RU2815371C2 - Porous resin used for solid phase synthesis and method of its preparation - Google Patents
Porous resin used for solid phase synthesis and method of its preparation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2815371C2 RU2815371C2 RU2023103704A RU2023103704A RU2815371C2 RU 2815371 C2 RU2815371 C2 RU 2815371C2 RU 2023103704 A RU2023103704 A RU 2023103704A RU 2023103704 A RU2023103704 A RU 2023103704A RU 2815371 C2 RU2815371 C2 RU 2815371C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- porous resin
- monomers
- resin
- total mass
- phase
- Prior art date
Links
- 229920005989 resin Polymers 0.000 title claims abstract description 128
- 239000011347 resin Substances 0.000 title claims abstract description 128
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 148
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims abstract description 76
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 69
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 48
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims abstract description 45
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 35
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 31
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 27
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims abstract description 25
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 239000003999 initiator Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims abstract description 11
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 55
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 37
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical group C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 28
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 27
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000004604 Blowing Agent Substances 0.000 claims description 22
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 21
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 17
- KYPOHTVBFVELTG-OWOJBTEDSA-N (e)-but-2-enedinitrile Chemical group N#C\C=C\C#N KYPOHTVBFVELTG-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 14
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 14
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 14
- 239000004342 Benzoyl peroxide Substances 0.000 claims description 13
- OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N Benzoylperoxide Chemical group C=1C=CC=CC=1C(=O)OOC(=O)C1=CC=CC=C1 OMPJBNCRMGITSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 235000019400 benzoyl peroxide Nutrition 0.000 claims description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 13
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 claims description 11
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 claims description 11
- BWDBEAQIHAEVLV-UHFFFAOYSA-N 6-methylheptan-1-ol Chemical compound CC(C)CCCCCO BWDBEAQIHAEVLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N dibutyl phthalate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=CC=C1C(=O)OCCCC DOIRQSBPFJWKBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 9
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 8
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 claims description 7
- JAMNSIXSLVPNLC-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl) acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CC=C(C=C)C=C1 JAMNSIXSLVPNLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- ZRZHXNCATOYMJH-UHFFFAOYSA-N 1-(chloromethyl)-4-ethenylbenzene Chemical compound ClCC1=CC=C(C=C)C=C1 ZRZHXNCATOYMJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WERKSKAQRVDLDW-ANOHMWSOSA-N [(2s,3r,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO WERKSKAQRVDLDW-ANOHMWSOSA-N 0.000 claims description 7
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 7
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 7
- GTJOHISYCKPIMT-UHFFFAOYSA-N 2-methylundecane Chemical compound CCCCCCCCCC(C)C GTJOHISYCKPIMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FUGYGGDSWSUORM-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxystyrene Chemical group OC1=CC=C(C=C)C=C1 FUGYGGDSWSUORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SGVYKUFIHHTIFL-UHFFFAOYSA-N Isobutylhexyl Natural products CCCCCCCC(C)C SGVYKUFIHHTIFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- VKPSKYDESGTTFR-UHFFFAOYSA-N isododecane Natural products CC(C)(C)CC(C)CC(C)(C)C VKPSKYDESGTTFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 5
- IJCWFDPJFXGQBN-RYNSOKOISA-N [(2R)-2-[(2R,3R,4S)-4-hydroxy-3-octadecanoyloxyoxolan-2-yl]-2-octadecanoyloxyethyl] octadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC IJCWFDPJFXGQBN-RYNSOKOISA-N 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 5
- 239000001589 sorbitan tristearate Substances 0.000 claims description 5
- 235000011078 sorbitan tristearate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229960004129 sorbitan tristearate Drugs 0.000 claims description 5
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 5
- UCDGLMPOKKXSDM-UHFFFAOYSA-N 1-(4-bromobutyl)-4-ethenylbenzene Chemical compound BrCCCCC1=CC=C(C=C)C=C1 UCDGLMPOKKXSDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 1-Octanol Chemical compound CCCCCCCCO KBPLFHHGFOOTCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SSVCJXZKDWCWOG-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethenyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OC=CC1=CC=CC=C1 SSVCJXZKDWCWOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N Ethylbenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1 YNQLUTRBYVCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 claims description 4
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims description 4
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940023564 hydroxylated lanolin Drugs 0.000 claims description 4
- NUMHUJZXKZKUBN-UHFFFAOYSA-N methyl 4-ethenylbenzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(C=C)C=C1 NUMHUJZXKZKUBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 4
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 4
- WAVDSLLYAQBITE-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl)methanamine Chemical compound NCC1=CC=C(C=C)C=C1 WAVDSLLYAQBITE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- LBSXSAXOLABXMF-UHFFFAOYSA-N 4-Vinylaniline Chemical compound NC1=CC=C(C=C)C=C1 LBSXSAXOLABXMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 3
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UPKOVKMNWQZTFB-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-(4-ethenylphenyl)acetate Chemical class CCOC(=O)CC1=CC=C(C=C)C=C1 UPKOVKMNWQZTFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 3
- FYRHIOVKTDQVFC-UHFFFAOYSA-M potassium phthalimide Chemical compound [K+].C1=CC=C2C(=O)[N-]C(=O)C2=C1 FYRHIOVKTDQVFC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M sodium polyacrylate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C=C NNMHYFLPFNGQFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- AVTLBBWTUPQRAY-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanobutan-2-yldiazenyl)-2-methylbutanenitrile Chemical compound CCC(C)(C#N)N=NC(C)(CC)C#N AVTLBBWTUPQRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WYGWHHGCAGTUCH-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-cyano-4-methylpentan-2-yl)diazenyl]-2,4-dimethylpentanenitrile Chemical compound CC(C)CC(C)(C#N)N=NC(C)(C#N)CC(C)C WYGWHHGCAGTUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YIVJZNGAASQVEM-UHFFFAOYSA-N Lauroyl peroxide Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OOC(=O)CCCCCCCCCCC YIVJZNGAASQVEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001451 organic peroxides Chemical group 0.000 claims description 2
- WYKYCHHWIJXDAO-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-ethylhexaneperoxoate Chemical compound CCCCC(CC)C(=O)OOC(C)(C)C WYKYCHHWIJXDAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 claims description 2
- CLECMSNCZUMKLM-UHFFFAOYSA-N (4-ethenylphenyl)methanol Chemical compound OCC1=CC=C(C=C)C=C1 CLECMSNCZUMKLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- BSVZXPLUMFUWHW-OWOJBTEDSA-N (e)-hex-3-enedinitrile Chemical compound N#CC\C=C\CC#N BSVZXPLUMFUWHW-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims 2
- 229920001479 Hydroxyethyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 18
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 abstract 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 16
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 15
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 14
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GYCMBHHDWRMZGG-UHFFFAOYSA-N Methylacrylonitrile Chemical compound CC(=C)C#N GYCMBHHDWRMZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical class CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 3
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- NYINVZSHVMSTDP-UHFFFAOYSA-N 1-ethenyl-4-(4-ethenylphenoxy)benzene Chemical compound C1=CC(C=C)=CC=C1OC1=CC=C(C=C)C=C1 NYINVZSHVMSTDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLBJTVDPSNHSKJ-UHFFFAOYSA-N 4-Methylstyrene Chemical compound CC1=CC=C(C=C)C=C1 JLBJTVDPSNHSKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 2
- XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxyphenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XQXPVVBIMDBYFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 2
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- MPMBRWOOISTHJV-UHFFFAOYSA-N but-1-enylbenzene Chemical compound CCC=CC1=CC=CC=C1 MPMBRWOOISTHJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 2
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 2
- CUNWUEBNSZSNRX-RKGWDQTMSA-N (2r,3r,4r,5s)-hexane-1,2,3,4,5,6-hexol;(z)-octadec-9-enoic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O CUNWUEBNSZSNRX-RKGWDQTMSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- NMRPBPVERJPACX-UHFFFAOYSA-N (3S)-octan-3-ol Natural products CCCCCC(O)CC NMRPBPVERJPACX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRJNEUBECVAVAG-UHFFFAOYSA-N 1,3-bis(ethenyl)benzene Chemical compound C=CC1=CC=CC(C=C)=C1 PRJNEUBECVAVAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEERVPDNCOGWJF-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(ethenyl)benzene Chemical compound C=CC1=CC=C(C=C)C=C1 WEERVPDNCOGWJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 1,4-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=C(N)C=C1 CBCKQZAAMUWICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOFPPJOZXUTRAU-UHFFFAOYSA-N 2-Ethyl-1-hexanol Natural products CCCCC(O)CCC WOFPPJOZXUTRAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKOKUHFZNIUSLW-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxypropyl stearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(C)O FKOKUHFZNIUSLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXLLCROMVONRRO-UHFFFAOYSA-N 2-butoxyethenylbenzene Chemical compound CCCCOC=CC1=CC=CC=C1 HXLLCROMVONRRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZHNODDFDJBMAS-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxyethenylbenzene Chemical compound CCOC=CC1=CC=CC=C1 FZHNODDFDJBMAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIWUKEYIRIRTPP-UHFFFAOYSA-N 2-ethylhexan-1-ol Chemical compound CCCCC(CC)CO YIWUKEYIRIRTPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTHJQRHPNQEPAB-UHFFFAOYSA-N 2-methoxyethenylbenzene Chemical compound COC=CC1=CC=CC=C1 CTHJQRHPNQEPAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWRFOTFNTZSPSJ-UHFFFAOYSA-N 2-pentoxyethenylbenzene Chemical compound CCCCCOC=CC1=CC=CC=C1 OWRFOTFNTZSPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWRZIZXBOLBCON-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethenamine Chemical compound NC=CC1=CC=CC=C1 UWRZIZXBOLBCON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLLXMBCBJGATSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethenol Chemical compound OC=CC1=CC=CC=C1 XLLXMBCBJGATSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILYSKJPEZAABAA-UHFFFAOYSA-N 2-propoxyethenylbenzene Chemical compound CCCOC=CC1=CC=CC=C1 ILYSKJPEZAABAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXIJHCSGLOHNES-UHFFFAOYSA-N 3,3-dimethylbut-1-enylbenzene Chemical compound CC(C)(C)C=CC1=CC=CC=C1 DXIJHCSGLOHNES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMRNFVJNQPVYCH-UHFFFAOYSA-N 3,3-dimethylpent-1-enylbenzene Chemical compound CCC(C)(C)C=CC1=CC=CC=C1 AMRNFVJNQPVYCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEBRPXLXYCFYGU-UHFFFAOYSA-N 3-methylbut-1-enylbenzene Chemical compound CC(C)C=CC1=CC=CC=C1 CEBRPXLXYCFYGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKYAUYAFESKLOL-UHFFFAOYSA-N 3-methylhex-1-enylbenzene Chemical compound CCCC(C)C=CC1=CC=CC=C1 RKYAUYAFESKLOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VSGFJIDEDKDAMZ-UHFFFAOYSA-N 3-methylpent-1-enylbenzene Chemical compound CCC(C)C=CC1=CC=CC=C1 VSGFJIDEDKDAMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GQEFPXSNRRKUHO-UHFFFAOYSA-N 4-methylpent-1-enylbenzene Chemical compound CC(C)CC=CC1=CC=CC=C1 GQEFPXSNRRKUHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTGFAAXYUUHEAX-UHFFFAOYSA-N 5-methylhex-1-enylbenzene Chemical compound CC(C)CCC=CC1=CC=CC=C1 HTGFAAXYUUHEAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005642 Gabriel synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical class O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001338 aliphatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- PVEOYINWKBTPIZ-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid Chemical compound OC(=O)CC=C PVEOYINWKBTPIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001924 cycloalkanes Chemical class 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- LLRANSBEYQZKFY-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid;propane-1,2-diol Chemical compound CC(O)CO.CCCCCCCCCCCC(O)=O LLRANSBEYQZKFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001821 foam rubber Polymers 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- KETWBQOXTBGBBN-UHFFFAOYSA-N hex-1-enylbenzene Chemical compound CCCCC=CC1=CC=CC=C1 KETWBQOXTBGBBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000010954 inorganic particle Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- JESXATFQYMPTNL-UHFFFAOYSA-N mono-hydroxyphenyl-ethylene Natural products OC1=CC=CC=C1C=C JESXATFQYMPTNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;piperidine Chemical compound CN(C)C=O.C1CCNCC1 CMWYAOXYQATXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NRMSDBSOGLOCJI-UHFFFAOYSA-N n-(4-ethenylphenyl)acetamide Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(C=C)C=C1 NRMSDBSOGLOCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- KHMYONNPZWOTKW-UHFFFAOYSA-N pent-1-enylbenzene Chemical compound CCCC=CC1=CC=CC=C1 KHMYONNPZWOTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 229920003214 poly(methacrylonitrile) Polymers 0.000 description 1
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 description 1
- 239000004848 polyfunctional curative Substances 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940093625 propylene glycol monostearate Drugs 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960005078 sorbitan sesquioleate Drugs 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 150000003440 styrenes Chemical group 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 238000010557 suspension polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002522 swelling effect Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ TECHNICAL FIELD
Настоящее изобретение относится к пористой смоле и способу ее получения. Носитель предназначен для использования в твердофазном синтезе олигонуклеотидов и принадлежит к области получения функциональных полимерных материалов.The present invention relates to a porous resin and a method for its production. The carrier is intended for use in solid-phase synthesis of oligonucleotides and belongs to the field of obtaining functional polymeric materials.
