SK562006A3

SK562006A3 - Spôsob stanovenia obsahu karbetopendecínium bromidu metódou kvapalinovej chromatografie

Info

Publication number: SK562006A3
Application number: SK56-2006U
Authority: SK
Inventors: Miroslav Veverka; Alena Bednáriková
Original assignee: Bel/Novamann, S. R. O.
Priority date: 2006-03-22
Filing date: 2006-03-22
Publication date: 2007-11-02
Also published as: WO2007108782A8; WO2007108782A2; WO2007108782A3; EP2054286A2

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka spôsobu stanovenia obsahu karbetopendecínium bromidu metódou kvapalinovej chromatografie vo farmaceutických prípravkoch. Stanovenie je možno použiť pri kontrole substancie a alebo jej obsahu v kvapalných, pevných alebo plynných liekových formách.

Doterajší stav techniky

Zlúčenina [1-(etoxykarbonyl)pentadecyl]trimetylammonium bromid, karbetopendecínium bromid (Synonymum. Carbethopendecinii bromidum, Septonex, Carbethopendecinium bromatum) vzorca I,

C2H5OCO-CH-N⁺(CH₃)₃ Br'

I (CH₂)₁₃—— ch_{3 (i}, je antiseptikum zo skupiny kvartérnych amóniových solí s bakteriostatickým účinkom.

Používa sa ako dermatologikum a dezinfektant. Ako aktívna komponenta predovšetkým v prípravkoch na dezinfekciu kože, dezinfekciu povrchových poranení, ale aj dekontamináciu obuvi a rukavíc pri mykózach. Ďalej sa používa k liečbe drobných prejavov kožného hnisania prejavujúcich sa sčervenaním, mokvaním, a to i pri výskyte vo vlasatej časti hlavy.

Používa sa ako zložka sprayov deodorantov s antiseptickým účinkom proti baktériám, vírusom a plesniam a alebo vo veterinárnej medicíne. Je tiež pomocnou látkou v rôznych mastiach, zásypoch a géloch. Sú napr. známe dentálne výrobky ako zubné pasty, gély lokálnych anestetík a antiseptík, očné instilácie napr. masť pre liečbu akútnej i chronickej nehnisavej konjunktivitidy alebo blefaritidy, stavy po extrakcii cudzích teliesok z rohovky, alebo kvapky pre akútnu i chronickú nehnisavú konjunktivitidu alebo blefaritidu, nehnisavú povrchovú keratitidu.

Doteraz používaná metóda stanovenia obsahu a čistoty karbetopendecinium bromidu opísaná napr. v liekopisnom článku (Český lékopis V diel, str. 5449, 2002) je limitovaná jeho koncentráciou najmä pri stanovení v nízkych koncentráciách. Titračné stanovenia taktiež neumožňujú rozlíšenie medzi degradačnými a „in-process nečistotami a výber optimálnej metódy pre stanovenie týchto je rozhodujúci. (S. Ahuja ed. in: Chromatography of Pharmaceuticals. ACS Symposium Šerieš 512, 1992. AChS, Washington.)

Z hľadiska bezpečnosti, regulačné orgány všeobecne vyžadujú výrobnú špecifikáciu s deklarovaným obsahom použitých látok. Ďalej stabilitné testy vyžadujú potvrdenie, že prítomné látky sa v ich priebehu nezmenili. Je dôležité doložiť, že pred aplikáciou sa produkt neodlišuje svojím zložením od schválenej špecifikácie. Stabilita látky je zásadne ovplyvňovaná množstvom nečistôt v nej obsiahnutých, či už majú pôvod v nedokonalom vyčistení pri výrobe alebo vznikajú intermolekulárnymi reakciami viaczložkových sústav pri skladovaní. Z uvedeného vidieť, že stanovenie pri nízkych koncentráciách je klúčové.

Pre stanovenie obsahu karbetopendecinium bromidu napr. v očných instiláciách sa používa UV spektroskopia, je však limitované kôpri viaczložkovom stanovení alebo vyžaduje opakovanú prípravu vzoriek. Nevýhodou je použiteľnosť len na vysoko koncentrované vzorky prípravkov.

