SE443799B - DEVICE FOR BACTERIAL CULTURE FROM A BEGINNING POPULATION TO A FINAL POPULATION, INCLUDING STAND-FORM - Google Patents

Description

D 7806946-5 10 15 20 25 30 35 2 nämnes Mcïarland-standard). En platta, som innehåller Mueller-Hinton-agar bestryks sedan med bakteriebuljong- suspensionen med användning av en bomullslapp. När in- okulatet har torkat appliceras en pappersskiva, som inne- håller ett antibiotiskt eller kemoterapeutiskt medel, på agarn. Plattorna inkuberas över natten och det område runt varje skiva där bakterietillväxt saknas, mäts. Detta mråde är känt som inhiberingszonen och används för att bestämma vilket antibiotika som är användbart för att bekämpa den särskilda bakterien. D 7806946-5 10 15 20 25 30 35 2 mention Mcïarland standard). A plate containing Mueller-Hinton agar is then coated with the bacterial broth suspension using a cotton swab. When the inoculum has dried, a paper disc containing an antibiotic or chemotherapeutic agent is applied to the agar. The plates are incubated overnight and the area around each disc where bacterial growth is absent is measured. This area is known as the inhibition zone and is used to determine which antibiotic is useful to fight the particular bacterium.

För att Kirby-Bauer-tekniken skall vara noggrann måste det finnas ungefärligen l x 108 CFO/ml i det medium som stryks ut på agarplattan. Vanligen bestäms tillväxt- nivån genom visuell 'jämförelse med den ovan beskrivna Mcïarland-standarden. Tidrymden för att nä denna bakterie- É koncentration kan variera från 2 till 8 h beroende på bakterien. Om bakterien tilläts växa med mer än l x 108 CFO/ml och blir grumligare än Mcïarland-standarden, mäste mediet spädas för att vara ekvivalent med standarden.For the Kirby-Bauer technique to be accurate, there must be approximately 1 x 108 CFO / ml in the medium applied to the agar plate. The level of growth is usually determined by visual comparison with the Mcïarland standard described above. The time taken to reach this bacterial concentration can vary from 2 to 8 hours depending on the bacterium. If the bacterium is allowed to grow at more than 1 x 108 CFO / ml and becomes cloudier than the Mcïarland standard, the medium must be diluted to be equivalent to the standard.

En annan metod för att bestäma känsligheten hos bak- terier för olika antibiotika kallas för MIC-testet (NIC I I Minimum Inhiberande koncentration). Detta test diskute- ras i Current Techniques for Antibiotics Susceptibility Testing, Albert Balows, 1974, sid 77-87. Denna metod in- begriper framställning av en serie koncentrationer av ett antibiotika, antingen i ett flytande eller fast medium, som underhåller tillväxten av den bakterie som skall tes- tas. Flytande medier fördelas lämpligen i provrör och fasta medier hälls vanligen i petriskälar. Det är praxis att iordningställa ett område av antibiotikakoncentrationer i form av en serie tväfaldiga spädningar för att genmföra testet. Varje provrör eller petriskål inokuleras med bak- terien ifråga. Efter en inkubationsperiod observeras bak- terietillväxten eller frånvaron av bakterietillväxt för varje antibiotikakoncentration. På detta sätt bestäms NIC för antibiotikan till den närmsta utspädningen vid använd- ning i serie. Detta är den noggrannaste metoden för att bestämma den inhiberande koncentrationen. Denna metod blev fi-jêu' . t. Mim 10 15 20 25" 30 35 7806946-5 3 emellertid inte populär förrän nyligen då det mödosama spädningsarbetet förenklades. Den utspädda antibiotikan inokuleras vid MIC-testet med bakterie i ett visst kon- centrationsomrâde, dvs vanligen 105 - 106 CPC/ml. Buljong, som innehåller bakterier som odlats till ekvivalens med McFarland-standarden, dvs ungefärligen l x 108 CFO/ml, späds för att erhålla denna koncentration.Another method for determining the susceptibility of bacteria to various antibiotics is called the MIC test (NIC I I Minimum Inhibitory Concentration). This test is discussed in Current Techniques for Antibiotics Susceptibility Testing, Albert Balows, 1974, pp. 77-87. This method involves the preparation of a series of concentrations of an antibiotic, either in a liquid or solid medium, which sustains the growth of the bacterium to be tested. Liquid media are conveniently distributed in test tubes and solid media are usually poured into petri dishes. It is the practice to prepare a range of antibiotic concentrations in the form of a series of double dilutions to perform the test. Each test tube or petri dish is inoculated with the bacterium in question. After an incubation period, bacterial growth or the absence of bacterial growth is observed for each antibiotic concentration. In this way, the NIC for the antibiotic is determined for the nearest dilution when used in series. This is the most accurate method for determining the inhibitory concentration. This method became fi- jêu '. t. Mim 10 15 20 25 "30 35 7806946-5 3 not popular until recently when the tedious dilution work was simplified. The diluted antibiotic is inoculated in the MIC test with bacteria in a certain concentration range, ie usually 105 - 106 CPC / ml Broth containing bacteria grown to the equivalent of the McFarland standard, ie approximately 1x108 CFO / ml, is diluted to obtain this concentration.

De ovan angivna känslighetstesterna, liksom andra tester för att bestämma typen av bakterie eller dess känslighet gentemot antibiotika, kräver att en viss för- utbestämd bakteriemängd utnyttjas vid testet för att in- okulera de plattor, på vilka pappersskivan skall placeras när det är fråga om Kirby-Bauer-testet eller för att in- okulera det utspädda antibiotikat när det är fråga om MIC-testet. Detta krävs för att testet skall vara nog- grant. Om en mindre bakteriekoncentration används vid testet, skulle resultatet indikera att bakterien är mera känslig för att antibiotikat än vad den faktiskt är. Om å andra sidan bakterien föreligger i en högre koncentra- tion, skulle testresultatet indikera att en högre koncen- tration av antibiotikat krävs för att inhibera tillväxt av bakterien. Båda indikationerna skulle vara felaktiga.The above sensitivity tests, as well as other tests to determine the type of bacterium or its sensitivity to antibiotics, require that a certain predetermined amount of bacteria be used in the test to inoculate the plates on which the paper disc is to be placed in the case of Kirby. -Bauer test or to inoculate the diluted antibiotic in the case of the MIC test. This is required for the test to be accurate. If a lower bacterial concentration is used in the test, the result would indicate that the bacterium is more sensitive to antibiotics than it actually is. If, on the other hand, the bacterium is present in a higher concentration, the test result would indicate that a higher concentration of antibiotic is required to inhibit the growth of the bacterium. Both indications would be incorrect.

För att de ovannämnda testerna eller motsvarande tester skall utföras, är det nödvändigt att en laboratorietekni- ker tar ett bakterieprov från 4-S bakteriekolonier från den agarplatta, på vilken bakterien har odlats, och place- rar provet i ett buljongodlingsmedium, såsom beskrivits ovan, i 2-8 h. Mediumet kontrolleras periodiskt för att bestämma huruvida bakteriekoncentrationen är ekvivalent med McFarland-standarden eller ej. Vid en visuell under- sökning av mediumet finner man att vissa bakteriekulturer inte har växt till rätt koncentration, medan andra har växt förbi den riktiga koncentrationen. Det förra fallet erfordrar att laboratorieteknikern låter bakterien växa längre, medan det senare fallet erfordrar en spädning för att återföra koncentrationen till samma koncentration som hos standarden. Alla dessa åtgärder är mödosamma och tidsödande. -.- i 3 :i J 2): flzvqagprwav-fßfvïfl* *ya 7806946-5 10 15 20 25 30 35 4 Man har nu upptäckt ett medium, på vilket bakterier kan odlas, men som begränsar den koncentrationsnivä var- till bakterierna tillväxer. Närmare bestämt har man upp- täckt ett vattenhaltigt medium, som har förmåga till od- ling av minst en art från två olika släkten av aeroba, patogena, snabbväxande bakterier från en begynnelsepopu- lacibn till en bestama slutpopulation, vid viixen :iii- växten av bakterien i huvudsak upphör på grund av närings- brist i mediumet, och i vilket medium bakterien förblir livsduglig i minst 18 h. Mediuet innefattar en vatten- lösning, som inbegriper en kolkälla, en kvävekälla, vita- miner och mineralämnen i tillräcklig mängd för att åstad- komma nämnda tillväxt och i en form, som är användbar för bakteriernas tillväxt.In order for the above tests or equivalent tests to be performed, it is necessary for a laboratory technician to take a bacterial sample from 4-S bacterial colonies from the agar plate on which the bacterium has been grown, and place the sample in a broth culture medium, as described above. for 2-8 hours. The medium is checked periodically to determine whether the bacterial concentration is equivalent to the McFarland standard or not. A visual examination of the medium finds that some bacterial cultures have not grown to the correct concentration, while others have grown beyond the correct concentration. The former case requires the laboratory technician to allow the bacterium to grow longer, while the latter case requires a dilution to return the concentration to the same concentration as with the standard. All of these measures are laborious and time consuming. -.- i 3: i J 2): fl zvqagprwav-fßfvï fl * * ya 7806946-5 10 15 20 25 30 35 4 A medium has now been discovered, on which bacteria can be grown, but which limits the concentration level to which the bacteria grow . More specifically, an aqueous medium capable of culturing at least one species from two different genera of aerobic, pathogenic, fast-growing bacteria from an initial population to a definite end population has been discovered in the viixen: iii plant of the bacterium essentially ceases due to malnutrition in the medium, and in which medium the bacterium remains viable for at least 18 hours. The medium comprises an aqueous solution, which includes a carbon source, a nitrogen source, vitamins and minerals in sufficient quantity to achieve the said growth and in a form which is useful for the growth of the bacteria.

De bakterier, för vilka mediumet är användbart, är aeroba bakterier, dvs de som utnyttjar syre för sin till- växt. Bakterierna är också patogena i det att de förorsakar sjukdomar och de är snabbväxande i det att de har genera- tionstid av 50 min eller mindre.The bacteria for which the medium is useful are aerobic bacteria, ie those that use oxygen for their growth. The bacteria are also pathogenic in that they cause diseases and they are fast-growing in that they have a generation time of 50 minutes or less.

Mediumet är användbart vid både gram-negativa och gram-positiva, aeroba, patogena, snabbväxande bakterier.The medium is useful in both gram-negative and gram-positive, aerobic, pathogenic, fast-growing bacteria.

Typen och mängden av de olika beståndsdelarna i mediumet skiljer sig emellertid vanligen för gram-positiva och för gram-negativa bakterier, och den tidsperiod som krävs för att erhålla erforderlig koncentration för de gram-positiva tenderar att vara längre än den för gra-negativa bakte- rier. , _ Odlingsmediet är användart för odling av minst en art från två olika släkten av aeroba, patogena bakterier. Nor- malt kan mediumet odla minst en art från två släkten av gram-positiva bakterier eller minst en art från minst två släkten av gram-negativa bakterier. Bland gram-positiva, aeroba bakterier finns två släkten, som inbegriper de bak- terier, vilka förorsakar de flesta sjukdomar, för vilka normal bakterie- och känslighetstestning utföres. Dessa släkten är Staphylococcus och Streptococcus. Om mediet kan odla arter från vart och ett av dessa båda släkten, kan man enkelt testa bakterierna för att bestämmaomden är gram-v D; ,. _~;',._,«»f,__~_. Jak-j, »jfk j, f 'jngaga mffiafnvtwaaæï* “ i' ~ ~ ~" L 10 15 20 25 30 35 1806946-s' 'S positiv eller gram-negativ med användning av ett gram- färgningstest. Om bakterien är gram-positiv används me- diumet för odling av grampositiva bakterier och bakte- rien odlas till den önskade nivån, såsom till ekvivalens med McFarland-standarden.However, the type and amount of the various constituents of the medium usually differ for gram-positive and for gram-negative bacteria, and the time period required to obtain the required concentration for the gram-positive tends to be longer than that for gram-negative baked - rier. The culture medium is used for culturing at least one species from two different genera of aerobic pathogenic bacteria. Normally, the medium can grow at least one species from two genera of gram-positive bacteria or at least one species from at least two genera of gram-negative bacteria. Among gram-positive aerobic bacteria, there are two genera, which include the bacteria that cause most diseases for which normal bacterial and susceptibility testing is performed. These genera are Staphylococcus and Streptococcus. If the medium can grow species from each of these two genera, one can easily test the bacteria because the determination range is gram-v D; ,. _ ~; ', ._, «» f, __ ~ _. Jak-j, »jfk j, f 'jngaga mf fi afnvtwaaæï *“ i' ~ ~ ~ "L 10 15 20 25 30 35 1806946-s '' S positive or gram-negative using a gram stain test. If the bacterium is gram -positive, the medium is used for culturing gram-positive bacteria and the bacterium is grown to the desired level, such as to equivalence with the McFarland standard.