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ PREREQUISITES FOR CREATION OF THE INVENTION
В прошлые десятилетия синтетические олиго нуклеотиды широко использовали в таргентной генной терапии. Олигонуклеотиды представляют собой короткоцепочечные нуклеотиды примерно из 20 оснований, включая дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) и рибонуклеиновую кислоту (РНК). Сегодня олигонуклеотидиы часто синтезируют с использованием химических методов, и наиболее распространен фосфорамидитный твердофазный синтез, в котором реакционная колонка наполнена носителем твердофазного синтеза, и раствор с растворенными реагирующими веществами быстро протекает через колонку под определенным давлением для совершения реакции. Чтобы улучшить эффективность реакции и уменьшить образование загрязняющих примесей, реагирующие вещества в растворе должны быстро диффундировать в носитель твердофазного синтеза для реакции с активными участками, а продукты, образующиеся в результате реакциий, могут быстро диффундировать в раствор и уноситься. Поэтому требуется, чтобы носители твердофазного синтеза удовлетворяли следующим требованиям: 1) носители должны содержать активные участки (или реакционноспособные группы) одного вида, к которым могут быть присоединены молекулярные цепи нуклеиновых кислот, и которые могут быть расщеплены по завершении синтеза; 2) носитель должен поддерживать физическую и химическую стабильность в процессе синтеза; 3) носитель должен иметь достаточно большой диаметр пор и идеальное распределение пор по размеру, чтобы способствовать быстрому и беспрепятственному контакту между растущими молекулярными цепями нуклеиновых кислот и реагентами; 4) активные участки должны быть равномерно распределены на носителе, чтобы уменьшить взаимное вмешательство между молекулярными цепями нуклеиновых кислот; 5) носитель должен иметь схожите степени набухания в различных растворителях, тем самым уменьшая мертвый объем, вызываемый разницей набухания в процессе синтеза или промывки с использованием разных растворителей, что способствует равномерной диффузии реагентов реакции и быстрому промыванию и удалению продуктов реакции.In past decades, synthetic oligonucleotides have been widely used in targeted gene therapy. Oligonucleotides are short-chain nucleotides of approximately 20 bases, including deoxyribonucleic acid (DNA) and ribonucleic acid (RNA). Today, oligonucleotides are often synthesized using chemical methods, and the most common is phosphoramidite solid-phase synthesis, in which a reaction column is filled with a solid-phase synthesis carrier and a solution of dissolved reactants is rapidly flowed through the column under a certain pressure to effect the reaction. To improve the reaction efficiency and reduce the formation of contaminants, the reactants in solution must quickly diffuse into the solid-phase synthesis carrier to react with the active sites, and the products formed from the reactions can quickly diffuse into the solution and be carried away. Therefore, solid-phase synthesis carriers are required to satisfy the following requirements: 1) the carriers must contain active sites (or reactive groups) of the same type to which the molecular chains of nucleic acids can be attached and which can be cleaved upon completion of the synthesis; 2) the carrier must maintain physical and chemical stability during the synthesis process; 3) the carrier must have a sufficiently large pore diameter and an ideal pore size distribution to facilitate rapid and unhindered contact between the growing molecular chains of nucleic acids and the reagents; 4) active sites should be evenly distributed on the carrier to reduce mutual interference between the molecular chains of nucleic acids; 5) The support should have similar swelling rates in different solvents, thereby reducing the dead volume caused by the difference in swelling during the synthesis or washing process using different solvents, which promotes uniform diffusion of reaction reagents and rapid washing and removal of reaction products.
На ранней стадии развития технологии твердофазного синтеза олигонуклеотидов в число широко используемых носителей твердофазного синтеза входили неорганические частицы, такие как стеклянные микросферы с контролируемым размером пор (CPG) и модифицированный кварц, но они имели очевидные недостатки, такие как низкая загрузка (обычно менее 100 мкмоль/г), которая приводит к низкому выходу одной партии олигонуклеотидов, низкому использованию оборудования и высоким издержкам производства. Чтобы улучшить загрузку носителя, компании Nitto Denko CO. LTD. и Ionis Inc. совместно подали заявку на патент WO2006029023, которая включала получение органических полимеров в качестве носителей для твердофазного синтеза олигонуклеотидов с использованием стирола , 4-ацетоксистирола и дивинилбензола в качестве мономеров полимеризации, а также изооктана и 2-этил-1-гексанола в качестве порообразующих агентов. Полученный носитель имел загрузку до 100–350 мкммоль/г, но обладал следующими недостатками: носитель имел относительно сильную неполярность, и, как результат, эффективность реакции была низкой при соединении линкера с системой конденсации ониевой соли, а также объем смолы сильно варьировался при использовании толуола и ацетонитрила в процессе синтеза и промывки, что приводило к большому мертвому объему в реакторе. В последующей заявке на патент US8592542, поданной компанией Nitto Denko CO. LTD., в качестве мономеров полимеризации использовали стирол, 4-ацетокситирол, дивинилбензол и производные метакриламида. В US8653152 в качестве мономеров полимеризации использовали стирол, 4-ацетоксистирол, дивинилбензол и метакрилонитрил. Носители твердофазного синтеза олигонуклеотидов с более высокой загрузкой (более 500 мкмоль/г) приготавливали путем добавления полярных мономеров в процесс полимеризации. Между тем, добавление полярных мономеров способствовало регулированию колебаний набухания носителей в различных растворителях (таких как толуол или ацетонитрил). Однако были и проблемы: мономеры метакриламида и метакрилонитрил были более гидрофильными, и воду, добавляемую на этапе окисления, было трудно удалить при промывке безводным растворителем (безводным ацетонитрилом), что влияло на эффективность последующего синтеза олигонуклеотидом. Кроме того, распределение размеров пор носителя, получаемое при формировании пор растворителем, неравномерное, и эффект переноса масс плохой, что также скажется на удалении воды и эффективности последующего синтеза олигонуклеотидов. В заявке на пантен CN201210562165.9, поданной Нанькайским университетом, в качестве базового скелета носителя использовали поперечно-сшивающий полиакрилонитрил или поперечно-сшивающий полиметакрилонитрил. Активные участки вводили добавлением мономеров эфира винилуксусной кислоты, акрилатов или метакрилатных эфиров и введением гидроксильных групп или аминогрупп путем щелочного гидролиза или с помощью реакции с соединениями, содержащими две первичные аминогруппы. В настоящей заявке на патент использовалось большое количество полярных мономеров, так что проблема разницы в набухании смолы в различных растворителях была решена. Однако из-за использования большого количества гидрофильных мономеров носитель был чрезвычайно гидрофильным, а удалять воду из носителя гораздо труднее, если промывать водным растворителем (ацетонитрилом), что сильно влияет на эффективность последующего синтеза олигонуклеотидов. In the early development of solid-phase oligonucleotide synthesis technology, commonly used solid-phase synthesis supports included inorganic particles such as controlled pore glass (CPG) microspheres and modified silica, but they had obvious disadvantages such as low loading (typically less than 100 µmol/ d), which leads to low yield per batch of oligonucleotides, low equipment utilization and high production costs. To improve media loading, Nitto Denko CO. LTD. and Ionis Inc. jointly filed patent application WO2006029023, which involved the preparation of organic polymers as carriers for the solid-phase synthesis of oligonucleotides using styrene, 4-acetoxystyrene and divinylbenzene as polymerization monomers, and isooctane and 2-ethyl-1-hexanol as pore-forming agents. The resulting support had loadings up to 100–350 μmmol/g, but had the following disadvantages: the support was relatively highly non-polar and, as a result, the reaction efficiency was low when connecting the linker to the onium salt condensation system, and the resin volume varied greatly when using toluene and acetonitrile during the synthesis and washing process, which led to a large dead volume in the reactor. In subsequent patent application US8592542 filed by Nitto Denko CO. LTD., styrene, 4-acetoxytyrene, divinylbenzene and methacrylamide derivatives were used as polymerization monomers. US8653152 used styrene, 4-acetoxystyrene, divinylbenzene and methacrylonitrile as polymerization monomers. Solid-phase oligonucleotide synthesis carriers with higher loading (more than 500 μmol/g) were prepared by adding polar monomers to the polymerization process. Meanwhile, the addition of polar monomers helped control the swelling variations of the carriers in various solvents (such as toluene or acetonitrile). However, there were problems: the methacrylamide and methacrylonitrile monomers were more hydrophilic, and the water added during the oxidation step was difficult to remove when washed with an anhydrous solvent (anhydrous acetonitrile), which affected the efficiency of subsequent oligonucleotide synthesis. In addition, the pore size distribution of the support obtained when the pores are formed by the solvent is uneven, and the mass transfer effect is poor, which will also affect the removal of water and the efficiency of subsequent oligonucleotide synthesis. In the panten application CN201210562165.9 filed by Nankai University, cross-linking polyacrylonitrile or cross-linking polymethacrylonitrile was used as the base skeleton of the carrier. Active sites were introduced by adding vinyl acetic acid ester monomers, acrylates or methacrylate esters and introducing hydroxyl groups or amino groups by alkaline hydrolysis or by reaction with compounds containing two primary amino groups. The present patent application used a large number of polar monomers, so that the problem of differences in swelling of the resin in different solvents was solved. However, due to the use of a large number of hydrophilic monomers, the support was extremely hydrophilic, and it is much more difficult to remove water from the support if washed with an aqueous solvent (acetonitrile), which greatly affects the efficiency of subsequent oligonucleotide synthesis.
Благодаря большому прогрессу в исследовании олигонуклеотидных препаратов в последние годы все больше и больше олигонуклеотидных препаратов выходят на клиническую стадию. Спрос на носители для синтеза олигонуклеотидов растет, в то время как проблемы переноса масс, набухания и полярности носителей олигонуклеотидов приводят к низкой эффективности синтеза олигонуклеотидов и высоким издержкам производства. Поэтому крайне необходимо разработать пористую смолу, чтобы олигонуклеотидные препараты можно было синтезировать в больших масштабах, с низкой стоимостью и высокой эффективностью для удовлетворения рыночного спроса на нуклеотидные препараты.Due to the great progress in oligonucleotide drug research, more and more oligonucleotide drugs have entered the clinical stage in recent years. The demand for supports for oligonucleotide synthesis is increasing, while problems of mass transfer, swelling and polarity of oligonucleotide supports lead to low efficiency of oligonucleotide synthesis and high production costs. Therefore, it is urgent to develop a porous resin so that oligonucleotide drugs can be synthesized on a large scale, at low cost and with high efficiency to meet the market demand for nucleotide drugs.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ SUMMARY OF THE INVENTION
Чтобы достичь широкомасштабного и низкозатратного производства олигонуклеотидов и преодолеть недостатки носителе известного уровня техники, такие как низкая эффективность переноса масс, неполноценный процесс промывки и большая вариация набухания в различных растворителях, в настоящем изобретении предложены пористая смола для твердофазного синтеза и способ ее получения.In order to achieve large-scale and low-cost production of oligonucleotides and overcome the disadvantages of the prior art carrier, such as low mass transfer efficiency, inferior washing process and large swelling variation in different solvents, the present invention provides a porous solid-phase synthesis resin and a method for its preparation.
