RU99101109A

RU99101109A - The method of enzymatic production of deacylated cephalosporins

Info

Publication number: RU99101109A
Application number: RU99101109/13A
Authority: RU
Inventors: Мартен Нибур; Вром Эрик Де; Йоханнис Люгтенбюрг; Дирк Схиппер; Адрианус Вильхельмус Херманус Воллебрегт; Рулоф Ари Ланс Бовенберг
Original assignee: Гист-Брокейдс Б.В.
Priority date: 1997-04-22
Filing date: 1998-04-22
Publication date: 2000-11-20

Claims

1. Способ получения N-деацилированного цефалоспорина, включающий стадии
ферментации микробного штамма, способного к продуцированию β-лактама и экспрессии ацилтрансферазы, а также экспандазной активности и, необязательно, ацетилтрансферазной и/или гидроксилазной активности, в присутствии предшественника боковой цепи формулы (1)
HOOC - X - COOH
где X представляет (CH₂)_m-CH=A-(CH₂)_n или (CH₂)_m-C≡C-(CH₂)_n, где m и n, каждый по отдельности, представляют 0, 1, 2 или 3, и m+n = 2 или 3, и А представляет CH или N,
или X представляет (CH₂)_p-CH=CH-CH=CH-(CH₂)_q, где р и q, каждый по отдельности, представляют 0 или 1, и p+q = 0 или 1,
или его соли, эфира или амида, причем указанный предшественник боковой цепи дает производное ацил-6-АРА, включающее указанный предшественник, причем указанное производное ацил-6-АРА in situ расширяется до соответствующего производного ацил-7-ADCA, и, необязательно, превращается затем в производное ацил-7-ADAC или ацил-7-ACA, и
извлечения производного ацил-7-цефалоспорина из ферментационного бульона,
деацилирования указанного производного ацил-7-цефалоспорина, и
извлечения кристаллического N-деацилированного цефалоспорина.1. The method of obtaining N-deacylated cephalosporin, which includes stages
fermenting a microbial strain capable of producing β-lactam and expressing an acyltransferase, as well as expanding activity and, optionally, acetyltransferase and / or hydroxylase activity, in the presence of a side chain precursor of formula (1)
HOOC - X - COOH
where X represents (CH ₂ ) _m —CH = A- (CH ₂ ) _n or (CH ₂ ) _m —C≡C- (CH ₂ ) _n , where m and n, each separately, represent 0, 1, 2 or 3, and m + n = 2 or 3, and A is CH or N,
or X is (CH ₂ ) _p -CH = CH-CH = CH- (CH ₂ ) _q , where p and q, each separately, represent 0 or 1, and p + q = 0 or 1,
or its salt, ester or amide, and the specified precursor of the side chain gives the derivative of acyl-6-APA, including the specified predecessor, and the specified derivative of acyl-6-APA in situ expands to the corresponding derivative of acyl-7-ADCA, and optionally turns then to an acyl-7-ADAC or acyl-7-ACA derivative, and
extracting the acyl-7-cephalosporin derivative from the fermentation broth,
deacylation of the acyl-7-cephalosporin derivative, and
extraction of crystalline N-deacylated cephalosporin.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют ненасыщенный предшественник боковой цепи формулы (1), где m и n представляют 1, и А представляет CH. 2. The method according to claim 1, wherein the unsaturated side chain precursor of formula (1) is used, where m and n are 1, and A is CH.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что указанный ненасыщенный предшественник боковой цепи представляет транс-6-гидромуконовую кислоту. 3. The method according to p. 2, characterized in that the unsaturated precursor of the side chain is trans-6-hydromuconic acid.

4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что микробный штамм представляет пeнициллинпpoдуциpующий штамм, снабженный полигенным экспрессирующим кластером, обеспечивающим экспрессию экспандазы. 4. Method according to any one of claims. 1-3, characterized in that the microbial strain is a penicillin-producing strain, equipped with a polygenic expression cluster providing expression of the expandase.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что пенициллинпродуцирующий штамм представляет Penicillinum chrysogenum. 5. The method according to p. 4, characterized in that the penicillin-producing strain is Penicillinum chrysogenum.

6. Способ по п. 4 или 5, отличающийся тем, что кристаллическим цефалоспорином является 7-ADCA. 6. The method according to p. 4 or 5, characterized in that the crystalline cephalosporin is 7-ADCA.

7. Способ по любому из пп. 1-3. отличающийся тем, что микробный штамм представляет цефалоспоринпродуцирующий штамм, снабженный полигенным экспрессирующим кластером, обеспечивающим экспрессию ацилтрансферазы. 7. A method according to any one of claims. 1-3. characterized in that the microbial strain is a cephalosporin-producing strain, equipped with a polygenic expressing cluster providing expression of the acyltransferase.

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что цефалоспоринпродуцирующий штамм представляет Acremonium chrysogenum. 8. The method according to p. 7, characterized in that the cephalosporin-producing strain is Acremonium chrysogenum.

9. Способ по п. 7 или 8, отличающийся тем, что кристаллическим цефалоспорином является 7-ADCA или 7-АСА. 9. The method according to p. 7 or 8, characterized in that the crystalline cephalosporin is 7-ADCA or 7-ACA.