RU2817013C1

RU2817013C1 - Способ синтеза циклических депсипептидов

Info

Publication number: RU2817013C1
Application number: RU2020118660A
Authority: RU
Inventors: Дирк Хаймбах; Сатоси Омура; Тосиаки Суназука; Томоясу ХИРОСЕ; Ёсихико НОГУТИ; Йоханнес КЕББЕРЛИНГ; Чжицзе У; Шуйбяо ФУ; Вей У; Цзиньфэн ЦЮ; Лю ХЭ; Сюйдун ВЕЙ
Original assignee: Байер Энимэл Хельс ГмбХ; Зе Китасато Инститьют
Priority date: 2017-11-07
Filing date: 2018-11-06
Publication date: 2024-04-09

Abstract

Изобретение относится к способу синтеза циклических депсипептидов, в частности эмодепсида. Предложен способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) в промышленном масштабе из депсипептидов общей формулы (II), где B представляет собой защитную группу аминной группы и A представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты, причем способ включает стадии: удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой B, получая таким образом незащищенную аминную группу; удаления защитной группы карбоновой кислоты, которая защищена группой A, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты; конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты с помощью связывающего агента, при этом связывающий агент добавляют медленно, предпочтительно по каплям, в реакционный раствор, получая таким образом циклический депсипептид (I), в котором R1-R12 определены в формуле изобретения, где связывающий агент представляет собой T3P® (ангидрид пропилфосфоновой кислоты, 2,4,6-трипропил-1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфоринан-2,4,6-триоксид, PPACA). 3 н. и 28 з.п. ф-лы, 9 ил., 6 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к способу синтеза циклических депсипептидов, в частности эмодепсида, включающему специфические защитные группы TAG карбоновой кислоты.

Эмодепсид (цикло[(R)-лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-3-(п-морфолинофенил)лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-лактоил-N-метил-L-лейцил-(R)-3-(п-морфолинофенил)лактоил-N-метил-L-лейцил) является антигельминтным лекарственным средством, которое эффективно против ряда желудочно-кишечных нематод. Его молекулярная структура, которая изображена ниже, может быть описана как циклические октадепсипептиды, причем депсипептид представляет собой пептид, в котором одна или более его амидных групп заменены соответствующими сложноэфирными группами. В промышленном масштабе эмодепсид может быть получен путем дериватизации встречающегося в природе вещества PF1022A, в котором два атома водорода заменены на морфолиновые кольца.

В WO 93/19053 A1 (EP 0 634 408 A1) раскрыто соединение общей формулы:

где A представляет собой бензильную группу, которая имеет подходящий заместитель (заместители), или фенильную группу, которая может иметь подходящий заместитель (заместители), A^a представляет собой бензильную группу, которая имеет подходящий заместитель (заместители), или фенильную группу, которая может иметь подходящий заместитель (заместители), B и D каждый представляет собой низший алкил, C представляет собой водород или низший алкил, и его фармацевтически приемлемую соль.

В WO 2005/055973 A2 раскрыты трансдермально применяемые средства, содержащие циклические депсипептиды и/или празиквантел, в дополнение к его получению и его применению для борьбы с эндопаразитами. Комбинации эмодепсида и празиквантела или эпсипрантела, а также 1,2-изопропилиденгликоля в качестве эндопаразитицидов раскрыты в WO 2006/094664 A1.

WO 2006/053641 А1 относится к применению эндопаразитицидных депсипептидов для получения фармацевтических препаратов для профилактики вертикальной инфекции эндопаразитами.

Общий синтез, среди прочего, PF1022A и его дериватизация обсуждаются в обзорной статье «Cyclodepsipeptides: A Rich Source of Biologically Active Compounds for Drug Research" by Sivatharushan Sivanathan and Jürgen Scherkenbeck, Molecules 2014, 19, 12368-12420; doi:10.3390/molecules190812368. Для нескольких циклодепсипептидов были установлены общие синтезы как в растворе, так и в твердой фазе, что позволило создать комбинаторные библиотеки. Кроме того, биосинтез специфических циклодепсипептидов был освещен и использован для хемоферментативного получения не встречающихся в природе аналогов. В обзорной статье также обобщены последние литературные данные о циклических тетра-декадепсипептидах, состоящих исключительно из α-амино- и α-гидрокси кислот.

При синтезе полипептидов твердофазная стратегия имеет преимущество, состоящее в простом разделении продуктов реакции, тогда как жидкофазная стратегия имеет преимущество, состоящее в гомогенных условиях реакции. Гибридный подход представляет собой стратегию на основе группы TAG, при которой соединения, имеющие группу TAG, легко отделяются от молекул без группы TAG.

В этом отношении в JP 2000/044493 А1 раскрывается защитная группа для синтеза библиотеки соединений, которая состоит из соединений, способных связываться с соединением, подлежащим защите, при соотношении 1: 1, имеющих одну молекулярную структуру, а также имеющих молекулярную массу >=500, которая состоит из 3,4,5-трис-(н-октадецилокси)бензилового спирта, 3,4,5-трис-(н-октадецилокси)бензилхлорида или метил-3,4,5-трис-(н-октадецилокси)бензоата.

EP 2 003 104 A2 относится к реагенту для органического синтеза, с которым химическая реакция может быть проведена в жидкой фазе, и ненужное соединение (соединения) может быть легко отделено при низких затратах от жидкой фазы после завершения реакции. Сообщается, что реагент для органического синтеза, который изображен ниже, обратимо изменяется из жидкофазного состояния в твердофазное состояние с изменением состава раствора и/или температуры раствора и предназначен для использования в реакциях органического синтеза.

R₁ - R₅ могут быть одинаковыми или различными и представляют собой водород, галоген, алкильную группу с числом атомов углерода от 1 до 30, которая может иметь группу заместитель, алкоксильную группу с числом атомов углерода от 1 до 30, которая может иметь группу заместитель, арильную группу с числом атомов углерода от 1 до 30, которая может иметь группу заместитель, ацильную группу с числом атомов углерода от 1 до 30, которая может иметь группу заместитель, тиоалкильную группу с числом атомов углерода от 1 до 30, которая может иметь группу заместитель, диалкиламино группу с числом атомов углерода от 1 до 30, которая может иметь группу заместитель, нитрогруппу или аминогруппу; и по меньшей мере два из R₁ 0 R5 представляют собой группы с числом атомов углерода от 18 до 30, и X представляет собой активный сайт реагента, имеющий один или более атомов, выбранных из группы, состоящей из атома углерода, атома кислорода, атома серы и атома азота.

В публикации "TAG-Assisted Liquid-Phase Peptide Synthesis Using Hydrophobic Benzyl Alcohols as Supports" by Yohei Okada, Hideaki Suzuki, Takashi Nakae, Shuji Fujita, Hitoshi Abe, Kazuo Nagano, Toshihide Yamada, Nobuyoshi Ebata, Shokaku Kim, and Kazuhiro Chiba, The Journal of Organic Chemistry 2013, 78, 320-327; doi: 10.1021/jo302127d; сообщается, что жидкофазный синтез растворимых пептидов с помощью группы TAG был успешно создан на основе простых гидрофобных бензиловых спиртов, которые можно легко получить из природных веществ. Сообщается, что на каждой стадии получают отличные выходы преципитации, сочетая лучшие свойства твердофазных и жидкофазных методик. Сообщается, что этот подход может быть эффективно применен для связываний фрагментов, что позволяет химически синтезировать несколько биоактивных пептидов.

В публикации "A Novel Protecting Group for Constructing Combinatorial Peptide Libraries" by Hitoshi Tamiaki, Tomoyuki Obata, Yasuo Azefu and Kazunori Toma, Bulletin of the Chemical Society of Japan 2001, 74, 733-738; doi http://dx.doi.org/10.1246/bcsj.74.733; раскрывается 3,4,5-трис(октадецилокси)бензиловый спирт, HO-Bzl(OC₁₈)_3, который был получен из галлиевой кислоты и стеарилбромида. Применяя обычное постадийное удлинение синтезировали N,C-защищенные пептиды, Fmoc-AA_n-…-AA₁-OBzl(OC₁₈)₃. Замещенный бензиловые сложные эфиры селективно расщепляли с помощью обработкой 4 M хлороводорода в этилацетате с получением Fmoc-AA_n-…-AA₁-OH и HO-Bzl(OC₁₈)₃. Таким образом, замещенная бензильная группа, как сообщается, эффективна для защиты C-концевых карбоксильных групп при жидкофазном пептидном синтезе. Так как замещенная бензильная группа имеет умеренно высокую молекулярную массу, Fmoc-AA_n-…-AA₁-OBzl(OC₁₈)_3, как сообщается, может быть легко очищен посредством эксклюзионной хроматографии по размеру; сообщалось, что все защищенные пептиды подлежат элюированию в долю пустот гель-фильтрационной колонки Sephadex LH-20. Сообщается, что комбинация карбоксил-защищающей группы B Bzl(OC₁₈)₃ с простой очисткой гель-фильтрацией дает новый путь для создания комбинаторных пептидных библиотек в фазе раствора.

WO 2017/116702 A1 относится к соединению циклического депсипептида или фармацевтически или ветеринарно приемлемой соли следующей формулы:

В качестве примера, соединение с обозначением 7-34A, как изображено ниже, показывает значение EC₅₀ между 0,1 мкМ и 1,0 мкМ в тесте in vitro против микрофилярии Dirofilaria immitis:

Задача настоящего изобретения состоит в обеспечении улучшенного пути синтеза эмодепсида и родственных циклических депсипептидов. Другая задача настоящего изобретения состоит в обеспечении новых депсипептидов, которые могут быть синтезированы с применением этого пути.

Эта задача решается способом по пункту 1 и депсипептидами согласно пункту 22. Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения являются объектами зависимых пунктов. Они могут свободно комбинироваться, если из контекста ясно не следует иное.

Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) из депсипептидов общей формулы (II):

где B представляет собой защитную группу аминной группы, и A представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты,

причем способ включает стадии:

- удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой B, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- удаления защитной группы карбоновой кислоты, которая защищена группой A, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты, получая таким образом циклический депсипептид (I)

где x и y представляют собой, независимо друг от друга, 0, 1 или 2, при условии что x+y ≥ 1 (предпочтительно, x и y представляют собой 1), и R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 и R12 каждый независимо друг от друга представляет собой водород, неразветвленный или разветвленный C1-C8-алкил, в частности метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, втор-пентил, гексил, изогексил, втор-гексил, гептил, изогептил, втор-гептил, трет-гептил, октил, изооктил, втор-октил, неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C8 алкил, в частности фторированный втор-бутил, гидрокси-C1-C6-алкил, в частности гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, C1-C4-алканоилокси-C1-C6-алкил, в частности ацетоксиметил, 1-ацетоксиэтил, C1-C4-алкокси-C1-C6-алкил, в частности метоксиметил, 1-метоксиэтил, арил-C1-C4-алкилокси-C1-C6-алкил, в частности бензилоксиметил, 1-бензилоксиэтил, меркапто-C1-C6-алкил, в частности меркаптометил, C1-C4-алкилтио-C1-C6-алкил, в частности метилтиоэтил, C1-C4-алкилсульфинил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфинилэтил, C1-C4-алкилсульфонил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфонилэтил, карбокси-C1-C6-алкил, в частности карбоксиметил, карбоксиэтил, C1-C4-алкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности метоксикарбонилметил, этоксикарбонилэтил, C1-C4-арилалкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности бензилоксикарбонилметил, карбамоил-C1-C6-алкил, в частности карбамоилметил, карбамоилэтил, амино-C1-C6-алкил, в частности аминопропил, аминобутил, C1-C4-алкиламино-C1-C6-алкил, в частности метиламинопропил, метиламинобутил, C1-C4-диалкиламино-C1-C6-алкил, в частности диметиламинопропил, диметиламинобутил, гуанидино-C1-C6-алкил, в частности гуанидинопропил, C1-C4-алкоксикарбониламино-C1-C6-алкил, в частности трет-бутоксикарбониламинопропил, трет-бутоксикарбониламинобутил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)амино-C1-C6-алкил, в частности 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминопропил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминобутил, C2-C8-алкенил, в частности винил, аллил, бутенил, C3-C7-циклоалкил, в частности циклопентил, циклогексил, циклогептил, C3-C7-циклоалкил-C1-C4-алкил, в частности циклопентилметил, циклогексилметил, циклогептилметил, бензил, замещенный бензил, фенил, фенил-C1-C4-алкил, в частности фенилметил, который может быть необязательно замещен радикалами из группы, состоящей из галогена, в частности фтора, хлора, брома или иода, гидроксила, C1-C4-алкокси, в частности метокси или этокси, C1-C4-алкила, в частности метила.

Защитные группы A и B могут быть независимы таким образом, что при удалении защитной группы B группа A является стабильной; однако, также является вариантом осуществления настоящего изобретения, когда защитные группы А и В удаляют одновременно.

В способе согласно настоящему изобретению неожиданно было обнаружено, что циклические депсипептиды (I), в частности эмодепсид и близко родственные структуры, могут быть синтезированы с высокими общими выходами.

После удаления защитной группы аминная группа и группа карбоновой кислоты вступают в реакцию с образованием пептидной связи. Подходящие связывающие агенты вместе с основанием, таким как N,N-диизопропилэтиламин, включают PyBOP (бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония гексафторфосфат), BOP ((бензотриазол-1-илокси)трис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат), BOP-Cl (бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфония хлорид), EDCI (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид), DEPBT (3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензотриазин-4(3H)-он), HATU (1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиния 3-оксид гексафторфосфат), HBTU (2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат) и, наиболее предпочтительно, T3P® (ангидрид пропилфосфоновой кислоты, 2,4,6-трипропил-1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфоринан-2,4,6-триоксид, PPACA).

Согласно одному варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению x представляет собой 1, y представляет собой 1, R1, R4, R7 и R10 представляют собой метил, R6 и R12 представляют собой метил, R5 и R11 представляют собой, независимо друг от друга, неразветвленный или разветвленный C1-C4-алкил или неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C4-алкил, и R3 и R9 представляют собой, независимо друг от друга, бензил или замещенный бензил. Согласно одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения R3 и/или R9 представляют собой п-морфолино-замещенный бензил.

Согласно варианту осуществления настоящего изобретения группа A является неустойчивой к кислоте, тогда как группа B является неустойчивой к гидрогенолизу. Соответственно, согласно варианту осуществления настоящего изобретения обеспечивается способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) из депсипептидов общей формулы (IIa):

где Y представляет собой защитную группу аминной группы, и X представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты,

причем способ включает стадии:

- удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой Y, в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- удаления защитной группы карбоновой кислоты, которая защищена группой X, посредством гидрогенолиза, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

В способе согласно этому варианту осуществления настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что циклические депсипептиды (I), в частности эмодепсид и близко родственные структуры, могут быть синтезированы с высокими общими выходами.

Термин «гидрогенолиз» следует понимать в его самом широком смысле, и он явно не ограничивается реакцией с газообразным и/или молекулярным водородом, хотя это является одним из вариантов осуществления настоящего изобретения. Подходящим катализом являются Pd, Pd/C, Pt, Pt/C. Термин «гидрогенолиз» также включает реакции, в которых водород образуется in situ или только формально, и где используются реагенты гидрогенолиза, такие как гидразин или диимид и т.д.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения X представляет собой замещенную или незамещенную -CH₂-арильную группу. Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения X выбирают из группы бензоила (Bn), 4-метокси-бензоила (PMB), 3,4-диметоксибензоила (DPMB), 4-фенил-бензоила (PPB), 2-нафтилметил (Nap), бензилоксиметилацеталя (BOM).

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения Y представляет собой трет.-бутилоксикарбонил (Boc), тритил (Trt), п-метоксибензилкарбамат (Moz) или п-нитробензилкарбамат (PNZ). Наиболее предпочтительно Y представляет собой Boc.

