SE504582C2 - Cyklosporinkomposition baserad på en L2-fas - Google Patents

Description

504 582 2 lO 15 20 25 30 35 suppressiv effekt. Det cyklosporin som ojämförligt har kommit att få störst betydelse är cyklosporin A, vilket ofta också är den förening man avser då man talar om enbart cyklosporin.

Cyklosporin A har kraftig immunsuppressiv verkan, vilken i sig finns beskriven i litteraturen, och är en cyklisk peptid bestående av ll aminosyror med en molekyl- vikt av ca 1,2 kDa. Många av de ingående aminosyrorna har ovanlig struktur och är starkt hydrofoba. Hydrofobici- teten hos cyklosporin A förstärks ytterligare av att sju av aminosyrorna är N-metylerade.

Enligt föreliggande uppfinning har det emellertid oväntat visat sig att L2-fasen ger avsevärt bättre upptag genom tarmväggen av cyklosporiner, och detta på ett mycket reproducerbart sätt, i förhållande till närbe- släktade föreningar, såsom andra peptider.

Det finns sålunda inga data i litteraturen, såvitt vi känner till, vilka tyder på att peptiders upptagning i mag/tarmkanalen skulle kunna ökas genom införlivande i en L2-fas av angivet slag. Enligt uppfinningen har det dock visat sig, att cyklosporin A solubiliserat i L2-fasen mycket effektivt tas upp i tunntarmen, enligt de försök på råtta som redovisas nedan. Peptider får ”normalt” inte tas upp i mag/tarmkanalen, eftersom det skulle leda till immunologiska reaktioner. Vi har även jämfört andra pep- tider, t.ex. DDAVP, och där inte kunnat påvisa det kraf- tiga upptag som observerats för cyklosporin A.

Föreliggande uppfinning avser närmare bestämt en biologiskt aktiv komposition baserad pà A) en L2-fas innefattande (a) minst en monoglycerid av en omättad fettsyra med 16-22 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja omvandlad till en sådan monoglycerid, (b) minst en triglycerid av en omättad fettsyra med 16-22 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja innehållande en sådan triglycerid och (c) minst en polär vätska vald ur gruppen bestående av vatten, glycerol, etylenglykol och propylenglykol, varvid viktförhållandet 10 15 20 25 30 35 3 504 582 monoglycerid till triglycerid ligger inom området från 1:1 till 3:1, och (B) pergerad biologiskt aktiv substans, där det känneteck- en i nämnda L2-fas löst eller dis- nande för kompositionen är att nämnda biologiskt aktiva substans är ett cyklosporin.

Kompositionen enligt uppfinningen kan innefatta vilket som helst cyklosporin, men det föredragna cyklo- sporinet enligt föreliggande uppfinning är cyklosporin A.

Ett annat intressant cyklosporin för användning enligt uppfinningen är cyklosporin G. Ytterligare exempel på cyklosporiner enligt uppfinningen är cyklosporin C, di- hydrocyklosporin C, cyklosporin D, dihydrocyklosporin D och isocyklosporin D.

En annan föredragen utföringsform av kompositionen enligt uppfinningen representeras av det fall där denna utformas som farmaceutisk komposition och speciellt för oral administration, då denna administrationsväg har visat sig ge oväntat högt upptag, vilket ej kunde förut- ses teoretiskt.

En annan intressant iakttagelse i samband med upp- finningen är vidare att en variation av koncentrationen av cyklosporinet i L2-fasen ger ett upptag som ej är proportionellt mot koncentrationen. Med andra ord uppnås speciellt fördelaktiga resultat vid ökande eller högre koncentrationer.

Generellt kan cyklosporinet användas i så låg kon- centration som från 0,1 viktprocent upp till mättnads- koncentrationen, räknat pà vikten av den totala komposi- tionen, men i praktiken kan det vara fråga om åtminstone 1 viktprocent eller åtminstone 2 viktprocent som undre gräns, varvid ett föredraget intervall representeras av 2-20 viktprocent, ännu hellre 5-20 viktprocent och allra helst 8-15 viktprocent.

