SE459975B - PROCEDURES FOR ANAEROBIC CLEANING OF FURFUROL-CONTAINING WASTE WATER, THEREFORE APPLICABLE BACTERIA AND RECOVERY THEREOF - Google Patents

Description

459 975 2 brytas med en blandkultur av sulfatreducerande bakterier och metanogena bakterier. Ändamålet med uppfinningen har därför varit att tillhandahålla ett förfarande, medelst vilket man kan uppnå en ohämmad anaerob nedbrytning och därmed en tillfredsställande rening av de kända àngkondensaten. 459 975 2 is broken with a mixed culture of sulfate-reducing bacteria and methanogenic bacteria. The object of the invention has therefore been to provide a process by means of which an uninhibited anaerobic decomposition can be achieved and thus a satisfactory purification of the known steam condensates.

Detta uppnås genom användning av speciella furfuralnedbrytande bakterier i närvaro av en bakterieblandkultur, som innehåller sulfatreducerande bakterier och metanogena bakterier.This is achieved by the use of special furfural-degrading bacteria in the presence of a bacterial blend culture, which contains sulfate-reducing bacteria and methanogenic bacteria.

Såsom har kunnat konstateras verkar furfural, som är närvarande i ångkondensatet i mängder av vanligtvis ca 5-30 mmol/liter och ibland upp till 40 mmol/liter, hämmande pá nedbrytningen och även vid utspädning är en självtillväxt av furfuralnedbrytande bakterier ytterst tidskrävande och tar flera månader i anspråk.As has been found, furfural, which is present in the steam condensate in amounts of usually about 5-30 mmol / liter and sometimes up to 40 mmol / liter, inhibits the degradation and even when diluted, a self-growth of furfural-degrading bacteria is extremely time consuming and takes several months.

Enligt uppfinningen kan denna svårighet elimineras genom till- handahállandet av furfuralnedbrytande bakterier, som är i stånd att nedbryta furfural i koncentrationer av ca. 5-10 mmol/liter, så att det är möjligt att kontinuerligt rena àngkondensat i när- varo av dessa bakterier vid härför lämplig utspädning respektive härför anpassad tillflödeshastighet vid kontinuerlig jäsning.According to the invention, this difficulty can be eliminated by the provision of furfural-degrading bacteria, which are capable of degrading furfural in concentrations of approx. 5-10 mmol / liter, so that it is possible to continuously purify steam condensate in the presence of these bacteria at a suitable dilution or adapted flow rate during continuous fermentation.

Eftersom furfural i högre koncentration verkar hämmande pà ut- vecklingen av anaeroba bakterier, har vi utvecklat ett förfa- rande för utvinning av furfuralnedbrytande bakterier, vilket förfarande utmärks därav att man genom stegvis spädning till 1:l09 fixerar en bakterieblandpopulation från rötslam i när- íngsagar och beskiktar populationen med utspädd furfurallösning som enda kolkälla och därefter utsätter de utspädda i agarn fixerade bakterierna för den från den överliggande lösningen långsamt indiffunderande furfuralen till utbildandet av synbara kolonier, som därefter isoleras.Since furfural in higher concentrations has an inhibitory effect on the development of anaerobic bacteria, we have developed a process for the extraction of furfural-degrading bacteria, which method is characterized by fixing a bacterial mixture population from digestate sludge in nutrient saws by stepwise dilution to 1: 10 and coats the diluted furfural solution population as the sole carbon source and then exposes the dilute agar-fixed bacteria to the furfural slowly diffusing from the overlying solution to the formation of visible colonies, which are then isolated.

Som utgângsmaterial kan man därvid använda avloppsslam från ett röttorn, som underkastas en anrikningsodling under tillförsel av ångkondensat från massafabrikation. Pâ detta sätt gynnar man "21 3 459 975 bakterier, som anpassas till de angivna användningsbetingelserna och som därefter fixeras på agar genom stegvis spädning till 9 I 1:10 .As a starting material, it is possible to use sewage sludge from a red tower, which is subjected to an enrichment cultivation during the supply of steam condensate from pulp production. In this way, bacteria are favored, which are adapted to the specified conditions of use and which are then fixed on agar by stepwise dilution to 9 I 1:10.

