Claims (42)
1. Конструкция ДНК, включающая последовательность ДНК, кодирующую фермент с активностью эндо -β- глюканазы, которая представляет собой a) последовательность ДНК с идентификационным No 3; b) аналог последовательности ДНК с идентификационным No 3, который i) гомогологичен последовательностям ДНК с идентификационным No 3; и/или ii) гидролизуется таким же олигонуклеотидным зондом, что и последовательность ДНК с идентификационным No 3, и/или iii) кодирует полипептид, который гомологичен полипептиду, закодированному последовательностью ДНК, включающей ДНК последовательность с идентификационным No 3, и/или iv) кодирует полипептид, обладающий иммунной реактивностью в отношении антитела, индуцированного против очищенной эндо-1,3(4) -β- глюканазы, закодированной последовательностью с идентификационным No 4, выделенной из Trichoderma harzianum, CBS 243.71.1. A DNA construct comprising a DNA sequence encoding an enzyme with activity of endo-β-glucanase, which is a) a DNA sequence with identification number 3; b) an analog of a DNA sequence with identification number 3, which i) is homologous to DNA sequences with identification number 3; and / or ii) is hydrolyzed by the same oligonucleotide probe as the DNA sequence with identification number 3, and / or iii) encodes a polypeptide that is homologous to a polypeptide encoded by a DNA sequence comprising a DNA sequence with identification number 3, and / or iv) encodes a polypeptide having immune reactivity against an antibody induced against purified endo-1,3 (4) -β-glucanase, encoded by a sequence with identification number 4, isolated from Trichoderma harzianum, CBS 243.71.
2. Конструкция ДНК по п. 1, отличающаяся тем, что эндоглюканазной активностью является активность эндо-1,3(4) -β- глюканазы. 2. The DNA construct according to claim 1, characterized in that the endoglucanase activity is the activity of endo-1,3 (4) -β-glucanase.
3. Конструкция ДНК по пп. 1 и 2, отличающаяся тем, что она включает последовательность ДНК, кодирующую фермент с активностью эндо-1,3(4) -β- глюканазы, которая включает по крайней мере часть последовательностей ДНК с идентификационным No 1 или 2. 3. The design of DNA according to paragraphs. 1 and 2, characterized in that it includes a DNA sequence encoding an enzyme with activity of endo-1,3 (4) -β-glucanase, which includes at least a portion of the DNA sequences with identification number 1 or 2.
4. Конструкция ДНК по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что последовательность ДНК, кодирующую фермент с активностью эндо -β- глюканазы, получают из микроорганизма. 4. The design of DNA according to any one of paragraphs. 1-3, characterized in that the DNA sequence encoding an enzyme with activity of endo-β-glucanase is obtained from a microorganism.
5. Конструкция ДНК по п. 4, отличающаяся тем, что последовательность ДНК получают из нитевидных грибов или дрожжей. 5. The design of DNA under item 4, characterized in that the DNA sequence is obtained from filamentous fungi or yeast.
6. Конструкция ДНК по п. 5, отличающаяся тем, что последовательность ДНК получают из штамма Trichoderma, Saccharomyces, Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Humicola, Acremonium, Botrytis или Sclerotium. 6. The DNA construct of claim 5, wherein the DNA sequence is obtained from a strain of Trichoderma, Saccharomyces, Aspergillus, Penicillium, Fusarium, Humicola, Acremonium, Botrytis or Sclerotium.
7. Конструкция ДНК по п. 6, отличающаяся тем, что последовательность ДНК получают из штамма Trichoderma, в частности из штамма Trichoderma harzianum. 7. The DNA construct of claim 6, wherein the DNA sequence is obtained from a Trichoderma strain, in particular from a Trichoderma harzianum strain.
8. Конструкция ДНК по п. 7, отличающаяся тем, что последовательность ДНК выделяют или получают на основе библиотеки ДНК штамма Tricholtrma harzianum CBS 243.71. 8. The DNA construct according to claim 7, characterized in that the DNA sequence is isolated or obtained on the basis of the DNA library of the strain Tricholtrma harzianum CBS 243.71.
9. Конструкция ДНК по п. 6, отличающаяся тем, что гомологичную последовательность ДНК получают из штамма Acremonium sp. CBS 265.95. 9. The DNA construct according to claim 6, characterized in that a homologous DNA sequence is obtained from a strain of Acremonium sp. CBS 265.95.
