SK51297A3 - Compositions and treatment for multiple sclerosis - Google Patents

Abstract

The present invention provides isolated peptides and combinations of peptides derived form myelin autoantigens such as MBP, MOG, PLP, and MAG suitable for treating multiple sclerosis, including prophylactic and therapeutic compositions and methods for preventing or treating multiple sclerosis. Preferred compositions of the invention comprise at least one isolated, purified peptide, free from all other polypeptides or contaminants, the peptide comprising an amino acid sequence, the myelin autoantigen which has T cell activity. A therapeutic composition of the invention is capable of down regulating the autoantigen specific immune response to the myelin autoantigen in a population of humans suffering from, or susceptible to multiple sclerosis, such that disease symptoms are reduced, eliminated, or reversed and/or the onset or progression of disease symptoms is prevented or slowed. Additionally, compositions and methods of the instant invention when administered in an advanced stage of disease, reverse ongoing paralysis or other signs of disease when administered during the acute phase of disease or prevents relapse when administered during remission.

Description

Prípravky na liečenie sklerózy multiplex a ich použitie na prípravu liečivCompositions for the treatment of multiple sclerosis and their use in the preparation of medicaments

Súvisiace prihláškyRelated Applications

Táto prihláška je čiastočne pokračovacou prihláškou (continuation-in-part) prihlášky č. USSN 08/328224, podanej 25.10.1994. Je taktiež čiastočne pokračovacou prihláškou prihlášky č. USSN 08/300811, podanej 1.9.1994, ktorá je čiastočne pokračovacou prihláškou prihlášky č. USSN 08/116824, podanej 3.9.1993. Táto prihláška je taktiež čiastočne pokračovacou prihláškou prihlášky č. USSN 08/241246, podanej 10.5.1994. Uvedené prihlášky sú tu ako celok zahrnuté formou odkazu.This application is partially a continuation-in-part application no. USSN 08/328224, filed October 25, 1994. It is also a partial continuation of application no. USSN 08/300811, filed Sep. 1, 1994, which is a partially continuing application of U.S. Ser. USSN 08/116824, filed 03/09/1993. This application is also a partial continuation of application no. USSN 08/241246, filed May 10, 1994. These applications are incorporated herein by reference in their entirety.

Oblasť technikyTechnical field

Predložený vynález sa týka peptidov a prípravkov na báze peptwlov odvodených od myelínových autoantigénov vhodných na liečenie sklerózy multiplex a ich použitia na prípravu liečiv na liečenie, prevenciu nástupu a tlmenie príznakov sklerózy multiplex.The present invention relates to peptides and peptide-based preparations derived from myelin autoantigens suitable for the treatment of multiple sclerosis and their use in the preparation of medicaments for the treatment, prevention of the onset and amelioration of symptoms of multiple sclerosis.

Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Autoimunitné choroby sú významným zdravotným problémom človeka a sú relatívne málo preskúmané. Pretože neexistuje žiadny zjavný priamo zodpovedný mikrób alebo vírus, musí byť prevencia, liečba a diagnostika týchto chorôb založená na ich etiológii. Tá vždy zahrnuje komplexný rad reakcií endogénnych metabolických medziproduktov, štruktúrnych komponentov, buniek atď.Autoimmune diseases are a major human health problem and are relatively little researched. Since there is no apparent directly responsible microbe or virus, the prevention, treatment and diagnosis of these diseases must be based on their etiology. This always involves a complex series of reactions of endogenous metabolic intermediates, structural components, cells, etc.

S charakterom autoimunitnej poruchy však vždy súvisí predstava, že pri vzniku iHowever, the nature of the autoimmune disorder is always related to the idea that i

sledu udalostí, ktoré vedú k príznakom, musí byť prítomný aspoň jeden autoantigén. Autoimunitné demyelinizujúce ochorenia, ako je skleróza multiplex (MS), nie sú výnimkou.at least one autoantigen must be present in the sequence of events leading to symptoms. Autoimmune demyelinating diseases such as multiple sclerosis (MS) are no exception.

lala

MS sa obvykle vyskytuje vo forme recidivujúcich záchvatov, odrážajúcich lézie v centrálnom nervovom systéme (CNS). Záchvaty sa vracajú, ustupujú a opäť vracajú po mnoho rokov zdanlivo náhodne. Frekvencia vzplanutia choroby je najväčšia počas prvých 3 až 4 rokov, ale po prvom záchvate, ktorý môže byť tak mierny, že unikne pozornosti lekára a ťažko sa naň možno rozpomenúť, nemusí ďalší nasledovať počas doby 10 až 20 rokov. Miera zotavenia po epizóde sa medzi pacientami výrazne líši. Remisia môže byť úplná, najmä po skorých záchva-MS usually occurs in the form of recurrent seizures reflecting lesions in the central nervous system (CNS). Seizures are returning, retreating and returning for many years seemingly accidentally. The frequency of outbreaks is greatest during the first 3 to 4 years, but after the first seizure, which may be so mild that it will escape the attention of the physician and difficult to remember, another may not follow for 10 to 20 years. The rate of recovery after an episode varies considerably between patients. Remission may be complete, especially after an early seizure

toch; často je však remisia neúplná a pretože nasleduje jeden záchvat za druhým, nasleduje stupňovitý postup smerom dole so zväčšujúcim sa trvalým deficitom. Klinický obraz MS je určovaný umiestnením ložisiek demyelinizácie v CNS. Klasické znaky zahrnujú zhoršené videnie, nystagmus, horšiu výslovnosť, znížené vnímanie vibrácií a polohový zmysel, ataxiu a chvenie končatiny pred dotykom, slabosť alebo paralýzu jednej alebo viac končatín, spasticitu a problémy s močovým mechúrom. Kritériá diagnózy klinicky určitej MS musia zahrnovať spoľahlivú históriu aspoň dvoch epizód neurologického deficitu a objektívne klinické známky lezie na viac ako jednom mieste CNS. Nie je známa účinná liečba MS. Súčasné terapeutické úsilie je zamerané na zlepšenie akútnych epizód a prevenciu relapsov alebo postupu choroby (Harrison’s Principles of Internal Medicíne, 12. vyd., zv. 2, str. 2038-2043, McGraw Hill, 1991).toch; often, however, remission is incomplete, and since one seizure after another follows, a gradual downward procedure with increasing persistent deficit follows. The clinical picture of MS is determined by the location of foci of demyelination in the CNS. Classical features include impaired vision, nystagmus, inferior pronunciation, decreased vibration perception and posture, ataxia and tremor of the limb before touch, weakness or paralysis of one or more limbs, spasticity and bladder problems. The criteria for diagnosing a clinically specific MS must include a reliable history of at least two episodes of neurological deficit, and objective clinical signs crawl at more than one CNS site. There is no known effective treatment for MS. Current therapeutic efforts are aimed at improving acute episodes and preventing relapses or disease progression (Harrison's Principles of Internal Medicine, 12th Ed., Vol. 2, pp. 2038-2043, McGraw Hill, 1991).

Obvykle používaným zvieracím modelom pre ľudskú sklerózu multiplex je experimentálna alergická encenfalomyelitída (EAE), demyelinizujúce ochorenie centrálneho nervového systému, ktoré môže byť vyvolané u náchylných kmeňov myší imunizáciou myelínovým bázickým proteínom (MBP), proteolipidovým proteínom (PLP), myelínovým oligodendrocytovým proteínom (MOG) alebo syntetickými peptidmi založenými na sekvenciách týchto proteínov spojených s myelínom. MBP je jedným z predpokladaných autoantigénov pri skleróze multiplex (MS) a bol epitopovo mapovaný ako v ľudskom (Ota a d’., Náture, 346:183-187 (1990)), tak aj v hlodavčom (Zamvil a d’., Náture, 324:258-260 (1986)) systéme. Peptidy, o ktorých sa usudzuje, že obsahujú aspoň jeden epitop T buniek MBP (myelínového bázického proteínu), boli identifikované vo WO 93/21222, EP 0 304 279, WO 91/15225, Ota a ď., Letters to Náture, 346:183187 (1990), Wucherpfennig a d’., J. Exp. Med., 170:279-290 (1994). Ďalšie peptidy obsahujúce epitop T buniek MBP sú identifikované v prihláškach, ktoré sú tu ako celok zahrnuté odkazom na USSN 08/328224, podanú 25.10.1994, a USSN 08/241246, podanú 10.5.1994. Peptidy MOG s aktivitou T buniek sú identifikované v USSN 08/30081 1, zahrnutej tu ako odkaz.The commonly used animal model for human multiple sclerosis is experimental allergic encenphalomyelitis (EAE), a demyelinating disease of the central nervous system that can be induced in susceptible strains of mice by immunization with myelin basic protein (MBP), proteolipid protein (PLP), myelin oligodend (MOG). or synthetic peptides based on the sequences of these proteins associated with myelin. MBP is one of the putative autoantigens in multiple sclerosis (MS) and has been epitope mapped both in human (Ota et al., Nature, 346: 183-187 (1990)) and in rodent (Zamvil et al., Nature). , 324: 258-260 (1986)). Peptides believed to contain at least one MBP (myelin basic protein) T cell epitope have been identified in WO 93/21222, EP 0 304 279, WO 91/15225, Ota et al., Letters to Nature, 346: 183187 (1990), Wucherpfenig et al., J. Exp. Med., 170: 279-290 (1994). Other peptides containing an MBP T cell epitope are identified in the applications, which are incorporated herein in their entirety by reference to USSN 08/328224, filed October 25, 1994, and USSN 08/241246, filed May 10, 1994. MOG peptides with T cell activity are identified in USSN 08/30081 1, incorporated herein by reference.

Proteolipidový proteín (PLP) a myelín-asociovaný glykoproteín (MAG) sa taktiež považujú za možné autoantigény pri skleróze multiplex. Štúdie opisujúce patogenézu autoimunitnej odpovede na PLP pri skleróze multiplex boli publikované v Trotter a d’., J. Neuroimmunol. 33:55-62 (1991); epitopy T buniek PLP boli opísané v Pelfrey a ď., J. Neuroimmunol. 46:33-42 (1993). Štúdie opisujúce MAG ako potenciálny autoantigén pri skleróze multiplex sú publikované v Johnson a d’., J. Neuroimmunol. 13:99-108 (1986).Proteolipid protein (PLP) and myelin-associated glycoprotein (MAG) are also considered to be possible autoantigens in multiple sclerosis. Studies describing the pathogenesis of autoimmune response to PLP in multiple sclerosis have been published in Trotter et al., J. Neuroimmunol. 33: 55-62 (1991); PL cell T cell epitopes have been described in Pelfrey et al., J. Neuroimmunol. 46: 33-42 (1993). Studies describing MAG as a potential autoantigen in multiple sclerosis are published in Johnson et al., J. Neuroimmunol. 13: 99-108 (1986).

Experimentálna autoimunitná encefalomyelitída (EAE) je autoimunitná choroba sprostredkovaná CD4+ T bunkami, ktorá sa niektorými svojimi klinickými a histologickými znakmi podobá skleróze multiplex a slúži ako experimentálny model pre túto a iné autoimunitné choroby. EAE je zápalové ochorenie centrálneho nervového systému, ktoré vedie k paralýze a iným neurologickým abnormalitám. Typicky je vyvolávané čistenými myelínovými proteínmi a peptidmi. Model EAE sa napriek tomu intenzívne používa na skúmanie mechanizmov autoimunity a výskum potenciálnych terapeutík pre autoimunitné choroby.Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a CD4 + T cell mediated autoimmune disease that resembles multiple sclerosis with some of its clinical and histological features and serves as an experimental model for this and other autoimmune diseases. EAE is an inflammatory disease of the central nervous system that leads to paralysis and other neurological abnormalities. It is typically induced by purified myelin proteins and peptides. Nevertheless, the EAE model is used extensively to investigate mechanisms of autoimmunity and to research potential therapeutics for autoimmune diseases.

Už v roku 1965 sa pozorovalo, že EAE je možné liečiť podávaním MBP v neencefalitogénnej forme, pravdepodobne vyvolaním imunologickej nereaktivity alebo tolerancie (Alvord, E.C. a ď., Ann. NY Acad. Sci., 1965, 122:333, Levine, S.E. a d’., Science, 1968, 161:1 155, Bernard, C.C.A., 1977 Clin. Exp. Immunol., 1977, 29:100). Tieto skoršie pozorovania boli v posledných niekoľkých rokoch doplnené mnohými výskumníkmi, ukazujúcimi, že podávanie MBP a peptidov MBP novorodencom alebo dospelým zamedzuje EAE (Bernard, C.C.A., 1977 Clin. Exp. Immunol., 1977, 29:100, Clayton, J.P. a d’., J. Exp. Med., 1989, 169:1681, Smilek, D.E. a d’., Proc. Naťl. Acad. Sci., 1991, 88:9633, Guar, A. a d’., Science 1992, 258:1491, Metzler, B. a d’., Int. Immunol. 1993, 5:1 159, Miller, A. a d’., J. Neuroimmunol. 1993, 46:73, Critchfield, J.M. a d’., Science, 1994, 263:1 139, Miller, A. a d’., Proc. Naťl. Acad. Sci. USA, 1992, 89:421). Tieto štúdie navrhujú rôzne cesty podávania, zahrnujúce subkutánnu, intraperitoneálnu, intranazálnu, intravenóznu a orálnu aplikáciu. Vyvolanie imunologickej nereaktivity u dospelých zvierat intravenóznou aplikáciou peptidov bolo demonštrované v rôznych systémoch antigénov. Z mnohých tu opisovaných dôvodov existujú obmedzenia klinickej použiteľnosti orálnej, enterálnej alebo aerosólovej aplikácie autoantigénov, ako je nemožnosť charakterizovať účinnú zložku terapeutického prípravku, akonáhle bola zavedená do žalúdka, v dôsledku následnej enzymatickej degradácie v žalúdku. S použitím týchto metód možno preto obťažne dosiahnuť predvídateľné a reprodukovateľné terapeutické účinky, nehovoriac o možnosti nepriaznivých vedľajších účinkov v dôsledku ďalšieho spracovania terapeutika organizmom, ktoré nemusí byť predvídateľné.As early as 1965, it was observed that EAE could be treated by administering MBP in a nonencephalitogenic form, presumably by inducing immunological non-reactivity or tolerance (Alvord, EC et al., Ann. NY Acad. Sci., 1965, 122: 333, Levine, SE and d '., Science, 1968, 161: 1155, Bernard, CCA, 1977 Clin. Exp. Immunol., 1977, 29: 100). These earlier observations have been supplemented in the past few years by many researchers showing that the administration of MBP and MBP peptides to neonates or adults inhibits EAE (Bernard, CCA, 1977 Clin. Exp. Immunol., 1977, 29: 100, Clayton, JP and d '). , J. Exp. Med., 1989, 169: 1681, Smilek, DE et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 1991, 88: 9633, Guar, A. et al., Science 1992, 258: 1491, Metzler, B. et al., Int. Immunol. 1993, 5: 1159, Miller, A. et al., J. Neuroimmunol., 1993, 46:73, Critchfield, JM et al. , Science, 1994, 263: 1139, Miller, A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89: 421). These studies suggest various routes of administration, including subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intravenous and oral administration. The induction of immunological non-reactivity in adult animals by intravenous administration of peptides has been demonstrated in various antigen systems. For many reasons described herein, there are limitations to the clinical utility of oral, enteral or aerosol administration of autoantigens, such as the inability to characterize the active ingredient of a therapeutic formulation once introduced into the stomach due to subsequent enzymatic degradation in the stomach. Using these methods, it is therefore difficult to achieve predictable and reproducible therapeutic effects, not to mention the possibility of adverse side effects due to further processing of the therapeutic by the organism, which may not be predictable.

Mechanizmus prevencie choroby alebo vyvolania tolerancie bol vo väčšine týchto prípadov-pripísaný klonálnej anergii (Gaur a ď., viď vyššie), periferálnej delécii (Critchfield a ď., viď vyššie) alebo iným formám antigénovo špecifickej tolerancie. Zdá sa však, že ďalším mechanizmom, ktorým môžu orálne podávané MBP a MBP peptidy inhibovať EAE, je supresia, sprostredkovaná TGF-β (Miller a ď., viď vyššie v Proc. Naťl Acad. Sci.). MBP peptidy, rovnako ako substituované analógy MBP peptidov, boli skúmané ako alternatívne terapeutiká pre EAE u myší PLJ, B10.PL a (PLJ x SJL) Fl. Imunodominantným encefalitogénnym peptidom pre každý z týchto kmeňov je MBP Acl-11, ktorý je rozpoznávaný vo väzbe na Aa^uAp^u (Wraith, D.C. a ď., viď vyššie). MBP Acl-11 bol intenzívne študovaný substitučnou analýzou a boli stanovené jeho požiadavky na rozpoznávanie T buniek a na väzbu k hlavnému komplexu histokompatibility (major histocompatibility complex, MHC). Postranné reťazce zvyškov 3 a 6 prispievajú hlavne k rozpoznávaniu T buniek a postranné reťazce zvyškov 4 a 5 prevažne k väzbe na MHC. Väzba MBP Acl-11 na Αα“Αβ^υ môže byť dramaticky zlepšená rôznymi substitúciami aminokyselín na zvyšku 4, zahrnujúcimi alanín (Acl11 [4A]) a tyrozín (Acl-11[4Y]) (Wraith, D.C. a ď., viď vyššie, Fairchild, P.J. a ď., Int. Immunol., 1993, 5:1 151). Zdá sa, že substitúcie zvyšku 4, najmä tyrozínom, zlepšujú stabilitu komplexov peptid-MHC vzniknutých s týmito peptidmi. Acl-11[4A]) a Acl-11[4Y] si uchovávajú kontaktné zvyšky pre receptory T buniek (TCR), nutné pre antigenicitu, a sú účinnejšie ako MBP Acl-11 pri stimulácii MBP-špecifických T buniek in vitro. Acl-11[4Y] je encefalitogénny tiež in vivo (Acl-11[4A] je z neznámych dôvodov málo encefalitogénny). Ukázalo sa, že ako Acl-11[4A], tak Acl-11[4Y] zabraňujú EAE, a má sa za to, že pôsobia antigénovo špecifickými mechanizmami (Smilek a ď., viď vyššie, Wraith, D.C. a ď., viď vyššie).The mechanism of disease prevention or induction of tolerance in most of these cases has been attributed to clonal anergy (Gaur et al., Supra), peripheral deletion (Critchfield et al., Supra), or other forms of antigen-specific tolerance. However, another mechanism by which orally administered MBP and MBP peptides can inhibit EAE appears to be TGF-β-mediated suppression (Miller et al., Supra, Proc. Natl Acad. Sci.). MBP peptides, as well as substituted analogues of MBP peptides, have been studied as alternative therapeutics for EAE in PLJ, B10.PL and (PLJ x SJL) F1 mice. Immunodominant encephalitogenic peptide for each of the strains is of MBP Acl-11, which is recognized for binding to A? A a ^{in the} (Wraith, DC et al., Supra). MBP Acl-11 has been extensively studied by substitution analysis and its requirements for T cell recognition and binding to the major histocompatibility complex (MHC) have been determined. The side chains of residues 3 and 6 mainly contribute to T cell recognition, and the side chains of residues 4 and 5 predominantly contribute to binding to MHC. The binding of MBP to Acl11 Αα ^"Αβ υ can be dramatically improved by various amino acid substitutions at residue 4, comprising at alanine (Acl11 [4A]) and tyrosine (Acl11 [4Y]) (Wraith, DC et al., Supra, Fairchild, PJ et al., Int. Immunol., 1993, 5: 1151). Substitution of residue 4, especially tyrosine, appears to improve the stability of peptide-MHC complexes formed with these peptides. Acl-11 [4A]) and Acl-11 [4Y] retain the T cell receptor (TCR) contact residues necessary for antigenicity and are more effective than MB1 of Acl-11 in stimulating MBP-specific T cells in vitro. Acl-11 [4Y] is also encephalitogenic in vivo (Acl-11 [4A] is little encephalitogenic for unknown reasons). Both Acl-11 [4A] and Acl-11 [4Y] have been shown to prevent EAE, and are thought to act by antigen-specific mechanisms (Smilek et al., Supra, Wraith, DC et al., Supra). higher).

V predchádzajúcich štúdiách bránili MBP peptidy alebo peptidové analógy, podávané v nekompletnom adjuvans tesne pred nástupom choroby, následnému vývoju EAE (Smilek a ď., viď vyššie, Gaur a ď., viď vyššie). Vo zvláštnej štúdii s použitím lymfocytov z MBP-špecifickej TCR transgénnej myši bolo zabránené adoptívne prenášanej EAE včasným a agresívnym podaním intravenózneho MBP pred nástupom klinických príznakov (Critchfield a ď., viď vyššie). Tieto štúdie naznačili, že by bolo možné zabraňovať EAE injekčnou aplikáciou MBP peptidov potom, čo boli aktivované encefalitogénne T bunky, ale nedotýkali sa otázky, či by s použitím tohto prístupu bolo možné zvrátiť postupujúcu paralýzu (a pravdepodobne aktívny zápal centrálneho nervového systému) alebo zabrániť relapsom po remisii. Okrem toho v niektorých ďalších skorších experimentoch boli na účinnú liečbu nutné extrémne vysoké dávky MBP alebo MBP peptidu. Pôvodcovia tohto vynálezu ako prví vo svojej skoršej prihláške USSN 08/328224, podanej 25.10.1994, v ktorej týmto pokračujú, opísali zvrat paralýzy a zabránenie relapsom po remisii. Od podania predchádzajúcej prihlášky pôvodcov tohto vynálezu zistili tiež mnohí ďalší pracovníci v odbore, že injekčným podaním určitých peptidových analógov odvodených od MBP je prekvapujúco možné zvrátiť postupujúcu paralýzu u EAE (Karin a ď., J. Exp. Med., 180:22272237 (december 1994).In previous studies, MBP peptides or peptide analogs administered in incomplete adjuvant just prior to disease onset prevented the development of EAE (Smilek et al., Supra, Gaur et al., Supra). In a separate study using lymphocytes from an MBP-specific TCR transgenic mouse, adoptively transmitted EAE was prevented by the early and aggressive administration of intravenous MBP before the onset of clinical symptoms (Critchfield et al., Supra). These studies indicated that it would be possible to prevent EAE by injecting MBP peptides after encephalitogenic T cells were activated, but did not address the question of whether this approach could reverse progressive paralysis (and possibly active central nervous system inflammation) or prevent relapse after remission. In addition, in some other earlier experiments, extremely high doses of MBP or MBP peptide were required for effective treatment. The inventors of the present invention were the first in their earlier application USSN 08/328224, filed October 25, 1994, in which they continue to describe the reversal of paralysis and the prevention of relapses after remission. Since the present application, many other artisans have also found that injection of certain MBP-derived peptide analogs is surprisingly able to reverse progressive paralysis in EAE (Karin et al., J. Exp. Med., 180: 22272237 (December). 1994).

Vynález odstraňuje vyššie uvedené nevýhody a poskytuje nové peptidy, prípravky a ich použitie na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex s použitím preparátov obsahujúcich aspoň jeden peptid so sekvenciou aminokyselinových zvyškov, ktorá zahrnuje aktivitu T buniek MBP. Ďalej sa vynález zaoberá doposiaľ nevyriešeným problémom, že ak má byť všeobecne použiteľná, musí byť liečba sklerózy multiplex s použitím peptidov alebo peptidových analógov účinná aj vtedy, keď je aplikovaná neskôr počas choroby alebo v jej pokročilom štádiu, buď počas remisii alebo počas relapsov za postupu nežiadúcej imunitnej odpovede.The invention overcomes the above disadvantages and provides novel peptides, compositions and their use for the preparation of a medicament for the treatment of Multiple Sclerosis using preparations comprising at least one peptide with an amino acid residue sequence that includes MBP T cell activity. Furthermore, the invention addresses the hitherto unsolved problem that if it is to be universally applicable, the treatment of multiple sclerosis using peptides or peptide analogs must be effective even when applied later during the disease or at an advanced stage, either during remission or during relapse adverse immune response.

Účelom vynálezu teda je nájsť peptidy a kombinácie peptidov, vhodné ako terapeutiká pre sklerózu multiplex účinné aj pri prevencii nástupu choroby. Ďalej je účelom vynálezu identifikovať profylaktický a terapeuticky účinné režimy dá6 vok a spôsoby aplikácie identifikovaných proteínov, peptidov a peptidových analógov na účinnú liečbu MS. Ďalej je účelom vynálezu identifikovať úspešnú liečbu pre neskoré štádium MS, na zabránenie relapsom, zastavenie choroby a/alebo zvrat postupu MS.It is therefore an object of the invention to find peptides and peptide combinations useful as therapeutics for multiple sclerosis, also effective in preventing the onset of the disease. It is a further object of the invention to identify prophylactic and therapeutically effective dosing regimens and methods of administering the identified proteins, peptides, and peptide analogs for effective treatment of MS. It is further an object of the invention to identify successful treatment for late stage MS, to prevent relapses, stop disease and / or reverse the progression of MS.

Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Predmetom vynálezu sú izolované peptidy a kombinácie peptidov, odvodených od myelínových autoantigénov, ako je MBP, MOG, PLP a MAG, vhodné na liečbu sklerózy multiplex, včítane profylaktických a terapeutických prípravkov a ich použitie na prípravu liečiva na liečbu sklerózy multiplex. Výhodné prípravky podľa vynálezu zahrnujú aspoň jeden izolovaný čistený peptid, v podstate zbavený všetkých iných polypeptidov a nečistôt, zahrnujúci aminokyselinovú sekvenciu myelínového autoantigénu, ktorá má aktivitu T buniek. Terapeutický prípravok podľa vynálezu je schopný tlmiť autoantigénovo špecifickú imunitnú odpoveď na myelínový autoantigén v populácii ľudí trpiacich sklerózou multiplex alebo náchylných k nej tak, že príznaky choroby sú potlačené, odstránené alebo zvrátené a/alebo je zamedzený alebo spomalený nástup alebo postup príznakov choroby. Prípravky a ich použitie podľa vynálezu, ak sú aplikované v pokročilom štádiu choroby, zvrátia postupujúcu paralýzu alebo iné znaky choroby, ak sú aplikované počas akútnej fázy, alebo bránia relapsu, ak sú aplikované počas re» misie.The present invention provides isolated peptides and combinations of peptides derived from myelin autoantigens, such as MBP, MOG, PLP and MAG, useful in the treatment of multiple sclerosis, including prophylactic and therapeutic agents, and their use in the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis. Preferred compositions of the invention include at least one isolated purified peptide substantially free of all other polypeptides and impurities, comprising the myelin autoantigen amino acid sequence having T cell activity. The therapeutic composition of the invention is capable of inhibiting an autoantigen-specific immune response to myelin autoantigen in a population of people suffering from or susceptible to multiple sclerosis, such that the disease symptoms are suppressed, eliminated or reversed and / or the onset or progression of disease symptoms is prevented. The formulations and their use according to the invention, when applied at an advanced stage of the disease, reverse the progressing paralysis or other signs of the disease when applied during the acute phase, or prevent relapse when applied during the review.

Znalosti, dostupné odborníkovi v odbore, tvorí tu uvádzaná patentová a odborná literatúra. Tu citované udelené patenty US, publikované prihlášky PCT a ďalšie publikácie sú tu zahrnuté ako odkaz.The knowledge available to a person skilled in the art consists of the patent and technical literature cited herein. US patent applications cited herein, PCT published applications and other publications are incorporated herein by reference.

Predmetom vynálezu sú izolované peptidy a ich kombinácie odvodené od myelínových autoantigénov, použiteľné na liečenie sklerózy multiplex, a taktiež terapeutické prípravky a ich použitie na prípravu liečiva na liečbu sklerózy multiplex. Tu používaný výraz „liečenie sklerózy multiplex“ alebo „liečba sklerózy multiplex“ zahrnuje profylaktické ošetrenie cicavcov náchylných k MS, liečbu pri počiatočnom nástupe MS a liečbu všetkých „pokročilých štádií“ MS včítane relapsujúcej-remitujúcej MS, chronickej progresívnej MS, primárnej progresívnejThe present invention provides isolated peptides and combinations thereof derived from myelin autoantigens useful for the treatment of multiple sclerosis, as well as therapeutic compositions and their use for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis. As used herein, the term "treating multiple sclerosis" or "treating multiple sclerosis" includes the prophylactic treatment of MS susceptible mammals, the treatment of early onset MS, and the treatment of all "advanced stages" of MS including relapsing-remitting MS, chronic progressive MS, primary progressive MS.

MS a be6aMS and be6a

nignej MS. Terapeutické prípravky podľa vynálezu zahrnujú aspoň jeden čistený peptid, v podstate zbavený všetkých ostatných proteínov alebo nečistôt a zahrnujúci definovanú sekvenciu aminokyselinových zvyškov myelínového antigénu majúceho stimulačnú aktivitu T buniek, ktorým peptidom môže taktiež byť izolovaný peptid. Tu používaný výraz „izolovaný“ sa vzťahuje na peptid, ktorý je zbavený všetkých ostatných polypeptidov, nečistôt, východiskových látok alebo ďalších látok a ktorý nieje konjugovaný so žiadnou ďalšou molekulou.nignej MS. The therapeutic compositions of the invention include at least one purified peptide substantially free of any other proteins or impurities and comprising a defined sequence of amino acid residues of a myelin antigen having T cell stimulatory activity, which peptide may also be an isolated peptide. As used herein, the term "isolated" refers to a peptide that is free of all other polypeptides, impurities, starting materials, or other substances and that is not conjugated to any other molecule.

Výraz „peptid“ sa podľa vynálezu vzťahuje na definovanú sekvenciu aminokyselinových zvyškov, ktorých je menej ako aminokyselín natívneho bielkovinového antigénu. Dĺžka peptidu podľa vynálezu prednostne činí aspoň približne sedem, výhodne aspoň asi 12 až 40 a najmä aspoň 13 až 30 aminokyselinových zvyškov, pričom tento peptid, keď je odvodený od bielkovinového antigénu, obsahuje menej aminokyselín ako celý bielkovinový antigén, výhodne nie viac ako 75 % aminokyselinových zvyškov celého bielkovinového antigénu. Peptidy používané podľa vynálezu majú aktivitu T buniek. Peptid majúci „aktivitu T buniek“ môže mať jednu alebo niekoľko týchto charakteristík: a) schopnosť vyvolať odpoveď T buniek, napríklad stimuláciu (tj. proliferáciu alebo sekréciu lymfokínu),The term "peptide" according to the invention refers to a defined sequence of amino acid residues that are less than the amino acids of the native protein antigen. Preferably, the length of the peptide of the invention is at least about seven, preferably at least about 12 to 40, and in particular at least 13 to 30 amino acid residues, wherein the peptide when derived from a protein antigen contains less amino acids than the whole protein antigen, preferably no more than 75% amino acid residues of the whole protein antigen. The peptides used according to the invention have T cell activity. A peptide having "T cell activity" may have one or more of the following characteristics: a) ability to elicit a T cell response, such as stimulation (ie, proliferation or secretion of lymphokine);

b) schopnosť vyvolať nereaktivitu alebo zníženú reaktivitu T buniek príslušných subpopulácií T buniek, takže sa tieto bunky nezúčastnia stimulácie imunitnej odpovede na útočiaci autoantigén (napríklad prostredníctvom anergie, tolerancie alebo apoptózy), c) schopnosť modifikovať profil sekrécie lymfokínu v porovnaní s vystavením prirodzene sa vyskytujúcemu autoantigénu, d) schopnosť vyvolať indukciu T supresorových buniek a e) je schopný vyvolať tlmenie príznakov autoimunitnej choroby akýmkoľvek mechanizmom alebo f) je odvodený od nezúčastneného antigénu a má schopnosť zistiť supresorové T bunky v mieste myelínového autoimunitného ataku, čo potom vedie k utlmeniu imunitných odpovedí v mieste myelínového autoimunitného ataku.b) ability to induce T cell non-reactivity or decreased reactivity of the respective T cell subpopulations, so that these cells do not participate in stimulating the immune response to the attacking autoantigen (for example through anergy, tolerance or apoptosis), c) ability to modify lymphokine secretion profile compared to naturally occurring exposure d) the ability to induce T suppressor cell induction; and e) it is capable of inducing the suppression of autoimmune disease symptoms by any mechanism; or f) it is derived from a non-participating antigen and has the ability to detect suppressor T cells at myelin autoimmune attack, resulting in immune suppression site of myelin autoimmune attack.

Peptidy zahrnujúce aspoň jeden epitop T buniek majú aktivitu T buniek a sú schopné vyvolať odpoveď T buniek, ako je stimulácia T buniek (tj. proliferácia T buniek alebo sekrécia lymfokínu) a/alebo sú schopné tlmiť autoantigénovo špecifickú odpoveď T buniek, čo môže viesť k autoantigénovo špecifickej nere8 aktivite T buniek alebo ku zníženej hladine autoantigénovo špecifickej reaktivity T buniek. Epitop T buniek je základný prvok alebo najmenšia jednotka rozpoznania receptorom T buniek, kde epitop zahrnuje aminokyseliny nevyhnutné na rozpoznanie receptora. Má sa za to, že epitopy T buniek sa zúčastňujú zahájenia a trvania imunitnej odpovede na antigén alebo autoantigén. Usudzuje sa, že tieto epitopy T buniek spúšťajú včasné prípady imunitnej odpovede na úrovni T pomocnej bunky väzbou na príslušnú molekulu HLA na povrchu bunky vykazujúcej antigén a stimuláciou relevantnej subpopulácie T buniek. Tieto prípady vedú k proliferácii T buniek, sekrécii lymfokínu, miestnym zápalovým reakciám, príchodu ďalších imunitných buniek na miesto a k aktivácii kaskády B buniek vedúcej k produkcii protilátok. V prípade autoimunitnej choroby sú produkovanými protilátkami protilátky proti autoantigénu, ako je MBP, čo vedie ku klinickým príznakom autoimunitnej choroby.Peptides comprising at least one T cell epitope have T cell activity and are capable of eliciting a T cell response, such as T cell stimulation (ie, T cell proliferation or lymphokine secretion) and / or capable of attenuating an autoantigen-specific T cell response, which may lead to autoantigen-specific T cell activity or decreased levels of autoantigen-specific T cell reactivity. The T cell epitope is an essential element or smallest unit of T cell receptor recognition, wherein the epitope comprises amino acids necessary for receptor recognition. T cell epitopes are believed to be involved in the initiation and duration of an immune response to an antigen or an autoantigen. These T cell epitopes are believed to trigger timely T-cell immune response events by binding to the respective HLA molecule on the surface of the antigen-presenting cell and stimulating the relevant T cell subpopulation. These cases lead to T cell proliferation, lymphokine secretion, local inflammatory reactions, the arrival of additional immune cells at the site, and activation of the B cell cascade leading to antibody production. In the case of an autoimmune disease, the antibodies produced are antibodies to an autoantigen such as MBP, resulting in clinical signs of autoimmune disease.

Peptidy s definovaným zložením aminokyselín, zahrnujúce epitopy T buniek, môžu byť identifikované pre ktorýkoľvek myelínový autoantigén včítane MBP. Jeden spôsob zahrnuje rozdelenie bielkovinového antigénu na neprekrývajúce alebo prekrývajúce sa peptidy s požadovanou dĺžkou a syntézu, Čistenie a testovanie týchto peptidov za účelom zistenia, či zahrnujú aspoň jeden epitop T buniek, rôznymi testami (napríklad testami proliferácie T buniek, testami sekrécie lymfokínu a štúdie nereaktivity T buniek). Pri inej metóde sa pomocou algoritmu odhadujú tie peptidy, ktoré pravdepodobne zahrnujú epitopy T buniek, a potom sa peptidy, odhadnuté pomocou algoritmu, syntetizujú, čistia a testujú v testoch T buniek alebo v štúdiách in vivo za účelom zistenia, Či tieto odhadnuté peptidy vyvolávajú proliferáciu T buniek alebo sekréciu lymfokínu alebo nereaktivitu T buniek, a budú teda pravdepodobne obsahovať epitopy T buniek. Ako je diskutované v mnohých vyššie citovaných dokumentoch, môže byť aktivita ľudských T buniek testovaná kultiváciou T buniek, získaných od jedinca, citlivého na autoantigén, ako je MBP, s peptidom odvodeným od tohto antigénu a stanovením, či ako reakcia na peptid prebieha proliferácia T buniek, meraná napríklad príjmom tritiovaného tymidínu bunkami. Stimulačné indexy pre odpoveď T buniek na peptidy je možné vypočítať ako maximálny počet za minútu (CPM) v reakcii na peptid, delený kontrolným CPM. Stimulačný index (S.I.) T buniek rovný alebo väčší ako dvojnásobok, prednostne trojnásobok úrovne pozadia sa považuje za „pozitívny“. Pozitívne výsledky sú použité v analýze potenciálnej terapeutickej účinnosti peptidov, diskutovanej ďalej a v príklade 1. Výhodné peptidy, používané podľa vynálezu, zahrnujú aspoň jeden epitop T buniek a prednostne aspoň dva alebo viac epitopov T buniek.Peptides with a defined amino acid composition, including T cell epitopes, can be identified for any myelin autoantigen, including MBP. One method involves dividing the protein antigen into non-overlapping or overlapping peptides of desired length and synthesizing, purifying and testing these peptides to determine if they include at least one T cell epitope, by various assays (e.g., T cell proliferation assays, lymphokine secretion assays and non-reactivity studies). T cells). In another method, the algorithm estimates those peptides likely to include T cell epitopes, and then the algorithm-estimated peptides are synthesized, purified, and tested in T cell assays or in vivo studies to determine whether these estimated peptides induce proliferation T cell or lymphokine secretion or T cell unreactivity, and thus are likely to contain T cell epitopes. As discussed in many of the documents cited above, human T cell activity can be assayed by culturing T cells obtained from an individual susceptible to an autoantigen such as MBP with a peptide derived from that antigen and determining whether T cell proliferation is responsive to the peptide. as measured, for example, by uptake of tritiated thymidine by cells. Stimulation indices for T cell responses to peptides can be calculated as the maximum number per minute (CPM) in response to the peptide divided by the control CPM. The T cell stimulation index (S.I.) equal to or greater than twice, preferably three times the background level is considered to be "positive". Positive results are used in the analysis of the potential therapeutic efficacy of the peptides discussed below and in Example 1. Preferred peptides used according to the invention include at least one epitope of T cells and preferably at least two or more epitopes of T cells.

Jeden z algoritmov pre nachádzanie peptidov so stimulačnou aktivitou T buniek je opísaný v Rothbard, l^st Fórum in Virology, Annals of the Pasteur Inštitúte, str. 518-526 (december 1986), Rothbard a Taylor, Embo, 7:93-100 (1988), a EP 0 304 279. Tieto dokumenty opisujú definovanie všeobecnej schémy (algoritmu) pre väzbu peptidu na MHC triedy II, jej štatistický význam a koreláciu schémy so známymi epitopmi T buniek, rovnako ako jej úspešné použitie pri nachádzaní skôr neidentifikovaných epitopov T buniek rôznych bielkovinových antigénov a autoantigénov. Zdá sa, že všeobecná schéma pre peptid, o ktorom je známe, že sa viaže na MHC triedy II, ako je uvedené vo vyššie zmienených dokumentoch, obsahuje lineárnu Štruktúru, tvorenú aminokyselinou s nábojom alebo glycínom, za ktorým nasledujú dva hydrofóbne zvyšky. Po určení, či peptid zodpovedá všeobecnej schéme, môže byť testovaný na reaktivitu T buniek. Medzi ďalšie algoritmy, ktoré boli použité k nachádzaniu epitopov T buniek v skôr nedefinovaných bielkovinách, patrí algoritmus opísaný v práci Margalit a ď., J. Immunol. 138:2213-2229 (1987), ktorý je založený na modeli amfipatickej špirály.One of the algorithms for finding peptides with T cell stimulatory activity is described in Rothbard, ^Ist Forum in Virology, Annals of the Pasteur Institute, p. 518-526 (December 1986), Rothbard and Taylor, Embo, 7: 93-100 (1988), and EP 0 304 279. These documents describe the definition of a general scheme (algorithm) for peptide binding to MHC class II, its statistical significance, and correlating the scheme with known T cell epitopes as well as its successful use in finding previously unidentified T cell epitopes of various protein antigens and autoantigens. The general scheme for a peptide known to bind to MHC class II, as set forth in the above-mentioned documents, appears to contain a linear structure consisting of a charged or glycine charged amino acid, followed by two hydrophobic residues. After determining whether the peptide conforms to the general scheme, it can be tested for T cell reactivity. Other algorithms that have been used to find T cell epitopes in previously undefined proteins include the algorithm described by Margalit et al., J. Immunol. 138: 2213-2229 (1987), which is based on an amphipathic spiral model.

Ďalej môžu byť stanovené peptidy zahrnujúce „kryptické epitopy T buniek“, ktoré sú taktiež použiteľné v spôsoboch a prípravkoch podľa vynálezu. Kryptické epitopy T buniek sú tie determinanty v bielkovinovom antigéne, ktoré v dôsledku spracovania a dodania natívneho bielkovinového antigénu do príslušnej molekuly MHC nie sú normálne odhalené imunitným systémom. Peptid zahrnujúci kryptický epitop T buniek je však schopný vyvolať nereaktivitu T buniek a keď je subjekt týmto peptidom primárne imunizovaný, T bunky získané zo subjektu proliferujú in vitro v reakcii na peptid alebo bielkovinový antigén, od ktorého je peptid odvodený. Peptidy, ktoré zahrnujú aspoň jeden kryptický epitop T buniek odvodený od bielkovinového antigénu, sa tu označujú ako „kryptické peptidy“. Na potvrdenie prítomnosti kryptických epitopov T buniek musí byť použitý test proliferácie T buniek, ako je v odbore známy, pri ktorom sa T bunky, senzibilizované antigénom, kultivujú in vitro v prítomnosti každého peptidu zvlášť na identifikáciu bunkových línií T buniek, reaktívnych s peptidom. Peptid sa pokladá za obsahujúci aspoň jeden kryptický epitop T buniek, keď je možné s daným peptidom identifikovať bunkovú líniu T buniek a T bunky sú pri expozícii peptidu a bielkovinovému antigénu, od ktorého je peptid odvodený, schopné proliferácie.Furthermore, peptides including "cryptic T cell epitopes" that are also useful in the methods and compositions of the invention can be determined. Cryptic T cell epitopes are those determinants in the protein antigen that are not normally detected by the immune system due to the processing and delivery of the native protein antigen to the respective MHC molecule. However, a peptide comprising a cryptic T cell epitope is capable of inducing T cell unreactivity, and when a subject is primarily immunized with the peptide, T cells derived from the subject proliferate in vitro in response to the peptide or protein antigen from which the peptide is derived. Peptides that comprise at least one cryptic epitope of T cells derived from a protein antigen are referred to herein as "cryptic peptides". To confirm the presence of cryptic T cell epitopes, a T cell proliferation assay, as known in the art, in which antigen sensitized T cells are cultured in vitro in the presence of each peptide separately to identify peptide-reactive T cell cell lines must be used. A peptide is considered to contain at least one cryptic T cell epitope when the T cell cell line can be identified with the peptide and the T cells are capable of proliferation upon exposure to the peptide and protein antigen from which the peptide is derived.

