RU95122776A

RU95122776A - Способ скрининга веществ с модулирующим действием на зависимый от рецептора интерлейкина-5 путь передачи сигналов в клетках

Info

Publication number: RU95122776A
Application number: RU95122776/13A
Authority: RU
Inventors: Петер Чернилофски Армин; Вайер Ульрике; Г.Янг Ян
Original assignee: Берингер Ингельгейм Интернациональ ГмбХ
Priority date: 1993-05-27
Filing date: 1994-05-27
Publication date: 1998-02-27

Claims

1. Способ определения модулирующего действия вещества на зависимый от рецептора путь передачи сигналов в человеческой клетке или клетке животного, отличающийся тем, что модулирующее действие вещества на компонент пути передачи сигналов, пускаемого путем активации рецептора интерлейкина-5, определяют путем инкубирования клеток млекопитающего,
а) трансформированных рекомбинантной ДНК, содержащей рецепторный ген и регуляторную последовательность, реагирующую на изменение концентрации одного или несколько вторичных переносчиков зависимого от рецептора интерлейкина-5 пути передачи сигналов, вследствие чего экспрессия репортерного гена модулируется изменением концентрации переносчика, и
б) экспрессирующих функциональный рецептор интерлейкина-5, вместе с исследуемым веществом, определения концентрации продукта репортерного гена и исследования избирательности найденного действия исследуемого вещества относительно зависимого от рецептора интерлейкина-5 пути передачи сигналов путем дополнительной подачи вещества в идентичных условиях на контрольные клетки млекопитающего, экспрессирующие контрольный рецептор, отличающийся от рецептора интерлейкина-5, и трансформированные рекомбинантной ДНК, содержащей репортерный ген и регуляторную последовательность, реагирующую на изменение концентрации вторичного переносчика зависимого от контрольного рецептора пути передачи сигналов, с последующим сравнением концентрации продукта репортерного гена в экспрессирующих рецептор интерлейкина-5 клетках с этой концентрацией в контрольных клетках.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что антагонистическое действие исследуемого вещества на зависимый от рецептора интерлейкина-5 путь передачи сигналов определяют путем дополнительной подачи интерлейкина-5 на клетки.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют клетки, по своей природе экспрессирующие функциональный рецептор интерлейкина-5.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют клетки, естественно экспрессирующие лишь β-субъединицу рецептора интерлейкина-5 и трансформированные рекомбинантной ДНК, содержащей кодирующую α-субъединицу рецептора интерлейкина-5 последовательность, вследствие чего клетки экспрессируют функциональный рецептор интерлейкина-5.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют клетки, трансформированные рекомбинантной ДНК, содержащей кодирующие α-субъединицу и β-субъединицу рецептора интерлейкина-5 последовательности, вследствие чего клетки экспрессируют функциональный рецептор интерлейкина-5.

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что кодирующие α-субъединицу и β-субъединицу рецептора интерлейкина-5 последовательности имеются на двух разных плазмидах.

7. Способ по одному из пп. 1 - 6, отличающийся тем, что клетки экспрессируют человеческий функциональный рецептор интерлейкина-5.

8. Способ по одному из пп. 1 - 6, отличающийся тем, что клетки экспрессируют мышиный функциональный рецептор интерлейкина-5.

9. Способ по одному из пп. 1 - 6, отличающийся тем, что клетки экспрессируют функциональный рецептор интерлейкина-5, α-субъединица и β-субъединица которого происходят от разных пород.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что α-субъединица имеет человеческое происхождение.

11. Способ по одному из пп. 1 - 10, отличающийся тем, что указанная под а) рекомбинантная ДНК в качестве регуляторной последовательности содержит промотор гена c-fos.

12. Способ по одному из пп. 1 - 10, отличающийся тем, что указанная под а) рекомбинантная ДНК в качестве регуляторной последовательности содержит промотор гена ICAM-1.

13. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что указанная под а) рекомбинантная ДНК в качестве репортерного гена содержит ген люциферазы.