Согласно другому варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению депсипептид общей формулы (IIa) получают из предшественников общих формул (IV) и (III):

посредством:

- в предшественнике (IV), удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG2, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- в предшественнике (III), удаления защитной группы карбоновой кислоты, которая защищена группой PG3 в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты, получая таким образом депсипептид (IIa);

где R1 - R12, X, Y, x и y имеют значения, как определено выше (в частности, x и y могут представлять собой 1), PG2 представляет собой защитную группу аминной группы, и PG3 представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты. Способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же как указано в отношении реакции соединений (IIa) - (I) выше.

Предпочтительно предшественник общей формулы (IV) получают из предшественников общих формул (VI) и (V):

посредством:

- в предшественнике (VI), удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG4, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- конденсации незащищенной аминной группы предшественника (VI) и группы карбоновой кислоты предшественника (V), получая таким образом предшественник (IV);

где R7 - R12, X и x имеют значения, как определено выше (в частности, x может представлять собой 1), PG2 имеет значение, как определено выше, и PG4 представляет собой защитную группу аминной группы. Способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же как указано в отношении реакции соединений (II) - (I) выше.

Также предпочтительно предшественник общей формулы (III) получают из предшественников общих формул (VIII) и (VII):

посредством:

- в предшественнике (VII), удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG5, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- конденсации незащищенной аминной группы предшественника (VII) и группы карбоновой кислоты предшественника (VIII), получая таким образом предшественник (III);

где R1 - R6, Y и y имеют значения, как определено выше (в частности, y может представлять собой 1), PG3 имеет значение, как определено выше, и PG5 представляет собой защитную группу аминной группы. Способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же как указано в отношении реакции соединений (II) - (I) выше.

Также предпочтительно предшественник общей формулы (VI) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (IX) с X-LG:

где R10 - R12 и X имеют значения, как определено выше, и PG4 также имеет значение, как определено выше, и LG представляет собой уходящую группу. Введение защитной группы или группы TAG для группы карбоновой кислоты в (IX) может быть осуществлено с применением стандартных методик, LG часто представляет собой галогенид, особенно хлорид. Альтернативно LG может представлять собой -OH, затем часто применяют стандартные протоколы конденсации.

Также предпочтительно предшественник общей формулы (VII) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (X) с PG3-OH:

где R4 - R6 и y имеют значения, как определено выше, PG3 также имеет значение, как определено выше, и PG5 также имеет значение, как определено выше.

Также предпочтительно предшественники (III) и (IV) являются идентичными.

Также предпочтительно R3 и R9 являются идентичными, R1 и R7 являются идентичными, R2 и R8 являются идентичными, R4 и R10 являются идентичными, R5 и R11 являются идентичными, и R6 и R12 являются идентичными.

Согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения группа A является неустойчивой к основанию, тогда как группа B является неустойчивой к кислоте. Поэтому, согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения настоящее изобретение обеспечивает способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) из депсипептидов общей формулы (IIb):

где PG1 представляет собой защитную группу аминной группы, и TAG представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты,

причем способ включает стадии:

- удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG1, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- удаления защитной группы карбоновой кислоты, которая защищена группой TAG, в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

Группа TAG содержит фрагмент арил-O-(CH₂)_n- , причем арил представляет собой ароматический фрагмент, и n представляет собой ≥ 13, x и y представляют собой, независимо друг от друга, 0, 1 или 2, при условии что x+y ≥ 1 (предпочтительно, x и y представляют собой 1) и R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 и R12 каждый независимо друг от друга представляет собой водород, неразветвленный или разветвленный C1-C8-алкил, в частности метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, втор-пентил, гексил, изогексил, втор-гексил, гептил, изогептил, втор-гептил, трет-гептил, октил, изооктил, втор-октил, неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C8 алкил, в частности фторированный втор-бутил, гидрокси-C1-C6-алкил, в частности гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, C1-C4-алканоилокси-C1-C6-алкил, в частности ацетоксиметил, 1-ацетоксиэтил, C1-C4-алкокси-C1-C6-алкил, в частности метоксиметил, 1-метоксиэтил, арил-C1-C4-алкилокси-C1-C6-алкил, в частности бензилоксиметил, 1-бензилоксиэтил, меркапто-C1-C6-алкил, в частности меркаптометил, C1-C4-алкилтио-C1-C6-алкил, в частности метилтиоэтил, C1-C4-алкилсульфинил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфинилэтил, C1-C4-алкилсульфонил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфонилэтил, карбокси-C1-C6-алкил, в частности карбоксиметил, карбоксиэтил, C1-C4-алкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности метоксикарбонилметил, этоксикарбонилэтил, C1-C4-арилалкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности бензилоксикарбонилметил, карбамоил-C1-C6-алкил, в частности карбамоилметил, карбамоилэтил, амино-C1-C6-алкил, в частности аминопропил, аминобутил, C1-C4-алкиламино-C1-C6-алкил, в частности метиламинопропил, метиламинобутил, C1-C4-диалкиламино-C1-C6-алкил, в частности диметиламинопропил, диметиламинобутил, гуанидино-C1-C6-алкил, в частности гуанидинопропил, C1-C4-алкоксикарбониламино-C1-C6-алкил, в частности трет-бутоксикарбониламинопропил, трет-бутоксикарбониламинобутил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)амино-C1-C6-алкил, в частности 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминопропил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминобутил, C2-C8-алкенил, в частности винил, аллил, бутенил, C3-C7-циклоалкил, в частности циклопентил, циклогексил, циклогептил, C3-C7-циклоалкил-C1-C4-алкил, в частности циклопентилметил, циклогексилметил, циклогептилметил, бензил, замещенный бензил, фенил, фенил-C1-C4-алкил, в частности фенилметил, который может быть необязательно замещен радикалами из группы, состоящей из галогена, в частности фтора, хлора, брома или иода, гидроксила, C1-C4-алкокси, в частности метокси или этокси, C1-C4-алкила, в частности метила.

В способе согласно настоящему изобретению неожиданно было обнаружено, что циклические депсипептиды (I), в частности эмодепсид и близко родственные структуры, могут быть синтезированы с высокими общими выходами, применяя гидрофобные защитные группы TAG для карбоновых кислот. Эти группы могут сделать молекулы, с которыми они связаны («несущие группу TAG» молекулы), нерастворимыми в полярных растворителях, таких как метанол. Следовательно, несущие группу TAG молекулы могут быть осаждены из реакционной смеси, и сама группа TAG, после удаления защитной группы, также может быть отделена с использованием этой методики. Кроме того, гидрофобная группа TAG позволяет несущим группу TAG молекулам растворяться в неполярных растворителях, таких как дихлорметан.

Удаление защитной группы аминной группы путем удаления защитной группы PG1 может быть выполнено с использованием стандартных методик с помощью основания, таких как обработка раствором пиперидина в дихлорметане. Аналогичным образом, удаление защитной группы карбоновых кислот путем удаления группы TAG может быть выполнено с использованием протоколов удаления бензильной группы, таких как обработка раствором трифторуксусной кислоты (TFA) в дихлорметане.

Согласно другому варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению PG1 представляет собой 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), трет-бутилкарбамат (Boc), бензилкарбамат (Z), ацетамид, трифторацетамид, фталимид, бензил (Bn), трифенилметил (Tr), бензилиден или п-толуолсульфонамид (Ts)

и TAG представляет собой:

или

где m представляет собой от ≥ 15 до ≤ 25, p представляет собой от ≥ 8 до ≤ 18, и q представляет собой от ≥ 15 до ≤ 25. Предпочтительно, m представляет собой 18, 19, 20, 21 или 22, p представляет собой 11, 12 или 13, и q представляет собой 21, 22 или 23.

Согласно другому варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению депсипептид общей формулы (IIb) получают из предшественников общих формул (IVb) и (IIIb):

посредством:

- в предшественнике (IVb), удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG2, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- в предшественнике (IIIb), удаления защитной группы карбоновой кислоты, которая защищена группой PG3, в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты, получая таким образом депсипептид (IIb);

где R1 - R12, TAG, PG1, x и y имеют значения, как определено выше (в частности, x и y могут представлять собой 1), PG2 представляет собой защитную группу аминной группы, и PG3 представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты. Способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же как указано в отношении реакции соединений (II) - (I) выше.

Предпочтительно предшественник общей формулы (IVb) получают из предшественников общих формул (Vb) и (Vb):

посредством:

- в предшественнике (VIb), удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG4, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- конденсации незащищенной аминной группы предшественника (VIb) и группы карбоновой кислоты предшественника (Vb), получая таким образом предшественник (IVb);

где R7 - R12, TAG и x имеют значения, как определено выше (в частности, x может представлять собой 1), PG2 имеет значение, как определено выше, и PG4 представляет собой защитную группу аминной группы. Способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же как указано в отношении реакции соединений (IIb) - (I) выше.

Также предпочтительно предшественник общей формулы (IIIb) получают из предшественников общих формул (VIIIb) и (VIIb):

посредством:

- в предшественнике (VIIb), удаления защитной группы аминной группы, которая защищена группой PG5, в присутствии основания, получая таким образом незащищенную аминную группу;

- конденсации незащищенной аминной группы предшественника (VIIb) и группы карбоновой кислоты предшественника (VIIIb), получая таким образом предшественник (IIIb);

где R1 - R6, PG1 и y имеют значения, как определено выше (в частности, y может представлять собой 1), PG3 имеет значение, как определено выше, и PG5 представляет собой защитную группу аминной группы. Способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же как указано в отношении реакции соединений (IIb) - (I) выше.

Также предпочтительно предшественник общей формулы (VIb) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (IXb) с TAG-OH:

где R10 - R12 и TAG имеют значения, как определено выше, и PG4 также имеет значение, как определено выше. Введение защитной группы или введение группы TAG для группы карбоновой кислоты в (IXb) может быть осуществлено с применением стандартной системы для конденсации, такой как DCC/DMAP.

Также предпочтительно предшественник общей формулы (VIIb) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (X) с PG3-OH:

Также предпочтительно PG3 представляет собой TAG, как определено выше.

Согласно другому варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению по меньшей мере одна стадия реакции из стадий реакции, приводящих к получению TAG-несущей молекулы, сопровождается осаждением неочищенного продукта реакции в метаноле, таким образом очищая неочищенный продукт реакции.

Согласно другому варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению по меньшей мере одна стадия из стадий реакции, в которых TAG-защищенные группы карбоновой кислоты подвергают удалению защитной группы, сопровождается осаждением отщепленного TAG-OH в метаноле и удалением осадка посредством фильтрации, таким образом очищая неочищенный продукт реакции.

Также предпочтительно предшественники (IIIb) и (IVb) являются идентичными.

Также предпочтительно R3 и R9 являются отличными друг от друга, R1 и R7 являются идентичными, R2 и R8 являются идентичными, R4 и R10 являются идентичными, R5 и R11 являются идентичными, и R6 и R12 являются идентичными.

Согласно другому варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению депсипептид выбран из депсипептида общих формул (II-1) - (II-14b):

где в формулах (II-11) - (II-14) -LINK- выбран из:

, где X1 может представлять собой C, N, S, O, X2 и X3 могут представлять собой C или N;

, где X1 может представлять собой C, N, S, O, X2, X3 и X4 могут представлять собой C или N;

, где X1, X2, X3 и X4 могут представлять собой C или N;

и где R13 выбран из SO₂NH(CH₃), SO₂NH₂, OC(O)CH₃, CF₃ или одной из следующих лактоновых структур:

Кроме того, настоящее изобретение обеспечивает способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (1) из депсипептидов общей формулы (IIb):

включающих стадии

обеспечения смеси соединения (IIc) и основания в растворителе, имеющем значение E_T(30) от ≥30 до ≤ 43

медленного, предпочтительно по каплям, добавления раствора связывающего агента в растворитель с образованием циклического депсипептида (I),

где x и y представляют собой, независимо друг от друга, 0, 1 или 2, при условии что x+y ≥ 1 (предпочтительно, x и y представляют собой 1), и R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11 и R12 каждый независимо друг от друга представляет собой водород, неразветвленный или разветвленный C1-C8-алкил, в частности метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, втор-пентил, гексил, изогексил, втор-гексил, гептил, изогептил, втор-гептил, трет-гептил, октил, изооктил, втор-октил, неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C8 алкил, в частности фторированный втор-бутил, гидрокси-C1-C6-алкил, в частности гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, C1-C4-алканоилокси-C1-C6-алкил, в частности ацетоксиметил, 1-ацетоксиэтил, C1-C4-алкокси-C1-C6-алкил, в частности метоксиметил, 1-метоксиэтил, арил-C1-C4-алкилокси-C1-C6-алкил, в частности бензилоксиметил, 1-бензилоксиэтил, меркапто-C1-C6-алкил, в частности меркаптометил, C1-C4-алкилтио-C1-C6-алкил, в частности метилтиоэтил, C1-C4-алкилсульфинил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфинилэтил, C1-C4-алкилсульфонил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфонилэтил, карбокси-C1-C6-алкил, в частности карбоксиметил, карбоксиэтил, C1-C4-алкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности метоксикарбонилметил, этоксикарбонилэтил, C1-C4-арилалкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности бензилоксикарбонилметил, карбамоил-C1-C6-алкил, в частности карбамоилметил, карбамоилэтил, амино-C1-C6-алкил, в частности аминопропил, аминобутил, C1-C4-алкиламино-C1-C6-алкил, в частности метиламинопропил, метиламинобутил, C1-C4-диалкиламино-C1-C6-алкил, в частности диметиламинопропил, диметиламинобутил, гуанидино-C1-C6-алкил, в частности гуанидинопропил, C1-C4-алкоксикарбониламино-C1-C6-алкил, в частности трет-бутоксикарбониламинопропил, трет-бутоксикарбониламинобутил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)амино-C1-C6-алкил, в частности 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминопропил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминобутил, C2-C8-алкенил, в частности винил, аллил, бутенил, C3-C7-циклоалкил, в частности циклопентил, циклогексил, циклогептил, C3-C7-циклоалкил-C1-C4-алкил, в частности циклопентилметил, циклогексилметил, циклогептилметил, бензил, замещенный бензил, фенил, фенил-C1-C4-алкил, в частности фенилметил, который может быть необязательно замещен радикалами из группы, состоящей из галогена, в частности фтора, хлора, брома или иода.

Термин «медленно», особенно означает, что и/или включает, что раствор связывающего агента добавляют со скоростью ≤ 2 (мол)% в минуту, предпочтительно ≤ 1 (мол)% в минуту, более предпочтительно ≤ 0,5 (мол)% в минуту.

В способ согласно настоящему изобретению неожиданно было обнаружено, что циклические депсипептиды (I), в частности эмодепсид и близко родственные структуры, могут быть синтезированы с высокими общими выходами. Не связываясь к какой-либо теории, авторы настоящего изобретения полагают, что это связано с плохой растворимостью циклического депсипептида (I) в растворителе в отличие от открытой формы (IIb).

Термин “значение E_T(30)” относится к E_T(30) согласно Reichardt, Angew. Chem. 1979,119-131, где указаны как метод определения таких значений, так и измеренные значения для многих стандартных растворителей.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения значение E_T(30) растворителя составляет от ≥ 34 до ≤ 39.

Термин “растворитель” в контексте настоящего изобретения должен также включать смесь растворителей.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения растворитель содержит этилацетат, согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения растворитель представляет собой этилацетат.