Naviac nie je nutné, aby peptid, používaný spôsobom podľa vynálezu, bol odvodený od sekvencie aminokyselín myelínového autoantigénu, ako je MBP. Spôsobom podľa vynálezu môže byť použitý ktorýkoľvek peptid, obsahujúci definovanú sekvenciu aminokyselinových zvyškov, ktorý je schopný tlmiť antigénovo špecifickú imunitnú odpoveď na myelínový autoantigén. Napríklad môžu byť syntetizované peptidy, zahrnujúce definovanú sekvenciu aminokyselín nezaloženú na sekvencii aminokyselín myelínového antigénu, ktoré sú napriek tomu schopné tlmiť antigénovo špecifickú imunitnú odpoveď, napríklad peptid simuluje epitop T buniek myelínového autoantigénu a spôsobuje tlmenie imunitnej odpovede na myelínový autoantigén, alebo spôsobuje tlmenie imunitnej odpovede z iných dôvodov, napríklad pretože je odvodený od nezúčastneného antigénu. Bez viazania sa na určitú teóriu sa má za to, že nezúčastnené antigény, ktoré sú taktiež tkanivovo špecifické (ale nie sú cieľom imunitného alebo autoimunitného ataku) môžu mať schopnosť iniciovať supresorové T bunky v mieste imunitného ataku, čo môže viesť ku tlmeniu imunitných odpovedí v mieste imunitného ataku (napríklad zasiahnutého „vlastného“ tkaniva v prípade autoimunitného ochorenia alebo nosnej sliznice, kože a pľúc v prípade alergie). Nezúčastnené antigény zahrnujú, bez toho, aby sa na ne obmedzovali, časti antigénu alebo autoantigénu, ktoré samé nie sú cieľom imunitného ataku a ktoré majú supresorovú aktivitu v mieste imunitného ataku. Tu používaný výraz „myelínový antigén“ alebo „myelínový autoantigén“ zahrnuje nezúčastnené antigény, ktoré môžu mať supresorovú aktivitu v mieste myelínového autoimunitného ataku.In addition, it is not necessary that the peptide used by the method of the invention be derived from the amino acid sequence of a myelin autoantigen such as MBP. Any peptide containing a defined sequence of amino acid residues that is capable of attenuating the antigen-specific immune response to myelin autoantigen can be used in the method of the invention. For example, peptides may be synthesized, including a defined amino acid sequence not based on the amino acid sequence of a myelin antigen, which are nevertheless capable of attenuating an antigen-specific immune response, for example the peptide simulates a T cell epitope of myelin autoantigen and causes silencing of the immune response to for other reasons, for example because it is derived from a non-participating antigen. Without wishing to be bound by theory, it is believed that non-participating antigens that are also tissue specific (but not the target of immune or autoimmune attack) may have the ability to initiate suppressor T cells at the immune attack site, which may result in suppression of immune responses in the site of an immune attack (for example, the affected "own" tissue in case of autoimmune disease or nasal mucosa, skin and lungs in case of allergy). Non-participating antigens include, but are not limited to, portions of the antigen or autoantigen that are not themselves an immune attack target and that have suppressor activity at the immune attack site. As used herein, the term "myelin antigen" or "myelin autoantigen" includes non-participating antigens that may have suppressor activity at the site of myelin autoimmune attack.

Ďalej môže byť podľa vynálezu použitá ktorákoľvek zlúčenina, ktorá simuluje peptid schopný tlmiť antigénovo špecifickú imunitnú odpoveď na myelínový autoantigén (napríklad peptidomimetikum). Takáto zlúčenina nemusí byť tvorená celkom podjednotkami spojenými peptidickými väzbami, ale môže byť spojená aj inými väzbami (napríklad tioesterovými väzbami, redukovanými analógmi väzieb, izosterázami amidických väzieb), pokiaľ nepeptidická zlúčenina simuluje peptid schopný tlmiť antigénovo špecifickú imunitnú odpoveď na príslušný antigén, ako ukazuje účinné terapeutické/profylaktické ošetrenie príznakov. Peptidomimetiká môžu byť založené na ktoromkoľvek peptide podľa vynálezu, ale môžu zahrnovať napríklad analógy peptidickej väzby (napríklad Nmetylamidické väzby (NH-C_a2[-CO-NCH3-]C_ai) a redukované analógy väzby (NH-C_a2[-CH₂-NH-]C_ai)) namiesto jednej alebo niekoľkých normálnych peptidických väzieb.Further, any compound that simulates a peptide capable of inhibiting an antigen-specific immune response to a myelin autoantigen (e.g., a peptidomimetic) can be used according to the invention. Such a compound need not be totally subunits linked by peptide bonds, but may also be linked by other bonds (e.g., thioester bonds, reduced bond analogs, amide bond isosterases) as long as the non-peptide compound simulates a peptide capable of attenuating an antigen specific immune response to the antigen, therapeutic / prophylactic treatment of symptoms. Peptidomimetics may be based on any peptide of the invention, but may include, for example, peptide bond analogs (e.g., N-methylamidic bonds (NH-C _and 2 [-CO-NCH 3 -] C _and i) and reduced bond analogs (NH-C _{and 2} [-CH ₂ -NH- (C) _and (i)) instead of one or more normal peptide bonds.

Len čo boli identifikované peptidy obsahujúce epitop T buniek, je taktiež možné modifikovať štruktúru týchto peptidov na použitie podľa vynálezu na také účely, ako je zvýšenie rozpustnosti (žiadúce najmä, ak má byť prípravok aplikovaný injekčné), zvýšenie terapeutickej alebo preventívnej účinnosti (viď ďalej diskusiu peptidových analógov so zvýšenou väzbou MHC) alebo stability (napríklad životnosť ex vivo a odolnosť voči proteolytickej degradácii in vivo) alebo na uľahčenie syntézy peptidov. Môže byť získaný modifikovaný peptid alebo peptidový analóg, v ktorom bola sekvencia aminokyselín zmenená v porovnaní so sekvenciou natívnej bielkoviny, od ktorej je odvodený, alebo v porovnaní s nemodifikovaným peptidom, od ktorého sa odvodzuje modifikovaný peptid, napríklad substitúciou, deléciou alebo adíciou aminokyselín, za účelom modifikácie imunogenicity, zlepšenia rozpustnosti peptidu alebo zvýšenie ľahkosti syntézy peptidu (napríklad automatizovaná syntéza peptidov).Once peptides containing a T cell epitope have been identified, it is also possible to modify the structure of these peptides for use according to the invention for purposes such as enhancing solubility (particularly desirable if the formulation is to be injected), enhancing therapeutic or preventive efficacy (see further discussion) peptide analogs with increased MHC binding) or stability (e.g., ex vivo viability and resistance to proteolytic degradation in vivo) or to facilitate peptide synthesis. A modified peptide or peptide analogue in which the amino acid sequence has been altered compared to the native protein sequence from which it is derived or compared to the unmodified peptide from which the modified peptide is derived, for example, by substitution, deletion or addition of amino acids, may be obtained. to modify immunogenicity, improve peptide solubility, or increase ease of peptide synthesis (e.g., automated peptide synthesis).

Peptid môže byť napríklad modifikovaný tak, že aspoň zachováva, pokiaľ nezlepšuje, schopnosť tlmiť autoimunitnú odpoveď pri MS (napríklad vyvolaním nereaktivity T buniek alebo znížením reaktivity T buniek) a súčasne si uchováva schopnosť viazať MHC proteíny. V tomto prípade je možné známymi metódami stanoviť kritické väzobné zvyšky pre receptor T buniek (napríklad substitúciou každého zvyšku a stanovením prítomnosti alebo absencie reaktivity T buniek). Zvyšky, ktoré sa ukázali ako nevyhnutné pre interakciu s receptorom T buniek, môžu byť modifikované náhradou nevyhnutnej aminokyseliny iným, prednostne podobným zvyškom aminokyseliny (konzervatívna substitúcia), ktorého prítomnosť sa prejavila ako zvyšujúca, znižujúca, avšak neeliminujúca, alebo neovplyvňujúca aktivitu T buniek. Ďalej môžu byť tie zvyšky aminokyselín, ktoré nie sú nevyhnutné pre interakciu s receptormi T buniek, modifikované náhradou inou aminokyselinou, ktorej zabudovanie môže zvýšiť, znížiť, avšak neeliminovať, alebo neovplyvňovať aktivitu T buniek, avšak neeliminuje väzbu na relevantný MHC. Ďalej môžu byť peptidy podľa vynálezu modifikované náhradou aminokyseliny, ktorá sa ukázala ako nevyhnutná pre interakciu s MHC proteínovým komplexom, iným, prednostne podobným zvyškom aminokyseliny (konzervatívna substitúcia), ktorého prítomnosť sa ukázala ako zvyšujúca, znižujúca, avšak neeliminujúca, alebo neovplyvňujúca aktivitu T buniek. Ďalej môžu byť zvyšky aminokyselín, ktoré nie sú nevyhnutné pre interakciu s MHC proteínovým komplexom, modifikované náhradou inou aminokyselinou, ktorej zabudovanie môže zvýšiť, neovplyvniť alebo znížiť, avšak neeliminovať reaktivitu T buniek. Ako neobmedzujúce príklady výhodných substitúcií aminokyselín za nie nevyhnutné aminokyseliny je možné uviesť náhrady alanínom, kyselinou glutámovou alebo metylaminokyselinou. Napríklad spis WO 94/06828 opisuje substituované peptidy, v ktorých môže byť v podstate každý zvyšok aminokyseliny substituovaný konzervatívnou aminokyselinou, aminokyselinou nenachádzajúcou sa v prírode alebo alanínom, a substituovaný peptid je napriek tomu schopný tlmiť antigéno.'7 vo špecifickú imunitnú odpoveď. Iným príkladom je práca Karin a ď., J. Exp.For example, the peptide may be modified to at least retain, unless it improves, the ability to attenuate the autoimmune response in MS (e.g., by inducing T cell non-reactivity or reducing T cell reactivity) while retaining the ability to bind MHC proteins. In this case, critical binding residues for the T cell receptor can be determined by known methods (e.g., by substituting each residue and determining the presence or absence of T cell reactivity). Residues that have been shown to be necessary for interaction with the T cell receptor may be modified by replacing the necessary amino acid with another, preferably similar, amino acid residue (conservative substitution) whose presence has been shown to increase, decrease, but not eliminate or affect T cell activity. Further, those amino acid residues that are not necessary for interaction with T cell receptors may be modified by replacing another amino acid whose incorporation may increase, decrease but not eliminate or affect T cell activity but do not eliminate binding to the relevant MHC. Furthermore, the peptides of the invention may be modified by substituting an amino acid that has been shown to be necessary for interaction with the MHC protein complex, another, preferably similar, amino acid residue (conservative substitution) whose presence has been shown to increase, decrease, but not eliminate or affect T cell activity. . Furthermore, amino acid residues that are not necessary for interaction with the MHC protein complex may be modified by replacing another amino acid whose incorporation may increase, not affect or decrease, but not eliminate T cell reactivity. Non-limiting examples of preferred amino acid substitutions for non-essential amino acids include alanine, glutamic acid, or methylamino acid substitutions. For example, WO 94/06828 discloses substituted peptides in which substantially every amino acid residue may be substituted by a conserved amino acid, an amino acid not found in nature or by alanine, and the substituted peptide is nevertheless capable of attenuating the antigen in a specific immune response. Another example is the work of Karin et al., J. Exp.

/J/ J

Med. 18,0:2227-2237 (1994), ktorá opisuje štúdie s použitím imunodominantné!Med. 18,0: 2227-2237 (1994), which describes studies using immunodominant!

ho krysieho epitopu MBP so sekvenciou aminokyselín 87-99 (SEQ ID NO: 43), uvedenou na obr. 14. Tieto analógy predstavujú rad 13 substituovaných peptidov na báze sekvencie 87-99 (SEQ ID NO: 43), ktoré sa od pôvodného peptidu 8799 (SEQ ID NO: 43), líšia jedinou substitúciou alanínom v každej polohe peptidov 87-99 (SEQ ID NO: 43). Tieto štúdie boli uskutočňované za účelom zistenia predpokladaných miest interakcie imunodominantného peptidu s MHC a TCR u Lewisovej krysy, rovnako ako pre nájdenie modifikovaných peptidov so zlepše13 nými požadovanými charakteristikami na potenciálne terapeutické použitie. Tieto štúdie ukázali, že náhradou lyzínu (K) v polohe 91 peptidu 87-99 (SEQ ID NO: 43), alanínom (A) (viď 87-99[K>A] (SEQ ID NO: 36), na obr. 14) došlo k zamedzeniu a zvratu EAE u Lewisových krýs. Na základe tejto informácie by bolo možné očakávať, že zámenou lyzínu (K) za alanín (A) v mieste jediného lyzínu (K) prítomného v peptidoch, ktoré vo svojej sekvencii aminokyselín obsahujú sekvenciu 87-99 (SEQ ID NO: 43), tj. MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), a MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), všetkých znázornených na obr. 2, by došlo taktiež ku zvýšeniu aktivity T buniek substituovaných peptidov. Napríklad MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), substituovaný alanínom (A) za lyzín (K) v polohe 10 peptidu MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), (t.j. DENPVVHFFANÍVTPRTPPPSQGK) (SEQ ID NO: 71), môže mať zvýšenú aktivitu T buniek, vedúcu ku zlepšeným terapeutickým vlastnostiam oproti „rodičovskému“ peptidu MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6).The rat MBP epitope of amino acid sequence 87-99 (SEQ ID NO: 43) shown in FIG. These analogs represent a series of 13 substituted peptides based on sequence 87-99 (SEQ ID NO: 43), which differ from the original peptide 8799 (SEQ ID NO: 43) by a single alanine substitution at each position of peptides 87-99 (SEQ. ID NO: 43). These studies were conducted to determine the predicted sites of interaction of the immunodominant peptide with MHC and TCR in a Lewis rat, as well as to find modified peptides with improved desirable characteristics for potential therapeutic use. These studies have shown that by replacing lysine (K) at position 91 of peptide 87-99 (SEQ ID NO: 43) with alanine (A) (see 87-99 [K> A] (SEQ ID NO: 36), FIG. 14) EAE was prevented and reversed in Lewis rats. On the basis of this information, one would expect that by replacing lysine (K) with alanine (A) at the site of a single lysine (K) present in peptides containing in their amino acid sequence the sequence 87-99 (SEQ ID NO: 43), i.e. . MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 7) NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), and MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), all shown in FIG. 2, there would also be an increase in T cell activity of the substituted peptides. For example, MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), substituted with alanine (A) for lysine (K) at position 10 of the MBP-2.1 peptide (SEQ ID NO: 6), (i.e., DENPVVHFFANVTPRTPPPSQGK) (SEQ ID NO: 71) have enhanced T cell activity, resulting in improved therapeutic properties over the "parent" MBP-2.1 peptide (SEQ ID NO: 6).

Za účelom zvýšenia stability a/alebo reaktivity môžu byť peptidy taktiež modifikované tak, aby obsahovali v sekvencii aminokyselín bielkovinového antigénu jeden alebo viac polymorfizmov, vyplývajúcich z prirodzených alelických obmien. Na získanie modifikovanej bielkoviny alebo peptidu v rozsahu vynálezu môže byť tiež uskutočnená zámena alebo adícia D-aminokyselinou, neprirodzenou aminokyselinou alebo neaminokyselinovými analógmi. Peptidy podľa vynálezu môžu byť ďalej modifikované s použitím polyetylénglykolovej (PEG) metódy podľa A. Sehona a spolupracovníkov (Wie a ď., viď vyššie) za vzniku proteínu alebo peptidu, konjugovaného s PEG. PEG môže byť ďalej pridávaný počas chemickej syntézy proteínu alebo peptidu podľa vynálezu. Modifikácie peptidov alebo ich častí môžu zahrnovať tiež redukciu/alkyláciu (Tarr v Methods of Protein Microcharacterization, J E. Silver ed., Humana Press, Clifton, NJ, str. 155194 (1986), acyláciu (Tarr, viď vyššie), chemickú kondenzáciu s vhodným nosičom (Mishell a Shiigi, ed., Selected Methods in Cellular Immunology, WH Freeman, San Francisco, CA (1980), patent US 4,939.239, alebo mierne pôsobenie formalínom (Marsh, International Archives of Allergy and Applied Immunology,In order to increase stability and / or reactivity, the peptides can also be modified to contain one or more polymorphisms resulting from natural allelic variations in the amino acid sequence of the protein antigen. In order to obtain a modified protein or peptide within the scope of the invention, D-amino acid, non-natural amino acid or non-amino acid analogs can also be exchanged or added. The peptides of the invention can be further modified using the polyethylene glycol (PEG) method of A. Sehon and co-workers (Wie et al., Supra) to produce a PEG-conjugated protein or peptide. PEG may be further added during chemical synthesis of a protein or peptide of the invention. Modifications to the peptides or portions thereof may also include reduction / alkylation (Tarr in Methods of Protein Microcharacterization, J. E. Silver ed., Humana Press, Clifton, N.J., p. 155194 (1986), acylation (Tarr, supra), chemical condensation with a suitable carrier (Mishell and Shiigi, ed., Selected Methods in Cellular Immunology, WH Freeman, San Francisco, CA (1980), US Patent 4,939,239, or mild formalin treatment (Marsh, International Archives of Allergy and Applied Immunology,

41:199-215 (1971)).41: 199-215 (1971)].

/3a/ 3

Na uľahčenie čistenia a potenciálne zvýšenie rozpustnosti proteínov alebo peptidov podľa vynálezu je možné k reťazcu peptidu pridať reportérove skupiny. Napríklad môže byť k peptidu pridaný polyhistidín na čistenie peptidu afinitnouReporter groups may be added to the peptide chain to facilitate purification and potentially increase the solubility of the proteins or peptides of the invention. For example, polyhistidine may be added to the peptide to affinity purify the peptide

chromatografiou na imobilizovanom kovovom ióne (Hochuli, E. a d., Bio/Technology, 6:1321-1325 (1988)). Okrem toho môžu byť, keď je to žiadúce, medzi reportérovu skupinu a aminokyselinové sekvencie peptidu zavedené špecifické miesta štiepenia endoproteázami na uľahčenie izolácie peptidov zbavených irelevantných sekvencií. Za účelom potenciálne napomôcť správnemu antigénovému spracovaniu epitopov T buniek v peptide môžu byť medzi oblasti rekombinačne alebo synteticky vložené kanonické miesta citlivé voči proteázam, obsahujúce vždy aspoň jeden epitop T buniek. Počas rekombinačnej konštrukcie peptidu môžu byť napríklad medzi oblasti v peptide vložené dvojice nabitých aminokyselín, ako je KK alebo RR. Vzniknutý peptid potom môže byť citlivý voči štiepeniu katepsínom a/alebo inými enzýmami typu trypsínu za vzniku častí peptidu obsahujúcich jeden alebo viac epitopov T buniek.immobilized metal ion chromatography (Hochuli, E. et al., Bio / Technology, 6: 1321-1325 (1988)). In addition, specific endoprotease cleavage sites may be introduced between the reporter group and the peptide amino acid sequences, if desired, to facilitate isolation of peptides devoid of irrelevant sequences. In order to potentially assist in the correct antigen processing of T cell epitopes in the peptide, canonical protease-sensitive canonical sites containing at least one T cell epitope may be inserted between regions recombinantly or synthetically. During recombinant construction of the peptide, for example, pairs of charged amino acids such as KK or RR may be interposed between regions in the peptide. The resulting peptide may then be sensitive to cleavage by cathepsin and / or other trypsin-like enzymes to form portions of the peptide containing one or more T cell epitopes.

Ďalším príkladom modifikácie peptidov je substitúcia cysteínových zvyškov prednostne serínom, treonínom, leucínom alebo kyselinou glutámovou za účelom minimalizácie dimerizácie cez disulfídické väzby. Ďalej môžu byť peptidy modifikované za účelom zvýšenia rozpustnosti peptidu pre použitie v pufrovaných vodných roztokoch, ako sú farmaceutický prijateľné nosiče alebo riedidlá, pridaním funkčných skupín k peptidu, terminálnych Častí peptidu alebo nezahrnutím hydrofóbnych oblastí do peptidu. Napríklad na zvýšenie rozpustnosti môžu byť ku karboxyterminálnemu alebo aminoterminálnemu koncu alebo k obom pridané nabité aminokyseliny alebo dvojice alebo triplety nabitých aminokyselín. Ako príklady nabitých aminokyselín je možné uviesť arginín (R), lyzín (K), histidín (H), kyselinu glutámovú (E) a kyselinu asparágovú (D). Kvôli uľahčeniu peptidovej syntézy, napríklad pre automatizovanú syntézu peptidov, môže byť žiadúce vypustiť alebo nahradiť aminokyseliny, ktoré robia syntézu peptidu obťažnejšou alebo nákladnejšou. Napríklad keď je N-terminálna alebo Cterminálna aminokyselina peptidu schopná cyklizácie alebo môže podliehať degradácii buď počas syntézy peptidu alebo po nej, je možné takú aminokyselinu vypustiť alebo nahradiť, alebo alternatívne možno pridať jednu alebo viac ďalších aminokyselín na „blokovanie“ menej žiadúcej amino- alebo karboxyterminálnej aminokyseliny. Tieto pridávané aminokyseliny môžu byť odvodené od natívnej proteínovej sekvencie alebo sa môže jednať o nenatívne aminokyselinové zvyšky. Na zvýšenie vyššie definovanej aktivity T buniek peptidu môžu byť pridávané buď na aminoterminálny alebo na karboxyterminálny koniec peptidu alebo na oba ďalšie aminokyseliny. Tieto ďalšie aminokyseliny môžu byť odvodené od natívnej proteínovej sekvencie alebo sa môže jednať o nenatívne aminokyselinové zvyšky.Another example of peptide modification is the substitution of cysteine residues preferably by serine, threonine, leucine or glutamic acid to minimize dimerization through disulfide bonds. Further, the peptides may be modified to increase the solubility of the peptide for use in buffered aqueous solutions, such as pharmaceutically acceptable carriers or diluents, by adding functional groups to the peptide, terminal portions of the peptide, or by not including hydrophobic regions in the peptide. For example, charged amino acids or charged amino acid pairs or triplets may be added to the carboxyterminal or amino terminal end or both to increase solubility. Examples of charged amino acids include arginine (R), lysine (K), histidine (H), glutamic acid (E) and aspartic acid (D). In order to facilitate peptide synthesis, for example, for automated peptide synthesis, it may be desirable to delete or replace amino acids that make peptide synthesis more difficult or more expensive. For example, when the N-terminal or Cterminal amino acid of a peptide is capable of cyclization or may be subject to degradation either during or after peptide synthesis, the amino acid may be deleted or replaced, or alternatively one or more additional amino acids may be added to "block" the less desirable amino- or carboxyterminal amino acids. These added amino acids may be derived from the native protein sequence or may be non-native amino acid residues. To enhance the above T cell activity of the peptide, they can be added to either the amino-terminal or carboxy-terminal end of the peptide, or both. These additional amino acids may be derived from the native protein sequence or may be non-native amino acid residues.

Peptidové prípravky, podávané podľa vynálezu, prednostne zahrnujú dostatočný percentuálny podiel epitopov T buniek myelínového autoantigénu (tj. aspoň asi 20, výhodne asi 30, prednostne asi 40 a najmä asi 60 % alebo viac) z celkovej reaktivity T buniek voči myelínovému autoantigénu v populácii jedincov, ktorí reagují na autoantigén a ktorí majú sklerózu multiplex (napríklad aspoň 10, výhodne aspoň 20 jedincov) a sú v prípravku obsiahnuté tak, že terapeutický režim podávania prípravku jedincovi s MS podľa vynálezu vedie k tlmeniu autoimunitnej odpovede MS. Na určenie, či peptid (do úvahy pripadajúci výhodný terapeutický peptid) alebo kombinácie do úvahy pripadajúcich peptidov budú obsahovať dostatočné percento celkovej reaktivity T buniek myelínového autoantigénu na tlmenie autoimunitnej odpovede MS v podstatnom percente populácie jedincov s MS, je možné použiť niekoľko analytických schém.Preferably, the peptide formulations administered according to the invention comprise a sufficient percentage of myelin autoantigen T cell epitopes (ie, at least about 20, preferably about 30, preferably about 40, and especially about 60% or more) of the total T cell reactivity to myelin autoantigen in the subject population. which respond to autoantigen and who have multiple sclerosis (for example at least 10, preferably at least 20 individuals) and are included in the formulation such that the therapeutic regimen of administering the formulation to an individual with MS of the invention results in inhibiting the autoimmune response of MS. Several analytical schemes may be used to determine whether a peptide (a candidate therapeutic peptide of choice) or combinations of candidate peptides will contain a sufficient percentage of the total T cell reactivity of myelin autoantigen to attenuate the autoimmune response of MS in a substantial percentage of the MS population.

Podľa jednej analytickej schémy (s použitím MBP ako príkladu) sa peptidy obsahujúce epitopy T buniek roztriedia podľa počtu línií mikrotitrovej kultúry MBP reagujúcich na peptidy obsahujúce epitop a podľa počtu pacientov reagujúcich na ne. Pretože frekvencia MBP-špecifíckých T buniek v PBL pacientov s MS môže byť veľmi nízka, nie je často možné testovať všetky MBP peptidy na každom pacientovi s MS. Preto je vhodný nasledujúci postup na stanovenie najvhodnejších terapeutických peptidov, ktorý je ďalej opísaný v príklade 1. PBL sa izolujú z krvi a kultúry sú iniciované v 96jamkových mikrotitrových platniach. PBL sa čistí zo vzoriek čerstvej periférnej krvi (približne 75 ml) od pacientov s jednoznačnou MS pomocou Ficollovho gradientu hustoty. Mikrotitrové kultúry sa iniciujú 2xl0⁵ PBL na jamku a 10 μg/ml čisteného ľudského miechového MBP v kultivačnom médiu RPMI 1640, doplnenom 5 % ľudského séra AB, penicilínom - streptomycínom a L-glutamínom. Počínajúc dňom 6 až 7 sa kultúry doplnia 1L2 (20 jedn./ml) a IL4 (5 jedn./ml). Po 11 až 13 dňoch sa mikrotitrové kultúry premyjú, resuspendujú v čerstvom médiu a rozdelia do 12 čerstvých mikrotitrových jamiek. Ako bunky obsahujúce antigén sa pridajú autológne zmrazené PBL v množstve 5.10⁴ PBL na jamku. Screeningové antigény sa pridajú dvojmo ku 12 opakovaným jamkám z každej mikrotitrovej kultúry. Ako negatívna kontrola je vždy použité médium a ako pozitívna kontrola čistený ľudský rekombinačný MBP v množstve 10 úg/ml. Každý pacient je taktiež testovaný na reaktivitu s maximálne 4 MBP peptidmi, každým v koncentrácii 10 μΜ. Po 48 h sa uskutočňuje pulzácia s 0,75 pCi ³H-tymidínu a po 6 až 16 h pulzácie sa uskutoční odber. Kultúry sa označia ako pozitívne pre každý peptid podľa týchto kritérií: stimulačný index väčší ako 3,0, zmena CPM väčšia alebo rovná 500 a štandardná odchýlka od priemeru menšia ako zmena CPM. Na účely analýzy sa ďalej kultúry označia ako „peptid-pozitívne“ iba vtedy, keď reagovali súčasne na MBP a na peptid, a ak nereagovali na viac ako jeden neprekrývajúci sa peptid. S každým MBP peptidom sa prednostne testujú skupiny asi 10 až 50 pacientov a každá skupina pacientov sa testuje s maximálne štyrmi peptidmi. Peptidy sa potom roztriedia podľa týchto kritérií: 1) percento MBP pozitívnych mikrotitrových kultúr v každej skupine pacientov (celková reaktivita MBP), ktoré boli taktiež pozitívne na jeden z MBP peptidov, 2) percento jedincov reagujúcich na MBP v každej skupine s aspoň jednou mikrotitrovou kultúrou, ktorá bola pozitívna na jeden z MBP peptidov, kde jedinec reagujúci na MBP je definovaný ako pacient s aspoň jednou mikrotitrovou kultúrou, ktorá bola pozitívna na MBP. Jednotlivé do úvahy pripadajúce peptidy sa potom vyberú, pokiaľ 1) obsahujú aspoň 5, prednostne aspoň 10 a najmä aspoň 20 % celkovej reaktivity MBP a 2) reaktivita na ne sa nachádza u aspoň 20, prednostne aspoň 30, výhodne aspoň 40, zvlášť aspoň 50 a najmä aspoň 60 % jedincov reagujúcich na MBP. Poprípade možno uvažovať ďalšie kritériá na hodnotenie peptidov, ako je index pozitivity pre daný peptid. Index pozitivity reprezentuje ako intenzitu odpovede T buniek na peptid (S.I.), tak aj frekvenciu odpovede T buniek na peptid v populácii jedincov, ktorí reagujú na myelínový autoantigén. Napríklad ako je znázornené na obr. 15, index pozitivity 141-165 (MBP-4) (SEQ ID NO: 14) je približne 2500, vypočítané na základe dát uvedených v príklade 1. Stredná hodnota S.I. peptidu MBP-4 (SEQ ID NO: 14), na pacienta reagujúceho na MBP bola násot, 17 bená percentom jedincov reagujúcich na MBP-4 (SEQ ID NO: 14), v populácii pacientov reagujúcich na MBP.According to one analytical scheme (using MBP as an example), peptides containing T cell epitopes are sorted by the number of MBP microtiter culture lines responsive to the epitope containing peptides and by the number of patients responding to them. Since the frequency of MBP-specific T cells in PBL of MS patients may be very low, it is often not possible to test all MBP peptides in each MS patient. Therefore, the following procedure is appropriate for determining the most appropriate therapeutic peptides, which is further described in Example 1. PBLs are isolated from blood and cultures are initiated in 96-well microtiter plates. PBL is purified from fresh peripheral blood samples (approximately 75 ml) from patients with a clear MS using a Ficoll density gradient. Microtiter cultures are initiated 2x10 ⁵ PBL per well and 10 µg / ml purified human spinal MBP in RPMI 1640 culture medium supplemented with 5% human serum AB, penicillin-streptomycin and L-glutamine. Starting on days 6-7, the cultures were supplemented with 1L2 (20 U / ml) and IL4 (5 U / ml). After 11 to 13 days, the microtiter cultures are washed, resuspended in fresh medium and distributed into 12 fresh microtiter wells. Autologous frozen PBL was added as antigen-containing cells at 5 x 10 ⁴ PBL per well. Screening antigens are added in duplicate to 12 replicate wells from each microtiter culture. Medium is used as a negative control and purified human recombinant MBP at 10 µg / ml as a positive control. Each patient is also tested for reactivity with a maximum of 4 MBP peptides, each at a concentration of 10 μΜ. After 48 h, pulsation with 0.75 pCi of ³ H-thymidine is performed and harvested after 6 to 16 h pulsation. Cultures are marked as positive for each peptide according to the following criteria: stimulation index greater than 3.0, CPM change greater than or equal to 500, and standard deviation from mean less than CPM change. For analysis purposes, cultures are further designated as "peptide positive" only when they have responded simultaneously to MBP and to the peptide, and if they have not responded to more than one non-overlapping peptide. Groups of about 10 to 50 patients are preferably tested with each MBP peptide and each group of patients is tested with a maximum of four peptides. Peptides are then categorized according to the following criteria: 1) percentage of MBP positive microtiter cultures in each group of patients (total MBP reactivity) that were also positive for one of the MBP peptides, 2) percentage of individuals responding to MBP in each group with at least one microtiter culture which was positive for one of the MBP peptides, wherein the individual responding to MBP is defined as a patient with at least one MBP positive microtiter culture. The respective peptides of interest are then selected if 1) they contain at least 5, preferably at least 10 and in particular at least 20% of the total reactivity of MBP and 2) the reactivity to them is at least 20, preferably at least 30, preferably at least 40, especially at least 50 and in particular at least 60% of individuals responding to MBP. Alternatively, other criteria for evaluating peptides, such as a positive index for a given peptide, may be considered. The positivity index represents both the intensity of the T cell response to the peptide (SI) and the frequency of the T cell response to the peptide in a population of individuals that respond to myelin autoantigen. For example, as shown in FIG. 15, the positivity index 141-165 (MBP-4) (SEQ ID NO: 14) is approximately 2500, calculated based on the data presented in Example 1. Mean SI value of MBP-4 peptide (SEQ ID NO: 14), per patient responding per MBP was effected, 17 per cent of individuals responding to MBP-4 (SEQ ID NO: 14), in the MBP responding population.

Vysoko prečistené peptidy, v podstate prosté všetkých iných polypeptidov a nečistôt, s definovanou sekvenciou aminokyselinových zvyškov, zahrnujúcich aspoň jeden epitop T buniek, používané v terapeutických prípravkoch podľa vynálezu, môžu byť získané synteticky chemickou syntézou s použitím štandardných metód. V odbore sú známe rôzne metódy chemickej syntézy peptidov, ako je syntéza v pevnej fáze, ktorá je plne alebo poloautomatizovaná v rôznych komerčne dostupných syntetizátoroch peptidov. Synteticky vyrobené peptidy je potom možné čistiť, prednostne do homogenity, najmä do aspoň 90, výhodne aspoň 95 a zvlášť aspoň 97 % čistoty v podstate bez všetkých iných polypeptidov a nečistôt, ktoroukoľvek z mnohých metód, známych z literatúry na čistenie bielkovín.Highly purified peptides, substantially free of all other polypeptides and impurities, with a defined sequence of amino acid residues, including at least one T cell epitope, used in the therapeutic compositions of the invention can be obtained synthetically by chemical synthesis using standard methods. Various methods of chemical peptide synthesis are known in the art, such as solid phase synthesis, which is fully or semi-automated in various commercially available peptide synthesizers. The synthetically produced peptides may then be purified, preferably to homogeneity, in particular to at least 90, preferably at least 95, and particularly at least 97% purity substantially free of all other polypeptides and impurities by any of a number of methods known in the protein purification literature.

Zvlášť žiadúce sú synteticky získané peptidy podľa vynálezu s dĺžkou až približne 45 a prednostne až približne 30 aminokyselinových zvyškov, pretože zväčšenie dĺžky môže viesť k ťažkostiam pri syntéze peptidu. Peptidy s väčšími dĺžkami môžu byť získavané ďalej diskutovanými metódami rekombinácie DNA.Particularly desirable are the synthetically obtained peptides of the invention up to about 45 and preferably up to about 30 amino acid residues in length, as increasing the length may lead to difficulties in peptide synthesis. Larger length peptides can be obtained by the recombinant DNA methods discussed below.

Peptidy, použiteľné pre spôsob podľa vynálezu, môžu byť získavané taktiež metódami rekombinácie DNA v hostiteľskej bunke, transformovanej sekvenciou nukleovej kyseliny kódujúcej príslušný peptid. Ak sú získané rekombinačnými metódami, kultivujú sa hostiteľské bunky, transformované nukleovou kyselinou kódujúcou požadovaný peptid, v médiu vhodnom pre bunky a izolované peptidy môžu byť od kultivačného média alebo hostiteľských buniek alebo od obojeho čistené metódami, známymi v odbore na čistenie peptidov a bielkovín, zahrnujúcimi iónovýmennú chromatografiu, ultrafiltráciu, elektroforézu alebo imunopurifikáciu s protilátkami Špecifickými pre požadovaný peptid. Peptidy získané rekombinačne môžu byť izolované a čistené, prednostne do homogenity v podstate bez bunkového materiálu, iných polypeptidov alebo kultivačného média, na použitie spôsobmi vyššie opísanými pre synteticky získané peptidy.Peptides useful in the method of the invention may also be obtained by recombinant DNA methods in a host cell transformed with a nucleic acid sequence encoding a particular peptide. When obtained by recombinant methods, host cells, transformed with nucleic acid encoding the desired peptide, are cultured in cell-friendly medium and the isolated peptides may be purified from the culture medium or host cells or both by methods known in the art for purifying peptides and proteins, including ion exchange chromatography, ultrafiltration, electrophoresis, or immunopurification with antibodies specific for the desired peptide. Peptides obtained recombinantly can be isolated and purified, preferably to homogeneity substantially free of cell material, other polypeptides or culture medium, for use by the methods described above for synthetically obtained peptides.

1$$ 1

Za určitých obmedzených podmienok môžu byť peptidy získavané taktiež chemickým alebo enzymatickým štiepením vysoko čisteného úplného alebo natívneho proteínu, v ktorom boli vopred stanovené miesta chemického alebo enzymatického štiepenia a vzniknutý štiepny produkt je reprodukovateľný. Peptidy s definovanými sekvenciami aminokyselín môžu byť vysoko čistené a izolované do čistoty v podstate bez iných polypeptidov alebo nečistôt, prítomných v produkte enzymatického alebo chemického štiepenia, ktorýmkoľvek z postupov, vyššie opísaných pre vysoko čistené a izolované synteticky alebo rekombinačne získané peptidy.Under certain limited conditions, the peptides may also be obtained by chemical or enzymatic cleavage of a highly purified full-length or native protein at which chemical or enzymatic cleavage sites have been predetermined and the resulting cleavage product is reproducible. Peptides with defined amino acid sequences may be highly purified and isolated to purity substantially free of other polypeptides or impurities present in the enzymatic or chemical cleavage product by any of the procedures described above for highly purified and isolated synthetically or recombinantly obtained peptides.

Ďalej môžu byť peptidy podľa vynálezu používané v konjugátoch, aké sú opísané napríklad v patente US 5,130.297 (Sharma a d’.), kde sa pripravujú terapeutické prostriedky s použitím vzorca X—MHC—peptid alebo MHC—peptidX, kde X predstavuje funkčnú skupinu vybranú z toxínov a značiacich skupín, MHC je účinná časť MHC glykoproteínu, ktorý je disociovaný z bunkového povrchu, na ktorom normálne spočíva, a „peptid“ predstavuje ktorýkoľvek z tu uvedených peptidov, najmä MBP alebo MOG a zvlášť peptidy uvedené na obr. 2 aFurther, the peptides of the invention may be used in conjugates such as described in US Patent 5,130,297 (Sharma et al.), Where therapeutic compositions are prepared using the formula X-MHC-peptide or MHC-peptideX, wherein X represents a functional group selected from of toxins and labeling moieties, MHC is the effective portion of the MHC glycoprotein that is dissociated from the cell surface on which it normally rests, and the "peptide" represents any of the peptides herein, particularly MBP or MOG, and particularly the peptides shown in FIG. 2 a

14.14th

Ďalej zahrnujú výhodné peptidy podľa vynálezu aspoň jeden epitop T buniek úplného proteínu, najmä MBP alebo MOG. Peptidy môžu obsahovať tandemové repetície jedného epitopu a/alebo viac ako jedného epitopu.Further preferred peptides of the invention comprise at least one T cell epitope of the complete protein, especially MBP or MOG. The peptides may contain tandem repeats of one epitope and / or more than one epitope.

V súlade s tu opísanými postupmi na identifikáciu peptidov obsahujúcich aktivitu T buniek MBP (viď diskusiu vyššie a ďalej v príklade 1) sú výhodnými peptidmi peptidy odvodené od MBP, pripadajúce do úvahy na terapeutické použitie, napríklad peptidy MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ 1D NO. 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2, alebo ktorákoľvek ich časť alebo modifikácia. Tieto peptidy boli testované na aktivitu T buniek spôsobom opísaným v príklade 1 a ukázalo sa, že obsahujú aspoň jeden epitop T buniek, ako ukazuje pomer MBP pozitívnych mikrotitrových kultúr, ktoré boli taktiež pozitívne na jeden z MBP peptidov (obr. 4a), a detegovateľná odpoveď na každý z výhodných peptidov vo významnom percente testovaných MBP pacientov (obr. 4b). Najreaktívnejší z týchto Štyroch peptidov je MBP-4 (141-165) (SEQ ID NO: 14), na ktorý pripadá 21 % celkovej odpovede MBP a je detegovateľný v 64 % testovaných pacientov, reagujúcich na MBP. MBP-4 (SEQ ID NO: 14) prekvapujúco vykazoval dramaticky väčšiu reaktivitu ako sú spojené reaktivity MBP 141-160 (SEQ ID NO: 28) a MBP 151-170 (SEQ ID NO: 29), ako je znázornené na obr. 3. Pôvodcovia tohto vynálezu ako prví identifikovali tento imunodominantný peptid, ktorý, ako sa zdá, obsahuje viacnásobné epitopy T buniek. Tento nový peptid je zvlášť vhodný na terapeutické použitie.In accordance with the procedures described herein for the identification of peptides containing MBP T cell activity (see discussion above and below in Example 1), preferred peptides are MBP-derived peptides that are contemplated for therapeutic use, for example, MBP-1 peptides (SEQ ID NO: 2). 1), MBP-2 (SEQ ID NO. 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), as shown in FIG. 2, or any part or modification thereof. These peptides were tested for T cell activity as described in Example 1 and were shown to contain at least one epitope of T cells, as shown by the ratio of MBP positive microtiter cultures that were also positive for one of the MBP peptides (Figure 4a), and detectable. response to each of the preferred peptides in a significant percentage of MBP patients tested (Fig. 4b). The most reactive of these four peptides is MBP-4 (141-165) (SEQ ID NO: 14), which accounts for 21% of the total MBP response and is detectable in 64% of the MBP responders tested. Surprisingly, MBP-4 (SEQ ID NO: 14) showed dramatically greater reactivity than the combined reactivities of MBP 141-160 (SEQ ID NO: 28) and MBP 151-170 (SEQ ID NO: 29), as shown in FIG. The present inventors first identified this immunodominant peptide that appears to contain multiple T cell epitopes. This novel peptide is particularly suitable for therapeutic use.

Ako vhodné peptidy, pripadajúce do úvahy na terapeutické použitie, sa ďalej javia MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), a MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), znázornené na obr. 2. Tieto peptidy sú modifikovanými verziami MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), resp. MBP3 (SEQ ID NO: 12), a očakáva sa, že budú mať podobnú aktivitu T buniek ako ich príslušné „rodičovské“ peptidy. Tieto peptidy boli modifikované vypustením a/alebo pridaním aminokyselín v súlade s vyššie opísanými metódami modifikácie peptidov, najmä za účelom uľahčenia syntézy.MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 are further suitable peptides to be considered for therapeutic use. (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11) ), and MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), shown in FIG. These peptides are modified versions of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), respectively. MBP3 (SEQ ID NO: 12), and is expected to have similar T cell activity to their respective "parent" peptides. These peptides have been modified by deleting and / or adding amino acids in accordance with the methods described above for modifying peptides, in particular to facilitate synthesis.

Iné peptidy, ktoré sa ukázali ako imunodominantné (tj. majú aktivitu T buniek MBP) alebo boli odvodené od peptidov so známou aktivitou T buniek MBP, boli identifikované pôvodcami tohto vynálezu alebo inými pracovníkmi v tomto odbore (viď napríklad USSN 08/328224, dátum podania 25.10.1994, USSN 08/241246, dátum podania 10.5.1994, WO 93/21222, EP 0 304 279, WO 91/15225, Ota a ď., Letters to Náture, 346:183-187 (1990), Wucherpfenning a ď., J. Exp. Med., 170:279-290 (1994), Martin a ď., J. Immunol., (1990) 145:540-548), Karin a ď., J. Exp. Med. 180:2227-2237 (1994)). Takéto peptidy môžu byť taktiež vhodné na terapeutické použitie v prípravkoch a spôsoboch podľa vynálezu, najmä v kombinácii s vyššie opísanými výhodnými peptidmi Takéto peptidy zahrnujú, avšak neobmedzujú sa na ne, tieto celé peptidy alebo ich časti, kde čísla zvyškov zodpovedajú aminokyselinovým zvyškom ľudského MBPOther peptides that have been shown to be immunodominant (i.e., have MBP T cell activity) or derived from peptides with known MBP T cell activity have been identified by the inventors or other artisans (see, e.g., USSN 08/328224, filing date) Oct. 25, 1994, USSN 08/241246, filed May 10, 1994, WO 93/21222, EP 0 304 279, WO 91/15225, Ota et al., Letters to Nature, 346: 183-187 (1990), Wucherpfenning and et al., J. Exp. Med., 170: 279-290 (1994), Martin et al., J. Immunol., (1990) 145: 540-548), Karin et al., J. Exp. Med. 180: 2227-2237 (1994)). Such peptides may also be suitable for therapeutic use in the compositions and methods of the invention, particularly in combination with the preferred peptides described above. Such peptides include, but are not limited to, these whole peptides or portions thereof, wherein the residue numbers correspond to the amino acid residues of human MBP.

