SE448883B - PROCEDURE FOR PREPARING D-ALFA AMINO ACIDS - Google Patents
PROCEDURE FOR PREPARING D-ALFA AMINO ACIDSInfo
- Publication number
- SE448883B SE448883B SE8003630A SE8003630A SE448883B SE 448883 B SE448883 B SE 448883B SE 8003630 A SE8003630 A SE 8003630A SE 8003630 A SE8003630 A SE 8003630A SE 448883 B SE448883 B SE 448883B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- hydantoin
- amino acid
- medium
- hours
- culture
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
- C12P41/009—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures by reactions involving hydantoins or carbamoylamino compounds
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
448 885 2 Efter H8 timmars inkubering: större kolonier (diameter ca 1-1,5 mm), vilka har tydliga kanter och är halvgenomskinliga. 448 885 2 After H8 hours of incubation: larger colonies (diameter approx. 1-1.5 mm), which have clear edges and are semi-transparent.
Efter H dygns inkubering: ännu större kolonier (diameter ca H mm), vilka är ogenomskinliga och slemmiga. (b) Näringsbuljong vid BOOC.After H day incubation: even larger colonies (diameter about H mm), which are opaque and slimy. (b) Nutritional broth at BOOC.
I provröv (10 x 160 mm) innehållande 5 cmš medium kan en ut- veckling iakttagas efter ZÄ timmar, men utvecklingen är ganska obe- tydlig. Utvecklingen ökar under de följande dygnen. Härvid bildas en likformig grumling och ett sediment, vilket häftar ganska kraftigt vid rörens botten. Koldioxidgas (10%) ökar icke utvecklingen. (c) Olika fasta medier.In test samples (10 x 160 mm) containing 5 cmš of medium, a development can be observed after ZÄ hours, but the development is quite insignificant. The development will increase in the following days. This creates a uniform cloud and a sediment, which adheres quite strongly to the bottom of the pipes. Carbon dioxide gas (10%) does not increase development. (c) Various solid media.
På näringsagar och på "Brain Heart Infusion Agar" sker samma utveckling och erhålles kulturer med samma utseende som ovan har angivits för odlingen på tryptikas-soja-agar-medium. (d) Olika Flytande medier.On nutrient agar and on "Brain Heart Infusion Agar" the same development takes place and cultures with the same appearance as above have been obtained for the cultivation on trypticase-soy-agar medium. (d) Various Liquid Media.
På "Brain Heart Infusion Agar", vatten försatt med pepton, vatten försatt med trypton, näringsbuljong med jästextrakt sker samma utveckling och erhålles kulturer med samma utseende som ovan har angivits för odlingen i näringsbuljong. På tryptikas-soja- buljong och på vatten försett med pepton och glukos (O,2%) är ut- vecklingen något svagare. (2) Morfologi. (a) Mikroskopisk undersökning utan färgning.On "Brain Heart Infusion Agar", water supplemented with peptone, water supplemented with tryptone, nutrient broth with yeast extract, the same development takes place and cultures with the same appearance as above have been obtained for the cultivation in nutrient broth. On trypticas-soy broth and on water supplemented with peptone and glucose (0.2%), the development is somewhat weaker. (2) Morphology. (a) Microscopic examination without staining.
Efter 2Ä timmars odling i flytande medium vid 37°C erhålles spolformade baciller med en längd av 0,5-5 pm. Bacillen är rörlig, och rörligheten är kraftigast när inkubering genomföras vid 2Ä-3000. (b) Mikroskopisk undersökning efter färgning.After 2 hours of culture in liquid medium at 37 ° C, coil-shaped bacilli with a length of 0.5-5 μm are obtained. The bacillus is mobile, and the mobility is strongest when incubation is carried out at 2Ä-3000. (b) Microscopic examination after staining.
Mikroorganismen är gram-negativ. Den centrala delen av bak- teriekroppen är ofta svagast färgad. (3) Optimal utvecklíngstemperatur: ZHUC; god utveckling 3006: mycket god utveckling 37°C: medelmåttlig utveckling H2°C; svag utveckling.The microorganism is gram-negative. The central part of the bacterial body is often the weakest colored. (3) Optimal development temperature: ZHUC; good development 3006: very good development 37 ° C: medium development H2 ° C; weak development.
(H) Odlingsegenskaper och biokemiska egenskaper. (a) Andningstyp: sträng aerob. (b) Oxidas: positiv. (c) Katalas: positiv. (d) "Mac Conkey Agar": riklig kultur. (e) (f) (a) (h) (1) (J) (k) (1) (m) (n) (0) (p) (q) (r) (S) (t) (u) (v) (w) (x) (v) När 448 883 3 "Salmonella Shigella Agar": foga riklig kultur.(H) Cultivation properties and biochemical properties. (a) Respiratory type: strictly aerobic. (b) Oxidase: positive. (c) Catalase: positive. (d) "Mac Conkey Agar": Abundant Culture. (e) (f) (a) (h) (1) (J) (k) (1) (m) (n) (0) (p) (q) (r) (S) (t) (u ) (v) (w) (x) (v) When 448 883 3 "Salmonella Shigella Agar": add abundant culture.
"Cetrimide Agar“: ingen utveckling."Cetrimide Agar": no development.
Ureas (i Ferguson-medium): positiv.Ureas (in Ferguson medium): positive.
Produktion av indol: negativ.Indole production: negative.
Prov med metylrött: negativt.Sample with methyl red: negative.
Voges-Proskauer-prov: negativt.Voges-Proskauer test: negative.
Utnyttjande av citrater (Simmons): psotivt under H8 timmar; alkalinisering.Utilization of citrates (Simmons): psotive for H8 hours; alkalinization.
Smältning av gelatin: negativ.Melting of gelatin: negative.
Oxidations-jäsningsprov (Hugh och Leifson): oxiderande.Oxidation fermentation test (Hugh and Leifson): oxidizing.
Bildning av syror utgående från kolhydrater: glukos: positiv laktos: positiv arabinos: positiv maltos: positiv mannitol: positiv sackaros: positiv xylos: positiv.Formation of acids from carbohydrates: glucose: positive lactose: positive arabinose: positive maltose: positive mannitol: positive sucrose: positive xylose: positive.
Reduktion av nitrater: positiv.Nitrate reduction: positive.
Reduktion av nitriter: negativ.Nitrite reduction: negative.
Denitrifiering: negativ.Denitrification: negative.
Bildning av pigment: negativ.Pigment formation: negative.
Bildning av H28: på mediet "Triple Sugar Iron Agar": mycket svagt positiv. papper med basiskt blyacetat: spår av H28.Formation of H28: on the medium "Triple Sugar Iron Agar": very slightly positive. paper with basic lead acetate: traces of H28.