Uttryckt på annat sätt skulle en speciellt föredra- gen utföringsform av uppfinningen kunna sägas represen- teras av minst 8 viktprocent och upp till mättnadskoncen- trationen, detta med tanke på upptäckten att upptaget är 504 582 l0 15 20 25 30 35 “kända tekniken, större vid högre koncentrationer, dvs ökar snabbare än proportionellt mot koncentrationen.

L2-fasen i övrigt finns, såsom har omtalats ovan, i och för sig noggrant beskriven i SE 8602931-l, varför in- formation i detta avseende kan hämtas från sagda skrift.

Dock kan vissa fördelar för L2-fasen samt föredragna ut- föringsformer av uppfinningen sammanfattas enligt följan- de.

L2-fasen är fördelaktig bl.a. därigenom att den är termodynamiskt stabil och därmed inte uppvisar någon ten- dens till fasseparation med tiden samt att den har dis- tinkta hydrofila och hydrofoba områden, vilket gör att den kan lösa (solubilisera) eller dispergera såväl vat- tenlösliga som vattenolösliga substanser.

De distinkta hydrofila och hydrofoba områdena repre- senterar en organiserad struktur, som innebär begräns- ningar för diffusionen av den tillsatta föreningen, vil- ket faktum med fördel kan användas för reglerad frisätt- ning av densamma. Sålunda bestäms frisättningshastigheten för en bioaktiv substans av den yttre ytan av fasen vänd mot det omgivande mediet samt av proportionerna mellan hydrofila och hydrofoba områden inom fasen. Såsom omta- lades ovan innefattar eller består L2-fasen använd enligt föreliggande uppfinning av minst en speciell flytande eller vätskeformig monoglycerid, minst en speciell flyt- ande eller vätskeformig triglycerid och minst en polär vätska. Sedan väl dessa tre komponenter i systemet har specificerats i varje enskilt fall, kan den exakta sam- mansättningen för ifrågavarande L2-fas hämtas från den t.ex. ur ett ternärt fasdiagram. Ett exempel på ett sådant fasdiagram, nämligen för systemet solrosoljemonoglycerid/sojabönolja/vatten vid 40°C och 90°C, finns i nämnda svenska patentskrift 8602931-1.

Generellt sett gäller sålunda att monoglyceriden är en monoglycerid av en omättad fettsyra med 16-22 kol- atomer. Ofta är det dock inte nödvändigt eller ens före- draget att använda denna monoglycerid i ren form. I 10 15 20 25 30 35 5 504 582 stället användes den med fördel i form av en naturprodukt i huvudsak omvandlad till en sådan monoglycerid, såsom en vegetabilisk eller animalisk olja i huvudsak omvandlad till den önskade monoglyceriden. Att omvandla en olja av ifrågavarande slag så att den i huvudsak enbart inne- håller monoglyceriden är en allmänt känd process och torde inte behöva beskrivas närmare här. Principiellt är det sålunda fråga om en omestring av oljan med ett över- skott av glycerol.

Enligt en föredragen utföringsform av uppfinningen är monoglyceriden en monoglycerid av en omättad fettsyra med 18 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja omvandlad till denna. En speciellt föredragen mono- glycerid ur denna grupp är monoolein eller monolinolein eller motsvarande omvandlade vegetabiliska eller anima- liska olja.

Den använda triglyceriden är en triglycerid av åt- minstone en omättad fettsyra med 16-22 kolatomer, men även i detta fall kan en naturprodukt innehållande denna triglycerid ersätta densamma, såsom en vegetabilisk eller animalisk olja innehållande den önskade triglyceriden.

En föredragen utföringsform av uppfinningen repre- senteras av det fall där triglyceriden är en triglycerid av minst en omättad fettsyra med 18 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja innehållande denna, varvid en speciellt föredragen olja är sojabönolja.

