SK287428B6 - Aromatické diketoderiváty, spôsob ich prípravy a farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje - Google Patents
Aromatické diketoderiváty, spôsob ich prípravy a farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje Download PDFInfo
- Publication number
- SK287428B6 SK287428B6 SK544-2002A SK5442002A SK287428B6 SK 287428 B6 SK287428 B6 SK 287428B6 SK 5442002 A SK5442002 A SK 5442002A SK 287428 B6 SK287428 B6 SK 287428B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- compound
- formula
- alkyl
- group
- xviii
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C65/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
- C07C65/32—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing keto groups
- C07C65/40—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups containing keto groups containing singly bound oxygen-containing groups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
- C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
- C07D307/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D307/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D307/20—Oxygen atoms
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Opisujú sa aromatické diketoderiváty a ich farmaceuticky prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty. Tieto deriváty sú inhibítory glukózo-6-fosfáttranslokázy a môžu sa využiť pri liečbe cukrovky. Ďalej sa opisujú spôsoby prípravy týchto látok, použitie týchto látok a ich farmaceuticky prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov ako liečiv, hlavne ich použitie pri liečbe cukrovky a opisujú sa tiež farmaceutické kompozície obsahujúce tieto látky, ich farmaceuticky prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty.
Description
Predkladaný vynález sa týka nových aromatických diketoderivátov a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov. Tieto deriváty sú inhibítormi glukózo-6-fosfáttranslokázy a môžu sa využiť pri liečbe cukrovky. Predkladaný vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy týchto derivátov a použitia týchto derivátov, ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov ako liečiv, hlavne ich použitia pri liečbe cukrovky, a farmaceutických kompozícií obsahujúcich tieto deriváty, ich farmaceutický prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty.
Doterajší stav techniky
Všeobecným rysom cukrovky je zvýšená rýchlosť produkcie pečeňovej glukózy. Obzvlášť silná závislosť medzi hladinou glukózy v plazme pri hladovaní a produkciou pečeňovej glukózy sa vyskytuje pri cukrovke nezávislej od inzulínu (NIDDM). Dvomi cestami, ktorými sa glukóza v pečeni produkuje, je glukoneogenéza a glykogenolýza. Konečné kroky oboch ciest sú katalyzované mikrozomálnou glukózo-6-fosfatázou, kľúčovým enzýmom na homeostatickú reguláciu hladiny krvnej glukózy. Je známe, že hladina tohto enzýmu sa zvyšuje tak pri experimentálnej, ako aj pri patologickej cukrovke. Zásah do účinnosti tohto enzýmu teda vedie k zníženiu produkcie pečeňovej glukózy.
Pečeňová glukózo-6-fosfatáza je systém, skladajúci sa z niekoľkých zložiek, ktoré majú najmenej tri funkcie: glukózo-6-fosfáttranslokáza (Tí), glukózo-6-fosfátfosfohydroláza a fosfát/pyrofosfáttranslokáza (T2). Glukózo-6-fosfattranslokáza umožňuje transport glukózo-6-fosfátu do dutín endoplazmatického retikula (ER). Fosfohydroláza, ktorej aktívne miesto je umiestnené na vnútrajšku povrchu dutín ER, hydrolyzuje glukózo-6-fosfát a uvoľňuje glukózu a fosfát do dutiny. Zatiaľ čo odvod fosfátu je zabezpečený fosfát/pyrofosfáttranslokázou, presný mechanizmus odvodu glukózy nie je známy.
Glukózo-6-fosfáttranslokáza je vysoko substrátovo špecifická, a je teda možným cieľom pre farmakologické zásahy pri liečbe cukrovky. Z fyziologicky prítomných fosfátov cukrov je teda jedine glukózo-6-fosfát transportovaný touto translokázou. Naopak fosfatáza je nešpecifická a je známe, že hydrolyzuje viacero organických fosfátesterov.
V literatúre bol opísaný rad nešpecifických inhibítorov glukózo-6-fosfatázy, napr. florrhizín (J. Biol. Chem., 242, 1995-1960 (1967)), 5,5'-ditio-bis-2-nitrobenzoová kyselina (Biochem. Biophys. Res. Commun., 48, 694-699 (1972)), 2,2'-diizotiokyanátostilbén a 2-izotiokyanáto-2'-acetoxystilbén (J. Biol. Chem., 255, 1113-1119 (1980)). Prvý terapeuticky využiteľný inhibítor glukózo-6-fosfatázového systému bol navrhnutý v EP-A-587 087 a EP-A-587 088. Kodaistatíny A, B, C, a D opísané v medzinárodnej patentovej prihláške PCT/EP 98/02247 sú prvými inhibítormi glukózo-6-fosfáttranslokázy z mikrobiálnych zdrojov.
Podstata vynálezu
Aromatické diketoderiváty podľa predkladaného vynálezu sa odvodzujú od zlúčeniny nazývanej mumbaistatín. Mumbaistatín je opísaný v medzinárodnej patentovej prihláške PCT/EP 99/04127. Ide o prírodný produkt, ktorý sa dá získať kultiváciou mikroorganizmu Streptomyces litmocidini, ktorého vzorka je uložená od
4. júla 1997 v Nemeckej zbierke mikroorganizmov a bunkových štruktúr (DSMZ) pod prístupovým číslom DSM 11641. Štruktúrny vzorec mumbaistatínu bol určený a je nasledujúci:
Teraz sa prekvapujúco zistilo, že určité deriváty mumbaistatínu majú zvýšenú aktivita a sú lepšie znášané v tele cicavcov, než mumbaistatín samotný. Tiež oddelené diastereoizoméry mumbaistatínu majú určité výhody oproti zmesi diastereoizomérov mumbaistatínu.
Predkladaný vynález preto poskytuje zlúčeniny všeobecného vzorca (I)
kde R4, R5, R6 a R7 sú nezávisle od seba atóm vodíka, hydroxylová skupina, atóm halogénu, prípadne substituovaná alkylová, arylová alebo acylová skupina, X-alkylová alebo X-arylová skupina, kde X je atóm kyslíka, skupina NH, N-alkylová skupina alebo atóm síry, K je skupina všeobecného vzorca (II) alebo (III) uve5 deného ďalej:
(Π)
X1 R1 (III)
L je skupina všeobecného vzorca (IV) alebo (V) uvedeného ďalej:
(IV) (V) alebo K a L tvoria, spolu so zodpovedajúcimi atómami uhlíka, ku ktorým sa viažu, skupinu všeobecného vzorca (VI), (VII) alebo (VIII) uvedenú ďalej:
(VI) (VII) (VIII),
kde
R1 a R3 sú nezávisle od seba katión, atóm vodíka, alkylová alebo arylová skupina,
R2 je atóm vodíka, alkylová, arylová alebo acylová skupina, X1, X2, X3, X4, X5, X6 a X7 sú nezávisle od seba atóm kyslíka, NH skupina, N-alkylová skupina alebo atóm síry a cyklus je, spolu s atómami uhlíka označenými „c“ a „d“, prípadne substituovaný nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo aromatický, karbocyklický alebo heterocyklický, jednoduchý alebo kondenzovaný cyklický systém, s výnimkou zlúčeniny, v ktorej K je skupina vzorca (II) a L je skupina vzorca (IV), v ktorých X1, X2, X3, X4, X5, X6 a X7 sú atómy kyslíka, R1, R2 a R3 sú atómy vodíka, R4 je hydroxylová skupina, R5, R6 a R7 sú atómy vodíka, a cyklus je 3,8-dihydroxyantrachinón, a zlúčeniny, v ktorej K a L tvorí skupinu vzorca (VI), v ktorej X1, X2, X3, X4, X5, X6 a X7 sú atómy kyslíka, R1 je metylová skupina, R2 a R3 sú atómy vodíka, R4 je hydroxylová skupina, R5, R6 a R7 sú atómy vodíka a cyklus je 3,8-dihydroxyantrachinón, a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty vo všetkých stereochemických a tautomémych formách a ich zmesi v ľubovoľnom pomere.