10. Конструкция ДНК по п. 9, отличающаяся тем, что последовательность ДНК выделяют из штамма Saccharomyces cerevisiae NN049006, включающего частичные последовательности с идентификационным No 5 и/или 6. 10. The DNA construct according to claim 9, characterized in that the DNA sequence is isolated from a strain of Saccharomyces cerevisiae NN049006, including partial sequences with identification number 5 and / or 6.
11. Рекомбинантный экспрессирующий вектор, включающий конструкцию ДНК по любому из пп. 1-10. 11. Recombinant expression vector comprising the DNA construct according to any one of paragraphs. 1-10.
12. Клетка, включающая конструкцию ДНК по любому из пп. 1-10 или рекомбинантный экспрессирующий вектор по п. 11. 12. A cell comprising the design of DNA according to any one of paragraphs. 1-10 or a recombinant expression vector according to claim 11.
13. Клетка по п. 12, отличающаяся тем, что ею является эукариотическая клетка, в частности грибная клетка, такая как клетка дрожжей или нитевидных грибов. 13. A cell according to claim 12, characterized in that it is a eukaryotic cell, in particular a fungal cell, such as a yeast or filamentous fungus cell.
14. Клетка по п. 13, отличающаяся тем, что она относится к штамму Aspergillus, в частности к штамму Aspergillus niger или Aspergillus oryzae. 14. A cell according to claim 13, characterized in that it relates to a strain of Aspergillus, in particular to a strain of Aspergillus niger or Aspergillus oryzae.
15. Способ получения фермента с активностью эндо -β- глюканазы, отличающаяся тем, что он включает культивирование клетки по любому из пунктов 12-14 в условиях, делающих возможным получение фермента и его извлечение из этой культуры. 15. A method of producing an enzyme with endo-β-glucanase activity, characterized in that it includes culturing the cell according to any one of paragraphs 12-14 under conditions that make it possible to obtain the enzyme and extract it from this culture.
16. Фермент с активностью эндо -β- глюканазы, отличающийся тем, что он а) закодирован конструкцией ДНК по любому из пунктов 1-10, или б) получен в соответствии со способом по пункту 15, и/или в) обладает иммунной реактивностью в отношении антитела, индуцированного против очищенной эндо-1,3(4) -β- глюканазы с идентификационным No 4, выделенным из Trichoderma harzianum CBS 243.71. 16. An enzyme with endo-β-glucanase activity, characterized in that a) it is encoded by the DNA construct according to any one of paragraphs 1-10, or b) is obtained in accordance with the method of paragraph 15, and / or c) has immune reactivity in against an antibody induced against purified endo-1,3 (4) -β-glucanase with identification No. 4 isolated from Trichoderma harzianum CBS 243.71.
17. Фермент по п. 16, отличающийся тем, что значение константы Михаэлиса Km находится в интервале 0,02-0,006% β- 1,3(4)-глюкана. 17. The enzyme according to claim 16, characterized in that the Michaelis constant Km is in the range of 0.02-0.006% β-1,3 (4) -glucan.
18. Фермент по п. 16, отличающийся тем, что среднее значение изоэлектрической точки pI равно 5,1. 18. The enzyme according to claim 16, characterized in that the average value of the isoelectric point pI is 5.1.
19. Фермент по п. 16, отличающийся тем, что средняя молекулярная масса составляет 31 кДа. 19. The enzyme according to claim 16, characterized in that the average molecular weight is 31 kDa.
20. Фермент по п. 16, отличающийся тем, что оптимальная температура находится в интервале 40 - 60oC и предпочтительно равняется 50oC.20. The enzyme according to p. 16, characterized in that the optimum temperature is in the range of 40 - 60 o C and preferably equals 50 o C.
21. Фермент по п. 16, отличающийся тем, что оптимальное значение pH находится в интервале от 4,5 до 5,5 и предпочтительно равняется pH 5. 21. The enzyme according to p. 16, characterized in that the optimum pH is in the range from 4.5 to 5.5 and preferably equals pH 5.
22. Фермент по п. 16, отличающийся тем, что удельная активность равняется 100-200 ед/мг фермента. 22. The enzyme according to p. 16, characterized in that the specific activity is 100-200 u / mg of the enzyme.