Den polära vätska som användes i kompositionen en- ligt uppfinningen kan vara vilken som helst av de angivna vätskorna och företrädesvis blandningar av dessa, vilket är fördelaktigt för reglering eller justering av det orala upptaget av det biologiskt aktiva materialet från L2-fasen. Med andra ord kan olika polära vätskor eller olika proportioner mellan polära vätskor användas för reglering av det orala upptaget av den aktiva substansen.

En lämplig blandning i detta sammanhang är en blandning av propylenglykol och glycerol. För en sådan reglering av 504 582 6 10 15 20 25 30 35 det orala upptaget kan även vanligt salt, dvs natrium- klorid, Såsom har omtalats ovan tas den exakta sammansätt- användas. ningen för en specifik L2-fas från ett fasdiagram under beaktande av det önskade orala upptaget för den aktiva föreningen, dvs i detta fall ett cyklosporin, vilken hastighet bestäms av en fackman på området med hjälp av enkla djurförsök. Generellt innebär detta att viktför- hållandet monoglycerid till triglycerid ligger inom om- rådet från 1:1 till 3:1, varvid ett föredraget viktför- hàllande är från 2:1 till 2,5:1, allra helst ca 7:3.

Innehållet av polär vätska bestäms generellt av den maximala vätskehalten för L2-fasområdet, vilken ofta inte (vikt/vikt). företrädesvis ca 5-10 överstiger 12-14% En lämplig vätskehalt är därför inom området ca 4-12, viktprocent.

Såsom antyddes ovan är kompostionen enligt uppfin- ningen speciellt intressant som farmaceutisk komposition och då i synnerhet för oral administration. En speciellt föredragen utföringsform av uppfinningen innebär därför att kompositionen innehåller en farmaceutiskt acceptabel bärare avsedd för oral administration.

Enligt en annan aspekt av uppfinningen tillhanda- hålles ett förfarande för framställning av ovannämnda komposition. Detta förfarande utmärkes av att man bildar en blandning av nämnda monoglycerid och triglycerid i sådana mängder därav, att en L2-fas bildas när bland- ningen bringas i kontakt med den polära vätskan, och tillsätter cyklosporinet för upplösning eller disperge- ring av detsamma i L2-fasen, varvid tillsatsen utföres före, under eller efter bildningen av L2-fasen.

Vanligtvis innebär detta att cyklosporinet sättes till L2-fasen när denna är bildad, men det kan också sättas t.ex. till den polära vätskan innan L2-fasen bildas.

Innan vissa utföringsformer av förfarandet enligt uppfinningen kommer att beskrivas, bör följande noteras. 10 15 20 25 30 35 7 504 582 Vätskeaggregaten i L2-fasen eller gränsskiktzonen mellan de hydrofila och hydrofoba områdena av fasen utgör säten eller ställen för oralt upptag av den aktiva substansen upplöst i ifrågavarande fas. Om den aktiva substansen uppvisar mycket låg löslighet i fasen, kan den dispergeras i densamma. L2-fasen har mycket låg gräns- ytspänning mot en utvändig polär vätskefas och är därför lätt emulgerbar i polär vätska.

I och med att cyklosporiner är en tämligen känslig grupp av substanser, innebär en föredragen utföringsform av förfarandet enligt uppfinningen att cyklosporinet först löses i den polära vätskan. Därefer blandas den erhållna lösningen med monoglycerid-triglyceridblandning- en, vilken blandningsoperation företrädesvis utföres genom droppvis tillsats av monoglycerid-triglycerid- vätskan till cyklosporinlösningen.

På detta sätt bevaras den nativa peptidstrukturen bäst. Om dropparna sättes till cyklosporinlösningen med ett intervall på ca 1 sek, kommer den bildade L2-fasen att svälla till gränsen för vattensvällning mellan varje tillsats. Pâ detta sätt kommer cyklosporinet att bibehål- la den vattenmiljö eller -omgivning som erfordras under hela framställningsprocessen.