Hemolys (hästblod): negativ.Hemolysis (horse blood): negative.
Lwflmmsmjölk: ingen modifiering. ß-galaktosidas: positiv.Lw fl mmsmjölk: no modification. β-galactosidase: positive.
Arginin-dihydrolas: negativ.Arginine dihydrolase: negative.
Lysin-dekarboxylas: negativ.Lysine decarboxylase: negative.
Ornitin-dekarboxylas: negativ. man odlar stammen Pseudomonas sp. HM-H0 i klassiska od- lingsmedier, bildas det enzym som kan omvandla hydantoiner till mot- svarande D-0(-aminosyror huvudsakligen i mikroorganismens celler och endast till en mindre del i odlingsmediet.Ornithine decarboxylase: negative. to grow the strain Pseudomonas sp. HM-H0 in classical culture media, the enzyme that can convert hydantoins to the corresponding D-O (amino acids is formed mainly in the cells of the microorganism and only to a small extent in the culture medium.
Odlingsmediet bör huvudsakligen innehålla källor för assimi- lerbart kol och källor för assimilerbart kväve samt andra närings- äinxnf-rl nom ih' Iníñflvšímulïgfgx För llt-vouklírniçcsrx av :zmmlrrxc-rx llM-(IO, :xšïzzoïrx oorganiska nultvrn Produktionun av cnzym kan förbättras, om man till odlingsmediet sätter en hydantoin substituerad i 5-ställning 448 885 H såsom kvävekälla. För detta ändamål använder man vanligen den hydan- toin som motsvarar metionin, men även andra hydantoiner kan med för- del användas, såsom den hydantoin som motsvarar valin, den hydantoin som motsvarar leucin, den hydantoin som motsvarar isoleucin och 5- cyanopropylhydantoin.The culture medium should mainly contain sources of assimilable carbon and sources of assimilable nitrogen as well as other nutrient sources. For the llt-vouklírniçcsrx of: zmmlrrxc-rx llM- if a hydantoin substituted in the 5-position 448 885 H is added to the culture medium as a nitrogen source, for this purpose the hydantoin corresponding to methionine is usually used, but other hydantoins can also be used to advantage, such as the hydantoin corresponding to valine, the hydantoin corresponding to leucine, the hydantoin corresponding to isoleucine and 5-cyanopropylhydantoin.
Såsom källor för assimilerbart kol kan man använda kolhydra- ter, såsom glukos, sackaros, laktos eller maltos, antingen i ren form eller i form av komplexa material, såsom melass och laktoserum.As sources of assimilable carbon, carbohydrates such as glucose, sucrose, lactose or maltose can be used, either in pure form or in the form of complex materials, such as molasses and lactose.
Man kan även använda alkoholer eller organiska syror. Vissa anima- liska eller vegetabiliska oljor, såsom späckolja eller sojaolja, kan ersätta dessa olika kolkällor eller användas såsom tillsats till dem.You can also use alcohols or organic acids. Certain animal or vegetable oils, such as lard or soybean oil, can replace these various carbon sources or be used as additives.
De lämpliga källorna för assimilerbart kväve är ytterst va- rierande. De kan vara mycket enkla kemiska föreningar, såsom oorga- niska eller organiska ammoniumsalter eller karbamid.. De kan också utgöras av komplexa substanser, som huvudsakligen innehåller kväve i proteinform. Bland de tillsatta oorganiska ämnena kan vissa ha en buffrande eller neutraliserande verkan, såsom alkalimetall- eller jordalkalimetallfosfater eller kalcium- eller magnesiumkarbonater.The suitable sources for assimilable nitrogen are extremely varied. They can be very simple chemical compounds, such as inorganic or organic ammonium salts or urea. They can also consist of complex substances, which mainly contain nitrogen in protein form. Among the added inorganic substances, some may have a buffering or neutralizing effect, such as alkali metal or alkaline earth metal phosphates or calcium or magnesium carbonates.
Andra oorganiska ämnen ger den nödvändiga jonjämvikten för utveckling- en av stammen HM-HO, såsom klorider och sulfater av alkalimetaller och alkaliska jordartsmetaller samt salter av zink, kobolt, järn, koppar och mangan. pH-värdet i jäsningsmediet bör vid odlingens början vara mel- lan U och 9, företrädesvis mellan 6 och 8. Den för jäsningen opti- mala temperaturen är mellan 25 och 3500, men en tillfredsställande produktion erhålles vid temperaturer mellan 20 och 3700.Other inorganic substances provide the necessary ionic balance for the development of the HM-HO strain, such as chlorides and sulphates of alkali metals and alkaline earth metals as well as salts of zinc, cobalt, iron, copper and manganese. The pH value of the fermentation medium at the beginning of the cultivation should be between U and 9, preferably between 6 and 8. The optimum temperature for fermentation is between 25 and 3500, but a satisfactory production is obtained at temperatures between 20 and 3700.
Lufttillförseln vid jäsningen kan variera inom ganska vida gränser. Man har emellertid funnit, att en lufttillförsel av 0,3- 3 liter per liter odlingsbuljong och minut är särskilt lämplig.The air supply during fermentation can vary within quite wide limits. However, it has been found that an air supply of 0.3-3 liters per liter of culture broth per minute is particularly suitable.
Det maximala utbytet erhålles efter 10-72 timmars odling, varvid den optimala tiden huvudsakligen beror på det använda mediet.The maximum yield is obtained after 10-72 hours of cultivation, the optimum time mainly depending on the medium used.
Eftersom enzymet huvudsakligen produceras i cellerna, kan omvandlingen av hydantoin substituterad i 5-ställning till D-0(-ami- nosyra genomföras med användning av odlingsmediet innehållande cel- lerna, eller man kan använda celler isolerade från odlingsbuljongen genom centrifugering. Dessa celler kan användas såsom sådana, ef- ter utfällning med aceton eller lyofilisering. Man kan även använda cellerna i form av ett cellulärt extrakt erhållet genom malning el- ler behandling med ultraljud. 9 448 883 Omvandlingen av den i 5-ställningen substituerade hydantoinen till motsvarande D-K-eminosyra genomförs vanligen i vattenhaltigt medium vid ett pH-värde av mellan 6 och 9, företrädesvis nära pH 7,8. pH-värdet hålles eventuellt nära detta värde genom tillsättning av en alkalisk vattenlösning, särskilt natriumhydroxidlösning.Since the enzyme is mainly produced in the cells, the conversion of hydantoin substituted in the 5-position to D-O (amino acid can be carried out using the culture medium containing the cells, or cells isolated from the culture broth by centrifugation can be used. as such, after precipitation with acetone or lyophilization.The cells can also be used in the form of a cellular extract obtained by grinding or treatment with ultrasound 9 448 883 is usually carried out in aqueous medium at a pH value of between 6 and 9, preferably close to pH 7.8, the pH value being optionally kept close to this value by adding an alkaline aqueous solution, in particular sodium hydroxide solution.