Om bakterien konstateras vara gram-negativ vid använd- ning av gramfärgningstestet, kan bakterien höra till ett mycket större antal släkten. 16 släkten representerar de bakterier som befunnits förorsaka 99 8 av de sjukdomar som orsakas av gram-negativa, aeroba bakterier. Dessa gram-_ negativa släkten inbegriper: Escherichia, Shigella, Edward- siella, Salmonella, Arizona, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Yersinia, Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella och Pasterurella.If the bacterium is found to be gram-negative when using the gram stain test, the bacterium may belong to a much larger number of genera. 16 genera represent the bacteria that have been found to cause 998 of the diseases caused by gram-negative, aerobic bacteria. These gram-negative genera include: Escherichia, Shigella, Edwardsiella, Salmonella, Arizona, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Yersinia, Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella and Pasterurella.

Bakterierna tillväxer i mediet från en viss popula- tion, som normalt uttrycks såsom CFU enligt definitionen ovan och som normalt hänförs till populationen i en viss volym av mediet, dvs CFO/ml. Begynnelsekoncentrationen kan vara så låg som l CFO, men är normalt och föredraget minst 5 x 106 CFU/ml.The bacteria grow in the medium from a certain population, which is normally expressed as CFU as defined above and which is normally attributed to the population in a certain volume of the medium, ie CFO / ml. The initial concentration may be as low as 1 CFO, but is normal and preferably at least 5 x 10 6 CFU / ml.

Att man startar med en lägre begynnelsepopulation eller -koncentration gör inte att bakterierna tillväxer i mediet till en väsentlig annorlunda slutpopulation eller -koncentration än vid högre begynnelsekoncentration, men påverkar den tid det tar för att slutkoncentrationen skall uppnås. Om inkubationstiden skall regleras, måste sålunda begynnelsekoncentrationen regleras. Den slutkoncentration vartill bakterierna skall odlas benämnes den stationära fasen.Starting with a lower initial population or concentration does not cause the bacteria to grow in the medium to a significantly different final population or concentration than at a higher initial concentration, but affects the time it takes for the final concentration to be reached. Thus, if the incubation time is to be regulated, the initial concentration must be regulated. The final concentration to which the bacteria are to be grown is called the stationary phase.

Såsom diskuterats ovan, varierar tiden för att nå en koncentration ekvivalent med HcFarland-standarden i enlig- het med förfarandet från 2 till 8 h, varvid de flesta- bakterier tar minst 5 - 6 ll för att nå denna koncentra- tion. Med det tillväxtbegränsande mediet når bakterierna företrädesvis slutkoncentrationen eller den stationära fasen inom 5 h. Om bakterierna når den stationära fasen på 2 h med det tillväxtbegränsade mediet, förblir bakte- rierna vid denna fas även om man inte kontrollerar mediet f. Å .ä å* 'šïïxåfviašs fr. 7806946-5 10 15 20 25 30 35 6 under S h och ingen spädning erfordras för att erhålla en koncentration, som är ekvivalent med HcParland-stan- darden. ' När den stationära fasen eller slutkoncentrationen är uppnådd upphör i huvudsak bakteriernas tillväxt. Detta beror på utarmning av minst ett näringsämne, sm är kri- tiskt för den kontinuerliga tillväxten av bakterien och inte på bildning av toxiska biprodukter frän bakterien, vilka stoppar tillväxten och kan förorsaka att popula- tionen minskar väsentligt. Med de standardmedier, som använts före föreliggande uppfinning och som beskrivs i Kirby-Bauer-förfarandet, bestäms den bakteriepopulation som skall nås för att tillväxten skall upphöra av toxiska E biprodukter från bakterien. Denna bakteriepopulation É ligger över Mcïarland-standarden. d Å fiammaæmmmwflmfimàfiwaw%@%%%@%%@fi“ Slutkoncentrationen eller den maximala stationära fasen erhålles på grund av utarmning av ett eller flera näringsämnen. Vid denna punkt planar antalet livskraftiga CFU/ml ut och förblir i huvudsak oförändrat under minst 18 h. Bakterierna förblir livskraftiga under en tidsperiod, som är användbar för att utföra de olika tester som skall utföras på bakterien, såsom beskrivits ovan. Normalt är 3 den tidsperiod. under vilken bakterierna är livsdugliga, 3 minst 18 h. ~ Den önskade slutkoncentrationen för de flesta bakte- rier ligger mellan 6 x 107 och 3,0 x 108 CFO/ml. Detta är ekvivalent med 0,5 Mcïarland-standarden. Mediet kan modi- fieras för att ge andra önskade koncentrationsniväer.As discussed above, the time to reach a concentration equivalent to the HcFarland standard varies according to the procedure from 2 to 8 hours, with most bacteria taking at least 5 - 6 μl to reach this concentration. With the growth-limiting medium, the bacteria preferably reach the final concentration or the stationary phase within 5 hours. If the bacteria reach the stationary phase in 2 hours with the growth-restricted medium, the bacteria remain at this phase even if the medium is not controlled. 'šïïxåfviašs fr. 7806946-5 10 15 20 25 30 35 6 during S h and no dilution is required to obtain a concentration equivalent to the HcParland standard. When the stationary phase or final concentration is reached, the growth of the bacteria essentially ceases. This is due to depletion of at least one nutrient, which is critical for the continuous growth of the bacterium and not to the formation of toxic by-products from the bacterium, which stop the growth and can cause the population to decrease significantly. The standard media used prior to the present invention and described in the Kirby-Bauer process determine the bacterial population to be reached in order to stop the growth of toxic E by-products of the bacterium. This bacterial population É is above the Mcïarland standard. d Å fi ammaæmmmw fl m fi mà fi waw% @ %%% @ %% @ fi “The final concentration or the maximum stationary phase is obtained due to depletion of one or more nutrients. At this point, the number of viable CFU / ml flattens out and remains essentially unchanged for at least 18 hours. The bacteria remain viable for a period of time, which is useful for performing the various tests to be performed on the bacterium, as described above. Normally 3 is the time period. during which the bacteria are viable, 3 at least 18 hours. ~ The desired final concentration for most bacteria is between 6 x 107 and 3.0 x 108 CFO / ml. This is equivalent to the 0.5 Mcïarland standard. The medium can be modified to give other desired concentration levels.

Mediet innehåller olika typer och mängder av bestånds- delar beroende pâ den önskade slutkoncentrationen av bak- terierna och den typ av bakterie som odlas. I samtliga fall förefinnes en kolkälla och kvävekälla, som tillför kol och kväve i en form, so är användbar vid bakterieod- lingen. Normalt förefinnes även vitaminer och mineralämnen. Så- som påpekats, är emellertid mängden av en eller flera av dessa beståndsdelar begränsad för att ästadkoma att bak- terien när en förutbestämd slutkoncentration och därefter ¿ i huvudsak upphör att tillväxa. f . M 10 15 20 25 30 35 7806946-š 7 För de gram-negativa bakterierna inbegriper ett föredraget medium cirka 0,42-0,70 mg kol per milliliter medium. Kolet föreligger~i en form, som är användbar för bakterieodling. Denna form har befunnits vara den, vari kol föreligger i pepton eller en motsvarande form. Det föredragna mediet inbegriper också 0,09-0,15 mg kväve per milliliter medium i en form, som motsvarar det kväve som finns i pepton. Det föredragna mediet har ett pH-värde av cirka 7-Ä8. Vid proteospepton är kolhalten cirka 0,16-0,27 mg kol per milliliter medium, kvävehalten är 0,035-0,056 mg kväve per milliliter medium och kolet och kvävet föreligger i den form som de finns i proteospepton eller i en motsvarande form. En typisk analys av peptonen anges nedan: Procent Pepton Proteospgpton Totalt kväve 16,16 14,37 Primärt proteos N 0,06 0,60 sekundärt proteos N 0,68 4,03 Pepton N 15,38 9,74 ammoniak N 0,04 0,00 Fri amino 3,20 2,66 Amid N 0,49 0,94 Mono-amino N 9,42 7,61 Di-amino N 4,07 4,51 Tryptofan 0,29 0,51~ Tyrosin 0,98 2,51 Crystin " 0,22 0,56 Organiskt svavel 0,33 0,60 Oorganiskt svavel 0,29 0,04 Fosfor 0,22 0,47 Klor 0,27 3,95 Natrium _ 1,08 2,84 Kalium _ '0,22 0,70 :amma i o,osa 0,131 Magnesium 0,056 0,118 Mangan noll 0,0002 Järn » '0,0033 0,00S6 _.'Q.-ÉÄ'Ü?H.-;..-_.~-;,: ïgwir'lampLáinåkngflïwï;..vïsë;ln;.ár.uàmššáiïšßï :mzmuaisaíäišzlßwugufàzvàiiåšf? .-'1.if;v1'_ïai.m.._-.«.. .Saw-vf .M5 _ lo' 15 20 25 30 35 780694645 8 Procent ' Pegton Proteosgggton Aska 3,53 _9,6l Eterlösligt extrakt 0,37' 0,32 Reaktion, pä 7,0 6,8 pä 1 8 lösning i destillerat vatten efter autoklavering is min via 121°c.The medium contains different types and amounts of constituents depending on the desired final concentration of the bacteria and the type of bacterium that is grown. In all cases, there is a carbon source and nitrogen source, which adds carbon and nitrogen in a form that is useful in bacterial culture. Normally there are also vitamins and minerals. However, as pointed out, the amount of one or more of these constituents is limited to cause the bacterium to reach a predetermined final concentration and then ¿essentially cease to grow. f. For the gram-negative bacteria, a preferred medium comprises about 0.42-0.70 mg of carbon per milliliter of medium. The carbon is present in a form which is useful for bacterial culture. This form has been found to be that in which carbon is present in peptone or a similar form. The preferred medium also includes 0.09-0.15 mg of nitrogen per milliliter of medium in a form corresponding to the nitrogen present in peptone. The preferred medium has a pH of about 7-Ä8. In the case of proteospeptone, the carbon content is about 0.16-0.27 mg of carbon per milliliter of medium, the nitrogen content is 0.035-0.056 mg of nitrogen per milliliter of medium and the carbon and nitrogen are in the form in which they are in proteospeptone or in a corresponding form. A typical analysis of the peptone is given below: Percent Peptone Proteospgpton Total nitrogen 16.16 14.37 Primary proteose N 0.06 0.60 Secondary proteose N 0.68 4.03 Peptone N 15.38 9.74 Ammonia N 0.04 0.00 Free amino 3.20 2.66 Amide N 0.49 0.94 Mono-amino N 9.42 7.61 Di-amino N 4.07 4.51 Tryptophan 0.29 0.51 ~ Tyrosine 0, 98 2.51 Crystin "0.22 0.56 Organic sulfur 0.33 0.60 Inorganic sulfur 0.29 0.04 Phosphorus 0.22 0.47 Chlorine 0.27 3.95 Sodium _ 1.08 2.84 Potassium _ '0.22 0.70: amma io, osa 0.131 Magnesium 0.056 0.118 Manganese zero 0.0002 Iron »' 0.0033 0.00S6 _. 'Q.-ÉÄ'Ü? H .-; ..-_ . ~ -;,: ïgwir'lampLáinåkng fl ïwï; .. vïsë; ln; .ár.uàmššáiïšßï: mzmuaisaíäišzlßwugufàzvàiiåšf? .- '1.if; v1'_ïai.m .._-. «.. .Saw-v. lo '15 20 25 30 35 780694645 8 Percent' Pegton Proteosgggton Ash 3.53 _9.6l Soluble extract 0.37 '0.32 Reaction, on 7.0 6.8 on 1 8 solution in distilled water after autoclaving ice min via 121 ° c.

