RU2802972C2

RU2802972C2 - Фармацевтическая комбинация атипичного антипсихотика и модулятора nmda для лечения шизофрении, биполярного расстройства, когнитивного нарушения и клинической депрессии

Info

Publication number: RU2802972C2
Application number: RU2018116882A
Authority: RU
Inventors: Джозеф Р. МОСКАЛ; Хеберт МЕЛЬЦЕР
Original assignee: Нортвестерн Юниверсити
Priority date: 2015-10-16
Filing date: 2016-10-14
Publication date: 2023-09-05

Abstract

Данное описание относится к комбинациям модуляторов NMDA и атипичных антипсихотиков. В данном описании предложены, например, способы лечения шизофрении, биполярного расстройства и/или (расстройства) когнитивного нарушения у пациента, которому субхронически вводили антагонист NMDAR, включающие введение рапастинела и атипичного антипсихотика. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 7 пр., 3 ил.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА

[0001] В данной заявке заявлен приоритет на основании заявки на патент США № 62/242633, поданной 16 октября 2015 года, полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] N-Метил-D-аспартатные (NMDA) рецепторы (NMDAR) представляют собой постсинаптические ионотропные рецепторы, которые, inter alia, отвечают на действие возбуждающих аминокислот глутамата и глицина и синтетического соединения NMDA. NMDA-рецептор контролирует поток как двухвалентных, так и одновалентных ионов в постсинаптические нервные клетки через канал, связанный с рецептором. В период развития NMDA-рецептор участвует в процессе определения нейронной архитектуры и синаптической проводимости, и может быть вовлечен в зависимые от опыта синаптические модификации. Кроме того, NMDA-рецепторы, предположительно, вовлечены в долгосрочное потенцирование и расстройства центральной нервной системы.

[0003] Полагают, что NMDA-рецептор состоит из нескольких цепей белка, встроенных в постсинаптическую мембрану. Первые два типа субъединиц, открытых к настоящему времени, образуют большую внеклеточную область, которая, вероятно, содержит самую большую часть аллостерических связывающих сайтов, несколько трансмембранных областей, петлеобразных и сложенных так, чтобы образовать пору или канал, который является проницаемым для Ca⁺⁺, и карбоксильную концевую область. Открытие и закрытие канала регулируется связыванием различных лигандов с доменами (аллостерическими сайтами) белка, находящегося на внешней клеточной поверхности. Связывание лигандов предположительно влияет на конформационное изменение общей структуры белка, что в конечном итоге отражается на открытии, частичном открытии, частичном закрытии или закрытии канала.

[0004] Недавно было описано, что частичный агонист NMDAR, такой как рапастинел, улучшает решение зависимых от гиппокампа задач пространственного обучения у грызунов, указывая на то, что он может обладать свойством улучшения когнитивных функций, а также антидепрессивными свойствами. Рапастинел представлен следующей структурой:

,

с молекулярной массой: 413,47 и химической формулой: C₁₈H₃₁N₅O₆. Рапастинел демонстрирует ноотропное, нейропротекторное и антиноцицептивное действие и усиливает способность к обучению, запоминанию и познаванию in vivo.

[0005] Также было описано, что кетамин, неконкурентный антагонист NMDAR, обладает свойствами быстродействующего антидепрессанта; однако он также вызывает диссоциативные и подобные психотическим эффекты, а также ухудшение когнитивной функции у здоровых людей, и усугубляет психоз, но не когнитивное нарушение у пациентов с шизофренией. Кетамин также вызывает дефицит познавательной функции у грызунов, включая распознавание нового объекта (NOR), аналог декларативной памяти у человека. NOR зависит от совместного действия гиппокампа, энторинальной области, околоносовой и временной ассоциациативной коры и перфронтальной коры. Глутамат, действуя на NMDAR и рецепторы α-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовой кислоты (AMPA), оказывают выраженное влияние на синаптическую пластичность и, следовательно, играют важную роль в обучении и запоминании.

[0006] Сохраняется большая потребность в терапевтических средствах, т.е. лекарственных препаратах, которые можно вводить отдельно или в сочетании с другими активными агентами для лечения депрессии, например, пациентов с биполярной депрессией, и/или для лечения пациентов с шизофренией.