Predkladaný vynález ďalej zahŕňa zlúčeniny všeobecného vzorca (IX)
(ix), a N je skupina vzorca (XI)
-XSR3 alebo M a N tvoria, spolu s atómami uhlíka, ku ktorým sa viažu, skupinu vzorca (XII),
ktorá sa viaže cez atóm uhlíka označený „e“, Oje skupina vzorca (XIII)
x3r3 (xi) (xii) , (xni) (xiv) (xv) a P je skupina vzorca (XIV),
-X5R2 alebo O a P tvoria, spolu s uhlíkmi, ku ktorým sa viažu, skupinu vzorca (XV),
X3 cyklus ktorá sa viaže cez atóm uhlíka označený „f‘, a kde R1 až R7, X1 až X7, cyklus, c a d majú význam uvedený v nároku 1,
a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty vo všetkých stereochemických a tautomémych formách a ich zmesi v ľubovoľnom pomere.
Tu používaný výraz „alkylová skupina“ označuje priamu, rozvetvenú, prípadne substituovanú alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 6 atómov uhlíka, výhodne alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, ako je: metyl, etyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl alebo i-butyl, priamu alebo rozvetvenú, prípadne substituovanú alkenylovú skupinu obsahujúcu 2 až 6 atómov uhlíka, výhodne alkenylovú skupinu obsahujúcu 2 až 4 atómy uhlíka, ako je alyl, priamu alebo rozvetvenú, prípadne substituovanú alkinylovú skupinu obsahujúcu 2 až 6 atómov uhlíka, výhodne alkinylovú skupinu obsahujúcu 2 až 4 atómy uhlíka, ako je alylén.
Tu používaný výraz „arylová skupina“ označuje prípadne substituovanú benzylovú alebo fenylovú skupinu.
Tu používaný výraz „acylová skupina“ označuje prípadne substituovanú alifatickú, aromatickú alebo heterocyklickú acylovú skupinu, napríklad alifatickú acylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, ako je acetylová alebo propionylová skupina, aromatickú acylovú skupinu, ako je benzoyl, toluoyl, a heterocyklickú acylovú skupinu odvodenú od päť a šesťčlenných kruhov s jedným až štyrmi heteroatómami, ako je nikotinoyl, furyl, pyrolyl, tienyl, tiazolyl a oxazolyl.
Tu používaný výraz „prípadne substituovaný“ označuje, že daná skupina je pripadne substituovaná jedným alebo viacerými, výhodne jedným, dvomi, tromi alebo štyrmi zhodnými alebo rozdielnymi nasledujúcimi substituentmi: hydroxylová skupina, alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alkenylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alkyltioskupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxykarbonylová skupina obsahujúca v alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka, karbamoylová skupina, karboxylová skupina, trifluórmetylová skupina, kyanoskupina, nitroskupina, aminoskupina, alkylamino skupina obsahujúca v alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka, dialkylamino skupina obsahujúca v alkylových častiach 1 až 4 atómy uhlíka, amidínová skupina, aryloxyskupina, arylaminoskupina a atóm halogénu.
Atóm halogénu je atóm jódu, brómu, chlóru alebo fluóru, výhodne atóm chlóru alebo brómu.
Výraz katión predstavuje anorganický kovový ión. Tu uvádzané príklady môžu byť najmä farmakologicky prijateľné ióny alkalických kovov alebo ióny kovov alkalických zemín, výhodne sodný, draselný, vápenatý alebo horečnatý ión, amónny ión a z organických iónov najmä prípadne substituovaný alkylovaný amóniový ión, ako je napríklad trietylamóniový alebo dietylamóniový ión, ako aj morfolín, benzylamóniový a prokaínový, L-asparagínový a L-lyzínový ión.
Cyklus, ktorý zahŕňa atómy uhlíka označené „c“ a „d“ použité vo vzorcoch, môže znamenať prípadne substituovaný nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo aromatický, karbocyklický, heterocyklický, jednoduchý alebo kondenzovaný kruh. Jednoduchý kruh značí monocyklický kruh obsahujúci 3 až 6 atómov v kruhu a kondenzovaný kruh značí kondenzovaný dicyklický alebo tricyklický systém obsahujúci 6 až 14 atómov v kruhu.
Nasýtený karbocyklický systém môže predstavovať kruhový systém s 3 až 14 členmi, výhodne jednoduchý 3- až 8- členný kruh, ako je cykloalkylová skupina obsahujúca 3 až 8 atómov uhlíka, výhodnejšie cykloalkylová skupina obsahujúca 3 až 6 atómov uhlíka, napríklad cyklopropylová skupina, cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina alebo cyklohexylová skupina. Môže tiež predstavovať bi- alebo tricyklický kondenzovaný kruhový systém, ako je bicyklo[3.3.1]nonán a tetradekahydrofenantrén.
Čiastočne nenasýtený karbocyklický kruhový systém sa líši od nasýteného tým, že obsahuje jednu alebo dve dvojité či trojité väzby. Môže teda predstavovať 3- až 14-členný kruhový systém, výhodne 3- až 8-členný kruhový systém, ako je cykloalkán obsahujúci 3 až 8 atómov uhlíka, napríklad cyklopentadién alebo cyklooktatetraén, výhodnejšie cykloalkén obsahujúci 3 až 6 atómov uhlíka alebo cykloalkín obsahujúci 5 až 8 atómov uhlíka.
Aromatický karbocyklický jednoduchý alebo kondenzovaný kruhový systém môže predstavovať 5- až 14-členný monocyklický, bicyklický alebo tricyklický kruhový systém, ako je fenyl, naftyl, fenantrén alebo antrachinón.
Heterocyklický kruhový systém môže byť nasýtený, čiastočne nenasýtený alebo aromatický a môže to byť jednoduchý alebo kondenzovaný kruhový systém definovaný predtým. Heterocyklický kruhový systém môže predstavovať karbocyklický kruhový systém definovaný predtým, v ktorom sú jeden, dva, tri alebo štyri atómy uhlíka nahradené nasledujúcimi rovnakými alebo rôznymi heteroatómami: atóm dusíka, atóm kyslíka a atóm síry. Môže napríklad predstavovať päť- alebo šesťčlenný kruh, ktorý obsahuje jeden až štyri nasledujúce heteroatómy: atóm kyslíka, atóm síry a atóm dusíka, najmä atóm dusíka, prípadne spolu s atómami síry alebo kyslíka ako členmi kruhu. Niektoré príklady heterocyklických kruhových systémov sú heteroalkylové skupiny, ako je pyrolidin, piperidín, tetrahydrofurán, oxazolidín tiazolidín, a heteroalkylové skupiny, ako je pyridyl, pyrimidyl, furyl, benzotiazol, benzofuranyl a indolyl.
Výhodne je cyklus skupina vzorca (XVI)
(xvi),
kde
R8 je atóm vodíka, alkylová, arylová alebo acylová skupina,
R9 je katión, atóm vodíka, alkylová alebo acylová skupina,
R10, R11, R12 a R13 sú nezávisle od seba atómy vodíka, alkylová skupina, -X10H alebo XIOR skupina, alebo sú
R10 a R11 a/alebo R12 a R13 spoločne =X10 skupina,
X8, X9 a X10 sú nezávisle od seba atóm kyslíka, NH skupina, N-alkylová skupina alebo atóm síry,
R je alkylová, arylová alebo acylová skupina,
--------„ označuje prípadnú väzbu, a cyklus sa viaže atómami uhlíka označenými „c“ a „d“.
Výhodnejšie je cyklus skupina vzorca (XVIA)
(XVIA), kde
X8 a X9 sú nezávisle od seba atóm vodíka alebo atóm kyslíka,
R8 a R9 sú nezávisle od seba atóm vodíka alebo alkylová skupina,
R10 a R13 sú atómy vodíka, alebo R12 a R13 spoločne a/alebo R12 a R13 spoločne sú skupina =O, a cyklus sa viaže atómami uhlíka označenými „c“ a „d“.
Cyklická časť štruktúry môže byť jednou z mnohých kruhových štruktúr. Je však výhodné mať cyklus substituovaný, výhodne hydroxylovou alebo alkoxylovou skupinou. Cyklus je výhodne aromatická kruhová štruktúra ďalej uvedeného vzorca (XVIB):
(XVIB), kde
R9 je atóm vodíka, alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka, a X9 je atóm kyslíka.