Den föredragna sammansättningen innehåller de vita- miner och mineralämnen som återfinnes i pepton eller proteospepton. Två särskilt föredragna sammansättningar, vilka har befunnits vara användbara vid odling av gram- negativa bakterier till en slutkoncentration av från 6 x 1o7 till 3 x 1o° cru/mi pa mindre an s n, innefattar en blandning av 1000 ml vatten innehållande 0,8 g pepton eller 0,3 g protecspepton, 0,03 g dextros, 2,5 g dikalium- fosfat, 1,25 g monokaliumiosfat och 5,0 g natriuklorid.The preferred composition contains the vitamins and minerals found in peptone or proteospeptone. Two particularly preferred compositions, which have been found to be useful in culturing gram-negative bacteria to a final concentration of from 6 x 10 7 to 3 x 10 6 cru / ml in less than 10 ml, comprise a mixture of 1000 ml of water containing 0.8 g peptone or 0.3 g of protecspeptone, 0.03 g of dextrose, 2.5 g of dipotassium phosphate, 1.25 g of monopotassium phosphate and 5.0 g of sodium chloride.

Fosfaterna tillsätts som buffertmaterial för att hålla kompositionen vid ett pH-värde av cirka 7,0. Buffring är nödvändig vid vissa bakterier. De ovannämnda båda samman- sättningarna skapar ett medium, på vilket arter från de flesta av släktena hos de gra-negativa, aeroba, patogena bakterierna kan odlas till de ovan beskrivna CFU/ml-områ- dena på)5 h o bakteriens begynnelsekoncentration är till- räcklig, dvs minst cirka S x 106 CFO/ml.The phosphates are added as a buffer material to maintain the composition at a pH of about 7.0. Buffering is necessary in some bacteria. The above two compositions create a medium on which species from most of the genera of the gra-negative, aerobic, pathogenic bacteria can be grown to the above-described CFU / ml ranges of the initial concentration of the bacterium. sufficient, ie at least about S x 106 CFO / ml.

Såsom påpekats, är det föredragna kol- och kvävekäl- lorna pepton och proteospepton för de gram-negativa bakte- rierna. Neopepton, trypton och polypepton kan också använ- das, men man har funnit att dessa inte alstrar tillväxt till nivån hos McFarland-standarden inom samma tidrymd och att de inte tillhandahåller de rätta näringsämnena för att cdla vissa gram-negativa bakterier i väsentlig omfattning.As pointed out, the preferred carbon and nitrogen sources are peptone and proteospeptone for the gram-negative bacteria. Neopeptone, tryptone and polypeptone can also be used, but it has been found that they do not produce growth to the level of the McFarland standard within the same time frame and that they do not provide the right nutrients to kill certain gram-negative bacteria to a significant extent.

Dessa material är därför_användbara för ett mera begränsat antal bakterier. kombinationerna av sådana material med pepton eller proteospepton kan emellertid användas för att skapa ett medium, som är användbart vid ett större antal bakterier.These materials are therefore useful for a more limited number of bacteria. however, the combinations of such materials with peptone or proteospeptone can be used to create a medium useful in a large number of bacteria.

Ett föredraget medium för användning vid gram-positiva 'bakterier inbegriper en lösning av 1000 ml vatten innehål- f I. w ä 10 15 20 25 30 35 7806946-5 _ 9 lande 1,7 g tryptikas, 0,3 g fyton, 0,25 g dextros, 0,5 g natriuklorid och 0,25 g dikaliufosfat.A preferred medium for use in gram-positive bacteria comprises a solution of 1000 ml of water containing 1 g of 1.7 g of trypticase, 0.3 g of phyton, 0 g. , 25 g of dextrose, 0.5 g of sodium chloride and 0.25 g of dipotassium phosphate.

Alla de olika medierna används genom att inokulera mediet med bakterien och inkubera mediet under 2-8 h.All the different media are used by inoculating the medium with the bacterium and incubating the medium for 2-8 hours.

Föreliggande uppfinning hänför sig till en anordning, som utnyttjar det ovan beskrivna tillväxtbe- gränsande mediet och som medger erhållande av en viss för- utbestämd bakteriemängd från bakteriekolonier, varmed det tillväxtbegränsande mediet inokuleras. Detta medger att även tidrymden för bakterieodlingen kan förutbestämmas.The present invention relates to a device which utilizes the growth-limiting medium described above and which allows a certain predetermined amount of bacteria to be obtained from bacterial colonies, whereby the growth-limiting medium is inoculated. This allows that even the time period for bacterial culture can be predetermined.

För att erforderlig växt skall ske inom den föredragna tidrymden av 5 h för de gram-negativa bakterierna måste begynnelsepopulationen vara minst cirka S x 106 CFO/ml.In order for the required growth to occur within the preferred period of 5 hours for the gram-negative bacteria, the initial population must be at least about S x 10 6 CFO / ml.

Enligt uppfinningen âstadkommes sålunda en anordning för bakterieodling från en begynnelsepopulation till en slutpopulation, vilken anordning inbegriper: (a) ett kärl. som innehåller ett förråd av odlingsmedium med förmåga att odla nämnda bakterie från begynnelsepopulationen till slut- populationen, varjämte kärlet har en öppning; (b) medel i kärlet för erhållande av bakterier från en bakteriekälla utanför kärlet och för inokulering av odlingsmediet; och (c) avtagbara medel, som frigörbart ingriper med kärlet för att täcka kärlets öppning. för att medge avlägsnande av nämnda bakterieerhållande medel för att erhålla nämnda bak- terie från bakteriekällan utanför kärlet, och för att till- sluta kärlet under inkubationen av det inokulerade mediet, kännetecknad därav, att nämnda bakterieerhållande medel ut- göres av ett avlägsningsbart stavliknande organ med en topp- ände, som är.fäst till nämnda avtagbara medel, och en undre ände, som innehåller minst en ränna för upplockning av en förutbestämd kvantitet bakterier genom kapillärverkan från minst en bakterieodlingskoloni utanför kärlet.According to the invention there is thus provided a device for bacterial culture from an initial population to a final population, which device comprises: (a) a vessel. containing a supply of culture medium capable of culturing said bacterium from the initial population to the final population, and the vessel has an opening; (b) means in the vessel for obtaining bacteria from a bacterial source outside the vessel and for inoculating the culture medium; and (c) removable means releasably engaging the vessel to cover the opening of the vessel. to allow removal of said bactericidal agent to obtain said bacterium from the bacterial source outside the vessel, and to close the vessel during the incubation of the inoculated medium, characterized in that said bactericidal means is constituted by a removable rod-like means with a top end attached to said removable means, and a lower end containing at least one chute for picking up a predetermined quantity of bacteria by capillary action from at least one bacterial culture colony outside the vessel.

Anordningen skall beskrivas mera i detalj med hänvis- ning till de bifogade ritningarna, där fig l är en sek- tionsvy med delarna isärförda av anordningen enligt före- liggande uppfinning. Pig 2 är en perspektivvy av anord- ningen enligt uppfinningen med delarna sektionerade. Fig 3 är en vy av en del av staven hos anordningen enligt upp- finningen, Fig 4 är en vy av staven i fig 3 med införli- 10 15 20 25 30 35 7806946-5 10 vade bakterier. Pig 5 är en sektionsvy av anordningen en- ligt uppfinningen strax efter inokulering av odlingsme- diet med bakterier. Pig 6 är en sektionsvy av anordningen enligt uppfinningen längs linjen 6-6 i fig 5. Fig 7 är en sektionsvy av anordningen enligt uppfinningen efter in- okulering och inkubering till den maximala stationära fasen eller detförutbestämda odlingsstadiet. Pig 8 visar en sek- tion av anordningen i fig 7 längs linjen 8-8.The device will be described in more detail with reference to the accompanying drawings, in which Fig. 1 is a sectional view with the parts separated from the device according to the present invention. Fig. 2 is a perspective view of the device according to the invention with the parts sectioned. Fig. 3 is a view of a part of the rod of the device according to the invention, Fig. 4 is a view of the rod in Fig. 3 with incorporated bacteria. Fig. 5 is a sectional view of the device according to the invention shortly after inoculation of the culture medium with bacteria. Fig. 6 is a sectional view of the device according to the invention taken along line 6-6 of Fig. 5. Fig. 7 is a sectional view of the device according to the invention after inoculation and incubation to the maximum stationary phase or the predetermined culture stage. Fig. 8 shows a section of the device in Fig. 7 along line 8-8.

Anordningen enligt föreliggande uppfinning inbegriper ett kärl eller en hylsa l, sqn är gjord av transparent, de- formerbart material, såsom polypropen,polyamid,cellulosa- acetatbutyrat eller olika polyestrar- Inuti hylsan l finns en glasampull 2, som inrymmer det tillväxtbegränsande me- diet 3, såsom beskrivits ovan. Glasampullen, som skall beskrivas senare, är spröd, dvs den bryts sönder när den deformerbara hylsan l pressas saman. Intill ampullen 2 hos anordningen finns en stav 4, som innehåller en av- smalnande ränna 5, vilken skall beskrivas mera i detalj i samband med fig 3 och 4. Staven 4 används för att plocka bakterier från de olika bakteriekolonierna och är utformad för att införa en förutbestämd bakteriemängd från kolo-' nierna till den avsmalnande rännan 5. Staven 4 är fäst till ett lock 6. Både locket 6 och staven 4 är gjorda av plastmaterial, såsom polypropen. På insidan av locket 6 finns två åsar 7 och 8, vilka medger aseptisk tätning mellan locket 6 och hylsan l..Detta hindrar andra mikroorganismer från att intränga i hylsan l innan anordningen inokuleras samt under inkubationen. I locket 6 finns också tre stycken utsprång 9, av vilka två visas i fig l. Dessa utsprång skyddar hålet 10 i locket 6 frän.att blockeras av krossat glas från ampullen 2 (som bildas när anordningen aktiveras) när den deformerbara hylsan 1 deformeras för att pressa ut eller utsöndra bakterierna och mediet3 via hålet 10. Hålet 10 är täckt med en tryckhäftande klisterremsa ll med en flik 1.2 I under tiden före användning av anordningen och till dess att inkubationen av anordningen är avslutad. vid denna tid- punkt avlägsnas klisterremsan Il så att hålet 10 exponeras.The device according to the present invention comprises a vessel or sleeve 1, sqn is made of transparent, deformable material, such as polypropylene, polyamide, cellulose acetate butyrate or various polyesters. Inside the sleeve 1 there is a glass ampoule 2, which contains the growth-limiting medium. 3, as described above. The glass ampoule, which will be described later, is brittle, i.e. it breaks when the deformable sleeve 1 is compressed. Adjacent to the ampoule 2 of the device is a rod 4, which contains a tapered groove 5, which will be described in more detail in connection with Figs. 3 and 4. The rod 4 is used to pick bacteria from the different bacterial colonies and is designed to introduce a predetermined amount of bacteria from the colonies to the tapered groove 5. The rod 4 is attached to a lid 6. Both the lid 6 and the rod 4 are made of plastic material, such as polypropylene. On the inside of the lid 6 there are two ridges 7 and 8, which allow aseptic sealing between the lid 6 and the sleeve 1. This prevents other microorganisms from penetrating into the sleeve 1 before the device is inoculated and during the incubation. There are also three projections 9 in the lid 6, two of which are shown in Fig. 1. These projections protect the hole 10 in the lid 6 from being blocked by broken glass from the ampoule 2 (which is formed when the device is activated) when the deformable sleeve 1 is deformed for to squeeze out or secrete the bacteria and the medium 3 via the hole 10. The hole 10 is covered with a pressure-sensitive adhesive strip 11 with a flap 1.2 I during the time before use of the device and until the incubation of the device is completed. at this time, the adhesive strip II is removed so that the hole 10 is exposed.

Detta medger utsöndring eller utpressning av mediet 3 och 10 15 20 25 30 35 7sos946¿s_ O ll bakterier från hylsan l. I Pig 2 visar anordningen i dess normala form före användning, utom att den tryckhäftande klisterremsan ll inte finns med. Såsom framgår av fig 2 är staven 4 be- lägen intill ampullen 2 och åsarna 7 och 8 är belägna intill den övre delen av hylsan l. Hålet 10 visas per- spektiviskt med den tryckhäftande klisterremsan ll av- lägsnad. Utsprången 9 är-inte synliga i figuren. Glas- - apullen 2 har normalt dimensionerna 35,6 mm x 6,3 mm och innehåller cirka 0,6 ml odlingsmedium. Hylsan l år normalt 43,0 mm lång och 8,6 mm i diameter.This allows secretion or squeezing of the medium 3 and bacteria from the sleeve 1. In Fig. 2 the device shows in its normal form before use, except that the pressure-sensitive adhesive strip III is not included. As can be seen from Fig. 2, the rod 4 is located next to the ampoule 2 and the ridges 7 and 8 are located next to the upper part of the sleeve 1. The hole 10 is shown in perspective with the pressure-sensitive adhesive strip 11 removed. The projections 9 are not visible in the figure. The glass apule 2 normally has the dimensions 35.6 mm x 6.3 mm and contains approximately 0.6 ml of culture medium. The sleeve is normally 43.0 mm long and 8.6 mm in diameter.