119a proteínu, znázorneného na obr. 1 a majúceho jednotlivé sekvencie aminokyselín, znázornené na obr. 14: 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 6180 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO. 35), 82-100 (SEQ ID NO. 30), 82100[P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO:119a of the protein shown in FIG. 1 and having the individual amino acid sequences shown in FIG. 14: 13-25 (SEQ ID NO: 31); 31-50 (SEQ ID NO: 18); 6180 (SEQ ID NO: 21); 82-92 (SEQ ID NO: 32); NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO. 35), 82-100 (SEQ ID NO. 30), 82100 [P> Y] (SEQ ID NO: 46) ), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO.

38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 111-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49),38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99. (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 111-135 ( 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49),

141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52), a 153-170 (SEQ ID NO: 53), výhodne 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), znázornené na obr. 14. Výhodné časti týchto peptidov alebo vý20 hodné modifikácie majú výhodne podobnú alebo väčšiu aktivitu T buniek v rovnakom alebo väčšom percente testovaných pacientov a/alebo majú podobnú alebo väčšiu terapeutickú účinnosť pri spôsoboch podľa vynálezu ako „rodičovský“ peptid, z ktorého bol modifikovaný peptid odvodený.141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52), and 153-170 (SEQ ID NO: 52). ID NO: 53), preferably 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 36), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO: 46) shown in FIG. Preferred portions of these peptides or preferred modifications preferably have similar or greater T cell activity in the same or a greater percentage of patients tested and / or have similar or greater therapeutic efficacy in the methods of the invention as the "parent" peptide from which the modified peptide was derived .

Predmetom vynálezu sú v jednom aspekte terapeutické prípravky zahrnujúce aspoň jeden peptid odvodený od myelínového antigénu s aktivitou T buniek alebo kombináciu peptidov odvodených od myelínového antigénu, z ktorých každý má aktivitu T buniek, a farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo. Výhodné terapeutické prípravky zahrnujú dostatočné percento aktivity T buniek myelínového autoantigénu, takže ak sú podané MS pacientovi v terapeutickom režime, prednostne v neimunogénnej forme, sú schopné tlmiť imunitnú odpoveď špecifickú pre myelínový autoantigén v populácii ľudí náchylných k takejto antigénovo špecifickej imunitnej odpovedi. Tu používaný výraz „tlmenie“ zahrnuje, avšak neobmedzuje sa na ne, zamedzenie počiatočného nástupu príznakov choroby, obmedzenie príznakov sklerózy multiplex spôsobených antigénovo špecifickou imunitnou odpoveďou na MBP alebo iný myelínový autoantigén, najmä zníženie, obrat, nepostupovanie alebo zmiernenie príznakov. Nepostupovanie môže byť charakterizované, avšak bez toho, aby sa na ne obmedzovalo, ako (a) kratšie obdobie aktívnej choroby alebo exacerbácie, (b) menej vážne príznaky alebo postihnutie, (c) zdržanie postupu choroby, pri ktorom sa základný zdravotný stav nezhoršuje tak rýchlo, (d) predĺženie doby medzi obdobiami aktívnej choroby alebo exacerbácie (napríklad dlhšie obdobie remisií) (e) menej relapsov alebo exacerbácií a/alebo (f) spomalenie alebo zastavenie postupu zaťaženia léziami, detegovaného MRI. Ďalšie spôsoby hodnotenia, používané odborníkmi v príslušnom odbore, zahrnujú bodovacie systémy Expanded Disability Status Scale (EDSS), Neurological Rating Scale a iné metódy. Tu používaný výraz „pokročilé štádium“ označuje ktorýkoľvek okamžik po jasných klinických znakoch zjavnej choroby, či už sa jedná o relapsujúcu-remitujúcu MS, chronickú progresívnu MS, benignú MS alebo primárnu progresívnu MS. Okrem tejto definície môže „pokročilé štádium“ zahrnovať akútne fázy, remisie a exacerbácie. Tu používaný výraz „akútna fáza“ znamená nastupujúci záchvat, akútnu chorobu, aktívnu chorobu a exacerbáciu, ktoré výrazy sa používajú vzájomne zameniteľné.In one aspect, the present invention provides therapeutic compositions comprising at least one peptide derived from myelin antigen with T cell activity or a combination of peptides derived from myelin antigen each having T cell activity and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. Preferred therapeutic compositions include a sufficient percentage of myelin autoantigen T cell activity such that when administered to an MS patient in a therapeutic regimen, preferably in a non-immunogenic form, they are capable of inhibiting a myelin autoantigen-specific immune response in a population of people susceptible to such antigen-specific immune response. As used herein, the term "attenuation" includes, but is not limited to, preventing the onset of disease symptoms, reducing the symptoms of multiple sclerosis caused by an antigen-specific immune response to MBP or other myelin autoantigen, in particular reducing, reversing, not progressing or relieving symptoms. Non-progress may be characterized, but not limited to, (a) a shorter period of active disease or exacerbation, (b) less severe symptoms or disability, (c) delaying the progression of a disease in which the underlying health does not deteriorate so rapidly; (d) increasing the time between periods of active disease or exacerbation (e.g., a longer period of remission); (e) fewer relapses or exacerbations; and / or (f) slowing or stopping the lesion loading process detected by MRI. Other assessment methods used by those skilled in the art include the Expanded Disability Status Scale (EDSS), the Neurological Rating Scale, and other methods. As used herein, the term "advanced stage" refers to any moment after clear clinical signs of overt disease, whether it is relapsing-remitting MS, chronic progressive MS, benign MS or primary progressive MS. In addition to this definition, the 'advanced stage' may include acute phases, remissions and exacerbations. As used herein, the term "acute phase" means an onset seizure, acute disease, active disease, and exacerbation, which terms are used interchangeably.

Tieto tu používané výrazy sa všeobecne vzťahujú na stav, kedy subjekt trpiaci chorobou (či už diagnostikovanou alebo nie) vykazuje aktívne príznaky alebo znaky, obvykle považované odborníkmi za spojené so špecifickou imunitnou odpoveďou charakteristickou pre sklerózu multiplex. „Relaps“ znamená akútnu fázu, ktorá nasleduje po remisii. Výraz exacerbácia, keď je použitý v príslušnom kontexte, môže byť tiež interpretovaný ako nové a zhoršujúce sa príznaky alebo znaky. „Príznaky“ sú tie indície choroby, na ktoré si pacient sťažuje. „Znaky“ sú indície pozorované alebo namerané diagnostikom. Výrazy príznaky a znaky sa však tu používajú vzájomne zameniteľné, ak nie je uvedené inak.As used herein, the terms generally refer to a condition in which a subject suffering from a disease (whether diagnosed or not) exhibits active symptoms or traits usually considered by those skilled in the art to be associated with a specific immune response characteristic of multiple sclerosis. "Relapse" means the acute phase following a remission. The term exacerbation, when used in an appropriate context, can also be interpreted as new and worsening symptoms or traits. "Symptoms" are those indications of a disease that the patient complains of. "Signs" are indications observed or measured by a diagnostic. However, the terms "flags and signs" are used interchangeably herein unless otherwise indicated.

Terapeutické prípravky podľa vynálezu prednostne zahrnujú aspoň jeden peptid alebo modifikovaný peptid alebo analóg peptidu, obsahujúci epitop T buniek, a farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo. Tieto prípravky môžu prednostne obsahovať MBP peptid zvolený z tejto skupiny peptidov: MBP-1 (SEQ ID NO: 2). MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO. 7),The therapeutic compositions of the invention preferably comprise at least one peptide or modified peptide or peptide analog comprising a T cell epitope and a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. These compositions may preferably comprise an MBP peptide selected from the group of peptides: MBP-1 (SEQ ID NO: 2). MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO. 7).

MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO:MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8); MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9);

10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15),, výhodne peptid zvolený zo skupiny zahrnujúcej MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), a MBP-5 (SEQ ID NO 15), a najmä je MBP peptidom MBP-4 (SEQ ID NO: 14).10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), preferably a peptide selected from the group consisting of MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP -5 (SEQ ID NO 15), and in particular MBP is an MBP-4 peptide (SEQ ID NO: 14).

Prípravky podľa vynálezu môžu zahrnovať aspoň dva peptidy (napríklad fyzikálnu zmes aspoň dvoch peptidov), z ktorých každý má aktivitu T buniek a prednostne zahrnuje aspoň jeden epitop T buniek myelínového autoantigénu, ako je MBP. Tieto prípravky môžu byť podávané vo forme terapeutickej kompozície s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom. Terapeuticky účinné množstvo jedného alebo viac týchto prípravkov môže byť jedincovi trpiacemu MS podávané súčasne alebo postupne. Výhodné prípravky zahrnujú aspoň jeden a prednostne aspoň dva peptidy vybrané zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO; 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO; 10),The compositions of the invention may comprise at least two peptides (for example, a physical mixture of at least two peptides) each having T cell activity and preferably comprises at least one T cell epitope of a myelin autoantigen such as MBP. These compositions may be administered in the form of a therapeutic composition with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. A therapeutically effective amount of one or more of these compositions can be administered simultaneously or sequentially to an individual suffering from MS. Preferred formulations include at least one and preferably at least two peptides selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9) ), MBP-2.5 (SEQ ID NO. 10),

MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO:MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); MBP-3 (SEQ ID NO: 12);

13) , MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 1 5),znázornené na obr.13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), shown in FIG.

2, výhodne zo skupiny zahrnujúcej MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ2, preferably from the group comprising MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ

ID NO: 4), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2.(SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5(SEQ ID NO: 10),MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9) MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10)

MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4(SEQ ID NO:MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13);

14) , a MBP-5(SEQ ID NO: 15), a najmä zo skupiny zahrnujúcej MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4(SEQ ID NO: 14) a MBP-5(SEQ ID NO: 15),. Ďalej môžu prípravky podľa vynálezu naviac obsahovať peptidy odvodené od MBP, obsahujúce zvyšky, ktorých čísla zodpovedajú aminokyselinovým zvyškom ľudského MBP proteínu, znázorneného na obr. 1, a obsahujúce jednotlivé sekvencie aminokyselín, uvedené na obr. 14: 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 8296 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 1 1 1-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53), a výhodne obsahujú tieto peptidy: 13-25 (SEQ ID NO: 3 1), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46). Prednostne obsahujú prípravky podľa vynálezu aspoň dva peptidy, kde aspoň jeden peptid je MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a aspoň jeden peptid je zvolený z tejto skupiny peptidov: MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2 6 (SEQ ID NO:14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), and in particular from the group consisting of MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15). Furthermore, the compositions of the invention may additionally comprise MBP-derived peptides comprising residues whose numbers correspond to the amino acid residues of the human MBP protein shown in FIG. 1 and containing the individual amino acid sequences shown in FIG. 14: 13-25 (SEQ ID NO: 31); 31-50 (SEQ ID NO: 18); 61-80 (SEQ ID NO: 21); 82-92 (SEQ ID NO: 32); NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO) : 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85- 100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 11-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO. : 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52), and 153- 170 (SEQ ID NO: 53), and preferably comprise the following peptides: 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO. : 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82100 [100P > Y] (SEQ ID NO: 46). Preferably, the compositions of the invention comprise at least two peptides wherein at least one peptide is MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and at least one peptide is selected from the group of peptides: MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP1.1 ( MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7) MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-26 (SEQ ID NO: 9),

11), MBP-3 (SEQ ID NO: 13), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornených na obr. 2, a ďalej môžu zahrňovať aspoň jeden λ 23 z nasledujúcich peptidov, odvodených od MBP, znázornených na obr. 14: 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO:11), MBP-3 (SEQ ID NO: 13), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), as shown in FIG. 2, and may further comprise at least one λ 23 of the following MBP-derived peptides shown in FIG. 14: 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 ( SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ. ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO:

39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 1 1 1-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO. 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53), a najmä aspoň jeden z týchto peptidov: 13-25 (SEQ ID NO:39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99. [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 11-135 (SEQ ID NO: 47), 122- 140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO. 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) and 153-170 (SEQ ID NO: 53), and in particular at least one of the following peptides: 13-25 (SEQ ID NO: 52);

31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46).31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] ( SEQ ID NO: 46).

Výhodné prípravky podľa vynálezu zahrnujú tieto peptidy:Preferred formulations of the invention include the following peptides:

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 5). NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 14). NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-5 (SEQ ID NO:MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-5 (SEQ ID NO: 6);

15);15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-3 (SEQ ID NO:MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-3 (SEQ ID NO: 6);

12);12);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1 (SEQ ID NO: 2) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);

MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);

MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2) alebo MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2) or MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P> Y] (SEQ ID NO) 87-99 (SEQ ID NO: 43) and 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2 6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP -2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-26 (SEQ ID NO: 11) shown in FIG. 2;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82 -100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82 -100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10> alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2.MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10 > or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11)), as shown in Figure 2.

Vynález taktiež zahrnuje použitie kombinácií terapeuticky účinných peptidov na prípravu liečiva k liečebnému režimu na liečenie sklerózy multiplex. Tieto kombinácie peptidov môžu byť podávané súčasne alebo postupne ako terapeutické prípravky zahrnujúce iba jeden peptid alebo niekoľko peptidov. Tento liečebný režim nemusí nutne zahrnovať fyzikálnu zmes viac ako jedného peptidu, ale zahrnuje kombináciu peptidov, podávaných súčasne alebo postupne ako jednorázová liečebná epizóda. Prednostné kombinácie peptidov (vo forme jedného alebo viac prípravkov, z ktorých každý zahrnuje jeden alebo viac peptidov), ktoré môžu byť podávané súčasne alebo postupne ako jednorázová liečebná epizóda, zahrnujú tieto kombinácie peptidov:The invention also encompasses the use of combinations of therapeutically effective peptides for the preparation of a medicament for a treatment regimen for the treatment of multiple sclerosis. These combinations of peptides may be administered simultaneously or sequentially as therapeutic compositions comprising only one peptide or several peptides. This treatment regimen does not necessarily include a physical mixture of more than one peptide, but involves a combination of peptides administered simultaneously or sequentially as a single treatment episode. Preferred combinations of peptides (in the form of one or more preparations, each comprising one or more peptides) that can be administered simultaneously or sequentially as a single treatment episode include the following peptide combinations:

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 2), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 2), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

,ι 25a, ι 25a

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 14). NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO:MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 6);

14) ;14);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4 (SEQ ID NO. 14);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), and MBP-4 (SEQ ID NO. 14);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-5 (SEQ ID NO:MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-5 (SEQ ID NO: 6);

15) ;15);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-3 (SEQ ID NO: 12);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-21 (SEQ ID NO: 6), and MBP-3 (SEQ ID NO: 12);

MBP-1 (SEQ ID NO: 2) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1 (SEQ ID NO: 2) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2 5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-25 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);

MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3

25b (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo25b (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or

MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);

MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2) alebo MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2) or MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3);

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P> Y] (SEQ ID NO) 87-99 (SEQ ID NO: 43) and 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP -2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14,MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36), shown in FIG. 14

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 1), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2 4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 1), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2-4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82100 [100 P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14;

MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 1 I), znázornené na obr. 2.MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. Second

;25c; 25c

Ďalej môžu výhodné prípravky a výhodné kombinácie MBP peptidov, ktoré môžu byť podávané súčasne a/alebo postupne, zahrnovať ktorýkoľvek z vyššie uvedených prípravkov a naviac môžu ďalej obsahovať peptid, obsahujúci aspoň jeden epitop T buniek, odvodený od myelínového oligodendrocytového proteínu (MOG), Čo je ďalší proteín, považovaný za jeden z autoantigénov zúčastňujúcich sa pri skleróze multiplex (viď Lebar a ď., J. Immunol. (1976) 1 16:1439-1446, Lebar a ď., J. Exp. Immunol. (1986) 66:423-443, Linington a Lassman, J. Neuroimmunol. (1987) 17:61-69, Lassman a ď., Acta Neuropathol. (Berl) (1988) 75:566-576, a Sun a ď., J. Immunol. (1991) 146:1490-1495). Peptidy, ktoré môžu zahrnovať epitopy T buniek odvodené od MOG, sú opísané v USSNFurther, preferred formulations and preferred combinations of MBP peptides that can be administered simultaneously and / or sequentially may include any of the above formulations and additionally may further comprise a peptide comprising at least one T cell epitope derived from myelin oligodendrocyte protein (MOG). is another protein considered to be one of the autoantigens involved in multiple sclerosis (see Lebar et al., J. Immunol. (1976) 1 16: 1439-1446; Lebar et al., J. Exp. Immunol. (1986) 66 Linington and Lassman, J. Neuroimmunol (1987) 17: 61-69, Lassman et al, Acta Neuropathol (Berl) (1988) 75: 566-576, and Sun et al, J. Immunol. (1991) 146: 1490-1495). Peptides that may include MOG-derived T cell epitopes are described in USSN

08/116824, dátum podania 3.9.1993, 1.9.1994 (tu zahrnuté ako odkaz) a je u pri liečbe sklerózy multiplex, keď sa f s vyššie uvedenými prípravkami a komb buniek T MBP podľa vynálezu, sú:08/116824, filed Sep. 3, 1993, Sep. 1, 1994 (incorporated herein by reference) and is u in the treatment of multiple sclerosis when f with the above formulations and combines of T MBP cells of the invention are:

ľudský MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) ľudský MOG 103-115 (SEQ ID NO: 5) ľudský MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) a USSN 08/30081 1, dátum podania nich možné očakávať, že budú účinné »ripravujú a/alebo podávajú v spojení ináciami peptidov obsahujúcich epitophuman MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) human MOG 103-115 (SEQ ID NO: 5) human MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) and USSN 08/30081 1, the date of administration can be expected that will be effective in preparing and / or administering in conjunction with peptide epitope-containing peptides

GQFRVIGPRHPIRGQFRVIGPRHPIR

HSYQEEAAMELKVHSYQEEAAMELKV

GQFRVIGPRHPIRALGDEVGQFRVIGPRHPIRALGDEV

ELPCRTSPGKNATGMEVGWYELPCRTSPGKNATGMEVGWY

RPPFSRVVHLYRNGKDQDGDRPPFSRVVHLYRNGKDQDGD

QAPEYRGRTELLKDAIGEGKQAPEYRGRTELLKDAIGEGK

VTLRIRNVRFSDEGGFTCFFVTLRIRNVRFSDEGGFTCFF

RDHSYQEEAAMELKVEDPFYWRDHSYQEEAAMELKVEDPFYW

Ďalšie peptidy MOG s obsahom epitopov boli identifikované pôvodcami tohto vynálezu s použitím experimentálnej analýzy podobnej, aká je opísaná vyššie a v príklade 1 (dáta neuvedené) a zahrnujú ľudský MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) GQFRVIGPRHPIRALVGDEV, ľudský MOG 1 1-30 (SEQ ID NO: 58)Other epitope-containing MOG peptides were identified by the inventors using experimental analysis similar to that described above and in Example 1 (data not shown) and include human MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) GQFRVIGPRHPIRALVGDEV, human MOG 1-30 (SEQ ID NO: 58)

PIRALVGDEVELPCRISPGK, i25d ľudský MOG 21-40 (SEQ ID NO; 59) ľudský MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) ľudský MOG ľudský MOG ľudský MOG ľudský MOGPIRALVGDEVELPCRISPGK, i25d human MOG 21-40 (SEQ ID NO; 59) human MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) human MOG human MOG human MOG human MOG

141-160 (SEQ ID NO 151-170 (SEQ ID NO141-160 (SEQ ID NO. 151-170 (SEQ ID NO

161-180 (SEQ ID NO161-180 (SEQ ID NO

199-218 (SEQ ID NO199-218 (SEQ ID NO

61)61)

62)62)

63)63)

64)64)

ELPCRISPGKNATGMEVGWY,ELPCRISPGKNATGMEVGWY.

NATGMEVGWYRPPFSRVVHL,NATGMEVGWYRPPFSRVVHL.

TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE,TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE.

YRLRGKLRAEIENLHRTFDP,YRLRGKLRAEIENLHRTFDP.

IENLHRTFDPHFLRVPCWKI aIENLHRTFDPHFLRVPCWKI a

YNWLHRRLAGQFLEELRNPF.YNWLHRRLAGQFLEELRNPF.

Vynález ďalej zahrnuje modifikácie alebo analógy (diskutované skoršie) vyššie uvedených MOG peptidov obsahujúcich epitop T buniek, ktoré si uchová26 vajú podobnú alebo väčšiu aktivitu T buniek ako rodičovský peptid, z ktorého je modifikácia alebo analóg odvodený.The invention further encompasses modifications or analogs (discussed earlier) of the aforementioned MOG peptides comprising a T cell epitope that retain 26 similar or greater T cell activity as the parent peptide from which the modification or analog is derived.

Má sa za to, že prípravky zahrnujúce ako peptidy MOG, tak MBP, obsahujúce epitopy T buniek, ich modifikácie, ich analógy alebo peptidomimetiká na ich báze a kombinácie týchto peptidov, ktoré môžu byť podávané súčasne alebo postupne, majú výhodu maximalizácie tlmiaceho účinku na T bunky, špecifické ako pre MBP, tak MOG, zúčastňujúce sa na autoimunitnej odpovedi pri MS. Týmto spôsobom je možné zacieliť na rozmedzie T buniek, ktoré sa môžu zúčastniť na autoimunitnej odpovedi buď na MBP alebo MOG vedúcej ku klinickej manifestácii MS (demyelinizácii), pre utlmenie, a teda zvýšenie terapeutického účinku zlúčenín a prípravkov podľa vynálezu. Podobne môžu byť pre prípravky a ich použitie na prípravu liečiva podľa vynálezu vhodné peptidy, obsahujúce epitop T buniek, odvodené od iných myelínových antigénov, považovaných za autoantigény pri MS (napríklad proteolipidový proteín (PLP) a myelín-asociovaný glykoproteín (MAG).Formulations comprising both MOG and MBP peptides containing T cell epitopes, modifications, analogs or peptidomimetics based thereon, and combinations of these peptides, which can be administered simultaneously or sequentially, are believed to have the advantage of maximizing T-depressant activity. cells specific for both MBP and MOG involved in autoimmune response in MS. In this way, it is possible to target a range of T cells that can participate in an autoimmune response to either MBP or MOG leading to clinical manifestation of MS (demyelination), to attenuate and thus enhance the therapeutic effect of the compounds and compositions of the invention. Similarly, peptides containing a T cell epitope derived from other myelin antigens considered to be autoantigens in MS (e.g., proteolipid protein (PLP) and myelin-associated glycoprotein (MAG)) may be suitable for the compositions and their use in the preparation of a medicament of the invention.

Použitie prípravkov na prípravu liečiva k liečebnému režimu na liečenie sklerózy multiplex podľa vynálezu (ktorý vedie ku zvratu, prevencii alebo odloženiu nástupu príznakov choroby, vyvolaných útočiacim autoantigénom, alebo ku zníženiu, nepostupovaniu alebo zmierneniu príznakov vyvolaných útočiacim autoantigénom, t.j. k tlmeniu imunitnej odpovede, špecifickej pre autoantigén) zahrnuje podávanie terapeutického prípravku podľa vynálezu, zahrnujúceho aspoň jeden izolovaný peptid, odvodený od autoantigénu, zodpovedného za ošetrovaný chorobný stav (napríklad MBP, MOG, PLP, MAG), v neimunogénnej forme. Bez úmyslu viazať sa na nejakú teóriu sa má za to, že podávanie terapeutického prípravku podľa vynálezu môže a) vyvolať nereaktivitu T buniek príslušných subpopulácií T buniek, takže nereagujú na útočiaci antigén a nezúčastňujú sa na stimulácii imunitnej odpovede pri expozícii útočiacemu bielkovinovému antigénu (prostredníctvom anergie alebo apoptózy), b) modifikovať profil sekrécie lymfokínu v porovnaní s expozíciou útočiacemu autoantigénu, c) spôsobiť, že subpopulácie T buniek, ktoré sa normálne zúčastňujú na odpovedi na útočiaci antigén, sa stiahnu z miest normálnej expozice k miestam podania pri26a.Use of the compositions for the preparation of a medicament for a treatment regimen for treating multiple sclerosis according to the invention (which leads to reversing, preventing or delaying the onset of disease symptoms induced by the attacking autoantigen or reducing, not progressing or ameliorating the symptoms induced by the attacking autoantigen; for autoantigen) comprises administering a therapeutic composition of the invention comprising at least one isolated peptide derived from an autoantigen responsible for the condition being treated (e.g., MBP, MOG, PLP, MAG), in a non-immunogenic form. Without wishing to be bound by theory, it is believed that administration of the therapeutic composition of the invention can a) induce T cell inactivity of the respective T cell subpopulations, so that they do not respond to the attacking antigen and do not participate in stimulating the immune response when exposed to the attacking protein antigen or apoptosis), b) modify the lymphokine secretion profile compared to the exposure to the attacking autoantigen, c) cause the T cell subpopulations that are normally involved in the response to the attacking antigen to be withdrawn from the normal exposure sites to the 2626a administration sites.

pravku (táto redistribúcia subpopulácií T buniek môže zlepšiť alebo znížiť schopnosť imunitného systému jedinca stimulovať obvyklú imunitnú odpo-(this redistribution of T cell subpopulations may improve or decrease the ability of the individual's immune system to stimulate the usual immune

veď v mieste normálnej expozície útočiacemu antigénu, čo vedie ku zníženiu alebo zvratu príznakov), d) spôsobiť indukciu T supresorových buniek alebo e) spôsobiť indukciu supresorových buniek pomocou nezúčastneného antigénu.indeed, at the site of normal exposure to the attacking antigen, resulting in a reduction or reversal of symptoms), d) induce T suppressor cell induction or e) induce suppressor cell induction by a non-participating antigen.

Vysoko čistené a izolované peptidy, získané vyššie opísaným spôsobom, môžu byť formulované do terapeutických prípravkov podľa vynálezu, vhodných pre humánnu terapiu. Keď sa má terapeutický prípravok podľa vynálezu podávať injekčné (napríklad subkutánne, intravenózne), je výhodné, aby vysoko čistený peptid bol rozpustný vo vodnom roztoku pri farmaceutický prijateľnom pH (t.j. pri rozmedzí pH asi 4 až 9) tak, aby bol prípravok tekutý a ľahko aplikovateľný ihlou. Prípravok taktiež prednostne zahrnuje farmaceutický prijateľný nosič. Tu používaný výraz „farmaceutický prijateľný nosič“ zahrnuje akékoľvek a všetky vehikulá, rozpúšťadlá, disperzné prostredie, povlaky, antibakteriálne a protipliesňové prostriedky, prostriedky pre úpravu toxicity, pufrovacie prostriedky, prostriedky oneskorujúce alebo posilňujúce absorpciu, povrchovo aktívne látky a micelotvorné prostriedky, lipidy, lipozómy a prostriedky pre tvorbu kvapalných komplexov, stabilizátory a pod. Použitie týchto prostredí a prostriedkov pre farmaceutický účinné látky je v odbore známe. Pre použitie v terapeutických prípravkoch pripadajú do úvahy všetky bežné prostredia a prostriedky, pokiaľ nie sú inkompatibilné s účinnou zlúčeninou. V prípravkoch môžu byť zahrnuté ďalšie účinné zlúčeniny.The highly purified and isolated peptides obtained as described above may be formulated into therapeutic compositions of the invention suitable for human therapy. When the therapeutic composition of the invention is to be administered by injection (e.g., subcutaneously, intravenously), it is preferred that the highly purified peptide be soluble in aqueous solution at a pharmaceutically acceptable pH (i.e., pH range of about 4-9) such that the composition is fluid and readily with a needle. The composition also preferably comprises a pharmaceutically acceptable carrier. As used herein, the term "pharmaceutically acceptable carrier" includes any and all vehicles, solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, toxicity adjusters, buffering agents, absorption delaying or enhancing agents, surfactants and micelleformers, lipids, liposomes and liquid complexing agents, stabilizers and the like. The use of such media and compositions for pharmaceutical active substances is known in the art. For use in therapeutic compositions, all conventional media and compositions are contemplated unless they are incompatible with the active compound. Other active compounds may be included in the compositions.

Ako je vyššie uvedené, terapeutické prípravky podľa vynálezu, vhodné na injekčné použitie, sú prednostne sterilné vodné roztoky, pripravené zabudovaním účinnej zlúčeniny (t.j. jedného alebo viac vyššie opísaných vysoko čistených a izolovaných peptidov) v požadovanom množstve do príslušného vehikulá s jednou alebo s kombináciou vyššie a ďalej uvedených zložiek podľa potreby s následnou sterilnou filtráciou. Medzi výhodné farmaceutický prijateľné nosiče patrí aspoň jedno vehikulum, ako je sterilná voda, fosforečnan sodný, manitol, sorbitol alebo chlorid sodný alebo akákoľvek ich kombinácia. Medzi ďalšie vhodné farmaceutický prijateľné nosiče patria rozpúšťadlá alebo disperzné prostredie, obsahujúce napríklad vodu, etanol, polyol (napríklad glycerol, propylénglykol a kvapalný polyetylénglykol a pod ), ich vhodné zmesi a rastlinné ole28 je. Správnu tekutosť je možné udržať napríklad použitím povlaku, ako je lecitín, dodržovaním požadovanej veľkosti častíc v prípade disperzií a použitím povrchovo aktívnych látok. Prevenciu proti pôsobeniu mikroorganizmov je možné dosiahnuť rôznymi antibakteriálnymi a protipliesňovými prostriedkami, ako sú napríklad parabeny, chlórbutanol, fenol, kyselina askorbová, thirmerosol a pod. Predĺženú absorpciu injekčných prípravkov možno dosiahnuť zahrnutím prostriedku, ktorý oneskoruje absorpciu, napríklad alumíniummonostearátu a želatíny.As mentioned above, therapeutic compositions of the invention suitable for injectable use are preferably sterile aqueous solutions prepared by incorporating the active compound (ie, one or more of the highly purified and isolated peptides described above) in the required amount into an appropriate vehicle with one or a combination of the above. and the following ingredients, as appropriate, followed by sterile filtration. Preferred pharmaceutically acceptable carriers include at least one vehicle such as sterile water, sodium phosphate, mannitol, sorbitol or sodium chloride, or any combination thereof. Other suitable pharmaceutically acceptable carriers include solvents or dispersion media containing, for example, water, ethanol, polyol (e.g., glycerol, propylene glycol, and liquid polyethylene glycol, and the like), suitable mixtures thereof, and vegetable oils 28. Proper fluidity can be maintained, for example, by the use of a coating such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the use of surfactants. Prevention of the action of microorganisms can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, such as parabens, chlorobutanol, phenol, ascorbic acid, thirmerosol, and the like. Prolonged absorption of the injectable preparation may be brought about by the inclusion of an agent which delays absorption, for example, aluminum monostearate and gelatin.

Výhodné terapeutické prípravky podľa vynálezu by mali byť sterilné, stabilné za podmienok výroby, skladovania, distribúcie a použitia a mali by byť chránené pred kontaminujúcim pôsobením mikroorganizmov, ako sú baktérie a pliesne. Výhodný spôsob prípravy terapeutického prípravku, ktorý zachováva integritu prípravku (t.j. bráni kontaminácii, predlžuje skladovanie atď.) spočíva v príprave formulácie peptidu a farmaceutický prijateľného nosiča alebo nosičov, takže prípravok môže byť vo forme lyofilizovaného prášku, ktorý je tesne pred použitím rekonštituovaný vo farmaceutický prijateľnom nosiči, ako je sterilná voda. V prípade sterilných práškov na prípravu sterilných injekčných roztokov sú výhodnými metódami prípravy vákuové sušenie, vymrazovacie sušenie alebo spinové sušenie, ktoré poskytuje prášok účinnej zložky plus akejkoľvek ďalšej požadovanej zložky z ich vopred sterilné prefiltrovaného roztoku.Preferred therapeutic compositions of the invention should be sterile, stable under the conditions of manufacture, storage, distribution and use and should be protected from the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi. A preferred method of preparing a therapeutic composition that maintains the integrity of the composition (i.e., prevents contamination, prolongs storage, etc.) is by preparing a formulation of the peptide and a pharmaceutically acceptable carrier or carriers so that the composition may be in lyophilized powder reconstituted into a pharmaceutically acceptable carriers such as sterile water. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, the preferred methods of preparation are vacuum drying, freeze-drying or spin-drying, which provides a powder of the active ingredient plus any other desired ingredient from their pre-sterile filtered solution.

Ako je vyššie uvedené, terapeutický prípravok podľa vynálezu môže zahrnovať viac ako jeden izolovaný peptid. Pre podávanie niekoľkých aktívnych peptidov môže byť žiadúci terapeutický prípravok zahrnujúci multipeptidovú formuláciu vhodnú na farmaceutické podávanie ľuďom. Multipeptidová formulácia zahrnuje aspoň dva alebo viac izolovaných peptidov s definovanou sekvenciou aminokyselín a je schopná tlmiť antigénovo špecifickú imunitnú odpoveď. Ako multipeptidová formulácia môže byť vhodný ktorýkoľvek z vyššie opísaných prípravkov, ktoré zahrnujú aspoň dva peptidy. Ako je vyššie uvedené, vysoko výhodné peptidy, vhodné pre použitie v multipeptidovej formulácii, zahrnujú aspoň dva z týchto peptidov: MBP-1, MBP-1.1, MBP-1.2, MBP-2, MBP-2.1, MBP-2.2, MBP-2.3, MBP-2.4, MBO-2.5, MBP-2.6, MBP-3, MBP-3.1, MBP-4 a —a 29As mentioned above, the therapeutic composition of the invention may comprise more than one isolated peptide. For administration of several active peptides, a therapeutic composition comprising a multipeptide formulation suitable for pharmaceutical administration to humans may be desirable. The multipeptide formulation comprises at least two or more isolated peptides having a defined amino acid sequence and is capable of attenuating an antigen-specific immune response. Any of the above-described compositions comprising at least two peptides may be suitable as a multipeptide formulation. As noted above, highly preferred peptides suitable for use in a multipeptide formulation include at least two of the following peptides: MBP-1, MBP-1.1, MBP-1.2, MBP-2, MBP-2.1, MBP-2.2, MBP-2.3 , MBP-2.4, MBO-2.5, MBP-2.6, MBP-3, MBP-3.1, MBP-4 and —and 29

MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 29), MBP-2 5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15). Zvláštne úvahy pri príprave multipeptidovej formulácie zahrnujú uchovanie rozpustnosti a stability všetkých peptidov vo formulácii vo vodnom roztoku pri fyziologicky prijateľnom pH. To vyžaduje voľbu jedného alebo viac farmaceutický prijateľných rozpúšťadiel a vehikulov, ktoré sú kompatibilné so všetkými peptidmi v multipeptidovej formulácii. Vhodné vehikulá napríklad zahrnujú sterilnú vodu, fosforečnan sodný, manitol alebo súčasne fosforečnan sodný a manitol. Ďalšia úvaha v prípade multipeptidovej formulácie zahrnuje prevenciu dimerizácie peptidov, keď je to nutné.MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 29), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 10) MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15). Particular considerations in preparing a multipeptide formulation include maintaining the solubility and stability of all peptides in the formulation in aqueous solution at a physiologically acceptable pH. This requires the choice of one or more pharmaceutically acceptable solvents and vehicles that are compatible with all peptides in the multipeptide formulation. Suitable vehicles include, for example, sterile water, sodium phosphate, mannitol or simultaneously sodium phosphate and mannitol. Another consideration in the case of a multipeptide formulation involves preventing peptide dimerization when necessary.

Podávanie vyššie opísaného terapeutického prípravku jedincovi v neimunogénnej forme možno uskutočňovať s použitím známych postupov v dávkach a počas doby účinnej na tlmenie imunitnej odpovede jedinca liečeného na MS, špecifickej pre antigén MBP. Tlmenie antigénovo špecifickej imunitnej odpovede na antigén súvisiaci s chorobným stavom u ľudí môže byť stanovené klinicky, keď je to možné, alebo subjektívne (t.j. pacient cíti, ako by sa zmiernili niektoré alebo všetky príznaky súvisiace s chorobným stavom).Administration of the above-described therapeutic composition to a subject in a non-immunogenic form can be accomplished using known procedures at dosages and for a period effective to inhibit the immune response of an individual treated to an MBP antigen-specific MS. The inhibition of an antigen-specific immune response to a disease-related antigen in humans can be determined clinically when possible or subjective (i.e., the patient feels that some or all of the symptoms associated with the disease state are alleviated).

Účinné množstvo terapeutických prípravkov podľa vynálezu sa môže líšiť podľa faktorov, ako je stupeň citlivosti jedinca na antigén, vek, pohlavie a hmotnosť jedinca a schopnosť peptidu vyvolávať tlmenie antigénovo špecifickej imunitnej odpovede u jedinca. Terapeutický prípravok podľa vynálezu môže byť podávaný v neimunogénnej forme vhodným spôsobom, napríklad injekčné (subkutánne, intravenózne a pod ), orálne, sublingválne, inhalačné, transdermáine, rektálne alebo ktoroukoľvek kombináciou aplikačných ciest za účelom zvýšenia terapeutickej účinnosti, alebo ktoroukoľvek inou aplikačnou cestou, známou pre podávanie terapeutických prípravkov. Môže byť žiadúce podávať jedincovi súčasne alebo postupne terapeuticky účinné množstvo jedného alebo viac terapeutických prípravkov podľa vynálezu. Každý z týchto prípravkov pre súčasné alebo postupné podávanie môže zahrnovať iba jeden peptid alebo vyššie opísanú multipeptidovú formuláciu.An effective amount of the therapeutic compositions of the invention may vary according to factors such as the degree of susceptibility of the individual to the antigen, the age, sex and weight of the individual and the ability of the peptide to induce a specific antigen-specific immune response. The therapeutic composition of the invention may be administered in a non-immunogenic form by a suitable route, for example, by injection (subcutaneously, intravenously and the like), orally, sublingually, inhalation, transdermain, rectally or by any combination of routes to enhance therapeutic efficacy or by any other route known. for the administration of therapeutic preparations. It may be desirable to administer to a subject simultaneously or sequentially a therapeutically effective amount of one or more therapeutic compositions of the invention. Each of these formulations for simultaneous or sequential administration may comprise only one peptide or a multipeptide formulation as described above.

Pre podávanie peptidu alebo peptidového prípravku inou ako parenterál nou cestou môže byť nutné peptid za účelom zamedzenia jeho inaktivácie po tiahnuť určitou látkou alebo ho s ňou podávať súčasne. Peptidový prípravok môFor administration of the peptide or peptide preparation by a route other than the parenteral route, it may be necessary to prevent or inactivate the peptide to be coated or co-administered with a substance. The peptide preparation may

29a29a

že byť napríklad podávaný súčasne s inhibítormi enzýmov alebo v lipozómoch. Inhibítory enzýmov zahrnujú inhibítor pankreatického trypsínu, diizopropylfluórofosfát (DEP) a trasylol. Lipozómy zahrnujú emulzie CGF voda v oleji vo vode, rovnako ako konvenčné lipozómy (Strejan a ď. (1984), J. Neuroimmunol. 7:27). Keď je peptid vhodne chránený, ako je opísané vyššie, môže byť podávaný orálne, napríklad s inertným riedidlom alebo s asimilovateľným jedlým nosičom. Peptidový prípravok a ďalšie zložky môžu byť taktiež uzatvorené v želatínovej kapsuli s tvrdým alebo mäkkým obalom, lisované na tablety alebo zabudované priamo do jedincovej diéty. Na orálne terapeutické podávanie môže byť účinná zlúčenina zabudovaná do vehikulov a používaná vo forme prehítateľných tabliet, bukálnych tabliet, pastiliek, kapsúl, elixírov, suspenzií, sirupov, oplátok a pod. Tieto kompozície a prípravky by mali obsahovať aspoň 1 % hmotnostné účinnej zlúčeniny. Percentuálny podiel kompozície alebo prípravku sa môže samozrejme meniť a výhodne môže činiť medzi asi 5 a 80 % hmotnosti jednotky. Množstvo účinnej zlúčeniny v týchto terapeuticky použiteľných prípravkoch je také, aby bolo dosiahnuté vhodné dávkovanie. Výhodné kompozície alebo prípravky podľa tohto vynálezu sa pripravujú tak, aby orálna dávková jednotka obsahovala medzi asi 10 pg a asi 200 mg účinnej zlúčeniny. Tablety, pastilky, pilulky, kapsuly a pod. môžu taktiež obsahovať: spojivo, ako je tragant, arabská guma, kukuričný škrob alebo želatína, vehikulá, ako je fosforečnan divápenatý, dezintegračný prostriedok, ako je kukuričný škrob, zemiakový škrob, kyselina algínová a pod., mazivo, ako je stearát horečnatý, a sladidlo, ako je sacharóza, laktóza alebo sacharín, alebo ochucovadlo, ako je pepermint, salicylan metylnatý alebo čerešňová príchuť. Keď je dávkovou jednotkou kapsula, môže okrem látok vyššie uvedeného typu obsahovať kvapalný nosič. Rôzne ďalšie látky môžu byť prítomné ako povlaky alebo môžu inak modifikovať fyzikálnu formu dávkovej jednotky. Napríklad tablety, pilulky alebo kapsuly môžu byť povlečené šelakom, cukrom alebo oboma. Sirup alebo elixír môže obsahovať účinnú zlúčeninu, sacharózu ako sladidlo, metyl- a propylparabény ako konzervačný prostriedok, farbivo a ochucovadlo, ako je čerešňová alebo pomarančová príchuť. Každá látka, použitá pri príprave všetkých jednotkových dávkových foriem, by samozrejme mala byť farmaceutický čistá a v použitom množstve v podstate netoxická. Účinná zlúče31 nina môže byť ďalej zabudovaná do prípravkov a formulácií s trvalým uvoľňovaním.For example, it may be administered concomitantly with enzyme inhibitors or in liposomes. Enzyme inhibitors include a pancreatic trypsin inhibitor, diisopropyl fluorophosphate (DEP), and trasylol. Liposomes include water-in-oil-in-water CGF emulsions as well as conventional liposomes (Strejan et al. (1984), J. Neuroimmunol. 7:27). When the peptide is suitably protected as described above, it can be administered orally, for example with an inert diluent or with an assimilable edible carrier. The peptide preparation and other ingredients may also be enclosed in a hard or soft shell gelatin capsule, compressed into tablets, or incorporated directly into an individual's diet. For oral therapeutic administration, the active compound may be incorporated into vehicles and used in the form of swellable tablets, buccal tablets, lozenges, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, and the like. These compositions and preparations should contain at least 1% by weight of the active compound. The percentage of the composition or preparation may, of course, be varied and preferably may be between about 5 and 80% by weight of the unit. The amount of active compound in these therapeutically useful compositions is such that a suitable dosage will be obtained. Preferred compositions or compositions of the invention are prepared so that the oral dosage unit contains between about 10 µg and about 200 mg of the active compound. Tablets, lozenges, pills, capsules and the like. they may also include: a binder such as gum tragacanth, acacia, corn starch or gelatin, vehicles such as dicalcium phosphate, a disintegrant such as corn starch, potato starch, alginic acid and the like, a lubricant such as magnesium stearate, and a sweetening agent such as sucrose, lactose or saccharin, or a flavoring agent such as peppermint, methyl salicylate or cherry flavoring. When the dosage unit is a capsule, it may contain, in addition to substances of the above type, a liquid carrier. Various other substances may be present as coatings or may otherwise modify the physical form of the dosage unit. For example, tablets, pills, or capsules may be coated with shellac, sugar, or both. A syrup or elixir may contain the active compound, sucrose as a sweetening agent, methyl and propyl parabens as a preservative, a colorant and a flavoring such as cherry or orange flavor. Of course, any agent used in the preparation of all unit dosage forms should be pharmaceutically pure and substantially non-toxic in the amounts used. The active compound 31 can further be incorporated into sustained release formulations and formulations.