Beträffande förfarandet enligt uppfinningen kan det dessutom tilläggas att föredragna utföringsformer av detta motsvaras av de föredragna utföringsformer som ovan har redovisats för kompositionen. Ifrågavarande utfö- ringsformer torde därför inte behöva upprepas ännu en gång.

Uppfinningen hänför sig slutligen till användning av ovannämnda L2-fas för inkapsling av ett cyklosporin för framställning av ett preparat med utomordentlig och reglerbar upptagsprofil för den aktiva substansen. Före- trädesvis är det härvid fråga om framställning av ett oralt administrerbart preparat och i synnerhet för an- vändning som immunsuppressivum. 504 582 10 15 20 25 30 EXEMPEL Vissa utföringsformer av uppfinningen kommer nu att beskrivas mera i detalj genom nedanstående icke begräns- ande exempel.

EXEMPEL 1 L2 för hârdgelatinkapslar En L2-fas med 2, 6, verkades genom att cyklosporinet löstes upp i en bland- 10 och 15% cyklosporin A till- ning innehållande glycerylmonooleat 63%, glyceryltrioleat 27%, propylenglykol 7,5% och vatten 2,5%. Denna formule- ring av cyklosporin är en klar lättflytande vätska, som går att fylla på hârdgelatinkapslar utan att kapselns egenskaper ändras efter 10 dagar. Värt att nämna är att om motsvarande L2-fas med enbart vatten som polär vätska fylls på kapslar kommer dessa kapslar att bli klibbiga och deformerade efter 10 dagar.

EXEMPEL 2 L2-interindividuell variation i cyklosporinupptaget hos råttor Den interindividuella variationen i upptaget av cyklosporin från L2-fas som innehåller 2, 6 och 10% från Exempel 1 har efter intragastinal administration till råttor studerats och finns sammanfattat i nedanstående tabell. Redovisad finns variansen på AUC*-värdena från 8 råttor. Tabellen visar att den högsta koncentrationen är bäst, då den har lägst varians. cyklosporinkoncentration % varians 2% 39% 6% 20% 10% 14% * = ”Area under the curve” 10 15 20 25 30 35 9 504 582 EXEMPEL 3 L2-självemulgerande cyklosporinberedning Följande exempel visar att upptaget av cyklosporin från en lipidblandning med L2-struktur är oberoende av tillsats av en emulgerande livsmedelskomponent (kasein).

En L2-blandning av cyklosporin 2%, glycerylmonooleat 62%, glyceryltrioleat 26% och vatten 10% gjordes. Denna använ- des antingen utan vidare behandling eller efter disper- gering i en l,l%-ig kaseinlösning.

Upptaget utav dessa beredningar studerades i råttor efter intragastinal tillförsel och resultaten finns sam- manfattade i bifogad Figur. Kurvan A visar upptaget av cyklosporin efter intragastinal administration av Sandimmunêt Kurvorna B och C visar upptaget av cyklospo- rin efter administration av en L2-blandning och en L2-fas dispergerad i en kaseinlösning.

SandimmunC)är enligt uppgift Ciclosporin i en bärare av etanol, majsolja och non-joniskt ytaktivt ämne.

EXEMPEL 4 L2-cyklosporinberedning som bildas vid kroppstemperatur En L2-fas med cyklosporin 10% gjordes genom att cyklosporinet löstes upp vid något förhöjd temperatur och under omröring i 90% L2-fas. Sammansättningen på L2-fasen var glycerylmonooleat 63%, glyceryltrioleat 27%, propy- lenglykol 7,5% och glycerol 2,5%.

Den homogena beredningen frystes vid -18°C, varvid lipidblandningen kristalliserade. Vid rumstemperatur är blandningen fortfarande till stor del kristallin och flyter ej, men vid 37°C är blandningen en lättflytande L2-fas.

Anm.

Med glycerylmonooleat och glyceryltrioleat avses tekniska kvaliteter. Glycerylmonooleat är framställd ur tallolja med högt innehåll av oljesyra, medan glyceryltrioleat är framställd ur solrosolja.