Omvandlingsreaktionen genomföras vanligen vid en temperatur mellan 20 och 5500, företrädesvis vid en temperatur nära 3700.The conversion reaction is usually carried out at a temperature between 20 and 5500, preferably at a temperature close to 3700.
Koncentrationen av hydantoin i reaktionsmediet är en funktion av lösligheten. Hydantoinkoncentrationen är vanligen nära 5 g per 100 ml lösning, men koncentrationen kan även vara högre än 10 g/100 ml lösning.The concentration of hydantoin in the reaction medium is a function of solubility. The hydantoin concentration is usually close to 5 g per 100 ml of solution, but the concentration can also be higher than 10 g / 100 ml of solution.
Reaktionsmediet kan innehålla ytaktiva ämnen, antioxidanter och koenzymer, vilka kan främja bildningen av D-N'-aminosyran och sålunda möjliggöra en förbättring av utbytet.The reaction medium may contain surfactants, antioxidants and coenzymes, which may promote the formation of the D-N 'amino acid and thus enable an improvement in the yield.
N Reaktionstiden är vanligen mellan 2 timmar och Ä dygn. Reak- tionen får i själva verket fortgå ända till dess att det icke längre sker någon omvandling av hydantoin till D-Of-aminosyra.N The reaction time is usually between 2 hours and 1 day. In fact, the reaction is allowed to continue until there is no longer any conversion of hydantoin to D-Of amino acid.
Under omvandlingen av hydantoin till D~ såsom mellanprodukt bildas en D-hydantoinsyra, vilken under inverkan av det enzymatiska systemet omvandlas till D~d-eminosyra. Förfaran- det enligt uppfinningen kan alltså genomföras antingen med en hydan~ toin eller med en hydantoinsyra eller med en blandning av hydantoin och hydantoinsyra. gfl Stammen HM-40 racemiserar alltså L-hydantoin in situ.During the conversion of hydantoin to D ~ as an intermediate, a D-hydantoic acid is formed, which under the influence of the enzymatic system is converted to D ~ d-amino acid. The process according to the invention can thus be carried out either with a hydantoin or with a hydantoic acid or with a mixture of hydantoin and hydantoic acid. g fl The HM-40 strain thus racemizes L-hydantoin in situ.
På grund härav kan racemisk hydantoin använd såsom utgängsmaterial omvandlas fullständigt till D-d -aminosyra Den genom förfarandet enligt uppfinningen erhållna D-$K~amino~ syran kan isoleras från reaktionsmediet enligt vanliga metoder för separation av aminosyror, vanligen efter klarning av reaktionsmediet genom centrifugering och filtrering genom jonbytare. Vanligen ge- nomför men en utfällning av aminosyran vid dess isoelektriska punkt.Due to this, racemic hydantoin used as a starting material can be completely converted to Dd -amino acid. The D- $ K-amino acid obtained by the process of the invention can be isolated from the reaction medium according to conventional methods for separating amino acids through ion exchangers. Usually but precipitates the amino acid at its isoelectric point.
Uppfinningen illustreras genom följande, icke begränsande exem- pel.The invention is illustrated by the following non-limiting examples.
Exempel 1. (a) Framställning av en enzymatisk komposition.Example 1. (a) Preparation of an enzymatic composition.
Man framställer ett odlingsmedium med följande sammansättning: glukos 20 g/l; monokaliumfosfat 3 g/l; dikaliumfosfat 7g/1; magne- siumsulfat 0,7 g/l; mangansulfat 0,02 g/l; järn(II)sulfat 0,02 g/1; natriumklorid lg/1; hydantoin motsvarande D,L-metionin 3 g/1. 448 883 2 6 Odlingsmediet fördelas i 250 cmz kolvar i en mängd av 50 cm; per kolv, varefter man steriliserar vid 12000 under 15 minuter. Ef- ter ympning med stammen Pseudomonas sp., HM-40 odlad på selektivt agarmedium omskakas kolvarna (250 varv/minut) under Ä8 timmar vid 3o°c.A culture medium is prepared with the following composition: glucose 20 g / l; monopotassium phosphate 3 g / l; dipotassium phosphate 7g / l; magnesium sulfate 0.7 g / l; manganese sulphate 0.02 g / l; ferrous sulfate 0.02 g / l; sodium chloride lg / l; hydantoin corresponding to D, L-methionine 3 g / l. 448 883 2 6 The culture medium is distributed in 250 cm 2 flasks in an amount of 50 cm; per flask, after which it is sterilized at 12000 for 15 minutes. After inoculation with the strain Pseudomonas sp., HM-40 grown on selective agar medium, the flasks are shaken (250 rpm) for Ä8 hours at 30 ° C.
Man genomför produktionsodlingen i en 2-liters jäsningsbehål- lare innehållande 1 liter av det ovan angivna odlingsmediet och 1 cm3 skumdämpare. Man ympar med innehållet i en av de ovan beskrivna kol- varna. Kulturen får utvecklas vid 3000 under 48 timmar, varvid man omrör med en omrörare som roterar med 500 varv/minut och luftar med 1 liter steril luft/minut.The production cultivation is carried out in a 2-liter fermentation vessel containing 1 liter of the above-mentioned culture medium and 1 cm3 defoamer. Inoculate with the contents of one of the flasks described above. The culture is allowed to develop at 3000 for 48 hours, stirring with a stirrer rotating at 500 rpm and aerating at 1 liter of sterile air / minute.
Efter avslutad odling avskiljes cellerna genom centrifugering, varefter cellerna suspenderas i 50 cmš destillerat vatten. Den er- hållna suspensionen innehåller 7,6 g torrt cellextrakt per 100 cmš, (b) Hydrolys av hydantoin motsvarande D,L-fenylalanin.After completion of culture, the cells are separated by centrifugation, after which the cells are suspended in 50 cm 3 of distilled water. The resulting suspension contains 7.6 g of dry cell extract per 100 cm 3, (b) Hydrolysis of hydantoin corresponding to D, L-phenylalanine.
Till 200 cmš destillerat vatten sätter man 5 g hydantoin mot- svarande D,L-fenylalanin. Efter upphettning för partiell upplösning av hydantoinen kyles reaktionsmediet till 3700. Man inställer pH- värdet på 7,8 genom tillsättning av en N natriumhydroxidlösning.To 200 cmš of distilled water is added 5 g of hydantoin corresponding to D, L-phenylalanine. After heating to partially dissolve the hydantoin, the reaction medium is cooled to 3700. The pH is adjusted to 7.8 by adding an N sodium hydroxide solution.