En ytterligare förselektion genom vätskeodling med furfural som enda kolkälla är emellertid speciellt lämplig, innan de på så sätt utspädda bakterierna, fixerade på agar, utsätts för den långsamma indiffunderingen av furfural från den överliggande lösningen.However, a further preselection by liquid culture with furfural as the sole carbon source is particularly suitable before the thus diluted bacteria, fixed on agar, are subjected to the slow indiffusion of furfural from the overlying solution.

De på detta sätt erhållna renkulturerna kan användas som tillsats- medel för anaerob rening av furfuralhaltigt avloppsvatten. Denna anaeroba rening kan utföras inom det neutrala till svagt sura pH-området, speciellt vid pH 6 - 7,5, företrädesvis pH 6,4 - - 7,2och speciellt vid pH 6,8. Temperaturen kan väljas mellan ca rumstemperatur och 65°C och det föredragna temperaturomrâdet är 37 - 60oC. Speciell teknisk betydelse har förfarandet enligt upp- finningen vid rening av ångkondensat från sulfitavlutindunstning vid massafabrikation.The purification cultures obtained in this way can be used as additives for anaerobic purification of furfural-containing wastewater. This anaerobic purification can be carried out in the neutral to slightly acidic pH range, especially at pH 6 - 7.5, preferably pH 6.4 - - 7.2 and especially at pH 6.8. The temperature can be chosen between about room temperature and 65 ° C and the preferred temperature range is 37 - 60oC. The process according to the invention is of special technical importance in the purification of steam condensate from sulphite liquor evaporation in pulp production.

Ytterligare särdrag framgår av underkraven samt av följande ut- föringsexempel, som avser isolering av furfuralnedbrytande bak- terier.Additional features appear from the subclaims as well as from the following exemplary embodiments, which relate to the isolation of furfural-degrading bacteria.

Exempel A: Utgångsmateríal: avloppsslam från röttornet i av- loppsreningsverket vid Alsdorf- -Bettendorf B: Anrikningsodling: kontinuerlig tillförsel av ångkon- densat från massafabrik; C-källa: acetat (90 %), furfural (10 %).Example A: Starting material: sewage sludge from the red tower in the sewage treatment plant at Alsdorf- -Bettendorf B: Enrichment cultivation: continuous supply of steam condensate from pulp mill; Source C: acetate (90%), furfural (10%).

Tillsats av mineralier (näringslös- ning I; se nedan); temperatur (för alla ytterligare försök) 37°c;1°c.Addition of minerals (nutrient solution I; see below); temperature (for all further experiments) 37 ° C; 1 ° C.

Acetat nedbröts till 99 % och fur- furol till 100 %; huvudsaklig slut- produkt var gödselgas (CH4 och C02). 459 975 Näringslösning 10 1 ångkondensat eller H O med 5 NH Cl 4 6 2 NaCl 1 FeS0 15 mg FeCl 4 2 9 g MgCl2-6 H 2,5 g caclz-2 H 9 9 pH-värdet hölls vid 6,8 i jäsningskammaren genom tillsats av 5n Na0H.Acetate was degraded to 99% and furfurol to 100%; The main end product was manure gas (CH4 and CO2). 459 975 Nutrient solution 10 1 Steam condensate or HO with 5 NH Cl 4 6 2 NaCl 1 FeSO 15 mg FeCl 4 2 9 g MgCl 2 - 6 H 2.5 g caclz-2 H 9 9 The pH was maintained at 6.8 in the fermentation chamber by addition of 5N NaOH.