Подходящие связывающие агенты, которые являются вариантами осуществления настоящего изобретения, приведены выше. В соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения, связывающий агент содержит T3P, в соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения, связывающий агент представляет собой T3P.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения соотношение связывающего агента и соединения (IIc) перед реакцией (в моль:моль) составляет от ≥ 1:1 до ≤ 5:1, предпочтительно от ≥ 2:1 до ≤ 3:1.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения соотношение основания и соединения (IIb) перед реакцией (в моль:моль) составляет от ≥ 2:1 до ≤ 10:1, предпочтительно от ≥ 4:1 до ≤ 6:1.

Подходящие основания, которые являются вариантами осуществления настоящего изобретения, содержат N,N-диизопропилэтиламин (DIEA), триэтиламин, диметиламинопиридин (DMAP), N-метилморфолин, пиридин, 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен (DBU), 1,5-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен (DBN) или их смеси. Наиболее предпочтительным является N,N-диизопропилэтиламин.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения температура в ходе добавления связывающего агента составляет ≤ 25C.

Согласно одному варианту осуществления способа согласно настоящему изобретению R3 и R9 являются идентичными, R1 и R7 являются идентичными, R2 и R8 являются идентичными, R4 и R10 являются идентичными, R5 и R11 являются идентичными, и R6 и R12 являются идентичными.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения соединение IIb синтезируют из соединения II или IIa посредством удаления защитной группы A и B или X и Y соответственно. Соединение IIb может быть выделено или применяться in situ для синтеза депсипептида (I).

Настоящее изобретение также относится к линейным или циклическим депсипептидам, выбранным из одной из общих формул (II-1) - (II-14b) или (I-1) - (I-9), как описано ниже, или их фармацевтически или ветеринарно приемлемой соли:

где в формулах (II-11) - (II-14) и (I-1) - (I-9), соответственно:

A, B, X и Y имеют значение, как определено выше,

-LINK- выбран из:

и R13 выбран из SO₂NH(CH₃), SO₂NH₂, OC(O)CH₃, CF₃ или одной из следующих лактоновых структур:

Термины «ветеринарно приемлемая соль» и «фармацевтически приемлемая соль» используются во всем описании для описания любых солей соединений, которые приемлемы для введения для фармацевтических или ветеринарных применений и которые обеспечивают активное соединение при введении.

Ветеринарно приемлемые соли включают соли, полученные из ветеринарно приемлемых неорганических или органических оснований и кислот. Подходящие соли включают соли, включающие щелочные металлы, такие как литий, натрий или калий, щелочноземельные металлы, такие как кальций, магний и барий. Соли, содержащие переходные металлы, включая, но не ограничиваясь этим, марганец, медь, цинк и железо, также являются подходящими. Кроме того, настоящее изобретение охватывает соли, содержащие катионы аммония, а также замещенные катионы аммония, в которых один или несколько атомов водорода замещены алкильными или арильными группами. Особенно пригодны соли, полученные из неорганических кислот, включая, но не ограничиваясь этим, галогенводородные кислоты (HCl, HBr, HF, HI), серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и тому подобное. Подходящие неорганические соли также включают, но не ограничиваются ими, бикарбонатные и карбонатные соли. В некоторых вариантах примерами ветеринарно и сельскохозяйственно приемлемых солей являются соли присоединения органических кислот, образованные с органическими кислотами, включая, но не ограничиваясь ими, малеат, дималеат, фумарат, тозилат, метансульфонат, ацетат, цитрат, малонат, тартрат, сукцинат, бензоат, аскорбат, α-кетоглутарат и α-глицерофосфат. Конечно, могут быть использованы другие приемлемые органические кислоты.

Соли щелочных металлов (например, натрия, калия или лития) или щелочноземельных металлов (например, кальция) соединений также могут быть получены путем взаимодействия достаточно кислотного остатка при соединениях с гидроксидом щелочного металла или щелочноземельного металла.

Ветеринарно приемлемые соли могут быть получены с использованием стандартных методик, хорошо известных в данной области техники, например, путем взаимодействия достаточно основного соединения, такого как амин, с подходящей кислотной функциональной группой, присутствующей в соединении, или путем взаимодействия подходящей кислоты с подходящей основной функциональной группой на соединениях согласно настоящему изобретению.

Примеры

Настоящее изобретение далее описано со ссылкой на следующие примеры, без ограничения ими.

1. Общий способ

Исходные структурообразующие блоки готовили из имеющихся в продаже реагентов. Если не указано иное, реагенты и растворители были приобретены с наивысшим коммерческим качеством и использовались без дальнейшей очистки. Метанол и сухой толуол, CH₂Cl₂ были приобретены у Kanto Chemical Co., Inc. Все реакции контролировали с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием предварительно покрытых силикагелем 60 F254 пластин Merck (0,25 мм). Флэш-хроматографию проводили на силикагеле Kanto Chemical (Kanto Chemical, силикагель 60N, сферический нейтральный, 0,040-0,050 мм, кат. № 37563-84). ¹H и ¹³C ЯМР спектры записывали на JEOL JNM-ECA-500 (500 МГц для ¹H-ЯМР и 125 МГц для ¹³C-ЯМР). Химические сдвиги выражены в ppm вниз от внутренних пиков растворителя для CDCl₃ (¹H; δ = 7.26 ppm, ¹³C; δ = 77.0 ppm), CD₃OD (¹H; δ = 3.31 ppm, ¹³C; δ = 49.0 ppm), и значения J приведены в Герцах. Следующие сокращения были использованы для обозначения мультиплетностей: s = синглет, d = дублет, t = триплет, q = квартет, dd = двойной дублет, ddd = двойной дублет дублетов, dt = двойной триплет, dq = двойной квартет, m = мультиплет br = широкий. Все инфракрасные спектры измеряли на спектрометре Horiba FT-210. Масс-спектры высокого и низкого разрешения были измерены на JEOL JMS-AX505 HA, JEOL JMS-700 MStation и JEOL JMS-T100LP. Оптические вращения измеряли с помощью поляриметра JASCO P-1010. Точки плавления измеряли на устройствах YANACO MP-500P или OptiMelt (Stanford Research Systems).

Общий способ удаления защитной группы Fmoc

Субстрат с защитной группой Fmoc растворяли в 5% пиперидине/CH₂Cl₂ (в общем, 0.05 M для субстрата) при комнатной температуре, и раствор перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до -5°C, и MeOH добавляли (пятикратный избыток реакционного раствора). Полученный гетерогенный раствор перемешивали в течение еще 30 мин при -5°C, и бесцветный осадок фильтровали и промывали с помощью дополнительного MeOH с получением соединения соответствующего амину в виде бесцветного порошка.

Общий способ отщепления функциональной группы TAGa

Несущие TAG субстраты с группой TAGa растворяли в 50% TFA/CH2Cl2 (0.05 M для субстрата) при комнатной температуре, и раствор перемешивали в общем в течение 1 ч. Реакционную смесь затем концентрировали с толуолом (x 3) для удаления TFA. В колбу затем добавляли CH2Cl2 при -5°C, затем MeOH добавляли (пятикратный избыток CH2Cl2). Полученный гетерогенный раствор перемешивали в течение еще 30 мин при -5°C, и бесцветный осадок фильтровали и промывали с помощью дополнительного MeOH. Объединенные фильтраты концентрировали в вакууме. К полученному продукту добавляли 4 M HCl/диоксан (0.05 M для продукта) и концентрировали с толуолом (x 3) с получением соединения соответствующего карбоновой кислоте в виде, в общем, масла коричневого цвета. Неочищенное вещество применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

2. Синтез эмодепсида

Далее описан синтез эмодепсида, применяя соединение бензил (R)-2-гидрокси-3-(4-морфолинофенил)пропаноат (называемое EMD-8), которое синтезируют из п-фторбензальдегида согласно схеме на Фиг. 1. Применяя это соединение, эмодепсид синтезируют согласно схеме на Фиг. 2.

4-Морфолинобензальдегид (EMD-22): В реактор объемом 100 л помещали раствор 4-фторбензальдегида (EMD-21, 3.6 кг, 29.0 моль, 1.0 экв) в 1-метил-2-пирролидине (36 л, 10.0 об), морфолин (7.6 кг, 87 моль, 3.0 экв), K₂CO₃ (10.0 кг, 72.5 моль, 2.5 экв). Полученную смесь перемешивали в течение по меньшей мере 6 ч при 125~130°C. Реакцию контролировали посредством ТСХ до отсутствия EMD-21. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (18 л, 5 об.), H₂O (72 л, 20 об.), и отделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью этилацетата (18 л × 2), и объединяли органические фазы, и промывали с помощью H₂O (36.0 л × 3). Органические экстракты концентрировали в вакууме при ниже 45°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Остаток элюировали гептаном/этилацетатом (5:1, об./об., 7.2 л) и концентрировали в вакууме при ниже 45°C. Затем, к вышеуказанному остатку добавляли гептан/этилацетат (5:1, об./об., 21.6 л) при 20~25°C. Раствор перемешивали при 20~25°C в течение 16 ч. Смесь фильтровали, и осадок на фильтре промывали с помощью гептана (7.3 л). Твердые вещества сушили в вакууме при 40~45°C. Получали 4.67 кг (84.8%) 4-морфолинобензальдегида (EMD-22) в виде твердого вещества желтого цвета. MS (ES, m/z): 192 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 9.74 (s, 1H), 7.74 (d, J = 8.1 Гц, 2H), 7.07(d, J = 8.4 Гц, 2H), 3.75-3.74 (m, 4H), 3.35-3.33 (m,4H).

( Z )-2-метил-4-(4-морфолинобензилиден)оксазол-5(4H)-он (EMD-22B): В реактор объемом 100 л помещали раствор N-ацетилглицина (1.22 кг, 10.46 моль, 1.0 экв) в тетрагидрофуране (20 л, 10 об.), уксусный ангидрид (3.2 кг, 31.38 моль, 3.0 экв), хлорид цинка (II) (1.48 кг, 10.46 моль, 1.0 экв). Полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 1 ч и EMD-22 (2.0 кг, 10.46 моль, 1.0 экв) добавляли. Затем, смесь перемешивали при 70°C в течение еще 16 ч и контролировали посредством LCMS. После охлаждения до 20~25°C, H₂O (40 л) добавляли. Затем, смесь перемешивали при 0~5°C в течение 3 ч и фильтровали. Осадок на фильтре промывали с помощью H₂O (10 л), и сушили под вакуумом при 40~45°C. Получали 2.29 кг (80.4%) (Z)-2-метил-4-(4-морфолинобензилиден)оксазол-5(4H)-она (EMD-22B) в виде твердого вещества коричневого цвета. MS (ES, m/z): 273 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.84 (s, 1H), 7.47(d, J = 9.0 Гц, 2H), 7.02(d, J = 9.1 Гц, 2H), 3.74-3.71 (m, 4H), 3.32-3.27 (m, 4H).

( E )-2-гидрокси-3-(4-морфолинофенил)акриловая кислота (EMD-23): В реактор объемом 50 л помещали раствор EMD-22B (2.2 кг, 8.08 моль, 1.0 экв) в 1,4-диоксане (8.8 л, 4.0 об.), HCl (8.8 л, 4.0 об.) при 20~25°C. Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 3 ч и контролировали посредством LCMS. После охлаждения до 0~10°C, смесь перемешивали при 0~10°C в течение 16 ч и фильтровали. Осадок на фильтре сушили под вакуумом при 40~45°C. Неочищенный продукт элюировали с помощью H₂O (4.4 л) и перемешивали при 0~10°C в течение 2 ч. Смесь отфильтровали, и осадок на фильтре сушили под вакуумом при 40~45°C. Получали 1.17 кг (56.0%) (E)-2-гидрокси-3-(4-морфолинофенил)акриловой кислоты (EMD-23) в виде твердого вещества синевато-серого цвета. MS (ES, m/z): 250 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.66 (d, J = 8.5 Гц, 2H), 6.97(d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.35 (s, 1H), 4.05 (s, 1H, -OH), 3.77-3.74 (m, 4H), 3.19-3.16 (m, 4H).

(R)-2-гидрокси-3-(4-морфолинофенил)пропановая кислота (EMD-24): В круглодонную колбу объемом 2 л, продутую азотом и с поддержанием инертной атмосферы азота, помещали раствор EMD-23 (66.0 г, 0.26 моль, 1.0 экв) в N,N-диметилформамиде (660 мл, 10.0 об.), Et₃N (107.2 г, 1.06 моль, 4.0 экв), RuCl(R,R)-TsDPEN (1.69 г, 0.0026 моль, 0.01 экв) при 20~25°C. К вышеописанной смеси добавляли муравьиную кислоту (36.59 г, 0.79 моль, 3.0 экв) по каплям в течение 2 ч при 20~25°C в атмосфере N₂. Затем, смесь перемешивали при 20~25°C и контролировали посредством LCMS. Реакция была отмечена для M1, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Бензил (R)-2-гидрокси-3-(4-морфолинофенил)пропаноат (EMD-8): К смеси (M1) добавляли K₂CO₃ (109.0 г, 0.78 моль, 3.0 экв) и по каплям бензилбромид (54.0 г, 0.32 моль, 1.2 экв) при 20~25°C в течение 1 ч. Затем, смесь перемешивали при 55~60°C в течение еще 16 ч. Реакционную смесь разбавляли этилацетатом (330 мл, 5 об.), H₂O (1.2 л, 20 об.), и отделяли. Водную фазу экстрагировали с помощью этилацетата (330 мл × 2), и объединяли органические фазы, и промывали с помощью H₂O (660 мл × 3). Органические экстракты концентрировали в вакууме при ниже 45°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Остаток элюировали гептаном/этилацетатом (3:1, об./об., 132 мл) и концентрировали в вакууме при ниже 45°C. Затем, к вышеуказанному остатку добавляли гептан/этилацетат (3:1, об./об., 264 мл) при 20~25°C. Смесь фильтровали, и осадок на фильтре промывали с помощью гептана (132 мл). Твердые вещества сушили в вакууме при 40~45°C. Получали 52 г (58%) бензил(R)-2-гидрокси-3-(4-морфолинофенил)пропаноата (EMD-8) в виде твердого вещества желтого цвета. MS (ES, m/z): 342 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.40-7.27 (m, 5H), 7.05 (d, J = 8.1 Гц, 2H), 6.82 (d, J = 8.1 Гц, 2H), 5.17 (s, 2H), 4.24 (t, J = 7.5 Гц, 1H), 3.74-3.71 (m, 4H), 3.06-3.03 (m, 4H), 2.90-2.73 (m, 2H).

(R)-1-(бензилокси)-3-(4-морфолинофенил)-1-оксопропан-2-ил- N -(трет-бутоксикарбонил)- N -метил-L-лейцинат (EMD-9B): В реактор объемом 50 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-8 (1.96 кг, 5.75 моль, 1.0 экв) в дихлорметане (14.1 л, 10. об.), N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцин (1.41 кг, 5.75 моль, 1.0 экв), DMAP (0.77 кг, 6.32 моль, 1.1 экв), EDCI (1.21 кг, 6.32 моль, 1.1 экв) при 20~25°C. Смесь перемешивали при этой температуре в течение по меньшей мере 3 ч и контролировали посредством LCMS. Смесь концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Остаток растворяли в MTBE (14.1 л) и HCl (вод, 1Н, 14.1 л) и фильтровали. Органический слой промывали с помощью HCl (вод., 1Н, 14.1 л), NaHCO₃ (нас., 14.1L × 2), и концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Затем остаток растворяли в гептане/MTBE (28.2 л, 8:1, об./об.), и концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. К вышеуказанному остатку добавляли гептан/MTBE (15.5 л, 8:1, об./об.) при 20~25°C и затравочный кристалл (0.2%, мас/мас), и поддерживали перемешивание всю ночь при 20~25°C. Смесь фильтровали; осадок на фильтре промывали с помощью гептана (7.0 л). Твердые вещества сушили в вакууме при 40~45°C. Получали 2.56 кг (78.3%) (R)-1-(бензилокси)-3-(4-морфолинофенил)-1-оксопропан-2-ил-N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцината (EMD-9B) в виде твердого вещества светло-желтого цвета. MS (ES, m/z): 569 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.38-7.26 (m, 5H), 7.10 (d, J = 8.2 Гц, 2H), 6.96 (d, J = 8.1 Гц, 2H), 5.25-5.22 (m, 1H), 5.12-5.10 (m, 2H), 4.07-3.99 (m, 1 H), 3.79-3.76 (m, 4H), 3.19-2.97 (m, 6H), 2.57 (s, 3H), 1.42-1.34 (m, 11H), 1.24-1.15 (m, 1H), 0.88-0.82 (m, 6H).