Ett viktigt drag hos anordningen enligt föreliggande uppfinning år staven 4 med den avsmalnande rännan 5.An important feature of the device according to the present invention is the rod 4 with the tapered groove 5.

Rännan S visas mera i detalj i fig 3. Såsm framgår av fig 3 är rännan 5 avsmalnande. Rånnan år utformad för att åstadkomma kapillärverkan, varigenom bakterierna skjuts in i rännan 5. När bakterierna skjuts in genom att föra staven 4 vinkelrät mot kolonins yta så att den större ån- den av den avsmalnande rännan 5 först bringas i kontakt med kolonin, börjar bakterierna att röra sig uppför rånnan och luft bortgår från rännans avsmalnande ände. vid en viss förutbestämd nivå kan ytterligare bakterier inte in- föras i rännan, eftersom bakterier som kontinuerligt tvingas in i rånnan 5 rör sig ut vid rånnans 5 topp i stället för att röra sig upp till den avsmalnande änden hos rännan S. Fig 4 visar schematiskt bakterier 13 i rån- nan S vid den normala, fyllda nivån hos rånnan. Rånnan S är utformad för att tillåta en viss bakteriepopulation att införas i.'rännan. Denna population år vanligen ekvi- valent med åtminstone 5 x 106 bakterier per milliliter när bakterierna placeras i mediet hos anordningen enligt uppfinningen. En avsmalnande rånna, som år cirka 0,43 mm djup, 0,25 mm bred vid sin största ände och 3,1 mm lång, tillåter den ovannämnda upptagningen. Rånnan kan modifi- eras för att inryma andra önskade bakterierpopulationer.The gutter S is shown in more detail in Fig. 3. As can be seen from Fig. 3, the gutter 5 is tapered. The gutter is designed to provide capillary action, whereby the bacteria are pushed into the gutter 5. When the bacteria are pushed in by moving the rod 4 perpendicular to the surface of the colony so that the larger spirit of the tapered gutter 5 is first brought into contact with the colony, the bacteria begin to move up the gutter and air escapes from the tapered end of the gutter. at a certain predetermined level, additional bacteria cannot be introduced into the chute, since bacteria which are continuously forced into the chute 5 move out at the top of the chute 5 instead of moving up to the tapered end of the chute S. Fig. 4 shows schematically bacteria 13 in the rune S at the normal, filled level of the rune. The gutter S is designed to allow a certain bacterial population to be introduced into the gutter. This population is usually equivalent to at least 5 x 10 6 bacteria per milliliter when the bacteria are placed in the medium of the device according to the invention. A tapered mug, which is approximately 0.43 mm deep, 0.25 mm wide at its largest end and 3.1 mm long, allows the above-mentioned uptake. The robin can be modified to accommodate other desired bacterial populations.

Användningen av anordningen kmmer nu att beskrivas med hänvisning till fig 5-8. Fig 5 visar schematiskt i sektion anordningen enligt uppfinningen just efter inoku- - a .The use of the device will now be described with reference to Figs. 5-8. Fig. 5 shows diagrammatically in section the device according to the invention just after inoculation.

I v: ' flw: 41 “å j? i f, in.. ,,._..«.11?::,.:;§, f* Ivlvaš-h-avæs; v .mn-m ...i 'fl-'ß X _ ,, ,.:,, . 7806946-5 10 15 20 25 30 35 12 lering av anordningen med användning av staven 4. Loc- ket 6 har avlägsnats från hylsan l och staven 4 har via den avsmalnande rännan 5 plockat upp en tillräcklig bakteriemängd för att inokulera anordningen, vanligen minst S x 106 bakterier, från 4-5 bakteriekolonier. Loc- ket 6 har satts på och via staven 4 och rännan 5 har bak- terierna placerats intill ampullen 2. Såsom visas i fig 5, har ampullen 2 krossats genom att deformera hylsan och bakterierna 13 anges schematiskt i det tillväxtbegränsan- de mediet 3. I denna form inkuberas anordningen normalt vid cirka 35°C under 2-8 h. Det föredragna odlingsnediet erfordrar cirka S h för att uppnå den förutbestämda, före- dragna bakteriemängden, dvs från 6 x 107 till 3 x 108 CPU/ml. I fig 6visas anordningen enligt fig 5 i sektion vid begynnelsestadiet av inkubation och fig 6 visar hyl- san l, som innesluter den krossade ampullen 2, odlings- mediet 3 och bakterierna 13.I v: 'fl w: 41 “å j? i f, in .. ,, ._ .. «. 11? ::,.:; §, f * Ivlvaš-h-avæs; v .mn-m ... i 'fl-' ß X _ ,,,.: ,,. 7806946-5 10 15 20 25 30 35 12 12 12 The lid has been removed from the sleeve 1 and the rod 4 has picked up a sufficient amount of bacteria via the tapered groove 5 to inoculate the device, usually at least S x 106 bacteria, from 4-5 bacterial colonies. The lid 6 has been put on and via the rod 4 and the gutter 5 the bacteria have been placed next to the ampoule 2. As shown in Fig. 5, the ampoule 2 has been crushed by deforming the sleeve and the bacteria 13 are schematically indicated in the growth-limiting medium 3. In this form, the device is normally incubated at about 35 ° C for 2-8 hours. The preferred culture medium requires about 5 hours to achieve the predetermined, preferred amount of bacteria, i.e. from 6 x 107 to 3 x 108 CPU / ml. Fig. 6 shows the device according to Fig. 5 in section at the initial stage of incubation and Fig. 6 shows the sleeve 1, which encloses the crushed ampoule 2, the culture medium 3 and the bacteria 13.

Efter inkuberingen har anordningen den i fig 7 visade formen. I detta fall är anordningen precis som förut, bortsett från att bakteriepopulationen 13 har ökat betyd- ligt. Pig 8 är en sektion av anordningen i fig 7 vid detta stadium. Fig 7 illustrerar anordningen vid använd- ning efter inkubering och visar att remsan ll har avlägs- nats och att anordningen nu är färdig för utpressning av de odlade bakterierna via'h&let 10. Anordningen hâlles med hålet 10 nedåt, hylsan 1 pressas samman och deforma- ras och bakterierna 13 och mediet 3 pressas ut via hå- let 10. Krossat glas från ampullen 2 förhindras från att sätta igen hålet medelst utsprången 9.After the incubation, the device has the shape shown in Fig. 7. In this case, the device is just as before, except that the bacterial population 13 has increased significantly. Fig. 8 is a section of the device of Fig. 7 at this stage. Fig. 7 illustrates the device in use after incubation and shows that the strip 11 has been removed and that the device is now ready for squeezing the cultured bacteria via the hole 10. The device is held with the hole 10 downwards, the sleeve 1 is pressed together and deformed. and the bacteria 13 and the medium 3 are pressed out via the hole 10. Broken glass from the ampoule 2 is prevented from clogging the hole by means of the projections 9.

Den avsmalnande rännan 5 i staven 4 kan varieras för att effektuera ett bakterieinokulat av annan storlek, så att den upplockade bakteriepopulationen är större eller mindre än den ovan beskrivna. Andra konfigurationer än en avsmalnande ränna kan användas vid föreliggande upp- finning så länge staven eller upplockningsorganet har för- måga att upprepat plocka upp en förutbestämd bakteriemängd.The tapered groove 5 in the rod 4 can be varied to effect a bacterial inoculum of a different size, so that the picked bacterial population is larger or smaller than that described above. Configurations other than a tapered chute may be used in the present invention as long as the rod or pick-up means is capable of repeatedly picking up a predetermined amount of bacteria.

Anordningen medger odling av bakterier från en viss för- utbestämd nivå, som bestäms av upplockningsorganet, till 10 15 20 25 30 35 7806946-á . 13 _ en slutnivå, som bestäms av det tillväxtbegränsande me- diet, på en viss tidrymd, vilken tidrymd bestäms av be- gynnelsepopulationen, det tillvâxtbegränsande mediets samansâttning samt typen av bakterie. Vid användning i ett Kirby-Bauer-test eller MIC-test, föredrages det att anordningen odlar bakterierna på S h till en koncentra- tion av från cirka 6 x 107 till 3 x 108 CFO/ml.The device allows the cultivation of bacteria from a certain predetermined level, which is determined by the picking means, to 7806946-á. 13 - a final level, which is determined by the growth-limiting medium, for a certain period of time, which period of time is determined by the initial population, the composition of the growth-limiting medium and the type of bacterium. When used in a Kirby-Bauer test or MIC test, it is preferred that the device grow the bacteria on S h to a concentration of from about 6 x 107 to 3 x 108 CFO / ml.

Den visade anordningen innehåller det tillväxtbe- gränsande mediet 3 i en glasampull 2. Andra modifieringar kan göras för att uppnå samma resultat. Så t ex kan an- ordningen utgöras av enbart en gängad hylsa med ett skruvlock, varpå staven är fäst. I detta fall föreligger det tillväxtbegränsande mediet inuti hylsan och inokule- ras direkt när locket sätts på hylsan. Bakterierna ploc- kas upp med staven och när staven placeras i mediet skru- vas locket åter pâ. Andra modifieringar inses av fack- mannen på området och innefattas i de efterföljande pa- tentkraven.The device shown contains the growth-limiting medium 3 in a glass ampoule 2. Other modifications can be made to achieve the same result. For example, the device can consist of only a threaded sleeve with a screw cap, to which the rod is attached. In this case, the growth-limiting medium is present inside the sleeve and is inoculated directly when the lid is placed on the sleeve. The bacteria are picked up with the rod and when the rod is placed in the medium, the lid is screwed back on. Other modifications will be appreciated by those skilled in the art and are included in the appended claims.

Den i fig l visade anordningen är gjord genom att gjuta och forma de olika glas- och plastkomponenterna.The device shown in Fig. 1 is made by molding and shaping the various glass and plastic components.

Ungefär 0,6 ml av mediet 3 placeras i glasampullen 2 som värmeförseglas och ångsteriliseras under lO min vid l2l° .Approximately 0.6 ml of the medium 3 is placed in the glass ampoule 2 which is heat sealed and steam sterilized for 10 minutes at 120 °.

Hylsan 1, locket 6 och remsan ll gassteriliseras med etylenoxid under 3 h vid 38°C och luftas sedan under 8 h.Sleeve 1, lid 6 and strip 11 are gas sterilized with ethylene oxide for 3 hours at 38 ° C and then aerated for 8 hours.

Den förseglade och steriliserade glasampullen 2 införes aseptiskt i hylsan l, locket 6 sätts på och remsan ll pressas på plats.The sealed and sterilized glass ampoule 2 is inserted aseptically into the sleeve 1, the lid 6 is put on and the strip 11 is pressed into place.

I de efterföljande exemplen hänvisas till följande material och bakterier, vars kalla anges nedan. I exemp- len hänför sig 'odlingsanordning' till en anordning med de ovan beskrivna dimensionerna.In the following examples, reference is made to the following materials and bacteria, the cold of which is given below. In the examples, 'cultivation device' refers to a device with the dimensions described above.

Trypton, ett enzymatiskt hydrolysat av kasein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Tryptone, an enzymatic hydrolyzate of casein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Pepton, ett enzymatiskt hydrolysat *v kasein, Difcc, Inc., Detroit, Michigan, USA: \ Dextros, Difco, Inc., Detroit, Michigan, OSA.Peptone, an enzymatic hydrolyzate of casein, Difcc, Inc., Detroit, Michigan, USA: Dextros, Difco, Inc., Detroit, Michigan, OSA.

