SE447386B - Aminoglykosider, komposition innehallande dem samt forfarande for framstellning av dem - Google Patents

Description

44-7 386 Föreliggande uppfinning avser även ett förfarande för fram- ställning av föreningar med följande formel *fl 6$H-NH-R2 ¥H2 i O f 5' \ l 6 « ar. (I) 4: 1 20H 5 OH a' 2' /\\\ \ ; *f Û 3 3 NH2 ?-CH3 Rs vari R1, R2 och R3 är definierade såsom ovan, vilket förfarande omfattar att man behandlar en förening med följande formel -«OCH (II) 5 vari R1 och R2 är definierade såsom ovan, med en stark syra och eventuellt skyddar aminogrupperna vid 1- och 2'-ställningarna eller amino- eller metylaminogruppen vid 6'-ställningen hos er- hållen förening, sedan acylerar den med glycin eller 4-amino-Z- hydroxismörsyra, i vilken aminogruppen är skyddad, eller ett 10 reaktivt derivat därav, eventuellt reducerar den acylerade produk- ten och sedan avspjälkar den skyddade gruppen och, om så önskas, omvandlar produkten till ett farmaceutiskt godtagbart syraaddi- tionssalt därav.

Det har nu visat sig, att de nya föreningarna med formeln 15 (I)-1 med en hydroxylgrupp vid 5-ställningen uppvisar högre anti- biotisk verkan än föreningar med formeln (ll) med -DCH3 vid 5- ställningen, och att föreningarna med formeln (I)-1 fördelaktigt kan alstras i höga utbyte genom mindre förfarandesteg genom att behandla föreningarna med formeln (Il) med en meotoxigrupp vid ZÜ 5-ställningen med starka syror, följt av acylering.

Utgångsaminoglykosiden, som användes för att framställa föreningen med formeln (I), motsvaras av följande formel _;1 10 15 447 586 3 É1 6gH-NH“R2 _ $H2 I i /SI Of\_ [Å 6 \ VVOCH (II) 5s'2'}fl\\ åâïïyáy 3 Vß-'W s 20 3 NH N-CH 2 I 3 H vari R och H2 är identiska eller olika och vardera betecknar l , en väteatom eller en metylgrupp.

Föåeningarna med Följande formel *u ?H3 6§H-NH: NH ¿ I ,%T“0 KL' 1>. ZàH 65 \3I 2' \_ ,' r 'å/f 1 iof' 3 : oas NH2 n-en 3 ; 3 H5' (A) vari R5' betecknar väte, -COCHQNHQ, -COCHZNHCONHZ eller -COCH2NHCH0; och syraadditionssalterna därav är kända såsom anti- biotíkumet KA-6606 eller sporaricin (t ex DE-OS 281 3021).

Såsom beskrives i detalj i ovanstående DE-OS, kan före- ningarna med formeln (A) alstras genom ett förfarande, fattar odling av en antibiotikum KA-6606-alstrande stam av S031 Om” släktet Saccharopolyspora och isolering av antibiotikumet KA-6606 från odlingsvätskan. hirsuta KC-6606 stammen.

Nr 3921 i Fermentation Research Institute, Agency of Industrial En typisk stam är Saccharopolyspora Denna stam deponerades såsom FERM-P Japan; såsom ATCC nummer 20501 i American och såsom DSM 1258 i German Collection Science & Technology, Type Culture Collection; of Microorganisms (Deutsche Sammuhug von Microorganismen).

Såsom beskrives i DE-OS 281 3021 kan det kända antibioti- kumet KA-6606 vidare separeras i fyra antibiotika KA-6606 I, KA-6606 II, KA-6606 III och KA-6606 IV, och KA-6606 I, KA-6606 :LI KA~boUö IV kan lätt omvandlas till KA-6006 II genom behand- Andra antibiotika KA~6606 V och och ling med alkalier eller syror. - ..,......--~«uq-_-p~u--p-- TU 15 30 35 447 386 4 KA-6606 VI kan separeras från antibiotikumet KA-6606. Molekyl- formlerna och specifika vridningar av KA-6606 I till VI, som hör till utgångsföreningarna med formeln (A) ges nedan.

Antibiotika Molekylformel Sgecifik vridning "*“""'*"'" ""“'““T““"“ 2 KA-66o6I cl7H35o5H5 {a}B7 + 1ou° (G1, H20) KAf66o6II cl5H52ouNu {a}D7 + 139,5° (cr, H20) KA-660611: cl8H35o6N6 {u)š7 + 1o3° (ei, H20) f' - . O KA-suosiv cl8H55o6H5 {a}D7 + 1010 (cl. H20) KA-oßocv cl5H¿2ouN¿ {a}š5 + 105 (cl, H20) KA-66o6vI cl5H32ouNu {u}25 + 5H° (cl, H20) Grunperna Rl, R2 och R3' i KA-6606 I till VI i formeln (II)-1 är tabulerade nedan.

R I _; “ fä _fi_ KA-56061 cH3 H cocH2NH2 KA-660611 CHB H H KA-6606111 CH; H cocH2NHcoNH2 KA-66o6Iv CHB H cocH2NHcHo KA-56o6v cH3 H H KA-66o6vI cH3 H H KA-5606 II, V och VI skiljer sig i sterisk konfiguration vid l- och H-ställningarna.

Beskrivningen i DE-OS 281 3021 beskriver i detalj sepa- rationen av KA-6606 I till IV motsvarande formeln (A). KA-6606 V och VI kan separeras på liknande sätt under separationen av KA-6606 I till IV från rå KA-6606, som erhållits på sättet beskri- vet i ovanstående tyska beskrivning. Exempelvis âstadkommes rå KA-6606 att adsorberas på ett adsorberingsmedel, såsom en katjon- bytarharts av svag syratyp, "CM-Sephadex" eller CM~cellulosa, och elueras med en gradíentmetod eller en stegvis metod under använd- ning av vattenhaltig ammoniak, en vattenhaltig lösning av ammo- niumkarbonat, en vattenhaltig lösning av ammoniumformiat, etc.

Först elueras flera spårkomponenter, och KA-6606 IV och sedan KA-6606 III elueras såsom fria baser. Vid ytterligare eluering separeras i följd KA-6606 I, VI och II substanser och slutligen _ separeras KA-6606 V.1,¿ :_- Dessa erhållna komponenter kan renas genom att lämpligt kombinera kromatografi på cellulosa, silikagel, etc., och kroma- tografi på "Sephadex"-serier, såsom LHZO. Exempelvis kan de re-. nas genom kromatografi med kloroform/metanol/l7-procentig ammo~' 10 15 25 30 447 386 niaklösning (l:8:3) på en silikagelkolonn.

Ernâllna fria basen sättes sedan till en kolonn av ett an- jonbytarharts av stark bastyp, såsom "Dowex lX2" (en produkt från Dow Chemical Company) och elueras exempelvis med vatten.

De aktiva fraktionerna uppsamlas och lyofiliseras för erhållande av rena fria baser. Dessa fria baser kan omvandlas till de mot- svarande syraadditionssalterna på ett vanligt sätt genom till- sats av oorganiska syror, såsom saltsyra, svavelsyra eller brom- vätesyra eller karbonsyra, eller organiska syror, sasom ättiksyra eller oxalsyra.

Andra föreningar med formeln (II), som användes såsom ett utgångsmaterial i föreliggande uppfinning, beskrives i den tyska patentansökningen P 29 28 373.

Dessa föreningar kallas antibiotika KA-7038 eller sannamycin¿ Antibiotika KA-7038 kan alstras genom ett förfaran- de, som omfattar odling av en stam, som alstrar en antibiotisk substans KA-7038 och som hör till släktet Streptomyces, och iso- lering av den antibiotiska substansen KA-7038 från odlingsvätskan.

En typisk stam är Streptomyces sp. KC-7038. Denna stam KC-7058 deponerades såsom FERM-P Nr A388 i Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science & Technology, Japan; såsom ATCC num- mer 3l53O i American Type Culture Collection; och såsom DSM Nr l59H i German Collection of Microorganisms.

Substansen KA-7058 kan vidare separeras i sju antibiotika, KA-70381, KA-YOBÖII, KA-TOBBIII, KA-7058IV, KA-YOESV, KA-70š8VI och KA-7038VII, och de kan lätt omvandlas till syraadditionssalter därav genom behandling med syror.

Formlerna och fysikaliska och kemiska egenskaper av ut- gångsföreningarna KA~7038I till VII ges nedan.