14. Способ по одному из пп. 2 - 13, отличающийся тем, что антагонистическое действие исследуемого вещества определяют путем дополнительного инкубирования клеток, кроме рецепторов других факторов роста экспрессирующих функциональный рецептор интерлейкина-1 и относительно своего роста зависимых от присутствия по меньшей мере лиганда одного этих рецепторов, с одной стороны, лишь вместе с интерлейкином-5 и, с другой стороны, - вместе с интерлейкином-1 и исследуемым веществом с последующим сравнением пролиферации обеих клеточных культур.

15. Способ по одному из пп. 1 - 13, отличающийся тем, что избирательность модулирующего действия исследуемого вещества на зависимый от рецептора интерлейкина-5 путь передачи сигналов исследуют путем дополнительной подачи вещества в идентичных условиях на контрольные клетки млекопитающего, экспрессирующие контрольный рецептор, отличающийся тем, что от рецептора интерлейкина-5, и трансформированные указанной под а) рекомбинантной ДНК, регуляторная последовательность которой реагирует не только на изменение концентрации одного или несколько вторичных переносчиков зависимого от рецептора интерлейкина-5 передачи сигналов, а также зависимого от контрольного рецептора пути передачи сигналов, с последующим сравнением концентрации продукта репортерного гена в экспрессирующих рецептор интерлейкина-5 клетках с этой концентрацией в контрольных клетках.

16. Способ по п.15, отличающийся тем, что контрольный рецептор представляет собой рецептор интерлейкина-3.

17. Способ по одному из пп. 1 - 13, отличающийся тем, что дополнительно инкубируют клетки млекопитающего, трансформированные указанной под а) рекомбинантной ДНК и не экспрессирующие функционального рецептора интерлейкина-5, в идентичных условиях вместе с исследуемым веществом с последующим определением концентрации продукта репортерного гена.

18. Способ по одному из пп. 1 - 17, отличающийся тем, что его используют в качестве скрининга, в котором подвергаемое исследованию вещество представляет собой одно из многих веществ, вместе с которыми инкубируют определенное количество клеток млекопитающего в определенных условиях, с последующими определение концентрации репортерного гена и проверкой избирательности веществ относительно зависимого от рецептора интерлейкина-5 пути передачи сигналов.

19. Клетки млекопитающего, отличающиеся тем, что а) они трансформированы рекомбинантной ДНК, содержащей репортерный ген и регуляторную последовательность, реагирующую на изменение концентрации одного или несколько переносчиков зависимого от рецептора интерлейкина-5 пути передачи сигналов, и б) они трансформированы рекомбинантной ДНК, кодирующей α-субъединицу или α- и β-субъединицы рецептора интерлейкина-5, благодаря чему они экспрессируют функциональный рецептор интерлейкина-5.

20. Клетки млекопитающего по п.19, отличающиеся тем, что они представляют собой человеческие клетки.

21. Клетки млекопитающего по п.19, отличающиеся тем, что они представляют собой мышечные клетки.

22. Клетки млекопитающего по одному из пп. 19 - 21, отличающиеся тем, что по своей природе они экспрессируют лишь α-субъединицу рецептора интерлейкина-5, причем они трансформированы рекомбинантной ДНК, содержащей кодирующую α-субъединицу последовательность.

23. Клетки млекопитающего по п.22, отличающиеся тем, что α-субъединица происходит от другой породы.

24. Человеческие клетки по п.22, отличающиеся тем, что они трансформированы рекомбинантной ДНК, содержащей кодирующую человеческую α-субъединицу последовательность.

25. Мышиные клетки по п.22, отличающиеся тем, что они трансформированы рекомбинантной ДНК, содержащей кодирующую мышиную α-субъединицу последовательность.

26. Клетки млекопитающего по одному из пп. 19 - 25, отличающиеся тем, что указанная под а) рекомбинантная ДНК в качестве регуляторной последовательности содержит промотор гена c-fos.

27. Клетки млекопитающего по одному из пп. 19 - 25, отличающиеся тем, что указанная под а) рекомбинантная ДНК в качестве регуляторной последовательности содержит промотор гена ICAM-1.

28. Клетки млекопитающего по одному из пп. 19 - 27, отличающиеся тем, что указанная под а) рекомбинантная ДНК в качестве репортерного гена содержит ген люциферазы.