RU97729U1 - DEVICE FOR OBTAINING HANTAVIRUS VIRIONS FROM VIRUS-CONTAINING SUSPENSION - Google Patents

Abstract

1. Устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, отличающееся тем, что вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow. ! 2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра. 1. A device for teaching hantavirus virions from a virus-containing suspension, comprising a container filled with sorbent, the body of which is made of material that does not interact with hantavirus virions, characterized in that the container is filled with Sepharose 6 Fast Flow agarose. ! 2. The device according to claim 1, characterized in that the container is made in the form of a hollow cylinder.

Description

Полезная модель относится к устройствам для получения вирионов хантавирусов, в частности возбудителей геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС), для изготовления противовирусных вакцин.The invention relates to devices for producing hantavirus virions, in particular causative agents of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS), for the manufacture of antiviral vaccines.

В процессе производства вакцин против хантавирусов - возбудителей ГЛПС - необходимо выделить из вируссодержащей суспензии фракцию вирионов и очистить ее от неиммуногенных и слабоиммуногенных примесей: антибиотиков, фрагментов мембран, белков, РНК, ДНК клеток, используемых для культивирования вирусов, а также неструктурных вирусных белков и фрагментов вирионов.In the process of production of vaccines against hantaviruses - HFRS causative agents - it is necessary to isolate the virion fraction from the virus-containing suspension and clean it of non-immunogenic and weakly immunogenic impurities: antibiotics, membrane fragments, proteins, RNA, DNA cells used for the cultivation of viruses, as well as non-structural viral proteins and fragments virions.

Известно устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов (CN 1109782),A device is known for teaching hantavirus virions from a virus-containing suspension, including a container filled with sorbent, the casing of which is made of material not interacting with hantavirus virions (CN 1109782),

Известное устройство производит путем очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов на принципе ионного обмена ввиду использования сорбента, несущего электрический заряд, что приводит к необходимости применения буферных растворов с высоким содержанием соли и, следовательно, к необходимости последующей очистки полученного продукта от солевых добавок.The known device is produced by purifying a virus-containing suspension from impurity components on the principle of ion exchange due to the use of a sorbent that carries an electric charge, which leads to the necessity of using buffer solutions with a high salt content and, therefore, to the necessity of subsequent purification of the obtained product from salt additives.

Технический результат от использования предлагаемого устройства заключается в сокращении времени очистки вируссодержащей суспензии от примесных компонентов.The technical result from the use of the proposed device is to reduce the time for cleaning the virus-containing suspension from impurity components.

Указанный технический результат достигается тем, что в устройстве для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающем заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow.The specified technical result is achieved in that in the device for producing hantavirus virions from a virus-containing suspension, including a container filled with a sorbent, the body of which is made of material that does not interact with hantavirus virions, the container is filled with Sepharose 6 Fast Flow agarose.

Указанный технический результат достигается также тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.The specified technical result is also achieved by the fact that the container is made in the form of a hollow cylinder.

На фиг.1 показано устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, на фиг.2 - хроматограмма процесса очистки.Figure 1 shows a device for producing hantavirus virions from a virus-containing suspension, figure 2 is a chromatogram of the cleaning process.

Устройство содержит полый цилиндр 1, с входным отверстием 2, и выходным отверстием 3, заполненный агарозой 4.The device comprises a hollow cylinder 1, with an inlet 2, and an outlet 3 filled with agarose 4.

Устройство для получения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии используют следующим образом.A device for producing hantavirus virions from a virus-containing suspension is used as follows.