Substans KA-ï0}8I ICHQNHCÛBIE ïlHg L-O_ _ (är .\ OH :lå/YZ CH; \ - .»_ _ \ . \_ O _: _ -l ~ COCH2JH2 i I NH2 OCH3 Molekylformel: Cl7H35O5N5 Specifik vridning: {u}š5 + 120,50 (c 1, H20) smaltpunkt; 85 - 90% 447 386 6 Substans KA-7038II:- (IIHQNI-Ig IšIHZ F /,">°H I OH / \ I 0 NHZ NHCHB Molekylformel: Cl3H28OuNu Speciflik vridning: {d}š5 + 610 (c i, H20) smä1fipunks= 85 - 10200 ' $ubstans KA-7038III:- CH2NHCH3 NHZ f š ' o \_\ CH; <\__fi//\\\ /// qn N H : o L.- NHZ OCH; Molekylformel: Cl5H32OuNu Specifik vridning: {u}â5 + 780 (c 0,5, H20) smälupunxtz 7h - 83°c Substans KA-7038IV:- CH NH “IH OH I 2 2 lf -' O O , ä-OCH \ f ïl/'f 3 . \ _ NHZ OH :JHCIIB Molekylformel: Cluá30O5Nu Specifik vridning: {u}š5 + 1150 (c 0,1, H20) smä1cpunkt= ~ 78 - 82°c 447 386 Substans KA-7038V:- (ïlíízïhlg NH Än-Q / i .x f Hg' _14 '.___( \._ O \:__.( OCHB NHQ NUCH; Molekylformel: CluH5OOuN4 Specifik vridning: {a}â5 + 980 (c 0,5, H20) Substans KA-7058VI:- CflâNflChf NH > 5 2 ,__0 1 OCH. , \\ -\' 5 OH N “ 0,-/\ :sig (m3 Molekylformel: Cl5H52OuNu F Specífik vridning: {u}š3 + 560 (c l, H20) Substans KA-Tüjßl/'II : - CH, IIH NH. 1' a 2 i 2 oss for 5 <1 ,;\ /fl/ozf Ä; \\ _; \¿i~è',\ NHZ líflCííš Molekylformel: CluflšoOullu Specifik vridning: {a}š5 + 590 (c l, H20) I föreliggande uppfinning kan antibiotifla KA~7038 erhållas genom att odla en KA~70}8-alstrande stam, såsom FERM-P Nr A388 stam eller ATCC 31535 stam, i ett näringsmediam, som innehåller en kolkälla, en kvävekälla och mineraler, och frånskilja KA-7038 5 från odlingsvätskan.

Lämpliga odlinqsmedia för användning vid jäsning av stam- men av släktet streptomyces, vilken stam alstrar substansen KA-YÜj3, omfattar kolf och kvävekällor och såsom eventuella be~ ständsdelar oorganisxa salter, (mineraler), mycket små mängder 10 av tunga metaller, etc. gp 10 15 35 40 447 586 Olika kolkällor kan användas och exempel på lämpliga kol- källor är glukos, stärkelse, sackaros, fruktos, dextrin, melass och glycerol, som kan användas antingen ensamma eller såsom lämp- liga blandningar. Kolväten, alkoholer, organiska syror och ve- getabiliska oljor kan även användas, om den använda stammen kan utnyttja dem såsom en kolkälla.

Exempel på kvävekällor är sojabönmjöl, jästextrakt, torkad jäst, pepton, köttextrakt, majsstöpvatten, kasaminosyra, lösliga destillationsåterstoder, ammoniumklorid, ammoniumsulfat, ammonium- nitrat, karbamid och natriumnitrat, som kan användas antingen en- samma eller såsom lämpliga blandningar. Exempel på oorganiska sal- ter omfattar natriumklorid, nitrater, kalciumkarbonat, kaliumklo- rid, koboltklorid och järn(II)sulfat.

Oorganiska substanser och organiska substanser (t ex amino- syror), som hjälper till vid tillväxten av stammen och gynnar alst- ringen av substansen KA-7038, kan även sättas till odlingsmediet, då så behövs. När en luftande odlingsmetod användes, kan ett an- tiskummedel, såsom fettsyraoljor, silikonoljor, bomullsfröolja och paraffiner, även sättas till odlingsmediet.

Odling kan utföras i ett fast medium. Lämpligen användes emellertid på samma sätt som i det allmänna förfarandet för alst- ring av antibiotika en vätskeformig odlingsmetod, speciellt en submers odlingsmetod. Odlingen utföres under aeroba förhållanden och odlingstemperaturen är lämpligen ca 20 till ca 3500, mera lämplig: ca 2H° till ca 27°c. odlingsmediets pH vid ca 4 till ca 10. ca 2 dagar till ca 10 dagar.

Såsom ett resultat av odlingen alstras substansen KA-7038 När mängden av substansen Lämpligen hålles under odlingen Odlingstiden är vanligen och ackumuleras i odlingsvätskan.

KA-7038, som alstrats i odlingsvätskan, når ett maximum, stoppas odlingen. Substansen KA-7038 kan uppsamlas från odlingsvätskan.

Emedan substansen KA-7038 är en vattenlöslig basisk subs- tans, löslig i vatten men svårlöslig i vanliga organiska lösnings- medel, kan den frånskiljas från odlingsvätskan genom att utnyttja förfarandena, som vanligen användes vid isolering och rening av vattenlösliga basiska antibiotika. Exempelvis kan man använda en adsorption-desorptíonsmetod under användning av ett jonbytar- harts, aktivt kol etc., kolonnkromatografisk metod under använd- ning av cellulosa, silikagel, aluminiumoxid, etc., och en metod för extraktion med butanol, amylalkohol, etc. under användning u. 10 V.. 25 40 447 386 av en högre fettsyra såsom ett hjälpmedel.

Om exempelvis odlingsvätskefiltratet sättes till en kolonn av ett svagt surt katjonbytarharts, adsorberas substansen KA-7038 på det. Substansen KA-7038 isoleras sedan genom eluering med 0,1-3,0 N alkali eller syra. Erhållet aktivt eluat kan lyo- filiseras för att ge ett rått pulver av substansen KA-7038.

Exempel på det svagt sura katjonbytarhartset, som användes för att utvinna KA-7058, är "Amberlite" IRC-50, IRC-8H och CG-50 (Bohm & Haas Co.); och "Diaion" HK-10 och NK-20 (Mitsubishi Chemical Co., Ltd.). Exempel på alkalier, som kan användas för elueringen, är ammoniumhydroxidlösnínq och en vattenhaltíg lös- ning av natriumhydroxid. Exempel på syrorna är myrsyra, saltsy- ra och svavelsyra. Ett annat exempel på utvinninqsmetoden omfat- tar reglering av odlingsvätskefiltratets pH till 7 till 9, bring- ande filtratet i kontakt med aktivt kol för att förorsaka subs- tansen KA-7038 att adsorberas på det aktiva kolet och eluerinq av substansen med surt vatten.

Substansen KA-7053, som kan isoleras genom ovan beskrivna metoder, kan separeras i KA-7038 I, II, III, IV, V, VI och VII genom att upplösa den i vatten, sätta den till en kolonn av ett adsorberande medel, såsom ett svagt surt jonbytarharts av ovan be- skriven typ eller en svagt sur jonbytare, såsom "CH-Sephadex" eller "CM-cellulosa", för att bringa substansen att adsorberas på det ad- sorberande medlet och sedan eluera den med en alkalisk vattenhal~ tig lösning, såsom utspädd ammoniumhydroxíd eller en vattenhaltig lösning av ammoniumkarbonat eller ammoniumformiat, med en gradient- metod eller en stegvis metod. Enligt detta separationsförfarande separeras i följd substansen KA-7038 IV, substansen KA-7038 VII, substansen KA-TO33 I, substansen KA-7053 II, substansen KA-7038 VI, substansen KA-7053 III och substansen KA-7055 V såsom fria baser.

Erhållna separerade substanser KA-7053 I, II, III, IV, V, VI och VII kan vara i pulverform genom att man koncentrerar elua- tet och lyofiliserar kondensatet. De kan renas genom kolonnkroma- tografi på t ex cellulosa, starkt basiskt anjonbytarharts. Exem- pelvis genom upplösning av pulvret i vatten, bringande dem att adsorheras på en kolonn av ett starkt basískt anjonbytarharts, såsom "Dowex lx2" (Dow Chemical), eluering av dem med dejoníserat vatten, uppsamling av aktiva fraktioner och lyofllisering av de uppsamlade fraktionerna. Dessa substanser KA-7038, som erhållits såsom fria baser, kan omvandlas till syraadditionssalterna därav 15 447 see 10 genom-behandling med farmaceutiskt godtagbara oorganiska eller organiska syror. Exempel på sådana syror är oorganiska syror, såsom svavelsyra, saltsyra, jodvätesyra, fosforsyra, kolsyra, salpetersyra etc., och organiska syror, såsom ättiksyra, fumar- syra, maleinsyra, citronsyra, mandelsyra och bärnstenssyra.