Výhodné zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu majú nasledujúci všeobecný vzorec (XVIII)
kde
R1 až R7, X1 až X7, cyklus a „c“ a „d“ majú uvedený význam s výnimkou zlúčeniny, v ktorej X1 až X7 sú atómy kyslíka, R1, R2 a R3 sú atómy vodíka, R4 je hydroxylová skupina,
R5, R6 a R7 je atóm vodíka a cyklus je 3,8-dihydroxyantrachinón, a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty, vo všetkých svojich stereoizomémych a tautomérnych formách a ich zmesi v ľubovoľnom pomere.
Výhodná je na atóme uhlíka označenom hviezdičkou konfigurácia S, v tomto prípade sa neuplatňuje uve6 dená výnimka.
Výhodne sú R1, R2 a R3 alkylové skupiny obsahujúce 1 až 6 atómov uhlíka, výhodne alkylové skupiny obsahujúce 1 až 4 atómy uhlíka, ako je metyl.
Výhodne je jeden alebo viac atómov X1 až X7 atóm kyslíka.
Príklad zlúčeniny uvedeného vzorca (XVIII) je uvedený ďalej:
(XVIIIA).
Ďalší príklad zlúčeniny uvedeného vzorca (XVIIIA) je uvedený ďalej:
(XVIIIB).
Alkylované deriváty mumbaistatínu vzorca (XVIIIA) a vzorca (XVIIIB) sa získavajú rozpúšťaním mumbaistatínu v rozpúšťadle, výhodne v organickom rozpúšťadle, ako je alkanol, napríklad metanol, a reakciou s alkylačným činidlom, ako je diazoalkán, napríklad diazometán, diazoetán, diarylmetyldiazometán, ako je difenyldiazometán. Alkylový substituent v uvedených skupinách vzorca (XVIIA) a vzorca (XVIIIB) je výhodne alkylová skupina obsahujúca 1 až 4 atómy uhlíka. Keď je alkylovou skupinou obsahujúcou 1 až 4 atómy uhlíka napríklad metylová skupina, získavajú sa metylované deriváty mumbaistatínu reakciou mumbaistatínu v roztoku a metylačným činidlom, ako je diazometán.
V ideálnom prípade sa na mumbaistatín vopred pôsobí kyselinou, výhodne nizkomolekulovou organickou kyselinou, napríklad kyselinou mravčou, kyselinou octovou alebo kyselinou trifluóroctovou. Reakčný produkt sa potom izoluje, výhodne chromatograficky.
Izolácia zlúčenín z reakčného média podľa predkladaného vynálezu sa môže uskutočniť známymi metódami, ktoré závisia od rozpustnosti výslednej zlúčeniny.
Ďalším príkladom zlúčeniny vzorca (XVIII) je ďalej uvedený diastereoizomér:
(XVIIIC), kde na atóme uhlíka označenom hviezdičkou je konfigurácia 5.
Diastereoizomér vzorca (XVIIID) podľa predkladaného vynálezu je uvedený ďalej:
(XVIIID), kde atómy uhlíka označené „a“ a „b“ vo forme ketálu alebo poloketálu majú nezávisle od seba konfiguráciu S alebo R.
Ďalší príklad zlúčeniny vzorca (XVIII) je uvedený ďalej:
(XVIIIE).
Niektoré výhodné zlúčeniny vzorca (I) znázornené pred týmto môžu byť zovšeobecnené ako deriváty hydroxy-diketo-diuhličitej kyseliny.
Vynález sa ďalej týka zlúčenín všeobecného vzorca (XIX) uvedeného ďalej:
kde R1 až R7, X1 až X7, cyklus a „c“ a „d“ majú uvedený význam s výnimkou zlúčeniny, v ktorej R1 je metylová skupina, R4 je hydroxylová skupina, X1 až X7 sú atómy kyslíka a cyklus je 3,8-dihydroxyantrachinón, ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov vo všetkých svojich stereoizomémych a tautomémych formách a ich zmesí v ľubovoľnom pomere.
Výhodne je R1 alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ako je metylová skupina, R4 je výhodne hydroxylová skupina alebo alkoxyskupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, ako je metoxyskupina.
Príklad zlúčeniny vzorca (XIX) je uvedený ďalej:
(XIXA).
Ďalší príklad zlúčeniny vzorca (XIX) je uvedený ďalej:
(XIXB).
Ďalší príklad zlúčeniny vzorca (XIX) je uvedený ďalej:
(XIXC).
Ďalší príklad zlúčeniny vzorca (XIX) je ďalej uvedený diastereoizomér:
(XIXD), kde na atóme uhlíka označenom hviezdičkou je konfigurácia S a na atómoch uhlíka označených „a“ a „b“ 5 môže byť konfigurácia buď S alebo R.
Jeden zo spôsobov prípravy zlúčenín vzorcov (XIXA), (XIXB) a (XIXC) zahŕňa rozpúšťanie mumbaistatínu v rozpúšťadle, výhodne v organickom rozpúšťadle, napríklad alkanole, ako je metanol, a reakciu s metylačným činidlom, ako je diazometán. V ideálnom prípade predchádza reakcii mumbaistatínu pôsobenie kyseliny, ako je kyselina trifluóroctová. Reakčný produkt sa izoluje výhodne chromatograficky.
Mumbaistatín má obmedzenú stabilitu v roztoku pri pH okolo 6 až 9. Pri kyslom pH mumbaistatín pod- lieha komplexnej konverzii, napríklad na uvedenú zlúčeninu vzorca (XIXD). Pretože pri príprave metylovaných zlúčenín XVIIIA, XVIIIB, XIXA, XIXB a XIXC uvedených mumbaistatín reaguje s diazometánom v kyslom prostredí, je treba zaistiť, aby sa získali definované, natívne metylačné produkty. Zistilo sa, že požadované produkty metylácie sa získajú za chladu, ako sú teploty medzi -1 až +3 °C, a/alebo keď sa proces uskutočňuje pri predĺžených reakčných časoch. Prekvapujúco bolo možné vykryštalizovať aspoň jeden z produktov metylácie použitím zmesi vody a acetonitrilu. To umožnilo určenie štruktúry zlúčenín rontgenoštrukturálnou analýzou.
Tabuľka 1:
Kryštalografícké dáta a upresnenie štruktúry pre trimetylmumbaistatín (vzorec (XVIIIA))
Identifikačný kód | sh608 |
Empirický vzorec | C33H27NOU |
Molekulová hmotnosť | 613,56 |
Teplota | 293(2) K [19,85(18,85) °C] |
Vlnová dĺžka | 0,71073 Ä |
Kryštálová sústava | monoklinická |
Priestorová skupina | P2(l) |
Rozmery jednotkovej cely | a = 12,907(4) Á a =90° b = 11,253(5) Ä β = 96,56(2)° c = 20,003(6) Ä γ=90° |
Objem | 2886,2(17) Á3 |
Z | 4 |
Hustota (vypočítaná) | 1,412 Mg/m3 |
Absorpčný koeficient | 0,107 mm'1 |
F(000) | 1280 |
Veľkosť kryštálu | 0,04 x 0,1 x 0,2 mm3 |
Rozsah theta pre zber dát | 2,08 až 20,83° |
Rozsahy indexov | -12ái<12,-11 ái <11,-1931 <19 |
Počet zachytených odrazov | 9796 |
Nezávislé odrazy | 5833 [R(int) = 0,0447] |
Úplnosť k theta = 20,83° | 98,7 % |
Absorpčná korekcia | maximum: 0,862, minimum: 0,632 |
Spresňovacia metóda | matr. metóda najmenších štvorcov na F2 |
Dáta/reštrikcie/parametre | 5833/1/822 |
Vhodnosť preloženia F2 | 1,064 |
Konečné Rukazovateľa(> 2 σ(1)) | R1 =0,0510, wR2 = 0,0966 |
R ukazovateľa (všetky dáta) | Rí =0,0981, wR2 = 0,1171 |
Absolútne štruktúrne parametre | 1(2) |
Extinkčný koeficient | 0,0035(4) |
Najväčší dif. pík a jama | 0,194 a-0,174 e. Á3 |
Tabuľka 2
Chemické posuny tetrametylmumbaistatínlaktóndispiroketónu (vzorec (XIXC) v CPC13 pri 280 K)
Aa) | B a> | A | B | |
‘H | ‘H | i3C | 13C | |
1 | - | - | 159,50 | 159,51 |
1-Ome | 3,87 | 3,87 | 56,28 | 56,28 |
2 | 7,26 | 7,26 | 118,27 | 118,27 |
3 | 7,67 | 7,67 | 134,57 | 134,57 |
4 | 7,85 | 7,85 | 119,32 | 119,32 |
5 | - | - | 134,44 | 134,44 |
6 | - | - | 183,27 | 183,24 |
7 | - | - | 139,57 | 139,57 |
8 | - | - | 124,51 | 124,51 |
9 | - | - | 180,29 | 180,26 |
10 | - | - | 122,56 | 122,50 |
11 | 7,88 | 7,88 | 110,55 | 110,58 |
12 | - | - | 160,33 | 160,33 |
12-OMe | 4,21 | 4,20 | 57,00 | 57,00 |
13 | - | - | 121,33 | 121,28 |
14 | - | - | 149,595 | 149,81 |
Aa) | Ba) | A | B | |
15 | - | - | 164,43 | 164,15 |
16 | - | - | 111,33 | 111,33 |
17 | - | - | 126,62 | 126,34 |
18 | - | - | 153,44 | 153,39 |
18-OMe | 3,54 | 3,54 | 55,52 | 55,52 |
19 | 6,76 | 6,77 | 110,97 | 110,92 |
20 | 7,46 | 7,47 | 132,15 | 132,23 |
21 | 7,12 | 7,09 | 114,38 | 114,32 |
22 | - | - | 141,76 | 142,18 |
23 | - | - | 119,28 | 119,58 |
24 | 2,74/2,58 | 2,70/2,63 | 36,05 | 35,22 |
25 | 2,41 / 1,92 | 2,41 /1,97 | 30,36 | 29,87 |
26 | 4,77 | 4,77 | 77,64 | 76,54 |
27 | 2,90 / 2,63 | 2,86/2,63 | 41,46 | 40,15 |
28 | - | - | 171,74 | 171,21 |
28-Ome | 3,67 | 3,71 | 51,72 | 51,78 |
a) A a B zodpovedá obom diastereoizomémym formám (pomer A:B je asi 1,2: 1,0).