Для повышения эффективности переноса масс настоящее изобретение направлено на достижение подходящего диаметра пор и равномерного распределения пор по размеру. В настоящем изобретении в качестве матрицы для формирования пор используется эмульсия с высоким содержанием дисперсной фазы, диаметром и распределением пор по размеру можно точно управлять с помощью размера капель эмульсии по сравнению с традиционными способами формирования пор, такими как метод обращенной фазы, метод разделения фаз и метод формирования пор с помощью растворителя. Размер капель эмульсии в дисперсной фазе может определяться молекулярной массой, значением гидрофильно-липофильного баланса (HLB) и количеством маслорастворимого поверхностно-активного вещества и т. д. Способ формирования пор согласно настоящему изобретению позволяет получать носитель, имеющий подходящий диаметр пор и узкое распределение пор по размеру, что способствует диффузии реагентов реакции во время синтеза олигонуклеотидов, тем самым повышая эффективность реакции и снижая образование примесей.To improve mass transfer efficiency, the present invention is aimed at achieving a suitable pore diameter and uniform pore size distribution. In the present invention, a high dispersed phase emulsion is used as a pore forming matrix, the diameter and size distribution of the pores can be precisely controlled by the droplet size of the emulsion, compared with traditional pore forming methods such as reverse phase method, phase separation method and formation of pores using a solvent. The droplet size of the emulsion in the dispersed phase can be determined by the molecular weight, the hydrophilic-lipophilic balance (HLB) value and the amount of oil-soluble surfactant, etc. The pore forming method of the present invention can produce a carrier having a suitable pore diameter and a narrow pore distribution across size, which promotes diffusion of reaction reagents during oligonucleotide synthesis, thereby increasing reaction efficiency and reducing the formation of impurities.
Добавление модифицированных мономеров в процесс полимеризации имеет четыре эффекта: во-первых, полимеризация модифицированного мономера происходит медленно, и поэтому подвергнуть их гомополимеризации невозможно, а можно подвергнуть только сополимеризации с другими мономерами, что способствует равномерному распределению активных участков. Во-вторых, добавление модифицированного мономера в малых количествах может корректировать характеристики набухания смолы в широком диапазоне, уменьшать объем вариации для набухания носителя в различных растворителях и уменьшать мертвый объем в реакторе во время синтеза олигонуклеотидов. В-третьих, молекулярная структура модифицированного мономера может делать повышать эффективность конденсирующего вещества ониевых солей и обеспечивать эффективность линкерного соединения. В-четвертых, модифицированный мономер более гидрофобен по сравнению с мономерам метакриламида и метакрилонитрилом, что приводит к снижению сопротивления воды переносу масс в носителе, уменьшению влияния воды на процесс синтеза олигонуклеотидов и улучшению эффективности и выхода реакции.Adding modified monomers to the polymerization process has four effects: firstly, the polymerization of the modified monomer occurs slowly, and therefore it is impossible to homopolymerize them, but only copolymerize them with other monomers, which promotes uniform distribution of active sites. Second, adding the modified monomer in small amounts can adjust resin swelling characteristics over a wide range, reduce the amount of variation for support swelling in different solvents, and reduce dead volume in the reactor during oligonucleotide synthesis. Third, the molecular structure of the modified monomer can enhance the efficiency of the condensing agent of onium salts and ensure the efficiency of the linker compound. Fourthly, the modified monomer is more hydrophobic compared to methacrylamide and methacrylonitrile monomers, which leads to a decrease in the resistance of water to mass transfer in the carrier, a decrease in the influence of water on the process of oligonucleotide synthesis and an improvement in the efficiency and yield of the reaction.
В настоящем изобретении раскрыта пористая смола для твердофазного синтеза, причем пористая смола имеет полимерный скелет с функциональными группами, которые представлены следующей формулой:The present invention discloses a porous resin for solid phase synthesis, wherein the porous resin has a polymer skeleton with functional groups represented by the following formula:
где: Where:
R1=-C- или -C-CH2-, R 1 = -C- or -C-CH 2 -,
R2=-OH, -CH2OH, -NH2, -CH2NH2, -CH2OOC-C6H4-OH, -CH2OOCCH2-C6H4-OH, -(CH2)4OOC-C6H4-OH, -(CH2)4OOCCH2-C6H4-OH, -COONH-C6H4-NH2, -CH2COONH-C6H4-NH2, -COO-C6H4-OH или -CH2COO-C6H4-OH; иR 2 = -OH, -CH 2 OH, -NH 2 , -CH 2 NH 2 , -CH 2 OOC-C 6 H 4 -OH, -CH 2 OOCCH 2 -C 6 H 4 -OH, -(CH 2 ) 4 OOC-C 6 H 4 -OH, -(CH 2 ) 4 OOCCH 2 -C 6 H 4 -OH, -COONH-C 6 H 4 -NH 2 , -CH 2 COONH-C 6 H 4 -NH 2 , -COO-C 6 H 4 -OH or -CH 2 COO-C 6 H 4 -OH; And
R3=-H; или CH3(CH2)n-, n— целое число от 0 до 4; или r(CH3)2CH(CH2)n, n — целое число от 0 до 2; или (CH3)3C-; или CH3CH2CH(CH3)-; или CH3CH2C(CH3)2-; или CH3CH2CH2CH(CH3)-; или CH3(CH2)n-O-, n — целое число от 0 до 4.R 3 =-H; or CH 3 (CH 2 ) n -, n—an integer from 0 to 4; or r(CH 3 ) 2 CH(CH 2 ) n , n is an integer from 0 to 2; or (CH 3 ) 3 C-; or CH 3 CH 2 CH(CH 3 )-; or CH 3 CH 2 C(CH 3 ) 2 -; or CH 3 CH 2 CH 2 CH(CH 3 )-; or CH 3 (CH 2 ) n -O-, n is an integer from 0 to 4.
В некоторых вариантах осуществления пористая смола для твердофазного синтеза представляет собой сополимер, содержащий в своем скелете повторяющиеся структурные звенья, представленные формулой (I), формулой (II), формулой (III) и формулой (IV):In some embodiments, the porous solid phase resin is a copolymer having in its backbone the repeating structural units represented by Formula (I), Formula (II), Formula (III), and Formula (IV):
（Ⅰ）（Ⅰ）
где R4=-C- или -C-CH2-;where R 4 = -C- or -C-CH 2 -;
（Ⅱ）（Ⅱ）
（Ⅲ）（Ⅲ）
где R5 выбирают из группы, состоящей из –OH, -CH2OH, -NH2, -CH2NH2, -CH2OOC-C6H4-OH, -CH2OOCCH2-C6H4-OH, -(CH2)4OOC-C6H4-OH, -(CH2)4OOCCH2-C6H4-OH, -COONH-C6H4-NH2, -CH2COONH-C6H4-NH2, -COO-C6H4-OH и -CH2COO-C6H4-OH；where R 5 is selected from the group consisting of –OH, -CH 2 OH, -NH 2 , -CH 2 NH 2 , -CH 2 OOC-C 6 H 4 -OH, -CH 2 OOCCH 2 -C 6 H 4 - OH, -(CH 2 ) 4 OOC-C 6 H 4 -OH, -(CH 2 ) 4 OOCCH 2 -C 6 H 4 -OH, -COONH-C 6 H 4 -NH 2 , -CH 2 COONH-C 6 H 4 -NH 2 , -COO-C 6 H 4 -OH and -CH 2 COO-C 6 H 4 -OH；
（Ⅳ）（Ⅳ）
где R6 представляет собой –H; или CH3(CH2)n-, n — целое число от 0 до 4; или (CH3)2CH(CH2)n-, n — целое число от 0 до 2；или (CH3)3C-; или CH3CH2CH(CH3)-; или CH3CH2C(CH3)2-; или CH3CH2CH2CH(CH3)-; или CH3(CH2)n-O-, n — целое число от 0 до 4.where R 6 represents –H; or CH 3 (CH 2 ) n -, n is an integer from 0 to 4; or (CH 3 ) 2 CH(CH 2 ) n -, n is an integer from 0 to 2；or (CH 3 ) 3 C-; or CH 3 CH 2 CH(CH 3 )-; or CH 3 CH 2 C(CH 3 ) 2 -; or CH 3 CH 2 CH 2 CH(CH 3 )-; or CH 3 (CH 2 ) n -O-, n is an integer from 0 to 4.
В некоторых вариантах осуществления пористая смола для твердофазного синтеза имеет содержание гидроксильной группы и аминогруппы 100—1000 мкмоль/г, предпочтительно 400–700 мкмоль/г.In some embodiments, the porous solid phase synthesis resin has a hydroxyl group and amino group content of 100-1000 μmol/g, preferably 400-700 μmol/g.
В некоторых вариантах осуществления пористая смола для твердофазного синтеза имеет размер частиц в диапазоне 35–200 мкм, предпочтительно 50–100 мкм.In some embodiments, the porous solid phase synthesis resin has a particle size in the range of 35-200 μm, preferably 50-100 μm.
В некоторых вариантах осуществления пористая смола имеет средний диаметр пор 10–200 нм, предпочтительно 40–100 нм.In some embodiments, the porous resin has an average pore diameter of 10-200 nm, preferably 40-100 nm.
В настоящем изобретении также раскрыт способ получения пористой смолы для твердофазного синтеза. Способ получения включает следующие этапы: получение водной фазы и масляной фазы, соответственно, причем водная фаза содержит: воду, диспергирующее средство и неорганическую соль; а масляная фаза содержит: моновинильное соединение, поперечно-сшивающий мономер, функциональный мономер, модифицированный мономер, маслорастворимое поверхностно активное веществ, разбавитель и инициатор; и при этом моновинильное соединение, поперечно-сшивающий мономер, функциональный мономер и модифицированный мономер представляют собой мономеры, способные к полимеризации; маслорастворимое поверхностно-активное вещество и разбавитель неспособны к полимеризации, а действуют в качестве порообразующих агентов для формирования пор; добавление масляной фазы в водную фазу, перемешивание и нагревание для осуществления реакции, и удаление порообразующих агентов по завершении реакции, получение пористой полимерной смолы. Пористая полимерная смола способна подвергаться дальнейшей реакции для получения пористой смолы, содержащей гидроксильную группу и аминогруппу в качестве функциональных групп.The present invention also discloses a method for producing a porous resin for solid phase synthesis. The production method includes the following steps: obtaining an aqueous phase and an oil phase, respectively, the aqueous phase containing: water, a dispersant and an inorganic salt; and the oil phase contains: a monovinyl compound, a cross-linking monomer, a functional monomer, a modified monomer, an oil-soluble surfactant, a diluent and an initiator; and wherein the monovinyl compound, cross-linking monomer, functional monomer and modified monomer are polymerizable monomers; the oil-soluble surfactant and diluent are not capable of polymerization, but act as pore-forming agents to form pores; adding the oil phase to the aqueous phase, stirring and heating to effect the reaction, and removing the blowing agents once the reaction is complete, obtaining a porous polymer resin. The porous polymer resin is capable of undergoing further reaction to obtain a porous resin containing a hydroxyl group and an amino group as functional groups.
В некоторых вариантах осуществления моновинильное соединение представляет собой ароматическое моновинильное соединение. Моновинильное соединение представляет собой стирол, незамещенный или замещенный алкилом C1-C5 на своем бензольном кольце, такой как метилстирол, этилстирол, n-пропилстирол, изопропилстирол, n-бутилстирол, изобутилстирол, втор-бутилстирол, трет-бутилстирол, n-амилстирол, изопентилстирол, втор-амилстирол или трет-амилстирол; или стирол, замещенный C1-C5 алкокси на своем бензольном кольце, такой как метоксистирол, этоксистирол, пропоксистирол, бутоксистирол или пентоксистирол. Предпочтительно моновинильное соединение представляет собой стирол.In some embodiments, the monovinyl compound is an aromatic monovinyl compound. A monovinyl compound is styrene, unsubstituted or substituted with a C1-C5 alkyl on its benzene ring, such as methylstyrene, ethylstyrene, n-propylstyrene, isopropylstyrene, n-butylstyrene, isobutylstyrene, sec-butylstyrene, tert-butylstyrene, n-amylstyrene, isopentylstyrene, sec-amylstyrene or tert-amylstyrene; or styrene substituted with a C1-C5 alkoxy on its benzene ring, such as methoxystyrene, ethoxystyrene, propoxystyrene, butoxystyrene or pentoxystyrene. Preferably the monovinyl compound is styrene.
В некоторых вариантах осуществления поперечно-сшивающий мономер представляет собой многофункциональный мономер, имеющий две или более конъюгированные винильные группы. Предпочтительно, поперечно-сшивающий мономер представляет собой дивинилбензол. Дивинилбензол представляет собой о-дивинилбензол, м-дивинилбензол, п-дивинилбензол или их смесь.In some embodiments, the cross-linking monomer is a multifunctional monomer having two or more conjugated vinyl groups. Preferably, the cross-linking monomer is divinylbenzene. Divinylbenzene is o-divinylbenzene, m-divinylbenzene, p-divinylbenzene, or a mixture thereof.