Man tillsätter därefter 25 cm3 av den ovan framställda suspensionen av celler. Reaktionsblandningens volym inställes på 250 cmš, och pH-värdet inställes på 7,8. _ Reaktionsblandningen placeras i kvävgasatmosfär vid en tempera- tur av 3700. pH-värdet hålles på 7,8 genom successiv tillsättning av en N natriumhydroxidlösning. Efter 24 timmars måttlig omrörning har hela mängden hydantoin löst sig.25 cm3 of the suspension of cells prepared above are then added. The volume of the reaction mixture is adjusted to 250 cmš and the pH is adjusted to 7.8. The reaction mixture is placed in a nitrogen atmosphere at a temperature of 3700. The pH is maintained at 7.8 by successive addition of an N sodium hydroxide solution. After 24 hours of moderate stirring, the entire amount of hydantoin has dissolved.
Reaktionshlandningen klargöres genom centrifugering, varefter den ledes genom en katjonbytare (Dowex 50 i H+-form). Man eluerar med en 2N ammoniaklösning. De alkaliska fraktionerna koncentreras till torrhet. Man erhåller härvid 3,98 g D-fenylalanin (utbyte 92,5%). Produkten har följande egenskaper: mi? N% 8,63 (teoretiskt 8,U8) Potentiometrisk titer: 93,3%.The reaction mixture is clarified by centrifugation, after which it is passed through a cation exchanger (Dowex 50 in H + form). Elution is carried out with a 2N ammonia solution. The alkaline fractions are concentrated to dryness. 3.98 g of D-phenylalanine are obtained (yield 92.5%). The product has the following properties: mi? N% 8.63 (theoretical 8, U8) Potentiometric titer: 93.3%.
Den optiska renheten hos den erhållna D-fenylalaninen är hög- re än 93%.The optical purity of the obtained D-phenylalanine is higher than 93%.
Exempel 2. Till 150 cm3 destillerat vatten sätter man Ä g 3 av en collsuspennion innehållande 0,6 g torrsubstans (framställd på samma sätt som be- skrives i exempel 1). 29,20 3 20 (c = 1;vatten) hydantoin motsvarande D,L-metionin och 8 cm .li .\\ 448 883 7 pH-värdet ínntälles pâ 7,8 genom tíllsättning av en N nat- riumhydroxjdlöuning. Huuktionnblnndníngvnu volym instüilos på P00 cmj genom tillsättning av destillerat vatten. Reaktionen får äga rum under QU timmar vid 3700, varvid man håller pH-värdet vid 7,8 genom uuoccnuiv tiilsättning av en N natriumhydroxldlösning.Example 2. To 150 cm 3 of distilled water is added Ä g 3 of a collus suspension containing 0.6 g of dry substance (prepared in the same manner as described in Example 1). 29.20 3 20 (c = 1; water) hydantoin corresponding to D, L-methionine and 8 cm -1. The pH is adjusted to 7.8 by adding an N sodium hydroxide solution. The volume of the mixture is adjusted to P00 cm @ 2 by adding distilled water. The reaction is allowed to proceed for QU hours at 3700, keeping the pH at 7.8 by adding an N sodium hydroxide solution.
Koncentrationen av bildad D-metionin bestämmes i reaktions- mediet enligt Stein och Moores metod. Man erhåller en koncentra- tion av 17 g/liter, vilket motsvarar en omvandlingsgrad av 100%, räknat på den använda hydantoínen motsvarande D,L-metionin.The concentration of D-methionine formed is determined in the reaction medium according to Stein and Moore's method. A concentration of 17 g / liter is obtained, which corresponds to a degree of conversion of 100%, calculated on the hydantoin used, corresponding to D, L-methionine.
Reaktionsblandningen klargöres genom centrifugering och le- des därefter genom en katjonbytare (Dowex 50 i H+-form). Man er- håller härvid 2,7 g D-metionin (utbyte 80% räknat på den analytiskt bestämda mängden D-metionin). Produkten har följande egenskaper: [åšíåo -19,3° (c = 1; 5N H01) N% 9,36 - 9,Ä2 (teoretiskt 9,39) Den erhållna D-metioninen har en optisk renhet av nära 90%.The reaction mixture is clarified by centrifugation and then passed through a cation exchanger (Dowex 50 in H + form). 2.7 g of D-methionine are obtained (yield 80% based on the analytically determined amount of D-methionine). The product has the following properties: [åšíåo -19.3 ° (c = 1; 5N H01) N% 9,36 - 9, Ä2 (theoretical 9,39) The D-methionine obtained has an optical purity of close to 90%.
Exempo__ä. (a) Framställning av en enzymatisk komposition.Exempo__ä. (a) Preparation of an enzymatic composition.
Man framställer ett odlingsmedium med följande sammansätt- ning: glukos 20g/l; jästextrakt (DIFCO) 10 g/l: bakto-pepton (DIFCO) 10 g/1.A culture medium is prepared with the following composition: glucose 20g / l; yeast extract (DIFCO) 10 g / l: bacto-peptone (DIFCO) 10 g / l.
Detta medium fördelas i 250 cmj kolvar i en mängd av 50 cmš per kolv, varefter man steriliserar vid 12000 under 15 minuter.This medium is distributed in 250 cm 3 flasks in an amount of 50 cm 2 per flask, after which it is sterilized at 12,000 for 15 minutes.
Efter ympning med stammen Pseudomonas sp., HM-40 omskakas kolvarna (250 varv/minut) under 2ü timmar vid 3000.After inoculation with the strain Pseudomonas sp., HM-40, the flasks were shaken (250 rpm) for 2 h at 3000.
Innehållet i en kolv användes för ympning av en 2 liters jäsningsbehållare innehållande 1 liter av det ovan angivna mediet.The contents of a flask were used to inoculate a 2 liter fermentation vessel containing 1 liter of the above medium.
Kulturen får utvecklas under ZÄ timmar vid 30°C, varvid man omrör med en omrörare som roterar med 500 varv/minut och luftar med 1 liter steril luft/minut.The culture is allowed to develop for ZÄ hours at 30 ° C, stirring with a stirrer rotating at 500 rpm and aerating with 1 liter of sterile air / minute.
Efter avslutad odling avskiljes bakteriecellerna genom cent- rifugering, varpå cellerna suspenderas i 100 cm3 destillerat vatten.After completion of culture, the bacterial cells are separated by centrifugation, after which the cells are suspended in 100 cm 3 of distilled water.
Den erhållna suspensionen innehåller 8,9 g torrt cellextrakt. (b) Enzymatisk hydrolys av hydantoin motsvarande metionin.The resulting suspension contains 8.9 g of dry cell extract. (b) Enzymatic hydrolysis of hydantoin corresponding to methionine.