(R)-2-(( N -(трет-бутоксикарбонил)- N -метил-L-лейцил)окси)-3-(4-морфолинофенил)пропановая кислота (EMD-10B): В реактор объемом 50 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-9B (400g, 0.7 моль, 1.0 экв) в EtOH (4.0 л, 10.0 об.) при 20~25°C. Реактор вакуумировали и продували азотом три раза, и Pd/C (28.0 г, 7% мас/мас) добавляли. Затем реактор вакуумировали и продували азотом три раза снова, и поддерживали барботирование водорода под поверхностью реакционной смеси. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 4 ч при 20~25°C и контролировали посредством ВЭЖХ. После завершения реакции, барботирование водорода прекращали. Смесь фильтровали через целит (2.0 кг), и остаток на фильтре промывали с помощью EA (0.8 л), и фильтрат концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Получали 317.7 г (94.4%) of (R)-2-((N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцил)окси)-3-(4-морфолинофенил)пропановой кислоты (EMD-10B) в виде масла темно желтого цвета; MS (ES, m/z): 479 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.10 (d, J = 8.4 Гц, 2H), 6.85 (d, J = 8.7 Гц, 2H), 5.03-5.02 (m, 1H), 4.81-4.53 (m, 1H), 3.73 (t, J = 7.2 Гц, 4H), 3.05 (t, J = 7.2 Гц, 4H), 2.96-2.90 (m, 1H), 2.63 (s, 3H), 1.42-1.16 (m, 12 H), 0.89-0.84 (m, 6H).

(R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-илметил-L-лейцинат (EMD-12B): В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцин (240.3 г, 0.98 моль, 1.0 экв) в THF (3.9 л, 16 об.), бензил (S)-2-гидроксипропаноат (176.5 г, 0.98 моль, 1.0 экв), трифенилфосфин (385.1 г, 1.47 моль, 1.5 экв) при 20~25°C. После охлаждения до ниже 10°C, диизопропил азодиформиат (297 г, 1.47 моль, 1.5 экв) добавляли по каплям при перемешивании при ниже 10°C. Затем нагревали до 20~25°C и перемешивали в течение по меньшей мере 2 ч. Реакцию контролировали посредством ВЭЖХ до бензил (S)-2-гидроксипропаноата менее или равного 0.5%. Полученную смесь разбавляли этилацетатом (3.9 л) и промывали с помощью NaHCO₃ (нас., 3.9 л × 2), солевым раствором (3.9 L × 2). Органическую фазу концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Остаток обменивали с трет-бутилметиловым простым эфиром (240 мл × 2), концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать, и смешивали с трет-бутилметиловым простым эфиром (960 мл) в течение по меньшей мере 3 ч. Смесь фильтровали, и осадок на фильтре промывали с помощью трет-бутилметилового простого эфира (240 мл). Фильтрат концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Получали неочищенный продукт (R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцината (EMD-1B) в виде масла желтого цвета, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-1B в HCl/EA (1.2 л, 5.0 экв) при ниже 25°C. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 1 ч при 20~25°C и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-1B менее или равного 0.5%. Раствор концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Остаток обменивали с трет-бутилметиловым простым эфиром (240 мл × 2), концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать, и растворяли в трет-бутилметиловом простом эфире (1.92 л). Затем добавляли затравочный кристалл (0.1%, мас/мас) и перемешивали в течение по меньшей мере 5 ч при 20~25°C. Смесь фильтровали, и осадок на фильтре промывали с помощью трет-бутилметилового простого эфира (0.24 л). Твердое вещество сушили под вакуумом при 40±5°C, и 270 г неочищенного продукта получали в виде твердого вещества белого цвета. Твердое вещество растворяли в этилацетате (810 мл) при нагревании до 40±5°C, и трет-бутилметиловый простой эфир (4.05 л) добавляли. Затем охлаждали до 20~25°C, и добавляли затравочный кристалл (0.1%. мас/мас). Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 5 ч при 20~25°C, фильтровали, осадок на фильтре промывали с помощью трет-бутилметилового простого эфира (0.24 л). Твердое вещество сушили под вакуумом при 40±5°C. Получали 226.7 г (67.3%, две стадии) (R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-илметил-L-лейцината (EMD-12B) в виде твердого вещества белого цвета. MS (ES, m/z): 308 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.41-7.35 (m, 5 H), 5.28 (q, J = 7.1 Гц, 1H), 5.20 (s, 2H), 2.51 (s, 3H), 1.77-1.71 (m, 3H), 1.50-1.48 (m, 3H), 0.90-0.87 (m, 6H).

(R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-((R)-2-((N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцил)окси)-3-(4-морфолинофенил)пропаноил)-N-метил-L-лейцинат (EMD-13B): В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-10B (275.0 г, 0.57 моль, 1.0 экв) в этилацетате (2.2 л, 8.0 об.), EMD-12B ( 197.7 г, 0.57 моль, 1.0 экв), N,N-диизопропилэтиламин (372.2 г, 2.88 моль, 5.0 экв) при 20~25°C. После охлаждения до 10 ~20°C, ангидрид пропилфосфоновой кислоты (916.4 г, 1.44 моль, 2.5 экв) добавляли по каплям при перемешивании при ниже 25°C. Затем, смесь перемешивали при 20~25°C в течение по меньшей мере 2.5 ч и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-12B равного или менее 1.0%. Раствор разбавляли гептаном (2.75 л) при 0~10°C и медленно гасили с помощью HCl (вод., 1.0Н, 2.75 л). Органическую фазу промывали с помощью HCl (вод., 1.0Н, 2.75 л), NaHCO₃ (нас., 2.75 л × 2), и концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Получали 429.8 г (97.4%) (R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-((R)-2-((N-(трет-бутоксикарбонил)-N-метил-L-лейцил)окси)-3-(4-морфолинофенил)пропаноил)-N-метил-L-лейцинат (EMD-13B) в виде густого масла желтого цвета. MS (ES, m/z): 768 (M+H);

(R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил-N-метил-N-((R)-2-((метил-L-лейцил)окси)-3-(4-морфолинофенил)пропаноил)-L-лейцинат (EMD-14B): В реактор объемом 5 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-13B (245 г, 0.32 моль, 1.0 экв) в HCl/EA (735, 3.0 об.) при ниже 25°C. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 1 ч при 20~25°C и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-13B менее или равного 0.5%. Полученный раствор концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать и экстрагировали с помощью этилацетата (245 мл × 2) при ниже 40°C. Остаток растворяли в этилацетате (735 мл) и N,N-диизопропилэтиламин (245 г) добавляли при 20~25°C. Смесь промывали с помощью NaHCO3 (нас., 735 мл × 2). Органический слой концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Получали 186.9 г (89.9%) (R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил-N-метил-N-((R)-2-((метил-L-лейцил)окси)-3-(4-морфолинофенил)пропаноил)-L-лейцинат (EMD-14B) в виде масла желтого цвета. MS (ES, m/z): 668 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.41-7.32 (m, 5 H), 7.17 (d, J = 8.5 Гц, 2H), 6.86 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 5.50-5.47 (m, 1H), 5.20-5.04 (m, 4H), 4.23-3.99 (m, 1H), 3.74-3.72 (m, 4H), 3.09-2.76 (m, 10H), 2.22-1.99 (m, 3H), 1.63-1.35 (m, 5H), 1.29-1.16 (m, 4H), 0.97-0.70 (m, 12H).

(6S,9R,12S,15R)-6,12-диизобутил-2,2,5,11,15-пентаметил-9-(4-морфолинобензил)-4,7,10,13-тетраоксо-3,8,14-триокса-5,11-диазагексадекан-16-овая кислота (EMD-15B): В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-13B (274.2 г, 0.36 моль, 1.0 экв) в EtOH (2.8 л, 10.0 об.) при 20~25°C. Реактор вакуумировали и продували азотом три раза, и Pd/C (19.2 г, 7% мас/мас) добавляли. Затем реактор вакуумировали и продували азотом три раза снова, и поддерживали барботирование водорода под поверхностью реакционной смеси. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 4 ч при 20~25°C и контролировали посредством ВЭЖХ. После завершения реакции, барботирование водорода прекращали. Смесь фильтровали через целит (2.0 кг), и осадок на фильтре промывали этилацетатом (0.56 л), и фильтрат концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Получали 237.4 г (98.0%)(6S,9R,12S,15R)-6,12-диизобутил-2,2,5,11,15-пентаметил-9-(4-морфолинобензил)-4,7,10,13-тетраоксо-3,8,14-триокса-5,11-диазагексадекан-16-овой кислоты (EMD-15B) в виде масла желтого цвета; MS (ES, m/z): 678 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.15 (d, J = 8.4 Гц, 2H), 6.85 (d, J = 8.3 Гц, 2H), 5.52-5.40 (m, 1H), 5.09-5.02 (m, 1H), 4.91-4.53 (m, 2 H), 3.74-3.72 (m, 4H), 3.15-3.04 (m, 5H), 2.94-2.86 (m, 4H), 2.65-2.64 (m, 3H), 1.43-1.28 (m, 16H), 0.93-0.77 (m, 12H).

(R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-метил-N-((6S,9R,12S,15R,18S,21R)-6,12,18-триизобутил-2,2,5,11,15,17-гексаметил-9,21-бис(4-морфолинобензил)-4,7,10,13,16,19-гексаоксо-3,8,14,20-тетраокса-5,11,17-триазадокозан-22-оил)-L-лейцинат (EMD-16B): В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-15B (147.6 г, 0.22 моль, 1.0 экв) в этилацетате (2.2 л, 8.0 об.), EMD-14B (145.5 г, 0.22 моль, 1.0 экв), N,N-диизопропилэтиламин (139.6 г, 1.08 моль, 5.0 экв) при 20~25°C. После охлаждения до 10 ~20°C, ангидрид пропилфосфоновой кислоты (346.4 г, 0.54 моль, 2.5 экв) добавляли по каплям при перемешивании при ниже 25°C. Затем, смесь перемешивали при 20~25°C в течение по меньшей мере 2.5 ч и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-12B менее или равного 0.5 %. Раствор разбавляли гептаном (2.2 л) при 0~10°C и медленно гасили с помощью HCl (вод, 1.0 Н, 2.2 л). Органическую фазу промывали с помощью HCl (вод., 1.0Н, 2.2 л), NaHCO₃ (нас., 2.2 л × 2), концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать, и экстрагировали с помощью гептана/MTBE (0.44 л, 1.5:1, об./об.) при ниже 40°C. Остаток растворяли в гептане/MTBE (1.65 л, 1.5:1, об./об.), и затравочный кристалл (0.1%, мас/мас) добавляли при 20~25°C. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 16ч при 20~25°C и фильтровали. Осадок на фильтре промывали с помощью гептана (0.66 л), сушили в вакууме при 40~45°C. Получали 242.4 г (83.4%) of (R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-метил-N-((6S,9R,12S,15R,18S,21R)-6,12,18-триизо-бутил-2,2,5,11,15,17-гексаметил-9,21-бис(4-морфолинобензил)-4,7,10,13,16,19-гексаоксо-3,8,14,20-тетраокса-5,11,17-триазадокозан-22-оил)-L-лейцината (EMD-16B) в виде твердого вещества белого цвета: MS (ES, m/z): 1328 (M+H);

(R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-((2R,5S,8R,11S,14R,17S)-5,11-диизобутил-6,8,12,19-тетраметил-17-(метиламино)-2,14-бис(4-морфолинобензил)-4,7,10,13,16-пентаоксо-3,9,15-триокса-6,12-диазаикозаноил)-N-метил-L-лейцинат (EMD-20B): В реактор объемом 5 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-16B (376.4 г, 0.28 моль, 1.0 экв) в HCl/EA (1128 мл, 3.0 об.) при ниже 25°C. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 1 ч при 20~25°C и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-16B менее или равного 0.5%. Полученный раствор концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать и экстрагировали с помощью этилацетата (376.4 мл × 2) при ниже 40°C. Остаток растворяли в этилацетате (1128 мл), и N,N-диизопропилэтиламин (376.4 г) добавляли при 20~25°C. Смесь промывали с помощью NaHCO3 (нас., 1128 мл × 2). Органический слой концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Получали 313.56 г (90.1%) of (R)-1-(бензилокси)-1-оксопропан-2-ил N-((2R,5S,8R,11S,14R,17S)-5,11-диизобутил-6,8,12,19-тетраметил-17-(метиламино)-2,14-бис(4-морфолинобензил)-4,7,10,13,16-пентаоксо-3,9,15-триокса-6,12-диазаикозаноил)-N-метил-L-лейцината (EMD-20B) в виде масла желтого цвета; MS (ES, m/z): 1228 (M+H);

(3S,6R,9S,12R,15S,18R,21S,24R)-3,9,15,21-тетраизобутил-8,12,14,20,24-пентаметил-6,18-бис(4-морфолинобензил)-4,7,10,13,16,19,22-гептаоксо-5,11,17,23-тетраокса-2,8,14,20-тетраазапентакозан-25-овая кислота (EMD-18B): В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-20B (313.56 г, 0.26 моль, 1.0 экв) в EtOH (3.2 л, 10.0 об.) при 20~25°C. Реактор вакуумировали и продували азотом три раза, и Pd/C (21.95 г, 7% мас/мас) добавляли. Затем реактор вакуумировали и продували азотом три раза снова, и поддерживали барботирование водорода под поверхностью реакционной смеси. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 4 ч при 20~25°C и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-20B менее или равного 1.0%. После завершения реакции, барботирование водорода прекращали. Смесь фильтровали через целит (2.0 кг), и осадок на фильтре промывали этилацетатом (0.64 л × 3), и фильтрат концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать. Остаток смешивали с этилацетатом (0.7 л) в течение по меньшей мере 3ч и фильтровали; осадок на фильтре промывали этилацетатом (0.32 л × 2). Твердое вещество сушили под вакуумом при 40~45°C. Получали 234.2 г (80.6%) (3S,6R,9S,12R,15S,18R,21S,24R)-3,9,15,21-тетраизобутил-8,12,14,20,24-пентаметил-6,18-бис(4-морфолинобензил)-4,7,10,13,16,19,22-гептаоксо-5,11,17,23-тетраокса-2,8,14,20-тетраазапентакозан-25-овой кислоты (EMD-18B) в виде твердого вещества грязновато-белого цвета; MS (ES, m/z): 1138 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.34-7.16 (m, 8H), 5.68-5.28 (m, 3H), 5.11-5.04 (m, 3H), 4.93-4.86 (m, 1H), 4.03-3.99 (m, 1H), 3.85-3.82 (m, 8H), 3.23-3.22 (m, 8H), 3.23-2.76 (m, 13H), 2.49 (s, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.66-1.45 (m, 8H), 1.43-1.16 (m, 10H), 0.99-0.64 (m, 24H).

