanolu a Imbentinu C91-35, so S. aureus. Dekadický logaritmus východzej koncentrácie, log (štart) pre S. aureus bol 6,8. Výsledky znázorňuje tab. 7.Suspension tests were performed using Bengal pink, ethanol and Imbentin C91-35, with S. aureus. The decimal logarithm of the initial concentration, the log (start) for S. aureus was 6.8. The results are shown in Tab. 7th

Príklad 10Example 10

Suspenzné testy sa vykonávali s použitím bengálskej ružovej , Dowanolu PnB a Imbentinu C91-35, so S. aureus. Log (štart) bol 6.9. Výsledky znázorňuje tab. 8.Suspension tests were performed using Bengal Pink, Dowanol PnB and Imbentin C91-35, with S. aureus. The log was 6.9. The results are shown in Tab. 8th

Tento príklad ukazuje, že Dowanol PnB vykazuje určité biocídne vlastnosti.This example shows that Dowanol PnB exhibits certain biocidal properties.

Príklad 11Example 11

Suspenzné testy sa vykonávali s použitím bengálskej ružovej , etylénglykolu a Imbentinu C91-35, so S. aureus. Log (štart) bol 6,8. Výsledky znázorňuje tab. 9.Suspension tests were performed using Bengal pink, ethylene glycol and Imbentin C91-35, with S. aureus. The log was 6.8. The results are shown in Tab. 9th

Príklad 12Example 12

Suspenzné testy sa vykonávali použitím bengálskej ružovej , IPA a Lialetu 111, so S. aureus. Lialet 111 je obchodný názov prípravku sulfátéteru, komerčne dostupného z Enichem-u , s priemernou dĺžkou reťazca 11 , s priemerným stupňom etoxylácie 3. Log (štart) bol 6.7. Výsledky vyjadruje tab. 10.Suspension tests were performed using Bengal Pink, IPA and Lialet 111, with S. aureus. Lialet 111 is the trade name of a sulfate ether preparation, commercially available from Enichem, with an average chain length of 11, with an average degree of ethoxylation of 3. The log (start) was 6.7. The results are shown in Tab. 10th

Príklad 13Example 13

Suspenzné testy sa vykonávali s použitím bengálskej ružovej , propan-2-olu a Imbentinu C91-35, s E, coli. Log (štart) bol 6.8.Suspension tests were performed using Bengal pink, propan-2-ol and Imbentin C91-35, with E, coli. The log was 6.8.

Výsledky vyjadruje tab 11.The results are shown in Table 11.

Príklad 14Example 14

Suspenzné testy sa vykonávali s použitím bengálskej ružovej , etanolu a Imbentinu C91-35, s E. coli. Log (štart) bol 7,1. Výsledky sú znázornené v tab. 12.Suspension tests were performed using Bengal pink, ethanol and Imbentin C91-35, with E. coli. The log was 7.1. The results are shown in Tab. 12th

Príklad 15Example 15

Adsorpcia bengálskej ružovej bola stanovená z deplécie koncentrácie roztoku. Koncentrácie sa získali spektroskopicky z absorbancií nameraných pri vlnovej dĺžke maximálnej absorbancie (ca. 549 nm) za použitia VPA Linton S110 spektrofotometra na supernantantových kvapalinách zbavených mikróbov centrifugáciou.Bengal pink adsorption was determined from solution depletion concentration. Concentrations were obtained spectroscopically from absorbances measured at the maximum absorbance wavelength (ca. 549 nm) using a VPA Linton S110 spectrophotometer on supernatant liquids devoid of microbes by centrifugation.

Výsledky znázorňujú obrázky 5 až 8.The results are shown in Figures 5 to 8.

Výsledky ukazujú, že fotobiocídny účinok závisí od adsorpcie farbiva. Adsorpcia farbiva je:The results show that the photobiocidal effect depends on the dye adsorption. Dye adsorption is:

a) zvýšená pri nízkom pH (obr. 4);a) increased at low pH (Fig. 4);

b) zvýšená pri neutrálnom elektrolyte (ktorý tiež zvyšuje fotobiocídny účinok pri neutrálnom pH na E. coli (obr. 6);b) increased with neutral electrolyte (which also increases the photobiocidal effect at neutral pH on E. coli (Fig. 6);

c) znížená povrchovoaktívnou látkou ( obr. 7);c) lowered by a surfactant (Fig. 7);

d) zvýšená propan-2-olom (obr. 8).d) increased propan-2-ol (Fig. 8).