В некоторых вариантах осуществления функциональный мономер имеет двойную связь, способную к свободнорадикальной полимеризации, а также гидроксильную группу, аминогруппу, галогенированную группу или другую группу, способную превращаться в гидроксильную группу и аминогруппу посредством реакции. В процессе синтеза олигонуклеотидов реакционноспособные гидроксильная группа и аминогруппа могут быть использованы в качестве активного участка для соединения олигонуклеотидов, включая аминогруппу, аминоалкильную группу, гидроксильную группу, гидроксиалкильную группу и т. д. Предпочтительны первичная аминогруппа, аминометильная группа, гидроксильная группа, гидроксиметильная группа и т. д. В число функциональных мономеров входят, без исключения, гидроксистирол и его производные, такие как 4-гидроксистирол и т. д.; гидроксиалкилстирол и его производные, такие как 4-гидроксиалкилстирол и т. д.; ацилоксистирол и его производные,такие как 4-ацилоксистирол и бензоилоксистирол и т. д.; аминостирол и его производные, такие как 4-аминостирол и т. д.; аминоалкилситрол и его производные, такие как 4-аминометилстирол и т. д.; мономеры галоалкилстирола, такие как 4-(4-бромбутил)стирол и 4-хлорметилстирол и т. д.; мономеры 4-винилфенилэфира, такие как метил-4-винилбензоат и этиловый эфир 4-этенилбензолуксусной кислоты и т. д. In some embodiments, the functional monomer has a double bond capable of free radical polymerization, as well as a hydroxyl group, amino group, halogenated group, or other group capable of being converted into a hydroxyl group and an amino group by reaction. In the process of oligonucleotide synthesis, reactive hydroxyl group and amino group can be used as the active site to connect oligonucleotides, including amino group, aminoalkyl group, hydroxyl group, hydroxyalkyl group, etc. Preferred are primary amino group, aminomethyl group, hydroxyl group, hydroxymethyl group, etc. etc. Functional monomers include, without limitation, hydroxystyrene and its derivatives such as 4-hydroxystyrene, etc.; hydroxyalkylstyrene and its derivatives such as 4-hydroxyalkylstyrene, etc.; acyloxystyrene and its derivatives such as 4-acyloxystyrene and benzoyloxystyrene, etc.; aminostyrene and its derivatives such as 4-aminostyrene, etc.; aminoalkylsitrol and its derivatives such as 4-aminomethylstyrene, etc.; haloalkylstyrene monomers such as 4-(4-bromobutyl)styrene and 4-chloromethylstyrene, etc.; 4-vinylphenyl ether monomers such as methyl 4-vinyl benzoate and 4-ethenylbenzeneacetic acid ethyl ester, etc.
В некоторых вариантах осуществления некоторые из функциональных мономеров содержат гидроксильные защитные группы или аминозащитные группы, которые могут быть непосредственно отрезаны с образованием аминогрупп или гидроксильных групп. Например, ацилоксистирол может быть превращен в гидроксильную группу как активные участки для соединения олигонуклеотидов путем щелочного гидролиза или кислотного гидролиза; некоторые из функциональных мономеров должны быть превращены в аминогруппы или гидроксильные группы как активные участки посредством реакции функционализации. Например, галоалкилстирол может быть превращен в гидроксильную группу посредством гидролиза или превращен в первичные аминогруппы посредством реакции Габриеля как активные участки для соединения олигонуклеотидов; некоторые из функциональных мономеров должны сшивать соединительные звенья, имеющие аминогруппы или гидроксильные группы в качестве активных участков. Например, галоалкилстирол может реагировать с 4-гидроксибензойной кислотой или 4-гидроксифенилуксусной кислотой с образованием гидроксильных групп в качестве активных участков для соединения олигонуклеотидов; некоторые из таких функциональных мономеров нуждаются в вышеуказанных многократных реакциях для получения аминогрупп или гидроксильных групп в качестве активных участков. Например, мономеры 4-винилфенилэфиров должны гидролизироваться, чтобы сначала обнажить карбоксильные группы, а затем реагировать с гидрохиноном или п-фенилендиамином для получения аминогрупп или гидроксильных групп в качестве активных участков.In some embodiments, some of the functional monomers contain hydroxyl protecting groups or amino protecting groups, which can be directly cut off to form amino groups or hydroxyl groups. For example, acyloxystyrene can be converted into a hydroxyl group as active sites for connecting oligonucleotides by alkaline hydrolysis or acid hydrolysis; some of the functional monomers must be converted to amino groups or hydroxyl groups as active sites through a functionalization reaction. For example, haloalkyl styrene can be converted to a hydroxyl group through hydrolysis or converted to primary amino groups through the Gabriel reaction as active sites for oligonucleotide coupling; some of the functional monomers must cross-link connecting units having amino groups or hydroxyl groups as active sites. For example, haloalkyl styrene can react with 4-hydroxybenzoic acid or 4-hydroxyphenylacetic acid to form hydroxyl groups as active sites for linking oligonucleotides; some of these functional monomers require the above multiple reactions to produce amino groups or hydroxyl groups as active sites. For example, 4-vinylphenyl ether monomers must be hydrolyzed to first expose carboxyl groups and then reacted with hydroquinone or p-phenylenediamine to produce amino groups or hydroxyl groups as active sites.
В некоторых вариантах осуществления модифицированный мономер имеет двойную связь, способную к свободнорадикальной полимеризации, и две цианогруппы. Он не может подвергаться гомополимеризации, а может только подвергаться сополимеризации с другими мономерами. Модифицированный мономер содержит, без ограничения, фумаронитрил, 1,4-дисиано-2-бутен и т. д. Предпочтительно модифицированный мономер представляет собой фумаронитрил.In some embodiments, the modified monomer has a free radical polymerizable double bond and two cyano groups. It cannot undergo homopolymerization, but can only undergo copolymerization with other monomers. The modified monomer contains, without limitation, fumaronitrile, 1,4-disyano-2-butene, etc. Preferably, the modified monomer is fumaronitrile.
В некоторых вариантах осуществления инициатор выбирают из группы, состоящей из органических пероксидов и азосоединений. В число инициаторов входят, без исключения, пероксид бензоила, пероксид лауроила, трет-бутилперокси-2-этилгексаноат, 2,2'-азобис(2-метилпропионитрил), 2,2'-азобис(2-метилбутиронитрил) и 2,2'-азобис(2,4-диметил)валеронитрил. На долю инициатора приходится 0,5–5 мас.% в пересчете на общую массу мономеров.In some embodiments, the initiator is selected from the group consisting of organic peroxides and azo compounds. Initiators include, but are not limited to, benzoyl peroxide, lauroyl peroxide, tert-butylperoxy-2-ethylhexanoate, 2,2'-azobis(2-methylpropionitrile), 2,2'-azobis(2-methylbutyronitrile) and 2,2' -azobis(2,4-dimethyl)valeronitrile. The share of the initiator is 0.5–5 wt.% in terms of the total mass of monomers.
В некоторых вариантах осуществления маслорастворимое поверхностно-активное вещество не полимеризуется, но нерастворимо или слаборастворимо в воде. В число маслорастворимых поверхностно-активных веществ входят, без ограничения, сорбитантриолеат, полученный из пчелиного воска полиоксиэтиленсорбит, сорбитантристеарат, полиоксиэтиленсорбитгесастеарат, этиленгликолевый сложный эфир жирной кислоты, пропиленгликолевый сложный эфир жирной кислоты, пропиленгликольмоностеарат, сорбитансесквиолеат, полиоксиэтиленсорбитолеат, моностеарин, гидроксилированный ланолин, сорбитмоноолеат, пропиленгликольлаурат и любые их комбинации. Разбавитель представляет собой органический растворитель, который не полимеризуется, но нерастворим или слаборастворим в воде. В число разбавителей входят, без ограничения, ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол, этилбензол и т. д.; алифатические углеводороды, такие как линейные или разветвленные алканы C6–C12 или циклоалканы C6–C12, такие как гексан, гептан, октан, додекан, изооктан, изододекан, циклогексан и т. д.; галогенизированные углеводороды, такие как хлороформ и хлорбензол; эфиры, содержащие 4 или более атомов углерода, такие как этилацетат, бутилацетат, дибутилацетат и т. д.; спирты, такие как линейный или разветвленный алкановый спирт C4-C12 или циклоалкановый спирт C4-C12, такие как гексанол, циклогексанол, октанол, изооктанол, деканол и додеканол. Маслорастворимое поверхностно-активное вещество и разбавитель не способны к полимеризации, но действуют как порообразующие агенты для формирования пор.In some embodiments, the oil-soluble surfactant does not polymerize, but is insoluble or slightly soluble in water. Oil-soluble surfactants include, but are not limited to, sorbitan trioleate, beeswax-derived polyoxyethylene sorbitol, sorbitan tristearate, polyoxyethylene sorbitol hesastearate, ethylene glycol fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, propylene glycol monostearate, sorbitan sesquioleate, polyoxyethylene sorbitoleate, monostearin, hydroxylated lanolin, sorbitol monooleate, propylene glycol laurate and any combinations thereof. A diluent is an organic solvent that does not polymerize but is insoluble or slightly soluble in water. Diluents include, but are not limited to, aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, ethylbenzene, etc.; aliphatic hydrocarbons such as linear or branched C6-C12 alkanes or C6-C12 cycloalkanes such as hexane, heptane, octane, dodecane, isooctane, isododecane, cyclohexane, etc.; halogenated hydrocarbons such as chloroform and chlorobenzene; esters containing 4 or more carbon atoms, such as ethyl acetate, butyl acetate, dibutyl acetate, etc.; alcohols such as C4-C12 linear or branched alkane alcohol or C4-C12 cycloalkane alcohol such as hexanol, cyclohexanol, octanol, isooctanol, decanol and dodecanol. The oil-soluble surfactant and diluent are not capable of polymerization, but act as pore-forming agents to form pores.
В некоторых вариантах осуществления водная фаза содержит воду, диспергирующее средство и неорганическую соль. Диспергирующее вещество представляет собой водорастворимый полимер, который содержит, без ограничения, одно или более из группы, состоящей из поливинилового спирта, гидроксиэтилцеллюлозы, гидроксиметилцеллюлозы, карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлозы, этилцеллюлозы, полиакрилата натрия и поливинилпирролидона. Диспергирующее вещество присутствует в водной фазе в количестве 0,1–5 мас.%. Неорганическая соль действует в качестве регулятора плотности водной фазы, при этом снижая растворимость компонентов масляной фазы в водной фазе, так что капли масла более устойчиво диспергируются в водной фазе. В число неорганических солей входят, без ограничения, одна или более солей выбранных из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида калия, хлорида кальция, сульфата натрия, сульфата калия, сульфата кальция и т. д. Неорганическая соль присутствует в водной фазе в количестве 20 мас.% или ниже.In some embodiments, the aqueous phase contains water, a dispersant, and an inorganic salt. The dispersant is a water-soluble polymer that contains, without limitation, one or more of the group consisting of polyvinyl alcohol, hydroxyethylcellulose, hydroxymethylcellulose, carboxymethylcellulose, methylcellulose, ethylcellulose, sodium polyacrylate and polyvinylpyrrolidone. The dispersant is present in the aqueous phase in an amount of 0.1–5 wt%. The inorganic salt acts as a density regulator for the aqueous phase while reducing the solubility of the oil phase components in the aqueous phase so that the oil droplets are more stably dispersed in the aqueous phase. Inorganic salts include, but are not limited to, one or more salts selected from the group consisting of sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, sodium sulfate, potassium sulfate, calcium sulfate, etc. The inorganic salt is present in the aqueous phase in an amount of 20 wt.% or lower.