Pri injekčnej aplikácii (subkutánnej, i.v., im., intraperitoneálnej) jedného alebo viac prípravkov podľa vynálezu môže byť na jednotkovú dávku podávané prednostne asi 1 gg až 3 mg, výhodne asi 20 gg až 1,5 mg, najmä asi 50 až 750 gg a obzvlášť asi 75 až asi 750 gg každej účinnej zlúčeniny (peptidu). V závislosti od ďalej opísaného režimu môžu byť použité dávky až 1500 gg alebo viac. Zvlášť výhodné je formulovať do dávkových jednotiek parenterálne prípravky pre ľahkosť podávania a rovnomernosť dávkovania. „Jednotková dávka“ tu označuje fyzikálne diskrétne jednotky, vhodné ako jednorázové dávky pre ošetrované ľudské subjekty, pričom každá jednotka obsahuje vopred stanovené množstvo účinnej zlúčeniny, vypočítané tak, aby poskytlo požadovaný terapeutický účinok, v spojení s požadovaným farmaceutickým nosičom. Konkrétne požiadavky na nové dávkové formy podľa vynálezu sú určované a priamo závislé od (a) špecifických charakteristík účinnej zlúčeniny a od konkrétneho dosahovaného terapeutického účinku a (b) od obmedzení vyplývajúcich z metódy formulácie tejto účinnej zlúčeniny pre ošetrovanie ľudských subjektov.When injected (subcutaneous, iv, im, intraperitoneal) of one or more of the formulations of the invention, preferably about 1 gg to 3 mg, preferably about 20 gg to 1.5 mg, especially about 50 to 750 gg, can be administered per unit dose, and in particular about 75 to about 750 gg of each active compound (peptide). Depending on the regimen described below, doses up to 1500 gg or more may be used. It is particularly advantageous to formulate parenteral formulations in dosage units for ease of administration and uniformity of dosage. "Unit dose" refers to physically discrete units suitable as single doses for human subjects to be treated, each unit containing a predetermined amount of active compound calculated to produce the desired therapeutic effect in association with the required pharmaceutical carrier. Particular requirements for the novel dosage forms of the invention are determined and directly dependent upon (a) the specific characteristics of the active compound and the particular therapeutic effect achieved and (b) the limitations resulting from the method of formulation of the active compound for the treatment of human subjects.

Dávkový režim môže byť upravený na dosiahnutie optimálnej profylaktickej alebo terapeutickej odpovede. Môže byť napríklad v priebehu dní, týždňov, mesiacov alebo rokov podávaných niekoľko delených dávok alebo sa dávky môžu s každou ďalšou injekciou úmerne zvyšovať alebo znižovať podľa požiadaviek terapeutickej situácie. V jednom výhodnom terapeutickom režime sa subkutánne injekcie terapeutických prípravkov podávajú jeden raz denne počas akútnej fázy a jeden raz za dva dni počas remisie počas doby života jedinca trpiaceho chorobou. Ako alternatívy je možné injekcie podávať týždenne, mesačne alebo v iných periódach. Dávka môže zostávať pri každej injekcii konštantná alebo sa môže s každou ďalšou injekciou zvyšovať alebo znižovať. Optimálne môže byť trvalý liečebný program pre celú dobu života. Ako alternatíva je možné v intervaloch asi troch mesiacov až asi jedného roku po počiatočnej dobe liečby podávať posilňovaciu injekciu, ktorá môže byť jednorázová alebo môže zahrnovať ďalší rad injekcií podobne ako pri počiatočnej liečbe.The dosage regimen may be adjusted to achieve an optimal prophylactic or therapeutic response. For example, several divided doses may be administered over days, weeks, months, or years, or may be increased or decreased proportionally with each subsequent injection as required by the therapeutic situation. In one preferred therapeutic regimen, subcutaneous injections of therapeutic agents are administered once daily during the acute phase and once every two days during remission during the life of the individual suffering from the disease. As alternatives, the injections may be given weekly, monthly or other periods. The dose may remain constant for each injection or may be increased or decreased with each additional injection. A permanent treatment program for the whole life can be optimal. As an alternative, a booster injection may be given at intervals of about three months to about one year after the initial treatment period, which may be a single injection or include an additional series of injections similar to the initial treatment.

V dôsledku vysoko individuálnej odpovede imunitného systému jedincov trpiacich relapsujúcou remitujúcou MS, primárnou progresívnou MS, benígnou MS a chronickou progresívnou MS je nutné vyvíjať dôkladný a premenlivý dávkový režim. Najprv musí byť dokončené hodnotenie príjmu pacientom. Uskutoční sa kompletné vyšetrenie za účelom zistenia okrem iného zhoršeného videnia, nystagmu, chybnej výslovnosti, zníženého vnímania vibrácií a polohového zmyslu, ataxie a chvenia končatiny pred dotykom, slabosti alebo paralýzy jednej alebo viac končatín, spasticity a problémov s močovým mechúrom. Odborník stanoví pomocou zavedených metód, ako je EDSS, Neurological Rating Scale alebo iné podobné známe prostriedky, rovnako ako vyššie diskutovaných indícií chorobného stavu základnú hodnotu, voči ktorej bude možné merať akúkoľvek zmenu, zahrnujúcu postup, ale prednostne tlmenie invalidity. Aj keď neexistuje typická akútna alebo remitujúca fáza MS, objavili sa určité schémy, ktoré môžu byť vodítkom skúsenému praktikovi. Ako je vyššie uvedené, frekvencia recidív alebo akútnych stavov je najväčšia počas prvých 3 až 4 rokov choroby, ale po prvom záchvate nemusí nasledovať ďalší pozorovateľný záchvat počas doby 10 až 20 rokov (hoci zaťaženie léziami detegovateľné iba MRI môže poskytovať iný klinický obraz). Počas typických epizód sa príznaky zhoršujú počas doby niekoľkých dní až 2 až 3 týždňov a potom ustupujú. Zotavenie je obvykle rýchle počas týždňov, aj keď občas sa môže pretiahnuť aj vyše niekoľkých mesiacov.Due to the highly individual immune response of individuals suffering from relapsing remitting MS, primary progressive MS, benign MS, and chronic progressive MS, a thorough and variable dose regimen should be developed. Patient income assessment must first be completed. A complete examination shall be performed to detect, inter alia, impaired vision, nystagmus, misspellings, decreased perception of vibration and posture, ataxia and tremor of the limb before touch, weakness or paralysis of one or more limbs, spasticity and bladder problems. One of ordinary skill in the art will determine, by established methods such as EDSS, Neurological Rating Scale or other similar known means, as well as the above-discussed indications of a disease state, a baseline against which any change, including procedure but preferably disability suppression, can be measured. Although there is no typical acute or remitting phase of MS, certain schemes have emerged that may guide the experienced practitioner. As mentioned above, the frequency of relapses or acute conditions is greatest during the first 3 to 4 years of disease, but the first seizure may not be followed by another observable seizure for 10 to 20 years (although lesion load detectable only by MRI may provide a different clinical picture). During typical episodes, symptoms worsen over a period of several days to 2 to 3 weeks and then subside. Recovery is usually fast in weeks, although it can sometimes stretch over several months.

MS je chronické ochorenie a predpokladá trvalú liečbu. V jej priebehu môže byť na zastavenie postupu choroby a invalidity najúčinnejšia dlhodobá liečba. Vhodný môže byť dávkový režim obdeň, aspoň jeden raz týždenne alebo jeden raz mesačne. Primerané modifikácie sú v rozsahu možností skúseného odborníka. Intervencia pri nástupe záchvatu sa považuje za významnú súčasť účinnej liečby.MS is a chronic disease and presupposes continued treatment. During this process, long-term treatment may be most effective in stopping disease progression and disability. A dosing regimen may be appropriate every other day, at least once a week or once a month. Appropriate modifications are within the skill of the art. Intervention at seizure onset is considered to be an important part of effective treatment.

U pacienta vykazujúceho akútne štádium musí byť zhodnotená sila záchvatu. Pri nástupe akútneho štádia môže byť podaná počiatočná injekcia. Zrejmým prínosom je zahájenie liečby čo najskôr počas akútnej fázy. Keď je to žiadúce, môže byť táto terapia kombinovaná so súčasnou liečbou β-interferónom, steroidmi a/alebo s inými terapiami, najmä určenými na znižovanie zápalov. Pacient t 33 by mal byť po prvom ošetrení, prednostne injekciou, denne pozorovaný. Počas akútnej fázy sa navrhuje aplikácia ďalšej liečby denne alebo aspoň každý tretí deň. Ako u každej medikácie by mal ošetrujúci lekár dávkovanie modifikovať na základe klinických zmien, ktoré indikujú potrebu modifikácie. Každá takáto úvaha je v rámci skúseností odborníka, riadiaceho sa navrhnutým dávkovým rozvrhom a podávaným množstvom. Rozsah dávok od asi 75 do asi 750 pg na dávku poskytuje ošetrujúcemu lekárovi dostatočnú šírku, ale nie neprimerané množstvo). Možnosti zahrnujú, avšak bez toho, aby sa na ňu obmedzovali, dennú liečbu počas akútnej fázy, po ktorej nasleduje vyššie opísaná liečba určená pre remisiu. To však nijako nevylučuje možnosť viac alebo menej častého dávkovania, keď stanoví ošetrujúci lekár, že je indikovaná intervencia.The severity of the seizure should be evaluated in a patient presenting with an acute stage. At the onset of the acute stage, an initial injection may be given. The obvious benefit is to start treatment as soon as possible during the acute phase. If desired, this therapy may be combined with concomitant treatment with β-interferon, steroids and / or other therapies, particularly designed to reduce inflammation. Patient t 33 should be observed daily after the first treatment, preferably by injection. During the acute phase, it is proposed to administer additional therapy daily or at least every third day. As with any medication, the attending physician should modify the dosage based on clinical changes indicating a need for modification. Any such consideration is within the skill of the skilled artisan, guided by the proposed dosage schedule and the amount administered. A dosage range of from about 75 to about 750 pg per dose provides the attending physician with a sufficient width, but not inadequate amount). Options include, but are not limited to, daily treatment during the acute phase, followed by the treatment described above for remission. However, this does not preclude the possibility of more or less frequent dosing when the attending physician determines that intervention is indicated.

Podľa vynálezu sa uvádza, že peptidy a prípravky podľa vynálezu môžu byť použité na liečenie a na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex v „pokročilom štádiu“. Na liečbu pokročilého štádia MS sú vhodné prípravky zahrnujúce aspoň jeden peptid s aktivitou T buniek, odvodený od myelínového autoantigénu. Na liečbu pokročilého štádia MS sú vhodné vyššie opísané prípravky MBP peptidov, MOG peptidov a ich kombinácie. Ako je vyššie uvedené, neobmedzujúcimi príkladmi týchto peptidov sú: MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 8899 (SEQ ID NO: 45), 1 11-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142166 (SEQ ID NO. 50), 142-168 (SEQ ID NO. 51), 146-160 (SEQ ID NO:According to the invention, it is stated that the peptides and compositions of the invention may be used for the treatment and preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in an "advanced stage". Compositions comprising at least one peptide with T cell activity derived from myelin autoantigen are suitable for the treatment of advanced MS. The above-described preparations of MBP peptides, MOG peptides and combinations thereof are suitable for the treatment of advanced MS. As mentioned above, non-limiting examples of these peptides are: MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 2). MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP -2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO) MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82- 92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39) ), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [ 91K > A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 8899 (SEQ ID NO: 45), 1111-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO. NO. 48), 139170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142166 ( SEQ ID NO. 50), 142-168 (SEQ ID NO. 51), 146-160 (SEQ ID NO.

52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53) a prednostne MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), rovnako ako peptidy odvodené od ľudského MOG:52) and 153-170 (SEQ ID NO: 53) and preferably MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP- 5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), as well as peptides derived from human MOG:

ľudský MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) ľudský MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) ľudský MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) ľudský MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) ľudský MOG 11-30 (SEQ ID NO: 58) ľudský MOG 21-40 (SEQ ID NO: 59) ľudský MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) ľudský MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) ľudský MOG 151-170 (SEQ ID NO. 62) ľudský MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) ľudský MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64)human MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) human MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) human MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) human MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) human MOG 11-30 (SEQ ID NO: 58) human MOG 21-40 (SEQ ID NO: 59) human MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) human MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) human MOG 151- 170 (SEQ ID NO. 62) human MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) human MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64)

GQFRVIGPRHPIRGQFRVIGPRHPIR

HSYQEEAAMELKVHSYQEEAAMELKV

GQFRVIGPRHPIRALGDEVGQFRVIGPRHPIRALGDEV

ELPCRTSPGKNATGMEVGWYELPCRTSPGKNATGMEVGWY

RPPFSRVVHLYRNGKDQDGDRPPFSRVVHLYRNGKDQDGD

QAPEYRGRTELLKDAIGEGKQAPEYRGRTELLKDAIGEGK

VTLRIRNVRFSDEGGFTCFFVTLRIRNVRFSDEGGFTCFF

RDHSYQEEAAMELKVEDPFYWRDHSYQEEAAMELKVEDPFYW

GQFRVIGPRHPIRALVGDEV,GQFRVIGPRHPIRALVGDEV.

PIRALVGDEVELPCRISPGK,PIRALVGDEVELPCRISPGK.

ELPCRISPGKNATGMEVGWY,ELPCRISPGKNATGMEVGWY.

NATGMEVGWYRPPFSRVVHL,NATGMEVGWYRPPFSRVVHL.

TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE,TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE.

YRLRGKLRAEIENLHRTFDP,YRLRGKLRAEIENLHRTFDP.

IENLHRTFDPHFLRVPCWKI aIENLHRTFDPHFLRVPCWKI a

YNWLHRRLAGQFLEELRNPFYNWLHRRLAGQFLEELRNPF

Pôvodcovia tohto vynálezu ako prví urobili prekvapujúci objav, že intervencia uprostred nastupujúceho záchvatu aktuálne zlepšuje stav subjektu, liečeného spôsobom podľa vynálezu. Prinajmenšom takáto intervencia nezhoršuje stav subjektu. Pôvodcovia ďalej preukázali, že intervencia počas remisie tlmí imunitnú odpoveď a v dôsledku takejto intervencie nedochádza k aktivácii stavu. Intervencia teda môže nielen spôsobiť zlepšenie, ale zdá sa, že keď je aplikovaná spôsobom podľa vynálezu, je úplne bezpečná. Na použití vyššie opísaného moλ 35 delu ΕΑΕ pôvodcovia demonštrovali, že opakované intravenózne podávanie imunodominantného MBP peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65) úspešne lieči EAE, vyvolanú úplným MBP proteínom. Jedna úspešná liečba (indikujúca reaktivitu T buniek) sa preukázala u „natívneho peptidu“ (nesubstituovaný peptid odvodený od natívnej sekvencie postupom tu opísaným na identifikáciu peptidov obsahujúcich epitop T buniek, odvodených od bielkovinového autoantigénu); vhodné modifikované peptidy môžu byť identifikované porovnaním väzbových afinít modifikovaného peptidu s natívnym peptidom. Modifikovaný peptid, ktorý má väzbovú afinitu nižšiu ako natívny peptid, bude vhodným kandidátom ako peptid pre terapeutický prípravok podľa tohto vynálezu. Testy na stanovenie väzbovej afinity môžu byť identifikované z údajov v USSN 08/30081 1 s dátumom podania 1.9.1994, zahrnutom tu ako odkaz. Napríklad terapia s Acl-11 (SEQ ID NO: 65) sa ukázala ako úspešná. Terapia s Acl-11 (SEQ ID NO: 65) potom bola porovnaná s terapiou pomocou Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67), čo je analóg Acl11(SEQ ID NO: 65), ktorý sa viaže na A“A“ s vyššou afinitou a väčšiu stabilitou (Wraith, D.C. a d’., viď vyššie, a Fairchild, P.J. a ď., viď vyššie). Zaujímavé je zistenie pôvodcov, že Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) je účinný pri lOOnásobne nižšej dávke ako Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a jeho terapeutický účinok je dlhodobejší, čo naznačuje, že pre terapeutický prípravok sú vhodné i vybrané modifikované peptidy. Prihlasovateľ ďalej preukazuje, že konkrétny testovaný peptid Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) tvorí u ošetrovanej myši in vivo stabilný komplex peptid-MHC. Z toho vyplýva, že modifikované peptidy, ktoré tvoria in vivo stabilné komplexy peptid-MHC, budou s vysokou pravdepodobnosťou vhodné na liečbu ľudí, pretože ich účinok sa môže veľmi zvýšiť pri konzervatívnych substitúciách aminokyselín (viď tiež Karin a ď., J. Exp. Med., 180:2227-2237 (1994)). Pôvodcovia tiež zistili, že analóg MBP peptidu Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zvrátil nastupujúcu paralýzu, keď bol podávaný počas akútnej fázy EAE a bránil relapsom, ak bol podávaný počas remisie. To ukazuje, že vybrané modifikované peptidy a vybrané analógy peptidov môžu zvrátiť aktívne príznaky a zabrániť relapsom u ľudí trpiacich MS.The present inventors were the first to make a surprising discovery that intervention in the midst of a seizure actually improves the condition of a subject treated by the method of the invention. At least such intervention does not worsen the condition of the subject. The inventors have further demonstrated that intervention during remission inhibits the immune response and does not trigger the condition as a result of such intervention. Thus, the intervention may not only bring about an improvement, but appears to be completely safe when applied by the method of the invention. Using the above-described moλ 35 del ΕΑΕ, the inventors have demonstrated that repeated intravenous administration of immunodominant MBP peptide Acl-11 (SEQ ID NO: 65) successfully treats EAE induced by full MBP protein. One successful treatment (indicating T cell reactivity) has been demonstrated for a "native peptide" (an unsubstituted peptide derived from a native sequence by the procedure described herein to identify peptides containing a T cell epitope derived from a protein autoantigen); suitable modified peptides can be identified by comparing the binding affinities of the modified peptide to the native peptide. A modified peptide having a binding affinity lower than the native peptide will be a suitable candidate as a peptide for the therapeutic composition of the invention. Binding affinity assays can be identified from the data in USSN 08/30081 1 with a filing date September 1, 1994, incorporated herein by reference. For example, therapy with Acl-11 (SEQ ID NO: 65) has been shown to be successful. Therapy with Acl-11 (SEQ ID NO: 65) was then compared to Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67), an analog of Acl11 (SEQ ID NO: 65) that binds to A ' A 'with higher affinity and greater stability (Wraith, DC and d'., Supra, and Fairchild, PJ et al., Supra). Interestingly, we find that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) is effective at 100 times lower than Acl-11 (SEQ ID NO: 65) and its therapeutic effect is longer lasting, suggesting that for a therapeutic preparation selected modified peptides are also suitable. The Applicant further demonstrates that the particular Acl-11 [4Y] peptide tested (SEQ ID NO: 67) forms a stable peptide-MHC complex in vivo in the treated mouse. Accordingly, modified peptides that form in vivo stable peptide-MHC complexes will most likely be useful in the treatment of humans since their effect may greatly increase with conservative amino acid substitutions (see also Karin et al., J. Exp. Med., 180: 2227-2237 (1994)). We also found that the Acl-11 [4Y] MBP peptide analogue (SEQ ID NO: 67) reversed onset paralysis when administered during the acute phase of EAE and prevented relapses when administered during remission. This demonstrates that selected modified peptides and selected peptide analogs can reverse active symptoms and prevent relapses in people suffering from MS.

V ďalšom modeli priebehu ľudskej choroby zahájili pôvodcovia intravenózne peptidovú terapiu po nástupe EAE a počas akútnej fázy. Celkom prekvapujúco táto terapia, aplikovaná počas akútnej fázy, zvrátila nastupujúcu chorobu. Toto zistenie je prvé svojho druhu. V skorších experimentoch, uskutočňovaných aj inými pracovníkmi, bola peptidová terapia zahájená v dobe, kedy väčšina myší v ošetrovanej skupine ešte nevykazovala známky EAE, najneskôr pred imunizáciou alebo v blízkosti nástupu choroby. Napríklad v práci Gaura a ď., viď vyššie, bola skupina 13 myší vystavená režimu MBP provokujúcemu chorobu. Akonáhle vykazovala iba jedna z 13 myši minimálne známky choroby, t.j. jedna myš mala klinický záznam 1 (diskusia klinického hodnotenia myší viď príklad 2), bola siedmim myšiam intraperitoneálne injekčné aplikovaná zmes MBP peptidov. Zostávajúcich šesť myší, jednou z ktorých bola myš vykazujúca známky choroby, nedostalo žiadne ďalšie ošetrenie. V tomto prípade nie sú Gaur a ď. schopní pre myši bez klinických príznakov choroby vyvodiť z týchto údajov zmysluplný záver. Prítomnosť nízkeho klinického záznamu 1 u jednej myši nemôže byť interpretovaná tak, že indikuje aktívnu chorobu u ktorejkoľvek z ostatných myší. Preto Gaur a ď. opisujú liečbu pred nástupom choroby a rozhodne pred klinickými známkami choroby. Naproti tomu, aby bola použiteľná pri klinickom nasadení pri liečbe ľudí s MS, musela by terapia byť účinná, aj keby bola zahájená až po nástupe chorobného procesu. Ako model príslušnej ľudskej terapie podávali pôvodcovia peptidovú terapiu myšiam, pričom zahajovali s 250 nmól Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) po nástupe akútnej fázy EAE. Účinok tejto terapie je znázornený na obr. 5. Terapia bola zahájená individuálne u každej myši, akonáhle vykazovala počiatočné známky EAE. Keď myši vyvinuli EAE, boli zaradené do skupiny terapie s peptidom Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) a do každej z troch kontrolných skupín (bez ošetrenia, PBS alebo peptid OVA 323-337 (SEQ ID NO: 70) viažúci sa na A^UA“). Obr. 9 ukazuje, že terapia s Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) pri nástupe EAE vedie k dramatickému zlepšeniu charakteristík choroby, zjavnému do 48 h po počiatočnej injekcii peptidu. U týchto ošetrovaných myší EAE temer zmizla do štvrtého dňa po nástupe a účinok 18denného behu peptidovej terapie bol predĺžený.In another human disease model, we initiated intravenous peptide therapy after the onset of EAE and during the acute phase. Quite surprisingly, this therapy, applied during the acute phase, reversed the emerging disease. This finding is the first of its kind. In earlier experiments, also performed by other workers, peptide therapy was initiated at a time when most mice in the treatment group had not yet exhibited signs of EAE, at the latest before immunization or near the onset of the disease. For example, in Gaura et al., Supra, a group of 13 mice were exposed to a disease-inducing MBP regimen. Once only one of the 13 mice showed minimal signs of disease, ie one mouse had clinical record 1 (for discussion of the clinical trial of mice see Example 2), seven mice were injected intraperitoneally with a mixture of MBP peptides. The remaining six mice, one of which was a mouse showing signs of disease, received no further treatment. In this case, Gaur et al. able to draw meaningful conclusions from these data for mice without clinical disease symptoms. The presence of a low clinical record 1 in one mouse cannot be interpreted to indicate active disease in any of the other mice. Therefore, Gaur et al. describe treatment prior to the onset of the disease and certainly before clinical signs of the disease. In contrast, in order to be useful in clinical use in the treatment of people with MS, therapy would have to be effective even if initiated after the onset of the disease process. As a model of appropriate human therapy, we administered peptide therapy to mice, starting with 250 nmol of Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) after the onset of the acute phase of EAE. The effect of this therapy is shown in FIG. 5. Therapy was initiated individually in each mouse once it showed initial signs of EAE. When mice developed EAE, they were assigned to the Acl-11 [4Y] peptide therapy group (SEQ ID NO: 67) and to each of the three control groups (untreated, PBS or OVA 323-337 peptide (SEQ ID NO: 70)). related to A ^U A '). Fig. 9 shows that therapy with Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) on the onset of EAE results in a dramatic improvement in disease characteristics, evident up to 48 h after the initial peptide injection. In these treated mice, EAE nearly disappeared by day 4 after onset and the effect of the 18-day run of peptide therapy was prolonged.

.......57....... 57

Počas ďalšieho prekvapujúceho vývoja pôvodcovia zistili, že intravenózna peptidová terapia zahájená počas remisnej fázy EAE zabraňuje relapsom. Pri použití EAE ako modelu pre ľudské ochorenie, ako je vyššie uvedené, si opäť myši (PLJ x SJL)F1 vyvíjajú po imunizácii s MBP relapsujúcu EAE (Fritz, R.B. a ď., J. Immunol., 1983, 130:1024). EAE sa vyvinie obvykle medzi 9 a 16 dňami po imunizácii a akútna fáza choroby v tomto modeli trvá približne 3 až 20 dní. Počas akútnej fázy môže 20 % alebo viac myší uhynúť alebo sa stať moribundnými v závislosti od intenzity choroby pri experimente. Väčšina zvierat, ktoré prežili akútnu fázu potom vstupuje do krátkej remisnej fázy, vykazujúcej počas niekoľkých dní mierne alebo žiadne klinické známky choroby. V niektorých experimentoch môžu myši vstúpiť do remisnej fázy všetky približne v rovnakom čase (znázornené na obr. 5), ale vo väčšine prípadov je dĺžka akútnej fázy premenlivejšia. Po remisnej fáze nasleduje prvá relapsová fáza, ktorá má všeobecne rovnakú silu ako akútna fáza choroby. Následne si prežívajúce myši vyvíjajú reziduálnu chronickú paralýzu, ktorá pretrváva do ukončenia experimentu.During a further surprising development, the inventors have found that intravenous peptide therapy initiated during the EAE remission phase prevents relapses. Using EAE as a human disease model, as described above, F1 mice (PLJ x SJL) again develop EAE after immunization with MBP (Fritz, R.B. et al., J. Immunol., 1983, 130: 1024). EAE usually develops between 9 and 16 days after immunization and the acute phase of the disease in this model lasts approximately 3 to 20 days. During the acute phase, 20% or more of the mice may die or become moribund depending on the intensity of the disease in the experiment. Most animals that have survived the acute phase then enter a short remission phase, showing few or no clinical signs of disease for a few days. In some experiments, mice may enter the remission phase all at about the same time (shown in Figure 5), but in most cases the length of the acute phase is more variable. The remission phase is followed by a first relapse phase, which generally has the same strength as the acute phase of the disease. Subsequently, surviving mice develop residual chronic paralysis which persists until the end of the experiment.

V myšom modeli predstavuje peptid Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) pozoruhodne účinnú terapiu, keď je zahájená počas remisnej fázy EAE. Za účelom vyšetrenia schopnosti Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zabraňovať relapsom EAE boli myši sledované počas počiatočných epizód paralýzy, ktoré trvali 3 až 19 dní. Pretože prežívajúce myši vstupovali do remisnej periódy jednotlivo (definovanej ako zníženie klinického záznamu na 1 alebo 0 počas doby aspoň dvoch dní), boli striedavo zaraďované do dvoch skupín a bola zahájená intravenózna terapia s 25 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) alebo s kontrolným PBS. Myši boli liečené individuálne počínajúc druhým dňom remisie. Obr. 10 ukazuje, že intravenózna aplikácia Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67), zahájená počas remisnej fázy EAE, dramaticky znížila výskyt a silu relapsov, a naznačuje, že intravenózna peptidová terapia môže byť účinná, aj keď sa zahajuje neskoršie v priebehu choroby.In the mouse model, the Acl-11 [4Y] peptide (SEQ ID NO: 67) represents a remarkably effective therapy when initiated during the EAE remission phase. In order to investigate the ability of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) to prevent EAE relapses, mice were observed during the initial paralysis episodes that lasted 3 to 19 days. As surviving mice entered the remission period individually (defined as reducing the clinical record to 1 or 0 for at least two days), they were alternately assigned to two groups and intravenous therapy with 25 nmol of Acl-11 [4Y] was initiated (SEQ ID NO: 67) or with PBS control. Mice were treated individually starting on the second day of remission. Fig. 10 shows that intravenous administration of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) initiated during the EAE remission phase dramatically reduced the incidence and strength of relapses, suggesting that intravenous peptide therapy may be effective even when initiated later in the course of the disease.

Mechanizmus intravenóznej peptidovej terapie doposiaľ nebol plne vysvetlený, aj keď už bolo u rôznych iných antigénových systémov naznačované, že podávanie antigénneho peptidu intravenózne pred imunizáciou vyvoláva antígéJ 138 novo špecifickú nereaktivitu imunitného systému. Ako ďalší dôkaz účinnosti terapeutika podávaného pacientom s MS podávali pôvodcovia i.v. encefalitogénny peptid alebo analóg peptidu a zistili, že znižuje in vitro proliferáciu lymfatických uzlín a produkciu IL2. Myšiam bolo desať a päť dní pred imunizáciou s MBP proteínom intravenózne aplikované 250 nmól MBP Acl-11(SEQ ID NO: 65). Obr. 11a ukazuje proliferatívnu odpoveď lymfatických uzlín týchto ošetrených myší, meranú na 10. deň po imunizácii. Predbežné intravenózne ošetrenie imunodominantným MBP peptidom Acl-11(SEQ ID NO: 65) bez vehikula pred imunizáciou znižuje následnú proliferatívnu odpoveď T buniek in vitro na MBP Acl-11(SEQ ID NO: 65). Podobné výsledky boli získané, keď boli myši vopred ošetrené intravenóznymi injekciami analógom MBP peptidu Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) (údaje neznázornené). Naviac bolo intravenóznym predbežným ošetrením s Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zabránené produkcii IL2 lymfatickými uzlinami v reakcii na MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) (obr. 11b). Tieto výsledky potvrdzujú, že intravenózne predbežné ošetrenie pomocou MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) alebo Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) indukuje nereaktivitu T buniek na MBP Acl-11(SEQ ID NO: 65).The mechanism of intravenous peptide therapy has not yet been fully explained, although it has been suggested in various other antigenic systems that administration of the antigenic peptide intravenously prior to immunization induces anti-Ag 138 as a newly specific immune system reactivity. As further evidence of the efficacy of the therapeutic administered to MS patients, the inventors administered i.v. encephalitogenic peptide or peptide analogue and found to reduce in vitro lymph node proliferation and IL2 production. Mice were injected intravenously with 250 nmol MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) ten and five days prior to immunization with MBP protein. Fig. 11a shows the lymph node proliferative response of these treated mice, measured on day 10 after immunization. Pre-intravenous treatment with an immunodominant MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) without vehicle prior to immunization reduces the subsequent in vitro T cell proliferative response to MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Similar results were obtained when mice were pre-treated with intravenous injections of the MBP peptide analog of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (data not shown). In addition, intravenous pretreatment with Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) prevented the production of IL2 by lymph nodes in response to MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) (Fig. 11b). These results confirm that intravenous pretreatment with MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) or Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) induces T cell unreactivity to MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) .

Pôvodcovia tak skúmali účinnosť intravenóznej terapie pomocou MBP peptidov a peptidových analógov pri liečbe relapsujúcej EAE a urobili rad jedinečných pozorovaní. Prvé a pravdepodobne najvýznamnejšie spočíva v tom, že liečba autoimunitného ochorenia jedným autoantigénnym peptidom môže byť účinná aj vtedy, keď je zahájená po nástupe príznakov ochorenia. Špecifické znaky ochorenia, používané na hodnotenie myší, sú diskutované v príkladoch uskutočnenia. Hodnotenie bodom 2 alebo viac na stupnici Mean Clinical Score bolo definované ako pokročilé štádium EAE. Výsledky naznačujú, že intravenózne MBP peptidy interferujú s encefalitogénnou aktivitou autoagresívnych imunizovaných buniek aj potom, čo bola prerušená mozgová krvná bariéra a došlo k lymfocytickej infiltrácii centrálneho nervového systému. V žiadnom časovom intervale nebolo pozorované, že by peptidy aspoň dočasne aktivovali, zhoršovali alebo exacerbovali nastupujúcu chorobu. EAE, ošetrená po nástupe akútnej fázy, bola zvrátená do niekoľkých dní po zahájení terapie, aj keď boli ošetrované myši pôvodne silne napadnuté. Histologické vyšetrenie potvrdilo, že klinická odpoveď na peptidovú terapiu korelovala s výrazným znížením lymfocytických infiltrátov do mozgu a miechy. Ako je tu diskutované, bola teda i.v. aplikácia MBP Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) účinná aj pri zahájení až 30 dní po imunizácii s MBP, v remisnej fáze EAE. Zahájenie liečby počas zdanlivo kľudovej fázy choroby teda opäť neviedlo k exacerbáciám a naviac úplne zamedzilo všetkým okrem najmiernejších relapsov. Tento výsledok je obzvlášť zaujímavý, pretože existuje dôkaz, že rozpoznávanie rôznych MBP epitopov prebieha neskôr počas imunitnej odpovede na MBP, a bolo naznačené, že tieto epitopy môžu prispievať k chorobe (Lehmann, P.V. a ď., Náture, 1992, 358:155). Tento vynález naznačuje, že podávanie peptidu veľmi skoro v priebehu choroby by mohlo zabraňovať vývoju neskoršej imunitnej odpovede na tieto epitopy. Je však pozoruhodné, že jeden analóg MBP peptidu účinne zabraňoval relapsom, ak bol podávaný po rozptýlení silnej akútnej fázy EAE, kedy imunitná odpoveď na MBP a poprípade na iné myelínové antigény už mohla pokročiť.Thus, we investigated the efficacy of intravenous therapy with MBP peptides and peptide analogs in the treatment of relapsing EAE and made a number of unique observations. The first and probably most important is that treatment of an autoimmune disease with one autoantigenic peptide may be effective even if it is initiated after the onset of disease symptoms. The specific features of the disease used to evaluate mice are discussed in the Examples. A score of 2 or more on the Mean Clinical Score was defined as an advanced EAE stage. The results indicate that intravenous MBP peptides interfere with the encephalitogenic activity of auto-aggressive immunized cells even after the cerebral blood barrier has been disrupted and lymphocytic infiltration of the central nervous system. At no time interval, peptides were observed to at least temporarily activate, aggravate, or exacerbate the emerging disease. EAE, treated after the onset of the acute phase, was reversed within a few days after initiation of therapy, although the treated mice were initially heavily infected. Histological examination confirmed that the clinical response to peptide therapy correlated with a significant decrease in lymphocyte infiltrates into the brain and spinal cord. Thus, as discussed herein, i.v. administration of MBP Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) effective even at initiation up to 30 days after immunization with MBP, in the EAE remission phase. Thus, the initiation of treatment during the seemingly resting phase of the disease did not again lead to exacerbations and, moreover, completely prevented all but the slightest relapses. This result is particularly interesting because there is evidence that recognition of different MBP epitopes occurs later during the immune response to MBP, and it has been suggested that these epitopes may contribute to the disease (Lehmann, PV et al., Nature, 1992, 358: 155). . The present invention suggests that administration of the peptide very early in the course of the disease could prevent the development of a later immune response to these epitopes. It is noteworthy, however, that one analogue of the MBP peptide effectively prevented relapses when administered after the dispersal of the strong acute phase of EAE, when the immune response to MBP and possibly to other myelin antigens might have advanced.

Pri praktickom uskutočňovaní tohto vynálezu sa preferuje voľba účinného terapeutika, ktorá je opísaná vyššie. Pôvodcovia vynálezu ďalej odvodili, že jedným kritériom pre optimálnych peptidických kandidátov by boli peptidy s reaktivitou T buniek a vyššou väzbovou afinitou MBP ako u natívneho peptidu, ktoré tvoria stabilné komplexy s MHC triedy II in vivo. Pôvodcovia konkrétne zistili, že peptidický analóg MBP, ktorý tvorí in vivo stabilné komplexy s MHC triedy II, je účinnejší pri liečbe EAE ako Acl-11(SEQ ID NO: 65). Už predtým sa preukázalo, že peptidický analóg MBP Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) sa viaže na A“A^U s vyššou afinitou a že komplexy, tvorené in vitro medzi Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) a A^UA^U, sú stabilnejšie ako komplexy, vytvorené medzi Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a A“A^U. Ukázalo sa tiež, že Acl-1 1 [4Y] (SEQ ID NO: 67) zabraňuje EAE, keď je inhalovaná veľká dávka pred imunizáciou (Metzler, B. a ď., viď vyššie). Tento vynález uvádza, že modifikovaný MBP peptidový analóg Acl11[4Y] (SEQ ID NO: 67) je aspoň lOOnásobne účinnejší ako terapeutický prostriedok než MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a vyžaduje aplikačnú schému s menšou frekvenciou dávok. Dôsledkom tejto zvýšenej účinnosti je terapeutikum,In practicing the present invention, it is preferred to select an effective therapeutic as described above. We further concluded that one criterion for optimal peptide candidates would be peptides with T cell reactivity and a higher MBP binding affinity than the native peptide, which forms stable complexes with MHC class II in vivo. In particular, we have found that the peptide analogue of MBP, which forms in vivo stable complexes with MHC class II, is more effective in treating EAE than Acl-11 (SEQ ID NO: 65). It has previously been shown that the peptide analog of MBP Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) binds to A "A ^U with higher affinity and that complexes formed in vitro between Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO) 67) and A ^U A ^U , are more stable than the complexes formed between Acl-11 (SEQ ID NO: 65) and A ^U A ^U. It has also been shown that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) prevents EAE when a large dose is inhaled prior to immunization (Metzler, B. et al., Supra). The present invention teaches that a modified MBP Acl11 [4Y] analogue peptide (SEQ ID NO: 67) is at least 100-fold more potent than a therapeutic agent than MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) and requires a lower dose frequency delivery schedule. As a result of this increased efficacy,

139a ktoré je jednak praktickejšie a jednak účinnejšie. Pôvodcovia pozorovali, že intravenózna aplikácia Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67)(ale nie Acl-11 (SEQ ID NO. 65)) vedie ku tvorbe stabilných komplexov peptid-MHC in vivo. Má sa za to, že zlepšená účinnosť Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) súvisí s touto tvorbou stabilných komplexov peptid-MHC. Tieto komplexy sú detegovateľné na slezinových bunkách pomocou hybridómu špecifického pre MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) počas doby až 10 h po injekcii. Má sa preto za to, že tvorba stabilných komplexov peptid-MHC môže byť jedným z charakteristických znakov takéhoto terapeuticky účinného peptidu. Terapeutický účinok Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) in vivo bol prekvapujúco prítomný dlho potom, čo sa komplexy peptid-MHC stali nedetegovateľnými na slezinových bunkách (viď obr. 6a a 9). Je pravdepodobné, že komplexy peptid-MHC tvoria antigénovo špecifické funkčné terapeutické jednotky, ktoré vykazujú dlhodobý účinok na encefalitogénne T bunky, pretrvávajúce aj potom, čo komplexy už nie sú detegovateľné in vivo. Nie je známe, či tieto komplexy vykazujú svoj účinok periférne alebo v centrálnom nervovom systéme. Ak operujú v centrálnom nervovom systéme, môžu tu komplexy vznikať alebo môžu bunky, nesúce tieto komplexy, migrovať cez bariéru krv-mozog.139a which is both practical and effective. We have observed that intravenous administration of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (but not Acl-11 (SEQ ID NO. 65)) results in the formation of stable peptide-MHC complexes in vivo. The improved efficacy of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) is believed to be related to this formation of stable peptide-MHC complexes. These complexes are detectable on spleen cells by the MBP-specific hybridoma Acl-11 (SEQ ID NO: 65) for up to 10 h after injection. It is therefore believed that the formation of stable peptide-MHC complexes may be one of the hallmarks of such a therapeutically active peptide. Surprisingly, the therapeutic effect of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) in vivo was surprisingly present long after peptide-MHC complexes became undetectable on spleen cells (see Figures 6a and 9). Peptide-MHC complexes are likely to form antigen-specific functional therapeutic units that exhibit a long-term effect on encephalitogenic T cells, persisting even after the complexes are no longer detectable in vivo. It is not known whether these complexes exert their effects peripherally or in the central nervous system. When operating in the central nervous system, the complexes may be formed, or the cells carrying the complexes may migrate across the blood-brain barrier.

Vynález ďalej poskytuje použitie aspoň jedného peptidu MBP majúceho aktivitu T buniek na prípravu liečiva k liečebnému režimu na liečenie sklerózy multiplex v kombinácii s pôsobením IFN-β v terapeuticky účinných množstvách.The invention further provides the use of at least one MBP peptide having T cell activity for the preparation of a medicament for a treatment regimen for the treatment of multiple sclerosis in combination with IFN-β treatment in therapeutically effective amounts.

Ako výsledok opísanej práce bolo objavené, že kombinácia aspoň jedného peptidu majúceho aktivitu T buniek, odvodeného od myelínových antigénov (napríklad MBP) a IFN-β, keď sa podáva v terapeutickom režime, má synergický účinok (obr. 12c), ktorý prekvapujúco znižuje klinické príznaky EAE u myši v ďaleko väčšom rozsahu ako je účinok každej zo zložiek na zmiernenie prizná40 kov EAE, ak sú podávané samostatne (obr. 12a až b), a ktorý je väčší, ako by bolo možné očakávať pre iba aditívny účinok peptidu plus IFN-β.As a result of the work described, it has been discovered that a combination of at least one peptide having T cell activity derived from myelin antigens (e.g. MBP) and IFN-β when administered in a therapeutic regimen has a synergistic effect (Fig. 12c) which surprisingly reduces clinical the EAE symptoms in the mouse far beyond the mitigating effect of each of the components will confer the 40 EAE metal when administered alone (Figs. 12a-b), and which is greater than would be expected for only the additive effect of the peptide plus IFN- β.

Pretože EAE slúži ako myší model ľudskej MS a je indukovaná rôznymi myelínovými antigénmi (napríklad PLP, MBP, MOG), očakáva sa, že podobný účinok bude pozorovaný i u ľudí. Vynález preto poskytuje použitie prípravku podľa vynálezu zahrnujúceho aspoň jeden peptid s aktivitou T buniek, odvodený od myelínového antigénu, prednostne v neimunogénnej forme, na prípravu liečiva na liečenie jedincov, ktorí majú sklerózu multiplex alebo sú náchylní k vyvinutiu sklerózy multiplex, v kombinácii s pôsobením IFN-β. Výhodné prípravky sú vyššie opísané prípravky podľa vynálezu, zahrnujúce MBP peptidy, rovnako ako MBP peptidy kombinované s MOG peptidmi, v kombinácii s pôsobením IFN-β súčasne alebo následne podávaným.Since EAE serves as a mouse model of human MS and is induced by various myelin antigens (e.g. PLP, MBP, MOG), a similar effect is expected to be observed in humans. The invention therefore provides the use of a composition of the invention comprising at least one peptide with T cell activity derived from a myelin antigen, preferably in non-immunogenic form, for the preparation of a medicament for treating individuals having multiple sclerosis or susceptible to multiple sclerosis in combination with IFN -β. Preferred formulations are those described above, comprising MBP peptides as well as MBP peptides combined with MOG peptides, in combination with IFN-β treatment simultaneously or sequentially administered.