Tabuľka 3
Porovnanie aromatických protónov vo vzorcoch (XVIIIA) a (XVIIIB)
Poloha | Vzorec (XVIIIA) | Vzorec (XVIIIB) |
2 | 7,29 | 7,26 |
3 | 7,59 | 7,67 |
4 | 7,85/7,84 | 7,85 |
11 | 7,97/7,90 | 7,88 |
19 | 6,92 | 6,76/6,77 |
20 | 7,68/7,67 | 7,64/7,47 |
21 | 6,92 | 7,12/7,09 |
Tabuľka 4
Chemické posuny mumbaistatínlakóndispiroketálmonometylesteru (vzorec (XIXA)) v DMSO pri 300 K
Poloha | XIXA | XIXA |
Ή | 13c | |
1 | - | 161,38 |
1-OH | 13,26 | - |
2 | 7,18 | 123,82 |
3 | 7,62 | 135,15 |
4 | 7,57 | 117,95 |
Poloha | XIXA | XIXA |
5 | - | 132,68 |
6 | - | 183,53 |
7 | - | 138,70 |
8 | - | 117,91 |
9 | - | 183,09 (š) |
10 | - | 116,48 |
11 | 7,16 (š) | -122,1 (š) |
12 | - | 153,87 (š) |
12-OH | (š) | - |
13 | - | a) |
14 | - | a) |
15 | - | 166,54 (š) |
16 | - | 110,11 |
17 | - | 124,64, 124,51 |
18 | - | 151,14, 151,09 |
18-OH | 9,51,9,52 | - |
19 | 6,68 | 115,32 |
20 | 7,26, 7,27 | 130,72, 130,78 |
21 | 6,97, 6,95 | 112,45 |
22 | - | 143,49, 143,68 |
Poloha | XIXA | XIXA |
23 | - | 117,93, 118,01 |
24 | 2,53/2,45, | -35,8 (š) |
2,59/2,37 | -34,9 (š) | |
25 | 2,26/1,74, | -29,8 (š) |
2,22/1,85 | -29,4 (š) | |
26 | 4,60, 4,54 | 76,84, 75,91 |
27 | 2,68, 2,63 | 41,09, 39,88 |
28 | - | 170,97, 170,86 |
28-Ome | 3,59,3,61 | 51,22, 51,28 |
a) pri týchto jadrách nebol v 3C NMR spektre pozorovaný žiaden signál
Tam, kde sa pozorujú dve sady signálov (v pomere asi 1,1 : 1,0), zodpovedajú obom diastereoizomémym formám. Obidve hodnoty sú oddelené čiarkou v prípade, že diastereoizoméry vykazujú rôzne chemické posuny (prvá hodnota zodpovedá hlavnej zložke).
Vynález sa ďalej týka zlúčenín všeobecného vzorca (XX):
(XX), kde R1 až R7, X1 až X7, cyklus a „c“ a „d“ majú uvedený význam, a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších chemických ekvivalentov vo všetkých stereoizomémych a tautomémych formách a ich zmesí v ľubovoľnom pomere.
Výhodne jeden alebo viac atómov X1 až X7 sú atómy kyslíka.
Vynález sa ďalej týka zlúčenín všeobecného vzorca (XXI):
(xxi), kde
R1 až R7, X1 až X7, cyklus a „c“ a „d“ majú uvedený význam, a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov vo všetkých stereoizomémych a tautomémych formách a ich zmesí v ľubovoľnom pomere.
Výhodne jeden alebo viac atómov X1 až X7 sú atómy kyslíka.
Vynález sa ďalej týka zlúčenín všeobecného vzorca (XXII):
(XXII), kde R1 až R7, X1 až X7, cyklus a „c“ a „d“ majú uvedený význam, a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov vo všetkých svojich stereoizomémych a tautomémych formách a ich zmesí v ľubovoľnom pomere.
Výhodne jeden alebo viac atómov X1 až X7 sú atómy kyslíka.
Príklad zlúčeniny vzorca (XXII) je uvedený ďalej:
(XXIIA).
Spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (XXIIa) zahŕňa rozpúšťanie mumbaistatínu v rozpúšťadle, výhodne organickom rozpúšťadle ako je alkanol, a reakciu so zdrojom amidu, ako je roztok amoniaku. Príprava sa uskutočňuje za chladu, výhodne pri teplote -1 až +3 °C. Reakčný produkt sa potom izoluje.
Vynález sa ďalej týka zlúčenín všeobecného vzorca (XXIV):
(XXIV), kde
R1 až R7, X1 až X7, cyklus a „c“ a „d“ majú horeuvedený význam, a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov vo všetkých svojich stereoizomémych a tautomémych formách a ich zmesí v ľubovoľnom pomere.
Výhodne jeden alebo viac atómov X1 až X7 sú atómy kyslíka.
Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú tautoméry, v ktorých sa otvorené a uzatvorené formy vyskytujú v rovnováhe.
Uzatvorené štruktúry vzorcov (XIX) až (XXIV) uvedených skôr sa môžu previesť na otvorenú štruktúru vzorca (XVIII) reakciou s vhodnou bázou. Vhodné bázy, použiteľné na reakciu, môžu byť anorganické alebo organické bázy. Môžu sa teda použiť uhličitany terciámych amínov a alkalických kovov, ako je uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, uhličitan draselný a uhličitan lítny.
Príkladom tautomérov podľa predkladaného vynálezu, nachádzajúcich sa v rovnováhe, sú zlúčeniny vzorca (XXIIIA) a (XXIIIF) uvedené ďalej:
(XXIIIA)
(XXIIIF).
Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu previesť na farmaceutický prijateľné soli a zrejmé chemické ekvivalenty, ako sú estery a étery, ktoré predkladaný vynález tiež zahŕňa. Vynález ďalej zahŕňa všetky soli a zrejmé chemické ekvivalenty predkladaných zlúčenín, ktoré samy osebe nie sú vhodné ako liečivá, ale môžu sa použiť ako medziprodukty pri príprave farmaceutický prijateľných solí a derivátov. Vynález zahŕňa predkladané diketoderiváty a ich soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty vo všetkých stereoizomémych a tautomémych formách. Soli týchto derivátov (napr. sodné, draselné, amónne soli) sa môžu pripraviť štandardnými, všeobecne známymi postupmi. Soli, ako napríklad sodné alebo draselné soli, sa môžu pripraviť pôsobením vhodnej sodnej alebo draselnej bázy na predkladané zlúčeniny.