Через входное отверстие 2 в заполненный агарозой полый цилиндр 1 подают определенную порцию вируссодержащей суспензии, включающей, наряду с вирионами хантавирусов, фрагменты мембран, белки, РНК и ДНК клеток, вирусные белки, фрагменты вирионов хантавирусов, а также компоненты питательной среды. Затем подают через то же отверстие буферный раствор. В результате осуществляется гель-фильтраци, в процессе которой из выходного отверстия 3 собирают фракцию вирионов хантавирусов.Through an inlet 2, a specific portion of a virus-containing suspension is fed into the hollow cylinder 1 filled with agarose, including, along with hantavirus virions, membrane fragments, proteins, RNA and DNA of cells, viral proteins, fragments of hantavirus virions, as well as nutrient medium components. Then a buffer solution is fed through the same hole. As a result, gel filtration is carried out, during which a fraction of hantavirus virions is collected from the outlet 3.

Пример.Example.

Вируссодержащую культуральную жидкость получили путем репродуцирования хантавируса Пуумала в монослойной перевиваемой культуре клеток почек зеленой мартышки (Vero). Монослой клеток получили в роллерных бутылях объемом 1 л в среде Игла MEM с двойным набором витаминов и аминокислот и 5% сыворотки крови плодов коров. После заражения монослойных культур для поддержания размножения вируса использовали среду, не содержащую, компонентов сыворотки крови. Сбор вируссодержащей жидкости начинали на шестой день. С одного монослоя клеток получили от 3 до 5 сборов вируссодержащей жидкости. Полученную вируссодержащую жидкость со средним титром 6,0 lg ФОЕ/мл фильтровали через каскад фильтров с рейтингом от 0.6 до 0.22 мкм. Концентрирование осветленной вируссодержащей жидкости проводили на ультрафильтрационных кассетах (Millipore) с молекулярным весом проходимых частиц 100000 Дальтон и площадью 0,2 м². Вируссодержащую жидкость концентрировали в 70-200 раз. Вирусный концентрат очищали на колонке 2,6/70 с Sepharose 6 Fast Flow со скоростью 7 мл/мин. На выходе из колонки собирали фракцию вирионов вируса Пуумала. На хроматограмме процесса очистки первый пик соответствует моменту времени выхода очищенных вирионов вируса Пуумала, второй и третий пики - моментам времени выхода балластных компонентов (фиг.2).Virus-containing culture fluid was obtained by reproducing the Puumala hantavirus in a monolayer transplanted culture of green monkey kidney cells (Vero). A monolayer of cells was obtained in 1 L roller bottles in Eagle MEM medium with a double set of vitamins and amino acids and 5% of the blood serum of cow fruits. After infection of monolayer cultures, a medium containing no serum components was used to maintain virus reproduction. Virus-containing fluid collection began on day six. From one monolayer of cells received from 3 to 5 collections of virus-containing fluid. The resulting virus-containing liquid with an average titer of 6.0 lg IOF / ml was filtered through a cascade of filters with a rating of 0.6 to 0.22 μm. The clarification of the clarified virus-containing liquid was carried out on ultrafiltration cassettes (Millipore) with a molecular weight of passable particles of 100,000 Daltons and an area of 0.2 m ² . The virus-containing liquid was concentrated 70-200 times. The viral concentrate was purified on a 2.6 / 70 Sepharose 6 Fast Flow column at a rate of 7 ml / min. At the column outlet, a fraction of the Puumala virus virions was collected. In the chromatogram of the purification process, the first peak corresponds to the time of release of purified Puumala virus virions, the second and third peaks to the time of release of ballast components (Fig. 2).

Claims (2)

1. Устройство для поучения вирионов хантавирусов из вируссодержащей суспензии, включающее заполненное сорбентом вместилище, корпус которого выполнен из материала, не взаимодействующего с вирионами хантавирусов, отличающееся тем, что вместилище заполнено агарозой марки Sepharose 6 Fast Flow.1. A device for teaching hantavirus virions from a virus-containing suspension, comprising a container filled with sorbent, the body of which is made of material that does not interact with hantavirus virions, characterized in that the container is filled with Sepharose 6 Fast Flow agarose. 2. Устройство по п.1, отличающееся тем, что вместилище выполнено в виде полого цилиндра.

2. The device according to claim 1, characterized in that the container is made in the form of a hollow cylinder.