Prepočty ukazujú, že množstvo naadsorbované na E. coli je v správnom poradí veľkosti pokrytia monovrstvy, ukazujú, že farbivá agregujú a prepočítaný povrch E. coli musí byt hodnotený nižšie (neuvažuje sa o fimbriách a pilusoch). Stručné detaily výpočtov sú uvedené nižšie. Molekulárne dimenzie bengálskej ružovej boli zobraté zo stupnicového modelu ( Catalin Povrchová plocha E. coli Plocha bengálskej ružovejThe calculations show that the amount absorbed on E. coli is in the correct order of monolayer coverage, showing that the dyes aggregate and the recalculated surface of E. coli must be evaluated lower (fimbrios and piles not considered). Brief details of the calculations are given below. Molecular dimensions of Bengal pink were taken from scale model (Catalin E. coli surface area Bengal pink area

Pokrytie monovrstvyMonolayer coverage

Nameraná adsorpcia počet molekúlMeasured adsorption number of molecules

Príklad 16Example 16

Ltd., Londýn).Ltd., London).

1E7 nm² 1E7 nm ²

O nm (rovná)O nm (straight)

0,5 nm² ( bočná)0.5 nm ² (lateral)

5E6 (rovná) alebo 2OE6 (bočná)5E6 (straight) or 2OE6 (side)

2-8 E-16 molov/baktérie2-8 E-16 moles / bacteria

120 - 480 E6 per baktéria120 - 480 E6 per bacteria

Suspenzné testy sa vykonávali, ako je uvedené vyššie, aby stanovil vplyv na rýchlosť usmrcovania E. coli bengálskou ružovou (20ppm) na pH a pridanie elektrolytu (sulfát sodný, 5%) pri pH 7 a výsledky sú graficky znázornené na obr. 9 a 10.Suspension tests were performed as above to determine the effect on the killing rate of E. coli Bengal pink (20ppm) on pH and the addition of electrolyte (sodium sulfate, 5%) at pH 7, and the results are graphically shown in FIG. 9 and 10.

Tabuľka 1 (Príklad 1)Table 1 (Example 1)

Fotobiocídny účinok uvedených činidielThe photobiocidal effect of said agents

Inhibičné zóny Inhibition zones okolo around disku disk Mikroorganizmy microorganisms Gram typ gram Type Bengálska ružová Bengal pink Erytrozín B Erythrosine B APS APS S. WITH. aureus aureus + + 4 4 1 1 2 2 B. B. subtilis subtilis + + 3 3 1 1 1 1 B. B. megaterium megaterium + + 3 3 1 1 1,5 1.5 E. E. coli coli - - 0 0 0 0 0 0 K. K. pneumoniae pneumoniae - - 1,5 1.5 0 0 3 3 Ps ps aeruginosa aeruginosa - - 0 0 0 0 0 0 Enterobacter sp Enterobacter sp . . 0 0 0 0 0 0 C. C. albicans albicans 0 0 0 0 0 0

Tabuľka 2 (Príklad 2)Table 2 (Example 2)

Letálny účinok bengálskej ružovej a svetla na Staphylococcus aureus prichytený na plastický povrchLethal effect of Bengal pink and light on Staphylococcus aureus attached to plastic surface

Roztok solution Log (pomeru) Log (ratio) Bengálska ružová Bengal pink 4,7 4.7 Bengálska ružová + Bengal pink + Imbentin C91-35 + Imbentin C91-35 + Etanol ethanol 6,0 6.0

Tabuľka 3 (Príklad 3)Table 3 (Example 3)

Mikroor- Počet Výsledky ich rastu ganizmy experimentov pri agarovej technikeMicroor- Number Results of their growth in the ganisms of experiments in agar technique

Kontrola Po expozíciiControl After exposure

S. WITH. aureus aureus 1 1 splývajúci blend into rast growth žiadny no rast growth 2 2 splývaj úci blend in rast growth žiadny no rast growth E. E. coli coli 1 1 veľký rast big growth 45 cfu 45 cfu 2 2 splývaj úci blend in rast growth žiadny no rast growth K. K. pneumoniae pneumoniae 1 1 splývajúci blend into rast growth žiadny no rast growth 2 2 splývaj úci blend in rast growth žiadny no rast growth P. P. aeruginosa aeruginosa 1 1 veľký rast big growth 5 cfu 5 cfu 2 2 splývaj úci blend in rast growth žiadny no rast growth C. C. albicans albicans 1 1 splývaj úci blend in rast growth 5 cfu 5 cfu 2 2 splývaj úci blend in rast growth 4 cfu 4 cfu