Estery sa môžu napríklad pripraviť reakciou predkladaných zlúčenín s karboxylovými kyselinami za prítomnosti činidiel, ako je dicyklohexylkarbodiimid (DCC), alebo pôsobením acylačných činidiel, ako sú chloridy kyselín, na tieto zlúčeniny. Ďalšie metódy na prípravu esterov sú uvedené v literatúre, napríklad v J. March, Advanced Organic Chemistry, 4th Edition, John Wiley & Sons, 1992.
Étery sa môžu napríklad pripraviť z mumbaistatínu reakciou s alkylačným činidlom za bázických podmienok. Ďalšie podmienky na prípravu éterov sú uvedené v literatúre, napríklad v J. March, Advanced Organic Chemistry, 4* Edition, John Wiley & Sons, 1992.
Ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty zahŕňajú produkty redukcie alebo oxidácie alebo adičné produkty, ako sú hydráty. Antrachinónová skupina mumbaistatínu sa môže napríklad redukovať redukčným činidlom na hydrochinón. Výsledný produkt je účinným inhibítorom glukózo-6-fosfáttranslokázy a IC50 = ~ 5 nM. Aktivita glukózo-6-fosfáttranslokázy bola preukázaná v niekoľkých biochemických testovacích systémoch pre mumbaistatín. Výťažok mumbaistatínu z fíltrátu kultúry Streptomycs litmocidínu je však extrémne nízky, čo brzdí ďalší rozvoj tejto zlúčeniny. Navyše až doteraz nebolo možné upresniť štruktúrny vzorec mumbaistatínu kvôli početným faktorom vrátane nemožnosti kryštalizácie a nestálosti v roztoku.
Objavil sa však spôsob, ktorý umožňuje izoláciu mumbaistatínu z extraktu v pomerne vysokom výťažku. Predkladaný spôsob preto poskytuje spôsob izolácie mumbaistatínu, ktorý zahŕňa extrakciu fíltrátu kultúry obsahujúceho mumbaistatín s použitím chromatografie na ionexoch pri pH 5 až 8, výhodne 6 alebo 7. Napriek tomu, že použitie chromatografie na ionexoch je vo všeobecnosti opísané v PCT/EP99/04127, je zrejmé, že použitie chromatografie na ionexoch s cieľom zvýšenia výťažku nebolo doteraz známe. To je vidieť z príkladu uvedenej patentovej prihlášky PCT/EP99/04127, kde ionomeniče nie sú použité na izoláciu mumbaistatínu a kde sa zo 730 litrov filtrátu získa len 70 mg čistého mumbaistatínu. Spôsob podľa predkladaného vynálezu umožňuje izoláciu a získanie väčšieho množstva mumbaistatínu a mumbaistaínu príbuzných zlúčenín s použitím ionomeničového procesu, ktorým sa dosiahne výťažok aspoň 50 %, obvykle viac než 70 %. Mumbaistatín získaný spôsobom podľa predkladaného vynálezu má vylepšený IC50 = ~ 5 nM v porovnaní s mumbaistatínom získaným podľa PCT/EP99/04127.
Pri spôsobe izolácie mumbaistatínu podľa predkladaného vynálezu sa môžu použiť rôzne ionomeniče. Príkladom sú QAE-, DEAE- a THAE- meniče aniónov. Výhodne sú na zvolenej matrici nesené substituované alebo nesubstituované aminoskupiny. Výhodnejšie je použitie DEAE- meničov aniónov ako DEAE ®Sepharose Fast Flow alebo ®Fractogel EMD DEAE. Meniče aniónov sa používajú známym spôsobom. V pufŕovanom systéme sa môže použiť obsah organického rozpúšťadla 5 až 85 %. Je však výhodné použitie vysokého obsahu organického rozpúšťadla v pufrovanom systéme, výhodné je preto použiť obsah 10 až 40 % organického rozpúšťadla vo vodnom roztoku pufra. Príkladom vhodných organických rozpúšťadiel sú organické rozpúšťadlá miešateľné s vodou, ako sú nižšie alkoholy, acetón, acetonitril, glykol, dioxán, dimetylsulfoxid, formamid a podobne. Výhodné rozpúšťadlá sú metanol, etanol, izopropanol a acetón.
Opísaným spôsobom sa získava mumbaistatín s čistotou vyššou než 99 % a dá sa získať väčšie množstvo zlúčeniny s výťažkom vyšším ako 70 %. Výsledný vo väčšom množstve získaný mumbaistatín sa môže čistiť jednoduchým spôsobom, napríklad chromatografiou na molekulových sitách alebo s reverznou fázou.
Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu inhibujú potkaniu pečeňovú mikrozomálnu glukózo-6-fosfáttranslokázu. Tieto zlúčeniny sú preto použiteľné ako farmaceutický aktívne substancie najmä pri liečbe cukrovky a všeobecne pri liečbe alebo profylaxii ochorení spôsobených alebo spojených so zvýšenou aktivitou glukózo-6-fosfáttranslokázy, alebo ochorení, pri ktorých je účelné znížiť aktivitu glukózo-6-fosfáttranslokázy. Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty sa môžu podať zvieratám, výhodne cicavcom a najmä ľuďom, ako samostatné liečivá, ako vzájomné zmesi alebo vo forme farmaceutických kompozícií, ktoré sa dajú podávať enterálne alebo parenterálne.
Predkladaný vynález sa preto týka aromatických diketoderivátov a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov na použitie ako liečivá a použitie derivátov a ich farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a ďalších zrejmých chemických ekvivalentov na výrobu liekov znižujúcich aktivitu glukózo-6-fosfáttranslokázy, najmä na výrobu liekov na liečbu cukrovky. Predkladaný vynález sa ďalej vzťahuje na farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú účinné množstvo týchto derivátov a/alebo jednej alebo viacerých farmaceutický prijateľných solí, esterov, éterov a/alebo ich zrejmých chemických ekvivalentov spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.
Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu podávať orálne, intramuskuláme, intravenózne alebo inými spôsobmi.
Farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú predkladané zlúčeniny alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo ich zrejmé chemické ekvivalenty samostatné alebo v kombináciách sa môžu pripraviť podľa štandardných postupov zmiešaním zlúčeniny alebo zlúčenín s jednou alebo viacerými farmaceutický prijateľnými prísadami a/alebo pomocnými látkami, ako sú napríklad plnivá, emulgátory, lubrikanty, maskovacie vône, farbivá alebo pufrovacie látky, a premenou zmesi na vhodnú liekovú formu, ako sú napríklad tablety, poťahované tablety, kapsuly alebo suspenzie, alebo roztoky vhodné na enterálne alebo parenterálne podanie.
Príklady pomocných látok a/alebo prísad, ktoré sa môžu spomenúť, sú škrob, tragant, laktóza, mastenec, agar-agar, polyglykoly, etanol a voda. Na parenterálne podanie sú vhodné a výhodné suspenzie alebo roztoky vo vode. Je tiež možné podať aktívnu substanciu samotnú bez spojiva alebo riedidla vo vhodnej forme, napríklad v kapsuliach. Farmaceutické kompozície, ktoré obsahujú zrejmé chemické ekvivalenty, môžu obsahovať ďalšie farmaceutický aktívne zložky.
Je obvyklé, že galenické prípravky, spôsob ich podania a rozsahy dávkovania vhodné v danom prípade závisia od liečeného druhu a stavu vlastnej kondície alebo ochorenia, a môžu sa optimalizovať všeobecne známymi metódami. V priemere sa denná dávka zlúčeniny podľa vynálezu podávaná pacientovi s hmotnosťou 75 kg pohybuje medzi najmenej 0,001 mg a najviac 100 mg, výhodne najviac 10,0 mg.
Okrem použitia ako farmaceutický aktívnej substancie a ako intermediátov pri príprave derivátov sa môžu predkladané zlúčeniny a ich soli a zrejmé chemické ekvivalenty použiť ako pomocné činidlá na diagnostické účely, napríklad pri in vitro diagnózach, a na výskumné účely v biochemickom výskume, v ktorom je požadovaná inhibícia glukózo-6-fosfáttranslokázy.