Podávanie prípravku podľa vynálezu, zahrnujúceho aspoň jeden peptid s aktivitou T buniek myelínového antigénu v terapeutickom režime, ktorý zahrnuje podávanie IFN-β, môže byť uskutočňované známymi postupmi pri ďávkach a počas doby dostatočnej k účinnej redukcii, eliminácii alebo prevencii príznakov spojených so sklerózou multiplex. Účinné množstvo ako peptidu, tak IFN-β, podávaných spoločne v terapeutickom režime, sa mení v závislosti od vyššie opísaných faktorov. Účinné zlúčeniny (napríklad MBP peptid alebo kompozícia obsahujúca ho spolu s IFN-β) môžu byť podávané vhodným vyššie uvedeným spôsobom, napríklad injekčné (subkutánne, intravenózne atď ), orálne, inhalačné, transdermálne alebo rektálne.Administration of a composition of the invention comprising at least one peptide with myelin antigen T cell activity in a therapeutic regimen comprising administration of IFN-β may be accomplished by known dosing procedures and for a time sufficient to effectively reduce, eliminate or prevent symptoms associated with multiple sclerosis. The effective amount of both peptide and IFN-β co-administered in a therapeutic regimen varies depending on the factors described above. The active compounds (for example MBP peptide or a composition comprising it together with IFN-β) can be administered by a suitable route as described above, for example by injection (subcutaneously, intravenously, etc.), orally, by inhalation, transdermally or rectally.

Injekčné môže byť napríklad podávané asi 1 μg až 3 mg a výhodne asi 20 až 500 μg peptidu, odvodeného od myelínového antigénu, na dávkovú jednotku. Prednostne sa injekčné môže podávať dávková jednotka 100 až 10 000 jednotiek IFN-β. Dávkový režim týchto dvoch zlúčenín môže byť upravený, aby poskytoval optimálnu terapeutickú odpoveď. Napríklad môže byť podávaný súčasne IFN-β a prípravok podľa vynálezu alebo prednostne môžu byť podávané s aspoň 6 hodinovým odstupom, výhodne aspoň 12 hodinovým odstupom alebo najmä aspoň s 24 hodinovým odstupom. Terapeutický režim podávania antigénneho pep41 tidu a IFN-β môže trvať počas doby niekoľkých dní alebo týždňov a môže byť skracovaný alebo predlžovaný podľa požiadaviek terapeutickej situácie, ako je opísané vyššie.For example, about 1 µg to 3 mg and preferably about 20 to 500 µg of a myelin antigen-derived peptide may be injected per dosage unit. Preferably, a dosage unit of 100 to 10,000 units of IFN-β may be administered by injection. The dosage regimen of the two compounds may be adjusted to provide the optimal therapeutic response. For example, IFN-β may be administered simultaneously and the composition of the invention or preferably may be administered at least 6 hours apart, preferably at least 12 hours apart, or particularly at least 24 hours apart. The therapeutic regimen of administration of antigenic peptide41 and IFN-β may last for several days or weeks and may be shortened or prolonged as required by the therapeutic situation as described above.

Vynález taktiež poskytuje nový prípravok, zahrnujúci fyzikálnu zmes peptidu s aktivitou T buniek, odvodeného od myelínového antigénu, ako je MBP alebo MOG, a IFN-β vo farmaceutický prijateľnom nosiči alebo riedidle. Tento prípravok môže byť používaný ako súčasť terapeutického režimu na liečbu alebo prevenciu sklerózy multiplex u jedinca.The invention also provides a novel composition comprising a physical mixture of a peptide with T cell activity derived from a myelin antigen, such as MBP or MOG, and IFN-β in a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. The composition may be used as part of a therapeutic regimen for treating or preventing multiple sclerosis in an individual.

Všeobecne sa uznáva, že výsledkom špecifickej odpovede na určitý autoantigén, sprostredkovanej T bunkami, sú aj iné autoimunitné ochorenia, ako je diabetes typu I a reumatoidná artritída. Rôzne prístupy k liečbe autoimunitných ochorení, sprostredkovaných T bunkami, zahrnujú podávanie celých autoantigénov alebo od nich odvodených peptidov obsahujúcich epitopy T buniek pacientovi za účelom tlmenia odpovede sprostredkovanej T bunkami, zodpovednej za nepriaznivé príznaky autoimunitného ochorenia.It is generally recognized that specific autoantigen responses mediated by T cells also result in other autoimmune diseases such as type I diabetes and rheumatoid arthritis. Various approaches to the treatment of T cell mediated autoimmune diseases include administering whole autoantigens or peptides derived therefrom containing T cell epitopes to a patient to attenuate the T cell mediated response responsible for the adverse symptoms of autoimmune disease.

Okrem myelínových autoantigénov, ktoré hrajú určitú úlohu pri MS, bol nájdený rad antigénov (tj. autoantigénov), ktoré vyvolávajú chorobné príznaky u iných autoimunitných ochorení, ako je diabetes, Gravesova choroba, myasténia gravis, syndróm good pasture, psoriáza, tyreoiditídä a reumatoidná artritída (t.j. autoantigény, ako je inzulín, rh faktor, acetylcholínové receptory, receptory buniek štítnej žľazy, proteíny základnej membrány, bielkoviny štítnej žľazy, ICA69 (PM-1), dekarboxyláza kyseliny glutámovej (64K alebo 65 K), proteolipid, kolagén (typ II), proteín teplotného šoku a karboxypeptidáza H). Má sa za to, že podobné prípravky a spôsoby, aké sú tu opisované, je možné používať pri liečbe autoimunitných ochorení, ako je reumatoidná artritída, diabetes, myasténia gravis, Gravesova choroba, syndróm good pasture, psoriáza a tyreoiditídä, kde antigénom zodpovedným za ochorenie je bielkovinový autoantigén.In addition to myelin autoantigens that play a role in MS, a number of antigens (ie autoantigens) have been found to cause disease symptoms in other autoimmune diseases such as diabetes, Graves' disease, myasthenia gravis, good pasture syndrome, psoriasis, thyroiditis and rheumatoid arthritis. (ie autoantigens such as insulin, rh factor, acetylcholine receptors, thyroid cell receptors, basement membrane proteins, thyroid proteins, ICA69 (PM-1), glutamic acid decarboxylase (64K or 65K), proteolipid, collagen (type II ), heat shock protein and carboxypeptidase H). It is believed that similar compositions and methods described herein can be used in the treatment of autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, diabetes, myasthenia gravis, Graves' disease, good pasture syndrome, psoriasis and thyroiditis where the antigen responsible for the disease is a protein autoantigen.

Peptidy zahrnujúce definované sekvencie aminokyselinových zvyškov, majúce aktivitu T buniek a prednostne zahrnujúce aspoň jeden epitop T buniek a/alebo ktoré indukujú nereaktivitu T buniek alebo zníženú reaktivitu T buniek, boli identifikované a izolované pre mnohé z vyššie uvedených autoantigénov. Napríklad vo WO 94/07520 sú identifikované peptidy, ktoré sú údajne schopné tlmiť antigénovo špecifickú odpoveď na rozpustný kolagén typu II, čo je bielkovinový antigén, o ktorom sa usudzuje, že je autoantigénom pri reumatoidnej artritíde. WO 92/06704 opisuje spôsoby identifikácie peptidov inzulínu, ktoré údajne zahrnujú epitopy T buniek a ktoré môžu byť vhodné pre prípravky a spôsoby, analogické tomuto vynálezu, na liečbu diabetu typu I. Ďalej môžu byť ktorýmkoľvek z vyššie uvedených a v príkladoch definovaných spôsobov identifikácie peptidov bielkovinového autoantigénu, obsahujúcich epitop T buniek, identifíkované vhodné peptidy s obsahom epitopov T buniek pre antigén alebo autoantigén, o ktorom sa predpokladá, že je zodpovedný za ktorékoľvek z vyššie uvedených ochorení. Len čo sú také peptidy obsahujúce epitop T buniek identifikované pre cieľový autoantigén, môžu byť tieto peptidy používané v prípravkoch a spôsoboch analogických tým, aké tu boli opísané na liečbu sklerózy multiplex.Peptides comprising defined amino acid residue sequences having T cell activity and preferably comprising at least one T cell epitope and / or which induce T cell unreactivity or reduced T cell reactivity have been identified and isolated for many of the above autoantigens. For example, WO 94/07520 discloses peptides that are reported to be capable of attenuating the antigen-specific response to soluble type II collagen, a protein antigen believed to be an autoantigen in rheumatoid arthritis. WO 92/06704 discloses methods for identifying insulin peptides that allegedly include T cell epitopes and which may be useful in compositions and methods analogous to the present invention for the treatment of type I diabetes. Further, any of the above and exemplified methods for identifying protein peptides may autoantigen comprising a T cell epitope identified by suitable peptides containing T cell epitopes for an antigen or an autoantigen believed to be responsible for any of the above diseases. Once such peptides containing a T cell epitope are identified for the target autoantigen, these peptides can be used in compositions and methods analogous to those described herein for the treatment of multiple sclerosis.

Prehľad obrázkov na výkresochBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Obr. 1 znázorňuje úplnú dĺžku sekvencie aminokyselín ľudského MBP s označením čísiel aminokyselinových zvyškov, na ktoré sa tu odkazuje.Fig. 1 depicts the full-length amino acid sequence of human MBP, indicating the amino acid residue numbers referred to herein.

Obr. 2 znázorňuje aminokyselinové sekvencie výhodných peptidov, odvodených od MBP.Fig. 2 depicts the amino acid sequences of preferred MBP-derived peptides.

Obr. 3 znázorňuje aminokyselinové sekvencie prekrývajúcich sa peptidov a dlhších peptidov, použitých v príklade 1.Fig. 3 shows the amino acid sequences of the overlapping peptides and longer peptides used in Example 1.

Obr. 4a predstavuje grafické znázornenie percentuálneho podielu celkovej odpovede MBP pre každý peptid uvedený na obr. 3. Reaktivita MBP bola vypočítaná na základe percenta MBP pozitívnych mikrotitrových kultúr v každej skupine individuálnych pacientov, ktorá taktiež reagovala pozitívne na jeden z MBP peptidov. Celkové MBP pozitívne mikrotitrové kultúry činili 89 až 184 v každej skupine 19 až 43 pacientov, testovaných na každý peptid.Fig. 4a is a graphical representation of the percentage of total MBP response for each peptide shown in FIG. 3. MBP reactivity was calculated based on the percentage of MBP positive microtiter cultures in each group of individual patients that also responded positively to one of the MBP peptides. Total MBP positive microtiter cultures were 89 to 184 in each group of 19 to 43 patients tested for each peptide.

Obr. 4b predstavuje grafické znázornenie percenta jedincov reagujúcich na MBP, ktorí rozpoznávajú každý peptid uvedený na obr. 3. Pacienti sa považujú za reagujúcich na MBP, ak aspoň jedna z ich mikrotitrových kultúr reaguje pozitívne na MBP. V každej skupine 19 až 43 pacientov, testovaných na každý peptid, bolo 12 až 3 1 pacientov reagujúcich na MBP. Reaktivita na peptid bola vypočítaná na základe percenta reagujúcich pacientov v každej skupine s aspoň jednou mikrotitrovou kultúrou pozitívnou na jeden z MBP peptidov.Fig. 4b is a graphical representation of the percentage of individuals responding to MBP that recognize each peptide shown in FIG. 3. Patients are considered to respond to MBP if at least one of their microtiter cultures responds positively to MBP. In each group of 19 to 43 patients tested for each peptide, there were 12 to 3 L patients responding to MBP. Peptide reactivity was calculated based on the percentage of responders in each group with at least one microtiter culture positive for one of the MBP peptides.

Obr. 5a predstavuje graf stredných klinických hodnôt za dobu 0 až 40 dní po vyvolaní choroby u myší i.v. injekciou MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) samotného v porovnaní s kontrolou.Fig. 5a is a graph of mean clinical values over 0 to 40 days after disease induction in i.v. injection of MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) alone as compared to control.

Obr. 5b predstavuje graf stredných klinických hodnôt za dobu 0 až 40 dní po vyvolaní choroby u myší i.v. injekciou MBP Acl-ll (SEQ ID NO: 65) v kombinácii s MBP 31-47 (SEQ ID NO: 68) v porovnaní s kontrolou.Fig. 5b is a graph of mean clinical values over 0 to 40 days after disease induction in i.v. injection of MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) in combination with MBP 31-47 (SEQ ID NO: 68) compared to control.

Obr. 5c predstavuje graf stredných klinických hodnôt za dobu 0 až 40 dní po vyvolaní choroby u myší i.v. injekciou OVA 323-339 (SEQ ID NO: 69) v porovnaní s kontrolou.Fig. 5c is a graph of mean clinical values over 0 to 40 days after disease induction in i.v. injection of OVA 323-339 (SEQ ID NO: 69) compared to control.

Obr. 6a predstavuje graf stredných klinických hodnôt za dobu 0 až aspoň 30 dní po vyvolaní choroby u subjektov injekciou buď 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) alebo Acl-11 (SEQ ID NO: 65) v porovnaní s kontrolou.Fig. 6a is a graph of mean clinical values over 0 to at least 30 days after disease induction in subjects by injection of either 250 nmoles of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) or Acl-11 (SEQ ID NO: 65) compared to control .

Obr. 6b predstavuje graf stredných klinických hodnôt za dobu 0 až aspoň 30 dní po vyvolaní choroby u myší ošetrených 2,5 nmól Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) v porovnaní s kontrolou.Fig. 6b is a graph of mean clinical values over 0 to at least 30 days after disease induction in mice treated with 2.5 nmoles of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) compared to control.

Obr. 6c predstavuje graf stredných klinických hodnôt za dobu 0 až aspoň 30 dní po vyvolaní choroby u myší ošetrených 2,5 nmól Acl-11 (SEQ ID NO: 65) v porovnaní s kontrolou.Fig. 6c is a graph of mean clinical values over 0 to at least 30 days after disease induction in mice treated with 2.5 nmoles of Acl-11 (SEQ ID NO: 65) compared to control.

Obr. 7 predstavuje úsečkový diagram znázorňujúci stredné histologické hodnoty u myší ošetrovaných peptidom oproti kontrolným myšiam, kde nižšia hodnota znamená znížený počet a vážnosť zápalových infiltrátov CNS.Fig. 7 is a bar graph depicting mean histological values in peptide-treated mice versus control mice, where a lower value indicates a reduced number and severity of inflammatory CNS infiltrates.

. . .......- 44. . .......- 44

Obr. 8 je úsečkový diagram znázorňujúci kapacitu slezinových buniek, ktoré boli podrobené pulzácii in vivo v uvedených časových intervaloch (1 až 10 h) pomocou 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) za účelom aktivácie hybridómovej bunkovej línie (hybridom 1934), odvodenej od MBP-špecifického klonu T buniek, in vitro.Fig. 8 is a bar graph depicting the capacity of spleen cells that were pulsed in vivo at the indicated time intervals (1-10 hours) with 250 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) to activate the hybridoma cell line (hybrid 1934) ), derived from an MBP-specific T cell clone, in vitro.

Obr. 9 predstavuje graf, ukazujúci porovnanie ošetrenia myší s 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) oproti kontrole, PBS a OVA 323-337 (SEQ ID NO: 70).Fig. 9 is a graph showing a comparison of the treatment of mice with 250 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) versus control, PBS and OVA 323-337 (SEQ ID NO: 70).

Obr. 10 predstavuje graf, ukazujúci porovnanie ošetrenia zahájeného počas remisie s 25 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) oproti kontrole.Fig. 10 is a graph showing a comparison of treatment initiated during remission with 25 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) versus control.

Obr. 11a predstavuje graf, znázorňujúci proliferáciu lymfatickej uzliny in vitro (indikovanú zabudovaním 3H-tymidínu) u myší, vopred ošetrených i.v. 250 nmól MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65), v porovnaní s kontrolou.Fig. 11a is a graph depicting lymph node proliferation in vitro (indicated by 3H-thymidine incorporation) in i.v.-treated mice. 250 nmol MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) compared to control.

Obr. 11b je úsečkový diagram, znázorňujúci relatívnu produkciu lymfatickej uzliny IL2 v reakcii na MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) u myší, vopred ošetrených s Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67), v porovnaní s kontrolou.Fig. 11b is a bar graph depicting the relative production of lymph node IL2 in response to MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) in Acl-11 [4Y] -treated mice (SEQ ID NO: 67) compared to control.

Obr. 12a predstavuje grafické znázornenie experimentu ukazujúceho účinok IFN-β na EAE u dvoch skupín po 10 dospelých myších samiciach (SJL x TLP)F1, u ktorých bola v deň 0 vyvolaná EAE morčacím MBP v kompletnom adjuvans s prídavkom toxínu dávivého kašľa a ktorým bolo buď podané iba nekompletné Freundovo adjuvans (kontrola) alebo ktoré boli v deň 9, 12, 16 a 20 (znázornené šípkami na osi x) ošetrované interperitoneálne (i.p.) 2 000 jednotkami IFN-β, pričom os y predstavuje strednú klinickú hodnotu (MCS) pre každú skupinu (0 - žiadne klinické znaky EAE, 1 - ochabnutý nereagujúci chvost, 2 čiastočná paralýza zadných končatín, 3 - úplná paralýza zadných končatín, 4 čiastočná až úplná paralýza predných končatín, 5 - moribundný stav).Fig. 12a is a graphical representation of an experiment showing the effect of IFN-β on EAE in two groups of 10 adult female F1 (SJL x TLP) mice in which EAE was induced with EAE guinea pig MBP in complete adjuvant with addition of pertussis toxin and either only incomplete Freund's adjuvant (control) or that were treated interperitoneally (ip) with 2,000 IFN-β units on days 9, 12, 16 and 20 (shown by the x-axis arrows), with the y-axis representing the mean clinical value (MCS) for each group (0 - no clinical signs of EAE, 1 - flabby unresponsive tail, 2 partial hind limb paralysis, 3 - total hind limb paralysis, 4 partial to total forelimbs paralysis, 5 - moribund condition).

Obr. 12b predstavuje grafické znázornenie experimentu ukazujúceho účinok MBP peptidu Ac 1-11 (SEQ ID NO: 65) u dvoch skupín po 10 dospelých myších samiciach (SJL x TLP)F1, u ktorých bola v deň 0 vyvolaná EAE morčacím MBP v kompletnom adjuvans s prídavkom toxínu dávivého kašľa a ktorým bolo buď podané PBS (kontrola) alebo ktoré boli v deň 10, 13, 17 a 21 (znázornené šípkami na osi x) ošetrované intravenózne s 250 nmól Ac 1-11(SEQ ID NO: 65), pričom os y predstavuje strednú klinickú hodnotu pre každú skupinu, ako je uvedené na obr. 12a.Fig. 12b is a graphical representation of an experiment showing the effect of MBP peptide Ac 1-11 (SEQ ID NO: 65) in two groups of 10 adult female F1 (SJL x TLP) mice in which EAE was induced with EAE guinea pig MBP in complete adjuvant with addition pertussis toxin and either treated with PBS (control) or treated on day 10, 13, 17 and 21 (shown by the x-axis arrows) treated intravenously with 250 nmol of Ac 1-11 (SEQ ID NO: 65), with the axis y represents the mean clinical value for each group as shown in FIG. 12a.

Obr. 12c predstavuje grafické znázornenie experimentu ukazujúceho účinok MBP peptidu Ac 1-11 (SEQ ID NO. 65), podávaného v kombinácii s IFN-β na EAE u dvoch skupín po 10 dospelých myších samiciach (SJL x TLP)F1, u ktorých bola v deň 0 vyvolaná EAE v kompletnom adjuvans s prídavkom toxínu dávivého kašľa a ktorým bolo buď podané PBS (kontrola) alebo ktoré boli v deň 10, 13, 17 a 21 (znázornené otvorenými šípkami na osi x) ošetrované intravenózne s 250 nmól Ac 1-11 (SEQ ID NO: 65) a v deň 9, 12, 16 a 20 (znázornené uzatvorenými šípkami na osi x) ošetrované interperitoneálne s 2 000 jednotkami IFN-β, pričom os y predstavuje strednú klinickú hodnotu pre každú skupinu, ako je uvedené na obr. 12a.Fig. 12c is a graphical representation of an experiment showing the effect of MBP peptide Ac 1-11 (SEQ ID NO. 65), administered in combination with IFN-β on EAE in two groups of 10 adult female F1 (SJL x TLP) mice on day 0 induced EAE in complete adjuvant with the addition of pertussis toxin and either treated with PBS (control) or treated on day 10, 13, 17 and 21 (shown by open arrows on the x-axis) treated intravenously with 250 nmol Ac 1-11 ( SEQ ID NO: 65) and on days 9, 12, 16, and 20 (shown by closed arrows on the x-axis) treated interperitoneally with 2,000 IFN-β units, the y-axis representing the mean clinical value for each group as shown in FIG. 12a.

Obr. 13 predstavuje grafické znázornenie experimentu, ukazujúceho účinok rôznych dávok IFN-β (10 000, resp. 2 000 jednotiek) na vyvolanú EAE u dvoch skupín po 10 dospelých myších samiciach (SJL x TLP)F1, u ktorých bola v deň 0 vyvolaná EAE pomocou morčacieho MBP s prídavkom toxínu dávivého kašľa a ktorým bolo buď podané PBS (kontrola) alebo ktoré boli v deň 9, 13 a 16 (znázornené uzatvorenými šípkami na osi x) ošetrované interperitoneálne (i.p.) s 10 000, resp. 2 000 jednotkami IFN-β, pričom os y predstavuje strednú klinickú hodnotu pre každú skupinu, ako je uvedené na obr. 12a.Fig. 13 is a graphical representation of an experiment showing the effect of different doses of IFN-β (10,000 and 2000 units, respectively) on EAE induced in two groups of 10 adult female F1 mice (SJL x TLP) who were EAE induced by day 0 guinea pig MBP with addition of pertussis toxin and either treated with PBS (control) or treated on days 9, 13 and 16 (shown by closed arrows on the x-axis) treated interperitoneally (ip) with 10,000 resp. 2,000 units of IFN-β, with the y-axis representing the mean clinical value for each group as shown in FIG. 12a.

Obr. 14 znázorňuje rôzne peptidy, odvodené od MBP, ktoré môžu byť vhodné pre prípravky a spôsoby podľa vynálezu.Fig. 14 depicts various MBP-derived peptides that may be useful in the compositions and methods of the invention.

Obr. 15 graficky znázorňuje index pozitivity (os y) (priemerný S.1./pacient reagujúci na MBP) násobený percentom jedincov reagujúcich na každý peptid (os x), ktorý je odvodený z rovnakých experimentálnych údajov, ktoré sú uvedené na obr. 4a a 4b a opísané v príklade 1.Fig. 15 is a graphical representation of the positivity index (y-axis) (mean S.1 / patient responsive to MBP) multiplied by the percentage of subjects responding to each peptide (x-axis) derived from the same experimental data as shown in FIG. 4a and 4b and described in Example 1.

Obr. 16 graficky znázorňuje stredné klinické hodnotenie vo vzťahu k zahájeniu terapie s použitím Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) pre každého jedinca (deň 1 - nástup klinických znakov pre každú jednotlivú myš). Myši boli v deň 1, 3, 6, a 9 choroby ošetrované PBS (plné štvorčeky), i.v. 250 nmól Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (prázdne trojuholníčky) alebo s.c. 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) (prázdne krúžky). Tieto údaje naznačujú, že Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) spôsobuje zvrátenie EAE, keď je podaný po nástupe paralýzy.Fig. 16 is a graphical representation of the mean clinical trial relative to initiation of therapy using Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) for each subject (day 1 - onset of clinical signs for each individual mouse). Mice were treated with PBS (solid squares) on day 1, 3, 6, and 9 of the disease, i.v. 250 nmol Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (open triangles) or s.c. 250 nmol Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (open circles). These data suggest that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) causes reversal of EAE when administered after the onset of paralysis.

Obr. 17 graficky znázorňuje stredné klinické hodnotenie, keď je Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) podaný pred manifestáciou príznakov choroby. Dáta sú vynesené vo vzťahu k vyvolaniu choroby v deň 0 pomocou miechového homogenizátu gp (gpSCH) a ku dňom terapie. Skupiny prežívajúcich myší boli ošetrované v deň 8, 10, 13 a 17 pomocou 25 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) i.v. (prázdne trojuholníčky), 25 nmól Acl-1 1[4Y] (SEQ ID NO: 67) s.c. (plné krúžky) alebo boli bez ošetrenia (prázdne štvorčeky). Dáta ukazujú, že Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zabraňuje nástupu EAE.Fig. 17 is a graphical representation of the mean clinical trial when Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) is administered prior to the manifestation of disease symptoms. Data are plotted in relation to disease induction on day 0 with gp spinal cord homogenate (gpSCH) and on treatment days. Groups of surviving mice were treated on day 8, 10, 13 and 17 with 25 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) i.v. (open triangles), 25 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) s.c. (solid circles) or untreated (open squares). Data show that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) prevents the onset of EAE.

Obr. 18 graficky znázorňuje stredné klinické hodnotenie vo vzťahu k zahájeniu terapie s použitím Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67), podávaného intravenózne (prázdne trojuholníčky) alebo subkutánne (plné krúžky). Prázdne štvorčeky predstavujú kontrolu.Fig. 18 is a graphical representation of the mean clinical trial relative to initiation of therapy using Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) administered intravenously (open triangles) or subcutaneously (solid circles). Empty squares represent control.

Obr. 19 graficky znázorňuje stredné klinické hodnotenie vo vzťahu ku dňu po vyvolaní choroby s použitím 75 pg gpMBP (plné štvorčeky), 100 pg huMOG (prázdne trojuholníčky) a kombinácie 75 pg gpMBP a 100 pg huMOG (plné štvorčeky). Ako je zrejmé, je choroba vyvolaná súčasne MOG a MBP oveľa silnejšia než každým z nich samotným.Fig. 19 is a graphical representation of the median day-to-day clinical challenge using 75 µg gpMBP (solid squares), 100 µg huMOG (open triangles), and a combination of 75 µg gpMBP and 100 µg huMOG (solid squares). As can be seen, the disease caused by MOG and MBP at the same time is much stronger than each of them alone.

Obr. 20 graficky znázorňuje stredné klinické hodnotenie vo vzťahu ku dňom terapie pomocou Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) (prázdne štvorčeky) v porovnaní s kontrolou PBS (plné štvorčeky). Choroba bola vyvolaná rovnako ako v príklade 10 pomocou huMOG +gpMBP. Tieto dáta ukazujú, že Acl11 [4 Y] (SEQ ID NO: 67) významne znižuje stredné klinické hodnotenie v porovnání s kontrolou.Fig. 20 is a graphical representation of the mean clinical evaluation relative to Acl-11 [4Y] therapy days (SEQ ID NO: 67) (open squares) compared to PBS control (solid squares). The disease was induced as in Example 10 with huMOG + gpMBP. These data show that Acl11 [4 Y] (SEQ ID NO: 67) significantly reduces the mean clinical trial compared to the control.

Príklady uskutočnenia vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Vynález je osvetlený na ďalej uvedených neobmedzujúcich príkladoch.The invention is illustrated by the following non-limiting examples.

Príklad 1Example 1

Štúdia sklerózy multiplex ako imunitnej odpovede na myelínový bázický proteín v ľudskej populácii a peptidy a voľba MBP peptidov vhodných na terapeutické použitieStudy of Multiple Sclerosis as an Immune Response to Myelin Basic Protein in the Human Population and Peptides and Selection of MBP Peptides Suitable for Therapeutic Use

Syntéza peptidov:Peptide synthesis:

Peptidy boli syntetizované s použitím štandardnej chémie Fmoc/Boc a čistené pomocou HPLC s reverznými fázami. Obr. 3 znázorňuje peptidy MBP použité v týchto štúdiách. Názvy peptidov alebo zvyšky aminokyselín sú v celom texte príkladov zhodné.Peptides were synthesized using standard Fmoc / Boc chemistry and purified by reverse phase HPLC. Fig. 3 shows the MBP peptides used in these studies. The peptide names or amino acid residues are identical throughout the examples.

Protokol: Analýza ľudského PBL na reaktivitu s MBP a MBP peptidmi:Protocol: Analysis of human PBL for reactivity with MBP and MBP peptides:

PBL boli čistené z čerstvých vzoriek periférnej krvi (približne 75 ml) od 222 pacientov s istou MS s použitím Ficollových gradientov hustoty. Mikrotitrové kultúry boli iniciované s 2 x 10⁵ PBL na jamku a 10 pg/ml čisteného ľudského miechového MBP v kultivačnom médiu RPMI 1640 doplnenom s 5 % ľudského séra AB, penicilínom-streptomycínom a L-glutamínom. Kultúry boli počínajúc dňom 6 až 7 doplnené s IL2 (20 jedn./ml) a s IL4 (5 jedn./ml). Po 1 1 až 13 dňoch boli mikrotitrové kultúry premyté, resuspendované v čerstvom médiu a rozdelené do 12 čerstvých mikrotitrových jamiek. Ako bunky obsahujúce antigén boli pridané autológne zmrazené PBL v množstve 5 x 10⁴ PBL na jamku.PBLs were purified from fresh peripheral blood samples (approximately 75 mL) from 222 patients with the same MS using Ficoll density gradients. Microtiter cultures were initiated with 2 x 10 ⁵ PBL per well and 10 µg / ml purified human spinal MBP in RPMI 1640 culture medium supplemented with 5% human serum AB, penicillin-streptomycin and L-glutamine. The cultures were supplemented with IL2 (20 U / ml) and IL4 (5 U / ml) starting on days 6-7. After 1 to 13 days, the microtiter cultures were washed, resuspended in fresh medium and dispensed into 12 fresh microtiter wells. Autologous frozen PBL at 5 x 10 ⁴ PBL per well were added as antigen-containing cells.

Screeningové antigény boli dvojmo pridané do 12 zdvojených jamiek z každej mikrotitrovej kultúry. Ako negatívna kontrola bolo vždy použité médium a ako pozitívna kontrola čistený ľudský rekombinačný MBP v množstve 10 pg/ml. Každý pacient bol testovaný tiež na reaktivitu s maximálne 4 MBP peptidmi, každým v koncentrácii 10 μΜ. Po 48 h boli vzorky podrobené pulzácii s 0,75 pCi ³H-tymidínu a získavané po 6 až 16 h pulzácie.Screening antigens were added in duplicate to 12 duplicate wells from each microtiter culture. Medium was used as a negative control and 10 µg / ml purified human recombinant MBP as a positive control. Each patient was also tested for reactivity with a maximum of 4 MBP peptides, each at a concentration of 10 μΜ. After 48 h, the samples were pulsed with 0.75 pCi of ³ H-thymidine and obtained after 6-16 h of pulsation.

Kultúry boli označené ako pozitívne pre každý peptid podľa týchto kritérií: stimulačný index väčší ako 3,0, zmena cpm väčšia alebo rovná 500 a štandardná odchýlka od priemeru menšia ako zmena cpm. Na účely analýzy boli kultúry ďalej označené ako „peptid-pozitívne“, len pokiaľ reagovali súčasne na MBP a peptid a pokiaľ nereagovali na viac ako jeden neprekrývajúci sa peptid. Reaktivita s každým z peptidov bola testovaná s použitím minimálne 19 a maximálne 43 pacientov.Cultures were marked as positive for each peptide according to the following criteria: stimulation index greater than 3.0, cpm change greater than or equal to 500, and standard deviation less than cpm change. For analysis purposes, cultures were further designated as "peptide-positive" only if they responded simultaneously to MBP and the peptide and did not respond to more than one non-overlapping peptide. Reactivity with each of the peptides was tested using a minimum of 19 and a maximum of 43 patients.

Výsledky:The results:

Priemerne 6 % mikrotitrových kultúr bolo zistených ako pozitívnych na MBP reaktivitu pre každého z pacientov (rozmedzie 0 až 37 MBP pozitívnych kultúr na pacienta). Aspoň jedna mikrotitrová kultúra bola pozitívna na MBP reaktivitu u 77 % pacientov a títo jedinci boli považovaní za „reagujúcich na MBP“. Status reagujúceho jedinca nekoreloval s pohlavím, kategóriou MS (RR vs. CP), typom HLA-DR, vekom alebo skutočnosťou, či pacient bral alebo nebral Betaseron.On average, 6% of the microtiter cultures were found to be positive for MBP reactivity for each patient (range 0 to 37 MBP positive cultures per patient). At least one microtiter culture was positive for MBP reactivity in 77% of patients and these individuals were considered "MBP responsive". The responder status did not correlate with gender, MS category (RR vs. CP), HLA-DR type, age or whether or not the patient was taking Betaseron.

Testované MBP peptidy zahrnovali panel 16 20mérov (obr. 3), prekrývajúcich sa o 10 aminokyselín a pokrývajúcich celú sekvenciu ľudského MBP (izoforma 18,5 kD). Boli testované ešte dva dlhšie peptidy (sekvencie MBP (MBP 83-105 (SEQ ID NO: 5) a MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14), obr. 3). Reaktivita na MBP peptidy potom bola vypočítaná na základe podielu MBP pozitívnych mikrotitrových kultúr, ktoré boli pozitívne taktiež na jeden z MBP peptidov. Štyri z peptidov zodpovedali každý za aspoň 10 % celkovej reaktivity voči MBP (MBP 11-30 (SEQ ID NO: 2), MBP 81-100 (SEQ ID NO: 23), MBP 83a 49The MBP peptides tested included a panel of 20 20mers (Fig. 3), overlapping by 10 amino acids and covering the entire human MBP sequence (18.5 kD isoform). Two more peptides were tested (MBP sequence (MBP 83-105 (SEQ ID NO: 5) and MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14), Fig. 3). Reactivity to MBP peptides was then calculated based on the MBP fraction positive microtiter cultures that were also positive for one of the MBP peptides Four of the peptides each accounted for at least 10% of the total reactivity to MBP (MBP 11-30 (SEQ ID NO: 2), MBP 81-100 (SEQ ID NO: 23) ), MBP 83a 49

105 (SEQ ID NO: 5) a MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14)). Okrem toho bola reaktivita voči každému z týchto peptidov detegovaná u aspoň tretiny jednotlivých pacientov MS reagujúcich na MBP, u ktorých boli testované. Naviac vykazuje 77 % pacientov reagujúcich na MBP reaktivitu voči buď MBP 83-105 (SEQ ID NO:105 (SEQ ID NO: 5) and MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14). In addition, reactivity to each of these peptides was detected in at least one third of the individual MBP responders of the MBPs tested. In addition, 77% of patients responding to MBP show reactivity to either MBP 83-105 (SEQ ID NO:

5) alebo MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14) alebo voči obom týmto peptidom.5) or MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14), or both.

Z týchto štyroch peptidov bol najreaktívnejší MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14), zodpovedajúci za 21 % celkovej reaktivity voči MBP, ktorý bol detegovateľný u 64 % testovaných reagujúcich pacientov. MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14) zrejme obsahuje epitopy T buniek ako z MBP 141-160 (SEQ ID NO: 28), tak MBP 151-170 (SEQ ID NO: 29) a prekvapujúco vykazoval dramaticky väčšiu reaktivitu ako dva 20mérové peptidy. MBP 81-100 (SEQ ID NO: 23) a MBP 83-105 (SEQ ID NO: 5) majú veľmi podobnú sekvenciu a pravdepodobne zahrnujú podobné, pokiaľ nie identické epitopy T buniek. Zodpovedajú oblasti, o ktorej sa predtým súdilo, že je spojená s haplotypom HLA-DR2. Naše výsledky naznačujú, že pacienti s MS ako s DR2, tak bez DR2 na tieto peptidy priaznivo reagujú. MBP 11-30 (SEQ ID NO: 2) je oblasť reaktivity peptidu, o ktorej sa pôvodne súdilo, že nie je u pacientov s MS často rozpoznávaná.Of these four peptides, MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14) was the most reactive, accounting for 21% of the total reactivity to MBP, which was detectable in 64% of the responding patients tested. MBP 141-165 (SEQ ID NO: 14) appears to contain T cell epitopes from both MBP 141-160 (SEQ ID NO: 28) and MBP 151-170 (SEQ ID NO: 29) and surprisingly showed dramatically greater reactivity than two 20mer peptides. MBP 81-100 (SEQ ID NO: 23) and MBP 83-105 (SEQ ID NO: 5) have a very similar sequence and are likely to include similar, if not identical, T cell epitopes. They correspond to a region previously believed to be associated with the HLA-DR2 haplotype. Our results indicate that MS patients with both DR2 and non-DR2 respond favorably to these peptides. MBP 11-30 (SEQ ID NO: 2) is a region of peptide reactivity that was initially believed not to be frequently recognized in MS patients.

Každému z ostatných MBP peptidov prislúchalo menej ako 5 % celkovej reaktivity MBP a bol detegovaný u 20 % alebo menej testovaných reagujúcich pacientov (viď obr. 4a a 4b). Najväčšia reaktivita v tejto skupine peptidov bola zistená u MBP 111-130 (SEQ ID NO: 12), ktorému prislúchalo 4,5 % reaktivity MBP a bol nájdený u 19 % testovaných reagujúcich pacientov.Each of the other MBP peptides accounted for less than 5% of the total MBP reactivity and was detected in 20% or less of the responding patients tested (see Figures 4a and 4b). The greatest reactivity in this group of peptides was found in MBP 111-130 (SEQ ID NO: 12), which accounted for 4.5% of the reactivity of MBP and was found in 19% of the responding patients tested.

Voľba výhodných MBP peptidovSelection of preferred MBP peptides

Výhodné MBP peptidy boli vyberané na základe dvoch kritérií:Preferred MBP peptides were selected based on two criteria:

1. Počet pacientov s MS, reagujúcich na peptidy pripadajúce do úvahy (aspoň 75 % testovaných pacientov, ktorí reagujú na bielkovinový antigén, rozpoznáva aspoň jeden z peptidov).1. Number of MS patients responding to the peptides in question (at least 75% of the tested patients responding to the protein antigen recognize at least one of the peptides).

' Λ . :··.· i ·50'Λ. I · 50

2. Intenzita odpovede T buniek na peptid pripadajúci do úvahy u pacientov s MS (odpoveď na peptidy pripadajúce do úvahy sa rovná 40 % celkovej odpovede na antigén).2. Intensity of the T cell response to the candidate peptide in MS patients (the response to the candidate peptides is equal to 40% of the total antigen response).

Prvé kritérium splňuje MBP 83-105 (MBP-2 (SEQ ID NO: 5)) a MBP 141165 (MBP-4 (SEQ ID NO: 14)) (77 % reagujúcich pacientov rozpoznáva jeden z nich alebo oba, viď ďalej tabuľka 1). Spoločne týmto peptidom prislúcha 32 % reaktivity voči MBP (viď ďalej tabuľka 2).The first criterion meets MBP 83-105 (MBP-2 (SEQ ID NO: 5)) and MBP 141165 (MBP-4 (SEQ ID NO: 14)) (77% of responding patients recognize either or both, see Table 1 below) ). Together, these peptides account for 32% reactivity to MBP (see Table 2 below).

Tabuľka 1. Reaktivita na MBP-2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14): Analýza podľa jedincovTable 1. Reactivity to MBP-2 (SEQ ID NO: 5) and MBP-4 (SEQ ID NO: 14): Individual analysis

% jedincov reagujúcich na % of subjects responding to MBP-2 MBP-2 MBP-4 MBP-4 MBP-2 a/alebo MBP-4 MBP-2 and / or MBP-4 medzi reagujúcimi na MBP among the respondents to MBP 11/3 1 [35,5 %] 11/3 1 [35.5%] 20/31 [64,5 %] 20/31 [64.5%] 24/31 [77,4 %] 24/31 [77.4%]

Tabuľka 2. Reaktivita na MBP-2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4(SEQ ID NO: 14): Analýza podľa T bunkových líniíTable 2. Reactivity to MBP-2 (SEQ ID NO: 5) and MBP-4 (SEQ ID NO: 14): T cell line analysis

% MBP pozitívnych línií % Of MBP positive lines MBP pozitívna a MBP-2 MBP positive a MBP-2 MBP pozitívna a MBP-4 MBP positive a MBP-4 MBP pozitívna a MBP-2 alebo MBP-4 MBP positive a MBP-2 or MBP-4 medzi MBP pozitívnymi líniami between MBP positive lines 20/184 [10,95%] 20/183 [10,95%] 39/184 [21,1 %] 39/184 [21.1%] 59/184 [32,1 %] 59/184 [32.1%]

Prídavok MBP 11-30 (MBP-1 (SEQ ID NO: 2)) tak splňuje druhé kritérium, pretože týmto trom peptidom spoločne prislúcha 42 % reaktivity vočiThus, the addition of MBP 11-30 (MBP-1 (SEQ ID NO: 2)) fulfills the second criterion, since these three peptides together account for 42% of the reactivity to

MBP. Ako výhodný peptid na terapeutické použitie by bol i MBP 11 1-130 (MBP-3 (SEQ ID NO 12)), najmä v kombinácii s MBP-1(SEQ ID NO. 2), MBP2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14). MBP 81-100 (SEQ ID NO: 23) sa zdá byť ekvivalentný MBP 83-105 (SEQ ID NO: 5) a môže byť taktiež používaný v spojení s ostatnými vybranými výhodnými peptidmi.MBP. MBP 11 1-130 (MBP-3 (SEQ ID NO 12)), particularly in combination with MBP-1 (SEQ ID NO 2), MBP2 (SEQ ID NO: 5) and MBP-4 (SEQ ID NO: 14). MBP 81-100 (SEQ ID NO: 23) appears to be equivalent to MBP 83-105 (SEQ ID NO: 5) and can also be used in conjunction with other selected preferred peptides.

Príklad 2Example 2

Podávanie peptidov cicavcom na liečbu EAE ako modelu pre sklerózu multiplexAdministration of peptides to mammals to treat EAE as a model for multiple sclerosis

Syntéza peptidov:Peptide synthesis:

Peptidy boli pripravené automatizovanou syntézou peptidov (ABI 430A, Applied Biosciences, Foster City, CA) s použitím štandardnej 9-fluorenylmetoxykarbonylovej chémie. Peptidy boli čistené vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou a bolo potvrdené zloženie aminokyselín. Zvolené peptidické sekvencie boli MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) ASQKRPSQRHG, MBP Acl11 [4 A] (SEQ ID NO: 66) ASQARPSQRHG, MBP Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) ASQYRPSQRHG, MBP 31-47 (SEQ ID NO: 68) RHRDTGILDSIGRFFSG, Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69) ISQAVHAAHAEINEAGR a Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70) ISQAVHAAHAEINEA.Peptides were prepared by automated peptide synthesis (ABI 430A, Applied Biosciences, Foster City, CA) using standard 9-fluorenylmethoxycarbonyl chemistry. The peptides were purified by high pressure liquid chromatography and the amino acid composition was confirmed. The peptide sequences selected were MBP Acl-11 [SEQ ID NO: 65] ASQKRPSQRHG, MBP Acl11 [4 A] (SEQ ID NO: 66) ASQARPSQRHG, MBP Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) ASQYRPSQRHG, MBP 31 -47 (SEQ ID NO: 68) RHRDTGILDSIGRFFSG, Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69) ISQAVHAAHAEINEAGR, and Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70) ISQAVHAAHAEINEA.