Ďalšou ťažkosťou pri uskutočňovaní postupu stanovenia podía doterajších postupov je ich prácnosť, nešpecifickosť a veiká spotreba času pri príprave vzorky a stanovení. Robustné a spoľahlivé analytické stanovenie substancie karbetopendecínium hromid a aj jeho liekových foriem má potvrdiť alebo vylúčiť, že je v limitoch povolených pre farmaceutickú kvalitu produktov.

Zvláštny význam má stanovenie v rôznych koncentráciách v rozličných produktoch a bolo teda potrebné navrhnúť všeobecnú metódu stanovenia karbetopendecínium bromidu v rôznych zmesiach.

Napriek veľkej aplikácii kvapalinovej chromatografie nie sú publikované práce zaoberajúce sa separáciou karbetopendecínium bromidu metódou kvapalinovej chromatografie v liečivých prípravkoch. Nie sú opísané ani práce zaoberajúce sa stanovením obsahu a čistoty karbetopendecínium bromidu metódou kvapalinovej chromatografie.

Nedostatky doteraz používaných metód teda odstraňuje spôsob stanovenia podľa vynálezu.

Bolo zistené, že karbetopendecínium bromid je možné stanoviť postupom podľa vynálezu metódou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie na základe separácie na reverznej fáze napr. alkyl-, fenyl-, kyanoalkyl- alebo aminoalkylsilánového typu v prítomnosti tetralkylammóniových solí.

Vynález sa teda týka spôsobu stanovenia obsahu a čistoty alkylammoniových zlúčenín metódou kvapalinovej chromatografie vo farmaceutických prípravkoch. Stanovenie je možné použiť pri *9 kontrole samotnej substancie a alebo jej obsahu v kvapalných, pevných alebo plynných liekových formách.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je spôsob stanovenia obsahu karbetopendecínium bromidu všeobecného vzorce I, vyznačujúci sa tým, že sa stanovenie vykoná metódou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie na reverznej fáze alkyl-, fenylalkyl-, kyanoalkyl- alebo aminoalkyl silánového typu v prítomnosti tetralkylammoniových soli (všeobecného vzorca II, nR₄N⁺X (II, kde X je skupina OH', Cl, HSO₄, H₂PO₄' a R značí Cl až C8 alkyl elúciou s mobilnou fázou 5-30% organickej s vodou miešatelnej zložky a 95-70% vodnej zložky s výhodou kombinované s gradientom a použije sa chromatografická kolóna s priemerom častíc 2.5 až 5mikrometrov pri teplote kolóny 2 až 50°C, pričom prietok mobilnej fázy je 0.2 - 2.0 mL/min s detekciou pri vlnovej dĺžke 210 až 220 nm a dávkovaní 5-100 mikro L.

Tetralkylammoniové soli všeobecného vzorca II sa používajú na prípravu vodnej zložky mobilnej fázy a alebo sú rozpustené v rozpúšťadle použitom na prípravu roztoku vzorku látky I. Látky uvedeného typu sú komerčne dostupné.

Ako stacionárna fáza pre separáciu sa použijú chemicky modifikované silikagél reverzné fázy alkylsilánového typu, napr. alkyl-, fenylalkyl-, kyanoalkyl- alebo aminoalkyl silán. Tieto typy kolón sú dostatočne známe. Bežne používané sú kolóny napr. Luna C8, Luna C18, Luna Phenyl-Hexyl, Purospher Star NH2.

Separácia sa uskutočňuje pri teplotách od 2°C do teploty 50 °C s výhodou pri laboratórnej teplote.

<

Mobilná fáza je zložená z 5-30% vodou miešatelnej organickej zložky a 95-70% vodnej zložky. Ako s vodou miešateľné rozpúšťadlá sa používa metanol, etanol, acetonitril. V závislosti na type analytu sa s výhodou separácia kombinuje s gradientovou elúciou. Podmienky použitého gradientu sú závislé od zloženia vzorky a závisia od prípadných zložiek prípravku.