Nasledujúce príklady bližšie ilustrujú predkladaný vynález, ale nijako neobmedzujú rozsah jeho uskutočnenia.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Skratky: MeOH - metanol, DMSO - dimetylsulfoxid, TFA - trifluóroctová kyselina
Príklad 1
Udržovanie kultúry Streptomyces litmocidini, DMS 11641
Kultúra DMS 11641 sa udržuje v nasledujúcom médiu | |
Sladový extrakt | 10,0 g |
Kvasnicový extrakt | 4,0 g |
Glukóza | 4,0 g |
Agarový prášok | 13,0 g |
Demineralizovaná voda | 1,0 litra |
PH | 7,0 |
Po úplnom rozpustení uvedených prísad zahrievaním sa roztok rozdelí do skúmaviek a sterilizuje pri 121 °C počas 20 minút. Skúmavky sa potom ochladia a nechajú stuhnúť vo zvažujúcej sa polohe. Na šikmý agar sa potom nanesie v pásikoch drôtenou slučkou kultúra Streptomyces litmocidini, DSM 11641, a inkubuje sa pri 28 °C (±1 °C) až kým sa nespozoruje dobrý rast. Dobre narastené kultúry sa uložia do chladničky pri 8 °C.
Príklad 2
Fermentácia kultúry Streptomyces litmocidini, DSM 11641 vo fermentoroch
Časť 1.: Príprava inokulačnej kultúry v trepačkách
Zloženie inokulačného média | |
Glukóza | 15,0 g |
Sójová múčka | 15,0 g |
Kukuričný výluh | 5,0 g |
NaCl | 5,0 g |
CaCO3 | 2,0 g |
Demineralizovaná voda | 1,0 g |
PH | 7,0 |
Opísané inokulačné médium sa rozdelí po 160 ml množstvách do 11 Erlenmeyerových baniek a vloží sa na 20 minút do autoklávu pri 121 °C. Banky sa potom ochladia na teplotu miestnosti a každá banka sa inokuluje jednou plnou slučkou už spomenutej dobre narastenej kultúry v príklade 1 a trepe na rotačnej trepačke 72 hodín pri 240 ot./min. pri 27 °C (±1 °C) za vzniku inokulačnej kultúry.
Zloženie produkčného média | |
Glukóza | 20,0 g |
Sójová múčka | 10,0 g |
CaCO3 | 0,2 g |
Chlorid kobaltu | 0,001 g |
Demineralizovaná voda | 1,0 litra |
PH | 7,0 |
Časť 2: Príprava inokulačnej kultúry vo fermentoroch litrov už opísaného inokulačného média sa sterilizuje in situ 45 minút pri 121 °C a inokuluje 4,5 litrami už opísanej inokulačnej kultúry.
Fermentácia prebieha s nasledovnými parametrami | |
Teplota | 27 °C (±0,5 °C) |
Miešanie | 80 ot./min. |
Prevzdušňovanie | 50 1/min. |
Čas zberu | 24 hodín |
Časť 3: Fermentácia vo veľkom meradle
700 litrov už opísaného výrobného média sa sterilizuje in situ 45 minút pri 121 °C v 1000 litrovom Marubishiho fermentore s prídavkom 150 ml ©Desmophenu (polypropylénoxid) ako činidla potláčajúceho penenie, ochladí sa na 27 °C ±1 °C a inokuluje 75 litrami inokulačnej kultúry z časti 2.
Fermentácia prebieha s nasledovnými parametrami | |
Teplota | 27 °C (±0,5 °C) |
Miešanie | 50 ot./min. |
Prevzdušňovanie | 450 1/min. |
Čas zberu | 40 až 44 hodín |
Tvorba zlúčeniny sa monitoruje meraním inhibície glukózo-6-fosfáttranslokázy. Keď sa fermentácia preruší, pH zákvasu je 6,0 až 7,0. Zákvas sa po zbere centrifuguje a mumbaistatín, inhibítor glukózo-6-fosfáttranslokázy, sa izoluje z filtrátu kultúry postupom opísaným ďalej v príklade 3.
Príklad 3
Izolácia mumbaistatínu pomocou aniónovej výmeny
Vezme sa približne 200 litrov zákvasu a oddelí sa od mycélia (12 kg) odstredením. Požadovaná zlúčenina mumbaistatín sa primáme nachádza vo filtráte kultúry. Filtrát kultúry (180 litrov so 120 mg mumbaistatínu) prechádza stĺpcom naplneným adsorpčnou živicou ®MCI GEL CHP20P (20 cm priemer x 45 cm výška, obsah 14 litrov). Stĺpec sa eluuje gradientovým spôsobom od 120 litrov 0,1 % fosfátového pufra, pH 6,3, do 120 litrov 45 % roztoku izopropanolu vo vode. Najväčšie množstvo mumbaistatínu (102 mg v 12-tich litroch) sa nachádza vo frakcii neobsahujúcej soľ, ktorá sa eluovala krokom gradientu od 25 do 28 % izopropanolu vo vode. Výsledný aktívny eluát prechádza cez 3 litrový stĺpec naplnený DEAE-®Sepharose Fast Flow, ktorý sa ekvilibroval na pH 7,0 fosfátovým pufrom. Mumbaistatín sa eluoval gradientovým spôsobom s 20 % izopropanolom v 0,1 % pufri obsahujúcom fosforečnan sodný, pH 7,0 ako A-pufrom a 20 % izopropanolom v 0,1 % fosfátovom pufri a 0,25 % roztoku NaCL ako B-pufrom. Pri prietoku 50 ml/min. sa odoberie 100 frakcií. Frakcie 72 až 74 obsahujú 81 mg vysoko obohateného mumbaistatínu a frakcia 75 ďalších 18 mg, ktoré sú menej čisté. Frakcie sa spájajú a vákuovo zahusťujú. Látka sa ďalej čistí prechádzaním cez stĺpec naplnený ®Nucleosil 100-10 C]8AB(2,1 cm x 25 cm) a eluovaný pri pH 6,3 s použitím krokového gradientu 5 až 35 % acetonitrilu v 0,05 % tlmivom roztoku octanu amónneho. Sublimačné sušenie čistých frakcií poskytuje celkom 86 mg (73+13 mg) čistého mumbaistatínu vo forme amónnej soli.
Sodná soľ mumbaistatínu sa pripraví rozpustením 40 mg amónnej soli v 10 ml vody (pH 6,4) a zvýšením vodivosti roztoku chloridom sodným na 12 mS/cm2. Výsledný vodný roztok prechádza stĺpcom ®MCI GEL CHP20P (1 cm široký x 9 cm vysoký). Elúcia prebieha gradientovo v systéme voda/40 % acetonitril s gradientom vody, prietok eluentu je 5 ml za minútu a objem frakcií je 10 ml. Vo frakciách 16 až 19 sa nachádza sodná soľ a vyčistený roztok má pH 8,5. Po sublimačnom sušení sa získa 32 mg sodnej soli mumbaistatínu s čistotou 99 % (merané HPLC).
UV maxima, roztok v metanole:
219 nm, e =33 000,
257 nm, e = 19 500, 285 nm, e = 19 500, 414 nm, e = 5 100.
Inhibícia glukózo-6-fosfáttranslokázy z mikrozómov potkaních pečení vykazuje IC505 nm. Inhibícia mik rozomálnej glukózo-6-fosfatázy v 10 μΜ roztoku: aktivita nebola preukázateľná.
Príklad 4
Produkty metylácie mumbaistatínu mg mumbaistatínu získaného podľa príkladu 3 sa rozpustí v 50 ml vody, ochladí na 0 °C a pH sa upraví na 2,8 studenou kyselinou trifluóroctovou (TFA). Hneď potom výsledná zmes prechádza stĺpcom (1 cm x 8 cm) naplneným 5,2 ml ®MCI GEL, CHP20P (75 až 150 μm) s použitím gradientu 0,01 %TFA do 30 % acetonitrilu v 0,01 %TFA ako eluentu. Prietok je 2,5 ml/min. Eluáty sa ochladia a frakcie obsahujúce mumbaistatín sa priamo zmrazia na -40 °C a lyofylizujú.