Čistenie MBPMBP cleaning

MBP bol pripravený z morčacích miech (Keystone Biologicals, Cleveland, OH) s použitím modifikácie metódy opísanej v Smith, M.E., J. Neurochem., 1969, 16:83. Stručne povedané bol MBP extrahovaný z izolovaných myelínových membrán pomocou chloroformu a metanolu, vyzrážaný citrátom draselným, extrahovaný kyselinou a lyofilizovaný. SDS-PAGE analýza tohto materiálu ukázala hlavný pás pri očakávanej molekulovej hmotnosti 18,5 kD.MBP was prepared from guinea pigs (Keystone Biologicals, Cleveland, OH) using a modification of the method described in Smith, M.E., J. Neurochem., 1969, 16:83. Briefly, MBP was extracted from isolated myelin membranes using chloroform and methanol, precipitated with potassium citrate, extracted with acid and lyophilized. SDS-PAGE analysis of this material showed a major band at an expected molecular weight of 18.5 kD.

»52»52

Indukcia EAE, hodnotenie a peptidová terapiaEAE induction, evaluation and peptide therapy

EAE bola indukovaná u myší (PJL x SJL) Fl, získaných od Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Keď myši dosiahli vek 8 až 14 týždňov, bola indukovaná EAE imunizáciou s 50 až 100 pg MBP, emulgovaného v kompletnom Freundovom adjuvans (Gibco Laboratories, Grand Island, NY), doplnenom ďalšími 400 pg na myš M. tuberculosis H37Ra (Difco Laboratories, Detroit, MI). V dobe imunizácie a po 48 h bolo intravenózne podané 200 ng toxínu dávivého kašľa (JRH Biosciences, Lenexa, KS). Myši boli hodnotené na základe klinických príznakov podľa tejto stupnice: 1 - paralýza chvostu, 2 - čiastočná paralýza zadných končatín, úplná paralýza zadných končatín, 4 - paralýza predných končatín, 5 - moribundná alebo mŕtva. Myši s hodnotou 5 boli usmrtené. Po smrti boli myši vyradené z ďalších výpočtov stredného klinického hodnotenia. Peptidy boli podávané intravenózne, ako je opísané ďalej v jednotlivých príkladoch.EAE was induced in mice (PJL x SJL) F1, obtained from Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). When mice reached 8-14 weeks of age, they were induced by EAE immunization with 50-100 µg MBP emulsified in complete Freund's adjuvant (Gibco Laboratories, Grand Island, NY) supplemented with an additional 400 µg per M. tuberculosis H37Ra mouse (Difco Laboratories, Detroit , MI). 200 ng of cough toxin (JRH Biosciences, Lenexa, KS) was administered intravenously at the time of immunization and after 48 h. Mice were scored for clinical signs according to the following scale: 1 - tail paralysis, 2 - hind limb paralysis, total hind limb paralysis, 4 - hind limb paralysis, 5 - moribund or dead. 5 mice were sacrificed. After death, mice were excluded from further calculations of the mid-trial. The peptides were administered intravenously as described below in the individual examples.

Pre testy proliferácie lymfatických uzlín a produkcie IL2 boli z myší, imunizovaných vyššie opísaným spôsobom, pripravené za účelom indukcie EAE lymfocytové suspenzie slabinovej a paraaortálnej lymfatickej uzliny (na proliferačné experimenty nebol obsiahnutý toxín dávivého kašľa). Lymfocyty boli kultivované na mikrotitrových platniach s guľatým dnom v množstve 5.10⁵ na jamku s peptidmi MBP a RPMI 1640 doplneným 0,5 % čerstvého normálneho myšieho séra, penicilínom-streptomycínom, L-glutamínom a 5.10'^s M 2-merkaptoetanolu. Kultúry na testy proliferácie boli podrobené pulzom počas doby 16 h ³Htymidínom s nasledujúcou inkubáciou počas doby 72 h. Pre testy IL2 boli získané po 24 h supernatanty kultúr a boli testované na schopnosť podporovať rast bunkovej línie HT2, závislej na IL2. Na rozlíšenie produkcie IL2 od produkcie IL4 boli uskutočnené biologické skúšky HT2 v prítomnosti supernatantu 10% kultúry monoklonálnej protilátky 11.B. 11 (O’Hara, J. a ď., Náture, 1985, 3 1 5:333), ktorá inhibuje IL4-indukovanú proliferáciu buniek HT2.For lymph node proliferation and IL2 production assays, lymphocyte suspensions of flank and paraaortic lymph node were prepared from mice immunized as described above (pertussis toxin was not included in proliferation experiments). Lymphocytes were cultured in round bottom microtiter plates at 5x10 ⁵ per well with MBP and RPMI 1640 peptides supplemented with 0.5% fresh normal mouse serum, penicillin-streptomycin, L-glutamine and 5x10 ' ^with M 2-mercaptoethanol. Cultures for proliferation assays were pulsed for 16 h with ³ Hthymidine followed by 72 h incubation. For the IL2 assays, culture supernatants were obtained after 24 h and tested for their ability to promote IL2-dependent HT2 cell line growth. To distinguish IL2 production from IL4 production, HT2 bioassays were performed in the presence of a 10% culture supernatant of monoclonal antibody 11.B. 11 (O'Hara, J. et al., Nature, 1985, 3 1 5: 333), which inhibits IL4-induced HT2 cell proliferation.

Výsledky sú uvedené na obr. 9, ktorý ukazuje, že Acl-11[4Y] (SEQ ID NO. 67) zvráti priebeh EAE, keď je podávaný po nástupe paralýzy. EAE bola indukovaná v skupinách po 14 myšiach pomocou MBP. Terapia bola zahájená u ,· 13 každej myši jednotlivo, potom, čo sa u nej vyvinuli klinické znaky EAE. Dáta sú vynesené vo vzťahu k zahájeniu terapie pre každého jedinca (deň 1 - nástup klinických príznakov pre každú jednotlivú myš). Myši boli ošetrované intravenózne v deň 1, 4, 11 a 18 choroby pomocou PBS (prázdny krúžok), 250 nmól Acl11[4Y] (SEQ ID NO: 67)(plné štvorčeky) alebo 250 nmól Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70)(plné krúžky). Ďalšia kontrolná skupina nedostávala žiadne ošetrenie (prázdne štvorčeky). Krížiky označujú jednotlivé myši, ktoré uhynuli alebo boli usmrtené v stupni 5 EAE. Hodnota MMS pre neošetrenú skupinu bola 4,6 a mortalita bola 64 %, Hodnota MMS pre skupinu ošetrenú s PBS bola 4,4 a mortalita 35 %. Hodnota MMS pre skupinu ošetrenú s Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70) bola 4,2 a mortalita 21 %. Hodnota MMS pre skupinu ošetrenú s Acl11[4Y] (SEQ ID NO: 67) bola 3,2 a mortalita 7 %.The results are shown in FIG. 9, which shows that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO. 67) reverses the course of EAE when administered after the onset of paralysis. EAE was induced in groups of 14 mice by MBP. Therapy was initiated in 13 each mouse individually after it developed clinical signs of EAE. Data are plotted in relation to initiation of therapy for each individual (day 1 - onset of clinical symptoms for each individual mouse). Mice were treated intravenously on days 1, 4, 11 and 18 of disease with PBS (open circle), 250 nmol of Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (solid squares), or 250 nmol of Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70) (solid rings). The other control group received no treatment (open squares). Crosses indicate individual mice that died or were sacrificed in Grade 5 EAE. The MMS value for the untreated group was 4.6 and the mortality was 64%, the MMS value for the PBS-treated group was 4.4 and the mortality was 35%. The MMS value for the Ova 323-337 treated group (SEQ ID NO: 70) was 4.2 and the mortality was 21%. The MMS value for the Acl11 [4Y] treated group (SEQ ID NO: 67) was 3.2 and the mortality was 7%.

Obr. 10 ukazuje, že Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zabraňuje relapsom EAE, keď sa podáva počas remisnej fázy choroby. EAE bola indukovaná pomocou MBP. Terapia bola zahájená u každej myši individuálne druhý deň remisie po počiatočnej epizóde EAE. Dáta sú vynesené vo vzťahu k zahájeniu terapie pre každého jedinca (deň 1 = druhý deň remisie). Skupiny 6 až 7 prežívajúcich myší boli ošetrované intravenózne v deň 1, 4, 7 a 18 po začiatku remisie buď pomocou PBS (prázdne krúžky) alebo 25 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67)(plné štvorčeky). Krížiky označujú jednotlivé myši, ktoré uhynuli alebo boli usmrtené v stupni 5 EAE. Počiatočné epizódy choroby pred remisiou trvali 3 až 18 dní (priemer 9 dní pre obe skupiny). Hodnota MMS počas počiatočnej epizódy bola podobná pre obe skupiny myší (3,0 pre skupinu ošetrenú s PBS a 3,9 pre skupinu ošetrenú s Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67)). Hodnota MMS po ošetrení pre skupinu PBS bola 4,1 a mortalita 33 %. Hodnota MMS po ošetrení pre skupinu ošetrovanú peptidom bola 0,3 a mortalita 0 %.Fig. 10 shows that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) prevents EAE relapses when administered during the disease remission phase. EAE was induced by MBP. Therapy was initiated on each mouse individually on the second day of remission following the initial EAE episode. Data are plotted relative to initiation of therapy for each subject (day 1 = second day of remission). Groups of 6-7 surviving mice were treated intravenously on days 1, 4, 7, and 18 after commencement of remission with either PBS (open circles) or 25 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (solid squares). Crosses indicate individual mice that died or were sacrificed in Grade 5 EAE. Initial episodes of disease prior to remission lasted 3 to 18 days (mean 9 days for both groups). The MMS value during the initial episode was similar for both groups of mice (3.0 for the PBS-treated group and 3.9 for the Acl-11-treated group [4Y] (SEQ ID NO: 67)). The MMS value after treatment for the PBS group was 4.1 and the mortality was 33%. The MMS value after treatment for the peptide treated group was 0.3 and the mortality was 0%.

Obr. 11 znázorňuje, že intravenózne podávanie Acl-11 (SEQ ID NO: 65) alebo Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) vyvoláva nereaktivitu T buniek.Fig. 11 shows that intravenous administration of Acl-11 (SEQ ID NO: 65) or Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) induces T cell non-reactivity.

a) Skupiny po 3 až 4 myšiach boli 5 a 10 dní pred imunizáciou pomocou 150 pg MBP intravenózne ošetrené buď s PBS (plné krúžky) alebo s 250 nmól i 54a) Groups of 3 to 4 mice were treated intravenously with either PBS (solid circles) or 250 nmol i5 days prior to immunization with 150 µg MBP.

Acl-11 (SEQ ID NO: 65)(plné trojuholníky). Testy proliferácie lymfatických uzlín s MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) boli uskutočnené v deň 9. Kontroly: Predbežné ošetrenie PBS PPD 108277/ médium 1855 a predbežné ošetrenie Acl11 (SEQ ID NO: 65) PPD 88499/médium 1335.Acl-11 (SEQ ID NO: 65) (solid triangles). Lymph Node Proliferation Assays with MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) were performed on day 9. Controls: PBS PPD 108277 pre-treatment / medium 1855 and Acl11 pre-treatment (SEQ ID NO: 65) PPD 88499 / medium 1335.

b) Skupiny po 4 myšiach boli 5 a 10 dní pred imunizáciou so 150 gg MBP intravenózne ošetrené buď s PBS alebo s 250 nmól Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67). Testy produkcie IL2 lymfatickými uzlinami so 150 gM Acl-11 (SEQ ID NO. 65) alebo so 17 gM Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) boli uskutočňované v deň 10.b) Groups of 4 mice were intravenously treated with either PBS or 250 nmol Acl-11 [4Y] 5 and 10 days prior to immunization with 150 gg MBP (SEQ ID NO: 67). Lymph node IL2 production assays with 150 gM Acl-11 (SEQ ID NO. 65) or 17 gM Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) were performed on day 10.

Príklad 3Example 3

Podávanie peptidu v pokročilom štádiuAdministration of the peptide at an advanced stage

Po imunizácii s MBP sa vyvíja u myší (PJL x SJL) F1 relapsujúca EAE (Fritz, R.B., a ď., J. Immunol., 1983, 130:1024), čo tento model EAE robí ideálnym pre skúmanie terapeutickej intervencie. Hoci imunodominantným encefalitogénom u myší (PJL x SJL) F1 je MBP Acl-11(SEQ ID NO. 65), je u tohto kmeňa encefalitogénny tiež subdominantný epitop MBP 31-47(SEQ ID NO: 68). Za účelom zistenia, či na liečbu EAE, indukovanej MBP, je nutný jeden z týchto peptidov alebo oba, boli opakované jednotlivé kroky príkladu 2, avšak s tou výnimkou, že skupiny myší boli ošetrené v pokročilom štádiu choroby intravenóznymi injekciami súčasne MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a MBP 3 1-47 (SEQ ID NO: 68) alebo samotným Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Skupiny kontrolných myší boli ošetrované intravenóznymi injekciami PBS alebo kontrolným peptidom Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69), čo je peptid viažúci sa na A^UA“, nepríbuzný MBP a neimunogénny pre myši (PJL x SJL) Fl.Upon immunization with MBP, F1 (EAJ) relapses in mice (PJL x SJL) (Fritz, RB, et al., J. Immunol., 1983, 130: 1024), making this EAE model ideal for investigating therapeutic intervention. Although the immunodominant encephalitogen in mice (PJL x SJL) F1 is MBP Acl-11 (SEQ ID NO. 65), the subdominant epitope MBP 31-47 (SEQ ID NO: 68) is also encephalitogenic in this strain. To determine whether one or both of these peptides were required to treat MBP-induced EAE, either of the steps of Example 2 were repeated, except that groups of mice were treated at an advanced stage of the disease with intravenous injections of MBP Acl-11 ( SEQ ID NO: 65) and MBP 3 1-47 (SEQ ID NO: 68) or Acl-11 alone (SEQ ID NO: 65). Groups of control mice were treated with intravenous injections of PBS or a control peptide Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69), a binding peptide and ^U A ', MBP and an unrelated non-immunogenic for mice (PJL x SJL) Fl.

Obr. 5 znázorňuje, že opakované intravenózne injekcie MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) buď samotného (obr. 5a) alebo v kombinácii s MBP 31-47 (SEQ ID NO. 68)(obr. 5b) znižujú výskyt, intenzitu a mortalitu EAE. Ošetrenie s obomaFig. 5 shows that repeated intravenous injections of MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) either alone (Fig. 5a) or in combination with MBP 31-47 (SEQ ID NO. 68) (Fig. 5b) reduce the incidence, intensity and mortality EAE. Treatment with both

155 peptidmi sa konzistentne s vyššie opísanými pozorovaniami iných pracovníkov javí ako o niečo účinnejšie ako ošetrenie s MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) samotným. Myši boli ošetrené šiestimi intravenóznymi injekciami peptidu počas akútnej a prvej relapsovej fázy. Potom boli myši sledované až do dňa 125 v priebehu chronickej remitujúcej fázy so žiadnymi známkami neskorého ochorenia v skupinách ošetrených MBP peptidom (dáta neznázornené). Kontrolný peptid Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69), podávaný intravenózne, nemal na ochorenie žiadny vplyv (obr. 5c). Vo zvláštnom experimente nebolo intravenózne podávanie MBP 3 1-47 (SEQ ID NO: 68) samotného účinné pri liečbe EAE (dáta neznázornené). Obr. 5a, b a c ukazujú účinnosť intravenózneho ošetrenia myší s EAE, indukovanou MBP. EAE bola indukovaná vyššie opísaným spôsobom pomocou MBP v skupinách po 11 až 16 myšiach. Myši boli ošetrované intravenózne injekciou 250 nmól každého peptidu počínajúc dňom 9, 12, 15, 21, 29 a 37. Krížiky, používané na všetkých obrázkoch, označujú jednotlivé myši, ktoré uhynuli alebo boli usmrtené v stupni 5 EAE. Kontrolná skupina, ošetrovaná PBS, je označená plnými krúžkami. Výsledky naznačujú, že imunodominantný encefalitogénny peptid MBP je jednak nevyhnutný a jednak dostačujúci k liečbe EAE indukovanej s MBP u myší (PJL x SJL) Fl, ako ukazuje zníženie intenzity a mortality EAE u ošetrených myší.The 155 peptides, consistent with the observations of other workers described above, appear to be somewhat more effective than treatment with MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) alone. Mice were treated with six intravenous injections of the peptide during the acute and first relapse phases. Then, mice were followed up to day 125 during the chronic remitting phase with no signs of late disease in the MBP peptide-treated groups (data not shown). The control peptide Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69), administered intravenously, had no effect on the disease (Fig. 5c). In a separate experiment, intravenous administration of MBP 3 1-47 (SEQ ID NO: 68) alone was not effective in treating EAE (data not shown). Fig. 5a, b and c show the efficacy of MBP-induced intravenous treatment of EAE mice. EAE was induced as described above by MBP in groups of 11-16 mice. Mice were treated by intravenous injection of 250 nmoles of each peptide beginning on days 9, 12, 15, 21, 29 and 37. The crosses used in all figures refer to individual mice that died or were sacrificed at step 5 of EAE. The control group treated with PBS is indicated by solid circles. The results indicate that the immunodominant encephalitogenic peptide MBP is both necessary and sufficient to treat MBE induced MBP in mice (PJL x SJL) F1, as shown by a decrease in the intensity and mortality of EAE in treated mice.

Príklad 4Example 4

Viacnásobné i.v. injekcie Acl-11 (SEQ ID NO: 65)Multiple i.v. injection of Acl-11 (SEQ ID NO: 65)

Po prípravných krokoch v príklade 2 boli pripravené viacnásobné injekcie Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Jedna injekcia peptidu v deň 9 oneskorila ochorenie o dva dni a znížila mortalitu zo 100 % na 63 %, ale u všetkých ošetrených myší sa nakoniec vyvinula silná EAE (dáta neznázornené). Tri injekcie peptidu počas akútnej fázy EAE spočiatku liečili ochorenie účinne, avšak počas relapsovej fázy si ošetrovaná skupina myší vyvinula ochorenie s neskorým nástupom (dáta neznázornené). Tieto výsledky, uvažované spoločne, naznačujú, že na liečbu s MBP-indukovaného ochorenia u myší (PJL x SJL) Fl sú potrebné viacnásobné intravenózne injekcie MBP peptidov počas akútnej a prvej relapsovej fázy EAE. Pre dlhodobé zníženie intenzity ochorenia sú teda vyžadované viacnásobné injekcie Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Obr. 6 ukazuje, že Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) lieči EAE v nižšej dávke ako Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a má na chorobu dlhšie trvajúci účinok. EAE bola indukovaná pomocou MBP u skupín po 8 až 10 myšiach. Obr. 6a znázorňuje myši ošetrované i.v. v dňoch 12 a 15 pomocou PBS (fosfátom pufrovaný salinický roztok; prázdne krúžky), 250 nmól Acl-11 (SEQ ID NO: 65)(plné štvorčeky) alebo 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67)(prázdne trojuholníčky). Hodnota MMS pre myši ošetrované s PBS bola 4,4 a mortalita 60 '%. Hodnota MMS pre myši ošetrované s Acl-11 (SEQ ID NO: 65) bola 3,9 a mortalita 37,5 %. Hodnota MMS pre myši ošetrované s Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) bola 2,1 a mortalita 0 %. Obr. 6b ukazuje myši ošetrované i.v. v dňoch 12, 15, 18, 21, 24 a 27 buď PBS (prázdne krúžky) alebo 2,5 nmól Acl11 (SEQ ID NO: 65)(plné krúžky). Hodnota MMS pre myši ošetrované s PBS bola 2,9 a mortalita 20 %. Hodnota MMS pre myši ošetrované peptidom bola 4,3 a mortalita 50 %.Following the preparation steps of Example 2, multiple injections of Acl-11 (SEQ ID NO: 65) were prepared. A single injection of peptide on day 9 delayed disease by two days and reduced mortality from 100% to 63%, but all treated mice eventually developed a strong EAE (data not shown). Three injections of peptide during the acute phase of EAE initially treated the disease effectively, but during the relapse phase the treated group of mice developed a late-onset disease (data not shown). These results, taken together, suggest that multiple intravenous injections of MBP peptides during the acute and first relapsing phases of EAE are required to treat MBP-induced disease in mice (PJL x SJL) F1. Thus, multiple injections of Acl-11 (SEQ ID NO: 65) are required for long-term reduction in disease intensity. Fig. 6 shows that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) treats EAE at a lower dose than Acl-11 (SEQ ID NO: 65) and has a longer lasting effect on the disease. EAE was induced by MBP in groups of 8 to 10 mice. Fig. 6a shows mice treated with i.v. on days 12 and 15 with PBS (phosphate buffered saline; open circles), 250 nmoles Acl-11 (SEQ ID NO: 65) (solid squares) or 250 nmoles Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) ( empty triangles). The MMS value for mice treated with PBS was 4.4 and the mortality was 60%. The MMS value for Acl-11 treated mice (SEQ ID NO: 65) was 3.9 and the mortality was 37.5%. The MMS value for Acl-11 [4Y] treated mice (SEQ ID NO: 67) was 2.1 and the mortality was 0%. Fig. 6b shows mice treated i.v. on days 12, 15, 18, 21, 24, and 27 either with PBS (open circles) or 2.5 nmol of Acl11 (SEQ ID NO: 65) (solid circles). The MMS value for mice treated with PBS was 2.9 and the mortality was 20%. The MMS value for peptide-treated mice was 4.3 and the mortality was 50%.

Príklad 5Example 5

Ošetrenie analógom MBP peptidu, ktorý tvorí in vivo stabilné komplexy s MHC triedy IITreatment with an analogue of the MBP peptide that forms in vivo stable complexes with MHC class II

Pretože komplexy peptid-MHC sú funkčné terapeutické jednotky, liečiace EAE, pôvodcovia odvodili, že Ac-1 1[4Y] (SEQ ID NO. 67) by mal byť účinnejší pri liečbe EAE, indukovanej aktívnym MBP, ako Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Na otestovanie tejto hypotézy boli uskutočnené stupne príkladu 2 s výnimkou injekčnej schémy a bolo zmenené dávkovanie. Obr. 6a ukazuje, že iba dve injekcie Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) skoro v priebehu choroby vyvolali dlhodobejší účinok ako dve injekcie Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Obr. 6b ďalej ukazuje, že opakované intravenózne injekcie Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) sú vysoko účinné pri liečbe EAE v dávke 2,5 nmól (obr. 6c). Potom boli uskutočnené histologické skúšky. Boli pripravené histologické rezy EAE z mozgu a miechy a farbené he57 matoxylínom a eozínom (CVD, West Sacramento, CA). V rezoch boli pozorovateľom naslepo hodnotené zápalové infiltráty na stupnici 1 až 4. Účinnosť Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) bola potvrdená histologickými skúškami mozgových a miechových rezov z myší, ošetrovaných peptidom a PBS, ktoré vykazujú výrazne znížený počet a intenzitu zápalových infiltrátov centrálneho nervového systému u myší ošetrených peptidom (obr. 7). Obr. 7 demonštruje, že zápalové infiltráty sú redukované u myší, ošetrených Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67). Zlepšená účinnosť Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) bola evidentná.Because peptide-MHC complexes are functional therapeutic units treating EAE, we have inferred that Ac-11 [4Y] (SEQ ID NO. 67) should be more effective in treating MBE induced by active MBP than Acl-11 (SEQ ID NO. NO: 65). To test this hypothesis, the steps of Example 2 were performed except for the injection schedule and the dosage was changed. Fig. 6a shows that only two injections of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) early in the course of the disease produced a longer-lasting effect than two injections of Acl-11 (SEQ ID NO: 65). Fig. 6b further shows that repeated intravenous injections of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) are highly effective in treating EAE at a dose of 2.5 nmol (Fig. 6c). Histological tests were then performed. Histological sections of EAE were prepared from brain and spinal cord and stained with he57 with matoxyline and eosin (CVD, West Sacramento, CA). The efficacy of Acl11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) was confirmed by histological assays of brain and spinal cord sections from peptide and PBS treated mice showing a significantly reduced number and intensity of inflammatory infiltrates. central nervous system infiltrates in peptide-treated mice (Fig. 7). Fig. 7 demonstrates that inflammatory infiltrates are reduced in Acl-11 [4Y] -treated mice (SEQ ID NO: 67). The improved efficacy of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) was evident.

Vo vyššie uvedenom príklade bola evidentná zlepšená účinnosť Acl11[4Y] (SEQ ID NO: 67). Pôvodcovia odvodili, že in vivo vznikajú stabilné komplexy peptid-MHC medzi A“A“ a Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67), ktorý bol intravenózne injikovaný, a tak spôsobil pozorovanú zlepšenú účinnosť. Tieto komplexy, vznikajúce in vivo, sú detegovateľné pomocou hybridómu 1934, ktorý bol odvodený z encefalitogénneho MBP-špecifického klonu T buniek. Bolo postupované podľa stupňov príkladu 2 s výnimkou dôb a množstva injekcií a množstvá boli upravené, ako je uvedené ďalej. Hybridom T buniek 1934 je špecifický pre MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) postupom podľa Wraitha, D.C., a ď., Celí 1989, 59:247. Stručne povedané boli hybridómové bunky inkubované v množstve 5.10⁴ na jamku v mikrotitrových platniach s plochým dnom s MBP peptidmi alebo peptidovými analógmi. Ako bunky obsahujúce antigén bolo pridané 5.10⁵ slezinových buniek (PJL x SJL) Fl, ožiarených 3 000 rad. Médium bolo rovnaké ako pri testoch proliferácie lymfatických uzlín s výnimkou toho, že doplnok séra tvorilo 10 % fetálneho teľacieho séra namiesto normálneho myšieho séra. Po 24 h boli odobrané supernatanty a bola skúmaná ich schopnosť podporovať rast buniek HT2. Potom boli z injikovaných myší v rôznych dobách po injekcii 250 nmól Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) odobrané sleziny a splenocyty boli použité ako bunky obsahujúce antigén pre Ac 1 -1 1-špecifický hybridom 1934. Ku kultúram nebol pridávaný žiadny ďalší peptid. Obr. 8 ukazuje, že slezinové bunky, ktoré boli in vivo podrobené „pulzácii“ s Acl-1 1[4Y] (SEQ ID NO: 67), sú vysoko účinné pri aktivácii hybridómu 1934. Schopnosť aktivovať hybridom trvá maximálne 2 h po injekcii, potom začína klesať do štyroch až šiestich h po injek58 cii. Po 10 h po injekcii Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) je aktivácia minimálna a po 20 h nie je prítomná (dáta neznázornené). Ako je zrejmé z obr. 8, experimenty s Acl-11 (SEQ ID NO: 65) aktiváciu hybridómu slezinovými bunkami z injikovaných myší nevykazujú ani 1 h po injekcii (dáta neznázornené). Ako je podrobnejšie znázornené na obr. 8, komplexy peptid-MHC, vzniknuté in vivo, sú detegovateľné u myší injikovaných Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67). Skupinám po 2 myšiach bolo v rôznych časových okamžikoch pred vybratím slezín (1 až 10 h) intravenózne injikované 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67). Splenocyty z injikovaných myší boli vyšetrované na schopnosť aktivovať bunky hybridómu 1934 na produkciu IL2. Výsledky sú vyjadrené ako proliferácia HT2. Tieto výsledky podporujú hypotézu, že vznik stabilných komplexov peptid-MHC in vivo prispieva k účinnosti terapeutického analógu MBP peptidu.In the above example, the efficacy of Acl11 [4Y] was evident (SEQ ID NO: 67). We inferred that in vivo stable peptide-MHC complexes were formed between A "A" and Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67), which was injected intravenously, thus causing the observed improved efficacy. These in vivo complexes are detectable with the hybridoma 1934, which was derived from an encephalitogenic MBP-specific T cell clone. The steps of Example 2 were followed except for the time and amount of injections, and the amounts were adjusted as shown below. The 1934 T cell hybridoma is specific for MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) following the procedure of Wraith, DC, et al., Cell 1989, 59: 247. Briefly, hybridoma cells were incubated at 5 x 10 ⁴ per well in flat-bottom microtiter plates with MBP peptides or peptide analogs. ⁵ x 10 ⁵ spleen cells (PJL x SJL) F1 irradiated with 3,000 rads were added as antigen-containing cells. The medium was the same as in the lymph node proliferation assays, except that the serum supplement constituted 10% of fetal calf serum instead of normal mouse serum. After 24 h, supernatants were collected and examined for their ability to promote the growth of HT2 cells. Spleens were then removed from injected mice at various times after injection of 250 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) and splenocytes were used as cells containing the antigen for the Ac 11-1 specific hybrid of 1934. No cultures were added to the cultures. no other peptide. Fig. 8 shows that spleen cells that have been 'pulsed' with Acl-11 [4Y] in vivo (SEQ ID NO: 67) are highly effective in activating hybridoma 1934. The ability to activate the hybrid lasts for a maximum of 2 hours after injection, then it begins to fall within four to six hours after injection 58 cii. After 10 h after injection of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67), activation is minimal and is not present after 20 h (data not shown). As shown in FIG. 8, experiments with Acl-11 (SEQ ID NO: 65) did not show activation of the hybridoma by spleen cells from injected mice even 1 h after injection (data not shown). As shown in more detail in FIG. 8, peptide-MHC complexes formed in vivo are detectable in Acl-11 [4Y] injected mice (SEQ ID NO: 67). Groups of 2 mice were injected intravenously with 250 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) at different times before the spleens were removed (1-10 h). Splenocytes from injected mice were screened for their ability to activate 1934 hybridoma cells to produce IL2. The results are expressed as HT2 proliferation. These results support the hypothesis that the formation of stable peptide-MHC complexes in vivo contributes to the efficacy of the therapeutic analogue of the MBP peptide.

Príklad 6Example 6

Syntéza myšieho MBP peptidu Acl-11(SEQ ID NO: 65)Synthesis of murine MBP peptide Acl-11 (SEQ ID NO: 65)

Myší MBP peptid Acl-11 (SEQ ID NO: 65) bol syntetizovaný štandardnou syntézou Fmoc/tBoc a čistený pomocou HPLC. Sekvencia aminokyselín peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65) je nasledujúca:The mouse MBP peptide Acl-11 (SEQ ID NO: 65) was synthesized by standard Fmoc / tBoc synthesis and purified by HPLC. The amino acid sequence of the Acl-11 peptide (SEQ ID NO: 65) is as follows:

Indukcia EAEEAE induction

EAE bola indukovaná u myších samíc (SJL x PL) F1 (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) vo veku 6 až 8 týždňov imunizáciou myší so 100 gg čisteného morčacieho MBP v CFA (GIBCO Lab., Grand Island, NY), obsahujúceho 400 gg kmeňa M. tuberculosis H37RA (DIFCO Lab., Detroit, MI), subkutánne pri koreni chvostu. V deň imunizácie a po 48 h bolo intravenózne dvakrát podané 200 ng toxínu dávivého kašľa (JHL BIOSCIENCE, Lenexa, Kansas). Myši boli denne monitorované na príznaky choroby a hodnotené podľa stupnice: 0 - žiadne klinické známky EAE, 1 - ochabnutý nereagujúci chvost, 2 - čiastočná paralýza zadných končatín, 3 - úplná paralýza zadných končatín, 4 - čiastočná až úplná <59 paralýza predných končatín, 5 - moribundná. Dáta sú vyjadrované ako priemer z hodnotenia intenzity choroby za každý deň zahrnujúci všetky zvieratá v skupine. Myši boli sledované počas doby 26 dní. Hneď keď myš uhynula na EAE, bolo do výpočtov pre všetky nasledujúce dni zahrnuté hodnotenie 5.EAE was induced in mice (SJL x PL) F1 (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) at 6-8 weeks of age by immunizing mice with 100 gg of purified turkey MBP in CFA (GIBCO Lab., Grand Island, NY) containing 400 gg of M. tuberculosis strain H37RA (DIFCO Lab., Detroit, MI), subcutaneously at the base of the tail. On the day of immunization and after 48 h, 200 ng of pertussis cough toxin (JHL BIOSCIENCE, Lenexa, Kansas) was administered intravenously twice. Mice were monitored daily for signs of disease and scored on a scale of: 0 - no clinical signs of EAE, 1 - flabby unresponsive tail, 2 - partial hind limb paralysis, 3 - complete hind limb paralysis, 4 - partial to complete <59 forelimb paralysis, 5 - moribund. Data are expressed as the average of the disease intensity assessment for each day including all animals in the group. Mice were followed for 26 days. As soon as the mouse died on EAE, a score of 5 was included in the calculations for all subsequent days.

Účinok IFN-β na EAEEffect of IFN-β on EAE

Bol uskutočnený titračný experiment na účely stanovenia účinkov rôzneho dávkovania IFN-β na EAE (obr. 13). Jedna skupina myši bola po indukcii EAE v deň 9, 13 a 16 ošetrovaná intraperitoneálne PBS (kontrola), jedna skupina myší bola v deň 9, 13 a 16 ošetrovaná 10 000 jedn. IFN-β (prázdny krúžok) a jedna skupina myší bola v deň 9, 13 a 16 ošetrovaná 2 000 jedn. IFN-β (plný krúžok). Ako je zrejmé z obr. 13, príznaky EAE sú v každom časovom bode pre obe dávky IFN-β podobné, čo naznačuje, že na experimenty s IFN-β by bola vhodná nižšia dávka, ktorá je preferovaná, pretože možnosť toxicity v dôsledku vyššej dávky IFN-β je menej pravdepodobná. V ostatných experimentoch, znázornených na obr. 12a až 12c, bolo použitých 2 000 jedn. IFN-β, pretože táto dávka vykázala zlepšenie klinického hodnotenia.A titration experiment was performed to determine the effects of different dosages of IFN-β on EAE (Fig. 13). One group of mice was treated intraperitoneally with PBS (control) after EAE induction on days 9, 13 and 16, one group of mice was treated with 10,000 units on days 9, 13 and 16. IFN-β (open circle) and one group of mice were treated with 2,000 units on days 9, 13 and 16. IFN-β (solid circle). As shown in FIG. 13, EAE symptoms are similar at each time point for both doses of IFN-β, suggesting that a lower dose, which is preferable, would be appropriate for IFN-β experiments, as the possibility of toxicity due to a higher dose of IFN-β is less likely . In the other experiments shown in FIG. 12a to 12c, 2,000 units were used. IFN-β as this dose showed an improvement in the clinical trial.

Ako je zrejmé z obr. 12a, bola ošetrovaná v deň 9, 12, 16 a 20 kontrolná skupina myší PBS a iná skupina myší 2 000 jedn. IFN-β. Ako je zrejmé z obr. 12a, skupina ošetrovaná IFN-β mala v priebehu času iba mierne slabšie príznaky ako kontrolná skupina.As shown in FIG. 12a, a control group of PBS mice and another group of 2000 units of mice were treated on days 9, 12, 16 and 20. IFN-β. As shown in FIG. 12a, the IFN-β treated group showed only slightly milder symptoms over time than the control group.

Účinok myšieho MBP peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65) na EAEEffect of murine MBP peptide Acl-11 (SEQ ID NO: 65) on EAE

Bol zisťovaný účinok myšieho MBP peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a výsledky sú zobrazené na obr. 12b. Jedna skupina myší bola v deň 10, 13, 17 a 21 po indukcii EAE ošetrovaná i.p. PBS (kontrola) a druhá skupina myší bola v deň 10, 13, 17 a 21 ošetrovaná i.v. 250 nmól peptidu Acl-11(SEQ ID NO:The effect of the murine MBP peptide Acl-11 (SEQ ID NO: 65) was determined and the results are shown in FIG. 12b. One group of mice was treated i.p. on day 10, 13, 17 and 21 after EAE induction. PBS (control) and a second group of mice were treated i.v. on days 10, 13, 17 and 21. 250 nmol of Acl-11 peptide (SEQ ID NO:

65). Myši boli monitorované vyššie uvedeným spôsobom. Ako je znázornené na obr. 12b, myši ošetrované Acl-11 (SEQ ID NO: 65) mali slabšie príznaky ako kontrolná skupina.65). Mice were monitored as above. As shown in FIG. 12b, Acl-11-treated mice (SEQ ID NO: 65) had fewer symptoms than the control group.

Účinok ošetrenia kombináciou peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a IFN-β na EAEEffect of treatment with the combination of Acl-11 peptide (SEQ ID NO: 65) and IFN-β on EAE

Účinky ošetrenia kombináciou peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65) a IFN-β sú znázornené na obr. 12c. Jedna skupina myší bola po indukcii EAE ošetrovaná PBS (kontrola) a jedna skupina myší bola v deň 10, 13, 17 a 21 ošetrovaná i.v. 250 nmól peptidu Acl-11 (SEQ ID NO: 65)(otvorené šípky) a v deň 9, 12, 16 a 20 i.p. 2 000 jedn. IFN-β. Ako je znázornené na obr. 12c, skupina myši ošetrovaná kombináciou peptidu a IFN-β vykazovala výrazný pokles intenzity príznakov v porovnaní s kontrolnou skupinou aj v porovnaní s ošetrovaním samotným IFN-β alebo samotným peptidom, znázorneným na obr. 12a a 12b, čo ukazuje na synergický účinok tejto kombinácie. Liečebný režim, zahrnujúci kombináciu peptidu a IFN-β, teda poskytuje zvýšený účinok, vedúci ku zníženiu sily príznakov EAE.The effects of the treatment with the combination of Acl-11 peptide (SEQ ID NO: 65) and IFN-β are shown in FIG. 12c. One group of mice was treated with PBS (control) after EAE induction and one group of mice was treated i.v. on days 10, 13, 17 and 21. 250 nmol of Acl-11 peptide (SEQ ID NO: 65) (open arrows) and on days 9, 12, 16 and 20 i.p. 2 000 unit IFN-β. As shown in FIG. 12c, a group of mice treated with a combination of peptide and IFN-β showed a significant decrease in symptom intensity compared to both the control group and the IFN-β alone or the peptide alone shown in FIG. 12a and 12b, indicating the synergistic effect of this combination. Thus, a treatment regimen comprising a combination of peptide and IFN-β provides an enhanced effect leading to a decrease in the severity of EAE symptoms.

Príklad 7Example 7

Podávanie peptidov cicavcom na liečbu EAE vyvolanej miechovým homogenizátom (SCH) ako modelu sklerózy multiplexAdministration of peptides to mammals for the treatment of EAE induced by spinal cord homogenate (SCH) as a model of multiple sclerosis

Syntéza peptidovPeptide synthesis

Peptidy boli pripravené automatizovanou syntézou peptidov (ABI 430A, Applied Biosciences, Foster City, CA) s použitím štandardnej 9-fluorenylmetoxykarbonylovej chémie. Peptidy boli čistené vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou a bolo potvrdené zloženie aminokyselín. Zvolené sekvencie peptidov boli MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) ASQKRPSQRHG, MBP Acl61Peptides were prepared by automated peptide synthesis (ABI 430A, Applied Biosciences, Foster City, CA) using standard 9-fluorenylmethoxycarbonyl chemistry. The peptides were purified by high pressure liquid chromatography and the amino acid composition was confirmed. The peptide sequences selected were MBP Acl-11 (SEQ ID NO: 65) ASQKRPSQRHG, MBP Acl61

11[4A] (SEQ ID NO: 66) ASQARPSQRHG, MBP Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) ASQYRPSQRHG, MBP 31-47 (SEQ ID NO: 68) RHRDTGILDSIGRFFSG, Ova 323-339 (SEQ ID NO: 69) ISQAVHAAHAEINEAGR a Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70) ISQAVHAAHAEINEA.11 [4A] (SEQ ID NO: 66) ASQARPSQRHG, MBP Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) ASQYRPSQRHG, MBP 31-47 (SEQ ID NO: 68) RHRDTGILDSIGRFFSG, Ova 323-339 (SEQ ID NO) : 69) ISQAVHAAHAEINEAGR and Ova 323-337 (SEQ ID NO: 70) ISQAVHAAHAEINEA.

Čistenie MBPMBP cleaning

SCH bol pripravený z morčacích miech (Keystone Biologicals, Cleveland, OH) s použitím modifikácie metódy podľa Smitha, M.E., J. Neurochem., 1969, 16:83. Zmes proteinov SCH bola lyofilizovaná a použitá podľa sušiny.SCH was prepared from guinea pigs (Keystone Biologicals, Cleveland, OH) using a modification of the method of Smith, M.E., J. Neurochem., 1969, 16:83. The SCH protein mixture was lyophilized and used according to dry weight.

Indukcia EAE, hodnotenie a peptidová terapiaEAE induction, evaluation and peptide therapy

EAE bola indukovaná u myší (PJL x SJL) Fl, získaných od Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). Keď myši dosiahli vek 8 až 14 týždňov, bola indukovaná EAE imunizáciou 500 až 1000 pg SCH, emulgovaného v kompletnom Freundovom adjuvans (Gibco Laboratories, Grand Island, NY), doplnenom ďalšími 400 pg na myš M. tuberculosis H37Ra (Difco Laboratories, Detroit, MI). V dobe imunizácie a o 48 h neskôr bolo podané 200 ng toxínu dávivého kašľu (JRH Biosciences, Lenexa, KS). Myši boli hodnotené na základe klinických príznakov podľa stupnice: 1. paralýza chvostu, 2. Čiastočná paralýza zadných končatín, 3. úplná paralýza zadných končatín, 4. paralýza predných končatín, 5. moribundná alebo mŕtva. Myši s hodnotením 5 boli usmrtené. Po smrti boli myši vyradené z ďalších výpočtov priemerného klinického hodnotenia. Intravenózne boli podávané peptidy, ako je uvedené ďalej v jednotlivých príkladoch.EAE was induced in mice (PJL x SJL) F1, obtained from Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME). When mice reached 8-14 weeks of age, they were induced by EAE immunization with 500-1000 µg of SCH, emulsified in complete Freund's adjuvant (Gibco Laboratories, Grand Island, NY) supplemented with an additional 400 µg per M. tuberculosis H37Ra mouse (Difco Laboratories, Detroit, MI). At the time of immunization and 48 h later, 200 ng of pertussis cough toxin (JRH Biosciences, Lenexa, KS) was administered. Mice were scored according to clinical signs according to the scale: 1. tail paralysis, 2. partial hind limb paralysis, 3. total hind limb paralysis, 4. forelimbs paralysis, 5. moribund or dead. Mice rated 5 were sacrificed. After death, mice were excluded from further average clinical trial calculations. Peptides were administered intravenously as described below in the individual examples.

Výsledky sú znázornené na obr. 16, ktorý ukazuje, že Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zvráti priebeh EAE, keď je podaný po nástupe paralýzy. EAE bola indukovaná u skupín po 14 myšiach pomocou SCH. Terapia bola zahájená u každej myši individuálne potom, čo sa u nej vyvinuli klinické znaky EAE. Dáta sú vynesené vo vzťahu k zahájeniu terapie u každého jedinca (deň 1 - nástup klinic62 kých príznakov pre každú jednotlivú myš). Myši boli ošetrované v deň 1, 3, 6 a 9 choroby s PBS (plné štvorčeky), i.v. 250 nmól Acl-11 (4Y] (SEQ ID NO: 67)(prázdne trojuholníky) alebo 250 nmól Acl-11 [4 Y] (SEQ ID NO: 67)(prázdne krúžky). Hviezdička označuje jednotlivé myši, ktoré uhynuli alebo boli usmrtené v dôsledku stupňa 5 EAE.The results are shown in FIG. 16, which shows that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) reverses the course of EAE when administered after the onset of paralysis. EAE was induced in groups of 14 mice by SCH. Therapy was initiated individually in each mouse after it developed clinical signs of EAE. Data are plotted relative to initiation of therapy in each individual (day 1 - onset of clinical symptoms for each individual mouse). Mice were treated on day 1, 3, 6 and 9 of disease with PBS (filled squares), i.v. 250 nmole of Acl-11 (4Y) (SEQ ID NO: 67) (open triangles) or 250 nmole of Acl-11 [4 Y] (SEQ ID NO: 67) (open circles) Asterisks indicate individual mice that died or were killed due to EAE Grade 5.