Substansen KA-7038 III har substansens KA-7038 I struktur- formel, vari glycylgruppen -COCH2NH2 är avspjälkad. Därför kan substansen KA-7058 III även erhållas genom att behandla substan- sen KA-7033 I med alkalier eller syror för att sönderdela substan- sen KA-7038 I och omvandla den till substansen KA-7038 III. Den- na omvandling kan utföras genom att behandla substansen KA-7058 med en 0,1-Ä N vattenhaltig lösning av ett alkaliskt reagens, så- som natriumhydroxid eller bariumhydroxid, eller med en 0,1-l N vattenhaltig lösning av ett surt reagens, såsom saltsyra eller svavelsyra.

Vid fallet att man använder det alkaliska reagenset, kan ett starkt basiskt anjonbytarharts {t ex "Amberlite IRA Ä00" (QH_ form) eller "Dowex lx2" (OH_ form)} tillsättas och reaktio- nen kan utföras i det suspenderade tillståndet. På :amma sätt kan, när det sura reagenset användes, ett starkt surt katjonbytar- harts, såsom "Amberlite IR l20" (H+ form) eller "Dowex 50x8" (E+ form),tillsättas och reaktionen kan utföras i det suspendera- de tillståndet. 1oo°c i ca 0,5 till 3 timmar.

Enligt föreliggande uppfinning tillhandahållas ett nytt' Reaktionen kan vanligen utföras vid ca 50 till kommersiellt fördelaktigt förfarande för framställning av kända antibiotika, de-Û-metyl-fortimiciner (US-PS N l2U 756), med f;rfieln ,1;-2 R |,1 H-“IH-R si: 1 2 nu, on X f'šï_u 'x ." v v;\ /ÉÅHS §>~-oH (I)-2 \ / \_' .ih-if : 0 3 3 NH _ 2 :lv CH; “s vari H1, R2 och R5 är definierade såsom ovan 1U 20 'timicin B, som motsvarar formeln (I)-2, 447 386 11 från kända antibiotika, fortimiciner (beskrivna t ex j US-PS 3931400, 3976768 och 40A8015, DE-05 2418349 och 2748530 och japanska utläggningsskriften 95548/79, med följande formeln (II)-2 H1 i 6FH~flH2 yH2 OH -..n ;__.; /êv /1 Se., _. i , r, -. II)-I.. qäg'2¿n~\K /råqfl q¿»« 1; ( z z 0 2 NH2 ¥~CH5 I H3 vari Rl och RB' är definierade såsom ovan, Enligt metoden beskriven i US~PS Ä l2U 756 för att alstra de-O-metyl-derivaten ~f{formeln (I)-2 } formeln (II)-2, bringas exempelvis fortimicin B (motsvarande formeln(II)-2, vari El betecknar metyl och R5' betecknar väte) att reagera med en överskottsmängd av metalliskt litium i ett lösningsmedel, såsom etylamín eller etylendiamin, för att bilda av fortimicinerna med de-O-metyl-fortimicin B (motsvarande formel (I)-2 , vari Bl be- tecknar metyl och RB betecknar väte). När den primära amino- gruppen hos de-O-metyl-fortimicin B är skyddad och metylamino- gruppen vid U~ställnlnqen är acylerad, följt av avspjälkning av den skyddande gruppen för aminogruppen, erhålles en förening mot- exempelvis betecknar en glycyl- Redaktion svarande formeln (I)-2 , vari H5 grupp ~COCH2NH2, vilket är de-O-metyl-fortimicín A. av denna förening ger i utbyte de~O:metyl~H-N-(ß-aminoetyl)-for- vari H5 betecknar en B~aminoetylgrupp.

Emellertid är denna metod_kommersiellt ofördelaktig, eme- dan utbytet i det första steget för att klyva metyletern endast är 1,5 %. ter erhållas i kommersiellt användbara utbyten från fortimicíner Enligt föreliggande uppfinninq kan dc-O-metyl-produk- och KA-6606 och KA-7038 substanser med en därtill liknande struk- tur. Speciellt kan föreningarna med formeln (I)-2 erhållas i ett utbyte så högt som mer än 10 gånger det, som erhålles i den förut angivna kända metoden genom att behandla föreningen med formeln (II) med starka syror.

Föreliggande uppfinning tillhandahåller även ett förfaran- 10 15 ZU 447 386 12 de för framställning av en förening med följande formel R :l CH-NH-R PH Grå 2 f: 2 l 5,_ - /S' o\ I? V14' 1' .I Zon 5 '^ÛH - \3' ÉV ' , ' li» . Û 3 2 R vari R1 och RZ är identiska eller olika och vardera betecknar en väteatom eller en metylgrupp, R3 betecknar en väteatom, -CUCHZNHZ.

-Q-nminn-2-hydrnxibutyl eller 2-aminuctyl, och när alla R1, R2 nrh R3 betecknar väteatumer, metyl-amino-gruppen vid 4-ställningen inte är orienterad trans till hydroxylgrupperna vid 3- och 5- ställningarna, eller ett farmaceutiskt godtagbart syraaddition°- salt därav, vilket förfarande omfattar behandling av en förening med följande formel' H1 SICII-Nll-Rz ïållíz /ÅTfi O / i* (W px ,A2OH §?-OCH (II) \3r gf W. f är k/ 3 »__~ .Of 3»_¶ NH2 N~CH5 vari R1 och I: är ciefinierade såsom ovan, med en stark syra och eventu- ellt skyddande av aminugrupperna vid 1- ochr 27-ställxwingarrma eller metylaminogruppen vid 6'-ställningarna hos erhållen Förening, sedan acyleríng av den med qlycin eller 4-amino-2-hydroxismörsyra, 1 vilken amínogruppen är skyddad eller ett raktivt derivat därav, eventuellt reducering av den acylerade produkten och sedan av- spjälkning av den skyddande gruppen och eventuellt omvandling av produkten till ett farmaceutískt godtagbart syraadditionssalt.

Vi utövandet av förfarandet enligt fönfligqmme uppfinning hrinqnu föreningen med formeln (II) eller dess skyddade produkt vid amino- eller mefylaminoqrupperna vid l-, 2'~, OCH Û'-Slä11- V1 10 15 50 }5 447 586 1) ningarna att reagera med en stark syra i närvaro eller frånvaro a/ ett lösningsmedel. Detta reaktion medför klyvning av metyletern vid 5-ställningen. Sålunda kan en förening med formeln (I), varl en hydroxylgrupp är närvarande vid 5-ställningen och R3 betecknar en väteatom, erhållas.

Exempel på den starka syran är starka mineralsyror, såsom bromvätesyra, saltsyra, jodvätesyra, fluorvätesyra, svavelsyra och fosforsyra; starkt sura organiska syror, såsom p-toluensul- fonsyra och trifluorometansulfonsyra; och Lewis-syror, såsom bor- När en Lewis-syra användes, utföres I andra fall Exempelvis triklorid och bortrifluorid. reaktionen lämpligen i ett vattenfritt förhållande. utföres reaktionen lämpligen i vattenhaltig lösning. kan diklorometan användas såsom ett vattenfritt lösningsmedel.

Reaktionen kan exempelvis utföras vid rumstemperatur till ca 20000. ca 50 dagar. kolonnkromatografisk metod, exempelvis genom att använda ett kat- Acylering av metylaminogruppen vid U-ställningen Vanligen upphör reaktionen efter ca l timme till ca Produkten kan frânskiljas och renas med en vanlig jcnbytarharts. nos ernållen föreninm med formeln (I), vari H5 betecknar en väte- atom, ger en förening med formeln (I), vari R3 betecknar en acyl- grupp. En lämplig acylgrupp, som representeras av RB , är -CÛCHZNHZ, -ä-amino~2-hydrøxibutyl eller 2-amlnoetyl.

Vid utförandet av acyleringen skyddas_amino- eller metyl- aminoqrupperna vid 1-, 2'- och 6'-ställningarna hos föreningen med formeln (I), varl Rá betecknar en vüteutum och -UH är närva- rande vld 5-ställningen. och sedan brjngas qlyein eller 4-aminn-2- hydrowismörsyra (lämpligen skyddad) eller dess reaktiva deri- vat för att bilda den önskvärda acylgruppen att inverka pa den skyddade föreningen för att acylera metylaminogruppen vid 4-ställ- Följande borttagande av skyddande grupper kan ge före- Eventuellt behandlas ningen. ningen med formelnljp-lzxnuntm fri bas. produkten med en syra för att omvandla den till en syraadditions- produkt.