В некоторых вариантах осуществления для уменьшения связывания между смолами и улучшения теплообмена полимеризации, а также для улучшения использования оборудования и эффективности производства, массовое соотношение масляной фазы и водной фазы устанавливают равным 1:3–1:20.In some embodiments, to reduce binding between resins and improve polymerization heat transfer, as well as improve equipment utilization and production efficiency, the oil phase to water phase weight ratio is set to 1:3 to 1:20.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения различные компоненты присутствуют в следующих количествах: моновинильное соединение, первоначально присутствующее в масляной фазе, составляет 40–95,9 мас.% от общей массы мономеров; поперечно-сшивающий мономер, первоначально присутствующий в масляной фазе, составляет 2–20 мас.% от общей массы мономеров; функциональный мономер, первоначально присутствующий в масляной фазе, составляет 2–20 мас.% от общей массы мономеров; модифицированный мономер, первоначально присутствующий в масляной фазе, составляет 0,1–20 мас. % от общей массы мономеров; порообразующие агенты, первоначально присутствующие в масляной фазе, составляют 15–70 мас.% от общей массы мономеров, маслорастворимое поверхностно-активное вещество составляет 0,1–15 мас.% от общей массы порообразующих агентов; и разбавитель составляет 85–99,9 мас.% от общей массы порообразующих агентов.In some embodiments of the present invention, the various components are present in the following amounts: the monovinyl compound, initially present in the oil phase, constitutes 40-95.9% by weight of the total weight of the monomers; the cross-linking monomer initially present in the oil phase constitutes 2–20 wt.% of the total mass of monomers; the functional monomer initially present in the oil phase constitutes 2–20 wt.% of the total mass of monomers; the modified monomer initially present in the oil phase is 0.1–20 wt. % of the total mass of monomers; pore-forming agents initially present in the oil phase constitute 15–70 wt.% of the total mass of monomers, oil-soluble surfactant constitutes 0.1–15 wt.% of the total mass of pore-forming agents; and the diluent constitutes 85–99.9% by weight of the total mass of the blowing agents.
В некоторых наиболее предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения различные компоненты присутствуют в следующих количествах: моновинильное соединение, первоначально присутствующее в масляной фазе, составляет 60–88 мас.% от общей массы мономеров; поперечно-сшивающий мономер, первоначально присутствующий в масляной фазе, составляет 5–15 мас.% от общей массы мономеров; функциональный мономер, первоначально присутствующий в масляной фазе, составляет 5–15 мас.% от общей массы мономеров; модифицированный мономер, первоначально присутствующий в масляной фазе, составляет 2–10 мас. % от общей массы мономеров; и порообразующие агенты, первоначально присутствующие в масляной фазе, составляют 25–50 мас.% от общей массы мономеров.In some of the most preferred embodiments of the present invention, the various components are present in the following amounts: the monovinyl compound, initially present in the oil phase, constitutes 60-88% by weight of the total monomers; the cross-linking monomer initially present in the oil phase constitutes 5–15 wt.% of the total mass of monomers; the functional monomer initially present in the oil phase constitutes 5–15 wt.% of the total mass of monomers; the modified monomer initially present in the oil phase is 2–10 wt. % of the total mass of monomers; and pore-forming agents initially present in the oil phase account for 25–50 wt.% of the total mass of monomers.
В некоторых вариантах осуществления полимеризацию выполняют при температуре 50–90 °C, предпочтительно 60–85 °C.In some embodiments, polymerization is performed at a temperature of 50-90°C, preferably 60-85°C.
В некоторых вариантах осуществления способ получения пористой смолы для твердофазного синтеза включает следующие этапы:In some embodiments, a method for producing a porous resin for solid phase synthesis includes the following steps:
добавление в реактор определенного количества очищенной воды, добавление диспергирующего вещества в количестве 0,1–5 мас.% от водной фазы и неорганическую соль в количестве не более 20 мас.% от водной фазы, и растворение для получения водной фазы; adding a certain amount of purified water to the reactor, adding a dispersant in an amount of 0.1–5 wt.% of the aqueous phase and an inorganic salt in an amount of not more than 20 wt.% of the aqueous phase, and dissolving to obtain the aqueous phase;
отвешивание моновинильного соединения, поперечно-сшивающего мономера, функционального мономера, модифицированного мономера, порообразующих агентов и инициатора в соответствии с массовым отношением масляной фазы к водной фазе, составляющим 1:3–1:20; при этом моновинильное соединение составляет 40–95,9 мас.% от общей массы мономеров, поперечно сшивающий мономер составляет 2–20 мас.% от общей массы мономеров, функциональный мономер составляет 2–20 мас.% от общей массы мономеров, модифицированный мономер составляет 0,1–20 мас.% от общей массы мономеров, порообразующие агенты составляют 15–70 мас.% от общей массы мономеров; маслорастворимое поверхностно-активное вещество в порообразующих агентах составляет 0,1–15 мас.% от общей массы порообразующих агентов; и разбавитель составляет 85–99,9 мас.% от общей массы порообразующих агентов, и хорошее перемешивание для получения масляной фазы; weighing out the monovinyl compound, cross-linking monomer, functional monomer, modified monomer, pore-forming agents and initiator according to a mass ratio of oil phase to aqueous phase of 1:3 to 1:20; wherein the monovinyl compound makes up 40–95.9 wt.% of the total mass of monomers, the cross-linking monomer makes up 2–20 wt.% of the total mass of monomers, the functional monomer makes up 2–20 wt.% of the total mass of monomers, the modified monomer makes up 0.1–20 wt.% of the total mass of monomers, pore-forming agents account for 15–70 wt.% of the total mass of monomers; oil-soluble surfactant in blowing agents accounts for 0.1–15 wt.% of the total mass of blowing agents; and the diluent is 85–99.9 wt% of the total mass of the pore-forming agents, and good mixing to obtain the oil phase;
добавление масляной фазы в реактор, перемешивание и нагревание до температуры 50–90 °C для проведения реакции; удаление порообразующих агентов по завершении реакции, просеивание и сбор смолы с соответствующим размером частиц и вакуумная сушка для получения полимерной смолы; adding the oil phase to the reactor, stirring and heating to a temperature of 50–90 °C to carry out the reaction; removing the blowing agents after the reaction is completed, sieving and collecting the resin with the appropriate particle size and vacuum drying to obtain a polymer resin;
проведение дополнительной реакции со смолой для получения пористой смолы, имеющей аминогруппу и карбоксильную группу.further reacting the resin to obtain a porous resin having an amino group and a carboxyl group.
В некоторых вариантах осуществления способ получения пористой смолы для твердофазного синтеза включает следующие этапы:In some embodiments, a method for producing a porous resin for solid phase synthesis includes the following steps:
добавление в реактор определенного количества очищенной воды, добавление диспергирующего вещества в количестве 0,1–5 мас.% от водной фазы и неорганическую соль в количестве не более 20 мас.% от водной фазы, и растворение для получения водной фазы; adding a certain amount of purified water to the reactor, adding a dispersant in an amount of 0.1–5 wt.% of the aqueous phase and an inorganic salt in an amount of not more than 20 wt.% of the aqueous phase, and dissolving to obtain the aqueous phase;
отвешивание моновинильного соединения, поперечно-сшивающего мономера, функционального мономера, модифицированного мономера, порообразующих агентов и инициатора в соответствии с массовым отношением масляной фазы к водной фазе, составляющим 1:3–1:20; при этом моновинильное соединение составляет 60–88 мас.% от общей массы мономеров, поперечно сшивающий мономер составляет 5–15 мас.% от общей массы мономеров, функциональный мономер составляет 5–15 мас.% от общей массы мономеров, модифицированный мономер составляет 2–10 мас.% от общей массы мономеров, порообразующие агенты составляют 25–50 мас.% от общей массы мономеров; маслорастворимое поверхностно-активное вещество в порообразующих агентах составляет 0,1–15 мас.% от общей массы порообразующих агентов; и разбавитель составляет 85–99,9 мас.% от общей массы порообразующих агентов, и хорошее перемешивание для получения масляной фазы; weighing out the monovinyl compound, cross-linking monomer, functional monomer, modified monomer, pore-forming agents and initiator according to a mass ratio of oil phase to aqueous phase of 1:3 to 1:20; in this case, the monovinyl compound makes up 60–88 wt.% of the total mass of monomers, the cross-linking monomer makes up 5–15 wt.% of the total mass of monomers, the functional monomer makes up 5–15 wt.% of the total mass of monomers, the modified monomer makes up 2– 10 wt.% of the total mass of monomers, pore-forming agents account for 25–50 wt.% of the total mass of monomers; oil-soluble surfactant in blowing agents accounts for 0.1–15 wt.% of the total mass of blowing agents; and the diluent is 85–99.9 wt% of the total mass of the pore-forming agents, and good mixing to obtain the oil phase;
добавление масляной фазы в реактор, перемешивание и нагревание до температуры 60–85 °C для проведения реакции; удаление порообразующих агентов по завершении реакции, просеивание и сбор смолы с соответствующим размером частиц и вакуумная сушка для получения полимерной смолы; adding the oil phase to the reactor, stirring and heating to a temperature of 60–85 °C to carry out the reaction; removing the blowing agents after the reaction is completed, sieving and collecting the resin with the appropriate particle size and vacuum drying to obtain a polymer resin;
проведение дополнительной реакции со смолой для получения пористой смолы, имеющей аминогруппу и карбоксильную группу.further reacting the resin to obtain a porous resin having an amino group and a carboxyl group.
Вышеупомянутый способ позволяет получать пористую смолу для твердофазного синтеза в соответствии с настоящим изобретением, т. е. пористую смолу, имеющую гидроксильные группы и аминогруппы. В настоящем изобретении содержание аминогруппы или гидроксильной группы, т. е., загрузка, может быть вычислено посредством реакции с реактивом Fmoc-Leu-OH и последующим удалением защитной группы Fmoc. Количество извлеченной Fmoc определяют калориметрическим способом, а затем вычисляют содержание аминогруппы или гидроксильной группы в пористой смоле.The above method can produce a porous solid-phase synthesis resin according to the present invention, that is, a porous resin having hydroxyl groups and amino groups. In the present invention, the amino group or hydroxyl group content, i.e., loading, can be calculated by reacting with the Fmoc-Leu-OH reagent and then removing the Fmoc protecting group. The amount of Fmoc recovered is determined by calorimetric method, and then the amino group or hydroxyl group content of the porous resin is calculated.
В некоторых вариантах осуществления подробная операция выглядит следующим образом: 1,0 г носителя точно взвешивают и суспендируют в 7 мл раствора ацетонитрила, затем туда добавляют 0,5 г Fmoc-Leu-OH, 0,5 г HBTU и 0,5 мл DIEA и в течение 2 ч перемешивают при комнатной температуре для проведения реакции. По завершении реакции смолу промывают последовательно ацетонитрилом (три раза, по 10 мл каждый раз) и метанолом (три раза, по 10 мл каждый раз), а затем смолу просушивают. Точно отвешивают 0,1000 г смолы, суспендируют в 20%-м растворе пиперидина/DMF (об./об.) и встряхивают в течение 30 мин при комнатной температуре, фильтруют и собирают фильтрат. Эту смолу промывают DMF и фильтрат собирают. Фильтраты объединяют для получения общего объема, а затем растворяют соответствующее количество раз, чтобы измерить поглощательную способность при 300 нм. Проводят аналогичные реакции удаления Fmoc, используя серию известных концентраций Fmoc-Leu-OH, и измеряют поглощательную способность для построения стандартной кривой. Содержание аминогруппы или гидроксильной группы в пористой смоле вычисляют с помощью стандартной кривой.In some embodiments, the detailed operation is as follows: 1.0 g of the carrier is accurately weighed and suspended in 7 ml of acetonitrile solution, then 0.5 g of Fmoc-Leu-OH, 0.5 g of HBTU and 0.5 ml of DIEA are added thereto, and stir for 2 hours at room temperature to carry out the reaction. Once the reaction is complete, the resin is washed successively with acetonitrile (three times, 10 mL each time) and methanol (three times, 10 mL each time), and then the resin is dried. Accurately weigh 0.1000 g of resin, suspend it in 20% piperidine/DMF (v/v) and shake for 30 min at room temperature, filter and collect the filtrate. This resin is washed with DMF and the filtrate is collected. The filtrates are combined to obtain the total volume and then diluted an appropriate number of times to measure the absorbance at 300 nm. Carry out similar Fmoc removal reactions using a series of known concentrations of Fmoc-Leu-OH and measure the absorbance to construct a standard curve. The amino group or hydroxyl group content of the porous resin is calculated using a standard curve.
Загрузка пористой смолы зависит от процентного содержания функциональных мономеров в общей массе мономеров, и корректируя количество функциональных мономеров, можно получить серию пористых смол с различной загрузкой. Загрузка пористой смолы определяет количество синтезированных олигонуклеотидов; если загрузка слишком мала, выход олигонуклеотидов в одной партии будет уменьшен, а если загрузка слишком высокая, это скажется на чистоте олигонуклеотидов. В настоящем изобретении загрузка пористой смолы составляет 100–1000 мкмоль/г, предпочтительно 400–700 мкмоль/г.The loading of the porous resin depends on the percentage of functional monomers in the total mass of monomers, and by adjusting the amount of functional monomers, a series of porous resins with different loadings can be obtained. The loading of the porous resin determines the amount of oligonucleotides synthesized; if the loading is too low, the yield of oligonucleotides per batch will be reduced, and if the loading is too high, the purity of the oligonucleotides will be affected. In the present invention, the loading of the porous resin is 100-1000 μmol/g, preferably 400-700 μmol/g.