Specifik anrikning av furfuralnedbrytande mik- roorganismer (selektionsvätskeodling): selek- = tionsodlingen skedde med furfural som enda C- -källa under kontinuerlig tillförsel av furfur- allösning (150 mmol/liter) och omsättning till CH4 + C02. Den aktuella furfuralkoncentrationen i jäsningskammaren var praktiskt taget försum- bar. Utgáende från denna blandkultur påbörjades isoleringen av de furfuralnedbrytande bakteri- êlffla.Specific enrichment of furfural-degrading microorganisms (selection liquid culture): the selection = culture was done with furfural as the only C- source during continuous supply of furfural solution (150 mmol / liter) and conversion to CH4 + CO 2. The current furfural concentration in the fermentation chamber was practically negligible. Based on this mixed culture, the isolation of the furfural-degrading bacterial cells was started.

Isolering 1.) Efter en stegvis spädning av de genom vät- skeodlingen enligt ovan erhållna bakterierna i näringslösning I (utan C-källa) med följande sammansättning: Sgârlösning 30 ml spårlösningx 10,2 g Na2HPO4 7,8 g Nan Po _ H o 2 4 0,13 ml MoSeW0-lösningxx 745 mg KCl 2 i 1 1 H2° (aest)* 0,475 g mnclz-4 H20 0 - 0,17 g CoCl2-6 H20 0 0,05 g CUSO4-5 H20 0,18 g ZnSO4-7 H20 0,018 g AIK (S04)2- 12 H20 0,01 g H3BO3 -2 H20 xx MoSeWO-lösning 2 i 1 1 H20 (dest): 2 g Na2SeO3-5 H20 2 g Na2W04-2 H20 2 g Na2MoO4-2 H20 41:." s 459 975 ympades ägärtshëkêâ (näringslösning I + 1-2 % agar som solidifieringsmedel) med bakteriekul- turen. Inkubationen skedde vid ett pH-värde mel- lan 6,4 och 7,0 under beskiktning av den fasta agarn med 1 ml flytande näringslösning I, som in- nehöll 15 mmol/liter furfural. Denna överliggande lösning förnyades efter 1 och efter 2 veckor. Ef- ter 4 veckor hade i agarn vid samtliga satser ut- bildats beigefärgade diskusformiga kolonier. Nå- gon gasbildning kunde inte konstateras. Bifogade ritning visar en mikroskopisk förstoring av en bakterie (med cilier försedda, lätt böjda stavar). 2.) Isolering av kolonierna och förnyad ympning av agar-shakes; samma betingelser som under D 1.); utbvte tre gånger av närinqslösninqen.Isolation 1.) After a stepwise dilution of the bacteria obtained by the liquid culture according to the above in nutrient solution I (without C-source) with the following composition: Surgical solution 30 ml trace solution x 10.2 g Na2HPO4 7.8 g Nan Po _ H o 2 4 0.13 ml MoSeWO solution x 745 mg KCl 2 in 1 1 H2 ° (est) * 0.475 g mnclz-4 H 2 O 0 - 0.17 g CoCl 2 - 6 H 2 O 0 0.05 g CUSO4-5 H 2 O 0.18 g ZnSO4-7 H2O 0.018 g AIK (SO4) 2- 12 H2O 0.01 g H3BO3 -2 H2O xx MoSeWO solution 2 in 1 1 H2O (dest): 2 g Na2SeO3-5 H2O 2 g Na2WO4-2 H2O 2 g Na2MoO4 -2 H 2 O 41: "s 459 975 grafted äärtshëkêâ (nutrient solution I + 1-2% agar as solidifier) with the bacterial culture. The incubation took place at a pH value between 6.4 and 7.0 under the coating of the solid agar with 1 ml of liquid nutrient solution I, which contained 15 mmol / liter of furfural, this overlying solution was renewed after 1 and after 2 weeks, and after 4 weeks, beige-colored disc-shaped colonies had formed in all batches. gon gas formation could not ascertain race. The attached drawing shows a microscopic magnification of a bacterium (cilia-bearing, slightly curved rods). 2.) Isolation of the colonies and re-inoculation of agar shakes; the same conditions as under D 1.); exercised three times the nutrient solution.