Skyddande grupper för en amino- eller metylaminogrupp kan vara de, som vanligen användes inom peptidsyntesen. När en aktiv ester, såsom en substituerad fenylester (t ex monobensylkarbonat), N-oxlsuccinimidester eller H-oxiftalimldester, användes, skyddas exempelvis endast amíno- eller metylaminogrupperna vid l-, 2'- och 6'-ställningarna av en bensyloxikarbonylgrupp. Närvaron av en metallförening, såsom nickelacetat, koboltacetat och koppar- gp IÜ 15 20 25 30 35 447 seed 14 acetat, under den skyddande reaktionen är lämplig. Substituera- de bensyloxikarbonylgrupper och tertiär butoxikarbonylgrupp kan även användas såsom skyddande grupper. När metylaminogruppen vid H-ställningen samtidigt skyddas, kan den frigöras genom att bringa produkten att reagera med ett alkali för att bilda ett cyk- lískt karbamat med hydroxylgruppen angränsande till metylamino- gruppen vid U-ställningen och sedan hydrolysera den.

Det förut angivna införandet av en skyddande grupp i ami- no- eller metylaminogrupperna kan exempelvis utföras genom att bringa den aktiva estern att verka på föreningen med formeln (I)-4, vari RE betecknar väte, vid en temperatur från ca 0 till ca 10000, lämpligen l närvaro av en metallförening, varvid mängden av den aktiva estern är ca 5 till ca 10 mol per mol av föreningen med formeln(Il-1. Reaktionen kan vanligen avslutas på ca 0,5 till ca 20 timmar.

Enligt metoden enligt föreliggande uppfinning införes even- tuellt en acylgrupp i metylaminogruppen vid Ä-ställningen av före- ningen med formeln (I), vari R3 betecknar väte och amino- eller metylaminogrupperna vid l-, 2'- och 6'-ställningarna skyddas.

Acyleringen kan utföras genom att använda en konventionell pep- tidsyntetiseringsteknik. Acylering utföres under användning av glycín eller à-amino-2-hydroxlsmörsyro eller ett reaklívl derivat därav. Exempel på det reaktiva dcrivalct är syrahalogenider, aktiva eetrar, såsom en Frnvlester. cyanomctylester, N-oxisuccínimidesher eller N~oxiFtalimidester, syraanhydríder, blandade syraanhydríder o:h andra Föreningar, som användes inom svntesen av peptidep Skyddande grupper för aminoqruppen hos aminogruppen kan vara de- sanuna som de som exemplífierades här ovan För amino och metylamínogrupperna hos föreningen med formeln (ll, vari R; betecknar väte. Lämpligen bör helt och hållet samma skyddande grupper användas.

Acyleringsreaktionen kan exempelvis utföras vid en tempera- p - O - .. . c tur fran ca 0_t1ll ca 100 C 1 ett losningsmedel, sasom metanol, dioxan, aß2ÜQnifiTil och díklorometan, genom att använda ca 1 till ca 10 moi av ett acyleringsmedel per mol av föreningen, som skall acyleras. Vanligen kan reaktionen avslutas inom ca 0,5 till ca 20 timmar.

Lämpligen avspjälkas de skyddande grupperna för aminogrup- perna från den skyddade föreningen med formeln (I), företrädes- vis med en katalytisk reuuceringsmetod. Lämpliga katalysatorer för detta ändamål omfattar palladium, platina, Raney-nickel, ro- 10 20 30 35 AU 447 386 dium, rutenium och nickel.

Avspjälkning av de skyddande grupperna genom katalytisk reduktion kan exempelvis utföras genom att bringa den skyddade föreningen att reagera i ett lösningsmedel, såsom ättíksyra, i närvaro av en katalysator vid en temperatur från ca 0 till ca 8000 i ca l till ca 50 timmar. Vätetrycket vid denna tid kan vara nor- malt eller atmosfäriskt tryck eller ett förhöjt tryck.

Om så ytterligare behövs, kan acylgruppen hos den acylera- de produkten reduceras för att alstra en förening, vari H3 be- tecknar en substituerad alkylgrupp. Lämpligen utföres reducerings- reaktionen innan de skyddande grupperna för aminogrupperna av- spjälkas. Reduceringsmetoder, som använder reduoeringsmedel, såsom litiumaluminiumhydrid, natriumborhydrid och diboran, kan utnyttjas.

I föreliggande uppfinning kan föreningen med formeln (I), som kan erhållas från föreningen med formeln (II) på ovanstående sätt, isoleras och renas på ett vanligt sätt. Kolonnkromatogra- fi är lämpligt. Lämpliga adsorberande medel för detta ändamål är katjonbytarhartser, såsom "CM-Sephadex", "Amberlite IRC-50", "Amberlite IRC-8U", "Amberlite CG-50" och karboximetylcellulosa.

Framkallning kan utföras med en gradientmetod eller en stegvis metod under användning av en alkalisk vattenhaltig lösning, så- som en vattennaltig lösning av ammoniak eller en vattenhaltig lösning av ammzniumformiat såsom ett framkallande lös- ningsmedel. De aktiva fraktionerna uppsamlas från eluaten och lyo- filiseras för erhållande av föreningen med formeln (I) i ren form.

Beroende på reningsoperationen kan den önskade produkten (I) även erhållas i form av ett syraadditionssalt. Föreningen (I) såsom en fri bas kan omvandlas till ett syraadditionssalt därav, lämpligen ett farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt därav, på vanligt sätt. Syror för detta ändamål omfattar t ex oorganiska syror, såsom svavelsyra, saltsyra, bromvätesyra, jodvätesyra, fos- forsyra, kolsyra och salpetersyra,_och organiska syror, såsom ättíksyra, fumarsyra, äpplesyra, citronsyra, mandelsyra och bärn- stenssyra.

Enligt förfarandet enligt föreliggande uppfinning kan de önskade föreningarna med formeln (I), som har antibakteriell ver- kan lätt erhållas med goda utbyten från fortimiciner eller KA-6606 eller KA-7058 substanser med en struktur liknande fortimicinernas.

Föreningarna med formeln (I)-l är föreningar, som inte förut be- 10 15 20 447 386 16 skrivits i litteraturen och uppvisar överlägsen antibiotisk verkan och är användbara inom medícinområden För människa och djur och även såsom mellanprodukter För syntesen av derivat.

Sålunda kan föreliggande uppfinning tillhandahålla en anti- biotísk komposition, som omfattar den nya föreningen med formeln (IJ-1.

Enligt föreiggande uppfinning tillhandahålles speciellt en antibiotisk komposition sammansatt av (i) från 0,01 till 99,5 viktprocent, räknat på kompositio- nernas vikt, av en Förening med Följande formel 51 6' çH-rlH-Rz lšlllz š__Q f '5' 6 av É}\ (ÉOH 5 -Qfl (I)-l \3I 2! / \ f |+ l ° 3 z NH2 §-CH3 33 vari R1 och R? är identiska eller olika och vardera betecknar cn väteatom eller en metylgrupp och R3 betecknar en väteatom, -CÜCHZNHZ, -4-amino-2-hydroxibutyl eller 2-aminoetyl, och när alla R1, R2 4-ställningen inte är orienterad och RZ betecknar vätatomer, metylaminogruppen vid trans till hydroxylgrupperna vid 3- och 5-ställningarna, eller ett Farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt därav, och (ii) ett Farmaceutiskt godtagbart spädningsmedel eller bä- rarel 7 Den antibiotiska kompositionen enligt föreliggande uppfin- nigà kan vara i vilka vanligen använda doseríngsformer som helst me¿:ínjicerbara preparat och kapslar är speciellt lämpliga.

Lämpligen framställes, likt kända vattenlösliga basiska. . antibiotika, ett injicerbart preparat ßefl0m att fylla ett 1Y°f1ll' - - - - " ' t'll m n serat pulver av antibiotikumet 1 en ampull, lämpligen 1 Sa ma S - - - ' " ' löses am ullens med ett stabiliseringsmedel, och vid anvandning 7 P _ innehåll i en upplösande vätska för administrering. smedlet eller bäraren omfattar t ex vätskeforf tspädning _ . såsom destillerat vatten för injektion och miga spädningsmedel, 10 '15 447 386 17 fysiologisk isotonisk lösning, och fasta bärare, såsom laktos, stärkelse, vitt socker, glukos, kristallin cellulosa, kalcium- karbonat, kaolin, D-mannitol, magnesiummetasilikat-aluminat, kal- ciumsulfat, kalciumfosfat och bentonit. Tillsats av stabilise- ringsmedel, såsom sur natriumbisulfit, är även lämpligt.