Polypepton, ett enzymatiskt hydrolysat av kasein och djurvävnad, Bioquest, Inc., Baltimore, Maryland, OSA. .å z s “ f. s'ff«nnv.fill"äfiš”èfïïrilüx.v' f :.>f.Ü'-..».. ' w zlffë* nu .a Mn; , nä. '1\,::'.~'§..;;;f_. 10 15 20 25 30 35 7806946-5 14 Neopepton, ett enzymatiskt hydrolysat av protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Polypeptone, an enzymatic hydrolyzate of casein and animal tissue, Bioquest, Inc., Baltimore, Maryland, OSA. .å zs “f. s'ff« nnv.fill "ä fi š” èfïïrilüx.v 'f:.> f.Ü'- .. »..' w zlffë * nu .a Mn;, nä. '1 \, Neopeptone, an enzymatic hydrolyzate of protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Proteospepton, ett enzymatiskt hydrolysat av protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.Proteospeptone, an enzymatic hydrolyzate of protein, Difco, Inc., Detroit, Michigan, USA.

Salmonella typhimurium, American Type Culture Collec- tion, (ATCC) Nr. 19028.Salmonella typhimurium, American Type Culture Collection, (ATCC) Nr. 19028

Shigella Sonnei, (AICC 25331).Shigella Sonnei, (AICC 25331).

Enterobacter cloacae (AICC 23355) och St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Enterobacter cloacae (AICC 23355) and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Klebsiella pneumoniae, (ATCC 23357) och St. Paul Ram- sey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Klebsiella pneumoniae, (ATCC 23357) and St. Paul Ram- sey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Proteus vulgaris (ATCC 6380).Proteus vulgaris (ATCC 6380).

Proteus mirabilis, St. John's Hospital, St. Paul, Minnesota and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul. Minne- sota, USA. _ Serratia marcescens (ATCC 8100) och St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Proteus mirabilis, St. St. John's Hospital, St. Paul, Minnesota and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul. Minne- sota, USA. _ Serratia marcescens (ATCC 8100) and St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Providencia species, University of Minnesota, Minne- apolis, Minnesota, USA.Providencia species, University of Minnesota, Minne- apolis, Minnesota, USA.

Citrobacter species, University of Minnesota, Minne- apolis, Minnesota, USA.Citrobacter species, University of Minnesota, Minnesota, Minnesota, USA.

Edwardsiella, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA. A Arizona, University of Minnesota, Minneapolis, Minne- sota, USA.Edwardsiella, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA. A Arizona, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.

Yersinia, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.Yersinia, University of Minnesota, Minneapolis, Minnesota, USA.

Pseudomonas aeruginosa (AECC 27853) St. Paul Ramsay Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Pseudomonas aeruginosa (AECC 27853) Paul Ramsay Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Hscherichia coli (AICC 25922) och St. Paul Rmsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Hscherichia coli (AICC 25922) and St. Paul Rmsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Acinetobacter calcoaceticus, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Acinetobacter calcoaceticus, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Proteus morganii, St. Paul Rmsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Proteus morganii, St. Paul Rmsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

Bnterobacter aerogenes, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. 3 sp 10 15 20 25 780694645 _ l5 Pasteurella (species), St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. ' CDC Group II F, St; Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. I Moraxella, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. V Citrobacter freundii, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.Bnterobacter aerogenes, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. 3 sp 10 15 20 25 780694645 _ l5 Pasteurella (species), St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. 'CDC Group II F, St; Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. In Moraxella, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA. V Citrobacter freundii, St. Paul Ramsey Hospital, St. Paul, Minnesota, USA.

EXEMPEL l “ Anordningar med de ovan beskrivna specifikationerna inokulerades med olika bakterier med användning av den avsmalnande rännan på staven hos anordningen. En begynnel- sekoncentration noterades för bakterien. Det tillväxtbe- gränsande mediet, som var inrymt i ampullen hos varje an- ordning, innehöll följande: Q O I 8 g Peptøn 0,03 g dextros 2,5 g dikaliufosfat , 1,25 g monokaliumfosfat 5,0 g natriumklorid Lösningar av mediet innehållande 0,2 g pepton och 1,6 g pepton iordningsstalldes också.EXAMPLE 1 “Devices with the specifications described above were inoculated with various bacteria using the tapered groove on the rod of the device. An initial concentration was noted for the bacterium. The growth-limiting medium contained in the ampoule of each device contained the following: QOI 8 g Peptøn 0.03 g dextrose 2.5 g dicala phosphate, 1.25 g monopotassium phosphate 5.0 g sodium chloride Solutions of medium containing 0 , 2 g of peptone and 1.6 g of peptone were also prepared.

Fyra andra tillväxtbegransande medier anvåndes, vilka inbegrep proteospepton, trypton, neopepton och polypepton.Four other growth inhibitory media were used, which included proteospeptone, tryptone, neopeptone and polypeptone.

Dessa insattes i stället för peptonen i ovanstående samman- sättning. De resulterande begynnelsekoncentrationerna be- stämdes och var, räknat i CPU/ml, såsom anges i tabell 1.These were used instead of the peptone in the above composition. The resulting initial concentrations were determined and were, calculated in CPU / ml, as given in Table 1.

Värdena_avser medelvärdet för 15 prover, dvs 5 prover för var och en av de tre samansättningarna för varje medium. :ï .5- 71:. _.,; 15' I i 1 ,':_§f¿ f? f; å .s __.. 93.: _.........,.v...ä,wfi,»..w,ww,fi.3%................i _ ... .umuuaøuou uø> uouøusxoau uuo .uænoccu 00.33 >ø 015322 åu>o uuuuåmcø Boman .ua øcuouuøøuuøuxøm »ou u mun »ou u »å | n. »ou u ~»u nuuøuus» usøooå »S ._ ...._ »S ._ »å , »S ._ ...u »S ._ Q» »S ._ u; $..._._..å »S ._ ...__ »S ._ »a »S ._ ä» »MS ._ du. ».S .__ u; _ 352.» .. ... .. n »S ._ ...... SuS-...ääæ a »ou u oå n , »ou u ...u »ou u må ucouuuu »ou u oåu »ou u oå »ou u må »ou u m... »ou u n... _ .Svounououo m. »ou u ...m ._ ... _ »ou .__ uå »ou u må »ou u o.o nacoaooowoo »S ._ mi. _ »S ._ ä» »S ._ ......_ . , »S ._ O... »S ._ »J 132.023...The values_refer to the mean value of 15 samples, ie 5 samples for each of the three compositions for each medium. : ï .5- 71 :. _.,; 15 'I i 1,': _ §f¿ f? f; å .s __ .. 93 .: _.........,. v ... ä, w fi, ».. w, ww, fi.3% .......... ...... i _ .... .umuuaøuou uø> uouøusxoau uuo .uænoccu 00.33> ø 015322 åu> o uuuuåmcø Boman .ua øcuouuøøuuuøuxøm »ou u mun» ou u »å | n. »ou u ~» u nuuøuus »usøooå» S ._ ...._ »S ._» å, »S ._ ... u» S ._ Q »» S ._ u; $ ..._._ .. å »S ._ ...__» S ._ »a» S ._ ä »» MS ._ du. ».S .__ u; _ 352. » .. ... .. n »S ._ ...... SuS -... ääæ a» ou u oå n, »ou u ... u» ou u må ucouuuu »ou u oåu» ou u oå »ou u må» ou u m ... »ou u n ... _ .Svounououo m.» ou u ... m ._ ... _ »ou .__ uå» ou u må »ou u oo nacoaooowoo »S ._ mi. _ »S ._ ä» »S ._ ......_. , »S ._ O ...» S ._ »J 132.023 ...

.. .. »S ._ »J »S ._ ...m _ »S ._ ...._ 132.22. ...-f...___ | ... , »S ._ o; »S ._ i» »S ._ ä» ._2.:.._>_.._» 5 .. , n . »S ._ o; »S ._ o... »S ._ m... ._3_..:.9.3â ß. »S ._ må _ ._ o »S ._ »i _ »S ._ »i »S ._ »J .Suau-»Su N »S ._ m... . | 1 »S ._ ...o . »S ._ ...u 313...... .. »S ._» J »S ._ ... m _» S ._ ...._ 132.22. ...- f ...___ | ..., »S ._ o; »S ._ i» »S ._ ä» ._2.: .._> _.._ »5 .., n. »S ._ o; »S ._ o ...» S ._ m ... ._3 _ ..:. 9.3â ß. »S ._ må _ ._ o» S ._ »i _» S ._ »i» S ._ »J .Suau-» Su N »S ._ m .... | 1 »S ._ ... o. »S ._ ... u 313 ....

/ »S ._ ...u _ .. »S ._ ...u »S ._ Så »S ._ o; Sue. Snuïßa-u 7 gå å å. ....Hmmm . .n .uâüfldä 10 15 20 7806946-5 17 EXEMPEL 2 Följande material löstes 1 1000 ml avjoniserat vat- ten och angsceriiiseraaéà via 121°c 1 15 min: 0,3 9 PGPCOQ 0,03 g dextron 2,5 g dikaliumfosfat 1,25 g monokaliumfosfat 5,0 g natriumklorid Mediumlösningar innehållande 0,2 g pepton och 1,6 g pepton iordningstâlldes ocksâ. Odlingsanordningar iord- ningställdes sedan med användning av vart och ett av me- dierna. Med utnyttjande av staven 4 hos odlingsanordningen plockades bakterier från 4-5, 18-25 h gamla bakteriekolo- nier av de olika bakterier, som anges i tabell 2. Fem od- lingsanordningar användes för varje bakterie för att er- hålla ett medelvärde för fem prover för varje bakterie./ »S ._ ... u _ ..» S ._ ... u »S ._ So» S ._ o; Sue. Snuïßa-u 7 go to å .... Hmmm. EXAMPLE 2 The following material was dissolved in 1000 ml of deionized water and disturbed via 121 ° C for 15 minutes: 0.3 g PGPCOQ 0.03 g dextron 2.5 g dipotassium phosphate 1, 25 g of monopotassium phosphate 5.0 g of sodium chloride Medium solutions containing 0.2 g of peptone and 1.6 g of peptone were also prepared. Cultivation devices were then prepared using each of the media. Using the rod 4 of the culture device, bacteria were picked from 4-5, 18-25 hour old bacterial colonies of the various bacteria, listed in Table 2. Five culture devices were used for each bacterium to obtain an average of five samples for each bacterium.