Produkt vysušený sublimáciou (15 mg) sa rozpustí v metanole a metyluje diazometánom. Po vákuovom zahustení sa reakčná zmes, obsahujúca viac než desať rôznych produktov metylácie, delí na stĺpci ®LiChrosorb RP18, lOu, veľkosť 1 cm šírka x 25 cm výška. Ako eluent sa používa acetonitril vo vode, 5 až 55 %. Frakcie sa spoja, ochladia a udržujú v chlade až do následného spracovania. Frakcie sa vákuovo zahustia. Frakcia 19 obsahuje monometyléter dimetylester mumbaistatínu vzorca (XVIIIA), ktorý má molekulovú hmotnosť 590. Charakteristické NMR dáta sú uvedené pred týmto v tabuľke 3. Inhibícia glukózo-6-fosfáttranslokázy 3μΜ roztokom: 42 %.
Zlúčenina vzorca (XIXB) sa získa z frakcie 34 po vákuovom zahustení za chladu. Údaje o rôntgenovej štruktúre sú uvedené skôr, v tabuľke 1. Existujú diastereoizoméry S,R,R a S,S,S tu už uvedené. Inhibícia glukózo-6-fosfáttranslokázy: IC50 > 100 μΜ.
Frakcia 26 obsahovala zlúčeninu, ktorou bol po uskladnení tetrametylderivát mumbaistatínu zodpovedajúci vzorcu (XIXC). Zodpovedajúce ’H a 13C NMR dáta sú v uvedenej tabuľke 2.
Príklad 5
Mumbaistatínhemiketálamid (vzorec (XXIIIa)) ml koncentrovaného roztoku amoniaku sa po kvapkách v argónovej atmosfére pridá pri 0 °C za miešania k roztoku 10 mg mumbaistatínu v 1 ml metanolu. Zmes sa mieša pri tejto teplote 2 hodiny a roztok sa potom vákuovo odparí. Získa sa 10 mg mumbaistatínamidu vo forme béžového prášku. Molekulová hmotnosť (548, M+H+) určená electron spray hmotnostnou spektrometriou zodpovedá chemickému vzorcu C29H23NO,, lH NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 7,8 (d, 1 H), 7,75 (t, 1 H), 7,35 (m, 1 H), 7,25 (s, 1 H), 6,85 (t, 1 H), 6,55 (d, 1 H), 3,85 (m, 1 H), 2,2 až 2,35 (m), 2,05 (m, 1 H), 1,8 (m, 1 H), 1,2 až 1,4 (m) ppm.
Mumbaistatínamid vzorca (XXIIIa) inhibuje glukózo-6-fosfáttranslokázu s IC50 = ~ ΙμΜ.
Príklad 6
Výroba mumbaistatínlaktodiketálmonometylesterov mg mumbaistatínu získaného v príklade 3 sa rozpustí v 1 ml absolútneho metanolu, reaguje s 0,1 % vodnou TFA a ponechá sa stáť pri teplote miestnosti 5 hodín. Produkt reakcie sa čistí preparatívnou chromatografiou podľa opisu v príklade 3 a po sublimačnom sušení aktívne frakcie obsahujú 7 mg mumbaistatínlaktónmonometylesteru (vzorec (XIXA)). Molekulová hmotnosť zlúčeniny bola 544 Da (ESI-MS).
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (16)
1. Zlúčenina všeobecného vzorca (I)
R6
R5 (i), kde R4, R5, R6 a R7 sú nezávisle od seba atóm vodíka, hydroxylová skupina, atóm halogénu, prípadne substituovaná alkylová, arylová alebo acylová skupina, X-alkylová alebo X-arylová skupina, kde X je atóm kyslíka, NH skupina, N-alkylová skupina alebo atóm síry,
K je skupina všeobecného vzorca (II)
II t 11 II , , c-f c H^- C — CHj-C X1 R1
L je skupina všeobecného vzorca (IV) (iv), alebo
X5
X6 11 3 3 c—x3r3 cyklus kde
R1 a R3 sú nezávisle od seba katión, atóm vodíka, alkylová alebo arylová skupina,
R2 je atóm vodíka, alkylová, arylová alebo acylová skupina,
X1, X2, X3, X4, X5, X6 a X7 sú nezávisle od seba atóm kyslíka, NH skupina, N-alkylová skupina alebo atóm síry a cyklus je spolu s atómami uhlíka označenými „c” a „d”, prípadne substituovaný aromatický, karbocyklický alebo heterocyklický, jednoduchý alebo kondenzovaný kruhový systém, s výnimkou zlúčeniny, kde X1, X2, X3, X4, X5, X6 a X7 sú atóm kyslíka, R1, R2 a R3 sú atóm vodíka, R4 je hydroxylová skupina, R5, R6 a R7 sú atómy vodíka, a cyklus je 3,8-dihydroxyantrachinón, a jej farmaceutický prijateľné soli, estery, étery a ďalšie zrejmé chemické ekvivalenty vo všetkých stereoizomémych a tautomémych formách;
pričom prípadne substituovaný znamená, že daná skupina je prípadne substituovaná 1, 2, 3 alebo 4 zhodnými alebo rozdielnymi substituentmi vybranými z hydroxylovej skupiny, alkylovej skupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka, alkenylovej skupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxyskupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka, alkyltioskupiny obsahujúcej 1 až 4 atómy uhlíka, alkoxykarbonylovej skupiny obsahujúcej v alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka, karbamoylovej skupiny, karboxylovej skupiny, trifluórmetylovej skupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny, aminoskupiny, alkylamino skupiny obsahujúcej v alkylovej časti 1 až 4 atómy uhlíka, dialkylamino skupiny obsahujúcej v každej z alkylových častí 1 až 4 atómy uhlíka, aryloxyskupiny, arylaminoskupiny a halogénu.
2. Zlúčenina, ako je definovaná v nároku 1 všeobecného vzorca (XVIII) kde R1 až R7, X1 až X7, cyklus, c a d majú význam uvedený v nároku 1 a uplatňuje sa výnimka z nároku 1.
3. Zlúčenina všeobecného vzorca (I), ako je definovaná v nároku 1 alebo zlúčenina všeobecného vzorca (XVIII), ako je definovaná v nároku 2, kde R1 ,R2 a R3 sú alkylové skupiny.
4. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (XVIII), ako je definovaná v nároku 3, vyznačujúci sa tým, že reaguje zlúčenina vzorca (XVIII), kde R1 ,R2 a/alebo R3 sú atómy vodíka, s alkylačným činidlom a izoluje sa reakčný produkt.
5. Spôsob prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (XVIII) ako je definovaná v nárokoch 2 alebo 3, kde -X3R3 je skupina -NH2, vyznačujúci sa tým, že reaguje zlúčenina vzorca (XVIII), kde X3R3 je hydroxylová skupina, so zdrojom amidu.
6. Spôsob podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že zlúčeninou vzorca (XVIII) je mumbaistatín.
7. Zlúčenina vzorca (I) alebo (XVIII), ako je definovaná v nárokoch 1, 2 alebo 3, kde X1 až X7 sú atómy kyslíka.
8. Zlúčenina podľa nároku (XVIII), ako je definovaná v nárokoch 1, 2, 3 alebo 7, kde atóm uhlíka označený hviezdičkou má konfiguráciu S a neuplatňuje sa výnimka uvedená v nároku 1.
9. Zlúčenina definovaná v nárokoch 1, 2, 3, 7 alebo 8, kde cyklus je skupina vybraná z prípadne substituovaného fenylu, benzylu, naftylu, fenantrénu alebo antrachinónu.
10. Zlúčenina definovaná v nároku 9, v ktorej cyklus je prípadne substituovaný jednou alebo viacerými hydroxylovými skupinami, alkylovými skupinami obsahujúcimi 1 až 4 atómy uhlíka, -O-alkylovými skupinami obsahujúcimi 1 až 3 atómy uhlíka, aminoskupinami, nitroskupinami, atómami halogénov, -NH-alkylovými skupinami obsahujúcimi 1 až 4 atómy uhlíka, karboxyskupinami alebo kyanoskupinami.
11. Zlúčenina definovaná v nároku 9 alebo 10, kde cyklus je skupina vzorca (XVI) (xvi), kde
R8 je atóm vodíka, alkylová, arylová alebo acylová skupina,
R9 je katión, atóm vodíka, alkylová alebo acylová skupina,
R10, R11, R12 a R13 sú nezávisle od seba atómy vodíka, alkylová skupina, -XIOH alebo X10R skupina, alebo sú R10 a R11 a/alebo R12 a R13 spoločne =X10 skupina,
X8, X9 a X10 sú nezávisle od seba atóm kyslíka, NH skupina, N-alkylová skupina alebo atóm síry,
R je alkylová, arylová alebo acylová skupina, „-.......„ označuje prípadnú väzbu, a c a d sú C-atómy spoločné s hlavnou štruktúrou, na ktoré je pripojený cyklus.