Efter 4 veckor: kolonier såsom under D 1.). 3.) Isolering av nâgra kolonier och provning av tillväxten i speciellt sulfatreducerande medium (näringslösning II, etanol som C-källa, SO42_ som elektronacceptor) gav positiva resultat så- väl i vätskemedium som på agar (Hungate-teknik).After 4 weeks: colonies as under D 1.). 3.) Isolation of several colonies and testing of the growth in special sulphate-reducing medium (nutrient solution II, ethanol as C-source, SO42_ as electron acceptor) gave positive results both in liquid medium and on agar (Hungate technology).

Näringslösning II hade följande sammansättning per liter vatten: 4,4 pmol/l resazurin 3,8 mmøl/l KH Po4/x2HPo4, pa 7,00 7,2 mmol/l NH:Cl 6,9 pmol/l FeSO4~7H2O 0,77 mmol/l MgSO4~7 H20 10 ml/1 Wolfes vitaminer) 10 ml/l Wolfes mineralie4 23,8 mmol/l NaHCO3 12 mmol/l KHCO3 28 mmol/l Na SO -10 H O 2 4 2 459 975 6 som reduktionsmedel: É 0,23 mmai/1 Na-aitionit l 0,416mmol/l Na2S-9 H20 g 4,38 mmol/l tioglykolat W som C-källa (i regel): 239 mmol/l etanol *se E.A. woiin, M.J. woiin, n.s. Wolfe, J. biol. Chem. 238 (1963) 2882-2886). 4.) Isolering av separata kolonier ur agar från D 3.) och inkubering i näringslösning II (utan etanol men under tillsats av 3-5 mmol/l furfur- al). Furfural nedbröts genast varje gång efter tillsats och acetat bildades (flerfaldiga till- satser av små mängder furfural till maximalt 8 mmol/l). Mikroskopisk bild: kraftigt rörliga, lätt S-formade gramnegativa bakterier med en längd av ca 2-6 Pm; morfologisk likhet med Desulfovib- rio gigas. Bakterierna innehåller cytokrom C3 och desulfoviridin- De tillväxer på etanol, pyruvat, laktat eller fumarat i närvaro av sulfat och ned- bryter furfural.Nutrient solution II had the following composition per liter of water: 4.4 pmol / l resazurin 3.8 mmol / l KH Po4 / x2HPo4, pa 7.00 7.2 mmol / l NH: Cl 6.9 pmol / l FeSO4 ~ 7H2O .77 mmol / l MgSO4 ~ 7 H20 10 ml / 1 Wolfes vitamins) 10 ml / l Wolfes mineral4 23.8 mmol / l NaHCO3 12 mmol / l KHCO3 28 mmol / l Na SO -10 HO 2 4 2 459 975 6 som reducing agent: É 0.23 mmol / l Na-aitionite l 0.416 mmol / l Na2S-9 H2O g 4.38 mmol / l thioglycolate W as C source (as a rule): 239 mmol / l ethanol * see EA woiin, M.J. woiin, n.s. Wolfe, J. biol. Chem. 238 (1963) 2882-2886). Isolation of separate colonies from agar from D 3.) and incubation in nutrient solution II (without ethanol but with the addition of 3-5 mmol / l furfural). Furfural was degraded immediately each time after addition and acetate was formed (multiple additions of small amounts of furfural to a maximum of 8 mmol / l). Microscopic image: highly motile, slightly S-shaped gram-negative bacteria with a length of about 2-6 Pm; morphological resemblance to Desulfovib- rio gigas. The bacteria contain cytochrome C3 and desulfoviridine- They grow on ethanol, pyruvate, lactate or fumarate in the presence of sulfate and degrade furfural.