Man löser 5 g hydantoin motsvarande D,L-metionin i 200 cmj destillerat vatten. Man inställer pH-värdet på 7,5 genom tillsätt- ning av en O,1N natriumhydroxidlösning, varefter man tillsätter HU umš nv don ovan framställda oulinuuponnïonvn. Voiymvn inutüllun på 250 cmj, och roaktionsblandningen placeras i kvävgasatmosfär vid en temperatur av 3700. 448 883 8 Efter en reaktionstid av 5 timmar bestämmes halten metionin i reaktionsmediet på kromatografisk väg enligt Stein och Moores me- tod. Man beräknar cellsuspensionens hydantoinasaktivitet, dvs. antalet¿¿mol bildad metionin per mg torrt cellextrakt och per timme enzymatisk reaktionstid. Denna aktivitet är 4,5.5 g of hydantoin corresponding to D, L-methionine are dissolved in 200 cm 3 of distilled water. The pH is adjusted to 7.5 by adding a 0.1N sodium hydroxide solution, after which the HU umš nv don prepared above are added. The volume of the mixture is 250 cm 3, and the reaction mixture is placed in a nitrogen atmosphere at a temperature of 3700 DEG C. After a reaction time of 5 hours, the content of methionine in the reaction medium is determined by chromatographic method according to Stein and Moore's method. The hydantoinase activity of the cell suspension is calculated, i.e. the number of moles of methionine formed per mg of dry cell extract and per hour of enzymatic reaction time. This activity is 4.5.
Efter 22 timmars reaktionstid klargöres reaktionsblandningen genom centrifugering. Den bildade metioninen isoleras genom att reaktionsblandningen ledes genom en katjonbytare (Dowex 50 i H+- form), varvid man eluerar med en 2N ammoniaklösning.After 22 hours of reaction time, the reaction mixture is clarified by centrifugation. The methionine formed is isolated by passing the reaction mixture through a cation exchanger (Dowex 50 in H + form), eluting with a 2N ammonia solution.
Efter indunstning av eluatet till torrhet och torkning er- håller man 3,9 g D-metionin (utbyte 91%). Produkten har följande egenskaper: N% = 9,Ä (teoretiskt 9,39) Iøtjšo = -23° (c ='1; SN Hcl) Potentiometrisk titer: 98%.< Exempel H. Enzymatisk hydrolys av hydantoin motsvarande para-hydroxifenylglycin.After evaporation of the eluate to dryness and drying, 3.9 g of D-methionine are obtained (yield 91%). The product has the following properties: N% = 9, Ä (theoretical 9,39) Iøtjšo = -23 ° (c = '1; SN Hcl) Potentiometric titer: 98% <Example H. Enzymatic hydrolysis of hydantoin corresponding to para-hydroxyphenylglycine.
På samma sätt som beskrives i exempel 3(a) framställer man 100 cm; av en suspension innehållande 8,9 g torrt cellextrakt.In the same manner as described in Example 3 (a), 100 cm 3 are prepared; of a suspension containing 8.9 g of dry cell extract.
Man löser 5 g hydantoin motsvarande p-hydroxifenylglycin i 250 cmš destillerat vatten. Man inställer pH-värdet på 7,5 genom tillsättning av en 0,1N natriumhydroxidlösning, varefter man till- 3 av cellsuspensionen. Volymen inställes på 250 cm3, sätter 20 cm och reaktionsblandningen placeras i kvävgasatmosfär vid en tempera- tur av 37°C.5 g of hydantoin corresponding to p-hydroxyphenylglycine are dissolved in 250 cm 3 of distilled water. The pH is adjusted to 7.5 by adding a 0.1N sodium hydroxide solution, after which the cell suspension is added. The volume is set at 250 cm 3, set 20 cm and the reaction mixture is placed in a nitrogen atmosphere at a temperature of 37 ° C.
Efter en reaktionstid av 5 timmar bestämmes halten p-hydroxi- fenylglycin. Hydantoinasaktiviteten är 1,8¿gmol bildad aminosyra per mg torrt cellextrakt och per timme reaktionstid.After a reaction time of 5 hours, the content of p-hydroxyphenylglycine is determined. The hydantoinase activity is 1.8 μmol formed amino acid per mg dry cell extract and per hour reaction time.
Efter en reaktionstid av 22 timmar isoleras p~hydroxifenyl- glycinen genom att reaktionsblandningen ledes genom en katjonbytare (Dowex 50 i H+-form). Man erhåller härvid 3,78 g D-p~hydroxifenyl- glycin (utbyte 87%) i form av en kromatografiskt homogen produkt med följande egenskaper: N% = 7,6 (teoretiskt 8,H) [gjâo = -155° (c = 1; 5N Hcl) Potentiometrink Liter: 110%.After a reaction time of 22 hours, the p-hydroxyphenylglycine is isolated by passing the reaction mixture through a cation exchanger (Dowex 50 in H + form). 3.78 g of Dp-hydroxyphenylglycine (yield 87%) are obtained in the form of a chromatographically homogeneous product with the following properties: N% = 7.6 (theoretical 8, H) [gjâo = -155 ° (c = 1 ; 5N Hcl) Potentiometrink Liter: 110%.
Exempel 5. Man odlar stammen Pseudomonas sp. HM-H0 l ett odlingsmedium med följande sammansättning: glukos 20 g/1; dikalium- fosfat 7 g/1; monokaliumfosfat 3 g/1; maßncsiumsulfat 0,7 g/l; ...,-._.._.__.._...,.,. ....._ _. _, _....._....._,_,_,_ m; 448 883 9 mangansulfat 0,02 g/l; järn(II)sulfat 0,0? g/1; natriumklorid 1 g/1; hydantoin motsvarande D,L-metionin Bg/l; jästextrakt 2 g/l.Example 5. The strain Pseudomonas sp. HM-H0 1 a culture medium having the following composition: glucose 20 g / l; dipotassium phosphate 7 g / l; monopotassium phosphate 3 g / l; magnesium sulfate 0.7 g / l; ..., -._.._.__.._...,.,. ....._ _. _, _....._....._, _, _, _ m; Manganese sulphate 0.02 g / l; ferrous sulfate 0.0? g / l; sodium chloride 1 g / l; hydantoin corresponding to D, L-methionine Bg / l; yeast extract 2 g / l.
Man genomför en första förodling under 2U timmar i en 250 cmš kolv innehållande 50 cmš odlingsmedium. En andra förodling genom- föres under 2H timmar i en 2 liters jäsningsbehållare innehållande 1 liter odlingsmedium, varvid man ympar med innehållet i den kolv, vari den första förodlingen har genomförts.A first pre-culture is carried out for 2U hours in a 250 cmš flask containing 50 cmš of culture medium. A second pre-culture is carried out for 2H hours in a 2 liter fermentation vessel containing 1 liter of culture medium, inoculating with the contents of the flask in which the first pre-culture has been carried out.