Размер частиц в настоящем изобретении измеряется с помощью прибора для обработки изображений частиц. Пористую смолу равномерно распределяют на предметном стекле и наблюдают под микроскопом при увеличении, при этом увеличенные изображения частиц пористой смолы фиксируются камерой. Морфологические характеристики и размер частиц пористой смолы анализируются и вычисляются компьютером.The particle size in the present invention is measured using a particle imaging apparatus. The porous resin is spread evenly on a glass slide and observed under a microscope under magnification, with magnified images of the porous resin particles captured by the camera. The morphological characteristics and particle size of the porous resin are analyzed and calculated by computer.
Размер частиц пористой смолы в основном зависит от типа и количества диспергирующего вещества, присутствующего в водной фазе, а также типа и количества порообразующих агентов и скорости перемешивания во время полимеризации суспензии. Размер частиц пористой смолы можно регулировать путем коррекции вышеуказанных условий. Если размер частиц пористой смолы слишком велик, с одной стороны, это приведет к уменьшению удельной площади поверхности носителя и увеличит количество активных участков на единицу площади, что скажется на чистоте олигонуклеотидов; с другой стороны, если размер частиц слишком велик, это замедлит скорость переноса масс и приведет к увеличению загрязняющих примесей во время синтеза олигонуклеотидов. Если размер частиц пористой смолы слишком мал, это приведет к слишком высокому давлению в процессе синтеза и сильно увеличит стоимость оборудования. В настоящем изобретении пористая смола имеет размер частиц в диапазоне 35–200 мкм, предпочтительно 50–100 мкм.The particle size of the porous resin mainly depends on the type and amount of dispersant present in the aqueous phase, as well as the type and amount of blowing agents and the mixing rate during suspension polymerization. The particle size of the porous resin can be controlled by correcting the above conditions. If the particle size of the porous resin is too large, on the one hand, this will lead to a decrease in the specific surface area of the carrier and will increase the number of active sites per unit area, which will affect the purity of the oligonucleotides; on the other hand, if the particle size is too large, it will slow down the mass transfer rate and lead to increased contaminants during oligonucleotide synthesis. If the particle size of the porous resin is too small, it will result in too high pressure during the synthesis process and greatly increase the cost of the equipment. In the present invention, the porous resin has a particle size in the range of 35-200 μm, preferably 50-100 μm.
Средний диаметр частиц пористой резины измеряют методом интрузии ртути. Образцы массой 0,1500–0,3000 г точно отвесили и поместили в автоматический ртутный порозиметр AutoPore IV 9500 (Micromeritics Instrument Co.). Угол смачивания ртутью установили на 130° и натяжение поверхности установили на 485 дин/см, а затем провели измерение методом интрузии ртути в этих условиях. Средний диаметр пор пористой смолы в основном зависит от типа и количества порообразующих агентов, количества поперечно-сшивающего вещества, температуры и времени реакции и т. д. Средний диаметр пор пористой смолы можно регулировать путем коррекции этих условий. Если средний диаметр пор пористой смолы слишком мал, это затруднит перенос масс и скажется на эффективности синтеза, если средний диаметр пор слишком велик, это приведет к уменьшению удельной площади поверхности пористой смолы и увеличит количество активных участков на единицу площади. Во время синтеза олигонуклеотидов рост нуклеотидов приведет к взаимному влиянию и скажется на чистоте олигонуклеотидов. В настоящем изобретении пористая смола имеет средний диаметр пор 10–200 нм, предпочтительно 40–100 нм.The average diameter of foam rubber particles is measured by the mercury intrusion method. Samples weighing 0.1500–0.3000 g were accurately weighed and placed in an AutoPore IV 9500 automatic mercury porosimeter (Micromeritics Instrument Co.). The mercury contact angle was set to 130° and the surface tension was set to 485 dyne/cm, and then the mercury intrusion measurement was carried out under these conditions. The average pore diameter of the porous resin mainly depends on the type and amount of pore-forming agents, the amount of cross-linking agent, the reaction temperature and time, etc. The average pore diameter of the porous resin can be adjusted by adjusting these conditions. If the average pore diameter of the porous resin is too small, it will hinder mass transfer and affect the synthesis efficiency, if the average pore diameter is too large, it will reduce the specific surface area of the porous resin and increase the number of active sites per unit area. During the synthesis of oligonucleotides, the growth of nucleotides will interfere with each other and affect the purity of the oligonucleotides. In the present invention, the porous resin has an average pore diameter of 10-200 nm, preferably 40-100 nm.
По сравнению с известным уровнем техники настоящее изобретение имеет четыре главных преимущества: во-первых, модифицированный мономер может регулировать скорость полимеризации и способствовать равномерному распределению активных участков. Во-вторых, характеристики набухания смолы регулируются для уменьшения вариации объема набухания носителя в различных растворителях. В-третьих, две цианогруппы в молекулярной структуре мономера делают отвердитель ониевых солей более эффективным и обеспечивают эффективность линкерного соединения. В-четверых, по сравнению с US8592542, в котором в качестве «модифицированного мономера» использовали мономеры метакриламида, и US8653152, в котором метакрилонитрил, модифицированный мономер, используемый в настоящем изобретении, более гидрофобный, так что ничтожно малое количество воды, остающейся в пористой смоле, может быть быстро удалено в ходе процесса промывки, что уменьшает влияние воды на процесс синтеза олигонуклеотидов и улучшает эффективность и выход реакции. В то же время, в настоящем изобретении в качестве матриц для формирования пор используются маслорастворимые поверхностно-активные вещества и капли эмульсии типа «вода в масле», так что диаметром пор и распределением пор носителя по размеру можно точно управлять, что способствует диффузии реагентов реакции, улучшающей эффективность реакции и уменьшающей образование загрязняющих примесей.Compared with the prior art, the present invention has four major advantages: first, the modified monomer can control the polymerization rate and promote uniform distribution of active sites. Second, the swelling characteristics of the resin are controlled to reduce the variation in the swelling volume of the carrier in different solvents. Third, the two cyano groups in the molecular structure of the monomer make the onium salt hardener more effective and ensure the effectiveness of the linker compound. Fourth, compared to US8592542, which used methacrylamide monomers as the “modified monomer,” and US8653152, which used methacrylonitrile, the modified monomer used in the present invention is more hydrophobic, so that negligible amount of water remains in the porous resin , can be quickly removed during the washing process, which reduces the influence of water on the oligonucleotide synthesis process and improves the efficiency and yield of the reaction. At the same time, the present invention uses oil-soluble surfactants and water-in-oil emulsion droplets as pore-forming matrices, so that the pore diameter and pore size distribution of the carrier can be precisely controlled, which promotes the diffusion of reaction reagents, improving reaction efficiency and reducing the formation of contaminants.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
На Фиг. 1 показано полученное сканирующим электронным микроскопом изображение носителя, приведенного в примере 1.In FIG. Figure 1 shows a scanning electron microscope image of the carrier shown in example 1.
На Фиг. 2 показано полученное сканирующим электронным микроскопом изображение носителя, приведенного в примере 2.In FIG. Figure 2 shows a scanning electron microscope image of the carrier shown in example 2.
На Фиг. 3 показано полученное сканирующим электронным микроскопом изображение носителя, приведенного в примере 6.In FIG. Figure 3 shows a scanning electron microscope image of the carrier shown in example 6.
На Фиг. 4 показано полученное сканирующим электронным микроскопом изображение носителя, приведенного в примере 9.In FIG. Figure 4 shows a scanning electron microscope image of the carrier shown in example 9.
На Фиг. 5 показано распределение пор носителя по размеру в примере 1, измеренное методом интрузии ртути.In FIG. Figure 5 shows the pore size distribution of the carrier in Example 1, measured by the mercury intrusion method.
На Фиг. 6 показано распределение пор носителя по размер в примере 2, измеренное методом интрузии ртути.In FIG. 6 shows the pore size distribution of the carrier in Example 2, measured by the mercury intrusion method.
На Фиг. 7 показано распределение пор носителя по размер в примере 6, измеренное методом интрузии ртути.In FIG. 7 shows the pore size distribution of the support in Example 6, measured by the mercury intrusion method.
На Фиг. 8 показано распределение пор носителя по размер в примере 9, измеренное методом интрузии ртути.In FIG. Figure 8 shows the pore size distribution of the support in Example 9, measured by the mercury intrusion method.
ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ IMPLEMENTATION OF THE INVENTION
Настоящая заявка будет проиллюстрирована далее со ссылкой на следующие варианты осуществления. Однако эти варианты осуществления являются лишь иллюстрацией, а не ограничениями настоящего изобретения, подробно изложенного в формуле изобретения.The present application will be illustrated below with reference to the following embodiments. However, these embodiments are merely illustrative and not limiting of the present invention as detailed in the claims.
Пример 1Example 1
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 110 г стирола, 10 г дивинилбензола (80 мас.%), 12 г. п-хлорметилстирола, 8 г фумаронитрила, 5 г сорбитмоноолеата, 45 г изооктанола и 2,5 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 80 °C для выполнения полимеризации в течение 4 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы с содержанием хлора 550 мкмоль/г.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 110 g styrene, 10 g divinylbenzene (80 wt%), 12 g p-chloromethylstyrene, 8 g fumaronitrile, 5 g sorbitol monooleate, 45 g isooctanol and 2.5 g benzoyl peroxide and mix well to obtain an oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 80 °C to perform polymerization for 4 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then vacuum dried to obtain a polymeric porous resin with a chlorine content of 550 μmol/g.
50 г полимерной пористой смолы и 500 мл N,N-диметилформамида добавляли в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивали. Затем добавляют 30 г фталимида калия и увеличивают температуру до 95 °C для проведения реакции в течение 16 часов. По завершении реакции охлаждают до комнатной температуры, дважды промывают N,N-диметилформамидом, промывают очищенной водой до нейтрального состояния и трижды промывают абсолютным этанолом, а затем смолу отфильтровывают и сушат. Добавляют в реактор 200 г абсолютного этанола и 50 г гидразингидрата и нагревают до температуры 75 °C для проведения реакции в течение 16 часов. После этого трижды промывают раствором этанол/очищенная вода в объемном соотношении 50:50, промывают очищенной водой до нейтрального состояния, трижды промывают абсолютным этанолом, а затем смолу отфильтровывают и сушат. Добавляют в реактор 200 г абсолютного этанола и 50 г концентрированной хлористо-водородной кислоты и нагревают до температуры 60 °C для проведения реакции в течение 6 часов. После этого охлаждают до комнатной температуры, промывают водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием аминогрупп 543 мкмоль/г и средним диаметром пор 48 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 500 mL N,N-dimethylformamide were added to a 1-L reactor equipped with a condenser, stirrer, and thermometer and stirred. 30 g of potassium phthalimide is then added and the temperature is increased to 95 °C to allow the reaction to proceed for 16 hours. After completion of the reaction, cool to room temperature, wash twice with N,N-dimethylformamide, wash with purified water until neutral, and wash three times with absolute ethanol, and then the resin is filtered and dried. 200 g absolute ethanol and 50 g hydrazine hydrate were added to the reactor and heated to 75 °C to react for 16 h. After this, it is washed three times with a solution of ethanol/purified water in a volume ratio of 50:50, washed with purified water until neutral, washed three times with absolute ethanol, and then the resin is filtered and dried. Add 200 g of absolute ethanol and 50 g of concentrated hydrochloric acid to the reactor and heat it to 60 °C to react for 6 hours. Thereafter, it is cooled to room temperature, washed with water until neutral, and then dried in vacuum to obtain a support for solid phase synthesis with an amino group content of 543 µmol/g and an average pore diameter of 48 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 2Example 2
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 70 г метилстирола, 28 г дивинилбензола (80 мас.%), 14 г p-хлорметилстирола, 28 г 1,4-дисиано-2-бутена, 6 г сорбитантриолеата, 45 г изооктанола, 30 г толуола и 1 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 70 °C для выполнения полимеризации в течение 8 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы с содержанием хлора 660 мкмоль/г.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 70 g methylstyrene, 28 g divinylbenzene (80 wt%), 14 g p-chloromethylstyrene, 28 g 1,4-disiano-2-butene, 6 g sorbitan trioleate, 45 g isooctanol, 30 g toluene and 1 g benzoyl peroxide and mix well to obtain an oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 70°C to perform polymerization for 8 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then vacuum dried to obtain a polymeric porous resin with a chlorine content of 660 μmol/g.