Claims (16)

504 582 N 10 15 20 25 30 35 PATENTKRAV

1. Biologiskt aktiv komposition baserad på A) en L2- fas innefattande (a) minst en monoglycerid av en omättad fettsyra med 16-22 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja omvandlad till en sådan monoglycerid, (b) minst en triglycerid av en omättad fettsyra med 16-22 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja innehållande en sådan triglycerid och (c) minst en polär vätska vald ur gruppen bestående av vatten, glycerol, etylenglykol och propylenglykol, varvid viktförhållandet monoglycerid till triglycerid ligger inom området från 1:1 till 3:1, och (B) pergerat biologiskt aktiv substans, kännetecknad av att en i nämnda L2-fas löst eller dis- den biologiskt aktiva substansen är ett cyklosporin.

2. Komposition enligt krav 1, kännetecknad av att cyklosporinet är cyklosporin A.

3. Komposition enligt något av de föregående kraven, kännetecknad av att cyklosporinet är närvarande i en mängd av från 1 viktprocent upp till mättnadskoncentra- tion, räknat på vikten av den biologiskt aktiva komposi- tionen.

4. Komposition enligt krav 3, kännetecknad av att nämnda mängd av cyklosporinet är 2-20 viktprocent, företrädesvis 5-20 viktprocent, och allra helst 8-15 viktprocent.

5. Komposition enligt något av de föregående kraven, känntecknad av att monoglyceriden är en monoglycerid av en omättad fettsyra med 18 kolatomer eller en vegetabi- liskt eller animalisk olja omvandlad till denna.

6. Komposition enligt krav 5, kännetecknad av att monoglyceriden är vald ur gruppen bestående av monoolein och monolinolein eller en vegetabilisk eller animalisk olja omvandlad till denna.

7. Komposition enligt något av de föregående kraven, kännetecknad av att triglyceriden är en triglycerid av en omättad fettsyra med 18 kolatomer eller en vegetabilisk eller animalisk olja innehållande densamma. 10 15 20 25 30 35 11 504 582

8. Komposition enligt krav 7, kännetecknad av att triglyceriden är sojabönolja.

9. Komposition enligt något av de föregående kraven, kännetecknad av att viktförhållandet monoglycerid till triglycerid ligger inom området från 2:1 till 2,5:l, företrädesvis omkring 7:3.

10. Komposition enligt något av de föregående kraven, kännetecknad av att den polära vätskan är en blandning av glycerol och propylenglykol.

11. Komposition enligt något av de föregående kraven, kännetecknad av en halt av polär vätska av ca 4- 12, företrädesvis 5-10, viktprocent.

12. Komposition enligt något av de föregående kraven för användning som oralt administrerbar farmaceutisk kom- position, kânnetecknad av att den innehåller en farmaceu- tiskt acceptabel bärare avsedd för oral administration.

13. Komposition enligt något av de föregående kraven, kännetecknad av att den innehåller natriumklorid som medel för modifiering av oralt upptag av den aktiva substansen.

14. Förfarande för framställning av en biologiskt aktiv komposition enligt något av kraven 1-13, känne- tecknad av att man bildar en blandning av nämnda mono- glycerid och triglycerid i sådana mängder därav, att en L2-fas bildas när nämnda blandning bringas i kontakt med den polära vätskan, och tillsätter cyklosporinet för upp- lösning eller dispergering av detsamma i L2-fasen, varvid tillsatsen utföres före, under eller efter bildningen av L2-fasen.

15. Förfarande enligt krav 14, kånnetecknat av att man bildar en blandning av monoglyceriden och triglyce- riden, löser cyklosporinet i den polära vätskan, före- trädesvis vatten, och droppvis sätter monoglycerid- triglyceridblandningen till lösningen av cyklosporin i den polära vätskan.

16. Användning av en L2-fas enligt definitionen i något av kraven 1-13 för inkapsling av ett cyklosporin 504 582 12 för framställning av ett oralt administrerbart preparat för användning som immunsuppressivum.