(3S,6R,9S,12R,15S,18R,21S,24R)-3,9,15,21-тетраизобутил-4,6,10,16,18,22-гексаметил-12,24-бис(4-морфолинобензил)-1,7,13,19-тетраокса-4,10,16,22-тетраазациклотетракозан-2,5,8,11,14,17,20,23-октаон (Эмодепсид): В реактор объемом 10 л, продутый азотом и в котором поддерживается инертная атмосфера азота, помещали раствор EMD-18B (234.2 г, 0.21 моль, 1.0 экв) в этилацетате (3.8 л, 16.0 об.), N,N-диизопропилэтиламин (131.84 г, 1.02 моль, 5.0 экв) при 20~25°C. После охлаждения до 10 ~20°C, ангидрид пропилфосфоновой кислоты (324.5 г, 0.51 моль, 2.5 экв) добавляли по каплям при перемешивании при ниже 25°C. Затем, смесь перемешивали при 20~25°C в течение по меньшей мере 2.5 ч и контролировали посредством ВЭЖХ до EMD-18B менее или равного 0.5 %. Смесь разбавляли гептаном (2.38 л) при 0~10°C и медленно гасили с помощью HCl (вод., 1.0 Н, 2.38 л). Органическую фазу промывали с помощью HCl (вод., 1.0Н, 2.38 л), NaHCO₃ (нас., 2.38 л × 2), концентрировали при ниже 40°C до тех пор, пока капли дистиллята не переставали выпадать, и экстрагировали с помощью EtOH (0.48 л × 2) при ниже 40°C. Остаток растворяли в EtOH (0.72 л) при 45~55°C, и затравочный кристалл (0.1%, мас/мас) добавляли при 20~25°C. Смесь перемешивали в течение по меньшей мере 16ч при 20~25°C и фильтровали. Осадок на фильтре промывали с помощью EtOH (0.24L). Твердое вещество сушили под вакуумом при 40±5°C. Неочищенный продукт перекристаллизовывали с этилацетатом. Получали 118.24 г (51.3%) (3S,6R,9S,12R,15S,18R,21S,24R)-3,9,15,21-тетраизобутил-4,6,10,16,18,22-гексаметил-12,24-бис(4-морфолинобензил)-1,7,13,19-тетраокса-4,10,16,22-тетраазациклотетракозан 2,5,8,11,14,17,20,23-октаона (эмодепсид) в виде твердого вещества белого цвета; MS (ES, m/z): 1120 (M+H); ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 7.16 (d, J = 8.7 Гц, 4H), 6.87 (d, J = 8.2 Гц, 4H), 5.68 (q, J = 8.0 Гц, 1H), 5.51-4.04 (m, 7H), 3.74-3.71 (m, 8H), 3.08-3.04 (m, 8H), 2.99-2.96 (m, 4H), 2.90-2.88 (m, 4H), 2.83-2.82 (m, 4H), 2.78 (s, 2H), 2.70 (s, 2H), 1.78-1.38 (m, 8H), 1.31-1.14 (m, 6H), 0.97-0.69 (m, 28H).

3. Получение PF1022A (способ 1; см. реакционную схему на Фиг. 3 и ЯМР спектр на Фиг. 4)

3-1. Методика синтеза

N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa

К перемешанному раствору соединения HO-TAGa (1.69 г, 1.85 ммоль) в CH₂Cl₂(37 мл) добавляли 0.2 M раствор в толуоле вещества 1 (12.0 мл, 2.40 ммоль), 4-диметиламинопиридин (12 мг, 93.0 мкмоль) и N,N’-дициклогексилкарбодиимид (1.30 г, 2.78 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере N₂. После перемешивания в течение 2 ч, реакционную смесь затем охлаждали до -5°C, и MeOH (185 мл) добавляли. Полученный гетерогенный раствор перемешивали в течение еще 15 мин при -5°C, и бесцветный осадок фильтровали и промывали с помощью дополнительного MeOH (500 мл) с получением соединения N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (2.46 г, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления: 44 - 45°C

[α]_D ²⁴:-10.2 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.78-7.74 (сложный m, 2H), 7.60-7.56 (сложный m, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.29 (m, 2H), 6.50 (s, 4/3H), 6.48 (s, 2/3H), 5.12-5.00 (сложный m, 4H), 4.67 (dd, J = 6.3, 9.7 Гц, 3/10H), 4.58 (dd, J = 6.3 Гц, 10.9 Гц, 4/10H), 4.50 (dd, J = 6.9 Гц, 10.3 Гц, 6/10H), 4.38-4.34 (сложный m, 9/10H), 4.30 (m, 5/10H), 4.23 (t, J = 6.3 Гц, 3/10H), 3.93 (m, 6H), 2.86 (s, 2H), 2.83 (s 1H), 1.76 (m, 6H), 1.64-1.42 (сложный m, 9H), 1.31-1.14 (сложный m, 87H), 0.96-0.87 (сложный m, 14H), 0.78 (d, J = 6.9 Гц, 1H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1334.0748 (M⁺, вычислено для C₈₆H₁₄₃NO₉ : 1334.0763)

N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (1)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (1.00 г, 0.749 ммоль) превращали в соединение 1 (816 мг, 98%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 6.50 (s, 2H), 5.16 (q, J = 6.9 Гц, 1H), 5.08 (d, J = 12.0 Гц, 1H), 5.04 (d, J = 12.0 Гц, 1H), 3.93 (m, 6H), 3.30 (t, J = 7.5 Гц, 1H), 2.37 (s, 3H), 1.75 (m, 6H), 1.53-1.42 (сложный m, 10H), 1.32-1.25 (сложный m, 86H), 0.93-0.86 (сложный m, 15H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 170.6, 153.3, 138.4, 130.2, 106.4, 73.5, 69.2, 68.9, 67.6, 61.4, 42.2, 34.5, 32.0, 30.4, 29.8 (x2), 29.5 (x2), 26.2, 25.0, 22.8, 22.6, 22.5, 17.1, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1113.0151 [(M+H)⁺, вычислено для C₇₁H₁₃₄NO₇ : 1113.0160]

N- Fmoc -N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-LacO-TAGa (2)

К перемешанному раствору соединения 1 (800 мг, 0.719 ммоль) в CH₂Cl₂(25 мл) добавляли вещество 2 (426 мг, 0.827 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0.429 мл, 2.52 ммоль), и PyBroP (496 мг, 1.222 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 88 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения 2 (1.11 г, 96%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.76-7.72 (сложный m, 2H), 7.62-7.40 (сложный m, 2H), 7.39-7.17 (сложный m, 9H), 6.47 (m, 2H), 5.47-5.27 (сложный m, 2H), 5.15-4.97 (сложный m, 4H), 4.69-4.13 (сложный m, 3H), 3.92 (сложный m, 6H), 3.07 (m, 2H), 2.85 (сложный, 6H), 1.80-1.25 (сложный m, 105H), 1.02-0.72 (сложный m, 21H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1632.2163 [(M+Na)⁺, вычислено для C₁₀₂H₁₆₄N₂O₁₂Na: 1632.2182]

N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac-OH (3)

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение, 2 (614 мг, 0.381 ммоль) превращали в соединение 3 (261 мг, 95%) в виде масла желтого цвета, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (4)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 2 (472 мг, 0.293 ммоль) превращали в соединение 4 (404 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.27 (m, 5H), 6.49 (s, 2H), 5.50 (dd, J = 5.7, 8.6 Гц, 1H), 5.32 (dd, J = 4.6, 10.9 Гц, 1H), 5.09-5.00 (сложный m, 3H), 3.93 (m, 6H), 3.28 (t, J = 6.9 Гц, 1H), 3.09 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.82-1.25 (сложный m, 105H), 0.89-0.77 (сложный m, 21H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 175.6, 175.1, 175.0, 174.8, 170.9, 170.5 (x2), 170.4, 169.8, 169.7, 166.7, 165.1, 153.3, 138.5, 138.3, 135.8 (x2), 130.2, 129.5, 129.3, 128.7, 128.6, 128.5 (x2), 127.2, 107.0, 106.9, 105.4, 78.1, 73.5, 71.9, 71.6, 69.4, 69.2, 68.9, 67.7, 67.5, 66.9, 65.6, 61.3, 61.2, 59.7, 57.7, 54.7, 42.3, 42.2, 42.1, 40.0, 38.8, 37.5, 36.9, 34.4, 34.3, 32.8, 32.0, 31.3, 30.4, 29.8 (x2), 29.6, 29.5 (x2), 26.2, 25.0, 24.8, 24.7, 24.6, 23.4, 22.9, 22.8, 22.5 (x2), 22.4 (x2), 21.9, 21.4, 20.5, 17.0, 16.9, 16.8, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1388.1664 [(M+H)⁺, вычислено для C₈₇H₁₅₅N₂O₁₀ : 1388.1682]

N- Fmoc -N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (5)

К перемешанному раствору соединения 2 (330 мг, 0.238 ммоль) в CH₂Cl₂(4.8 мл) добавляли соединение 3 (221 мг, 0.309 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0.150 мл, 0.881 ммоль), и PyBroP (197 мг, 0.428 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 42 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa с получением соединения 5 (477 мг, 96%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.74 (m, 2H), 7.53 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.32-7.15 (сложный m, 12H), 6.48 (m, 2H), 5.51-4.96 (сложный m, 10H), 4.70-4.12 (сложный m, 3H), 3.93 (m, 6H), 3.23 (dd, J = 6.9, 13.7 Гц, 1H), 3.08-2.70 (сложный m, 15H), 1.80-1.25 (сложный m, 114H), 0.95-0.78 (сложный m, 33H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 2106.4949 [(M+Na)⁺, вычислено для C₁₂₈H₂₀₂N₄O₁₈ Na₁: 2106.4912]

N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 5 (450 мг, 0.206 ммоль) превращали в соответствующий амин (398 мг, 98%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.25 (m, 10H), 6.48 (s, 2H), 5.57-4.99 (сложный m, 9H), 3.93 (m, 6H), 3.26-2.78 (сложный m, 14H), 2.24 (s, 3H), 1.80-1.25 (сложный m, 114H), 0.90-0.78 (сложный m, 33H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 175.6, 175.2 (x2), 171.5, 171.1, 170.8 (x2), 170.6, 170.5 (x2), 170.3, 153.3, 138.5 (x2), 138.3, 136.1, 135.9, 135.5, 130.2, 130.1, 130.0, 129.8, 129.7, 129.6, 129.4 (x2), 128.8, 128.7, 128.6, 128.5, 127.4 (x2), 127.2, 127.1, 126.9, 126.8, 107.0 (x2), 106.9, 73.5, 72.5, 72.2, 71.7, 71.6, 69.8, 69.4, 69.2, 68.1, 68.0, 67.8, 67.5 (x2), 66.9, 61.4, 57.4, 55.2, 54.8, 54.6 (x2), 38.8, 37.7, 37.6, 37.4 (x2), 37.1 (x2), 37.0, 36.9, 34.7, 34.6, 32.2, 32.0, 31.9, 31.7, 31.6, 31.4, 31.3, 31.2, 30.4, 29.8 (x2), 29.6, 29.5 (x2), 26.2, 24.9, 24.8 (x2), 24.7, 24.6, 24.5, 23.5, 23.4, 23.3, 23.1 (x2), 23.0, 22.8, 22.7, 22.5, 22.4, 22.3, 22.0, 21.5, 21.4, 21.3 (x2), 20.5, 16.9, 16.8, 16.6, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1862.4425 [(M+H)⁺, вычислено для C₁₁₃H₁₉₃N₄O₁₆ : 1862.4412]

N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac-OH

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение, N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-LacO-TAGa (380 мг, 0.204 ммоль) превращали в соответствующую карбоновую кислоту (198 мг, 98%) в виде масла желтого цвета, которую применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

PF1022A

Реакция для 0.005M концентрации субстрата

Неочищенную смесь из предшествующей реакции (90 мг, 0.0895 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (18 мл, 0.005 M). К реакционной смеси добавляли N,N-диизопропилэтиламин (76 мкл, 4.48 ммоль) и PyBOP (93 мг, 0.179 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 48 ч, реакционную смесь гасили посредством насыщенного водного NaHCO₃ (18 мл) при 0°С, и эту смесь экстрагировали с помощью CHCl₃ (20 мл × 2). Объединенные органические слои промывали с помощью 10% водного NaHSO₄ (60 мл) и солевого раствора (60 мл), высушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃: MeOH = 400 : 1 - 40 : 1) с получением PF1022A (55 мг, 65%) в виде бесцветного твердого вещества.

Реакция для 0.05M концентрации субстрата

Согласно методике циклизации, упомянутой выше, неочищенную смесь из предшествующей реакции (90 мг, 0.0895 ммоль) подвергали циклизации в CH₂Cl₂ (1.8 мл, 0.05 M) с N,N-диизопропилэтиламином (76 мкл, 4.48 ммоль) и PyBOP (93 мг, 0.179 ммоль) при комнатной температуре в течение 48 ч с получением PF1022A (40 мг, 49%) в виде бесцветного твердого вещества.

точка плавления: 100-103°C

[α]²² _D : -99.4°C (c 0.06, MeOH)

IR (KBr) : 1743, 1666, 1466, 1412, 1265, 1188, 1126, 1080, 1026, 748, 701

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃OD) δ : 7.29 (m, 10H), 5.82 (t, J = 7.5 Гц, 1H), 5.72 (m, 2H, ротамер), 5.54 (q, J = 6.9 Гц, 1H), 5.44 (dd, J = 4.6, 11.7 Гц, 1H), 5.40 (dd, J = 4.6, 11.7 Гц, 1H, ротамер), 5.23 (dd, J = 4.6, 11.7 Гц, 1H), 5.18 (q, J = 6.9 Гц, 1H, ротамер), 4.77 (dd, J = 3.4, 11.2 Гц, 1H), 3.14 (m, 4H), 3.00 (s, 5/2H, ротамер), 2.91 (m, 7H, ротамер), 2.82 (s, 5/2H, ротамер), 1.84 (m, 1H), 1.77-1.47 (сложный m, 11H), 1.39 (d, J = 6.3 Гц, 3H), 1.05 (d, J = 6.3 Гц, 3H), 0.98 (d, J = 6.9 Гц, 3H), 0.80 (d, J = 6.3 Гц, 3H), 0.95-0.82 (сложный m, 18H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CD₃OD) δ : 174.4, 173.5, 173.1, 173.1, 172.3, 172.0, 171.0, 170.7, 136.4, 136.2, 130.8, 130.7, 130.7, 129.8, 129.7, 129.7, 128.4, 128.3, 72.5, 72.3, 69.9, 68.5, 58.6, 55.7, 55.5, 55.4, 39.0, 38.9, 38.6, 38.6, 37.8, 37.3, 32.0, 31.3, 31.1, 30.0, 26.2, 26.1, 25.5, 25.2, 23.9, 23.7, 23.7, 23.6, 21.7, 21.6, 21.4, 21.1, 17.5, 17.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 971.5353 [(M+Na)⁺, вычислено для C₅₂H₇₆N₄O₁₂Na₁ : 971.5357]

*Литература (J. Antibiot., 1992, 45, 692-697)

точка плавления: 104-106°C

[α]²² _D : -102°C (c 0.1, MeOH)

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ : 7.30 - 7.20 (PhH, 10H), 5.80 и 5.75 (C_αH-PhLac, 1Hx2), 5.54 и 5.16 (C_αH-Lac, 1Hx2), 5.43, 5.42, 5.22 и 4.78 (C_αH-Leu, 1Hx4), 3.22-3.15 (C_βH₂-PhLac, 2Hx2), 3.00, 2.90, 2.88 и 2.80 (N-Me-Leu, 3Hx4), 1.87-1.50 (C_βH₂-Leu, 2Hx4), 1.40 (C_γH-Leu, 1Hx4), 1.38 (C_βH₃-Lac, 3H), 1.02-0.75 (C_δH₃-Leu, 6Hx4), 0.88 (C_βH₃-Lac, 3H).