50 г полимерной пористой смолы и 500 мл N,N-диметилформамида добавляли в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивали. Затем добавляют 35 г фталимида калия и увеличивают температуру до 95 °C для проведения реакции в течение 16 часов. По завершении реакции охлаждают до комнатной температуры, дважды промывают N,N-диметилформамидом, промывали очищенной водой до нейтрального состояния и трижды промывают абсолютным этанолом, а затем смолу отфильтровывают и сушат. Добавляют в реактор 200 г абсолютного этанола и 50 г гидразингидрата и нагревают до температуры 75 °C для проведения реакции в течение 16 часов. После этого трижды промывают раствором этанол/очищенная вода в объемном соотношении 50:50, промывают очищенной водой до нейтрального состояния и трижды промывают абсолютным этанолом, а затем смолу отфильтровывают и сушат. Добавляют в реактор 200 г абсолютного этанола и 50 г концентрированной хлористо-водородной кислоты и нагревают до температуры 60 °C для проведения реакции в течение 6 часов. После этого охлаждают до комнатной температуры, промывают водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием аминогрупп 650 мкмоль/г и средним диаметром пор 132 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 500 mL N,N-dimethylformamide were added to a 1-L reactor equipped with a condenser, stirrer, and thermometer and stirred. 35 g of potassium phthalimide is then added and the temperature is increased to 95 °C to allow the reaction to proceed for 16 hours. After completion of the reaction, cool to room temperature, wash twice with N,N-dimethylformamide, wash with purified water until neutral, and wash three times with absolute ethanol, and then the resin is filtered and dried. 200 g absolute ethanol and 50 g hydrazine hydrate were added to the reactor and heated to 75 °C to react for 16 h. After this, it is washed three times with a solution of ethanol/purified water in a 50:50 volume ratio, washed with purified water until neutral, and washed three times with absolute ethanol, and then the resin is filtered and dried. Add 200 g of absolute ethanol and 50 g of concentrated hydrochloric acid to the reactor and heat it to 60 °C to react for 6 hours. Thereafter, it is cooled to room temperature, washed with water until neutral, and then dried in vacuum to obtain a support for solid phase synthesis with an amino group content of 650 μmol/g and an average pore diameter of 132 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 3Example 3
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 127 г этилстирола, 4 г дивинилбензола (80 мас.%), 8,8 г 4-(4-бромобутил)стирола, 0,2 г фумаронитрила, 1 г полиоксиэтиленсорбита, полученного из пчелиного воска, 12 г изооктанола, 12 г дибутилфталата и 2,5 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 65 °C для выполнения полимеризации в течение 10 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы с содержанием брома 265 мкмоль/г.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 127 g ethylstyrene, 4 g divinylbenzene (80 wt%), 8.8 g 4-(4-bromobutyl)styrene, 0.2 g fumaronitrile, 1 g polyoxyethylene sorbitol derived from beeswax, 12 g isooctanol, 12 g dibutyl phthalate and 2.5 g benzoyl peroxide and mix well to obtain an oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 65 °C to perform polymerization for 10 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then vacuum dried to obtain a polymeric porous resin with a bromine content of 265 μmol/g.
50 г полимерной пористой смолы и 600 мл N,N-диметилформамида добавляли в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивали. Затем добавляют 5,4 г p-гидроксибензойной кислоты, 5,4 г обезвоженного карбоната калия и 0,3 г йодида калия и нагревают до температуры 75 °C для проведения реакции в течение 6 часов. По завершении реакции охлаждают до комнатной температуры, промывают очищенной водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием гидроксильной группы 250 мкмоль/г и средним диаметром пор 23 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 600 mL N,N-dimethylformamide were added to a 1-L reactor equipped with a condenser, stirrer, and thermometer and stirred. Then 5.4 g p-hydroxybenzoic acid, 5.4 g anhydrous potassium carbonate and 0.3 g potassium iodide are added and heated to 75 °C to react for 6 h. Upon completion of the reaction, cool to room temperature, wash with purified water until neutral, and then dry in vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with a hydroxyl group content of 250 μmol/g and an average pore diameter of 23 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 4Example 4
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 110 г стирола, 11 г дивинилбензола (80 мас.%), 9 г p-хлорметилстирола, 10 г фумаронитрила, 0,5 г сорбитантристеарата, 20 г толуола, 40 г дибутилфталата и 1 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 60 °C для выполнения полимеризации в течение 7 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы с содержанием хлора 425 мкмоль/г.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 110 g styrene, 11 g divinylbenzene (80 wt%), 9 g p-chloromethylstyrene, 10 g fumaronitrile, 0.5 g sorbitan tristearate, 20 g toluene, 40 g dibutyl phthalate and 1 g benzoyl peroxide and mix well to obtain the oil phase . The oil phase is added to the reactor, stirred and heated to 60 °C to perform polymerization for 7 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then vacuum dried to obtain a polymeric porous resin with a chlorine content of 425 μmol/g.
50 г полимерной пористой смолы и 300 мл абсолютного этанола добавляли в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивали. В химическом стакане отвешивают 30 г гидроокиси натрия, растворяют в 300 мл деионизированной воды и медленно добавляют в реактор. Температуру поднимают до 65 °C для проведения реакции в течение 6 часов. По завершении реакции охлаждают до комнатной температуры, промывают очищенной водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием гидроксильной группы 420 мкмоль/г и средним диаметром пор 43 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 300 mL absolute ethanol were added to a 1-L reactor equipped with a condenser, stirrer, and thermometer and stirred. 30 g of sodium hydroxide is weighed into a beaker, dissolved in 300 ml of deionized water and slowly added to the reactor. The temperature is raised to 65°C to allow the reaction to proceed for 6 hours. Upon completion of the reaction, cool to room temperature, wash with purified water until neutral, and then dry in vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with a hydroxyl group content of 420 μmol/g and an average pore diameter of 43 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 5Example 5
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 83 г стирола, 25 г дивинилбензола (80 мас.%), 18 г N-(4-винил-фенил)ацетамида, 14 г фумаронитрила, 3 г сорбитантристеарата, 16 г изооктанола, 8 г изододекана и 2 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 55 °C для выполнения полимеризации в течение 10 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 83 g styrene, 25 g divinylbenzene (80 wt%), 18 g N-(4-vinyl-phenyl)acetamide, 14 g fumaronitrile, 3 g sorbitan tristearate, 16 g isooctanol, 8 g isododecane and 2 g benzoyl peroxide and well stirred to obtain an oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 55°C to perform polymerization for 10 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then dried under vacuum to obtain a polymeric porous resin.
50 г полимерной пористой смолы и 300 мл абсолютного этанола добавляли в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивали. В химическом стакане отвешивают 30 г гидроокиси натрия, растворяют в 300 мл деионизированной воды и медленно добавляют в реактор. Температуру поднимают до 65 °C для проведения реакции в течение 6 часов. По завершении реакции охлаждают до комнатной температуры, промывают очищенной водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием аминогрупп 840 мкмоль/г и средним диаметром пор 43 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 300 mL absolute ethanol were added to a 1-L reactor equipped with a condenser, stirrer, and thermometer and stirred. 30 g of sodium hydroxide is weighed into a beaker, dissolved in 300 ml of deionized water and slowly added to the reactor. The temperature is raised to 65°C to allow the reaction to proceed for 6 hours. Upon completion of the reaction, cool to room temperature, wash with purified water until neutral, and then dry in vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with an amino group content of 840 μmol/g and an average pore diameter of 43 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 6Example 6
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 111 г стирола, 11 г дивинилбензола (80 мас.%), 13 г 4-ацетоксистирола, 5 г фумаронитрила, 8 г сорбитмоноолеата, 40 г изооктанола, 20 г изододекана и 2,5 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 78 °C для выполнения полимеризации в течение 6 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы. 2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 111 g styrene, 11 g divinylbenzene (80 wt%), 13 g 4-acetoxystyrene, 5 g fumaronitrile, 8 g sorbitol monooleate, 40 g isooctanol, 20 g isododecane and 2.5 g benzoyl peroxide and mix well to obtain the oil phase. . The oil phase is added to the reactor, stirred and heated to 78°C to perform polymerization for 6 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then dried under vacuum to obtain a polymeric porous resin.
50 г полимерной пористой смолы и 300 мл ацетонитрила добавляют в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивают. Медленно добавляют 7,5 мл гидразингидрата для проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре. После этого промывают водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием гидроксильной группы 550 мкмоль/г и средним диаметром пор 64 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 300 ml acetonitrile are added to a 1-liter reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and mixed. 7.5 mL of hydrazine hydrate was added slowly to react for 3 h at room temperature. Thereafter, it was washed with water until neutral, and then dried under vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with a hydroxyl group content of 550 μmol/g and an average pore diameter of 64 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 7Example 7
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 130 г стирола, 5 г дивинилбензола (80 мас.%), 4 г 4-ацетоксистирола, 1 г фумаронитрила, 1 г эфира жирной кислоты пропиленгликоля, 40 г изооктанола, 10 г толуола и 3,5 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 70 °C для выполнения полимеризации в течение 6 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы. 2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 130 g styrene, 5 g divinylbenzene (80 wt%), 4 g 4-acetoxystyrene, 1 g fumaronitrile, 1 g propylene glycol fatty acid ester, 40 g isooctanol, 10 g toluene and 3.5 g benzoyl peroxide and mix well to obtaining the oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 70°C to perform polymerization for 6 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then dried under vacuum to obtain a polymeric porous resin.
50 г полимерной пористой смолы и 300 мл ацетонитрила добавляют в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивают. Медленно добавляют 7,5 мл гидразингидрата для проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре. После этого промывают водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием гидроксильной группы 175 мкмоль/г и средним диаметром пор 53 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 300 ml acetonitrile are added to a 1-liter reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and mixed. 7.5 mL of hydrazine hydrate was added slowly to react for 3 h at room temperature. Thereafter, it was washed with water until neutral and then dried under vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with a hydroxyl group content of 175 μmol/g and an average pore diameter of 53 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 8Example 8
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 72 стирола, 28 г дивинилбензола (80 мас.%), 27 г бензоилоксистирола, 13 г фумаронитрила, 5 г гидроксилированного ланолина, 10 г толуола, 20 г дибутилфталата и 3 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 80 °C для выполнения полимеризации в течение 6 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 72 styrene, 28 g divinylbenzene (80 wt%), 27 g benzoyloxystyrene, 13 g fumaronitrile, 5 g hydroxylated lanolin, 10 g toluene, 20 g dibutyl phthalate and 3 g benzoyl peroxide and mix well to obtain an oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 80 °C to perform polymerization for 6 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then dried under vacuum to obtain a polymeric porous resin.
50 г полимерной пористой смолы и 300 мл ацетонитрила добавляют в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивают. Медленно добавляют 7,5 мл гидразингидрата для проведения реакции в течение 3 ч при комнатной температуре. После этого промывают водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием гидроксильной группы 852 мкмоль/г и средним диаметром пор 47 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 300 ml acetonitrile are added to a 1-liter reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and mixed. 7.5 mL of hydrazine hydrate was added slowly to react for 3 h at room temperature. Thereafter, it was washed with water until neutral, and then dried under vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with a hydroxyl group content of 852 μmol/g and an average pore diameter of 47 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 9Example 9
2 л очищенной воды, 20 г поливинилового спирта и 60 г хлорида натрия добавляют в 3-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и растворяют для получения водяной фазы. Отвешивают 85 г стирола, 24 г дивинлибензола (80 мас.%), 18 г метил-4-винилбензоата, 13 г фумаронитрила, 4 г полиоксиэтиленсорбитолеата, 40 г изододекана, 40 г дибутилфталата и 2,5 г пероксида бензоила и хорошо перемешивают для получения масляной фазы. Масляную фазу добавляют в реактор, перемешивают и нагревают до температуры 70 °C для выполнения полимеризации в течение 6 часов. По завершении полимеризации промывают горячей водой. Удаляют порообразующие агенты путем экстракции орошением этанолом. Смолу с размером частиц 50–100 мкм отсеивают и собирают, а затем сушат в вакууме для получения полимерной пористой смолы.2 L of purified water, 20 g of polyvinyl alcohol and 60 g of sodium chloride are added to a 3-L reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and dissolved to obtain the aqueous phase. Weigh out 85 g styrene, 24 g divinlibenzene (80 wt%), 18 g methyl 4-vinyl benzoate, 13 g fumaronitrile, 4 g polyoxyethylene sorbitoleate, 40 g isododecane, 40 g dibutyl phthalate and 2.5 g benzoyl peroxide and mix well to obtain oil phase. The oil phase is added to the reactor, mixed and heated to 70°C to perform polymerization for 6 hours. Upon completion of polymerization, wash with hot water. Pore-forming agents are removed by extraction with ethanol irrigation. Resin with a particle size of 50–100 μm is screened and collected and then dried under vacuum to obtain a polymeric porous resin.