Väčšina separácií sa uskutočňuje pri laboratórnej teplote, ale teplota kolóny môže byť upravená pre dosiahnutie vyššej účinnosti v závislosti na zložení vzorku prípravku. V priebehu analýzy však musí byť udržiavaná konštantná teplota mobilnej fázy a kolóny. Uvedené je dôležité pri príprave niektorých typov vzoriek ako masť alebo gél.

Hodnota pH je podmienená vlastnosťami chromatografovaného materiálu ale všeobecne sa pohybuje od 2 do 7. Výhodné je uskutočniť separáciu s prídavkom tlmivého roztoku k mobilnej fáze ako napríklad kyselina octová - diethylamín, kyselina propiónová - diethylamin, kyselina mravenčí - diethylamín, je možno použiť i iné amíny ako napr. trietylamín alebo amoniak a jeho soli. Je možné priamo použiť aj komerčne dostupné činidlá ako soli kyseliny octovej, fosforečnej alebo chloristej.

Pri použití hore uvedených mobilných fáz a chromatografických podmienok nedochádza k nežiaducej kvalitatívnej zmene píkov separovaných látok v priebehu chromatografického procesu (tvar píkov zostáva symetrický a reprodukovateľný) . Je zrejmé, že je možné vypočítať obsah stanovovaného karbetopendecínium bromidu pomocou kalibračných kriviek získaných s kalibračnými štandardmi.

Ako detektor možno použiť detekciu spektrofotometrom s diódovým polom ale i iný detektor.

Na obrázku 1 je chromatografický záznam vzorky gélu s obsahom karbetopendecínium bromidu. Vzorka gélu (cca 2,5 g/ 50 ml, faktor asymetrie pre pík karbetopendecínium bromidu je 1,36, rozlíšenie medzi píkom prislúchajúcim karbetopendecínium bromidu a zložkou placeba je 2,7)

Na obrázku 2 je chromatografický záznam substancie karbetopendecínium bromidu(cca 50 mg/ 50 ml, faktor asymetrie pre pík karbetopendecínium bromidu je 1,17)

Na obrázku 3 je chromatografický záznam vzorky očnej instilácie s obsahom karbetopendecínium bromidu (cca 5 ml/ 10 ml, faktor asymetrie pre pík karbetopendecínium bromidu je 1,21)

Na obrázku 4 je chromatografický záznam vzorky aerodisperzie s obsahom karbetopendecínium bromidu (cca 1 ml/ 50 ml, faktor asymetrie pre pík karbetopendecínium bromidu je 1,44)

Predkladaný vynález poskytuje spolahlivý spôsob stanovenia metódou kvapalinovej chromatografie. Vynález je ilustrovaný v nasledujúcich príkladoch uskutočnenia bez toho, aby sa na nich obmedzoval.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Stanovenie obsahu karbetopendecínium bromidu v gély

Navážilo sa 2,500 g vzorky liečiva vo forme gélu do 50 ml odmernej banky, pridalo sa 15 ml rozpúšťacieho roztoku (metanol + voda (1:10, v/v)) a 10 min. sa trepalo vo vodnom kúpeli pri 30°C. Pridalo sa ďalších 15 ml rozpúšťacieho roztoku (metanol + voda (1:10, v/v)) a opäť sa 10 min. trepalo vo vodnom kúpeli pri 30°C. Po temperácii a ustálení sa doplnil roztok v odmernej banke po značku rozpúšťacím roztokom. Pre analýzu sa použila kolóna C18 (250x4,6mm, 5pm), mobilná fáza :

KV

20% acetonitril, 80% roztok tetrabutylammonium dihydrogen fosfátu (c= lg/1), prietok : 1,0 ml/min., detekcia : UV 210 nm, dávkovaný objem : 20 μΐ, doba analýzy : 25 min., teplota 22°C. Chromatogram na obr. 1 ilustruje separáciu jednotlivých zložiek prípravku a karbetopendecínium bromidu. Stanovilo sa 2mg karbetopendecínium bromidu na lg gélu.