¹³C-ЯМР (100 МГц, CD₃OD) δ : 174.4, 173.4, 172.4, 172.4, 172.1, 172.1, 171.0, 170.8, 136.5, 136.2, 130.7, 130.7, 130.7, 130.7, 129.7, 129.7, 129.7, 129.7, 128.3, 128.2, 72.5, 72.3, 69.9, 68.4, 58.6, 55.7, 55.5, 55.4, 39.0, 38.9, 38.6, 38.6, 37.9, 37.4, 32.0, 31.3, 31.1, 29.9, 26.2, 26.1, 25.6, 25.2, 23.6, 23.6, 23.5, 23.5, 21.7, 21.6, 21.4, 21.0, 17.5, 17.2.

4. Получение PF1022A (способ 2; см. реакционную схему на Фиг. 5)

4-1. Методика синтеза

N -Fmoc -N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa

К перемешанному раствору соединения HO-TAGa (170 мг, 0.186 ммоль) в CH₂Cl₂(3.7 мл) добавляли 0.1 M раствор в толуоле вещества 2 (2.42 мл, 0.242 ммоль), 4-диметиламинопиридин (1.1 мг, 9.30 мкмоль), и N,N’-дициклогексилкарбодиимид (58 мг, 0.279 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере N₂. После перемешивания в течение 1 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения N -Fmoc -N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa (266 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления:44 - 45°C

[α]_D ²⁷:-6.1 (c 1.74, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.76 (сложный m, 2H), 7.54 (m, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.26-7.14 (сложный m, 4H), 7.08 (m, 2H) 6.44 (m, 2H), 5.20 (m, 1H), 5.04-4.94 (сложный m, 3H), 4.61-4.15 (сложный m, 3H), 3.92 (m, 6H), 3.10 (m, 2H), 2.72 (s, 3H), 1.76 (m, 6H), 1.60-1.25 (сложный m, 93H), 0.90-0.71 (сложный m, 15H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 177.2, 175.2, 169.5, 153.3, 138.4, 135.9, 130.0, 129.6, 129.3, 128.6, 128.4, 127.1, 107.5, 107.2, 73.5, 73.1, 69.2, 67.8, 61.6, 42.5, 37.4, 34.5, 32.0, 30.4, 29.8 (x2), 29.6, 29.5, 26.2, 24.8, 22.8, 22.6, 22.5, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1410.1063 [(M+H)⁺, вычислено для C₉₂H₁₄₇NO₉: 1410.1076]

N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa (6)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение N -Fmoc- N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa (457 мг, 0.324 ммоль) превращали в соединение 6 (378 мг, 99%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления:48 - 49°C

[α]_D ²⁶:+4.2 (c1.10, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.22 (m, 5H), 6.48 (s, 2H), 5.28 (dd, J = 4.0, 10.3 Гц, 1H), 5.08 (d, J = 12.0 Гц, 1H), 5.04 (d, J = 12.0 Гц, 1H), 3.93 (m, 6H), 3.24 (dd, J = 4.0 Гц, 14.3 Гц, 1H), 3.17 (t, J = 6.9 Гц, 1H), 3.07 (dd, J = 9.7, 14.3 Гц, 1H), 2.18 (s, 3H), 1.76 (m, 6H), 1.48-1.25 (сложный m, 93H), 0.90-0.76 (сложный m, 15H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1189.0458 [(M+H)⁺, вычислено для C₇₇H₁₃₈NO₇: 1189.0473]

N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLacO-TAGa (7)

К перемешанному раствору соединения 6 (358 мг, 0.301 ммоль) в CH₂Cl₂(6.0 мл) добавляли 0.1 M раствор в толуоле вещества 1 (3.31 мл, 0.331 ммоль), N.N-диизопропилэтиламин (0.15 мл, 0.903 ммоль) и PyBroP (211 мг, 0.452 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 13 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения 7 (468 мг, 97%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления:47 - 48°C

[α]_D ²⁶ : -13.9 (c 1.10, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.75 (m, 2H), 7.59 (m, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.30-7.09 (сложный m, 7H), 6.44 (m, 2H), 5.36-4.96 (сложный m, 6H), 4.71-4.24 (сложный m, 3H), 3.93 (t, J = 6.5 Гц, 6H), 3.14 (m, 2H), 2.90-2.81 (сложный s, 6H), 1.80-1.25 (сложный m, 105H), 0.96-0.76 (сложный m, 21H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 171.6, 171.2, 171.1, 170.9, 169.3, 157.0, 153.3, 144.3, 143.9, 141.4 (x2), 138.4, 135.9, 130.0, 129.9, 129.8, 129.7, 129.6, 129.5, 129.3, 128.7, 128.5, 128.4, 127.7, 127.6, 127.0, 125.3, 125.1, 125.0, 124.9, 120.0, 107.5, 107.2, 74.1, 74.0, 73.9, 73.8, 73.5, 71.3, 69.2, 67.9, 67.7, 57.4, 57.2, 56.7, 56.6 (x2), 54.5 (x2), 47.4 (x2), 47.3, 37.6, 37.3, 37.2, 37.1, 37.0, 32.0, 31.1, 30.7, 30.6 (x2), 30.5, 30.4, 30.3, 30.2, 29.8 (x2), 29.6, 29.5 (x2), 26.2, 24.9, 24.8, 24.7, 24.6, 24.4, 23.4, 23.2, 22.9, 22.8, 22.1, 21.4, 21.2, 16.8, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1609.2274 (M⁺, вычислено для C₁₀₂H₁₆₈N₂O₁₂: 1609.2284)

N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLacOH (8)

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение, 7 (244 мг, 0.152 ммоль) превращали в соединение 8 (106 мг, 97%) в виде масла желтого цвета, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLacO-TAGa (9)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 7 (204 мг, 0.127 ммоль) превращали в соединение 9 (176 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления:47 - 48°C

[α]_D ²⁶ : -2.1 (c 1.1, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.19 (m, 5H), 6.45 (s, 2H), 5.45 (q, J = 6.9 Гц, 1H), 5.31 (ddd, J = 4.6, 11.2, 19.6 Гц, 1H), 5.22 (dd, J = 5.2, 6.9 Гц, 1H), 5.03 (m, 2H), 3.94 (m, 6H), 3.33-2.95 (сложный m, 3H), 2.80 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 1.82-1.25 (сложный m, 105H), 0.96-0.75 (сложный m, 21H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 175.0, 171.1, 171.0, 169.2, 153.3, 130.0, 129.8, 129.7, 129.3, 128.7, 128.6, 128.5, 127.4, 127.1, 126.9, 107.5, 107.2, 73.8, 73.5, 71.3, 69.2, 67.9, 67.7, 67.4, 67.3, 61.2, 57.5, 54.6, 42.3, 42.2, 37.3, 37.2, 37.0, 34.6, 32.0, 31.1, 30.4, 29.8 (x2), 29.6, 29.5 (x2), 26.2, 25.0, 24.8, 23.4, 23.0, 22.8, 22.7, 22.4, 22.1, 21.3, 16.9, 16.8, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 1388.1676 [(M+H)⁺, вычислено для C₈₇H₁₅₅N₂O₁₀: 1388.1682]

N- Fmoc -N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa (10)

К перемешанному раствору соединения 9 (155 мг, 96.2 мкмоль) в CH₂Cl₂(1.9 мл) добавляли соединение 8 (103 мг, 0.144 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (73 мкл, 0.434 ммоль) и PyBroP (112 мг, 0.241 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 66 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения 10 (201 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления:47 - 48°C

[α]_D ²⁷:-27.2 (c 1.1, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.75 (m, 2H), 7.59 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.30-7.12 (сложный m, 12H), 6.44 (m, 2H), 5.43-4.96 (сложный m, 10H), 4.69-4.22 (сложный m, 3H), 3.93 (m, 6H), 3.24-2.69 (сложный m, 16H), 1.80-1.25 (сложный m, 114H), 0.95-0.75 (сложный m, 33H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 174.1, 171.5, 171.4, 171.3, 171.2, 171.1 (x2), 170.9, 170.8, 170.7, 170.6, 170.5, 170.4, 170.0, 169.2, 157.0, 156.5, 153.3, 144.3, 144.2, 144.0 (x2), 141.4 (x2), 138.6, 138.4, 136.1, 136.0, 135.9 (x2), 135.7, 135.6, 135.3, 130.0, 129.8, 129.7, 129.6, 129.5, 129.3, 128.8, 128.7, 128.6, 128.4, 127.7, 127.4, 127.1 (x2), 127.0. 125.3, 125.2, 125.1, 125.0, 120.0, 107.5, 107.2, 107.1, 73.9, 73.5, 72.5, 71.3, 69.2, 68.0, 67.7, 57.5, 56.6 (x2), 55.1, 55.0, 54.9, 54.7, 54.4, 47.4, 47.3, 40.9, 40.6, 38.7, 37.6, 37.3, 37.2, 37.1, 32.0, 31.9, 31.7, 31.5, 31.3, 31.2, 31.0, 30.7, 30.6, 30.4, 30.3, 29.8 (x2), 29.6, 29.5 (x2), 25.0, 24.9, 24.8, 24.7, 24.5, 24.4 (x2), 23.4, 23.3, 23.1, 23.0, 22.9, 22.8, 22.3, 22.1, 22.0, 21.3, 21.2, 16.8, 16.6, 16.5, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 2106.4910 [(M+Na)⁺, вычислено для C₁₂₈H₂₀₂N₄O₁₈Na: 2106.4912]

N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 10 (181 мг, 86.8 мкмоль) превращали в соответствующий амин (163 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления:47 - 48°C

[α]_D ²⁷:-18.7 (c 1.3, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.20 (m, 10H), 6.44 (s, 2H), 5.50-4.95 (сложный m, 9H), 3.93 (m, 6H), 3.31-2.72 (сложный m, 14H), 2.36 (m, 3H), 1.80-1.25 (сложный m, 114H), 0.99-0.81 (сложный m, 33H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 171.4, 171.2, 171.0, 170.9, 170.6, 170.4, 153.3, 138.3, 136.1, 136.0, 135.9, 135.8, 130.0, 129.8 (x2), 129.7, 129.6 (x3), 129.5, 129.4, 129.2, 129.2 (x2), 128.8, 128.7, 128.6, 128.4, 127.4, 127.3, 127.2 (x2), 127.1, 127.0, 107.5, 107.2, 107.1, 73.9, 73.5, 72.3, 72.2, 71.3, 69.2, 68.0 (x2), 67.7, 67.4, 61.3, 55.2, 55.0, 54.8, 54.5, 54.4, 42.4, 40.6, 38.7, 37.7, 37.2, 37.1, 34.7 (x2), 32.0, 31.7, 31.5, 31.0, 30.4, 29.8 (x2), 29.6, 29.5 (x2), 26.2, 25.0, 24.9 (x2), 24.7, 23.5, 23.4 (x2), 23.3, 23.2, 23.0, 22.8, 22.4, 22.1, 21.9, 21.3 (x2), 16.9, 16.8 (x3), 16.7, 16.6, 16.5, 14.2.

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1862.4462 [(M+H)⁺, вычислено для C₁₁₃H₁₉₃N₄O₁₆: 1862.4412]

N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac-OH

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-PhLac-O-TAGa (143 мг, 0.768 ммоль) превращали в соответствующую карбоновую кислоту (78 мг, 100%) в виде масла желтого цвета, которую применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

PF1022A

Неочищенную смесь из предшествующей реакции (78 мг, 0.0777 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (16 мл, 0.005 M). К реакционной смеси добавляли N,N-диизопропилэтиламин (66 мкл, 0.389 ммоль) и PyBOP (81 мг, 0.155 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 48 ч, реакционную смесь гасили посредством насыщенного водного NaHCO₃ (16 мл) при 0°C, и эту смесь экстрагировали с помощью CHCl₃ (20 мл × 2). Объединенные органические слои промывали с помощью 10% водного NaHSO₄ (60 мл) и солевого раствора (60 мл), высушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃: MeOH = 400 : 1 - 40 : 1) с получением PF1022A (48 мг, 65%) в виде бесцветного твердого вещества.

Все физические данные для синтетического PF1022A совпадают с данным для аутентичного PF1022A.

5. Получение эмодепсида (способ 1; см. реакционные схемы на Фиг. 6, ЯМР спектр на Фиг. 7 и ЖХ-УФ спектр на Фиг. 8)

5-1. Методика синтеза

N -Fmoc -N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (11)

К перемешанному раствору соединения 1 (259 мг, 0.233 ммоль) в CH₂Cl₂(4.7 мл) добавляли 0.2 M раствор в толуоле вещества 3 (0.122 мл, 0.244 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0.12 мл, 0.698 ммоль) и PyBroP (163 мг, 0.349 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания при 40 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения 11 (395 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.74 (m, 2H), 7.57 (m, 2H), 7.42-7.27 (сложный m, 4H), 7.05 (m, 2H), 6.70 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.48 (s, 2H), 5.40 (dd, J = 6.9, 8.4 Гц, 3/10H, ротамер), 5.35-5.27 (сложный m, 17/10H), 5.10-4.97 (сложный m, 4H), 4.72-4.12 (сложный m, 3H), 3.93 (m, 6H), 3.75 (m, 4H), 3.00-2.79 (сложный m, 12H), 1.80-1.60 (сложный m, 9H), 1.49-1.42 (сложный m, 9H), 1.27 (сложный m, 87H), 0.93-0.80 (сложный m, 21H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 1717.2701 [(M+Na)⁺, вычислено для C₁₀₆H₁₇₁N₃O₁₃Na: 1717.2710]

N -Fmoc -N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac-OH (12)

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение 11 (210 мг, 0.124 ммоль) превращали в соединение 12 (100 мг, ~0.124 ммоль) в виде масла коричневого цвета. Неочищенный продукт применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (13)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 11 (158 мг, 0.0934 ммоль) превращали в соединение 13 (138 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.15 (m, 2H), 6.83 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.49 (s, 2H), 5.47 (dd, J = 6.9, 8.0 Гц, 1H), 5.32 (dd, J = 4.9, 11.2 Гц, 1H), 5.09-5.00 (сложный m, 3H), 3.94 (m, 6H), 3.85 (m, 4H), 3.27 (t, J = 6.9 Гц, 1H), 3.13-2.79 (сложный m, 9H), 2.29 (s, 3H), 1.81-1.25 (сложный m, 105H), 1.01-0.78 (сложный m, 21H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 1473.2214 [(M+H)⁺, вычислено для C₉₁H₁₆₂N₃O₁₁ : 1473.2209]

N- Fmoc -N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa (14)

К перемешанному раствору соединения 13 (138 мг, 0.934 ммоль) в CH₂Cl₂(1.9 мл) добавляли 12 (100 мг, ~0.124 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (48 мкл, 0.280 ммоль) и PyBroP (65 мг, 0.140 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 18 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения 14 (211 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.75 (m, 2H), 7.58 (m, 2H), 7.42-7.28 (сложный m, 4H), 7.09 (m, 4H), 6.77 (m, 4H), 6.48 (s, 2H), 5.45-5.15 (сложный m, 6H), 5.06-4.97 (сложный m, 4H), 4.73-4.12 (сложный m, 3H), 3.95-3.73 (сложный m, 14H), 3.15-2.73 (сложный m, 24H), 1.80-1.25 (сложный m, 114H), 0.96-0.77 (сложный m, 33H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 2276.5962 [(M+Na)⁺, вычислено для C₁₃₆H₂₁₆N₆O₂₀Na: 2276.5967]

N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 14 (211 мг, 0.0934 ммоль) превращали в соответствующий амин (178 мг, 94%) в виде бесцветного порошка.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.15 (m, 4H), 6.82 (m, 4H), 6.49 (s, 2H), 5.14 (t, J = 7.45 Гц, 1H), 5.44-5.09 (сложный m, 5H), 5.07-5.00 (сложный m, 3H), 3.93 (m, 6H), 3.85 (m, 8H), 3.32 (m, 1H), 3.17-2.74 (сложный m, 21H), 2.33 (s, 3H), 1.81-1.64 (сложный m, 12H), 1.55-1.25 (сложный m, 102H), 1.03-0.77 (сложный m, 33H).