50 г полимерной пористой смолы и 300 мл ацетонитрила добавляют в 1-литровый реактор, оборудованный конденсатором, мешалкой и термометром, и перемешивают. Добавляют 8,8 г гидрохинона 23 г HBTU и 13 мл DIEA для проведения реакции в течение 2 ч при комнатной температуре. После этого промывают водой до нейтрального состояния, и затем сушат в вакууме для получения носителя для твердофазного синтеза с содержанием гидроксильной группы 735 мкмоль/г и средним диаметром пор 143 нм, измеренным методом интрузии ртути.50 g polymer porous resin and 300 ml acetonitrile are added to a 1-liter reactor equipped with a condenser, stirrer and thermometer and mixed. Add 8.8 g hydroquinone 23 g HBTU and 13 mL DIEA to react for 2 h at room temperature. After this, it was washed with water until neutral and then dried in vacuum to obtain a solid-phase synthesis support with a hydroxyl group content of 735 μmol/g and an average pore diameter of 143 nm, measured by the mercury intrusion method.
Пример 10Example 10
Свойства набухания носителей твердофазного синтеза, полученных в примерах 1–9, измеряют в ацетонитриле и толуоле, соответственно. Способ следующий: отвешивают около 1,5 г образца и помещают в измерительную пробирку с притертой пробкой. В соответствующей пропорции добавляют толуол или ацетонитрил. Затем смолы и растворитель перемешивают стеклянной палочкой до полного набухания и плотно закрывают пробкой. 2–3 часа спустая смолы и медленно перемешивают стеклянной палочкой, чтобы удалить пузырьки воздуха и равномерно распределить смолу без образования комков. Стеклянную палочку вынимают, и измерительную пробирку помещают на стол с резиновым ковриком и подвергают вибрации для компактного уплотнения смолы. После выдерживания в течение 24 часов объем записывают и вычисляют степень набухания.The swelling properties of solid-phase synthesis supports obtained in examples 1–9 are measured in acetonitrile and toluene, respectively. The method is as follows: weigh about 1.5 g of the sample and place it in a measuring tube with a ground stopper. Toluene or acetonitrile is added in appropriate proportions. Then the resins and solvent are mixed with a glass rod until completely swollen and tightly closed with a stopper. Let the resin sit for 2-3 hours and stir slowly with a glass rod to remove air bubbles and distribute the resin evenly without forming lumps. The glass rod is removed and the measuring tube is placed on a table with a rubber mat and vibrated to compact the resin. After standing for 24 hours, the volume is recorded and the degree of swelling is calculated.
Результаты показаны в таблице 1:The results are shown in Table 1:
Пример 11Example 11
Оценивают свойства носителей для твердофазного синтеза, полученных в примерах, и синтетических носителей NittoPhase HL для твердофазного синтеза. Чтобы лучше показать преимущества настоящего изобретения, объем (г) загрузки носителей = объему (мл) колонки для синтеза/степень набухания носителя в толуоле (мл/г), а объем промывки ограничен объемом одной колонки для синтеза во время синтеза олигонуклеотидов.The properties of the solid phase synthesis supports obtained in the examples and the synthetic NittoPhase HL solid phase synthesis supports are evaluated. To better demonstrate the advantages of the present invention, volume (g) of support loading = volume (ml) of synthesis column/swelling rate of support in toluene (ml/g), and the washing volume is limited to the volume of one synthesis column during the synthesis of oligonucleotides.
10 г носителя для твердофазного синтеза отвешивают в реактор и оставляют набухать в 50 мл ацетонитрила в течение 10 минут, а затем туда добавляют соответствующее количество DMT-dT-3'-янтарной кислоты, HBTU и DIEA для проведения реакции при комнатной температуре в течение 12 ч. По завершении реакции 5 раз промывают ацетонитрилом. Затем добавляют кэп А (состоящий из 20 мл ацетонитрила, 7,5 мл пиридина и 5,0 мл N-метилимидазола) и кэп В (состоящий из 10 мл ацетонитрила и 4 мл уксусного ангидрида) для проведения реакции при комнатной температуре в течение 30 минут. По завершении реакции смолу промывают 5 раз ацетонитрилом и сушат в вакууме для получения носителя, загруженного DMT-dT. Загруженные группы DMT удаляют с помощью раствора p-толуолсульфоновой кислоты/ацетонитрила. Содержание групп DMT, загруженных в носитель, определяют с помощью спектрометрии при длине волн 412 нм, и результаты показаны в таблице 2.10 g of solid-phase synthesis support is weighed into the reactor and left to swell in 50 mL of acetonitrile for 10 min, and then the appropriate amount of DMT-dT-3'-succinic acid, HBTU and DIEA is added thereto to react at room temperature for 12 h Upon completion of the reaction, wash with acetonitrile 5 times. Cap A (consisting of 20 ml acetonitrile, 7.5 ml pyridine and 5.0 ml N-methylimidazole) and cap B (consisting of 10 ml acetonitrile and 4 ml acetic anhydride) are then added to react at room temperature for 30 minutes . Upon completion of the reaction, the resin was washed 5 times with acetonitrile and dried under vacuum to obtain a DMT-dT-loaded carrier. Loaded DMT groups are removed using p-toluenesulfonic acid/acetonitrile solution. The content of DMT groups loaded into the carrier was determined by spectrometry at 412 nm, and the results are shown in Table 2.
Носители, загруженные DMT-dT, взвешивают, и заполняют ими колонку для синтеза (32 мм). Колонку для синтеза устанавливают на AKTA OligoPilot 100, чтобы синтезировать олигонуклеотид длиной в 20 оснований, имеющий последовательность d[ACGTACGTACGTACGTACGT]. Процесс синтаза: 1. смолу подвергают набуханию в дихлорметане; 2. удаляют группы DMT 10%-м DCA/DCM; 3. промывают обезвоженным ацетонитрилом; 4. добавляют мономер фосфорамидита и активирующий реагент для проведения конденсации; 5. промывают обезвоженным ацетонитрилом; 6. добавляют окислительный агент для проведения окисления; 7. промывают обезвоженным ацетонитрилом; 8. добавляют кэпирующий реагент для проведения кэпирования конца; 9. промывают обезвоженным ацетонитрилом; и 10. повторяют этап 2, чтобы начать следующий цикл.The DMT-dT-loaded supports are weighed and loaded onto a synthesis column (32 mm). The synthesis column is set up on an AKTA OligoPilot 100 to synthesize a 20 base oligonucleotide having the sequence d[ACGTACGTACGTACGTACGT]. Synthase process: 1. the resin is swollen in dichloromethane; 2. remove DMT groups with 10% DCA/DCM; 3. washed with anhydrous acetonitrile; 4. add phosphoramidite monomer and activating reagent to carry out condensation; 5. washed with anhydrous acetonitrile; 6. add an oxidizing agent to carry out oxidation; 7. washed with anhydrous acetonitrile; 8. add a capping reagent to perform end capping; 9. washed with anhydrous acetonitrile; and 10. repeat step 2 to begin the next cycle.
По завершении синтеза носители извлекают для сушки. Затем их помещают в склянку, и туда добавляют надлежащее количество концентрированной аммиачной воды для проведения реакции при температуре 55 °C в течение 16 ч, чтобы олигонуклеотиды отщепились от носителей при одновременном удалении защитных групп на основаниях. Носитель и олигонуклеотиды отделяют друг от друга посредством фильтрации, и фильтрат высушивают для получения необработанного порошка олигонуклеотидов. Измеряют чистоту олигонуклеотидов с помощью ВЭЖХ и вычисляют выход олигонуклеотидов. Результаты показаны в таблице 2.Upon completion of the synthesis, the supports are removed for drying. They are then placed in a flask and the appropriate amount of concentrated ammonia water is added to react at 55°C for 16 hours to allow the oligonucleotides to be cleaved from the supports while removing the protecting groups on the bases. The carrier and oligonucleotides are separated from each other by filtration, and the filtrate is dried to obtain a crude oligonucleotide powder. The purity of the oligonucleotides is measured by HPLC and the yield of oligonucleotides is calculated. The results are shown in Table 2.
Как можно увидеть из таблицы 2, использование для носителя твердофазного синтеза олигонуклеотидов согласно настоящему изобретению может улучшить выход и чистоту олигонуклеотидов и, таким образом, помогает уменьшить издержки производства нуклеотидов.As can be seen from Table 2, the use of a solid-phase oligonucleotide synthesis vehicle according to the present invention can improve the yield and purity of oligonucleotides and thus help reduce the cost of nucleotide production.
Вышеприведенные примеры и технические решения являются лишь предпочтительными вариантами осуществления настоящего изобретения. Следует отметить, что для специалистов в данной области техники любые изменения или модификации, вытекающие из сущности настоящего изобретения, остаются в пределах объема охраны настоящего изобретения.The above examples and technical solutions are only preferred embodiments of the present invention. It should be noted that for those skilled in the art, any changes or modifications resulting from the spirit of the present invention remain within the scope of protection of the present invention.
Claims (55)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011357390X | 2020-11-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2023103704A RU2023103704A (en) | 2023-04-20 |
| RU2815371C2 true RU2815371C2 (en) | 2024-03-13 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006029023A2 (en) * | 2004-09-02 | 2006-03-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polymeric beads for oligonucleotide synthesis |
| US8592542B2 (en) * | 2008-06-25 | 2013-11-26 | Nitto Denko Corporation | Porous resin beads and method of producing nucleic acid using the same |
| US8653152B2 (en) * | 2009-09-17 | 2014-02-18 | Nitto Denko Corporation | Porous resin bead and method for producing nucleic acid using the same |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006029023A2 (en) * | 2004-09-02 | 2006-03-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polymeric beads for oligonucleotide synthesis |
| US8592542B2 (en) * | 2008-06-25 | 2013-11-26 | Nitto Denko Corporation | Porous resin beads and method of producing nucleic acid using the same |
| US8653152B2 (en) * | 2009-09-17 | 2014-02-18 | Nitto Denko Corporation | Porous resin bead and method for producing nucleic acid using the same |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Бабаев Е. В. Твердофазный синтез для начинающих: выбор инструментария и техника проведения многостадийных превращений // Российский химический журнал. 2009. Т. 53. N. 5. С. 57-72. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP4177281A1 (en) | Porous resin used to solid phase synthesis and preparation method therefor | |
| EP4190825A1 (en) | Solid-phase synthesis carrier, preparation method therefor and use thereof | |
| US9045573B2 (en) | Solid-phase support for oligonucleotide synthesis and oligonucleotide synthesis method | |
| US8487013B2 (en) | Production method of porous resin particle having hydroxyl group | |
| WO2012128515A2 (en) | Polymer supported reagents and methods of reducing aromatic nitro compounds by using the same | |
| EP2298821B1 (en) | Porous resin bead and method for producing nucleic acid using the same | |
| JP2009280544A (en) | Carrier for solid phase synthesis of nucleic acid | |
| US8076383B2 (en) | Porous resin particle having hydroxy group or primary amino group and production method thereof | |
| RU2815371C2 (en) | Porous resin used for solid phase synthesis and method of its preparation | |
| EP2298820B1 (en) | Porous resin bead and method for producing nucleic acid using the same | |
| Akelah et al. | Synthesis and chemical modification of poly (methyl methacrylate) resins | |
| KR100257293B1 (en) | Method for manufacturing porous polymer particle | |
| EP2886564B1 (en) | Porous resin bead and production method of nucleic acid by using same | |
| RU2023103704A (en) | Porous resin used for solid phase synthesis and method for its production | |
| JPWO2022110560A5 (en) | ||
| CN116440819B (en) | Preparation method of carrier microsphere for solid phase synthesis of nucleic acid | |
| JP6041685B2 (en) | Solid phase carrier for nucleic acid synthesis and nucleic acid synthesis method | |
| JP2004075822A (en) | Method for producing crosslinked polymer particle | |
| CN112552456A (en) | Preparation method of carrier initial microspheres for uniform-particle-size DNA/RNA solid-phase synthesis |