Doseringen av den antibiotiska substansen enligt förelig- gande uppfinning kan väljas passande och är t ex ca 0,01 till ca l00 mg/kg/dag.

Sålunda kan enligt föreliggande uppfinning tillhandahål- las antibiotiska kompositioner för djur andra än människan, såsom fjäderfä, tamdjur, och odlad fisk, och antibiotiska kompositioner för människa. Dessa kompositioner är användbara såsom antibak- teriella medel med ett brett antibakteriellt spektrum.

Tabell l nedan summerar antibakteriella spektra för flera exempel av föreningen med formeln (I)-l och utgångsmaterial där- för. 447 586 18 Tabell l De-O- H-N- De-0- De-O- metyl glycyl mñtšl mebyl glycyl K ~ KA* KA- KA- KA- KA- 66061 66061 66o6v1 6606v1 70381 70381 Staphylococcus aureus 209P 0,2 0,2 0,39 0,39 0,39 0,39% íBaCí11uS Subtilis ATCC 6633 0,2 (0,1 0,20 0,20 0,20-¿0,1 š 02011105 cereus 1,56 0,78 0,78 0,78 1,56 0,39 66611103 antm-acis 0,2 40,1 0,20 0,20 0,20 40,1 Streptococcus faecalis 25 25 25 25 50 100 § Escherichia 0O1i NIHJ 1,56, 1,56 1,56 1,56 3,13 3,133 §scherichia coli MLlHl0 1,56 1,56: 3,13 3,13 1,56 1,56 fsscnericniaßcoii 1411141011-81 3,13 1,56: 6,25 3,13 6,25 3,13 §(resistent mot kanamycin, 1 1 _ âstreptomycin och lividomycüfi ; § , šßscnerichia 6011 ßxLluioa-özä 3,13 3,13; 6,25 6,25 z 12,5É 6,25 i gresistent mot kanamycin, i 7 ' ; f ßtreptomycin och butirosin) , ¿ 2 åEscnex-icnía coli ML11110R-101f 1,56: 1,56; 3,13 3,13 6,25; 3,13 ;(resistent mot gentamicin, å 5 _ 3 Étobramycin och kanamycin) g 2 § * x Y I 1 ¿Proteus vulgaris OX-19 š 0,78; 0,78: 1,56 1,56 ¿ 3,13: 3,31» :Klebsiella pneumoniae 1 3 * I å § :PCI 602 E 0,78% 0,78; 0,78 0,78 I 1,56; 0,78 :Pseudomonas aeruginosa § § Å § É äshíbata 2 3,13; O,78í 6,25 1,56 É 6,25: 1,56 _Pseudomonas aeruginosa A3 = 3,13* 0,78: 6,25 3,13 E 12,5; 3,13 §Pseudomonas aerugínosa nr.l2šO,39¿ 0,395 0,78 0,73 E 1,55* 0,78 šPseudomonas aeruginøsa TI-l3,3,l3É 0,78¿ 3,13 3,13 I 6,25, 1,56 -Pseuaomonas aeruginøsa K-11i 6,25¿ 1,56 6,25 6,25 i 12,5* 3,13 ¿(resistent.mot kanamycin) I E i iPseudomonas aeruginosa nrl57 6,25, 1,56: 3,13 1,56 6,25 1,56 ;Pseudomonas aerugínosa nr3l5 6,25! 3,13! 12,5 6,25 g 25 6,25 l(resistent mot gentamicin, I § tobramycin och amikacin) § ! ^ æroceus inconstans i1,56§ 1,56; 1,56 1,56 § 6,25 6,25 ser-rama marcescens _ |3,13§ 1,56; 0,78 1,56§ 1,56 0,78 ,._..__......_____.._.._...__..,__ .___ _ ,. _ Följånde exempel visar framställningen av föreningarna en- ligt föreliggande uppfinníng.och framställningen av känd de-O- metyl-fortimicin genom förfarandet enligt föreliggande uppfinning. lO 15 ZO 25 30 19 447 see Exemoel l DE-O-metyl-KA~6606 II KA-6606 II såscm en fri bas (1,1 g) löstes 1 100 ml H8-procentig bromvätesyra och lösningen upphettades i ett för- seglat rör till 90°C i Ä timmar. Reaktionsblandningen koncentre- rades till torrhet under reducerat tryck. Återstoden löstes i vatten och neutraliserades med konc. vattenhaltig ammoniak. Lös- ningen sattes till en kolonn packad med 400 ml "CM-Sephadex C-25" (NHÉ form) och eluerades med vattenhaltig ammoniak av en koncentra- tion, som varierade långsamt från 0,05N till 0,5 N. Fraktioner innehållande de-O-metyl-KA-6606 II uppsamlades och behandlades på vanligt sätt för att ge 620 mg de~0~metyl-KA-6606 II såsom en färglös förening med följande formel.

CH , z CHNH2 //L-Q CH3 NH2 \g_}X\ //<š:%í:H I O ÛH NH 2 specifik vridning: {a}§5 + 1uo° (cz, Hzo) NMR: 5 D20 ppm 1,55 (BH, d, J=6,3 Hz, C-CH3) 2,88 (BH, s, N-CH3) __" 5,Ä6 (IH, d, J=Éfï Hz, anomeriskt E) Elementaranalys: för CluH3ONuOq.H2O Beräknat (%): c u9,98 H 9,59 N 16,65 Funnet (%): C H9,69 H 9,73 N l6,ü8 Exemgel 2 (a) Tenrakis-N-bensyioxikarbonyl-de-0-metyi-KA:6606 I De-O-metyl-KA-6606 II såsom en fri bas (60 mg) löstes i 5 ml metanol och vid -l0°C tillsattes 75 mg N-bensyloxikarhonyl- Blandningen omrördes, Vid slutet av l timme och 2 timmar tillsattes respektive 30 mg och 2Q mg av förut angivna Blandningen omrördes ytterligare vid samma tempe- oxisuccinimid. aktiva ester. ratur i 2 timmar. ducerat tryck. återstoden löstes i 10 ml kloroform, tvättades med vatten och torkades, följt av avdestillering av lösningsmed- let.

Reaktionsblandningen koncentrerades under re- 10 20 447 386 i 20 Äterstoden löstes i 3,5 ml dioxan, och 0,2 ml trietylamin och 100 mg N~hydroxisuccinímidyl-N-bensyloxikarbonylglycin till- Blandningen upphettades till 60°C över natten. Reak- tionsblandningen koncentrerades till torrhet. Äterstoden löstes i 10 ml kloroform, tvättades med vatten och torkades, följt av sattes. avdestillering av lösningsmedlet. Återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn under användning av kloroform-metanol (50:l) såsom ett elueringsmedel, och bearbetades på vanligt sätt för att ge 62 mg tetrakis-N-bensyloxikarbonyl-de-0-metyl-KA-6606 I såsom ett färglöst fast ämne. specifik vridning:{a}š5 + 37° (ca, cHc13) NMR: 6CDCl3, ppm 1,01 (BH, a, J=6,5 Hz, c-cnš) 2,91 (BH, s, N-cH3) """ IR: våâglš cm_l l6UÜ_Tamid I) Elementaranalys: för Cu8H57N5O13 Beräknat (%): C 63,22 H 6,50 N 7,68 Funnet (%): C 63,28 H 6,35 N 7,55 (b) De-Ofmetyl-KA-6606 I Ovan under (a) erhållet tetrakis-N-bensyloxikarbonyl-de-O- metyl-KA-6606 I (60 mg) löstes i 1,2 ml ättiksyra och hydrogeno- lyserades i närvaro av 30 mg palladiumsvart vid rumstemperatur och atmosfäriskt tryck. Katalysatorn borttogs genom filtrering och filtratet späddes med 100 ml vatten och neutraliserades i konc. vattenhaltig ammoniak. Lösningen sattes till en kolonn packad med 10 ml "CM-Sephadex C-25" (NH: form) och eluerades med en gradientmetod under användning av vattenhaltig ammoniak av en koncentration, som långsamt varierade från 0,05 N till 0,5 N. raktioner, som innehöll den önskade föreningen, uppsamlades och lyofiliserades för att ge 21 mg de-O-metyl-KA-6606 I såsom ett färglöst fast ämne med en smältpunkt av 172 till l75°C (sönder- delning) och följande formel.