HR-MS (FAB, NBA матрикс+NaI) m/z: 2032.5488 [(M+H)⁺, вычислено для C₁₂₁H₂₀₇N₆O₁₈ : 2032.5467]

N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac-OH

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-LacO-TAGa (178 мг, 0.0876 ммоль) превращали в соответствующую карбоновую кислоту (~0.0876 ммоль) в виде неочищенного масла, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Эмодепсид (условие высокого разбавления с применением PyBOP)

К неочищенной карбоновой кислоте (~0.0876 ммоль) в CH₂Cl₂ (18 мл, 0.005 M) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (0.10 мл, 0.613 ммоль) и PyBOP (91 мг, 0.175 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 19 ч, реакционную смесь гасили посредством насыщенного водного NaHCO₃ (18 мл) при 0°C, и эту смесь экстрагировали с помощью CHCl₃ (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали с помощью 10% водного NaHSO₄ (60 мл) и солевого раствора (60 мл), высушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃: MeOH = 400 : 1 - 100 : 1) с получением эмодепсида (45 мг, 46% для 2 стадий) в виде твердого вещества светло-желтого цвета.

точка плавления:98-103°C

[α]_D ²⁴:-40.3 (c 0.67, CHCl₃)

IR (чистый) : 2954, 2862, 1743, 1659, 1520, 1458, 1412, 1265, 1234, 1188, 1119, 1072, 1026, 926, 810.

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.14-7.11 (сложный m, 4H), 6.83-6.79 (сложный m), 5.64-5.54 (сложный m), 5.52-5.43, 5.43-5.39, 5.33, 5.18, 5.06 и 4.46 (5 m, 6H), 3.85 (видимо t, 8H), 3.15-3.04 (сложный m, 8H), 3.04-2.92 (сложный m, 4H), 3.00, 2.82, 2.79, 2.72 и 2.71 (5 s, 12H), 1.82-1.24 (сложный m, 18H), 1.03-0.79 (сложный m, 30H).

¹³C-ЯМР (125 МГц, CDCl₃) δ : 171.6, 171.2, 171.0, 170.9, 170.3, 170.2, 170.1, 169.8, 169.7, 150.2, 130.4, 130.2, 115.7, 115.6, 71.2, 70.8, 68.5, 66.8, 66.7, 57.1, 54.0, 53.9, 49.3, 49.2, 38.0, 37.5, 37.1, 36.9, 36.8, 36.7, 36.6, 36.1, 31.1, 30.6, 30.4, 29.7, 29.6, 29.3, 25.0, 24.8, 24.6, 24.5, 24.5, 24.1, 23.6, 23.5, 23.4, 23.3, 23.3, 23.1, 22.6, 21.6, 21.5, 21.1, 21.1, 21.0, 20.8, 17.1, 15.7.

HRMS (ESI) m/z: 1141.6404 [(M+Na)⁺, вычислено для C₆₀H₉₀N₆O₁₄ Na: 1141.6413]

*Литература (Eur. J. Org. Chem., 2012, 1546-1553)

¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ : 7.17-7.09 (m, 4 H, Ar-H), 6.86-6.77 (m, 4 H, Ar-H), 5.67-5.54 (m, 2 H, CαH-Lac), 5.53-5.38, 5.34, 5.19, 5.08 и 4.47 (5 m, 6 H, CαH-Leu, CαH-morphPhLac), 3.88-3.81 (псевдо-t, 8 H, OCH₂морфолин), 3.15-3.08 (m, 8 H, N-CH₂-morpholine), 3.07-2.85 (m, 4 H, CβH₂-morphPhLac), 3.00, 2.83, 2.80, 2.74 и 2.73 (5 s, 12 H, NCH₃), 1.83-1.20 (m, 18 H, CβH₂-Leu, CγH-Leu, CH₃-Lac), 1.05-0.77 (m, 30 H, CδH₃-Leu, CβH₃-Lac).

¹³C-ЯМР (100 МГц, CDCl₃) δ : 171.7, 171.2, 171.0, 170.6, 170.4, 170.2, 169.8, 141.7, 130.6, 130.4, 116.9, 116.1, 71.3, 70.8, 68.6, 66.9, 66.6, 66.5, 57.1, 54.0, 49.9, 38.1, 37.5, 37.2, 36.7, 36.2, 31.2, 30.5, 29.4, 24.9, 24.7, 24.2, 23.6, 23.5, 23.5, 23.4, 21.2, 21.1, 20.9, 17.1, 15.8.

Эмодепсид (условие медленного добавления с применением T3P)

Отщепление TAGa: К перемешиваемому раствору линейного соединения с TAG (179.0 мг, 0.088 ммоль) в DCM (1.8 мл) добавляли TFA (1.8 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 6 ч при комнатной температуре, раствор концентрировали в вакууме. Полученную смесь растворяли в толуоле (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении 3 раза для удаления избытка TFA. Неочищенный остаток растворяли в CH₂Cl₂ (1.0 мл), затем перекристаллизовали для отщепления TAGa веществ посредством добавления MeOH (8.0 мл) при комнатной температуре. Осадки фильтровали через слой Celite^® и промывали с помощью MeOH (20 мл). Объединенные фильтраты концентрировали в вакууме. К полученному продукту добавляли 4 M HCl/диоксан (0.05 M для продукта), затем разбавляли толуолом (10 мл) и концентрировали с получением соединения свободного от соли TFA продукта. Для удаления избытка HCl из неочищенного продукта, продукт снова разбавляли в толуоле (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении 2 раза.

Циклизация: К перемешиваемому раствору T3P^® (50% в EtOAc, 110 мкл, 0.187 ммоль) в DIPEA (110 мкл, 0.187 ммоль) добавляли по каплям неочищенное линейное соединение (0.088 ммоль) в DCM (1.8 мл, 0.05 M включая промывку) за 2.5 ч при комнатной температуре. После перемешивания в течение 20 ч при комнатной температуре, реакционную смесь гасили с помощью насыщенного водного NaHCO₃(3.0 мл), экстрагировали с помощью CHCl₃ (2.0 мл × 3). Объединенные органические слои высушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный остаток очистили посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃/MeOH = 100/1) с получением эмодепсида (86.4 мг, 88%) в аморфном виде. Аналитические данные были идентичны данным для аутентичного соединения.

6. Получение эмодепсида (способ 2; см. реакционную схему на Фиг. 9)

N -Fmoc -N -MeLeu-D-morphPhLac-O-TAGa

К перемешанному раствору соединения HO-TAGa (381 мг, 0.417 ммоль) в CH₂Cl₂(8.4 мл) добавляли 0.2 M раствор в толуоле вещества 3 (2.71 мл, 0.542 ммоль), 4-диметиламинопиридин (2.5 мг, 20.8 мкмоль) и N,N’-дициклогексилкарбодиимид (129 мг, 0.626 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере N₂. После перемешивания в течение 1 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения N -Fmoc -N -MeLeu-D-morphPhLac- O-TAGa (628 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления : 46-47°C

[α]_D ²⁷ = -3.1 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.78 (d, J = 7.5 Гц, 1H), 7.74 (d, J = 7.5 Гц, 1H), 7.57 (m, 2H), 7.39 (m, 2H), 7.27 (m, 2H), 6.98 (d, J = 8.6 Гц, 1H), 6.96 (d, J = 8.6 Гц, 1H), 6.67 (m, 2H), 6.49 (2 s, ротамер 4:3, 2H), 5.17 (2 dd, ротамер, J = 4.0 Гц, 8.0 Гц, 1H), 5.08-4.98 (сложный m, 3H), 4.67-4.13 (сложный m, 3H), 3.93 (m, 6H), 3.73 (m, 4H), 3.08 (dd, J = 4.0 Гц, 14.6 Гц, 1H), 3,07-2.95 (сложный m, 5H), 2.80 (ротамер 4:3, 3H), 1.76 (m, 6H), 1.64-1.53 (сложный m, 3H), 1.45 (m, 6H), 1.28 (сложный m, 84H), 0.93-0.86 (сложный m, 14H), 0.76 (d, J = 6.3 Гц, 1H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 1495.1583 (M⁺, вычислено для C₉₆H₁₅₄N₂O₁₀ : 1495.1604)

N -MeLeu-D-morphPhLac-O-TAGa (15)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение N -Fmoc -N -MeLeu-D-morphPhLac-O-TAGa (628 мг, 0.417 ммоль) превращали в соединение 15 (530 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления : 49-50°C

[α]_D ²⁷ = +5.7 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.08 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.80 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.51 (s, 2H), 5.24 (dd, J = 4.0, 9.7 Гц, 1H), 5.07 (q, J = 12.0 Гц, 2H), 3.94 (m, 6H), 3.85 (m, 4H), 3.18 (m, 2H), 3.10 (m, 4H), 3.00 (d, J = 10.3, 14.3 Гц, 1H), 2.21 (s, 3H), 1.76 (m, 6H), 1.47 (m, 6H), 1.34-1.25 (сложный m, 87H), 0.88 (t, J = 6.9 Гц, 9H), 0.80 (d, J = 6.9 Гц, 3H), 0.79 (d, J = 6.9 Гц, 3H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z : 1274.0986 [(M+H)⁺, вычислено для C₈₁H₁₄₅N₂O₈ : 1274. 1001]

N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac-O-TAGa (16)

К перемешанному раствору соединения 15 (530 мг, 0.417 ммоль) в CH₂Cl₂(8.4 мл) добавляли 0.2 M раствор в толуоле вещества 1 (0.22 мл, 0.44 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (0.212 мл, 1.25 ммоль) и PyBroP (291 мг, 0.62 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 16 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa, с получением соединения 16 (670 мг, 95%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления : 48-49°C

[α]_D ²⁷ = -12.4 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.76 (m, 2H), 7.61 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.30 (m, 2H), 7.02 (m, 2H), 6.74 (m, 2H), 6.49 (2 s, ротамер, 2H), 5.38-5.22 (сложный m, 2H), 5.15-4.98 (сложный m, 4H), 4.47 (сложный m, 3H), 3.94 (m, 6H), 3.81 (m, 4H), 3.12-2.78 (сложный m, 12H), 1.82-1.56 (сложный m, 9H), 1.53-1.40 (сложный m, 8H), 1.34-1.26 (сложный m, 88H), 0.98-0.75 (сложный m, 21H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 1694.2828 (M⁺, вычислено для C₁₀₆H₁₇₁N₃O₁₃: 1694.2812)

N -Fmoc- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac-OH (17)

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение 16 (376 мг, 0.222 ммоль) превращали в соединение 17. В случае этого субстрата, для реакции требовалось больше времени, чем в случае общего условия отщепления TAGa (около 1 ч). Реакцию соединения 16 в 50% TFA/CH₂Cl₂ при комнатной температуре необходимо перемешивать в течение 8 ч, чтобы израсходовать все исходное вещество, и получить продукт 17 (178 мг, 0.222 ммоль) в виде неочищенного масла, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac-O-TAGa (18)

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 16 (290 мг, 0.171 ммоль) превращали в соединение 18 (251 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления : 43-45°C

[α]_D ²⁵ = -2.8 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.07 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.79 (d, J = 8.6 Гц, 2H), 6.49 (s, 2H), 5.46 (q, J = 6.9 Гц, 1H), 5.33 (dd, J = 5.2, 10.9 Гц, 1H), 5.17 (dd, J = 5.2, 7.5 Гц, 1H), 5.06 (m, 2H), 3.95 (m, 6H), 3.84 (m, 4H), 3.33 (t, J = 7.5 Гц, 1H), 3.11-3.06 (сложный m, 6H), 2.82 (2 s, ротамер 4:1, 3H), 2.40 (s, ротамер, 3H), 1.82-1.59 (сложный m, 10H), 1.52-1.43 (сложный m, 8H), 1.34-1.25 (сложный m, 87H), 0.97-0.86 (сложный m, 21H).

HRMS (FAB, NBA матрикс + NaI) m/z: 1473.2222 [(M+H)⁺, вычислено для C₉₁H₁₆₂N₃O₁₁ : 1473.2209]

N -Fmoc- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac-O-TAGa (19)

К перемешанному раствору соединения 18 (251 мг, 0.171 ммоль) в CH₂Cl₂(3.4 мл) добавляли 17 (178 мг, 0.222 ммоль), N,N-диизопропилэтиламин (87 мкл, 0.513 ммоль) и PyBroP (120 мг, 0.257 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 46 ч, реакционную смесь кристаллизовали посредством методики, описанной в синтезе N -Fmoc -N -MeLeu-D-Lac-O-TAGa с получением соединения 19 (350 мг, 91%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления : 50-52°C

[α]_D ²⁵ = -25.5 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.75 (m, 2H), 7.62 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.30 (m, 2H), 7.06 (m, 4H), 6.77 (m, 4H), 6.49 (2 s, ротамер, 2H), 5.42-4.98 (сложный m, 10H), 4.73-4.20 (сложный m, 3H), 3.94 (m, 6H), 3.84 (m, 8H), 3.17-2.66 (сложный m, 24H), 1.80-1.64 (сложный m, 14H), 1.46-1.25 (сложный m, 100H), 1.00-0.77 (сложный m, 33H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 2276.5940 [(M+Na)⁺, вычислено для C₁₃₆H₂₁₆N₆O₂₀Na: 2276.5967]

N- MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D- morphPhLac-O-TAGa

После методики, описанной для общей методики удаления защитной группы Fmoc, соединение 19 (114 мг, 0.0505 ммоль) превращали в соответствующий амин (103 мг, 100%) в виде бесцветного порошка.

точка плавления : 45-47°C

[α]_D ²⁵ = -19.6 (c 1.0, CHCl₃)

¹H-ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ : 7.76 (m, 4H), 6.79 (m, 4H), 6.48 (s, 2H), 5.50-4.96 (сложный m, 9H), 3.94 (m, 6H), 3.83 (m, 8H), 3.30 (m, 1H), 3.16-2.74 (сложный m, 21H), 2.38 (m, 3H), 1.80-1.55 (сложный m, 9H), 1.47-1.24 (сложный m, 105H), 1.00-0.81 (сложный m, 33H).

HRMS (FAB, NBA матрикс) m/z: 2032.5468 [(M+H)⁺, вычислено для C₁₂₁H₂₀₇N₆O₁₈ : 2032.5467]

N- MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D- morphPhLac-OH

После методики, описанной для общей методики отщепления TAGa, соединение, N- MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morphPhLac- N -MeLeu-D-Lac- N -MeLeu-D-morph- PhLac-O-TAGa (102 мг, 0.0502 ммоль) превращали в соответствующую карбоновую кислоту. В случае этого субстрата, для реакции требовалось больше времени, чем в случае общего условия отщепления TAGa (около 1 ч). Реакцию в 50% TFA/CH₂Cl₂ при комнатной температуре было необходимо перемешивать в течение 5 ч, чтобы израсходовать все исходное вещество, и получить желаемый продукт (~0.0502 ммоль) в виде неочищенного масла, которое применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Эмодепсид

К неочищенной карбоновой кислоте (~0.0502 ммоль) в CH₂Cl₂ (10 мл, 0.005 M) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (60 мкл, 0.351 ммоль) и PyBOP (52 мг, 0.175 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 44 ч, реакционную смесь гасили посредством насыщенного водного NaHCO₃ (10 мл) при 0°C, и эту смесь экстрагировали с помощью CHCl₃ (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали с помощью 10% водного NaHSO₄ (60 мл) и солевого раствора (60 мл), высушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (CHCl₃: MeOH = 400 : 1 - 100 : 1) с получением эмодепсида (25 мг, 44% для 2 стадий) в виде твердого вещества светло-коричневого цвета.