Fjorton olika bakterier testades. Sålunda utnyttjades 70 stycken odlingsanordningar vid testet för vart och ett av de tre medierna. Varje odlingsanordning blandades un- der 10 s och inxuberaaes via 3s° . Antalet 11v=auq11ga bakterier räknades vid 0, 4, 5 och 6 h. Resultaten anges 1 tabeii 2. 'å e J' få Å v: . v = fisáï. -ï:; ~V w. _,,_:W,v:,ä%fiy?.,, ., 7so69Å6-s~ 18 ' TABELL 2 _ An=a1 (X 107 cru/m1) Bakterier - - 1) 0,2 g 0,8 g' 1,6 g Eacheriçhia co11_ 0 1,6 1,8! 2,! . 1 0,: 5,2 11,6 ä 5 3,7 10,2 1l,8 3 sn1ge11a a0nne1 0 u,2 3,62 1,2 ~ 2% - 8 5,1 1h,l 15,8 “ g 6 6,0 12,2 21,0 É Klebsiella pneumøníae 3 0 2,6 2,86 2,6 E 0 5,3 13,0 11,6 3 5 1,9 13,6 13,6 3 6 0,9 12,0 16,0 É Entercbacter cloacae 0 5,3 8,! 3,9 å “ Ü 9,! 17,0 17,! 3 5 9,2 19,0 ~ 26,0 6 9,N 19,6 38,6 å -Providencia apecieß 0 1,3 6,1! 9,1 É 8 11,6 22,2 30,2 3 5 13,2 21,! 38,6 å 6 13,2 22,8 39,8 É Proceua m1rab111a 0~ 1,2 l,66 5,8 3 5 8,6 19,8 33,2 _ 6 9,1 2l,0 37,2 ä Salmonella typhimuriun 0 2,! 2,32 3,8 iš I 6,6 16,! _27,8 3 5 7,1 16,! 31,0 5 Pseudomonaa aeruginoaa 0 1,0 0,7 0,8 É I 5,6 1l,6 11,! : 5 3,6 16,6 18,6 3 6 o Citrobacter species 0 3,8 31,0 6,6 Å _. 4 9,2 20,8 21,0 1 5 9,3 20,8 30,6 g _ V 6 12,6 _31,l 32,6 få Ar1=°na 0 1,1 1,n6 2,0 6 u 8,1 15,2 16,0 S M9 16,0 21,8 6 8,9 11,6 26,2 Lä» , W,¿¶wfs_g¿r«r:ïn~. ~.»g,.,.~v,«-w WW 1 m., 7806946-s' , 19 TABELL 2 (fortsättning) :men (x 107 era/mn Bakterier ' 'rid (h) 0,2 g 0,8 g 1,8 g Ed ard 1 11 0 2 2 2 98 1 9 W 8 B a u 5 2,5 6,02 8,0 6 2|~ Sf, 02 3 7 _ Yerainia 2 :za 3:9 16:e 5 5,4 11,5 19,2 .6 651 13r° 2112 1 62 1 1 Serratl marceaeens g å:š lqzo llzo S 6,3 _ 6 6,8 26,3 23,3 ' A '1 1 36 0 S Proteus vulßaria 2 6:; 19:36 19:2 s 6,3 23,2 31,* 6 1,3 22,0 3~,S EXEHPEL 3 .Fourteen different bacteria were tested. Thus, 70 cultivators were used in the test for each of the three media. Each culture medium was mixed for 10 s and incubated via 3 s °. The number of 11v = auq11ga bacteria was counted at 0, 4, 5 and 6 h. The results are given 1 tabeii 2. 'å e J' få Å v:. v = fisáï. -ï :; ~ V w. _ ,, _: W, v:, ä% fi y?. ,,., 7so69Å6-s ~ 18 'TABLE 2 _ An = a1 (X 107 cru / m1) Bacteria - - 1) 0.2 g 0.8 g '1.6 g Eacheriçhia co11_ 0 1.6 1.8! 2 ,! . 1 0 ,: 5.2 11.6 ä 5 3.7 10.2 1l, 8 3 sn1ge11a a0nne1 0 u, 2 3.62 1.2 ~ 2% - 8 5.1 1h, l 15.8 “g 6 6.0 12.2 21.0 É Klebsiella pneumøníae 3 0 2.6 2.86 2.6 E 0 5.3 13.0 11.6 3 5 1.9 13.6 13.6 3 6 0, 9 12.0 16.0 É Entercbacter cloacae 0 5.3 8 ,! 3.9 å “Ü 9 ,! 17.0 17 ,! 3 5 9.2 19.0 ~ 26.0 6 9, N 19.6 38.6 å -Providencia apecieß 0 1.3 6.1! 9.1 É 8 11.6 22.2 30.2 3 5 13.2 21,! 38.6 å 6 13.2 22.8 39.8 É Proceua m1rab111a 0 ~ 1.2 l .66 5.8 3 5 8.6 19.8 33.2 _ 6 9.1 2l .0 37.2 ä Salmonella typhimuriun 0 2 ,! 2.32 3.8 iš I 6.6 16 ,! _27,8 3 5 7,1 16 ,! 31.0 5 Pseudomonas aeruginoaa 0 1.0 0.7 0.8 É I 5.6 1l, 6 11 ,! : 5 3.6 16.6 18.6 3 6 o Citrobacter species 0 3.8 31.0 6.6 Å _. 4 9.2 20.8 21.0 1 5 9.3 20.8 30.6 g _ V 6 12.6 _31, l 32.6 få Ar1 = ° na 0 1.1 1, n6 2.0 6 u 8.1 15.2 16.0 S M9 16.0 21.8 6 8.9 11.6 26.2 Lä », W, ¿¶wfs_g¿r« r: ïn ~. ~. »G,.,. ~ V,« - w WW 1 m., 7806946-s', 19 TABLE 2 (continued): men (x 107 era / mn Bacteria '' rid (h) 0.2 g 0 , 8 g 1,8 g Ed ard 1 11 0 2 2 2 98 1 9 W 8 B au 5 2,5 6,02 8,0 6 2 | ~ Sf, 02 3 7 _ Yerainia 2: za 3: 9 16 : e 5 5,4 11,5 19,2 .6 651 13r ° 2112 1 62 1 1 Serratl marceaeens g å: š lqzo llzo S 6,3 _ 6 6,8 26,3 23,3 'A' 1 1 36 0 S Proteus vulßaria 2 6:; 19:36 19: 2 s 6,3 23,2 31, * 6 1,3 22,0 3 ~, S EXEHPEL 3.

Exempel 2 upprepades, utom att pepton utbyttes mot polypepton. Resultaten anges 1 tabell 3.Example 2 was repeated, except that peptone was exchanged for polypeptone. The results are given in Table 3.

TABELL 3 , :men (x 107 evo/mn Bakterier “ 'rm un 0.2 g 0.8 g 1.6 g Eacherichia c011 0 1,! 0,3 1,1 8 1 1,8 9,8 6,8 å 6,0 5,5 5,5 _,__ 6,1 1,9 1,9 Shigella Sønnei 0 1,7 1,68 2,8 - . l 7,1 e 9,98 10,6 5 , 6,8 9,88 11,8 6 8,0 11,! 111,0 Klebsiella pneumoniae 0 3 0 3 68 3 3 - l 6:9 u§18 1,1 s 1,0 1,3 8,0 6 1,8 12,6 9,5 _ Élïeš :E31 z få mífêïzßgli f 18-., Nås» än. 7806946-5 20 'rama-nn 3 (fortsättning) _ Anta (x 107 evo/mn Enterobacter cloacae 10 0,2 3,2 1,3 Å _, I 16,2 19,0 8,1 3 6 11,6 13,6 16,8 .ä Providencia apecies ¿ ' 0 - - - å (fel på inqkulatetl- ; - - - å i v _ 6 - i - Proteus nirnbilia 0 0,l6 0,l6 0,3! ;š I ' 2,7 3,86 3,6 É 5 7,6 1l,6 13,0 g 6 7,5 10,6 11,! å s 1 11 typnmuriun 0 1 3 1 l 0 91 , a none a “_ 6,8 6,9 7,. ä S 10,0 11,8 10,1 å 6 9,0 11,1 11,0 - Paeudomonas aeruginøsa 0 5,8 1,7 5,6 å 8 8,0 8,3 11,0 6 7,5 20,3 23,6 ä Citrobacter apecies 0 15,! 21,6 3l,2 É l 16,6 22,1: 2 22,2 5 114,8 31,1: 25,6 6 15,2 21,2 30,! Arizona 0 3,7 8,0 3,2 É 5 5:5 1302 12,5 É 6 7,0 20,0 11,2 Edwardslella 0- Ingen tillväxt å _ I Ingen tillväxt É 5 Ingen tillväxt ¿ 6 V Ingen tillväxt ' É _ Yerainia 0 8,8 2,35 5,7 ä l 8,8 5,0 10,7 if] 6 8,6 11,0 18,6 _; Serratia marcescens 0 l,l 0,6 l,1 Aš 5 15,2 18,8 - 10,1 43 _ 6 15,! 15,0 13,6 A1 _ Bakterier Proteus vulgaris EXEMPEL 4 21 7806946-6 rAsELL 3 (fortsättning) Antal (x 10 rid (n) 0,2 g omaó 6:9 1s,s 16,5 7 cru/ni) Ota g lysl 2,64 1,4 7,92 4,2 15,4 11,3 18,0 15,3 Exanpel 2' upprepades , ntom att pepton utbyttes mot neopepton. Resultaten anges i tabell 4.TABLE 3,: men (x 107 evo / mn Bacteria “'rm un 0.2 g 0.8 g 1.6 g Eacherichia c011 0 1,! 0.3 1.1 8 1 1.8 9.8 6.8 å 6.0 5 , 5 5.5 _, __ 6.1 1.9 1.9 Shigella Sønnei 0 1.7 1.68 2.8 -. L 7.1 e 9.98 10.6 5, 6.8 9.88 11,8 6 8,0 11,! 111,0 Klebsiella pneumoniae 0 3 0 3 68 3 3 - l 6: 9 u§18 1,1 s 1,0 1,3 8,0 6 1,8 12,6 9,5 _ Élïeš: E31 z få mífêïzßgli f 18-., Nås »än. 7806946-5 20 'rama-nn 3 (continued) _ Anta (x 107 evo / mn Enterobacter cloacae 10 0,2 3,2 1, 3 Å _, I 16,2 19,0 8,1 3 6 11,6 13,6 16,8 .ä Providencia apecies ¿'0 - - - å (error on inqkulatetl-; - - - å iv _ 6 - i - Proteus nirnbilia 0 0, l6 0, l6 0,3!; š I '2,7 3,86 3,6 É 5 7,6 1l, 6 13,0 g 6 7,5 10,6 11 ,! å s 1 11 typnmuriun 0 1 3 1 l 0 91, a none a “_ 6,8 6,9 7 ,. ä S 10,0 11,8 10,1 å 6 9,0 11,1 11,0 - Paeudomonas aeruginøsa 0 5.8 1.7 5.6 å 8 8.0 8.3 11.0 6 7.5 20.3 23.6 ä Citrobacter apecies 0 15,! 21.6 3l, 2 É l 16, 6 22.1: 2 22.2 5 114.8 31.1: 25.6 6 15.2 21.2 30,! Arizona 0 3.7 8.0 3.2 É 5 5: 5 1302 12.5 É 6 7.0 20.0 11.2 Edwa rdslella 0- No growth å _ I No growth É 5 No growth ¿6 V No growth 'É _ Yerainia 0 8.8 2.35 5.7 ä l 8.8 5.0 10.7 if] 6 8.6 11.0 18.6 _; Serratia marcescens 0 l, l 0,6 l, 1 Aš 5 15,2 18,8 - 10,1 43 _ 6 15 ,! 15.0 13.6 A1 _ Bacteria Proteus vulgaris EXAMPLE 4 21 7806946-6 rAsELL 3 (continued) Number (x 10 rid (n) 0.2 g omaó 6: 9 1s, s 16.5 7 cru / ni) Ota g lysine 2.64 1.4 7.92 4.2 15.4 11.3 18.0 15.3 Example 2 'was repeated, except that peptone was exchanged for neopeptone. The results are given in Table 4.

Bakterier Escherichia cøli Shigel1a_aonne1 xleusieilaqpneumoqiae Enterobaeter eloaeae Providencia species Proteus mirabilia TMEWÅ Ant61 (x 1o7 cru/m1) Tid (h) 0,2 g 0,8 g 1,6 g 0 0,80 1,0 0,55 I 0,50 0,6 0,38 5 1,8 1,96 1,1_ 6 1,3 l,0 3,0 0 1,8 0,8 0,19 Ä 3,3 2,3 1,0 5 u,6 6,2 u,z 6 6,3 6,1 n,o 0 0,2 0,13 0,1 I 3,7 2,5 l,0 5 7,2 2,5 3,0 6 5,3 5,8 8,2 0 Ingen tillväxt I Ingen tillväxt S Ingen tillväxt 6 Ingen tillväxt 5 _ 1,! - 0,1 6 _ I), _ 1,8 0 2,0 1,0 l,2 n 6,3 a,s ' 6,6 5 10,0 17,6 16,0 6 10,5 21,8 22,2 -Lixäwww : .;\p._í.«êfiïàiír4u .fix -Lfi-v...f_.: « . 7806946-5 'rassnn 4 (fortsättning) An:a1 (x 107 cru/m1) Bakterier Salmonella typhimuriqm Pseudomonas aeruginosa Citrobacter speciesf Arizona.Bacteria Escherichia cøli Shigel1a_aonne1 xleusieilaqpneumoqiae Enterobaeter eloaeae Providencia species Proteus mirabilia TMEWÅ Ant61 (x 1o7 cru / m1) Time (h) 0.2 g 0.8 g 1.6 g 0 0.80 1.0 0.55 I 0.50 0.6 0.38 5 1.8 1.96 1.1_ 6 1.3 l .0 3.0 0 1.8 0.8 0.19 Ä 3.3 2.3 1.0 5 u, 6 6.2 h, z 6 6.3 6.1 n, o 0 0.2 0.13 0.1 I 3.7 2.5 l, 0 5 7.2 2.5 3.0 6 5.3 5.8 8.2 0 No growth I No growth S No growth 6 No growth 5 _ 1 ,! - 0,1 6 _ I), _ 1,8 0 2,0 1,0 l, 2 n 6,3 a, s' 6,6 5 10,0 17,6 16,0 6 10,5 21, 8 22,2 -Lixäwww:.; \ P._í. «Ê fi ïàiír4u .fix -L fi- v ... f_ .:«. 7806946-5 'rassnn 4 (continued) An: a1 (x 107 cru / m1) Bacteria Salmonella typhimuriqm Pseudomonas aeruginosa Citrobacter speciesf Arizona.