Tabuľka 4 (Príklad 4)Table 4 (Example 4)

Mikroorganizmy microorganisms Gram typ Gram typ Podmienky expozície Exposure conditions bez rozpúšťadla without solvent s etanolom with ethanol pH 7 pH 7 pH 4 pH 4 pH 7 pH 7 pH 4 pH 4 S. aureus S. aureus + + 7,0 7.0 7,1 7.1 7,1 7.1 6,9 6.9 B. subtilis B. subtilis + + 0,6 0.6 2,1 2.1 3,1 3.1 0,8 0.8 B. megaterium B. megaterium + + 1,3 1.3 0,3 0.3 1,1 1.1 0,3 0.3 E. coli E. coli - - 0,2 0.2 5,3 5.3 0,1 0.1 6,9 6.9 K. pneumoniae K. pneumoniae - - 0,9 0.9 5,6 5.6 0 0 7,0 7.0 Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa - - 0 0 7,0 7.0 0 0 6,9 6.9 Enterobacter sp. Enterobacter sp. - - 1,1 1.1 7,3 7.3 0 0 7,4 7.4 C. albicans C. albicans 0 0 5,7 5.7 0 0 5,7 5.7 Kontroly (bez Bengálskej Controls (without Bengali ružovej) pink) E. coli E. coli - - 0,1 0.1 0,8 0.8

Tabuľka 5 (Príklad 7)Table 5 (Example 7)

Mikroorganizmy s Microorganisms s IMBENTÍN Imbentin IMBENTÍN/RB Imbentin / RB EMPICOL EMPICOL EMPICOL/RB EMPICOL / RB vetlo greater tma dark svetlo the light tma dark svetlo the light tma dark svetlo the light tma dark St. aureus St. aureus 4,5 4.5 4,0 4.0 8,0 8.0 3,5 3.5 4,5 4.5 4,5 4.5 5,5 5.5 5,0 5.0 E. coli E. coli 9,0 9.0 9,5 9.5 10,5 10.5 10,0 10,0 5,5 5.5 5,0 5.0 6,5 6.5 6,0 6.0 Entero. Entero. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 KlebsieU a KlebsieU a 7,0 7.0 6,0 6.0 6,0 6.0 7,0 7.0 6,0 6.0 6,0 6.0 6,0 6.0 6,0 6.0 Ps. aerug. Ps. aeruginosa. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C. albicans C. albicans 0 0 0 0 1,0 1.0 1,0 1.0 2,5 2.5 1,5 1.5 3,0 3.0 0 0

Tabuľka 5 (Príklad 7) pokračovanieTable 5 (Example 7) continued

Mikroor- IMBENTÍN/EMPICOL Microor IMBENTIN / EMPICOL IMBENTÍN/EMPICOL/RB Imbentin / EMPICOL / RB BENGÁL.RUŽOVÁ BENGÁL.RUŽOVÁ gánizmy -organisms svetlo the light tma dark svetlo the light tma dark svetlo the light tma dark St.aureus St. aureus 3,0 3.0 4,0 4.0 2,0 2.0 0 0 4,0 4.0 0 0 E. coli E. coli 4,0 4.0 4,0 4.0 4,0 4.0 4,5 4.5 0 0 0 0 Entero. Entero. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Klebsiella Klebsiella 3,5 3.5 3,5 3.5 4,0 4.0 2,5 2.5 0 0 0 0 Ps.aerug. Ps.aerug. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C.albicans C. albicans 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Tabuľka 6 (Príklad 8)Table 6 (Example 8)

EXPOZIČNÉ ČASY EXPOSURE TIME 1 HODINA 1 HOUR 2 HODINY 2 HOURS 3 HODINY 3 HOURS svetlo the light tma dark svetlo the light tma dark svetlo the light tma dark Bengálska ružová Bengal pink 3,8 3.8 0,5 0.5 7,2 7.2 0,4 0.4 7,2 7.2 0,7 0.7 RB/Imbentin RB / Imbentin C91-35 C91-35 0,2 0.2 0,2 0.2 1,0 1.0 0,3 0.3 3,8 3.8 0,5 0.5 RB/Empicol LX RB / Empicol LX 1,7 1.7 0,4 0.4 3,9 3.9 0,7 0.7 7,2 7.2 0,7 0.7 RB/IPA RB / IPA 5,4 5.4 3,6 3.6 4,7 4.7 5,0 5.0 7,2 7.2 7,2 7.2 Imbentin Imbentin C91-35 C91-35 0,1 0.1 0,3 0.3 0,9 0.9 Empicol LX Empicol LX 0,1 0.1 0,6 0.6 1.0 1.0 IPA IPA 0,3 0.3 1.7 1.7 4,4 4.4