Innehållet i jäsningsbehållaren med volymen 2 liter användes för ympning av en 7,5 liters jäsningsbehållare innehållande 5 liter odlingsmedium. Man genomför produktionsodling i den sistnämnda jäs- ningsbehållaren, varvid kulturen får utvecklas under 2H timmar vid 3700. Man luftar med 5 liter steril luft per minut och omrör med en omrörare roterande med 500 varm/minut.The contents of the 2-liter fermentation vessel were used to inoculate a 7.5 liter fermentation vessel containing 5 liters of culture medium. Production cultivation is carried out in the latter fermentation vessel, whereby the culture is allowed to develop for 2H hours at 3700. Aerate with 5 liters of sterile air per minute and stir with a stirrer rotating at 500 hot / minute.
Den under dessa betingelser erhållna biomassan utgör 3,8 g torrt material per liter odlingsmedium.The biomass obtained under these conditions constitutes 3.8 g of dry material per liter of culture medium.
Efter avslutad odling isoleras bakteriecellerna från odlings- medíet genom centrifugering, varefter cellerna suspenderas i 250 cm3 destillerut vatten. 10 g hydantoin motsvarande D,L-fenylglycin suspenderas i 400 cmš destillerat vatten, varpå pH-värdet inställes på 7,5 genom tillsättning av en 0,1N natriumhydroxidlösning. Man tillsätter 50 cmš av den ovan framställda cellsuspensionen, och reaktionsbland- ningens volym inställes på 500 cmš genom tíllsättning av vatten.After completion of culture, the bacterial cells are isolated from the culture medium by centrifugation, after which the cells are suspended in 250 cm 3 of distilled water. 10 g of hydantoin corresponding to D, L-phenylglycine are suspended in 400 cm 3 of distilled water, after which the pH is adjusted to 7.5 by adding a 0.1 N sodium hydroxide solution. 50 cmš of the cell suspension prepared above are added, and the volume of the reaction mixture is adjusted to 500 cmš by adding water.
Den enzymatiska reaktionen får äga rum i kvävgasatmosfär vid 3700, varvid pH-värdet hâlles på 7,5 under hela reaktionstiden om 17 tim- mar.The enzymatic reaction is allowed to proceed in a nitrogen atmosphere at 3700, keeping the pH at 7.5 for the entire reaction time of 17 hours.
Efter 17 timmars reaktionstid klargöres reaktionsblandningen genom centrifugering, varpå den indunstas till en femtedel av sin ursprungliga volym och surgöres till pH 1 genom tillsättning av koncentrerad saltsyra.After 17 hours of reaction time, the reaction mixture is clarified by centrifugation, then it is evaporated to one-fifth of its original volume and acidified to pH 1 by the addition of concentrated hydrochloric acid.
Den bildade fällningen avskiljes genom filtrering och torkas.The precipitate formed is separated by filtration and dried.
En kromatografisk analys visar, att fällningen utgöres av den hydan- toinsyra som motsvarar fenylglycin. Denna syra har följande egen- skaper: N% = 13,9% (teoretiskt 1H,4%) [qjšo = -137° (c = 1; ammoniak 17.) Utbytet av D-hydantoinsyra är 6,3%, räknat på tillförd mängd hydantoin.A chromatographic analysis shows that the precipitate consists of the hydantoic acid corresponding to phenylglycine. This acid has the following properties: N% = 13.9% (theoretical 1H, 4%) [qjšo = -137 ° (c = 1; ammonia 17.) The yield of D-hydantoic acid is 6.3%, calculated on added amount of hydantoin.
Moderlutarna koncentreras ytterligare, varefter pH-värdet ínställes på 5 genom tillsättning av natriumhydroxid. Den bildade 448 883 10 i -- fällningen av D-fenylglycin avskiljes genom filtrering, tvättas med vatten och med etylalkohol och torkas. Man erhåller härvid 7,6 g D-fenylglycin (utbyte 88%) med följande egenskaper: N% = 9,2 (teoretiskt 9,3) [qjšo = -1M8° (c = 1; 5N H01) Exempel 6. Man odlar Pseudomonas HM-H0 under samma betingel- ser som anges i exempel 5. Efter centrifugering suspenderas de av- skilda bakteriecellerna i en O,1M fosfatbuffert (pH 7,8). Den er- hållna suspensionen användes såsom katalysator för hydrolys av oli- ka hydantoiner. Följande hydrolysbetingelser användes. Den ur- sprungliga hydantoinkoncentrationen är 20 g/1 i en 0,1N fosfatbuf- fert (pH 7,8). Man använder 6,5 g biomassa (räknat såsom torrsub~ stans) per liter reaktionsblandning. Reaktionstemperaturen är 37°C, och reaktionstiden är 5 timmar.The mother liquors are further concentrated, after which the pH is adjusted to 5 by adding sodium hydroxide. The precipitate of D-phenylglycine formed is separated by filtration, washed with water and with ethyl alcohol and dried. 7.6 g of D-phenylglycine are obtained (yield 88%) with the following properties: N% = 9.2 (theoretical 9.3) [qjšo = -1M8 ° (c = 1; 5N H01) Example 6. Pseudomonas HM-H0 under the same conditions as in Example 5. After centrifugation, the separated bacterial cells are suspended in a 0.1 M phosphate buffer (pH 7.8). The resulting suspension was used as a catalyst for hydrolysis of various hydantoins. The following hydrolysis conditions were used. The initial hydantoin concentration is 20 g / l in a 0.1N phosphate buffer (pH 7.8). 6.5 g of biomass (calculated as dry matter) are used per liter of reaction mixture. The reaction temperature is 37 ° C, and the reaction time is 5 hours.
Den bildade aminosyran analyseras i reaktionsblandningen, och med hjälp av den bestämda halten beräknas cellextraktets enzyma- tiska aktivitet.The amino acid formed is analyzed in the reaction mixture, and with the aid of the determined content the enzymatic activity of the cell extract is calculated.
De erhållna resultaten är sammanställda i nedanstående tabell, där de angivna aktivitetsvärdena är uttryckta i nmol bildad amino- syra per mg torrt enzymatiskt extrakt och per timme reaktionstid.The results obtained are summarized in the table below, where the stated activity values are expressed in nmol formed amino acid per mg dry enzymatic extract and per hour reaction time.