Все физические данные для синтетического эмодепсида совпадают с данным для аутентичного соединения.

Сравнительный пример 1

TAG, аналогичную TAGa, но с C₁₂ вместо C₁₈ алкильных цепей (C12-TAG), получали и связывали с N-Fmoc-N-MeLeu-D-Lac-OH (вещество 1) согласно следующей схеме реакции:

Очистка с помощью хроматографии на силикагеле была необходима после каждой стадии реакции. Соединения 2, C12-TAG и соединение 3 не кристаллизуются в метаноле. Это является отличием, например, от методики синтеза N-Fmoc-N-MeLeu-D-Lac-O-TAGa (часть 2.1 выше). C12-TAG в этом сравнительном примере не подходит для предполагаемого синтеза с помощью группы TAG, и дальнейшая функционализация соединения 3 в дальнейшем не исследовалась.

Сравнительный пример 2

Коммерчески доступный C1-TAG связывали с N-Fmoc-N-MeLeu-D-Lac-OH (вещество 1) согласно следующей схеме реакции:

Очищение посредством колоночной хроматографии было необходимо после стадии реакции. Соединения C1-TAG и 6 не кристаллизуются в метаноле. C1-TAG в этом сравнительном примере не подходит для предполагаемого синтеза с помощью группы TAG, и дальнейшая функционализация соединения 6 дополнительно не исследовалась.

Claims

1. Способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) в промышленном масштабе из депсипептидов общей формулы (II):

где B представляет собой защитную группу аминной группы и A представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты,

причем способ включает стадии:

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты с помощью связывающего агента, при этом связывающий агент добавляют медленно, предпочтительно по каплям, в реакционный раствор, получая таким образом циклический депсипептид (I),

причем R2 и R8, каждый, независимо друг от друга представляют собой водород, неразветвленный или разветвленный C1-C8-алкил, в частности метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, втор-пентил, гексил, изогексил, втор-гексил, гептил, изогептил, втор-гептил, трет-гептил, октил, изооктил, втор-октил, неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C8 алкил, в частности фторированный втор-бутил, гидрокси-C1-C6-алкил, в частности гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, C1-C4-алканоилокси-C1-C6-алкил, в частности ацетоксиметил, 1-ацетоксиэтил, C1-C4-алкокси-C1-C6-алкил, в частности метоксиметил, 1-метоксиэтил, арил-C1-C4-алкилокси-C1-C6-алкил, в частности бензилоксиметил, 1-бензилоксиэтил, меркапто-C1-C6-алкил, в частности меркаптометил, C1-C4-алкилтио-C1-C6-алкил, в частности метилтиоэтил, C1-C4-алкилсульфинил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфинилэтил, C1-C4-алкилсульфонил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфонилэтил, карбокси-C1-C6-алкил, в частности карбоксиметил, карбоксиэтил, C1-C4-алкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности метоксикарбонилметил, этоксикарбонилэтил, C1-C4-арилалкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности бензилоксикарбонилметил, карбамоил-C1-C6-алкил, в частности карбамоилметил, карбамоилэтил, амино-C1-C6-алкил, в частности аминопропил, аминобутил, C1-C4-алкиламино-C1-C6-алкил, в частности метиламинопропил, метиламинобутил, C1-C4-диалкиламино-C1-C6-алкил, в частности диметиламинопропил, диметиламинобутил, гуанидино-C1-C6-алкил, в частности гуанидинопропил, C1-C4-алкоксикарбониламино-C1-C6-алкил, в частности трет-бутоксикарбониламинопропил, трет-бутоксикарбониламинобутил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)амино-C1-C6-алкил, в частности 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминопропил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминобутил, C2-C8-алкенил, в частности винил, аллил, бутенил, C3-C7-циклоалкил, в частности циклопентил, циклогексил, циклогептил, C3-C7-циклоалкил-C1-C4-алкил, в частности циклопентилметил, циклогексилметил, циклогептилметил, бензил, замещенный бензил, фенил, фенил-C1-C4-алкил, в частности фенилметил, который может быть необязательно замещен радикалами из группы, состоящей из галогена, в частности фтора, хлора, брома или иода,

где x представляет собой 1, y представляет собой 1, R1, R4, R7 и R10 представляют собой метил, R6 и R12 представляют собой метил, R5 и R11 представляют собой, независимо друг от друга, неразветвленный или разветвленный C1-C4-алкил или неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C4-алкил и R3 и R9 представляют собой, независимо друг от друга, бензил или п-морфолино-замещенный бензил и

где связывающий агент представляет собой T3P® (ангидрид пропилфосфоновой кислоты, 2,4,6-трипропил-1,3,5,2,4,6-триоксатрифосфоринан-2,4,6-триоксид, PPACA).

2. Способ по п. 1, причем циклические депсипептиды общей формулы (I) синтезируют из депсипептидов общей формулы (IIa):

где Y представляет собой защитную группу аминной группы и X представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты,

причем способ включает стадии:

- удаления защитной группы группы карбоновой кислоты, которая защищена группой X, посредством гидрогенолиза, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты, получая таким образом циклический депсипептид (I).

3. Способ по п. 1 или 2, причем X представляет собой замещенную или незамещенную -CH₂-арильную группу.

4. Способ по любому из пп. 1-3, причем X выбран из группы бензила (Bn), 4-метокси-бензила (PMB), 3,4-диметоксибензила (DPMB), 4-фенил-бензила (PPB), 2-нафтилметила (Nap), бензилоксиметилацеталя (BOM).

5. Способ по любому из пп. 1-4, причем Y представляет собой трет-бутилоксикарбонил (BOC).

6. Способ по любому из пп. 1-5, где депсипептид общей формулы (IIa) получают из предшественников общих формул (IV) и (III):

посредством:

- в предшественнике (III), удаления защитной группы группы карбоновой кислоты, которая защищена группой PG3, в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты, получая таким образом депсипептид (II);

где R1-R12, X, Y, x и y имеют значения, как определено в любом из пп. 1-3, PG2 представляет собой защитную группу аминной группы и PG3 представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где предшественник общей формулы (IV) получают из предшественников общих формул (VI) и (V):

посредством:

где R7-R12, X и x имеют значения, как определено выше, PG2 имеет значение, как определено выше, и PG4 представляет собой защитную группу аминной группы, причем способы удаления защитной группы и конденсации могут быть такими же, как указано в отношении реакции соединений (II)-(I) выше.

8. Способ по любому из пп. 1-7, где предшественник общей формулы (III) получают из предшественников общих формул (VIII) и (VII):

посредством:

где R1-R6 и y имеют значения, как определено в любом из пп. 1-3, PG3 имеет значение, как определено в п. 3, PG1 и PG5 представляют собой защитные группы аминной группы.

9. Способ по любому из пп. 1-8, где предшественник общей формулы (VI) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (IX) с X-LG:

где R10-R12 и X имеют значения, как определено в п. 1 или 2, PG4 имеет значение, как определено в п. 7, и LG представляет собой уходящую группу.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где предшественник общей формулы (VII) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (X) с PG3-OH:

где R4-R6 и y имеют значения, как определено в п. 1, PG3 имеет значение, как определено в п. 6, и PG5 имеет значение, как определено в п. 8.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где PG3 представляет собой X.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где предшественники (III) и (IV) являются идентичными.

13. Способ по любому из пп. 1-12, где R3 и R9 являются идентичными, R2 и R8 являются идентичными, R5 и R11 являются идентичными.

14. Способ по п. 1, включающий стадию синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) из депсипептидов общей формулы (IIb):

где PG1 представляет собой защитную группу аминной группы и TAG представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты,

причем способ включает стадии:

- удаления защитной группы группы карбоновой кислоты, которая защищена группой TAG, в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

- конденсации незащищенной аминной группы и незащищенной группы карбоновой кислоты, получая таким образом циклический депсипептид (I);

отличающийся тем, что группа TAG представляет собой:

или ,

при этом m представляет собой от ≥15 до ≤25, p представляет собой от ≥8 до ≤18 и q представляет собой от ≥15 до ≤25.

15. Способ по п. 14, где PG1 представляет собой 9-флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), трет-бутилкарбамат (Boc), бензилкарбамат (Z), ацетамид, трифторацетамид, фталимид, бензил (Bn), трифенилметил (Tr), бензилиден или п-толуолсульфонамид (Ts).

16. Способ по п. 14 или 15, где депсипептид общей формулы (IIb) получают из предшественников общих формул (IVb) и (IIIb):

посредством:

- в предшественнике (IIIb), удаления защитной группы группы карбоновой кислоты, которая защищена группой PG3, в присутствии кислоты, получая таким образом незащищенную группу карбоновой кислоты;

где R1-R12, x и y имеют значения, как определено в п. 1, PG1 имеет значение, как определено в п. 8, TAG имеет значение, как определено в п. 14, и PG2 и PG3 имеют значение, как определено в п. 6.

17. Способ по любому из пп. 14-16, где предшественник общей формулы (IVb) получают из предшественников общих формул (VIb) и (Vb):

посредством:

где R7-R12 и x имеют значения, как определено в п. 1, TAG имеет значение, как определено в п. 14, PG2 имеет значение, как определено в п. 6, и PG4 имеет значение, как определено в п. 7.

18. Способ по любому из пп. 14-17, где предшественник общей формулы (IIIb) получают из предшественников общих формул (VIIIb) и (VIIb):

посредством:

где R1-R6 и y имеют значения, как определено в п. 1, PG1 и PG5 имеют значение, как определено в п. 8, и PG3 имеет значение, как определено в п. 6.

19. Способ по любому из пп. 14-18, где предшественник общей формулы (VIb) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (IXb) с TAG-OH:

где R10-R12 имеют значения, как определено в п. 1, TAG имеет значение, как определено в п. 14, и PG4 имеет значение, как определено в п. 7.

20. Способ по любому из пп. 14-19, где предшественник общей формулы (VIIb) получают в результате эстерификации предшественника общей формулы (Xb) с PG3-OH:

21. Способ по любому из пп. 14-20, где PG3 представляет собой TAG, как определено в п. 14.

22. Способ по любому из пп. 14-21, где по меньшей мере одна стадия реакции из стадий реакции, приводящих к получению TAG-несущей молекулы, сопровождается осаждением неочищенного продукта реакции в метаноле, таким образом очищая неочищенный продукт реакции.

23. Способ по любому из пп. 14-21, где по меньшей мере одна стадия из стадий реакции, в которых TAG-защищенные группы карбоновой кислоты подвергают удалению защитной группы, сопровождается осаждением отщепленного TAG-OH в метаноле и удалением осадка посредством фильтрации, таким образом очищая неочищенный продукт реакции.

24. Способ по любому из пп. 1-23, где депсипептид (II) выбран из одной из общих формул (II-1)-(II-6b):

,

где B представляет собой защитную группу аминной группы, A представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты, Y представляет собой защитную группу аминной группы, удаляемую в присутствии кислоты, X представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты, удаляемую посредством гидрогенолиза, PG1 представляет собой защитную группу аминной группы и TAG имеет значение, как определено в п. 14.

25. Способ синтеза циклических депсипептидов общей формулы (I) в промышленном масштабе из депсипептидов общей формулы (IIc):

включающий стадии

обеспечения смеси соединения (IIc) и основания в растворителе, имеющем значение E_T(30) от ≥30 до ≤43,

медленно, предпочтительно по каплям, добавления раствора связывающего агента в растворителе с образованием циклического депсипептида (I),

причем R2 и R8, каждый независимо друг от друга, представляет собой водород, неразветвленный или разветвленный C1-C8-алкил, в частности метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, втор-пентил, гексил, изогексил, втор-гексил, гептил, изогептил, втор-гептил, трет-гептил, октил, изооктил, втор-октил, неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C8 алкил, в частности фторированный втор-бутил, гидрокси-C1-C6-алкил, в частности гидроксиметил, 1-гидроксиэтил, C1-C4-алканоилокси-C1-C6-алкил, в частности ацетоксиметил, 1-ацетоксиэтил, C1-C4-алкокси-C1-C6-алкил, в частности метоксиметил, 1-метоксиэтил, арил-C1-C4-алкилокси-C1-C6-алкил, в частности бензилоксиметил, 1-бензилоксиэтил, меркапто-C1-C6-алкил, в частности меркаптометил, C1-C4-алкилтио-C1-C6-алкил, в частности метилтиоэтил, C1-C4-алкилсульфинил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфинилэтил, C1-C4-алкилсульфонил-C1-C6-алкил, в частности метилсульфонилэтил, карбокси-C1-C6-алкил, в частности карбоксиметил, карбоксиэтил, C1-C4-алкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности метоксикарбонилметил, этоксикарбонилэтил, C1-C4-арилалкоксикарбонил-C1-C6-алкил, в частности бензилоксикарбонилметил, карбамоил-C1-C6-алкил, в частности карбамоилметил, карбамоилэтил, амино-C1-C6-алкил, в частности аминопропил, аминобутил, C1-C4-алкиламино-C1-C6-алкил, в частности метиламинопропил, метиламинобутил, C1-C4-диалкиламино-C1-C6-алкил, в частности диметиламинопропил, диметиламинобутил, гуанидино-C1-C6-алкил, в частности гуанидинопропил, C1-C4-алкоксикарбониламино-C1-C6-алкил, в частности трет-бутоксикарбониламинопропил, трет-бутоксикарбониламинобутил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)амино-C1-C6-алкил, в частности 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминопропил, 9-флуоренилметоксикарбонил(Fmoc)аминобутил, C2-C8-алкенил, в частности винил, аллил, бутенил, C3-C7-циклоалкил, в частности циклопентил, циклогексил, циклогептил, C3-C7-циклоалкил-C1-C4-алкил, в частности циклопентилметил, циклогексилметил, циклогептилметил, бензил, замещенный бензил, фенил, фенил-C1-C4-алкил, в частности фенилметил, который может быть необязательно замещен радикалами из группы, состоящей из галогена, в частности фтора, хлора, брома или иода,

где x представляет собой 1, y представляет собой 1, R1, R4, R7 и R10 представляют собой метил, R6 и R12 представляют собой метил, R5 и R11 представляют собой, независимо друг от друга, неразветвленный или разветвленный C1-C4-алкил или неразветвленный или разветвленный галогенированный C1-C4-алкил и R3 и R9 представляют собой, независимо друг от друга, бензил или замещенный бензил и

26. Способ по п. 25, причем значение E_T(30) растворителя составляет от ≥34 до ≤39.

27. Способ по п. 25 или 26, причем добавление раствора связывающего агента проводят при скорости ≤2 (мол)% в минуту.

28. Способ по любому из пп. 25-27, причем соотношение основания и соединения (IIb) перед реакцией (в моль:моль) составляет от ≥2:1 до ≤10:1.

29. Способ по любому из пп. 25-28, причем соотношение связывающего агента и соединения (IIb) перед реакцией (в моль:моль) составляет от ≥1:1 до ≤5:1.

30. Способ по любому из пп. 25-29, причем в ходе добавления связывающего агента поддерживают температуру ≤25°C.

31. Линейный депсипептид, выбранный из одной из общих формул (II-1)-(II-6), или его фармацевтически или ветеринарно приемлемая соль:

где B представляет собой защитную группу аминной группы, A представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты, Y представляет собой защитную группу аминной группы, удаляемую в присутствии кислоты, и X представляет собой защитную группу группы карбоновой кислоты, удаляемую посредством гидрогенолиза, PG1 представляет собой защитную группу аминной группы и TAG имеет значение, как определено в п. 14.