Enligt ovan erhållna furfuralnedbrytande mikroorganismer har de- ponerats vid Deutschen Sammlung von Mikroorganismen i Göttingen under nummer DSM 2590. #5* 'According to the furfural-degrading microorganisms obtained above, it has been deposited at the Deutschen Sammlung von Mikroorganismen in Göttingen under number DSM 2590. # 5 * '

Claims (6)

459 975 PATENTKRAV459 975 PATENT CLAIMS 1. Förfarande för utvinning av furfuralnedbrytande bak- terier, k ä n n e t e c k n a t därav, att man genom stegvis spädning till 1:10 fixerar en bakterieblandpopu- - lation frán rötslam i näríngsagar och beskiktar populatio- nen med utspädd furfurallösning som enda kolkälla och därefter utsätter de utspädda i agarn fixerade bakterier- na för den från den överliggande lösningen långsamt in- diffunderande furfuralen till utbildandet av synbara ko- lonier, som därefter isoleras.1. A process for the extraction of furfural-degrading bacteria, characterized in that a bacterial mixture population from digestate is fixed in nutrient saws by stepwise dilution to 1:10 and the population is coated with dilute furfural solution as the sole carbon source and then exposed to diluted in the agar-fixed bacteria of the furfural slowly diffusing from the overlying solution to the formation of visible colonies, which are then isolated. 2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t därav, att man beskíktar fast agar, som innehåller sus- penderade bakterier, i förhållandet 5:1 med en flytande mineraliehaltig näringslösning, som innehåller 15 mmol/ liter furfural som enda C-källa och inkuberar satsen nâg- ra veckor under veckovis utbyte av näringslösningen.Process according to Claim 1, characterized in that solid agar containing suspended bacteria is coated in a ratio of 5: 1 with a liquid mineral-containing nutrient solution containing 15 mmol / liter of furfural as the only C-source and incubated. the batch for a few weeks during a weekly exchange of the nutrient solution. 3. Förfarande enligt krav 1 eller 2, k ä n n e t e c k - n a t därav, att man underkastar den bakterieblandpopu- latíon som skall suspenderas i agarn en föranrikande se- lektionsodling i flytande näringslösning med 5-10 mmol/ liter furfural som enda C-källa.3. A method according to claim 1 or 2, characterized in that the bacterial mixture population to be suspended in agar is subjected to an enriching selection culture in liquid nutrient solution with 5-10 mmol / liter furfural as the only C-source. 4. Förfarande enligt något av kraven 1 - 3, k ä n n e - t e c k n a t därav, att man genomför en anrikningsod- ling utgående från klarslammet från ett röttorn under kon- tinuerlig tillförsel av àngkondensat från massafabrika- tion för erhållande av en bakterieblandpopulation för ymp- ning av den flytande selektionskulturen respektive för suspension i agar.4. A method according to any one of claims 1 to 3, characterized in that an enrichment culture is carried out starting from the clear sludge from a rotten tower with continuous supply of steam condensate from pulp production to obtain a bacterial mixture population for grafting. of the liquid selection culture and for suspension in agar, respectively. 5. Användning av enligt krav 1 erhållna bakterier för 459 975 anaerob upparbetning av furfuralhaligt avloppsvatten i närvaro av en bakterieblandkultur, som innehåller sulfat- reducerande bakterier och metanogena bakterier.Use of bacteria obtained according to claim 1 for 459,975 anaerobic work-up of furfural-containing wastewater in the presence of a bacterial mixture culture, which contains sulphate-reducing bacteria and methanogenic bacteria. 6. Furfuralnedbrytande bakterier, deponerade vid Deutsch- en Sammlung von Mikroorganismen, Göttingen, under deposi- tionsnuner DSM 2590 och med följande karakteristik: mikroskopisk bild: kraftigt rörliga, lätt S-formade gram- negativa bakterier med en längd av ca 2 - 6 um; morfolo- gisk likhet med Desulfovíbrio gigas. Bakterierna innehål- ler cytokrom C och desulfovirídin. De tillväxer på etan- ol, pyruvat, laktat eller fumarat i närvaro av sulfat och nedbryter furfural. lgh,Furfural-degrading bacteria, deposited at the Deutsch- en Sammlung von Mikroorganismen, Göttingen, under deposition numbers DSM 2590 and with the following characteristics: microscopic image: highly mobile, slightly S-shaped gram-negative bacteria with a length of about 2 - 6 μm ; morphological resemblance to Desulfovíbrio gigas. The bacteria contain cytochrome C and desulfoviridine. They grow on ethanol, pyruvate, lactate or fumarate in the presence of sulphate and degrade furfural. lgh,