Yerslnia Edwardaiella Serratia marceacena Proteus vulgaris EZXEMPEL 5 rid (h) 9,2 g 0,8 g 1,6 g ' 0 3 3 2 RB 2 6 1 122 8292 820 5 13,2 17,2 19,0 6 12,6 16,6 16,0 0 0-2 0 16 0 2! u .126 629 H29 S Spa 9|5 906 6 1,2 18,0 16,0 0 5 n 1 62 13 0 1 121 121m i 5 12,2 20,6 21,2 6 15,6 30,2 31,! 20 3 8 3 0 2~6 a 623 626 126 5 1,9 13,0 11,8- 6 9,8 16,! 17,l 0 I! 9 6 210 6 0 0 620 1021 1028 6 10,0 20,6 21,0 0 Inga värden I Inga värden 5 Inga värden 5 Inga värden 0 3 5 3 16 5 1 n 821 1021 928 5 11,3 11,6 12,3 6 9, 12,1 12,8 0 2,! 3,56 2,0 l 5,5 12,5 8,1 5 8,6 23,8 16,! 6 10,7 28,8 23,2 Exempel 2 upprepades, utan att pepton utbyttes mot trypton; Resultaten anges 1 tabell S. á á å y 1:61 .IL,. _;16äsšëíffèélß'=.É'J.1'=É.ÅÉÉ:,Q -.L.¿.í~f.ï'í12..»Åñ3B§L.»il1Ã-§sßz-.fixšfiååißïuåzfiè ”N04 auf; 115.' 2' 1, « _ .ff{-.Ü::'="'flf 7806946-s' 23 TABELL 5 7 ï , Antal (x 10 gmml) Bakterier ___-Tid (h) 2 ___-img -J-fll 6 Escherichla coli 0 3,5 3,9 2,1 É sn1ge11a aønnei o 1,0 _0,h 0,33 ' Å 0 6,3 11,0 10,0 g 5 7,1 16,0 16,0 6 8,2 21,3 22,3 g Klebsiella pneumoniae 0 5,9 5,32 5,7 Q 0 13,2 10,2 16,2 å 5 10,0 15,8 15,! 1 6 13,0 19,6 19.! - ¿ Enterobacter cloacae 0 8,7 7,08 10,6 É 5 15,2 39,2 33,8 Providencia species 0 3,2 3,52 3,9 R 8,2 16,l 17,0 , 5 8,2 22,18 22,2 6 5,8 2l,6 27,l Proteus mlrabilia I 0 3,3 2,08 3, 3 5 11,1 21,6 19,0 á 6 13,0 26,2 28,0 § Salmonella typhimuriun 0 1,1 1,56 1,0 ä “ l 7,5 15,6 11,6 5 8,0 21,! 13,8 å 6 10,6 27,6 19,2 ¿ Paeudomonaa aeruginosa 0 3,! 2,52 2,9 å 9 I 10,0 11 0 11,6 2 11,0 10,! 13,0 Citrobacter species 0 3,3 2,66 2,! * I 16,6 15,8 17,2 s 11,0 sm 21,1 Arizona 0 1,! 1,0 0,66 I 5,5 6,2 6,3 , 5 5,7 12,0 10,2 8 .6 6,! 17,3 ll,2 e' , “.^-~':V. .« « "”" 7sos94s¿5 3 24 ~rAßßnL 5 (fortsättning, § - Antal (x 10 cru/ml) 2 Bakterier ;r_1_¿___(h) _|__¶° 2 Q|_8_¶. .1. 5 i sawaraaiella of _ 0,18 0,85 1,6 É z ë-å š-s s 2,9 aja N18 å rerainia 0 2,0 1,58 2,1 yå H 5,1 5,8 10,0 0 5 6,1 8,h2 13,6 å Serratia marcescens 0 3,2 5,93 3,0 ä Ä 16,6 20,8 15,6 3 5 19,2 25,! 21,0 ¿ Proteus vulgaris 3 å,g6 1å,å 1å,g_ nå 5 10,0 16,5 16,0 g 6 10,0 25,1 22,3 ¿ sxsursn 6 K. É Exempel 2 upprepades, utom att pepton utbyttes mot proteospeptøn. Resultaten anges 1 tabell 6, Ae-.ßf-a nu; .,«.....~,.Ä."-<. _. -...f.\ , f;..'.Yerslnia Edwardaiella Serratia marceacena Proteus vulgaris EXAMPLE 5 rid (h) 9.2 g 0.8 g 1.6 g '0 3 3 2 RB 2 6 1 122 8292 820 5 13.2 17.2 19.0 6 12.6 16.6 16.0 0 0-2 0 16 0 2! u .126 629 H29 S Spa 9 | 5 906 6 1.2 18.0 16.0 0 5 n 1 62 13 0 1 121 121m i 5 12.2 20.6 21.2 6 15.6 30.2 31 ,! 20 3 8 3 0 2 ~ 6 a 623 626 126 5 1.9 13.0 11.8- 6 9.8 16 ,! 17, l 0 I! 9 6 210 6 0 0 620 1021 1028 6 10.0 20.6 21.0 0 No values I No values 5 No values 5 No values 0 3 5 3 16 5 1 n 821 1021 928 5 11.3 11.6 12 , 3 6 9, 12.1 12.8 0 2,! 3.56 2.0 l 5.5 12.5 8.1 5 8.6 23.8 16 ,! 6.7 28.8 23.2 Example 2 was repeated, without exchanging peptone for tryptone; The result is given in 1 table S. á á å y 1:61 .IL ,. _; 16äsšëíffèélß '=. É'J.1' = É.ÅÉÉ:, Q -.L.¿.í ~ f.ï'í12 .. »Åñ3B§L.» Il1Ã-§sßz-.fixš fi ååißïuåz fi è ”N04 auf ; 115. ' 2 '1, «_ .ff {-. Ü ::' =" 'flf 7806946-s' 23 TABLE 5 7 ï, Number (x 10 gmml) Bacteria ___- Time (h) 2 ___- img -J- fl l 6 Escherichla coli 0 3.5 3.9 2.1 É sn1ge11a aønnei o 1.0 _0, h 0.33 'Å 0 6.3 11.0 10.0 g 5 7.1 16.0 16.0 6 8.2 21.3 22.3 g Klebsiella pneumoniae 0 5.9 5.32 5.7 Q 0 13.2 10.2 16.2 å 5 10.0 15.8 15 ,! 1 6 13.0 19 , 6 19.! - ¿Enterobacter cloacae 0 8.7 7.08 10.6 É 5 15.2 39.2 33.8 Providencia species 0 3.2 3.52 3.9 R 8.2 16, l 17 , 0, 5 8,2 22,18 22,2 6 5,8 2l, 6 27, l Proteus mlrabilia I 0 3,3 2,08 3, 3 5 11,1 21,6 19,0 á 6 13, 0 26.2 28.0 § Salmonella typhimuriun 0 1.1 1.56 1.0 ä “l 7.5 15.6 11.6 5 8.0 21 ,! 13.8 å 6 10.6 27.6 19.2 ¿Paeudomonaa aeruginosa 0 3 ,! 2,52 2,9 å 9 I 10,0 11 0 11,6 2 11,0 10 ,! 13,0 Citrobacter species 0 3,3 2,66 2 ,! * I 16.6 15.8 17.2 s 11.0 cm 21.1 Arizona 0 1,! 1.0 0.66 I 5.5 6.2 6.3, 5 5.7 12.0 10.2 8 .6 6 ,! 17,3 ll, 2 e ', “. ^ - ~': V..« «" ”" 7sos94s¿5 3 24 ~ rAßßnL 5 (continued, § - Number (x 10 cru / ml ) 2 Bacteria; r_1_¿ ___ (h) _ | __¶ ° 2 Q | _8_¶. .1. 5 i sawaraaiella of _ 0.18 0.85 1.6 É z ë-å š-ss 2.9 aja N18 å rerainia 0 2.0 1.58 2.1 yå H 5.1 5.8 10.0 0 5 6.1 8, h2 13.6 å Serratia marcescens 0 3.2 5.93 3.0 ä Ä 16.6 20.8 15.6 3 5 19.2 25 ,! 21.0 ¿Proteus vulgaris 3 å, g6 1å, å 1å, g_ reach 5 10.0 16.5 16.0 g 6 10.0 25.1 22.3 ¿sxsursn 6 K. É Example 2 was repeated, except that peptone is exchanged for proteospeptone. The results are given in Table 6, Ae-.ßf-a now; ., «..... ~, .Ä." - <. _. -... f. \, F; .. '.

TABELL 6 _ 0 Antal 1: 107 cru/ml) Bákterier Tid (h) 0,2 g 0,8 2 1,6 g § Escherichia cøll 0 1â,â 1å,z5 lšzå É 5 7,! 22,0 22,0 É 6 7,6 20,! - 29,0 3 _ ' 0 s 9 6 aa u s f Shigella sonnei I 1,,° 23:2 20,6 , 5 13,n 20,8 28,8 6 13,0 25,4 33,! 0 H l 3 52 3 5 Xlebsiella pneumoniae l 12,6 15,2 15:, 6 13,! 21,2 17,8 ' l 2 0 8 I 3 Enterobacter cloacae ßg 12,2 znzz 17:6 3 S 13|° 2a|3 zïgo' _ 4- _ « Bakterier Providencia species Proteus mirabiils Salmonella typhimurium _ Pseudomonas aeruginøaa Citrobacter speciea Arizona Edwardsiella Yfirainia Serratia marcescens Prøtéua vulgaris 3 GWIIDO ÛUIÜÖ QUIDO OQUICO GUIRO 550180 GUI-IG UWDRO GUIDO 1aos94sis TABELL 6 (fortsättning) > Antal (x 107 cm/ml) Tid (h) Q,2 g Q,8 Q 1,6 g 1620 11,6 13,6 -I-Irw W-IIU) 'Qñww Q Qi W GGN Q WP' UJUJN UJUIUJ UII'%FÛ UIHQU) \Û@@U'l wsnw wwwflu ÉNÛQ NN°æ ßNN @@ U\ 33,2 1,1 32,0 u1,a un,s 5.3 32,: 38,0 ua,s SJ 25,2 um» www uu om :www :mmm wwwm mo QQQC ÜQÜO CC _ø~a~ omum am PHP NHH WN swsn wvwq 18,! GGUMM OGOfl 'å -, i? « .~ -.«:- .~ ~. A. N 4 ,.- . -. , f ,. f.. .~,A..«.|..,.f~¿.,. flnh.. .....~,..~xflmmaïwfißßåfivfilnfifmy*~nm¥a§am^í;¿.f::f.s:':; ' V. 7806946-5 10 15 20 25 30 35 .26 EXEMPEL 7 * " .TABLE 6 _ 0 Number 1: 107 cru / ml) Bacteria Time (h) 0.2 g 0.8 2 1.6 g § Escherichia cøll 0 1â, â 1å, z5 lšzå É 5 7 ,! 22.0 22.0 É 6 7.6 20 ,! - 29,0 3 _ '0 s 9 6 aa u s f Shigella sonnei I 1 ,, ° 23: 2 20,6, 5 13, n 20,8 28,8 6 13,0 25,4 33 ,! 0 H l 3 52 3 5 Xlebsiella pneumoniae l 12,6 15,2 15 :, 6 13 ,! 21,2 17,8 'l 2 0 8 I 3 Enterobacter cloacae ßg 12,2 znzz 17: 6 3 S 13 | ° 2a | 3 zïgo' _ 4- _ «Bacteria Providencia species Proteus mirabiils Salmonella typhimurium _ Pseudomonas aeruginøaa Citrobacter speciea Arizona Edwardsiella Y fi rainia Serratia marcescens Prøtéua vulgaris 3 GWIIDO ÛUIÜÖ QUIDO OQUICO GUIRO 550180 GUI-IG UWDRO GUIDO 1aos94sis TABLE 6 (continued)> Number (x 107 cm / ml) Time (h) Q, 2 g Q, 8 Q 1.6 1620 11,6 13,6 -I-Irw W-IIU) 'Qñww Q Qi W GGN Q WP' UJUJN UJUIUJ UII '% FÛ UIHQU) \ Û @@ U'l wsnw www fl u ÉNÛQ NN ° æ ßNN @@ U \ 33,2 1,1 32,0 u1, a un, s 5.3 32 ,: 38,0 ua, s SJ 25,2 um »www uu om: www: mmm wwwm mo QQQC ÜQÜO CC _ø ~ a ~ omum am PHP NHH WN swsn wvwq 18,! GGUMM OGO å 'å -, i? «. ~ -.«: -. ~ ~. A. N 4, .-. -. , f,. f ... ~, A .. «. | ..,. f ~ ¿.,. fl nh .. ..... ~, .. ~ x fl mmaïw fi ßßå fi v fi ln fi fmy * ~ nm ¥ a§am ^ í; ¿.f :: f.s: ':; V. 7806946-5 10 15 20 25 30 35 .26 EXAMPLE 7 * ".