Tabuľka 7 (Príklad 9)Table 7 (Example 9)

Etanol % ethanol % Imbentín C91-35 % Imbentin C91-35% Po svetelnej « After light « Log (redukcia) Bez expozícii Bengálskej ružovej Log (reduction) without exposure of Bengal pink 5 5 0,2 0.2 + 6,8 + 6.8 5 5 0,6 0.6 4,6 4.6 10 10 0,6 0.6 + 6,8 + 6.8 15 15 0,6 0.6 + 6,8 + 6.8 5 5 - - + 6,8 + 6.8 0,1 0.1 10 10 - - + 6,8 + 6.8 - 0,4 - 0,4 15 15 - - + 6,8 + 6.8 0,0 0.0 - - 0,2 0.2 4,6 4.6 2,5 2.5 - - 0,6 0.6 3,5 3.5 2,3 2.3 - - - - + 6,8 + 6.8 2,3 2.3 Tabuľka table 8 (Príklad 8 (Example 10) 10)

Log (redukcia)Log (reduction)

Dowanol Dowanol Imbentín Imbentin Po After Bez without % % C91-35 % C91-35% svetelnej expozícii light exposure Bengálskej ružovej Bengal pink 3 3 0,7 0.7 + 6,9 + 6,9 3 3 - - + 6,9 + 6,9 4,0 4.0 - - 0,7 0.7 5,2 5.2 3,4 3.4 - - - - + 6,9 + 6,9

Tabuľka 9 (Príklad 11)Table 9 (Example 11)

Log (redukcia)Log (reduction)

V IN Etylénglykol % Ethylene glycol% Imbentín C91-35 % Imbentin C91-35% Po svetelnej expozícii After light exposure Bez Bengálskej ružovej without Bengal pink 10 10 0,7 0.7 + 6,8 + 6.8 10 10 - - + 6,9 + 6,9 - 0,2 - 0,2 - - 0,7 0.7 + 6,8 + 6.8 3,4 3.4 - - - - + 6,8 + 6.8

Tabuľka 10 (Príklad 12)Table 10 (Example 12)

Propan- 2-ol % propane 2-ol% Lialet 111 % Lialet 111 % Po svetelnej After light Log (redukcia) Bez expozícii Bengálskej ružovej Log (reduction) without exposure of Bengal pink 15 15 0,5 0.5 + 6,7 + 6.7 15 15 - - + 6,7 + 6.7 4,9 4.9 - - 0,5 0.5 + 6,7 + 6.7 + 6,7 + 6.7 - - - - + 6,7 + 6.7

Tabuľka 11 (Príklad 13)Table 11 (Example 13)

Propan- 2-ol % propane 2-ol% Imbentin C91-35 % Imbentin C91-35% Po svetelnej After light Log (redukcia) Bez expozícii Bengálskej ružovej Log (reduction) without exposure of Bengal pink 5 5 0,1 0.1 2,3 2.3 10 10 0,1 0.1 + 6,8 + 6.8 10 10 0,5 0.5 + 6,8 + 6.8 10 10 0,7 0.7 + 6,8 + 6.8 - - - - 4,8 4.8 5 5 - - 5,5 5.5 0,3 0.3 10 10 - - 3,0 3.0 1,9 1.9 - - 0,1 0.1 1,2 1.2 1,3 1.3 - - 0,5 0.5 1,0 1.0 1,2 1.2 - - 0,7 0.7 1,1 1.1 1,1 1.1

Tabuľka 12 (Príklad 14)Table 12 (Example 14)

Etanol Imbentin % C91-35 %Ethanol Imbentin% C91-35%

Log (redukcia)Log (reduction)

Po Bez svetelnej expozíci i Bengálskej ružovejAfter No Light Exposure And Bengal Pink

5 5 0,2 0.2 4,1 4.1 15 15 0,6 0.6 + 7,1 + 7.1 5 5 - - 5,0 5.0 0,2 0.2 10 10 - - + 7,1 + 7.1 0,2 0.2 15 15 - - + 7,1 + 7.1 2,2 2.2 - - 0,2 0.2 3,3 3.3 2,5 2.5 - - 0,6 0.6 3,4 3.4 2,6 2.6 - - - - 3,9 3.9