Obr. 17 ukazuje, že Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) zabraňuje nástupu EAE, keď je podaný predtým, ako sa prejavia príznaky choroby. EAE bola indukovaná pomocou SCH. Terapia bola zahájená u každej myši individuálne na ôsmy deň po indukcii choroby pomocou gpSCH. Dáta sú vynesené vo vzťahu k zahájeniu terapie pre každého jedinca. Skupiny myší, ktoré prežili boli v deň 8, 10, 13 a 17 ošetrované i.v. 25 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67)(prázdne trojuholníky) alebo s.c. 25 nmól Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67)(plné krúžky). Jedna skupina nedostávala žiadne ošetrenie (prázdne štvorčeky).Fig. 17 shows that Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) prevents the onset of EAE when administered before symptoms of the disease are manifested. EAE was induced by SCH. Therapy was initiated on each mouse individually on day 8 after disease induction by gpSCH. Data are plotted in relation to initiation of therapy for each individual. Groups of surviving mice were treated i.v. on days 8, 10, 13 and 17. 25 nmol Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (open triangles) or s.c. 25 nmol Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (solid circles). One group received no treatment (open squares).

Výsledky na obr. 16 a 17 ukazujú, že oba spôsoby podávania sú účinné pri prevencii nástupu príznakov.The results in FIG. 16 and 17 show that both routes of administration are effective in preventing the onset of symptoms.

Príklad 8Example 8

Bolo postupované rovnako ako v príklade 2, avšak neboli uskutočňované testy proliferácie lymfatických uzlín a produkcie IL2. EAE bola indukovaná v deň 0 pomocou gpMBP a potom bol 3 skupinám myší v deň 8, 10, 13 a 17 podávaný Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67). Výsledky sú graficky znázornené na obr. 18 ako intravenózne aplikácie (prázdne trojuholníky), subkutánne injekcie (plné krúžky) a kontrola (prázdne krúžky). Predbežné ošetrenie (napríklad ošetrenie pred prejavom príznakov) pomocou Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) môže zamedziť vzniku EAE indukovanej pomocou gpMBP.The procedure was as in Example 2, but the lymph node proliferation and IL2 production tests were not performed. EAE was induced on day 0 with gpMBP, and then Acl-11 [4Y] was administered to 3 groups of mice on days 8, 10, 13 and 17 (SEQ ID NO: 67). The results are shown graphically in FIG. 18 such as intravenous administration (open triangles), subcutaneous injections (solid circles), and control (open circles). Pretreatment (e.g., treatment before symptoms) with Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) can prevent gpMBP-induced EAE.

Príklad 9 cDNA kódujúca ľudský MOG proteínExample 9 cDNA encoding human MOG protein

V počiatočnom pokuse získať ľudskú DNA kódujúcu MOG proteín bola knižnica ľudskej cDNA podrobená polymerázovej reakcii (PCR) s použitím primérov 3’ a 5’, konštruovaných na základe publikovanej sekvencie kódujúcej krysí MOG podľa Gardiniera a ď. (viď vyššie). Sekvencia ľudského MOG nemohla byť týmto spôsobom získaná, pravdepodobne v dôsledku nedostatku homológie na konci 5’ a/alebo 3’ ľudskej a krysej sekvencie.In an initial attempt to obtain human DNA encoding a MOG protein, a human cDNA library was subjected to a polymerase reaction (PCR) using primers 3 'and 5', constructed on the basis of the published rat MOG coding sequence of Gardinier and d '. (see above). The human MOG sequence could not be obtained in this way, probably due to a lack of homology at the end of the 5 'and / or 3' human and rat sequences.

Preto boli konštruované štyri vnútorné krysie oligonukleotidy. Dva z nich boli homológne k hornému reťazcu génu (priméry 94-111 a 166-183) (SEQ ID NO: 74), báza 1 počínajúc ATG) a dva boli homológne so spodným reťazcom génu (priméry 538-555 (SEQ ID NO: 75) a 685-702). Kombinácia primérov 166183 (SEQ ID NO: 74) a 538-555 (SEQ ID NO: 75) bola úspešná pri uskutočňovaní amplifikácie fragmentu s očakávanou veľkosťou približne 400 bp z knižnice cDNA ľudského mozgu. Sekvencia týchto primérov bola:Therefore, four internal rat oligonucleotides were constructed. Two of them were homologous to the upper chain of the gene (primers 94-111 and 166-183) (SEQ ID NO: 74), base 1 starting with ATG) and two were homologous to the lower chain of the gene (primers 538-555 (SEQ ID NO: 75) and 685-702). The combination of primers 166183 (SEQ ID NO: 74) and 538-555 (SEQ ID NO: 75) was successful in performing amplification of a fragment of the expected size of approximately 400 bp from the human brain cDNA library. The sequence of these primers was:

a) 166-183: CAGAATCCGGGAAGAATGCCACGGGC (SEQ ID NO: 74) a(a) 166-183: CAGAATCCGGGAAGAATGCCACGGGC (SEQ ID NO: 74); and

b) 538-555: CAGCGGCCGCACGGAGTTTTCCTCTCAG (SEQ ID NO: 75)(b) 538-555: CAGCGGCCGCACGGAGTTTTCCTCTCAG (SEQ ID NO: 75)

V priméri 166-183 (SEQ ID NO: 74) je prítomné miesto EcoRI a v priméri 538-555 (SEQ ID NO: 75) sa nachádza miesto Nôti.An EcoRI site is present in primer 166-183 (SEQ ID NO: 74) and a Note site is found in primer 538-555 (SEQ ID NO: 75).

Produkt PCR 400 bp bol klonovaný do expresného vektora pVL1393 štiepením pVL1393 (Pharmigen CA) pomocou EcoRI a Nôti, štiepením amplifikovaného produktu rovnakými enzýmami a ligáciou vzniknutých fragmentov. Inzert bol overený štiepením niekoľkých klonov odvodených z Iigovaných plazmidov pomocou EcoRI a Nôti a sekvenovaním vzniknutého 400 bp fragmentu ľudského MOG. Predpokladá sa, že vzniknutý inzert postráda 184 bp sekvencie 5’ a 201 bp sekvencie 3’, vztiahnuté na krysí otvorený čítací rámec s veľkosťou 738 bp.The 400 bp PCR product was cloned into the expression vector pVL1393 by digestion of pVL1393 (Pharmigen CA) with EcoRI and Noti, digesting the amplified product with the same enzymes and ligating the resulting fragments. The insert was verified by digesting several clones derived from the ligated plasmids with EcoRI and Noto and sequencing the resulting 400 bp fragment of human MOG. The resulting insert is believed to lack 184 bp of sequence 5 'and 201 bp of sequence 3', based on a rat open reading frame of 738 bp in size.

Z horného a spodného reťazca inzertu 400 bp polôh 346-363 boli konštruované dva priméry:Two primers were constructed from the upper and lower strands of the 400 bp insert 346-363:

5’-CAGAATTCTCAGGTTCTCAGATGAAGGA-3’ (SEQ ID NO: 76) a5’-CAGAATTCTCAGGTTCTCAGATGAAGGA-3 '(SEQ ID NO: 76), and

5’-AAGCGGCCGCTATCCTTCATCTGAGAACCT-3’ (SEQ ID NO: 77) kde je v prvom reťazci prítomné miesto EcoRI a v druhom miesto Nôti. Podčiarknuté oblasti zodpovedajú sekvencii MOG.5´-AAGCGGCCGCTATCCTTCATCTGAGAACCT-3 '(SEQ ID NO: 77) where EcoRI is present in the first chain and Nôte in the second. The underlined regions correspond to the MOG sequence.

Horný, resp. spodný primér ľudského MOG 346-363 (SEQ ID NO: 76 a 77) bol použitý v kombinácii s vyššie uvedeným krysím primérom 5’, resp. 3’ na amplifikáciu chýbajúcich koncov 5’ a 3’ génu z tej istej knižnice cDNA ľudského mozgu, ktorá bola použitá predtým. Bol získaný produkt PCR, zodpovedajúci 3’-konci génu, ale zodpovedajúci 5’-koniec nevznikol.Upper, respectively. the lower primer of human MOG 346-363 (SEQ ID NOS: 76 and 77) was used in combination with the above-mentioned rat primer 5 &apos; 3 'to amplify the missing 5' and 3 'ends of the gene from the same human brain cDNA library that was used previously. A PCR product was obtained corresponding to the 3 'end of the gene, but the corresponding 5' end was not produced.

Získaný 3’-fragment ma, očekávanú veľkosť 400 bp a tento fragment bol klonovaný do pVL1393 a sekvenovaný.The obtained 3'-fragment has the expected size of 400 bp and this fragment was cloned into pVL1393 and sequenced.

Na získanie 5’-časti génu bola knižnica ľudskej mozgovej drene gtlO, získaná od Clotech, ktorá bola vopred amplifikovaná a mala titer 8.1O¹⁰ pfu/ml, podrobená screeningu postupom predpísaným výrobcom. Knižnica bola nanesená na 12 veľkých platní v množstve 30 000 plakov/platňu a plaky boli prenesené na nitrocelulózové filtre (2 opakované filtre/platňu). Dvanásť filtrov, získaných z 12 rôznych platní, potom bolo hybridizovaných s ³²P značenou sondou, zodpovedajúcou pôvodne klonovanému vnútornému 400 bp fragmentu ľudského MOG (polohy 184-534). Bolo získaných 22 silne pozitívnych. Pre každý pozitívny bola z pôvodných platní vyzdvihnutá zátka a inkubovaná cez noc pufrom s riedením λ za účelom vymytia fága z agaru. Skúmavka potom bola odstredená a supernatant prenesený.To obtain the 5'-part of the gene, the gt10 human brain marrow library obtained from Clotech, which had been amplified beforehand and had a titer of 8.10 ¹⁰ pfu / ml, was screened according to the manufacturer's prescribed procedures. The library was plated on 12 large plates at 30,000 plaques / plate and the plaques were transferred to nitrocellulose filters (2 replicate filters / plate). Twelve filters, obtained from 12 different plates, were then hybridized with a ³² P labeled probe, corresponding to the originally cloned 400 bp internal fragment of human MOG (positions 184-534). 22 strongly positive were obtained. For each positive, the stopper was removed from the original plates and incubated overnight with λ dilution buffer to wash the phage from the agar. The tube was then centrifuged and the supernatant transferred.

Z každého poolu bola amplifikovaná DNA s použitím buď priameho priméru gtlO s miestom SstlI:DNA was amplified from each pool using either the gt10 direct primer with the SstII site:

5’-CTTTTGAGCAAGTTCAGCCTGGTTAAG-3’ (SEQ ID NO: 78) alebo reverzného priméru gtlO s miestom Xhol:5’-CTTTTGAGCAAGTTCAGCCTGGTTAAG-3 ’(SEQ ID NO: 78) or gt10 reverse primer with Xhol:

5’-ACCTCGAGGAGGTGGCTTATGAGTATTTCTTCCAGGGTA-3’ (SEQ ID5’-ACCTCGAGGAGGTGGCTTATGAGTATTTCTTCCAGGGTA-3 '(SEQ ID

NO: 79) rovnako ako horného alebo spodného reťazca vnútorného priméru ľudského MOG:NO: 79) as well as the upper or lower strand of the internal primer of human MOG:

5’-GGTGCGGGAAAGGTGACTCTCAGGATCCGGAAT-3 ’ (SEQ ID NO: 80) alebo5’-GGTGCGGGAAAGGTGACTCTCAGGATCCGGAAT-3 '(SEQ ID NO: 80), or

5’-ATTCCGGATCCTGAGAGTCACCTTTCCCGCACC-3’ (SEQ ID NO: 81)5’-ATTCCGGATCCTGAGAGTCACCTTTCCCGCACC-3 '(SEQ ID NO: 81)

Posledné dva priméry (SEQ ID NO: 80 a 81) zahrnujú miesto BamHI (v sekvenciách podčiarknuté), prirodzene prítomné v sekvencií ľudského MOG.The last two primers (SEQ ID NOS: 80 and 81) include a BamHI site (underlined in sequences) naturally present in the human MOG sequence.

Priméry boli použité v štyroch rôznych kombináciách: 1) priamy horný/spodný interného MOG, 2) reverzný spodný/spodný interného MOG, 3) horný interného MOG/reverzný spodný a 4) horný interného MOG/priamy horný.The primers were used in four different combinations: 1) direct upper / lower internal MOG, 2) reverse lower / lower internal MOG, 3) upper internal MOG / reverse lower and 4) upper internal MOG / direct upper.

Prvé dve kombinácie poskytli 5’-koniec génu (až po miesto BamHI) a posledné dve 3’-koniec génu. Obe časti 5’ a 3’ obsahujú nepreložené oblasti. Ktorý z oboch členov každej kombinácie skutočne vedie k požadovanému fragmentu, závisí na orientácii cDNA, klonovaných do gtlO.The first two combinations provided the 5 'end of the gene (up to the BamHI site) and the last two 3' end of the gene. Both sections 5 'and 3' contain untranslated areas. Which of the two members of each combination actually results in the desired fragment depends on the orientation of the cDNA cloned into gt10.

Veľkosť získaných fragmentov sa v jednotlivých pooloch líšila. Päť najväčších fragmentov 5’ alebo 3’ bolo subklonovaných do miest SstlI a BamHI alebo BamHI a Xhol polylinkéru SK. Tri klony z každého poolu potom boli sekvenované, aby sa vylúčila prítomnosť chýb PCR. Tým sa získala úplná sekvencia oblasti kódujúcej gén, rovnako ako 174 bp nepreloženej sekvencie 5’.The size of the fragments obtained varied between pools. The five largest 5 'or 3' fragments were subcloned into SstIII and BamHI or BamHI and Xhol sites of the SK polylinker. Three clones from each pool were then sequenced to eliminate the presence of PCR errors. This gave the complete sequence of the gene coding region as well as the 174 bp untranslated sequence 5 '.

Ľudský gén MOG kóduje preproteín s 248 aminokyselinami, ktorý má 87% homológiu s 246 aminokyselinami v krysom proteíne. Maturovaný proteín obsahuje 218 aminokyselín. Maturovaný proteín začína glycínom a je odvodený od preproteínu s 248 aminokyselinami štiepením z presekvencie siahajúcej od štar(,6 tovacieho kodónu MET k alanínovému zvyšku tesne predchádzajúcemu glycínu v polohe 1.The human MOG gene encodes a 248 amino acid preprotein having 87% homology to 246 amino acids in the rat protein. The mature protein contains 218 amino acids. The mature protein starts with glycine and is derived from a 248 amino acid preprotein by cleavage from a presequence ranging from the 6 'start codon MET to the alanine residue immediately preceding the glycine at position 1.

Príklad 9AExample 9A

Expresia skráteného ľudského MOG v hmyzích bunkách SF-9 a E. coliExpression of Truncated Human MOG in SF-9 and E. coli Insect Cells

Expresia SF-9Expression SF-9

Prenosový vektor PVL1393, obsahujúci cDNA skráteného ľudského MOG kódujúci aminokyseliny 1-121 ľudského MOG (prvých 121 aminokyselín SEQ ID NO: 48) bol kotransfikovaný do buniek SF-9 spolu s linearizovanou DNA Baculoviru Baculogold (Pharmingen, San Diego, CA). Po 4 dňoch bol odobraný supernatant kultúry, obsahujúci rekombinačné vírusy. Rekombinačný vírus bol vyčistený od plakov a podrobený trom cyklom amplifikácie na získanie zásobného vírusu s vyšším titrom. Bunky AF-9 potom boli infikované zásobným vírusom v množstve MOI 2,0. Supernatant z infikovaných buniek bol odobraný po 48 h po infekcii a nanesený na stĺpec agarózy NiNTA. Rekombinačný proteín MOG bol eluovaný za nedenaturujúcich podmienok s použitím 250 mM imidazolu, dialyzovaný proti 5% kyseline propiónovej a H₂O a následne lyofilizovaný. Koncentrácia proteínu bola odhadnutá pomocou BCA. Čistený proteín MOG bol vizualizovaný na 12,5% polyakrylamidovom géli, farbenom Coomassie blue.The transfer vector PVL1393 containing truncated human MOG cDNA encoding amino acids 1-121 of human MOG (first 121 amino acids of SEQ ID NO: 48) was cotransfected into SF-9 cells along with Baculovirus Baculogold linearized DNA (Pharmingen, San Diego, CA). After 4 days, culture supernatant containing recombinant viruses was harvested. The recombinant virus was plaque-cleaned and subjected to three cycles of amplification to obtain a higher titer virus stock. AF-9 cells were then infected with a stock virus of MOI 2.0. The supernatant from the infected cells was harvested 48 h after infection and loaded onto a NiNTA agarose column. Recombinant MOG protein was eluted under non-denaturing conditions using 250 mM imidazole, dialyzed against 5% propionic acid and H ₂ O and subsequently lyophilized. Protein concentration was estimated by BCA. The purified MOG protein was visualized on a Coomassie blue stained 12.5% polyacrylamide gel.

Príklad 10Example 10

Podľa príkladov 9 a 9A bol pripravený skrátený ľudský MOG (huMOG). MBP (morča) bol pripravený opísaným spôsobom. Postupovalo sa podľa príkladu 2, avšak EAE bola indukovaná v troch oddelených skupinách myší s použitím 75 pg gpMBP a 100 pg huMOG (prázdne trojuholníky) a kombinácie 75 pg gp MBP a 100 pg huMOG (plné štvorčeky). Graf na obr. 19 ukazuje priebeh ochorenia pre každý prípad v tomto príklade. Ochorenie vyvolané súčasne MOG aTruncated human MOG (huMOG) was prepared according to Examples 9 and 9A. MBP (guinea pig) was prepared as described. Example 2 was followed, but EAE was induced in three separate groups of mice using 75 µg gpMBP and 100 µg huMOG (open triangles) and a combination of 75 µg gp MBP and 100 µg huMOG (solid squares). The graph of FIG. 19 shows the course of the disease for each case in this example. MOG a

MBP je silnejšie ako v prípade každého z nich samotného. Výsledky naznačujú, že k ochoreniu prispieva MOG i MBP.MBP is stronger than for each of them alone. The results indicate that both MOG and MBP contribute to the disease.

Príklad 11Example 11

Ochorenie bolo vyvolané rovnako ako v príklade 10 pomocou huMOG + gpMBP (deň 0 - vyvolanie ochorenia). Myši boli ošetrované pred nástupom príznakov s 250 nmól Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67) a kontrolou (PBS) v deň 6, 8, 1, 13, 17, 22 a 27 (šípky označujú ošetrenie). Ako ukazuje graf na obr. 20, ošetrenie Acl-11[4Y] (SEQ ID NO: 67)(prázdne štvorčeky) významne znížilo priemerný klinický záznam v porovnaní s kontrolami (plné štvorčeky).The disease was induced as in Example 10 with huMOG + gpMBP (day 0 - disease induction). Mice were treated before the onset of symptoms with 250 nmol of Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) and control (PBS) on days 6, 8, 1, 13, 17, 22 and 27 (arrows indicate treatment). As shown in FIG. 20, treatment with Acl-11 [4Y] (SEQ ID NO: 67) (open squares) significantly reduced the mean clinical record compared to controls (solid squares).

Na základe tu opísaných konkrétnych postupov je odborník schopný nájsť, resp. pomocou iba rutinných experimentov vypracovať početné ekvivalenty, ktoré taktiež spadajú do rozsahu vynálezu a sú pokryté patentovými nárokmi.Based on the specific procedures described herein, one skilled in the art is able to find, respectively. using only routine experiments to elaborate numerous equivalents which are also within the scope of the invention and are covered by the claims.

ZOZNAM SEKVENCIÍ (1) VŠEOBECNÉ INFORMÁCIE:LIST OF SEQUENCES (1) GENERAL INFORMATION:

(i) PÔVODCOVIA: Smilek, Dawn;(i) ORIGINATORS: Smilek, Dawn;

Samson, Michael F.; Gefter, Malcolm;Samson, Michael F .; Gefter, Malcolm;

Hsu, Di-Hwei,Hsu, Di-Hwei

Shi, Jia-Dong;Shi, Jia-Dong;

Paliard, Xavier; Devaux, Brigitte; Rothbard, Jonathan; a Franzen, Henry M.Palliard, Xavier; Devaux, Brigitte; Rothbard Jonathan; and Franzen, Henry M.

(ii) NÁZOV VYNÁLEZU: Prípravky a spôsoby liečenia sklerózy multiplex (iii) POČET SEKVENCIÍ: 81 (iv) KOREŠPONDENČNÁ ADRESA:(ii) NAME OF THE INVENTION: Preparations and methods for treating multiple sclerosis (iii) NUMBER OF SEQUENCES: 81 (iv) CORRECTIVE ADDRESS:

(A) ADRESÁT: LAHIVE & COCKFIELD (B) ULICA: 60 State Street, Suite 510 (C) MESTO: Boston (D) ŠTÁT: Massachusetts (E) KRAJINA: USA (F) ZIP: 02109-1875 (v) STROJOVO ČITATEĽNÁ FORMA:(A) ADDRESS: LAHIVE & COCKFIELD (B) STREET: 60 State Street, Suite 510 (C) CITY: Boston (D) COUNT: Massachusetts (E) COUNTRY: USA (F) ZIP Code: 02109-1875 (v) MACHINE READER FORM:

(A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM PC kompatibilný (C) OPERAČNÝ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release #1.0, Verše #1.25 (vi) ÚDAJE O TEJTO PRIHLÁŠKE:(A) MEDIA TYPE: Floppy Disk (B) COMPUTER: IBM PC Compatible (C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS / MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release # 1.0, Versions # 1.25 (vi) INFORMATION ON THIS APPLICATION:

(A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY: PCT/US95/13682 (B) DÁTUM PODANIA: 25.10.1995 (vii) ÚDAJE O PRIORITNEJ PRIHLÁŠKE:(A) APPLICATION NUMBER: PCT / US95 / 13682 (B) filing date: 25.10.1995 (vii) PRIORITY APPLICATION DETAILS:

(A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY: US 08/404,228 (B) DÁTUM PODANIA: 15.3.1995 (A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY: US 08/328,224 (B) DÁTUM PODANIA: 25.10.1994 (A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY: US 08/300,811 (B) DÁTUM PODANIA: 1.9.1994 (A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY: US 08/241,246 (B) DÁTUM PODANIA: 10.5.1994 (A) ČÍSLO PRIHLÁŠKY: US 08/116,824 (B) DÁTUM PODANIA: 3.9.1993 (viii) INFORMÁCIE O ZÁSTUPCOVI:(A) APPLICATION NUMBER: US 08 / 404,228 (B) filing date: 3/15/1995 (A) APPLICATION NUMBER: US 08 / 328,224 (B) APPLICATION NUMBER: 25.10.1994 (A) APPLICATION NUMBER: US 08 / 300,811 (B ) SUBMISSION DATE: 1.9.1994 (A) APPLICATION NUMBER: US 08 / 241,246 (B) SUBMISSION DATE: 10.5.1994 (A) APPLICATION NUMBER: US 08 / 116,824 (B) SUBMISSION DATE: 3.9.1993 (viii) INFORMATION ABOUT Deputy:

(A) MENO: Amy E. Mandragouras (B) REGISTRAČNÉ ČÍSLO: Reg No. 36,207 (C) REFERENC1A/ČÍSLO SPISU: 094.2 PCT (IMI-052C2PC) (ix) TELEKOMUNIKAČNÉ INFORMÁCIE:(A) NAME: Amy E. Mandragouras (B) REGISTRATION NUMBER: Reg. 36,207 (C) REFERENCE 1A / FILE NUMBER: 094.2 PCT (IMI-052C2PC) (ix) TELECOMMUNICATION INFORMATION:

(A) TELEFÓN: (617) 227-7400 (B) TELEFAX: (617) 227-5941 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 1:(A) PHONE: (617) 227-7400 (B) TELEFAX: (617) 227-5941 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 1:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 170 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 1:(A) LENGTH: 170 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 1:

Ala 1 Ala 1 Ser Ser Gin gin Lys Lys Arg 5 Arg 5 Pro for Ser Ser Gin gin Arg Arg His 10 His 10 Gly Gly Ser Ser Lys Lys Tyr Tyr Leu 15 Leu 15 Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ser Ser Thr 20 Thr 20 Met Met Asp Asp His His Ala Ala Arg 25 Arg 25 His His Gly Gly Phe Phe Leu Leu Pro 30 for 30 Arg Arg His His Arg Arg Asp Asp Thr 35 Thr 35 Gly Gly íle Ile Leu Leu Asp Asp Ser 40 Ser 40 íle Ile Gly Gly Arg Arg Phe Phe Phe 45 Phe 45 Gly Gly Gly Gly Asp Asp Arg Arg Gly 50 Gly 50 Ala Ala Pro for Lys Lys Arg Arg Gly 55 Gly 55 Ser Ser Gly Gly Lys Lys Asp Asp Ser 60 Ser 60 His His His His Pro for Ala Ala Arg 65 Arg 65 Thr Thr Ala Ala His His Tyr Tyr Gly 70 Gly 70 Ser Ser Leu Leu Pro for Gin gin Lys 75 Lys 75 Ser Ser His His Gly Gly Arg Arg Thr 80 Thr 80 Gin gin Ásp Asp Glu Glu Asn same time Pro 85 for 85 Val wall Val wall His His Phe Phe Phe 90 Phe 90 Lys Lys Asn same time íle Ile Val wall Thr 95 Thr 95 Pro for Arg Arg Thr Thr Pro for Pro 100 for 100 Pro for Ser Ser Gin gin Gly Gly Lys 105 Lys 105 Gly Gly Arg Arg Gly Gly Leu Leu Ser 110 Ser 110 Leu Leu Ser Ser Arg Arg Phe Phe Ser 115 Ser 115 Trp Trp Gly Gly Ala Ala Glu Glu Gly 120 Gly 120 Gin gin Arg Arg Pro for Gly Gly Phe 125 Phe 125 Gly Gly Tyr Tyr Gly Gly Gly Gly Arg 130 Arg 130 Ala Ala Ser Ser Asp Asp Tyr Tyr Lys 135 Lys 135 Ser Ser Ala Ala His His Lys Lys Gly 140 Gly 140 Phe Phe Lys Lys Gly Gly Val wall Asp 145 Asp 145 Ala Ala Gin gin Gly Gly Thr Thr Leu 150 Leu 150 Ser Ser Lys Lys íle Ile Phe Phe Lys 155 Lys 155 Leu Leu Gly Gly Gly Gly Arg Arg Asp 160 Asp 160 Ser Ser Arg Arg Ser Ser Gly Gly Ser Ser Pro for Met Met Ala Ala Arg Arg Arg Arg

165 170 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:2:165 170 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 2:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA. 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:2:(A) LENGTH. 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 2:

Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His 15 10 15Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr

Gly Phe Leu Pro 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:3:Gly Phe Leu Pro 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 3:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:3:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 3:

Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His 15 10 15Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr

Gly Phe Leu (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO.4:Gly Phe Leu (2) INFORMATION ON SEQ ID NO.4:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:4:(A) LENGTH: 21 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 4:

Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg His 15 10 15Gly Ser Lys Tyr Leu Ala Thr

Gly Phe Leu Pro Arg 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:5:Gly Phe Leu Pro Arg 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 5:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE (A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:5:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS (A) LENGTH: 23 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 5:

Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr 1 5 10 15Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr 1 5 10 15

Pro Pro Pro Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:6:Pro Pro Pro Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 6:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID N0:6:(A) LENGTH: 24 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 6:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 1 5 10 15Asp Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 1 5 10 15

Thr Pro Pro Pro Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:7:Thr Pro Pro Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 7:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:7:(A) LENGTH: 23 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 7:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15Asp Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 15 10 15

Thr Pro Pro Pro Ser Gin Gly 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 8:Thr Pro Pro Ser Gin Gly 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 8:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:8:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 8:

Thr Gin Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val ThrThr Gin Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Il Val Thr

10 1510 15

Pro Arg Thr (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:9:For Arg Thr (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 9:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 21 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:9:(A) LENGTH: 21 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 9:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15Asp Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 15 10 15

Thr Pro Pro Pro Ser 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 10:Thr Pro Pro Pro Ser 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 10:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 10:(A) LENGTH: 25 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 10:

Thr 1 Thr 1 Gin gin Asp Asp Glu Glu Asn Pro Val 5 Asn Pro Val Val wall His His Phe Phe Lys Asn íle 10 Phe Phe Lys Asn ile 10 Val Thr 15 Val Thr Pro for Arg Arg Thr Thr Pro for Pro for Pro for Ser Ser Gin gin Gly Gly 20 20 25 25

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 11:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 11:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 23 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 11:(A) LENGTH: 23 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 11:

Thr Gin Asp Glu Asn Pro Val Vai His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr 15 10 15Thr Gin Asp Glu Asn Pro Val Vai His Phe Phe Lys Asn White Val Thr 15 10 15

Pro Arg Thr Pro Pro Pro Ser 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 12:Pro Arg Thr Pro Pro Ser 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 12:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE. SEQ ID NO. 12.(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE. SEQ ID NO. 12th

Leu Ser Arg Phe Ser Trp Gly Ala Glu Gly Gin Arg Pro Gly Phe GlyLeu Ser Arg Phe Ser Gp Gly Ala Glu Gly Gin Arg Pro Gly Phe Gly

10 1510 15

Tyr Gly Gly Arg 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 13:Tyr Gly Gly Arg 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 13:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 13:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 13:

Leu Ser Arg Phe Ser Trp Gly Ala Glu Gly Gin Arg Pro Gly Phe Gly 15 10 15Leu Ser Arg Phe Ser Gp Gly Ala Glu Gly Gin Arg Pro Gly Phe Gly 15 10 15

Tyr Gly Gly (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 14:Tyr Gly Gly (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 14:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA. lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný(A) LENGTH: 25 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY. linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal

(xi) OPIS SEK (xi) DESCRIPTION OF SEC VENCIE: SEQ ID NO: 14: VENCES: SEQ ID NO: 14: Phe Lys Phe Lys Gly Val Asp Ala Gin Gly Val Asp Ala Gin Gly Gly Thr Leu Thr Leu Ser Lys íle Phe Lys Leu Ser Lys White Phe Lys Leu 1 1 5 5 10 10 15 15 Gly Gly Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Arg Asp Ser Gly Gly Ser Ser . 20 . 20 25 25

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 15:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 15:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný(A) LENGTH: 25 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal

(xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 15: Pro Ser Gin Gly Lys Gly Arg (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 15: Pro Gin Gly Lys Gly Arg Gly Leu Gly Leu Ser Leu 10 Ser Leu Ser Arg Phe Ser Trp 15 Ser Arg Phe Ser Trp 16 1 1 5 5 Gly Ala Gly Ala Glu Gly Glu Gly Gin Arg Pro Gin Arg Pro Gly Gly Phe Phe 20 20 25 25

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 16:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 16:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 16:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 16:

Ala Ser Gin Lys Arg Pro Ser Gin Arg His Gly Ser Lys Tyr Leu AlaAla Ser Gin Lys Arg

10 1510 15

Thr Ala Ser Thr 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 17:Thr Ala Ser Thr 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 17:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE.(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS.

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 17:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 17:

Met Asp His Ala Arg His Gly Phe Leu Pro Arg His Arg Asp Thr Gly 15 10 15 íle Leu Asp Ser 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 18:Met Asp His Ala Arg His Gly Phe Leu For Arg His Arg Asp Thr Gly 15 10 15 ile Leu Asp Ser 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 18:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 18:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 18:

Arg His Arg Asp Thr Gly íle Leu Asp Ser íle Gly Arg Phe Phe Gly 15 10 15Arg His Arg Asp Thr Gly White Leu Asp Ser Gly Arg Phe Phe Gly 15 10 15

Gly Asp Arg Gly 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO: 19:Gly Asp Arg Gly 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 19:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO: 19:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULTY TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 19:

íle Gly Arg Phe Phe Gly Gly Asp Arg Gly Ala Pro Lys Arg Gly Ser 15 10 15Gly Arg Phe Phe Gly Gly Arg Arg Gly Ala Lys Arg Gly Ser 15 10 15

Gly Lys Asp Ser 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 20:Gly Lys Asp Ser 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 20:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:20:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 20:

Ala Pro Lys Arg Gly Ser Gly Lys Asp Ser His His Pro Ala Arg Thr 15 10 15Ala Pro Lys Arg Gly Ser

Ala His Tyr Gly 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:21:Ala His Tyr Gly 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 21:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:21:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 21:

His His Pro Ala Arg Thr Ala His Tyr Gly Ser Leu Pro Gin Lys Ser 15 10 15His His Pro Ala Arg Thr Ala His Tyr Gly Ser Leu

His Gly Arg Thr 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:22:His Gly Arg Thr 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 22:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:22:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULTY TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 22:

Ser Leu Pro Gin Lys Ser His Gly Arg Thr Gin Asp Glu Asn Pro Val 1 5 10 15Ser Leu Pro Gin Lys Ser His Gly Arg Thr

Val His Phe Phe 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:23:Val His Phe Phe 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 23:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE. SEQ ID NO:23:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE. SEQ ID NO: 23:

Gin Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro 15 10 15Gin Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro 15 10 15

Arg Thr Pro Pro 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 24:Arg Thr Pro Pro 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 24:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:24:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 24:

Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro Pro Ser Gin Gly Lys Gly 15 10 15Lys Asn ile Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro Ser Gin Gly Lys Gly 15 10 15

Arg Gly Leu Ser 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:25:Arg Gly Leu Ser 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 25:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP. aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:25:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE. amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 25:

Pro Ser Gin Gly Lys Gly Arg Gly Leu Ser Leu Ser Arg Phe Ser Trp 15 10 15Pro Gin Gly Lys Gly Arg Gly Leu

Gly Ala Glu Gly 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 26:Gly Ala Glu Gly 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 26:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:26:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 26:

Gin Arg Pro Gly Phe Gly Tyr Gly Gly Arg Ala Ser Asp Tyr Lys Ser 15 10 15Gin Arg Pro Gly Phe Gly Tyr

Ala His Lys Gly 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:27:Ala His Lys Gly 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 27:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:27:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 27:

Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala His Lys Gly Phe Lys Gly Val Asp Ala 15 10 15Ala Ser Asp Tyr Lys

Gin Gly Thr Leu 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:28:Gin Gly Thr Leu 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 28:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:28:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 28:

Phe Lys Gly Val Asp Ala Gin Gly Thr Leu Ser Lys íle Phe Lys Leu 15 10 15Phe Lys Gly Val Asp Ala Gin Gly Thr Leu Ser Lys White Phe Lys Leu 15 10 15

Gly Gly Arg Asp ď 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:29:Gly Gly Arg Asp d 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 29:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA. lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:29:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY. linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 29:

Ser Lys íle Phe Lys Leu Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro 15 10 15Ser Lys White Phe Lys Leu

Met Ala Arg Arg 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 30:Met Ala Arg Arg 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 30:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:30:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 30:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15Asp Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 15 10 15

Thr Pro Pro (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:3 1.Thr Pro Pro (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 3 1.

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE: (A) DĹŽKA: 13 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:31:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 13 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 31 :

Lys Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:32:Lys Tyr Leu Ala Thr Ala Ser Thr Met Asp His Ala Arg 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 32:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 11 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:32:(A) LENGTH: 11 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 32:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:33:Asp Glu Asn For Val Val His Phe Phe Lys Asn 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 33:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 15 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:33:(A) LENGTH: 15 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 33:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro 1 5 10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:34 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Lys Asn Val Val Thr Pro 1 5 10 15 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 34 (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 16 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE. SEQ ID NO 34:(A) LENGTH: 16 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE. SEQ ID NO 34:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 35:Asp Glu Asn Val Val His Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 15 10 15 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 35:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 17 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ϋ) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU, interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO 35:(A) LENGTH: 17 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ϋ) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE, internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO 35:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15Asp Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 15 10 15

Thr (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:36:Thr (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 36:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 13 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO 36:(A) LENGTH: 13 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO 36:

Val His Phe Phe Ala Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:37:Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 37:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 18 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO 37:(A) LENGTH: 18 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO 37:

Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr 15 10 15Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr 15 10 15

Pro Pro (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:38:Pro Pro (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 38:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ED NO:38:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ED NO: 38:

Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr 15 10 15Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr 15 10 15

Pro Pro Pro (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 39:Pro Pro Pro (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 39:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 14 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO 39:(A) LENGTH: 14 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO 39:

Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 40 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:Asn Val Val His Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 40 (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 17 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:40:(A) LENGTH: 17 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 40:

Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro 15 10 15Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr Pro 15 10 15

Pro (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:41:For (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 41:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 16 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:41:(A) LENGTH: 16 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 41:

Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro 15 10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:42:Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr Pro 15 10 15 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 42:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:42:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 42:

Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro Pro 15 10 ¹⁵ Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro 15 10 ¹⁵

Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:43:Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 43:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 13 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ED NO:43:(A) LENGTH: 13 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ED NO: 43:

Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:44:Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 44:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 13 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:44:(A) LENGTH: 13 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 44:

His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:45:His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr Pro Pro 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 45:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 12 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:45:(A) LENGTH: 12 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 45:

His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:46:His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 46:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:46:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 46:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Lys Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15Asp Glu Asn Val Val His Phe Phe Lys Asn Val Val Thr Pro Arg 15 10 15

Thr Pro Tyr (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:47:Thr Pro Tyr (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 47:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:47:(A) LENGTH: 25 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 47:

Leu 1 Leu 1 Ser Arg Phe Ser Arg Phe Ser Trp Gly Ala Glu Gly Gin Arg Pro Ser Trp Gly Glu Glu Gin Arg Pro Gly Phe Gly 15 Gly Phe Gly 5 5 10 10 Tyr Tyr Gly Gly Gly Gly Arg Arg Ala Ala Ser Ser Asp Asp Tyr Tyr Lys Lys 20 20 25 25

(2) INFORMÁCIE O SEQ Π) NO.48.(2) INFORMATION ON SEQ.