Resultaten sm erhölls med mediet enligt förelig- gande uppfinning jämfördes med de resultat som erhölls med användning av ett konventionellt buljongmedium, dvs tryptisk sojabuljong och standardförfarande. 100 odlings- anordningar iordningställdes, vilka innehöll samma medium som angivits i exempel 2. 100 kliniska bakterieisolat, som erhållits från patienter, odlades med användning av' dessa odlingsanordningar och den standardodlingsteknik som etablerats för Kirby-Bauer-testet. De testade bakte- rierna inhegrep: Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter calocoaceticus Proteus mirabilis Proteus morganii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Serratia marcescens Pasteurella (species) CDC Group II ? Moraxella _ Citrobacter freundii 4 till S isolerade kolonier berördes med odlings- anordningens stav och staven användes för att inokulera odlingsmediet i odlingsanordningen. Enheterna inkubera- des vid 35°C i en inkubator av märket 3M modell 107 under'\ 4 h. Klisterremsförseglingen på locket avlägsnades hos odlingsenheten och 6-8 droppar bakteriesuspension för- delades på en bomullslapp. Lappen ströks i 3 riktningar över en Hueller-Hinton-agarplatta och Kirhy- muer-testet fullfölj- des i enlighet med ovan angivna National Clinical Committee for Laboratory Standards (NCCLS) of the United States of America, Antibiotics Susceptibility Standard. En jämförelse gjordes mellan resultaten för den antihiotiska känslighet som erhållits med användning av odlingsmedium-anordningen enligt uppfinningen samt med användning av standardteknik 10 15 20 780694645' 21 för Bakterieodling. Resultaten var jämförbara.The results sm obtained with the medium of the present invention were compared with the results obtained using a conventional broth medium, i.e. tryptic soy broth and standard procedure. 100 culture devices were prepared, which contained the same medium as in Example 2. 100 clinical bacterial isolates obtained from patients were cultured using these culture devices and the standard culture technique established for the Kirby-Bauer test. The tested bacteria included: Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter calocoaceticus Proteus mirabilis Proteus morganii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Serratia marcescens Pasteurella (species) CDC Group II? Moraxella - Citrobacter freundii 4 to S isolated colonies were touched with the culture device rod and the rod was used to inoculate the culture medium in the culture device. The units were incubated at 35 ° C in a 3M Model 107 incubator for 4 hours. The adhesive strip seal on the lid was removed at the culture unit and 6-8 drops of bacterial suspension were distributed on a cotton swab. The patch was coated in 3 directions over a Hueller-Hinton agar plate and the Kirhymer test was performed in accordance with the above-mentioned National Clinical Committee for Laboratory Standards (NCCLS) of the United States of America, Antibiotics Susceptibility Standard. A comparison was made between the results of the antihiotic sensitivity obtained using the culture medium device according to the invention and using standard technology for bacterial culture. The results were comparable.

EXEMPEL 8- Följande material löstes i 1000 ml avjoniserat vatten och ångsteriliserades vid l21°C under 15 min: 1,7 g Tryptikas 0,3 g' Fyton 0,25 g Dextros 0,5 g NaC1 0,25 g KZHPO4 Odlingsanordningarna som användes i detta exempel var polypropenhylsor, sâsm beskrivits ovan, med mediet placerat direkt inuti. Bylsorna tillslöts med ett plast- lock innehållande ett 'Tyvec'-filter. Mediet inokulerades med användning av en trådögla med Staphyloccocus aureus- bakterier, som erhållits från 4-5 kolonier av nämnda bak- terie på en agarplatta. Odlingsanordningarna blandades under 10 s och inkuberades sedan vid 35°C. Antalet livs- augnge bakterier beraxneaee via o, 1, 2,5, 4,5, 5,5, 5,5, 11,5, 13,5, 23,5 een 31 h. aemuteten vmeae ett ae: ur- sprungliga antalet var l x 104 och att vid 11,5 h antalet hade axe: :111 exrxe 1,1-1,9 r 1o° cru/m1 rem: et: enune: inte minskade väsentligt från detta värde under de reste- rande intervallerna. l a; . < U' w v »gare -._:~J..Å.'L_: -. s» Ü.'1f*»1.«»"f'“~=» .' 'Ia-fw v» «. .f . r . ' _ . lå-.rarfi-Jaøáæm ra;mäts-ïüa:é$§3uïrmím5ï«a~auvm*ßfinfimmfiwf' 'W vrf”EXAMPLE 8 The following materials were dissolved in 1000 ml of deionized water and steam sterilized at 211 ° C for 15 minutes: 1.7 g Trypticase 0.3 g Phyton 0.25 g Dextrose 0.5 g NaCl 0.25 g KZHPO in this example, polypropylene sleeves, as described above, were with the medium placed directly inside. The guns were closed with a plastic lid containing a 'Tyvec' filter. The medium was inoculated using a wire loop with Staphyloccocus aureus bacteria, obtained from 4-5 colonies of said bacterium on an agar plate. The cultures were mixed for 10 s and then incubated at 35 ° C. The number of life-threatening bacteria beraxneaee via o, 1, 2.5, 4.5, 5.5, 5.5, 11.5, 13.5, 23.5 een 31 h. Aemuteten vmeae ett ae: original the number was lx 104 and that at 11.5 h the number had ax:: 111 exrxe 1.1-1.9 r 1o ° cru / m1 stra: et: enune: did not decrease significantly from this value during the remaining intervals. l a; . <U 'w v »gare -._: ~ J..Å.'L_: -. s »Ü.'1f *» 1. «» "f '“ ~ = ».' 'Ia-fw v »«. .F. R.' _. Lå-.rar fi- Jaøáæm ra; mäts-ïüa: é $ §3uïrmím5ï «a ~ auvm * ß fi n fi mm fi wf '' W vrf”

Claims (8)

mff-gfjepf-y-f-w, . . å vaïïswï” 13 PATENTKRAVmff-gfjepf-y-f-w,. . å vaïïswï ”13 PATENT REQUIREMENTS 1. Anordning för bakterieodling från en begynnelse- polulation till en slutpopulation, vilken anordning in- begriper: (a) ett kärl, som innehåller ett förråd av odlingsmedium med förmåga att odla nämnda bakterie från 5 begynnelsepolulationen till slutpopulationen, varjämte kärlet har en öppning; (b) medel i kärlet för erhållande av bakterier från en bakteriekälla utanför kärlet och för inokulering av odlingsmediet; och (c) avtagbara medel, som frigörbart ingriper med kärlet för att täcka 19 kärlets öppning, för att medge avlägsnande av nämnda bakterieerhållande medel för att erhålla nämnda bakterie från bakteriekällan utanför kärlet, och för att till- sluta kärlet under inkubationen av det inokulerade «mediet, k ä n n e t e c k n a d därav, att nämnda 15 bakterieerhållande medel utgöres av ett avlägsningsbart stavliknandne organ med en toppände, som är fäst till nämnda avtagbara medel, och en undre ände, som inne- håller minst en ränna för upplockning av en förutbestämd kvantitet bakterier genom kapillärverkan från minst 20 en bakterieodlingskoloni utanför kärlet.A device for culturing bacteria from an initial population to a final population, said device comprising: (a) a vessel containing a supply of culture medium capable of culturing said bacterium from the initial population to the final population, the vessel having an opening; (b) means in the vessel for obtaining bacteria from a bacterial source outside the vessel and for inoculating the culture medium; and (c) removable means releasably engaging the vessel to cover the opening of the vessel, to allow removal of said bactericidal means to obtain said bacterium from the bacterial source outside the vessel, and to close the vessel during the incubation of the inoculated « The medium, characterized in that said bactericidal means is constituted by a removable rod-like member having a top end attached to said removable means and a lower end containing at least one chute for picking up a predetermined quantity of bacteria by capillary action from at least one bacterial culture colony outside the vessel. 2. Anordning enligt kravet'l, k ä n n e t e c k - n a d' därav, att odlingsmediet har förmåga att odla bakterien från begynnelsepopulationen till en förutbe- stämd slutpopulation av mellan 6 x 107 och 4 x 108 CPU/ml, 25 varvid bakterietillväxten väsentligen upphör vid den förutbestämda slutpopulationen på grund av brist på ett kritiskt näringsämne.Device according to claim 1, characterized in that the culture medium is capable of culturing the bacterium from the initial population to a predetermined final population of between 6 x 107 and 4 x 108 CPU / ml, wherein the bacterial growth substantially ceases at the predetermined final population due to a lack of a critical nutrient. 3. Anordning enligt kravet l, k ä n n e t e c k - n a d därav, att odlingsmediet är ett vattenhaltigt 30 medium med förmåga att odla minst en art från två olika släkten av aeroba, patogena, snabbväxande bakterier från begynnelsepopulationen till en förutbestämd slut- population, vid vilken bakterietillväxten väsentligen upphör på grund av brist på näringsämne i mediet, vari \ 1 'Ä 1. 1 1. .v,-, -~ Ä-Xfi- »w L- ' 1:1»- -wvw Jm* -mifvßtwwna- .ß 10 15 20 25 'upprätthålla ett pH-värde av ca 7-8. 7806946-5 fl bakterien förblir livsduglig, och at en vattenlösning innehållande en kolkälla, en kvävekälla, vitaminer och mineralämnen i tillräcklig mängd för att åstadkomma nämnda odling och i en form som är användbar av bakterien för nämnda odling.Device according to claim 1, characterized in that the culture medium is an aqueous medium capable of culturing at least one species from two different genera of aerobic, pathogenic, fast-growing bacteria from the initial population to a predetermined end population, in which bacterial growth essentially ceases due to lack of nutrient in the medium, wherein \ 1 'Ä 1. 1 1. .v, -, - ~ Ä-X fi- »w L-' 1: 1» - -wvw Jm * -mifvßtwwna- .ß 10 15 20 25 'maintain a pH of about 7-8. 7806946-5 fl the bacterium remains viable, and that an aqueous solution containing a carbon source, a nitrogen source, vitamins and minerals in sufficient quantity to effect said culture and in a form useful by the bacterium for said culture. 4. Anordning enligt kravet 3, n a a därav, att mediet inbegriper en varrennairig lösning av pepton, vilken är huffrad för att upprätt- hålla ett pH-värde av ca 7-8.The device of claim 3, wherein said medium comprises a varietal solution of peptone which is buffered to maintain a pH of about 7-8. 5. Anordning enligt kravet 3, därav, att mediet inbegriper en vattenhaltig buffrad för att t mediet innefattar k ä n n e t e c k - k ä n n e t e c k - n a d lösning av proteospepton, vilken ärThe device of claim 3, wherein the medium comprises an aqueous buffer so that the medium comprises a solution of proteospeptone, which is 6. Anordning enligt kravet l,_ k ä n n e t e c k - n a d därav, att rännan i det stavliknande organet är en avsmalnande ränna.Device according to claim 1, characterized in that the gutter in the rod-like member is a tapered gutter. 7. Anordning enligt kravet 1, n a d därav, att det avtagbara medlet innefattar ett lock för kärlet, vilket lock har ett hål för utmatning av odlade bakterier utan att avtaga locket samt ett frigörbart täckorgan för hålet.Device according to claim 1, n a d in that the removable means comprises a lid for the vessel, which lid has a hole for discharging cultured bacteria without removing the lid and a releasable cover means for the hole. 8. Anordning enligt kravet l, k 3 n a d därav, att kärlet är deformerbaxc, och att mediet är innelslutet i en spröd behållare inuti kärlet. k ä n n e t e c k - n e t e c k - nia ~ 1, _ , _ .få ,.".,!_~.n.;t.'.-.Device according to claim 1, k 3 n a d, in that the vessel is deformed at the back, and that the medium is enclosed in a brittle container inside the vessel. k ä n n e t e c k - n e t e c k - nia ~ 1, _, _ .få,. ".,! _ ~ .n.; t .'.-.