CH 1 3 :CHNH2 g_ 0 ' CH3 * w cocnzlvnz O NH2 OH Elementaranalys: för C16H33N505.H2C03.H20 Beräknat (%): C ÄH,85 H 3,19 N 15,38 }-\ U 20 25 .vw-a -. n 447 386 Funnet (%): C HU,U7 H 8,38 N 15,05 Hydrokloriden av denna produkt, som erhölls med en konven- tionell metod, har följande egenskaper.

Specifik vridning: {a}š5 + 1100 (C2, H20) NMR: G D20 ppm 1,83 (SH, d, J=6,6 Hz, c-cH3) 3,65 (BH, s, N-CHB) _' 6,03 (ln, a, J=ïjE Hz, anomeriskc 3).

Exempel 3 De-O-metyl-fortimicin B Fortimicin såsom en fri bas (100 mg) löstes i 5 ml 52-pro- centig jodvätesyra och bringades att reagera i ett förseglat rör vid 3700 i 10 dagar. Efter reaktionen avdestillerades jodväte- syran. Återstoden späddes med vatten och neutraliserades med vat- tenhaltig ammoniak. Lösningen sattes till en kolonn av "CM-Sephadex C-25" (NHE form) och eluerades med en koncentrations- gradientmetod under användning av vattenhaltig ammoniak av en kon- centration, som långsamt varierade från 0,05 N till 0,5 N. Frak- tioner, som innehöll den önskade produkten, uppsamlades och kon- centrerades till torrhet för att ge 16 mg de-O-metyl-fortimicin B såsom en fri bas med följande formel <:h_1;>-o-\>__<, on OH NHCH3 Specifik vridning: {u}š5 + 430 (el, H20) NMR: 6 D20 1,50 (BH, d, J=6,5 Hz, CH~CH3) 2,83 (3H, S, N-cH3) "“' 5,5H (IH, d, J=Éf5 Hz, anomeriskt g) Exempel 4 De-0-metyl-fortimicin A Samma förfarande som i exempel 2 (a) upprepades med undan- tag av att 30 mg de-0-metyl-fortimicin B såsom en fri bas använ- des. Man erhöll 34 mg tetrakis-N-bensoyloxikarbonyl-de-0-metyl- fortimicin A såsom ett färglöst fast ämne. 10 20 30 447 sas 221 Produkten löstes i 1,0 ml ättiksyra och hydrogenolysera- des och renades på samma sätt som i exempel 2 (b) för att ge 10 mg de-O-metyl-fortimicin A såsom ett färglöst fast ämne med följande formel CH3 CHNH, _ NH2 OH 1 O O OH mig .on \ :wii-ff -- COCHZNH2 .

Elementaranalys: för Cl6H53N5O6°H2O Beräknat (%): C H6,93 H 8,62 N 17,10 Funnet (%): C U6,66 H 8,Ä7 N 16,81 Hydrokloriden, som framställts från den fria basen på vanligt sätt, hade följande egenskaper. specifik vridning: (afi + 82° (cl, H20) NMR: 6D2O ppm 1,80 (BH, d, J=6,5 Hz, C-CH3) 5,60 (3H, s, N-CHB) '_ 5,78 (lH, d, J=É:5 Hz, anomeriskt E) Exempel 5 De-0-metyl-KA-6066 II KA-6606 II såsom en fri bas (100 mg) suspenderades i 5 ml diklorometan och 5 g bortriklorid tillsattes vid -8000. Bland- ningen fick stå vid samma temperatur i l timme. Sedan fick den stå vid rumstemperatur över natten. Reaktionsblandningen kon- centrerades till torrhet och metanol sattes till återstoden.

Blandningen koncentrerades igen till torrhet. Denna operation upprepades tre gånger.

Erhâllen återstod löstes i 10 ml vatten och lösningen sat- tes till en kolonn packad med H0 ml "CM-Sephadex C~25" (NH: form) och eluerades med en koncentrationsgradientmetod under användning av vattenhaltig ammoniak_av en koncentration, som långsamt varie- rade från 0,05 N till 0,5 N. Fraktioner, som innehöll de-O-metyl- KA-6606 II, uppsamlades och bearbetades på vanligt sätt för er- hållande av l5 mg av en färglös substans. Denna produkts egen- skaper var identísk med de för de-0-metyl-KA-6606 II, som erhölls i exempel 1. 10 l5 ZÛ 25 30 25 447 386 Exempel 6 De-0-metyl-KA-6606 VI KA-6606 VI såsom en fri bas (350 mg) löstes i 3,5 ml 56-procentig jodvätesyra och upphettades till 60°C i ett förseg- Reaktionsblandningen koncentrerades till Återstoden löstes i vatten och lat rör under 4 timmar. torrhet under reducerat tryck. neutraliserades med konc. vattenhaltig ammoniak. res till en kolonn packad med so ml "CM-sepnadex c-25" (NH: form) och eluerades med vattenhaltig ammoniak av en koncentration, som långsamt varierade från 0,25 N till 0,35 N. Fraktioner, som in- nehöll den önskade produkten, uppsamlades och koncentrerades till torrhet för erhållande av 265 mg de-O-metyl-KA-6606 VI med följan- Lösningen sat- de formel CH | 3 CHNH2 NH2 0 CH3 on N H 0 NH OH 2 .

Elementaranalys: för C1¿H50Nu0q .H20 Beräknat (%): C ü9,98 H 9,59 N 16,65 Funnet (%): C u9,65 H 9,uu N 16,61 Specifik vridning: {d}š3 + 870 (Ccl, H20) NMR: 5 D20 ppm 1,5h (BH, d, J=6,5 Hz, c-cH3) 2,85 (5H, s, N-cH5) "_" 5,56 (1H, a, J=5Iï Hz, anomerisxt 3) Exempel 7 (a) 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl-H-N-bensyloxikarbonylglycyl- de~0-metyl~KA-6606 VI De-O-metyl-KA-6606 VI (163 mg) löstes i 5 ml metanol och 273 mg nickelacetat tillsattes. Blandningen omrördes vid rums- temperatur i 30 minuter och sedan tillsattes USM mg N-bensyloxi- succinimid. Blandníngen omrördes vid samma temperatur i 2 tim- mar. Konc. vattenhaltíg ammoniak (2,5 ml)-sattes till reaktions- blandningen och blandningen omrördes i 2 timmar. Reaktionsbland~ ningen koncentrerades under reducerat tryck och återstoden lös- tes i 20 ml kloroform och BN vattenhaltig ammoniak. Lösningen skakades. Kloroformskiktet frånskildes, tvättades två gånger 10 202 Pa UK 30 35 447 386 21, med 3N vattenhaltig ammoniak och två gånger med vatten och torka- des, följt av avdestillering av lösningsmedlet. Återstoden löstes i 9 ml dioxan, och 330 mg 2,Ä-dinitro- fenylester av N-bensyloxikarbonylglycin och 0,3 ml trietylamin tillsattes, och blandningen upphettades till 60°C i 1 timme. Till reaktionsblandningen sattes l ml konc. vattenhaltig ammoniak och blandningen fick stå i 1 timme." Lösningsmedlet avdestillerades sedan. Äterstoden löstes i 20 ml kloroform och tvättades tre gång- er med 0,5 N vattenhaltig natriumhydroxidlösning och två gånger med vatten och torkades, följt av avdestillering av lösningsmed- let. återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn under an- vändning av kloroform/metanol (50:l) såsom ett elueringsmedel.

Fraktioner, som innehöll den önskade produkten, uppsamlades och koncentrerades för att ge 288 mg 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbony1- Ä-N-bensyloxikarbonylglycyl-de-O-mety1-KA-6606 VI såsom ett färg- löst fast ämne.