H* 448 883 11' Akt ivitet Substrat Formel “HA@5qfl ' co -- nu Hydantoin motsva- ~“' rande DL-metionin CH3-S-cH2_CH3_cH'“*'NH ._ go 2'# Hydantoín motsva- co--NH rande DL-fenyl- / \ CE _03 f' | 2 0 a-lanin __ 2 . ___ ' H dantoin motsva- CE C0-NH rånde DL-leucin 3\\ 'I | /cx-cxa-cfl \ 1 , 6 CH; NH -CO Hydantoin motsva- ,,C0'*"NF _ - CH -CH -CE -CH 1 0 rande DL valln 3 2 2 \NH___Co 1 Hydantoin motsva- ,/C0"'NE rande DL-trypto- 032-03-\ 1 0,7 fan I MH - co NH ' Hydantoin motsva~ _CH/'C°'“_TE 0 6 rande DL-fenyl- -NB___Co ' glycin Hydantoin møtsva- /,C°'__?H rande DL-para- H0 CH 0 5 hydrçxifenyl- “\NE __g0 ' glycln _ Rabemisk cyano- C0"NH propylhydantoln CN_cH2_CE2_cH2_cH 1 3w5 NE-CO Hydantoin motsva~ 0' CO--NH rande DL-meta- CH¿/ i O 7 hydroxlfenyl- > -\NH___C° 1 glycin 448 ass 12 Exempel 7.* En cellsuspension av Pseudomonas HM-H0 i fosfat- buffert framställes på samma sätt som beskrivas i exempel 6. Denna suspension innehåller 6,5 g torra celler per 100 cmš. Före använd- ningen krossas cellerna med hjälp av ultraljud under följande be- tingelser. Man använder en Pons-apparat försedd med en sond TCNC.H * 448 883 11 'Activity Substrate Formula “HA @ 5q fl' co - now Hydantoin corresponding to DL-methionine CH3-S-cH2_CH3_cH '“ *' NH ._ go 2 '# Hydantoin corresponding to -NH rande DL-phenyl- / \ CE _03 f '| 2 0 a-lanin __ 2. ___ 'H dantoin corresponds to CE C0-NH raw DL-leucine 3 \\' I | / cx-cxa-c fl \ 1.6 CH; NH -CO Hydantoin equivalent- ,, C0 '* "NF _ - CH -CH -CE -CH 1 0 rande DL valln 3 2 2 \ NH ___ Co 1 Hydantoin equivalent-, / C0"' NE rande DL-trypto- 032-03 - \ 1 0,7 fan I MH - co NH 'Hydantoin equivalent ~ _CH /' C ° '“_ TE 0 6 edge DL-phenyl- -NB ___ Co' glycine Hydantoin meets- /, C ° '__? H edge DL-para - H0 CH 0 5 hydroxyphenyl- "\ NE __g0 'glycline _ Rabemic cyano- C0" NH propylhydantoin CN_cH2_CE2_cH2_cH 1 3w5 NE-CO Hydantoin corresponding to ~ 0' CO - NH radical DL-meta- CH Example 7 * A cell suspension of Pseudomonas HM-H0 in phosphate buffer is prepared in the same manner as described in Example 6. This suspension contains 6.5 g of dry cells per 100 cm 3. The cells are crushed by ultrasound under the following conditions: Use a Pons device equipped with a TCNC probe.
Ultraljudfrekvensen är 20 kHz. Den behandlade volymen är 15 cmš, temperaturen hâlles nära 000, och behandlingstiden är 10 minuter.- Den sålunda behandlade suspensionen användes såsom katalysa- tor för hydrolys av de hydantoiner som motsvarar metionin, fenyl- alanin respektive fenylglycin, varvid hydrolysen genomföres under samma betingelser som anges i exempel 6. I nedanstående tabell an- ges de uppmätta aktiviteterna i pmol bildad aminosyra per mg enzy- matiskt extrakt och per timme reaktionstid.The ultrasonic frequency is 20 kHz. The volume of treatment is 15 cm @ 2, the temperature is kept close to 000, and the treatment time is 10 minutes. is given in Example 6. The table below gives the measured activities in pmol of amino acid formed per mg of enzymatic extract and per hour of reaction time.
Substrat I Aktivitet lpM/(mg-h) Hydantoin motsvarande DL-metionin . I 1,7 Hydantoin motsvarande DL-fenylalanín 1,0 Hydantoin motsvarande DL-fenylglycin 0,8 Exempel 8. En cellsuspension av Pseudomonas sp. HM-H0 i vat- ten framställes pâ samma sätt som beskrives i exempel 5. Den fram- ställda suspensionen innehåller 7,3 g torra celler per 100 cmš.Substrate I Activity lpM / (mg-h) Hydantoin corresponding to DL-methionine. In 1.7 Hydantoin corresponding to DL-phenylalanine 1.0 Hydantoin corresponding to DL-phenylglycine 0.8 Example 8. A cell suspension of Pseudomonas sp. HM-H0 in the water is prepared in the same manner as described in Example 5. The prepared suspension contains 7.3 g of dry cells per 100 cm 3.
Suspensionen lyofiliseras före användning under följande betingelser. 120 cm5 suspension fördelas i fyra kolvar med volymen 500 cmš.The suspension is lyophilized before use under the following conditions. 120 cm5 suspension is distributed in four flasks with a volume of 500 cmš.