23. Ферментный препарат, предназначенный для модификации или разрушения материалов, содержащих β- глюкан, отличающийся тем, что он обогащен ферментом с активностью эндо -β- глюканазы по любому из пп. 16-22. 23. An enzyme preparation intended to modify or destroy materials containing β-glucan, characterized in that it is enriched with an enzyme with endo-β-glucanase activity according to any one of claims. 16-22.
24. Препарат по п. 23, отличающийся тем, что он дополнительно содержит по крайней мере один фермент, выбираемый их группы, включающей протеазы, хитиназы, маннаназы, хитосаназы, целлюлазы, эндоглюканазы, маннозидазы, β- глюкозидазы, β- 1,6-глюканазы, мутаназы, ксиланазы, арабинаназы, галактаназы, рамногалактуроназы, пектин-ацетилэстеразы, полигалактуроназы, пектин-лиазы, пектат-лиазы или пектин-метилэстеразы. 24. The drug according to p. 23, characterized in that it further comprises at least one enzyme selected from their group comprising proteases, chitinases, mannanases, chitosanases, cellulases, endoglucanases, mannosidases, β-glucosidase, β-1,6- glucanases, mutanases, xylanases, arabinanases, galactanases, ramnogalacturonases, pectin acetyl esterases, polygalacturonases, pectin lyases, pectate lyases or pectin methyl esterases.
25. Применение фермента по любому из пп. с 16 по 22 или ферментного препарата по п. 23 или 24 для модификации или разрушения материала, содержащего β- глюкан. 25. The use of the enzyme according to any one of paragraphs. 16 to 22 or an enzyme preparation according to claim 23 or 24 for modifying or destroying a material containing β-glucan.
26. Применение по п. 25, в котором материалом, содержащим β- глюкан, является клеточные стенки микробов. 26. The application of claim 25, wherein the material containing β-glucan is the cell walls of the microbes.
27. Применение по п. 25, в котором материалом, содержащим β- глюкан, являются клеточные стенки растений. 27. The use of claim 25, wherein the material containing β-glucan is plant cell walls.
28. Применение по п. 25 или 26 для получения протопластов. 28. The use of claim 25 or 26 for the production of protoplasts.
29. Применение по п. 25 или 26 для получения дрожжевых экстрактов. 29. The use of claim 25 or 26 for producing yeast extracts.
30. Применение по п. 25 или 27 в пивоварении. 30. The use of claim 25 or 27 in brewing.
31. Применение по п. 25 или 26 в виноделии и при изготовлении виноградного сока. 31. The use of claim 25 or 26 in winemaking and in the manufacture of grape juice.
32. Применение по любому из пп. 25-27 в пищевой и кормовой отраслях промышленности. 32. The use according to any one of paragraphs. 25-27 in the food and feed industries.
33. Применение по п. 32, в котором названной пищевой промышленностью является выпечка хлебобулочных изделий и изготовление продуктов из дробленного зерна. 33. The application of claim 32, wherein the named food industry is the baking of bakery products and the manufacture of products from crushed grain.
34. Применение по п. 25 или 26 в качестве противогрибкового средства. 34. The use of claim 25 or 26 as an antifungal agent.
35. Применение по любому из пп. 25 - 27, для обработки тканей. 35. The use according to any one of paragraphs. 25 - 27, for processing fabrics.
36. Применение по п. 25 или 26 для удаления плесени с покрытий. 36. The use of claim 25 or 26 for removing mold from coatings.
37. Применение по п. 25 для изготовления предметов личной гигиены. 37. The use of claim 25 for the manufacture of personal care products.
38. Применение по п. 37 в составах для чистки зубных протезов. 38. The use according to claim 37 in the compositions for cleaning dentures.
39. Применение по п. 37 в составах для удаления пятен. 39. The use of claim 37 in stain removing compositions.
40. Применение по п. 25 для удаления биопленок с поверхностей. 40. The use of claim 25 for removing biofilms from surfaces.
41. Применение по п. 25 или 26 для экстракции маннобелков из клеточных стенок микробов. 41. The use according to claim 25 or 26 for the extraction of mannose proteins from the cell walls of microbes.
42. Выделенная чистая культура Saccharomyces cerevisiae NN049006. 42. The isolated pure culture of Saccharomyces cerevisiae NN049006.