Elementaranalys: för Cu8H57N5Ol3 Beräknat (%): C 63,22 H 6,30 N 7,68 Funnet (%>: c 63,u3 H 6,21 N 7,uH Specifik vridning: {a}š3 + 32° (c l, CHCl3) NMR: 6 CDCl5 ppm 2,92 (SH, s, N-CH3) 1,21 (BH, d, J=6'fiz, cH-cH3) (b) De-o-meuyi-4-N-giycyi-KA-6606 vI'”“ Ovan under (a) erhållet 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl- H-N-bensyloxikarbonylglycyl-de-0-metyl-KA-6606 VI (288 mg) löstes i i Ä ml ättiksyra och 50 mg palladiumsvart tillsattes. Ovanstående förening reducerades sedan katalytiskt vid rumstemperatur. Reak- Filtratet späddes med H00 ml vat- Lösningen sat- tionsblandningen filtrerades. ten och neutraliserades med vattenhaltig ammoniak. tes till en kolonn av “CM-Sephadex C-25" (NH: form) och eluerades med en koncentrationsgradientmetod under användning av vattenhal- tig ammoniak av en koncentration, som långsamt varierade från 0,05 N till 0,35 N. Fraktioner, som innehöll den önskade produk- ten, uppsamlades och lyofiliserades för att ge 105 mg de-O-metyl- -4-N-glycyl-KA-6606 VI såsom ett färglöst fast ämne med följande formel. \n 10 15 P0 25 30 25 447 saa ?t Cd2NH2 NH2 0 CH3 COCHZNHQ O OH NH 2 Elementaranalys: för Cl5H33N505.H20 Beräknat (%): C U8,8ü H 8,97 N 17,80 Funnet (%)= c u8,55 H 8,83 N 17,u8 specifik vridning: {a}š3 + 115° (C 1, H20) NMR: 6 D20 ppm 1,52 (BH, d, J=6,5 Hz, C-CH3) 3,62 (3H, S, N-CH3) "'" 5,ä0 (lH, d, J=5ÉÉ, anomeriskt E) Exemnel 8 De-O-metyl-KA-6606 VI KA-6606 VI (100 mg) löstes i 5 ml Ä8-procentig bromväte- syra och lösningen fick stå vid 37°C i 10 dagar. Reaktionsbland- ningen koncentrerades till torrhet vid under 3700. Återstoden löstes i 50 ml vatten och neutraliserades med vattenhaltig ammo- niak. Lösningen sattes till en kolonn av "CM-Sephadex C-25" (NHE form) och eluerades med en koncentrationsgradientmetod under användning av vattenhaltig ammoniak av en koncentration, som långsamt varierade från 0,05 N till 0,5 N, för att ge 19 mg de-O-metyl-KA-6606 VI. de för de-0-metyl-KA-6606 VI, som erhölls i exempel 6.

Produktens egenskaper var identiska med Exempel 9 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl-H-N-bensyloxikarbonylglycyl-de- 0-metyl-KA-6606 VI De-0-metyl-6606 VI (19 mg) löstes i 0,8 ml metanol,och 90 mg bensyl-p-nitrofenylkarbonat tillsattes. Blandningen om- rördes över natten vid rumstemperatur. Till reaktionsblandning- en sattes 0,1 ml av en 50-prooentig etanollösning av metylamin och blandningen omrördes ytterligare i 1 timme. Sedan koncentre- rades reaktionsblandningen till torrhet. Återstoden löstes i kloroform, tvättades med vatten och torkades. Produkten löstes i 1 ml dioxan, och 0,05 ml trietylamin och 35 mg N-hydroxisuccin- imidyl-N-bensyloxikarbonylglycin tillsattes och blandningen upp- hettades till 8000 i 5 timmar. Reaktionsblandningen koncentrera- 10 20 25 447 386 26 Återstoden löstes i kloroform och olösligt ma- Kloroformskiktet tvättades des till torrhet. terial frånskildes genom filtrering. med vatten och torkades, följt av avdestillering av lösningsmed- let. Återstoden frånskildes och renades med silikagel-preparativ kromatografi (kloroform/metanol i ett förhållande av l5:l) för att ge 23 mg 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl-U-N-bensyloxikarbonyl- glycyl-de-O-metyl KA-6606 VI såsom ett färglöst fast ämne. Pro- duktens egenskaper var identiska med de för föreningen, som er- hölls i exempel 7(a).

Exempel lO De-O-metyl-KA-7038 III KA-7038 III såsom en fri bas (302 mg) bringades att reage- ra på samma sätt som i exempel 6. Vid rening erhölls 220 mg de-O-metyl-KA-7058 III såsom ett färglöst pulver med följande for- mel.

CH2NHCH3 NH2 I O I CHB fflr” ;>\\\ //Å4HlI}â:_H \\-1 o on NH2 gElementaranalys: för Cl¿H30N4O¿.H2O Beräknat (2): c u9,98 H 9,59 N 16,65 'Funnet (%)= c u9,71 H 9,73 N 16,33 Specifik vridning: {u}å5 + H0° (c 0,5, H20) NMR: 6 D20 ppm I 2,80 (3H, S, N-cfiš) 2,85 (BH, S, N-C 3) 5,53 (IH, d, J= ,3 Hz, anomeriskt ä) Exempel ll (a) Tetrakis-N-bensyloxíkarbonyl-de-0-metyl-KA-7038 I De-0-metyl-KA-7038 III (190 mg) bringades att reagera på samma sätt som i exempel 7(a). Vid rening erhölls 350 mg l,2',6'- tris-N-bensyloxikarbonyl-4-N-bensyloxikarbonylglycyl-de-0-metyl- KA-7038 III, dvs tetrakis-N-bensyloxikarbonyl-de-O-metyl-KA 7038 I, såsom ett färglöst fast ämne. » Elementaranalys: för_Cu8H57N5Ol3 __ Beräknat (z)= c 63,22 H 6,30 N 7,68 Funnec (%): c 63,01 H 6,49 N 7,M2 Specifik vridning: {u}š5 + 55° (c l, CHCI3) 10 15 25 35 27 447 ass NMR: 6 CDCl5 ppm 2,92 (ÖH, S, 2xN~CH3) (b) De-o-mecyl-KA-7038 I “"' Tetrakís-N-bensyloxikarbonyl-de-O-metyl-KA-7058 I (320 mg) behandlades på samma sätt som i exempel 7 (b) för att ge 112 mg de-O-metyl-KA-7038 I såsom ett färglöst fast ämne med följande formel CH2NHCH3 NH2 I 0 _ CH3 <::::T;>\\\ \<ï¶_ï>%:-COCH2NH2 O OH NH2 - Elementaranalys: för Cl6H33N505.H2O Beräknat (%): c u8,8u H 8,97 N 17,80 Funnet (%): C ü8,5ü H 8,69 N 17,98 specifik vridning: {u}§5 + 126° (c 1, H20) NMR: 6 D20 ppm 2,82 (BH, S, 6'-N-CH3) 5,65 (3H, s, H~N-cfišï 5,H2 (lH, d, J=3 ÉE: anomeriskt E) Exempel 12 (a) 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl-U-N-{(S)-4-bensyloxikarbo- nylamino-2-hymxmimnW1yl}-5-de-O-metyl-KA-6606 II 138 mg 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl-5-de-metyl-KA- 6606 II (1) upplöstes i 4 ml dioxan, och 130 mg N-hydroxisuccin- imidester av (S)-U-N-bensyloxikarbonylandno-2-hydroxismörsyra och 0,1 ml trietylamin tillsattes. Blandningen upphettades till 5500 i 3 timmar. Reaktionsblandningen koncentrerades till torrhet. Återstoden löstes i 20 ml kloroform, tvättades med vatten och torkades och sedan avdestillerades lösningsmedlet. Återstoden eluerades med kloroform-metanol (30:l) genom silikagelkolonnkro- matografi och bearbetades på vanligt sätt för att ge 160 mg av önskad produkt såsom ett_färglöst fast ämne.

NMR: 6 CDCl, ppm },0Ä (BH, S, N~CH3) 1,03 (BH, d, J=7:Ö Hz, C-CH3) IR: v 1625 cm_1 (amid I) för C50H6lN501u C 62,81 H 6,N} C 62,55 H 6,19 Elementaranalys: Beräknat (%): Funnet (%): N 7,32 N 7,ü8. 10 20 jü 35 447 sas, 2, (b) 1,2',6'-tris+N-bensyloxikarbonyl-fl7N{(S)-U-bensyloxikarbonyl- amino-2-hydroxibutyl}-5-de-O-metyl~KA-6606 II 160 mg av produkten erhållen ovan under (a) löstes i 3,2 ml l M diboran-tetrahydrofuran-lösning och bringades att reagera vid rumstemperatur i 2 timmar i en kväveström. Vatten (0,2 ml) sattes till reaktionsblandningen och blandningen kon- centrerades till torrhet. Återstoden löstes i 3 ml 0,2N HCl-me- tanol-lösning och lösningen fick stå över natten vid rumstempera- tur. Reaktionsblandningen koncentrerades till torrhet. Ätersto- den löstes i l5 ml kloroform, tvättades med en mättad vattenhal- tig lösning av natriumbikarbonat och sedan med vatten och torka- des. Lösningsmedlet avdestillerades. Ãterstoden eluerades med kloroform-metanol (20:1) genom silikagelkolonnkromatografi och be- arbetades på vanligt sätt för att ge 85 mg av önskad produkt så- som ett färglöst fast ämne.