Innehållet i kolvarna fryses och hålles under förminskat tryck (0,5 X 1o'2 serat enzymatiskt pulver, vilket användes för hydrolys under samma mm Hg) under 16 timmar. Man erhåller härvid 8,8 g lyofili- betingelser som anges i exempel 6. I nedanstående tabell anges de uppmätta aktiviteterna i pmol bildad aminosyra per mg torrt extrakt och per timme reaktionstid. 13 448 885 Uubuhrut Aki/Ä Vlßüí, pM/(mg-h) Hyduntuín mmLuvuvundc Uh~mnLínnln 2,5 Hydantoín motsvarande DL~fenylg1ycín 0,14 Hydantoin motsvarande DL-fenylalanin 1,5The contents of the flasks are frozen and kept under reduced pressure (0.5 X 10 -2 serated enzymatic powder, which was used for hydrolysis under the same mm Hg) for 16 hours. This gives 8.8 g of lyophilization conditions as given in Example 6. The table below gives the measured activities in pmol of amino acid formed per mg of dry extract and per hour of reaction time. 13 448 885 Uubuhrut Aki / Ä Vlßüí, pM / (mg-h) Hyduntuin mmLuvuvundc Uh ~ mnLínnln 2,5 Hydantoin corresponding to DL ~ phenylglycine 0.14 Hydantoin corresponding to DL-phenylalanine 1.5
Claims (8)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR7912285A FR2456728A1 (en) | 1979-05-15 | 1979-05-15 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF D-A-AMINOACIDS |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8003630L SE8003630L (en) | 1980-11-16 |
| SE448883B true SE448883B (en) | 1987-03-23 |
Family
ID=9225470
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8003630A SE448883B (en) | 1979-05-15 | 1980-05-14 | PROCEDURE FOR PREPARING D-ALFA AMINO ACIDS |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55153595A (en) |
| BE (1) | BE883322A (en) |
| CH (1) | CH643299A5 (en) |
| DE (1) | DE3018584A1 (en) |
| FR (1) | FR2456728A1 (en) |
| GB (1) | GB2051053B (en) |
| IT (1) | IT1131185B (en) |
| NL (1) | NL8002627A (en) |
| SE (1) | SE448883B (en) |
| SU (1) | SU984405A3 (en) |
| UA (1) | UA5567A1 (en) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1209495B (en) * | 1984-02-02 | 1989-08-30 | A San Donato Milanese Milano | PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF L-ALPHA-AMINO ACIDS. |
| JPS6356278A (en) * | 1986-08-27 | 1988-03-10 | Nippon Soda Co Ltd | Bacterium ns214 belonging to genus pseudomonas and production of d-amino acid |
| IT1276163B1 (en) | 1995-11-23 | 1997-10-27 | Eniricerche Spa | IMPROVED PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF D-ALPHA-AMINO ACIDS |
| IT1277125B1 (en) | 1995-12-21 | 1997-11-04 | Eniricerche Spa | THERMOSTABLE MUTANTS OF D-N-ALPHA-CARBAMYLASE |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1039757B (en) * | 1975-07-10 | 1979-12-10 | Snam Progetti | ENZYMATIC COMPLEXES FOR TRANSFORMING IDANTOIN RACEME INTO OPTICALLY ACTIVE AMINO ACIDS AND THEIR APPLICATION |
| JPS5344690A (en) * | 1976-02-04 | 1978-04-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | Preparation of d-n-carbamylphenylglycine and its substituted derivatives |
| US4211840A (en) * | 1977-06-08 | 1980-07-08 | Ajinomoto Company, Incorporated | Method for producing D-α-amino acid |
| JPS542398A (en) * | 1977-06-08 | 1979-01-09 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of d-alpha-amino acid |
-
1979
- 1979-05-15 FR FR7912285A patent/FR2456728A1/en active Granted
-
1980
- 1980-05-07 NL NL8002627A patent/NL8002627A/en not_active Application Discontinuation
- 1980-05-13 GB GB8015758A patent/GB2051053B/en not_active Expired
- 1980-05-14 BE BE0/200638A patent/BE883322A/en not_active IP Right Cessation
- 1980-05-14 UA UA2919350A patent/UA5567A1/en unknown
- 1980-05-14 SE SE8003630A patent/SE448883B/en not_active IP Right Cessation
- 1980-05-14 SU SU802919350A patent/SU984405A3/en active
- 1980-05-14 CH CH378980A patent/CH643299A5/en not_active IP Right Cessation
- 1980-05-14 DE DE19803018584 patent/DE3018584A1/en not_active Ceased
- 1980-05-15 IT IT22089/80A patent/IT1131185B/en active
- 1980-05-15 JP JP6465580A patent/JPS55153595A/en active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55153595A (en) | 1980-11-29 |
| BE883322A (en) | 1980-11-14 |
| FR2456728A1 (en) | 1980-12-12 |
| NL8002627A (en) | 1980-11-18 |
| SE8003630L (en) | 1980-11-16 |
| JPS6319158B2 (en) | 1988-04-21 |
| CH643299A5 (en) | 1984-05-30 |
| GB2051053A (en) | 1981-01-14 |
| GB2051053B (en) | 1983-07-20 |
| UA5567A1 (en) | 1994-12-28 |
| SU984405A3 (en) | 1982-12-23 |
| FR2456728B1 (en) | 1983-11-10 |
| DE3018584A1 (en) | 1980-11-27 |
| IT8022089A0 (en) | 1980-05-15 |
| IT1131185B (en) | 1986-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2235419C (en) | Microorganisms and processes for the fermentative preparation of l-cysteine, l-cystine, n-acetylserine or thiazolidine derivatives | |
| FI87579B (en) | FRAMEWORK FOR MICRO-ORGANISMS | |
| CN1246155A (en) | Method for production of dicarboxylic acids | |
| CS211400B2 (en) | Method of microbiological enzymatic production of d-aminoacids | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| JPH06343462A (en) | Method for producing new microorganism and l-alpha-amino acid, method for cultivating mutant and metamorphosis of new microorganism, method for obtaining gene for coding carbamoylase and/or hydantoinase and/or hydanto-inracemase and method for inserting gene for coding carbamoylase and/or hydantoinase and/or hydantoinrace-mase into microorganism or cell | |
| CA1208579A (en) | Microorganisms of the genus hyphomicrobium and process for degrading compounds which contain methyl groups in aqueous solutions | |
| JP3905575B2 (en) | Novel microorganism, method for producing L-α-amino acid, method for culturing mutant strain and mutant of novel microorganism, method for obtaining gene encoding carbamoylase and / or hydantoinase and / or hydantoin racemase, and carbamoylase and / or hydantoinase and / or Or insertion of a gene encoding hydantoin racemase into a microorganism or cell | |
| SE448883B (en) | PROCEDURE FOR PREPARING D-ALFA AMINO ACIDS | |
| JPH0552195B2 (en) | ||
| US4418146A (en) | Preparation of D-N-carbamyl-α-aminoacids and micro-organisms for carrying out this preparation | |
| KR850001533B1 (en) | Enzymatic de esterification of cephalosporin methyl ester | |
| US5100782A (en) | Process for the preparation of l-amino acids and amino acid amides | |
| JP2670838B2 (en) | Method for producing L-α-amino acids | |
| Ôtsuka et al. | Fermentative production of L-glutamic acid from α-ketoglutaric acid and ammonium salt | |
| JP2843596B2 (en) | Process for producing novel D-amidase and D-α-alanine and / or L-α-alanine amide | |
| Behrendt et al. | The Production of l‐serine with a methylotrophic microorganism using the l‐serine pathway and coupling with an l‐tryptophan‐producing process | |
| EP0102529B1 (en) | Process for preparation of aspartylphenylalanine alkyl esters | |
| JPS6125358B2 (en) | ||
| JPS61274690A (en) | Production of d-alpha-amino acid | |
| KR0146493B1 (en) | Process for producing l-alanine by fermentation | |
| JP2899071B2 (en) | Method for producing L-α-alanine | |
| JPH0370472B2 (en) | ||
| JPS582677B2 (en) | Production method of L-serine | |
| JP3771750B2 (en) | Enzyme production medium |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 8003630-4 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8003630-4 Format of ref document f/p: F |