Príklad 2

Určenie zloženia vzorky karbetopendecínium bromidu

Navážilo sa 50 mg vzorky karbetopendecínium bromidu do 50 ml odmernej banky, rozpustilo sa v 15 ml rozpúšťacieho roztoku (metanol + voda (1:10, v/v)) a doplnilo v odmernej banke po značku rozpúšťacím roztokom. Pre analýzu sa použila kolóna C18 (250x4,Omm, 5pm), mobilná fáza : 20% acetonitril, 80% roztok tetrabutylammonium dihydrogen fosfátu (c= 0,9 g/1), prietok : 1,2 ml/min., detekcia : UV 210 nm, dávkovaný objem : 20 μΐ, doba analýzy : 15 min., teplota 25°C. (Chromatogram na obr. 2) Obsah karbetopendecínium bromidu 98.5%.

Príklad 3

Stanovenie obsahu karbetopendecínium bromidu v očnej instilácii ml vzorky očnej instilácie s obsahom karbetopendecínium bromidu sa odpipetovalo do 10 ml odmernej banky a doplnilo po značku destilovanou vodou. Pre analýzu sa použila kolóna C18 (150x4,6mm, 5pm), mobilná fáza : 15% acetonitril, 85% roztok tetrabutylammonium dihydrogen fosfátu (c= lg/1), prietok : 1,0 ml/min., detekcia : UV 210 nm, dávkovaný objem : 20 μΐ, doba analýzy : 25 min., teplota 22°C. (Chromatogram na obr.3)

Stanovilo sa 0.2mg karbetopendecínium bromidu na lml prípravku.

s*

Príklad 4

Stanovenie obsahu karbetopendecínium bromidu v aerodisperzii ml vzorky aerodisperzie s obsahom účinnej zložky karbetopendecínium bromid sa odpipetovalo do 50 ml odmernej banky a doplnilo po značku destilovanou vodou. Pre analýzu sa použila kolóna C8 (250x4,6mm, 5pm), mobilná fáza : 20% acetonitril, 80% roztok tetraoktylammonium bromid (c= lg/1), prietok : 0,8 ml/min., detekcia : UV 210 nm, dávkovaný objem : 50 μΐ,. doba analýzy : 25 min., teplota 22°C. (Chromatogram na obr. 4)

Príklad 5

Stanovenie obsahu karbetopendecínium bromidu v aerodisperzii

Postupom analogicky ako v príklade 4, s tým že sa použije kolóna NH2 typu. Stanovilo sa 8mg karbetopendecínium bromidu na lml prípravku.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Spôsob stanovenia obsahu karbetopendecinium bromidu všeobecného vzorce 1,

C₂H₅OCO-CH-N ⁺(CH₃)₃ Bf (ch₂)₁₃—ch_{3 (I/} vyznačujúci sa tým, že sa stanovenie vykoná metódou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie na reverznej fáze alkyl-, fenylalkyl-, kyanoalkyl- alebo aminoalkyl-silánového typu elúciou s vodou a s vodou miešatelnou organickou zložkou v prítomnosti tetralkylammoniových soli všeobecného vzorca II, nR₄N⁺X' (II, kde X je skupina OH, Cľ, HSO₄~, H₂PO₄ a R značí Cl až C8 alkyl
2. Spôsob podľa nároku 1 vyznačujúci sa tým, že sa použije kolóna so stacionárnou fázou typu alkylsilán C8 až C18.
3. Spôsob podľa nároku 1 a 2 vyznačujúci sa tým, že sa použije chromatografická kolóna s časticami priemeru 2.5 až 5 mikrometrov
4. Spôsob podľa nároku 1 až 3 vyznačujúci sa tým, že sa použije mobilná fáza s 5-30% organickej s vodou miešateľnej zložky a 95-70% vodnej zložky s výhodou kombinované s gradientovou elúciou.
5. Spôsob podľa nároku 1 a 4, vyznačujúci sa tým, že sa ako organická s vodou miešateľná zložka použije acetonitril,etanol alebo metanol.
6. Spôsob podľa nároku 1 až 3 vyznačujúci sa tým, že sa použije prietok mobilnej fázy 0.2 - 2.0 mL/min.
7. Spôsob podľa nároku 1 až 5, vyznačujúci sa tým, že na detekciu sa použije spektrofotometer v oblasti 190 až 230 nm s výhodou 210 nm.