12. Zlúčenina, ako je definovaná v nároku 11, kde cyklus je skupina vzorca (XVIA) uvedeného ďalej kde
X8 a X9 sú nezávisle od seba atóm vodíka alebo atóm kyslíka,
R8 a R9 sú nezávisle od seba atóm vodíka alebo alkylová skupina,
R10 až R13 sú atómy vodíka, alebo R10 a R13 spoločne a/alebo R12 a R13 spoločne sú skupina =O, a c a d sú C-atómy spoločné s hlavnou štruktúrou, na ktoré je pripojený cyklus.
13. Zlúčenina definovaná v ktoromkoľvek z predchádzajúcich nárokov alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie ako liečivo.
14. Farmaceutická kompozícia obsahujúca účinné množstvo zlúčeniny definovanej v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 13 alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ a farmaceutický prijateľný nosič.
15. Zlúčenina definovaná v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 13 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie ako inhibítor glukózo-6-fosfát translokázy.
16. Zlúčenina definovaná v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 13 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie na liečenie diabetes mellitus.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP99121241 | 1999-10-25 | ||
PCT/EP2000/008103 WO2001030736A2 (en) | 1999-10-25 | 2000-08-19 | Aromatic di-keto derivatives as glucose-6-phosphate translocase inhibitors |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK5442002A3 SK5442002A3 (en) | 2002-12-03 |
SK287428B6 true SK287428B6 (sk) | 2010-09-07 |
Family
ID=8239274
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK544-2002A SK287428B6 (sk) | 1999-10-25 | 2000-08-19 | Aromatické diketoderiváty, spôsob ich prípravy a farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6380257B1 (sk) |
EP (1) | EP1248763B1 (sk) |
JP (1) | JP2003512448A (sk) |
KR (1) | KR100755730B1 (sk) |
CN (1) | CN1192999C (sk) |
AR (1) | AR034095A1 (sk) |
AU (1) | AU779352B2 (sk) |
BR (1) | BR0015023A (sk) |
CA (1) | CA2388957C (sk) |
CZ (1) | CZ20021404A3 (sk) |
EE (1) | EE200200216A (sk) |
HK (1) | HK1049827B (sk) |
HR (1) | HRP20020352A2 (sk) |
HU (1) | HUP0203129A3 (sk) |
IL (1) | IL149156A0 (sk) |
NO (1) | NO20021812L (sk) |
NZ (1) | NZ518545A (sk) |
PL (1) | PL205217B1 (sk) |
RS (1) | RS50431B (sk) |
RU (1) | RU2252211C2 (sk) |
SK (1) | SK287428B6 (sk) |
TR (1) | TR200201124T2 (sk) |
WO (1) | WO2001030736A2 (sk) |
ZA (1) | ZA200203034B (sk) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE10208828A1 (de) * | 2002-03-01 | 2003-09-11 | Bayer Ag | Verfahren zur Reduktion von 3-Heteroaryl-3-oxopropionsäurederivaten |
KR101106152B1 (ko) * | 2010-05-14 | 2012-01-20 | (주)한국킹유전자 | 주야 변환형 사인보드 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW399041B (en) | 1992-09-09 | 2000-07-21 | Hoechst Ag | Substituted cyclohexane derivatives, the preparation and the use for treating diseases |
TW255880B (sk) * | 1992-09-09 | 1995-09-01 | Hoechst Ag | |
EP0912244A4 (en) | 1996-07-15 | 2001-09-12 | Mobil Oil Corp | BIMETALLIC CATALYST PRE-PROCESSED BY COMONOMER FOR BLOW MOLDING AND FOR FILM APPLICATIONS |
AR012449A1 (es) * | 1997-04-18 | 2000-10-18 | Hoechst Marion Roussell Deutschland Gmbh | Kodaistatinas a, b, c y d, proceso para su produccion, y su uso. |
DE19740080A1 (de) * | 1997-09-12 | 1999-03-18 | Hoechst Marion Roussel De Gmbh | Neue Phthalaldehyd-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
PL345192A1 (en) * | 1998-06-24 | 2001-12-03 | Aventis Pharma Gmbh | Mumbaistatin, a process for its production and its use as a pharmaceutical |
-
2000
- 2000-08-19 WO PCT/EP2000/008103 patent/WO2001030736A2/en active IP Right Grant
- 2000-08-19 IL IL14915600A patent/IL149156A0/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 SK SK544-2002A patent/SK287428B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 CZ CZ20021404A patent/CZ20021404A3/cs unknown
- 2000-08-19 TR TR2002/01124T patent/TR200201124T2/xx unknown
- 2000-08-19 EE EEP200200216A patent/EE200200216A/xx unknown
- 2000-08-19 KR KR1020027005212A patent/KR100755730B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 CA CA002388957A patent/CA2388957C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-19 EP EP00960495.0A patent/EP1248763B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-08-19 JP JP2001533093A patent/JP2003512448A/ja not_active Abandoned
- 2000-08-19 AU AU72782/00A patent/AU779352B2/en not_active Ceased
- 2000-08-19 PL PL354452A patent/PL205217B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 NZ NZ518545A patent/NZ518545A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 RS YUP-270/02A patent/RS50431B/sr unknown
- 2000-08-19 CN CNB00814463XA patent/CN1192999C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-08-19 BR BR0015023-1A patent/BR0015023A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-08-19 RU RU2002113655/04A patent/RU2252211C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-08-19 HU HU0203129A patent/HUP0203129A3/hu unknown
- 2000-08-29 AR ARP000104495A patent/AR034095A1/es unknown
- 2000-10-24 US US09/694,790 patent/US6380257B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-04-17 NO NO20021812A patent/NO20021812L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-04-17 ZA ZA200203034A patent/ZA200203034B/en unknown
- 2002-04-23 HR HR20020352A patent/HRP20020352A2/hr not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-03-14 HK HK03101870.0A patent/HK1049827B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4264620A (en) | Antihypertensive 5-substituted 2-pyrrolidinecarboxylic acids | |
EP0304493A1 (en) | Hydroxystyrene derivatives | |
KR20020063173A (ko) | 포스포디에스테라아제 ⅶ 저해제로서의 피롤 유도체 | |
KR20180011779A (ko) | 디아릴메탄 구조를 함유하는 카르복실산 urat1 억제제, 그 제조 방법 및 용도 | |
US7378530B2 (en) | Anti-cancer and anti-microbial 5-membered heterocyclic compounds | |
GB2158440A (en) | 4,5,6,7-Tetrahydroimidazo[4,5-c]pyridine derivatives | |
US5272151A (en) | Aminoacyl and oligopeptidyl derivatives of allopurinol exhibiting immunostimulatory activity, and pharmaceutical formulations containing these substances | |
US20060004079A1 (en) | Anti-bacterial and anti-cancer spiro beta-lactone/gamma-lactams | |
HU182531B (en) | Process for producing z-2-bracket-acyl-amino-bracket closed-3-bracket-monosubstituted-bracket closed-propenoates | |
US4831053A (en) | Composition for prophylaxis and therapy of hepatitis | |
SK287428B6 (sk) | Aromatické diketoderiváty, spôsob ich prípravy a farmaceutická kompozícia, ktorá ich obsahuje | |
US6596694B2 (en) | Caloporoside derivatives, methods of their preparation and use | |
IE44863B1 (en) | 2-(amino or acylamino)-1-sulphonyl-benzimidazole derivatives | |
KR960008242B1 (ko) | 벤조옥사디논유도체 | |
US5202342A (en) | N-alkyl thiazolidine derivatives | |
US5183816A (en) | Bicyclic sulfur-containing compounds | |
US6727232B2 (en) | Nucleoside peptide antibiotics of AA-896 | |
US6930130B2 (en) | Citrullimycines, a process for their production and their use as pharmaceuticals | |
US5256655A (en) | Bicyclic sulfur-containing compounds | |
US3928593A (en) | Antiviral compositions containing piperazine derivatives and method of use | |
SK286691B6 (sk) | Pluraflavíny a ich deriváty, spôsob ich prípravy a ich použitie |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20110819 |