NMR: 6 CDCl3, ppm 2,40 (3H, S, N-cní) 1,03 (BH, d, J=7,0 Hz, C-CH3) IR: absorption vid l625cm:1försvann Elementaranalys: för C50H63N50l3 Beräknat (%): C 63,75 H 6,7H N 7,U3 Funnec (%): c 63,88 H 6,B8 N 7,31 (c) Ä-N-{(S)-4-amino-2-hydroxibutyl}-5-de-O-metyl-KA-6606 II 80 mg av produkten, som erhållits ovan under (b), löstes i 2 ml ättiksyra och 20 mg 5 % palladium-kol tillsattes. Den reducerades katalytiskt vid rumstemperatur. Reaktionsblandning- en filtrerades och filtratet späddes med 500 ml vatten, följt av neutralisation med vattenhaltig ammoniak. Blandningen sattes sedan till en kolonn av “CM-Sephadex C-25" (NHÉ form) och framkal- lades med en gradientmetod med vattenhaltig ammoniak, som lång- samt varierade i koncentration från 0,25 N till 0,60 N. Fraktio- ner, som innehöll den önskade produkten, uppsamlades och lyofilise- serades för att ge 21 mg av önskad produkt såsom ett färglöst pulver. ' I NMR: 6 D20, ppm 1,60 (BH, d, J=T,0 Hz, C-CH3) 3,00 (3H, s, N-cH3) 5,U6 (lH, d, J=3,5 Hz, anomeriskt E) 10 15 20 447 386 29 Elementaranalys: för Cl8H39N5d5.H2O , Beräknat (%): c 51,04 H 9,70 N 1o,5u Funnet (%): C 50,87 H 9,92 N l6,H0 Exempel 13 (a) 1,2',6'-tris-N-bensyloxikarbonyl~Ä-N-(2-bensyloxikarbonyl~ aminoetyl)-5-de-O-metyl~KA-6606 II 500 mg av tetrakis-N-bensyloxikarbonyl-5-de-O-metyl-KA- 6606 I, som erhölls i exempel 2(a), behandlades på samma sätt som i exempel l2(b) för att ge 220 mg av rubricerad produkt.

NMR: 5 COCl3, ppm 1,05 (BH, d, J=7,o Hz, c-cuš) 2,H3 (BH, s, N-cnš) Elementaranalys: Beräknat (%): C 64,20 H 6,62 N 7,80 Funnet (%): C 6Ä,l3 H 6,75 N 7,61 (b) H-N-(2-aminoetyl)-5-de-O-metyl-KA-6606 II 240 mg av produkten, som erhölls ovan under (a), behand- för Cu8H59N5Ol2 lades på samma sätt som i exempel 12 (c) för att ge 62 mg av rub- ricerad produkt.

NMR: 6 D20, ppm 1,53 (3H, d, J=7,o,Hz, c-eäš) 2,96 (šñ, S, N-CH3) 5,ÄH (lH, d, J=3,5 Hz, anomeriskt H) Elementaranalys: Beräknat (%): C 50,6ü Funnet (%): C 50,29 för cl6H35N5ou.H2o I I H 9,83 N 15,45 H 9,71 N 18,18 Den jämförande föreningen de-0-metyl-fortímicin A och typiska föreningar enligt föreliggande uppfinning, de-0-metyl- KA-66061, de-O-metyl-4-N-glycyl-KA-6606Vl och de-0-mety1-KA- 7038l, som visas i följande tabell, testades var för sig för att undersöka deras minimala hämmande koncentrationer (NIC) mot försöksorganismerna, som visas i tabell A. Resultaten visas i tabell A. Det följer från detta att genom mangsidiga utvär- deringar Eran dessa resultat de untíhíotiska verkningarna för de typiska föreningarna enligt föreliggande uppfinning är nära tva gånger de för den jämförande föreningen. 447 386 ß omï mfim wcwummuäws FSPSm , , mm.. m. M H^.~oQ< m~.m m ~_ m~ m m.N, fioU< m~.@ m~.@ m_.~ m_.m oQ< @m,~ mm.. @m.~ m_ßm o=@ M. M m~.m @m._ m~.m - -.m m.,m æ~.Q . m_.~ ...Q mm,wO_ m_.wo w~.O @w.F ~H-^_~o=@ w~,o mN.O F .om .OO_ ^ ~H-^moU< mïo _. mfio ofo Nfoz mwøowmzgmw mmcøsowammm få . wfo mfm Now Cm wßšësmš. mïwwmnmpx oo» ._ ooP wß o 2 m mTxo mimmi; .äfioå . . .om oo. A fi~-^moU< m.~_ W N. mw Q WN fiHH-^~oU< m_,m m_.m @m._ mwnm ~o@< _ m,.m m_.m m_.m m~.@ _mo=& o WN Q m~_@ m,.m m~.@ mo=@ _) ._ ß . n _ _ MK MTM :m :m - .mšâ :Z Oo_ m~ mm _ m~ 0 ofiqfoí o_°U @W=uwLm;umw To w N_.o ïflNfl Nnflm mïmuwm» .váuuouopmmgom mm.@ u w~^Q m~.o @m“_ Mmmm UU~< wwwwwwmw To v N.o To W. mwåo Nmo Nmo So "v" Nmo . även mouïfiš 32.53 N o N o N o N.o äoN .Swšm wzuuounšxßamom _mm@~-<¥ H>mo@@-<¥-_>U>~@ H@Q@@-<¥ < Couwewukoo _ _ .

:Tflumëïqmo nz|znfiæumë|o|mo lflævwøroåwo .åæßmcïoàwo Emflcwwfiomxommom .ö :i .a :i J... _ f... e ...zšuou o _.. o ..._ . o :G -šrnflou . wšïwou o .ü . ...x .uuxxiö ...z 3:-... :u ~ ~xx ;o _ .Iíffnw oo: .Ä Hflwflilnr

Claims (3)

447 586 Batentkrav

1. Förening. k ä n n e t e c k n a d av följande for- mel vari R1 och R, är identiska eller olika och vardera betecknar en väteatom eller en metylgrupp, R betecknar en väteatom, 3 -COCHqNH,, -4-amíno~2-hydroxíbutyl eller 1-aminoetyl och när alla R1, Rv och R3 vid 4-ställningen inte orienterad trans till hydroxígrupperna hetecknar väteatomer är metvl-amíno-qru> en J . t vid 3- och S-ställningarna; och ett Farmaceutiskt godtagbart syraadditionssalt därav. Z. Antibíotisk komposition, k ä n n e t e c k n a d därav, att den är sammansatt av (í)írm10,UltíllSML3 víktprocent, räknat pa kompositionens vikt, av en Förening med följande Formel R-u fzfx-NH-R 51

2. (I)-1 vari R] och Rz är identiska eller olika och vardera betecknar en väteatom eller en metylgrupp,-RS betecknar en väteatom, -COCH,NHq, -4-amino-2-hydroxíbutyl eller 1-amlnoetyl och när alla kl,LR3 och R3 betecknar väteatomer, är metyl~aminn~gruppen vid 4-ställningen inte orienterad trans till hydroxigruppernu vid 3- och 5-ställningarna; och ett Earmaceutískt godtagbart syraaddítionssalt därav, och 447 386 32 (ii) ett farmaoeutiskt godtagbart spädningsmedel eller bärare.

3. Förfarande för framställning av en förening med formeln R1 ,ÖH-NH-R “H2 s, 2 Å (I)-l vari R1 0çh.R2 är identiska eller olika och vardera betecknar e en vätcatom eller en metylgrupp, R3 betecknar en väteatom, -COCHZNHZ, alla R1, R2 och RS betecknar väteatomer, metyl-amino-gruppen -4-amino-Z-hydroxibutyl eller 2-amínoetyl, och när vid 4-ställningen inte är orienterad trans till hydroxigrupperna vid 5- och 5-ställningarna; eller ett Earmaceutiskt godtagbart syraaddítionssalt därav, k ä n n e t e c k n a t därav, att man behandlar en förening med följande formel 31 çH~NH-R 51 2 ¿ VVJQCHÜ (II) N-cnr H I \ vari R1 0çh~R;'är_defínlerdde-såsom ovan; med enÄstdrk eyra-Ü och eventuellt skyddar aminogrupperna vid l- och 1'-stallníngare na eller amino- eller metylaminogruppen vid 6'-ställningen hos erhallcn förening, sedan acylerar den med glycin eller l-amíno- 2-hydroxismörsyra, í vilken amínogruppcn är skyddad, eller ett reaktívt derivat därav, eventuellt reducerar den acylerade pro- dukten och sedan avspjälkar den skyddade gruppen och, om sa önskas, omvandlar produkten till ett Farmaceutískt godtagbart syraaddítionssalt därav.