P/P /

Claims (18)

PATENTOVÉ NÁROKYPATENT CLAIMS 1. Spôsob usmrcovania mikroorganizmov prichytených na povrchu^ vyznačujúci sa tým, že obsahuj káciu prípravku s obsahom farbiva na povrch, pričom farbivo má schopnosť fotodynamicky inaktivovať mikroorganizmy.CLAIMS 1. A method for killing microorganisms adhered to a surface, comprising forging a dye-containing composition onto a surface, wherein the dye has the ability to photodynamically inactivate microorganisms. 2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že farbivo generuje singletový kyslík po expozícii svetla.Method according to claim 1, characterized in that the dye generates singlet oxygen upon exposure to light. 3. Spôsob podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že farbivo je pre mikroorganizmy priame.Method according to claim 1 or 2, characterized in that the dye is direct for the microorganisms. 4. Spôsob podľa nároku 1, 2 alebo 3, vyznačujúci sa tým, že farbivo po expozícii svetla vybledne .Method according to claim 1, 2 or 3, characterized in that the dye fades after exposure to light. 5. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že farbivo je vybrané zo skupiny zahrňujúcej bengálsku ružovú, Erytrozín B a sulfonáty ftalokyanínu.The method according to any one of the preceding claims, wherein the colorant is selected from the group consisting of Bengal pink, Erythrosine B and phthalocyanine sulfonates. 6. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že farbivo je prítomné v množstve v rozmedzí 1 až 100 ppm.The process according to any one of the preceding claims, wherein the colorant is present in an amount in the range of 1 to 100 ppm. 7. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že prípravok ďalej obsahuje jednu alebo viac povrchovoaktívnych látok.The method according to any one of the preceding claims, characterized in that the formulation further comprises one or more surfactants. 8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že povrchovoaktívna látka je alkoxylovaná.8. The method of claim 7, wherein the surfactant is alkoxylated. 9. Spôsob podľa nároku 8, vyznačujúci sa tým, že povrchovoaktívna látka je etoxylovaná.The method of claim 8, wherein the surfactant is ethoxylated. 10. Spôsob podľa nároku 7, 8 alebo 9, vyznačujúci sa tým, že povrchovoaktivna látka je aspoň prevažne neiónová a/ alebo aniónová.Method according to claim 7, 8 or 9, characterized in that the surfactant is at least predominantly non-ionic and / or anionic. 11. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 7 až 10, vyznačujúci sa tým, že povrchovoaktivna látka je prítomná v prípravku v množstve v rozmedzí 0,05 až 2,5 % hmotn. na celkovú hmotnosť prípravku.The method of any one of claims 7 to 10, wherein the surfactant is present in the composition in an amount ranging from 0.05 to 2.5% by weight. to the total weight of the preparation. 12. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že prípravok obsahuje jedno alebo viac rozpúšťadiel.A method according to any one of the preceding claims, characterized in that the composition comprises one or more solvents. 13. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlo je polárne.Process according to claim 12, characterized in that the solvent is polar. 14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa t ý m, že rozpúšťadlo je C2 až C5 alkohol s Lineárnym alebo rozvetveným reťazcom.14. The method of claim 13 wherein the solvent is a linear or branched C2 to C5 alcohol. 15. Spôsob podľa nároku 12, 13 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlo je prítomné v množstve v rozsahu 2 až 20 % hmotn. na celkovú hmotnosť prípravku.Process according to claim 12, 13 or 14, characterized in that the solvent is present in an amount in the range of 2 to 20% by weight. to the total weight of the preparation. 16. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že pH prípravku je v rozmedzí 3 až 5.Process according to any one of the preceding claims, characterized in that the pH of the preparation is in the range of 3 to 5. 17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že pH prípravku je asi 4.17. The method of claim 16, wherein the pH of the formulation is about 4. 18. Spôsob usmrcovania mikroorganizmov prichytených na povrchu, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje povrchovú aplikáciu prípravku s obsahom farbiva schopného fotodynamicky inaktivovať mikro-organizmy a s obsahom povrchovoaktívnej látky a rozpúšťadla.18. A method of killing micro-organisms adhered to a surface, comprising topically applying a dye-containing composition capable of photodynamically inactivating micro-organisms and containing a surfactant and a solvent.