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 19 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:48:(A) LENGTH: 19 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 48:

Arg Pro Gly Phe Gly Tyr Gly Gly Arg Ala Ser Asp Tyr Lys Ser Ala 15 10 15Arg Pro Gly Phe Gly Gly Gly Gly Arg

His Lys Gly (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:49:His Lys Gly (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 49:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 32 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:49:(A) LENGTH: 32 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 49:

Lys 1 Lys 1 Gly Gly Phe Phe Lys Lys Gly 5 Gly 5 Val wall Asp Asp Ala Ala Gin gin Gly 10 Gly 10 Thr Thr Leu Leu Ser Ser Lys Lys íle 15 Ile 15 Phe Phe Lys Lys Leu Leu Gly Gly Gly 20 Gly 20 Arg Arg Asp Asp Ser Ser Arg Arg Ser 25 Ser 25 Gly Gly Ser Ser Pro for Met Met Ala 30 Ala 30 Arg Arg Arg Arg

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:50:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 50:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 25 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:50:(A) LENGTH: 25 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 50:

Lys Lys Gly Gly Val wall Asp Asp Ala Ala Gin gin Gly Gly Thr Thr Leu Leu Ser Lys Ser Lys íle Phe Lys Leu Gly Phe Lys Leu Gly 1 1 5 5 10 10 15 15 Gly Gly Arg Arg Asp Asp Ser Ser Arg Arg Ser Ser Gly Gly Ser Ser Pro for 20 20 25 25

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:51:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 51:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 27 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:51:(A) LENGTH: 27 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULTY TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 51:

Lys Lys Gly Gly Val wall Asp Asp Ala Ala Gin gin Gly Gly Thr Thr Leu Leu Ser Ser Lys íle Phe Lys Leu Gly Lys White Phe Lys Leu Gly 1 1 5 5 10 10 15 15 Gly Gly Arg Arg Asp Asp Ser Ser Arg Arg Ser Ser Gly Gly Ser Ser Pro for Met Met Ala Ala 20 20 25 25

(2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:52:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 52:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 15 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:52:(A) LENGTH: 15 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 52:

Ala Gin Gly Thr Leu Ser Lys íle Phe Lys Leu Gly Gly Arg Asp 15 10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO53:Ala Gin Gly Thr Leu Ser Lys Phe Lys Leu Gly Gly Arg Asp 15 10 15 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO53:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 18 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:53:(A) LENGTH: 18 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 53:

íle Phe Lys Leu Gly Gly Arg Asp Ser Arg Ser Gly Ser Pro Met Ala 1 5 10 15Phe Lys Leu Gly Arg Asp Ser Ser Gly Ser Pro Met Ala 1 5 10 15

Arg Arg (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:54:Arg Arg (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 54:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 13 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:54:(A) LENGTH: 13 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 54:

Gly Gin Phe Arg Val íle Gly Pro Arg His Pro íle Arg 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:55:Gly Gin Phe Arg Val Gly Pro Arg His Pro G Arg 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 55:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 13 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO 55:(A) LENGTH: 13 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULTY TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO 55:

His Ser Tyr Gin Glu Glu Ala Ala Met Glu Leu Lys Val 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:56:His Ser Tyr Gin Glu Glu Ala Ala Met Glu Leu Lys Val 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 56:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 121 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:56:(A) LENGTH: 121 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 56:

Gly 1 Gly 1 Gin Phe Arg Gin Phe Arg Val 5 wall 5 íle Ile Gly Pro Gly Pro Arg Arg His Pro íle Arg Ala Leu Val His Pro il Arg Ala Leu Val 10 10 15 15 Gly Gly Asp Glu Val Asp Glu Val Glu Glu Leu Leu Pro Cys Pro Cys Arg Arg Thr Ser Thr Ser Pro Gly Lys Asn Ala For Gly Lys Asn Ala 20 20 25 25 30 30 Thr Thr Gly Met Glu Gly Met Glu Val wall Gly Gly Trp Tyr Trp Tyr Arg Arg Pro Pro Pro Pro Phe Ser Arg Val Val Phe Ser Arg Val Val 35 35 40 40 45 45 His His Leu Tyr Arg Leu Tyr Arg Asn same time Gly Gly Lys Asp Lys Asp Gin gin Asp Gly Asp Gly Asp Gin Ala Pro Glu Asp Gin Ala Pro Glu 50 50 55 55 60 60 Tyr Tyr Arg Gly Arg Arg Gly Arg Thr Thr Glu Glu Leu Leu Leu Leu Lys Lys Asp Ala Asp Ala íle Gly Glu Gly Lys Gly Glu Gly Lys 65 65 70 70 75 75 80 80 Val wall Thr Leu Arg Thr Leu Arg íle Ile Arg Arg Asn Val Asn Val Arg Arg Phe Ser Phe Ser Asp Glu Gly Gly Phe Asp Glu Gly Gly Phe 85 85 90 90 95 95 Thr Thr Cys Phe Phe Cys Phe Arg Arg Asp Asp His Ser His Ser Tyr Tyr Gin Glu Gin Glu Glu Ala Ala Met Glu Glu Ala Ala Met Glu 100 100 105 105 110 110 Leu Leu Lys Val Glu Lys Val Glu Asp Asp Pro for Phe Tyr Phe Tyr Trp Trp 115 115 120 120

(2) INFORMÁCIE O SEQ CD NO:57:(2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 57:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO.57:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO.57:

Gly Gin Phe Arg Val íle Gly Pro Arg His Pro íle Arg Ala Leu Val 15 10 15Gly Gin Phe Arg Val Gly Pro Arg His Pro Arg Arg Ala Leu Val 15 10 15

Gly Asp Glu Val 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:58:Gly Asp Glu Val 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 58:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:58:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULTY TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 58:

Pro íle Arg Ala Leu Val Gly Asp Glu Val Glu Leu Pro Cys Arg íle 15 10 15Arg Ala Leu Val Gly Asp Glu Val Glu Leu For Cys Arg Goals 15 10 15

Ser Pro Gly Lys 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:59:Ser Pro Gly Lys 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 59:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:59:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 59:

Glu Leu Pro Cys Arg íle Ser Pro Gly Lys Asn Ala Thr Gly Met Glu 1 5 10 15Glu Leu Pro Cys Arg Il Ser Pro Gly Lys Asn Ala Thr Gly Met Glu 1 5 10 15

Val Gly Trp Tyr 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:60:Val Gly Trp Tyr 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 60:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:60:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 60:

Asn Ala Thr Gly Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg 15 10 15Asn Ala Thr Gly Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg Pro Pro Phe Ser Arg 15 10 15

Val Val His Leu 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:61:Val Val His Leu 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 61:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA. lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:61:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY. linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 61:

Thr Val Gly Leu Val Phe Leu Cys Leu Gin Tyr Arg Leu Arg Gly Lys 15 10 15Thr Val Gly Leu Val Phe Leu Cys Leu Gin Tyr

Leu Arg Ala Glu 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:62:Leu Arg Ala Glu 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 62:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:62:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 62:

Tyr Arg Leu Arg Gly Lys Leu Arg Ala Glu íle Glu Asn Leu His Arg 15 10 15Tyr Arg Leu Arg Gly Lys Leu Arg Ala Glu White Glu Asn Leu His Arg 15 10 15

Thr Phe Asp Pro 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:63:Thr Phe Asp Pro 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 63:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE (A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA. lineárna(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS (A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY. straight

100 (ii) TYP MOLEKULY, peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:63:100 (ii) MOLECULA TYPE, peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 63:

íle Glu Asn Leu His /Arg Thr Phe Asp Pro His Phe Leu Arg Val Pro 1 5 10 15Glu Asn Leu His / Arg Thr Phe Asp

Cys Trp Lys íle 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ED NO:64:Cys Trp Lys White 20 (2) INFORMATION ON SEQ ED NO: 64:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 20 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:64:(A) LENGTH: 20 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 64:

Tyr Asn Trp Leu His Arg Arg Leu Ala Gly Gin Phe Leu Glu Glu Leu 15 10 15Tyr Asn Trp Leu Arg Arg Leu Ala Gly Phu Leu Glu Glu Leu 15 10 15

Arg Asn Pro Phe 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:65:Arg Asn Pro Phe 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 65:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA. 11 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný(A) LENGTH. 11 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal

101 (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:65:101 (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 65:

Ala Ser Gin Lys Arg Pro Ser Gin 1 5Ala Ser Gin Lys Arg

Arg His 10Arg His 10

Gly (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:66:Gly (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 66:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 11 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:66:(A) LENGTH: 11 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 66:

Ala Ser Gin Ala Arg Pro Ser Gin Arg His Gly 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ED NO:67:Ala Ser Gin Ala Arg Pro Ser Gin Arg His Gly 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ED NO: 67:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 11 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ED NO 67:(A) LENGTH: 11 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ED NO 67:

Ala Ser Gin Tyr Arg Pro Ser 1 5Ala Ser Gin Tyr Arg Pro Ser 1

Gin Arg His Gly 10Gin Arg His Gly

102 (2) INFORMÁCIE O SEQ ED NO:68:102 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 68:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 17 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:68:(A) LENGTH: 17 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULTY TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 68:

Arg His Arg Asp Thr Gly íle Leu Asp Ser íle 1 5 10Arg His Arg Asp Thr Gly White Leu Asp Ser White 1 5 10

Gly (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:69:Gly (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 69:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 17 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:69:(A) LENGTH: 17 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 69:

íle Ser Gin Ala Val His Ala Ala His Ala Glu 1 5 10Ser Gin Ala Val His Ala Ala His Ala Glu 1 5 10

ArgArg

Gly Arg Phe Phe Ser 15 íle Asn Glu Ala Gly 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:70:Gly Arg Phe Phe Ser 15 Asn Glu Ala Gly 15 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 70:

103 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:103 (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 15 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:70:(A) LENGTH: 15 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 70:

íle Ser Gin Ala Val His Ala Ala His Ala Glu íle Asn Glu Ala 15 10 15 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:71:Ser Gin Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Asn Glu Ala 15 10 15 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 71:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 24 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:71:(A) LENGTH: 24 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 71:

Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Ala Asn íle Val Thr Pro Arg 15 10 15Asp Glu Asn Pro Val Val His Phe Phe Ala Asn Il Val Thr Pro Arg 15 10 15

Thr Pro Pro Pro Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:72:Thr Pro Pro Ser Gin Gly Lys 20 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 72:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE: (A) DĹŽKA: 12 aminokyselín(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 12 amino acids

104 (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: peptid (v) TYP FRAGMENTU: interný (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO.72:104 (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: peptide (v) FRAGMENT TYPE: internal (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO.72:

His Phe Phe Ala Asn íle Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:73:His Phe Phe Ala Asn Val Val Thr Pro Arg Thr Pro 1 5 10 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 73:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 18 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:73:(A) LENGTH: 18 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: simple (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 73:

GAAAGGCTCC ACACACCG 18 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:74:GAAAGGCTCC ACACACCG 18 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 74:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 26 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA(A) LENGTH: 26 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA

105 (xi) OPIS SEKVENCIE. SEQ ID NO:74:105 (xi) DESCRIPTION OF THE SEQUENCE. SEQ ID NO: 74:

CAGAATCCGG GAAGAATGCC ACGGGC 26 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:75:CAGAATCCGG GAAGAATGCC ACGGGC 26 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 75:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 28 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC, jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:75:(A) LENGTH: 28 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING, single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 75:

CAGCGGCCGC ACGGAGTTTT CCTCTCAG 28 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:76:CAGCGGCCGC ACGGAGTTTT CCTCTCAG 28 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 76:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 28 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:76:(A) LENGTH: 28 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: simple (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 76:

CAGAATTCTC AGGTTCTCAG ATGAAGGACAGAATTCTC AGGTTCTCAG ATGAAGGA

106 (2) INFORMÁCIE O SEQ Π) NO:77:106 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 77:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 30 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:77:(A) LENGTH: 30 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: simple (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 77:

AAGCGGCCGC TATCCTTCAT CTGAGAACCT 30 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:78:AAGCGGCCGC TATCCTTCAT CTGAGAACCT 30 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 78:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 27 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ Π) NO.78:(A) LENGTH: 27 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ Π) NO.78:

CTTTTGAGCA AGTTCAGCCT GGTTAAG 27 (2) INFORMÁCIE O SEQ ED NO:79:CTTTTGAGCA AGTTCAGCCT GGTTAAG 27 (2) INFORMATION ON SEQ ED NO: 79:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE: (A) DĹŽKA: 39 párov báz(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 39 base pairs

107 (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:79:107 (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: simple (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 79:

ACCTCGAGGA GGTGGCTTAT GAGTATTTCT TCCAGGGTA (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO 80:ACCTCGAGGA GGTGGCTTAT GAGTATTTCT TCCAGGGTA (2) INFORMATION ON SEQ ID NO 80:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 33 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNA (xi) OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:80:(A) LENGTH: 33 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULA TYPE: cDNA (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 80:

GGTGCGGGAA AGGTGACTCT CAGGATCCGG AAT 3 3 (2) INFORMÁCIE O SEQ ID NO:81:GGTGCGGGAA AGGTGACTCT CAGGATCCGG AAT 3 3 (2) INFORMATION ON SEQ ID NO: 81:

(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:(i) SEQUENCE CHARACTERISTICS:

(A) DĹŽKA: 33 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: jednoduchý (D) TOPOLÓGIA: lineárna(A) LENGTH: 33 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRING: simple (D) TOPOLOGY: linear

108 (ii) TYP MOLEKULY: cDNA108 (ii) MOLECULA TYPE: cDNA

OPIS SEKVENCIE: SEQ ID NO:81:SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 81:

ATTCCGGATC CTGAGAGTCA CCTTTCCCGC ACCATTCCGGATC CTGAGAGTCA CCTTTCCCGC ACC

109109

T’V 51iVT’V 51iV

Claims (63)

1. Prípravok na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aspoň jeden peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2, alebo ich modifikácie alebo analógy alebo peptidomimetiká.A composition for treating multiple sclerosis in a mammal, comprising at least one peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 ( MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8) MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ. MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), as shown in FIG. 2, or modifications or analogs or peptidomimetics thereof. 2. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že uvedený peptid je vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2.The composition of claim 1, wherein said peptide is selected from the group consisting of MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14). 1) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15) shown in FIG. Second 3. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že uvedeným peptidom je MBP-4 (SEQ ID NO: 14).The composition of claim 1, wherein said peptide is MBP-4 (SEQ ID NO: 14). 4. Prípravok na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aspoň jeden peptid odvodený od MBP, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4),A composition for treating multiple sclerosis in a mammal comprising at least one MBP-derived peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP -1.2 (SEQ ID NO: 4) MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7),MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10),MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 1 1), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13),MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2, pričom tento prípravok zahrnuje aspoň 40 % celkovej reaktivity T buniek voči MBP v populácii jedincov majúcich T bunky reagujúce na MBP.MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15) shown in FIG. 2, wherein the composition comprises at least 40% of the total T cell reactivity to MBP in a population of individuals having MBP responsive T cells. 110110 5. Prípravok na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aspoň dva peptidy MBP, vybrané zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID5. A composition for treating multiple sclerosis in a mammal, comprising at least two MBP peptides selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 1). NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ IDMBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 2) NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ IDMBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 6) NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ IDMBP-2.5 (SEQ ID NO: 10); MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); NO. 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2.NO. 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), as shown in FIG. Second 6. Prípravok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že uvedené peptidy sú vybrané zo skupiny zahrnujúcej MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2.The composition of claim 5, wherein said peptides are selected from the group consisting of MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14). 1) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15) shown in FIG. Second 7. Prípravok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že jeden z uvedených peptidov zahrnuje MBP-4.7. The composition of claim 5, wherein one of said peptides comprises MBP-4. 8. Prípravok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje aspoň jeden peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej sekvencie aminokyselín 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO:The composition of claim 5, further comprising at least one peptide selected from the group consisting of amino acid sequences 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 ( SEQ ID NO: 21, 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO. 38), 84-97 (SEQ ID NO. 39), 84-100 (SEQ ID NO.32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100. [100 P> Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO. 38), 84-97 (SEQ ID NO. 39), 84-100 ( SEQ ID NO. 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 1 1 1-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53), znázornené na obr. 14.40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36) ), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 11-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139- 170 (SEQ ID NO: 49); 141-160 (SEQ ID NO: 28); 142-166 (SEQ ID NO: 50); 142-168 (SEQ ID NO: 51); 52) and 153-170 (SEQ ID NO: 53) shown in FIG. 14th 9. Prípravok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje aspoň jeden peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej sekvencie aminokyselín 13-25 (SEQ IDThe composition of claim 5, further comprising at least one peptide selected from the group consisting of amino acid sequences 13-25 (SEQ ID NOs). 111111 NO. 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO. 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), znázornené na obr. 14.NO. 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO. 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] ( (SEQ ID NO: 46) shown in FIG. 14th 10. Prípravok na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aspoň dva peptidy odvodené od MBP, pričom aspoň jedným peptidom je MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a aspoň jeden peptid je vybraný zo skupiny zahrnujúcejA composition for treating multiple sclerosis in a mammal comprising at least two MBP-derived peptides, wherein the at least one peptide is MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and at least one peptide is selected from the group consisting of: MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4),MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7),MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10),MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO. 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 355), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO. 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO. 36), 88100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 1 1 1-135 (SEQ ID NO: 47), 122140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53), znázornené na obr. 2 a 14.MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO): 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO. 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82 -97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 355), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO. 46), 83- 100 (SEQ ID NO: 37); 83-101 (SEQ ID NO: 38); 84-97 (SEQ ID NO: 39); 84-100 (SEQ ID NO: 40); 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO. 36), 88100 (SEQ ID NO: 44), 88-99 (SEQ ID NO: 45), 11-135 (SEQ ID NO: 47), 122140 (SEQ ID NO: 48), 139-170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 48), NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) and 153-170 (SEQ ID NO: 53), as shown in FIG. FIG. 2 and 14. 11. Prípravok podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že aspoň jedným peptidom je MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a aspoň jeden peptid je vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4),The composition of claim 10, wherein the at least one peptide is MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and the at least one peptide is selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 ( MBP-1.2 (SEQ ID NO: 3); MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7),MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10),MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13),MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 3 1), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 8799[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[ 100P>Y] (SEQ ID NO: 46).MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 8799 [91K> A] (SEQ ID NO: 36), 82- 100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO: 46). 112112 12. Prípravok na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aspoň dva peptidy MBP, vybrané zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID12. A composition for treating multiple sclerosis in a mammal comprising at least two MBP peptides selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2. MBP-2 (SEQ ID NO: 4); NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ IDMBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 5) NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ IDMBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ IDMBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO. NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2, pričom tento prípravok zahrnuje aspoň 40 % celkovej reaktivity T buniek voči MBP v populácii jedincov majúcich T bunky reagujúce na MBP.NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15) shown in FIG. 2, wherein the composition comprises at least 40% of the total T cell reactivity to MBP in a population of individuals having MBP responsive T cells. 13. Prípravok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje percentuálny podiel celkovej reaktivity T buniek voči MBP, dostatočný na to, aby podávanie prípravku jedincovi s MS viedlo k tlmeniu autoimunitnej odpovede MS.13. The composition of claim 5 comprising a percentage of total T cell reactivity to MBP sufficient to administer the composition to an individual with MS resulting in inhibition of the autoimmune response of MS. 14. Prípravok na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje aspoň dva peptidy MBP, obsahujúce epitopy T buniek, pričom tento prípravok je vybraný zo skupiny zahrnujúcej prípravky pozostávajúce z:14. A composition for treating multiple sclerosis in a mammal comprising at least two MBP peptides comprising T cell epitopes, said composition being selected from the group consisting of: MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 14). NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO. 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO. 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); 113113 MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-3 (SEQ ID NO: 12);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-3 (SEQ ID NO: 12); MBP-1 (SEQ ID NO: 2) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1 (SEQ ID NO: 2) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2) alebo MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2) or MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P> Y] (SEQ ID NO) 87-99 (SEQ ID NO: 43) and 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP -2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y]MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82 -100 [100P> Y] 114 (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;114 (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36), as shown in FIG. 14; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO. 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82 -100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO. 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36), shown in FIG. 14; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2.MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. Second 15. Prípravok podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje aspoň jeden peptid s aktivitou T buniek, odvodený od ľudského myelínového oligodendrocytového proteínu (MOG).The composition of claim 5, further comprising at least one peptide with T cell activity derived from human myelin oligodendrocyte protein (MOG). 16. Prípravok podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že uvedený peptid odvodený od MOG je vybraný zo skupiny zahrnujúcej ľudský MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) ľudský MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) ľudský MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56)The composition of claim 15, wherein said MOG-derived peptide is selected from the group consisting of human MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) human MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) human MOG 1- 121 (SEQ ID NO: 55) GQFRVIGPRHPIRGQFRVIGPRHPIR HSYQEEAAMELKVHSYQEEAAMELKV GQFRVIGPRHPIRALGDEVGQFRVIGPRHPIRALGDEV ELPCRTSPGKNATGMEVGWYELPCRTSPGKNATGMEVGWY RPPFSRVVHLYRNGKDQDGDRPPFSRVVHLYRNGKDQDGD QAPEYRGRTELLKDAIGEGKQAPEYRGRTELLKDAIGEGK VTLRIRNVRFSDEGGFTCFFVTLRIRNVRFSDEGGFTCFF RDHSYQEEAAMELKVEDPFYWRDHSYQEEAAMELKVEDPFYW 115 ľudský MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) ľudský MOG 11-30 (SEQ ID NO: 58) ľudský MOG 21-40 (SEQ ID NO: 59) ľudský MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) ľudský MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) ľudský MOG 151-170 (SEQ ID NO: 62) ľudský MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) ľudský MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64)115 human MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) human MOG 11-30 (SEQ ID NO: 58) human MOG 21-40 (SEQ ID NO: 59) human MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) human MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) human MOG 151-170 (SEQ ID NO: 62) human MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) human MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64) GQFRVIGPRHPIRALVGDEV,GQFRVIGPRHPIRALVGDEV. PIRALVGDEVELPCRISPGK,PIRALVGDEVELPCRISPGK. ELPCRISPGKNATGMEVGWY,ELPCRISPGKNATGMEVGWY. NATGMEVGWYRPPFSRVVHL,NATGMEVGWYRPPFSRVVHL. TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE,TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE. YRLRGKLRAEIENLHRTFDP,YRLRGKLRAEIENLHRTFDP. IENLHRTFDPHFLRVPCWKI aIENLHRTFDPHFLRVPCWKI a YNWLHRRLAGQFLEELRNPF.YNWLHRRLAGQFLEELRNPF. 17. Prípravok podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje aspoň jeden peptid s aktivitou T buniek, odvodený od MOG.17. The composition of claim 14, further comprising at least one peptide with T cell activity derived from MOG. 18. Izolovaný peptid, odvodený od MBP, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1.1 (SEQ ID NO. 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), znázornené na obr. 2, alebo ich modifikácie alebo analógy.An isolated MBP-derived peptide selected from the group consisting of MBP-1.1 (SEQ ID NO. 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 ( MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11) , MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), as shown in FIG. 2, or modifications or analogs thereof. 19, Izolovaný peptid podľa nároku 18, ktorým je MBP-4 (SEQ ID NO: 14) alebo jeho modifikácia alebo analóg.The isolated peptide of claim 18 which is MBP-4 (SEQ ID NO: 14) or a modification or analogue thereof. 20. Analóg peptidu podľa nároku 18, kde aspoň jeden aminokyselinový zvyšok je nahradený alanínom, kyselinou glutámovou alebo metylaminokyselinou.The peptide analogue of claim 18, wherein at least one amino acid residue is replaced with alanine, glutamic acid, or methylamino acid. 21. Peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4A peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8) ), MBP-2.4 116 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2, kde lyzin (K) je nahradený alanínom (A).116 (SEQ ID NO: 9); MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10); MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); 2, wherein the lysine (K) is replaced by alanine (A). 22. Peptidický analóg MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), kde lyzin (K) v polohe 10 je nahradený alanínom (A), pričom tento peptidický analóg má sekvenciu aminokyselín DENPVVHFFANIVTPRTPPPSQGK (SEQ ID NO: 71).The peptide analogue of MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), wherein the lysine (K) at position 10 is replaced by alanine (A), wherein the peptide analogue has the amino acid sequence DENPVVHFFANIVTPRTPPPSQGK (SEQ ID NO: 71). 23. Peptidomimetikum peptidu vybraného zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO. 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO. 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), kde aspoň jedna normálna peptidická väzba je nahradená nepeptidickou väzbou, analógom peptidickej väzby alebo redukovaným analógom väzby.A peptide peptidomimetic of a peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) ), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 ( MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), wherein at least one normal peptide bond is replaced by a non-peptide bond, a peptide bond analog, or a reduced bond analog. 24. Peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO. 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15), ktorý bol modifikovaný adíciou aspoň jedného nabitého aminokyselinového zvyšku na aminoterminálny koniec, karboxyterminálny koniec alebo oba konce na zvýšenie rozpustnosti peptidu vo vodnom roztoku.A peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) ), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 ( MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 (SEQ ID NO: 15), which has been modified by adding at least one charged amino acid residue to the amino-terminal, carboxy-terminal, or both ends to increase the solubility of the peptide in aqueous solution. 25. Peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO. 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO. 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO. 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5A peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) ), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 ( MBP-2.6 (SEQ ID NO. 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and MBP-5 117 (SEQ ID NO: 15), ktorý bol modifikovaný adíciou aspoň jedného aminokyselinového zvyšku na aminoterminálny koniec, karboxyterminálny koniec alebo oba konce na zvýšenie aktivity T buniek, pričom uvedený aminokyselinový zvyšok je odvodený od sekvencie natívneho MBP proteínu.117 (SEQ ID NO: 15), which has been modified by the addition of at least one amino acid residue to the amino-terminal, carboxy-terminal, or both ends to increase T cell activity, wherein said amino acid residue is derived from the native MBP protein sequence. 26. Použitie prípravku podľa nároku 1 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy mul típlex u cicavca tlmiaceho autoimunitnú odpoveď.Use of a composition according to claim 1 for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in an autoimmune-inhibiting mammal. 27. Použitie prípravku podľa nároku 1 na prípravu liečiva na prevenciu nástupu sklerózy multiplex u cicavca.Use of the composition of claim 1 for the preparation of a medicament for preventing the onset of multiple sclerosis in a mammal. 28. Použitie prípravku podľa nároku 5 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho autoimunitnú odpoveď.Use of a composition according to claim 5 for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a mammal suppressing an autoimmune response. 29. Použitie prípravku podľa nároku 10 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho autoimunitnú odpoveď.Use of a composition according to claim 10 for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a mammal suppressing an autoimmune response. 30. Použitie prípravku podľa nároku 14 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho autoimunitnú odpoveď.Use of a composition according to claim 14 for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a mammal attenuating an autoimmune response. iand 31. Použitie prípravku podľa nároku 15 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho autoimunitnú odpoveď.Use of a composition according to claim 15 for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a mammal attenuating an autoimmune response. 118118 32. Použitie aspoň dvoch rôznych prípravkov podľa nároku 1 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca.Use of at least two different formulations according to claim 1 for the preparation of a medicament for treating multiple sclerosis in a mammal. 33. Použitie kombinácie peptidov odvodených od MBP, vybraných zo skupiny kombináciou peptidov zahrnujúcou33. Use of a combination of MBP-derived peptides selected from the group consisting of a peptide combination MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 5). NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 14). NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO. 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO. 15); MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1 (SEQ ID NO. 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1 (SEQ ID NO. 2), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5) a MBP-4 (SEQ ID NO: 14);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), and MBP-4 (SEQ ID NO: 14); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15); MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6) a MBP-3 (SEQ ID NO: 12);MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), and MBP-3 (SEQ ID NO: 12); MBP-1 (SEQ ID NO: 2) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1 (SEQ ID NO: 2) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); 119119 MBP-1.1 (SEQ ID NO; 3) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11);MBP-1.1 (SEQ ID NO; 3) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11); MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO. 11);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO. 11); MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2) alebo MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3);MBP-4 (SEQ ID NO: 14) and a peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2) or MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3); MBP-1.1 (SEQ ID NO. 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO. 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P> Y] (SEQ ID NO. 87-99 (SEQ ID NO: 43) and 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO. 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP -2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO. 11) shown in FIG. 2; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82 -100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2; MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43) a 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), znázornené na obr. 14;MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82 -100 [100P> Y] (SEQ ID NO: 46), 87-99 (SEQ ID NO: 43), and 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36) shown in FIG. 14; 120120 MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a peptid vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10) alebo MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), znázornené na obr. 2, na prípravu liečiva k liečebnému režimu na liečenie sklerózy multiplex u cicavca.MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and a peptide selected from the group consisting of MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP -2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), or MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), as shown in FIG. 2, for the preparation of a medicament for a treatment regimen for treating multiple sclerosis in a mammal. 34. Multipeptidová formulácia na farmaceutické podávanie jedincom s MS, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje aspoň dva peptidy MBP, pričom každý tento peptid je rozpustný a stabilný pri vopred stanovenom fyziologicky prijateľnom pH a tieto peptidy sú vybrané zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14) a MBP-5 (SEQ ID NO: 15).34. A multiple peptide formulation for pharmaceutical administration to a subject with MS comprising at least two MBP peptides, each peptide being soluble and stable at a predetermined physiologically acceptable pH, and selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO. MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP -2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO) 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), and MBP-5 (SEQ ID NO: 15). 35. Použitie terapeutického prípravku zahrnujúceho aspoň jeden peptid s aktivitou T buniek, odvodený od myelínového antigénu, alebo analóg tohto peptidu, na prípravu liečiva na liečenie pokročilého štádia sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho príznaky sklerózy multiplex.The use of a therapeutic composition comprising at least one peptide of T cell activity derived from a myelin antigen, or an analogue thereof, for the preparation of a medicament for the treatment of advanced stage sclerosis in a mammal ameliorating the symptoms of multiple sclerosis. 36. Použitie podľa nároku 35, kde uvedený myelínový antigén je vybraný zo skupiny zahrnujúcej myelínový bázický proteín (MBP), myelínový oligodendrocytový proteín (MOG), proteolipidový proteín (PLP) a myelín-asociovaný glykoproteín (MAG).The use of claim 35, wherein said myelin antigen is selected from the group consisting of myelin basic protein (MBP), myelin oligodendrocyte protein (MOG), proteolipid protein (PLP), and myelin-associated glycoprotein (MAG). 37. Použitie podľa nároku 35, kde uvedený peptid zahrnuje peptidový analóg s väzbovou afinitou MHC, ktorá je vyššia ako väzbová afinita MHC peptidu, od ktorého je analóg odvodený.The use of claim 35, wherein said peptide comprises a peptide analog with an MHC binding affinity that is higher than the binding affinity of the MHC peptide from which the analog is derived. 121121 38. Použitie terapeutického prípravku zahrnujúceho aspoň jeden MBP peptid, vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO. 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 8899 (SEQ ID NO: 45), 111-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53), znázornené na obr. 2 a 14, alebo analóg tohoto peptidu na prípravu liečiva na liečenie pokročilého štádia sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho príznaky sklerózy multiplex.38. Use of a therapeutic composition comprising at least one MBP peptide selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP- 2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21) ), 82-92 (SEQ ID NO. 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 ( SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ. 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K> A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 8899 (SEQ ID NO: 45), 111-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28) ), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52), and 153-170 (SEQ ID NO: 53), as shown in FIG. 2 and 14, or an analogue of this peptide for the preparation of a medicament for the treatment of advanced stage of multiple sclerosis in a mammal ameliorating the symptoms of multiple sclerosis. 39. Použitie podľa nároku 38, kde uvedený peptid je vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO. 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO. 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 8799[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y) (SEQ ID NO: 46) alebo ich analógy.The use of claim 38, wherein said peptide is selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP- 2 (SEQ ID NO. 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO. 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 87-99 (SEQ ID NO: 43), 8799 [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 82-100 (SEQ ID NO. NO: 30), 82-100 [100P> Y) (SEQ ID NO: 46), or analogs thereof. 40. Použitie podľa nároku 35, kde uvedený peptid je odvodený od ľudského MOG a je vybraný zo skupiny zahrnujúcejThe use of claim 35, wherein said peptide is derived from human MOG and is selected from the group consisting of 122122 ľudský MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) human MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) GQFRVIGPRHPIR GQFRVIGPRHPIR ľudský MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) human MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) HSYQEEAAMELKV HSYQEEAAMELKV ľudský MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) human MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) GQFRVIGPRHPIRALGDEV ELPCRT SPGKN ATGME VGW Y RPPFSRVVHLYRNGKDQDGD QAPEYRGRTELLKDAIGEGK VTLRIRNVRFSDEGGFTCFF RDHSYQEEAAMELKVEDPFYW GQFRVIGPRHPIRALGDEV ELPCRT SPGKN ATGME VGW Y RPPFSRVVHLYRNGKDQDGD QAPEYRGRTELLKDAIGEGK VTLRIRNVRFSDEGGFTCFF RDHSYQEEAAMELKVEDPFYW ľudský MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) human MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) GQFRVIGPRHPIRALVGDEV, GQFRVIGPRHPIRALVGDEV. ľudský MOG 11-30 (SEQ ID NO. 58) human MOG 11-30 (SEQ ID NO. 58) PIRALVGDEVELPCRISPGK, PIRALVGDEVELPCRISPGK. ľudský MOG 21-40 (SEQ ID NO: 59) human MOG 21-40 (SEQ ID NO: 59) ELPCRISPGKNATGMEVGWY, ELPCRISPGKNATGMEVGWY. ľudský MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) human MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) NATGMEVGWYRPPFSRVVHL, NATGMEVGWYRPPFSRVVHL. ľudský MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) human MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE, TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE. ľudský MOG 151-170 (SEQ ID NO: 62) human MOG 151-170 (SEQ ID NO: 62) YRLRGKLR AEIENLHRTFDP, YRLRGKLR AEIENLHRTFDP, ľudský MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) human MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) IENLHRTFDPHFLRVPCWKI a IENLHRTFDPHFLRVPCWKI a ľudský MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64) human MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64) YN WLHRRL AGQFLEELRNPF. YN WLHRRL AGQFLEELRNPF. 41. Použitie podľa nároku 38, kde uvedený prípravok ďalej zahrnuje aspoň jeden peptid ľudského MOG, vybraný zo skupiny zahrnujúcej ľudský MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) GQFRVIGPRHPIRThe use of claim 38, wherein said composition further comprises at least one human MOG peptide selected from the group consisting of human MOG 1-13 (SEQ ID NO: 54) GQFRVIGPRHPIR ľudský MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) human MOG 103-115 (SEQ ID NO: 55) HSYQEEAAMELKV HSYQEEAAMELKV ľudský MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) human MOG 1-121 (SEQ ID NO: 56) GQFRVIGPRHPIRALGDEV ELPCRTSPGKNATGMEVGWY RPPFSRVVHLYRNGKDQDGD QAPEYRGRTELLKDAIGEGK VTLRIRNVRFSDEGGFTCFF RDHSYQEEAAMELKVEDPFYW GQFRVIGPRHPIRALGDEV ELPCRTSPGKNATGMEVGWY RPPFSRVVHLYRNGKDQDGD QAPEYRGRTELLKDAIGEGK VTLRIRNVRFSDEGGFTCFF RDHSYQEEAAMELKVEDPFYW 123 ľudský MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) ľudský MOG 11-30 (SEQ ID NO: 58) ľudský MOG 21-40 (SEQ ID NO. 59) ľudský MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) ľudský MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) ľudský MOG 151-170 (SEQ ID NO: 62) ľudský MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) ľudský MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64)123 human MOG 1-20 (SEQ ID NO: 57) human MOG 11-30 (SEQ ID NO: 58) human MOG 21-40 (SEQ ID NO. 59) human MOG 31-50 (SEQ ID NO: 60) human MOG 141-160 (SEQ ID NO: 61) human MOG 151-170 (SEQ ID NO: 62) human MOG 161-180 (SEQ ID NO: 63) human MOG 199-218 (SEQ ID NO: 64) GQFRVIGPRHPIRALVGDEV,GQFRVIGPRHPIRALVGDEV. PIRALVGDEVELPCRISPGK,PIRALVGDEVELPCRISPGK. ELPCRISPGKNATGMEVGWY,ELPCRISPGKNATGMEVGWY. N ATGME VGW YRPPF SRV VHL,ATGME VGW YRPPF SRV VHL TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE,TVGLVFLCLQYRLRGKLRAE. YRLRGKLRAEIENLHRTFDP,YRLRGKLRAEIENLHRTFDP. IENLHRTFDPHFLRVPCWKI aIENLHRTFDPHFLRVPCWKI a YN WLHRRL AGQFLEELRNPF.YN WLHRRL AGQFLEELRNPF. 42. Použitie aspoň jedného terapeutického prípravku, zahrnujúceho aspoň jeden izolovaný a čistený peptid s definovanou dĺžkou, definovanou sekvenciou aminokyselinových zvyškov a zahrnujúci aktivitu T buniek, na prípravu liečiva na liečenie cicavca v pokročilom štádiu sklerózy multiplex, pričom je tento prípravok rozpustný vo vodnom roztoku a stabilný pri fyziologicky prijateľnom pH.Use of at least one therapeutic composition comprising at least one isolated and purified peptide of defined length, defined amino acid residue sequence, and comprising T cell activity, for the preparation of a medicament for treating a mammal in advanced stage multiple sclerosis, said composition being soluble in aqueous solution and stable at physiologically acceptable pH. 43. Použitie terapeutického prípravku podľa nároku 5, na prípravu liečiva na liečenie pokročilého štádia sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho príznaky sklerózy multiplex.The use of a therapeutic composition according to claim 5, for the preparation of a medicament for the treatment of advanced stage of multiple sclerosis in a mammal ameliorating the symptoms of multiple sclerosis. 44. Použitie terapeutického prípravku podľa nároku 10, na prípravu liečiva na liečenie pokročilého štádia sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho príznaky sklerózy multiplex.The use of a therapeutic composition according to claim 10, for the preparation of a medicament for the treatment of advanced stage of multiple sclerosis in a mammal ameliorating the symptoms of multiple sclerosis. 45. Použitie terapeutického prípravku podľa nároku 14, na prípravu liečiva na liečenie pokročilého štádia sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho príznaky sklerózy multiplex.The use of a therapeutic composition according to claim 14, for the preparation of a medicament for the treatment of advanced stage of multiple sclerosis in a mammal ameliorating the symptoms of multiple sclerosis. 124124 46. Použitie terapeutického prípravku podľa nároku 15, na prípravu liečiva na liečenie pokročilého štádia sklerózy multiplex u cicavca tlmiaceho príznaky sklerózy multiplex.The use of a therapeutic composition according to claim 15, for the preparation of a medicament for the treatment of advanced stage of multiple sclerosis in a mammal ameliorating the symptoms of multiple sclerosis. 47. Použitie podľa nároku 35, kde pokročilým štádiom sklerózy multiplex je relapsujúca-remitujúca MS, chronická progresívna MS, primárna progresívna MS alebo benigná MS.The use of claim 35, wherein the advanced stage of Multiple Sclerosis is relapsing-remitting MS, chronic progressive MS, primary progressive MS or benign MS. 48. Použitie aspoň jedného peptidu myelínového autoantigénu, majúceho aktivitu T buniek, na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u jedinca v kombinácii s pôsobením IFN-β.48. Use of at least one myelin autoantigen peptide having T cell activity in the manufacture of a medicament for treating multiple sclerosis in an individual in combination with IFN-β. 49. Prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje terapeuticky účinné množstvo aspoň jedného peptidu majúceho aktivitu T buniek ľudského MBP a terapeuticky účinné množstvo IFN-β vo farmaceutický prijateľnom nosiči alebo riedidle.49. A composition comprising a therapeutically effective amount of at least one peptide having human MBP T cell activity and a therapeutically effective amount of IFN-β in a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. 50. Prípravok podľa nároku 49, vyznačujúci sa tým, že uvedený peptid je vybraný zo skupiny zahrnujúcej MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6),50. The composition of claim 49, wherein said peptide is selected from the group consisting of MBP-1 (SEQ ID NO: 2), MBP-1.1 (SEQ ID NO: 3), MBP-1.2 (SEQ ID NO: 4). ), MBP-2 (SEQ ID NO: 5), MBP-2.1 (SEQ ID NO: 6), MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9),MBP-2.2 (SEQ ID NO: 7), MBP-2.3 (SEQ ID NO: 8), MBP-2.4 (SEQ ID NO: 9), MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12),MBP-2.5 (SEQ ID NO: 10), MBP-2.6 (SEQ ID NO: 11), MBP-3 (SEQ ID NO: 12), MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP-5 (SEQ ID NO: 15),MBP-3.1 (SEQ ID NO: 13), MBP-4 (SEQ ID NO: 14), MBP-5 (SEQ ID NO: 15), 13-25 (SEQ ID NO: 31), 31-50 (SEQ ID NO: 18), 61-80 (SEQ ID NO: 21), 82-92 (SEQ ID NO: 32), 82-96 (SEQ ID NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100[100P>Y] (SEQ ID NO: 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85-100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-9913-25 (SEQ ID NO: 31); 31-50 (SEQ ID NO: 18); 61-80 (SEQ ID NO: 21); 82-92 (SEQ ID NO: 32); NO: 33), 82-97 (SEQ ID NO: 34), 82-98 (SEQ ID NO: 35), 82-100 (SEQ ID NO: 30), 82-100 [100P > Y] (SEQ ID NO) : 46), 83-100 (SEQ ID NO: 37), 83-101 (SEQ ID NO: 38), 84-97 (SEQ ID NO: 39), 84-100 (SEQ ID NO: 40), 85- 100 (SEQ ID NO: 41), 86-105 (SEQ ID NO: 42), 87-99 125 (SEQ ID NO: 43), 87-99[91K>A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 8899 (SEQ ID NO: 45), 1 11-135 (SEQ ID NO: 47), 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142-168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52) a 153-170 (SEQ ID NO: 53), znázornené na obr. 2 a 14.125 (SEQ ID NO: 43), 87-99 [91K > A] (SEQ ID NO: 36), 88-100 (SEQ ID NO: 44), 8899 (SEQ ID NO: 45), 11-135 ( 122-140 (SEQ ID NO: 48), 139170 (SEQ ID NO: 49), 141-160 (SEQ ID NO: 28), 142-166 (SEQ ID NO: 50), 142 -168 (SEQ ID NO: 51), 146-160 (SEQ ID NO: 52), and 153-170 (SEQ ID NO: 53) shown in FIGS. 2 and 14. 51. Použitie aspoň jedného peptidu, majúceho aktivitu T buniek myelínového anti· génu, na prípravu liečiva na prevenciu nástupu sklerózy multiplex u jedinca náchyl neho na sklerózu multiplex, v kombinácii s pôsobením IFN-β.51. The use of at least one peptide having a T cell activity of a myelin anti-gene for the preparation of a medicament for preventing the onset of multiple sclerosis in an individual susceptible to multiple sclerosis, in combination with IFN-β. 52. Použitie aspoň jedného prípravku podľa nároku 1 na prípravu liečiva na prevenciu nástupu sklerózy multiplex u jedinca náchylného na sklerózu multiplex, v kombinácii s pôsobením IFN-β.Use of at least one composition according to claim 1 for the preparation of a medicament for preventing the onset of multiple sclerosis in a subject susceptible to multiple sclerosis, in combination with IFN-β. 53. Použitie aspoň jedného prípravku podľa nároku 5 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, v kombinácii s pôsobením IFN-β.Use of at least one composition according to claim 5 for the preparation of a medicament for treating multiple sclerosis in a mammal, in combination with IFN-β. 54. Použitie aspoň jedného prípravku podľa nároku 10 na prípravu liečiva na liečenie sklerózy multiplex u cicavca, v kombinácii s pôsobením IFN-β.Use of at least one composition according to claim 10 for the preparation of a medicament for treating multiple sclerosis in a mammal, in combination with IFN-β. 55. Použitie aspoň jedného prípravku podľa nároku 14 na prípravu liečiva na lieče nie sklerózy multiplex u cicavca, v kombinácii s pôsobením IFN-β.Use of at least one composition according to claim 14 for the preparation of a medicament for the treatment of non-multiple sclerosis in a mammal, in combination with IFN-β. 56. Použitie aspoň jedného prípravku podľa nároku 15 na prípravu liečiva na lieče nie sklerózy multiplex u cicavca, v kombinácii s pôsobením IFN-β.The use of at least one composition according to claim 15 for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a mammal, in combination with IFN-β. 126126 57. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje farmaceutický prijateľné vehikulum a peptidový komplex MHC triedy II, schopný viazať receptor T buniek a indukovať anergiu v T bunke nesúcej tento receptor, pričom tento komplex pozostáva v podstate zo:57. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable vehicle and an MHC class II peptide complex capable of binding the T cell receptor and inducing anergy in a T cell bearing the receptor, the complex consisting essentially of: zložky MHC triedy II, zahrnujúcej extracelulárne domény molekuly MHC triedy II, dostačujúce na vytvorenie väzbového vačku antigénu, pričom táto zložka je kódovaná alelou asociovanou s autoimunitnou chorobou a je rozpustná za fyziologických podmienok v neprítomnosti detergentu alebo lipidu, a autoantigénneho peptidu podľa nároku 1, ktorý je naviazaný na väzbový vačok antigénu.an MHC class II component comprising the extracellular domains of an MHC class II molecule sufficient to form an antigen binding cam, said component being encoded by an allele associated with an autoimmune disease and soluble under physiological conditions in the absence of detergent or lipid, and an autoantigenic peptide according to claim 1 is bound to an antigen binding cam. 58. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje farmaceutický prijateľné vehikulum a peptidový komplex MHC triedy II, schopný viazať receptor T buniek a indukovať anergiu v T bunke nesúcej tento receptor, pričom tento komplex pozostáva v podstate zo:58. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable vehicle and an MHC class II peptide complex capable of binding the T cell receptor and inducing anergy in the T cell bearing the receptor, which complex consists essentially of: zložky MHC triedy II, zahrnujúcej extracelulárne domény molekuly MHC triedy II, dostačujúce na vytvorenie väzbového vačku antigénu, pričom táto zložka je kódovaná alelou asociovanou s autoimunitnou chorobou a je rozpustná za fyziologických podmienok v neprítomnosti detergentu alebo lipidu, a autoantigénneho peptidu podľa nároku 8, ktorý je naviazaný na väzbový vačok antigénu.an MHC class II component comprising the extracellular domains of an MHC class II molecule sufficient to form an antigen binding cam, said component being encoded by an allele associated with an autoimmune disease and soluble under physiological conditions in the absence of detergent or lipid, and an autoantigenic peptide according to claim 8 is bound to an antigen binding cam. 59. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje farmaceutický prijateľné vehikulum a peptidový komplex MHC triedy II, schopný viazať receptor T buniek a indukovať anergiu v T bunke nesúcej tento receptor, pričom tento komplex pozostáva v podstate zo:59. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable vehicle and an MHC class II peptide complex capable of binding the T cell receptor and inducing anergy in the T cell bearing the receptor, the complex consisting essentially of: 127 zložky MHC triedy II, zahrnujúcej extracelulárne domény molekuly MHC triedy II, dostačujúce na vytvorenie väzbového vačku antigénu, pričom táto zložka je kódovaná alelou asociovanou s autoimunitnou chorobou a je rozpustná za fyziologických podmienok v neprítomnosti detergentu alebo lipidu, a autoantigénneho peptidu podľa nároku 16, ktorý je naviazaný na väzbový vačok antigénu.127 a MHC class II component comprising the extracellular domains of an MHC class II molecule sufficient to form an antigen binding cam, said component being encoded by an allele associated with an autoimmune disease and soluble under physiological conditions in the absence of detergent or lipid, and an autoantigenic peptide of claim 16, which is bound to an antigen binding cam. 60. Prípravok podľa nároku 57, vyznačujúci sa tým, že autoimunitnou chorobou je skleróza multiplex.60. The composition of claim 57, wherein the autoimmune disease is multiple sclerosis. 61. Prípravok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje tandemové kópie uvedeného peptidu.61. The composition of claim 1, comprising tandem copies of said peptide. 62. Prípravok podľa nároku 8, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje tandemové kópie uvedeného peptidu.62. The composition of claim 8, comprising tandem copies of said peptide. 63. Prípravok podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje tandemové kópie uvedeného peptidu.63. The composition of claim 16, comprising tandem copies of said peptide. 1/211/21