Краткое описание сущности изобретения

Данное описание отчасти характеризуется комбинациями, которые содержат один или более атипичных антипсихотиков и модулятор NMDA, такой как рапастинел и другие модуляторы NMDA, описанные в настоящем документе (каждый из которых иногда упоминают в данном документе как «компонент»). Благоприятный эффект указанной комбинации отчасти основан на установлении того факта, что введение рапастинела и атипичного антипсихотика (например, луразидона) (например, в суб-интенсивной дозе) может реверсировать и/или предупреждать вызванное антагонистом NMDAR когнитивное нарушение (например, вызванное антагонистом NMDAR ухудшение распознавания нового объекта; например, вызванное вследствие введения нескольких доз антагониста NMDAR). Описанные комбинации могут дополнительно содержать один или более других биологически активных ингредиентов (например, одно или более других соединений-антидепрессантов) и/или одно или более фармацевтически приемлемых веществ и/или носителей. Компоненты указанной комбинации (иногда также упоминаемые в настоящем документе как химические вещества или химические соединения) можно вводить пациенту последовательно (каждый компонент вводят в разное время) или по существу одновременно. Следует понимать, что компоненты могут находиться в одном фармацевтически приемлемом носителе и, следовательно, могут быть введены одновременно. Альтернативно, каждый из компонентов может содержаться в отдельных фармацевтических носителях, например, в обычных пероральных лекарственных формах или в парентеральных формах (или один компонент может быть пероральным, а другой парентеральным), которые можно вводить либо одновременно, либо последовательно. Соответственно, в одном аспекте предложены способы по существу реверсирования или предупреждения когнитивного нарушения у пациента, которому введена интенсивная доза антагониста NMDAR, включающие введение описанного модулятора NMDA, такого как рапастин, и атипичного антипсихотика (например, луразидона). Например, в данном документе предложен способ лечения шизофрении или биполярного расстройства у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение пациенту: атипичного антипсихотика; и модулятора NMDA, выбранного из группы, состоящей из рапастинела, (S)-N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида, (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида, (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)-пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида и N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин)-2-карбонил)-2-бензилпирролидин-2-карбоксамида. В некоторых предусмотренных способах каждый модулятор NMDA и атипичный антипсихотик вводят в дозе, которая является субэффективной при введении по отдельности.

[0007] В другом варианте реализации в данном документе предложена фармацевтически приемлемая композиция, содержащая модулятор NMDA, например, рапастинел, и атипичный антипсихотик (например, луразидон). Например, такая композиция может содержать суб-интенсивные или субэффективные дозы (относительно введения лекарства в отдельности) рапастинела и/или луразидона.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0008] На Фиг. 1 представлен вызванный интенсивным воздействием кетамина (ket; 30 мг/кг), но не рапастинела (rap; 1,0 мг/кг) значительный дефицит NOR у самцов мышей C57BL/6J. Rap (1,0 мг/кг) существенно препятствует ket-индуцированному дефициту NOR ($$$P<0,001). В частности, представлено влияние физиологического раствора (sal; 0,9%; iv), интенсивной дозы рапастинела (rap; 1,0 мг/кг; iv), интенсивной дозы кетамина (ket; 30 мг/кг, ip); rap+ket (1,0 мг/кг + 30 мг/кг) в испытании NOR у самцов мышей C57BL/6J. Данные выражены как среднее ± СОС (N=7-10 на группу). DI, ***P<0,001; существенное снижение DI по сравнению с sal; ###P<0,001; существенное снижение DI по сравнению с Rap+Sal; $$$P<0,001; существенное увеличение DI по сравнению с ket+sal.

[0009] На Фиг. 2 изображено, что rap (1,0 мг/кг) существенно реверсирует дефицит NOR, вызванный субхроническим (sc) введением PCP и ket (10 и 30 мг/кг; интраперитонеально (i.p.); два раза в сутки (b.i.d.); 7 дней; затем 7 дней вымывания) (###P<0,001). В частности, представлено влияние субхронического введения sal (0,9%), субхронического введения PCP и субхронического введения ket (10 и 30 мг/кг; ip; bid; 7 дней; 7 дней вымывания); субхронического введения PCP+rap (1,0 мг/кг) и субхронического введения ket+rap (1,0 мг/кг) в испытании NOR у самцов мышей C57BL/6J. Данные выражены как среднее ± СОС (N=7-10 на группу). DI, *P<0,05; **P<0,01; существенное снижение DI по сравнению с лечением sal. ###P<0,001; существенное увеличение DI у мышей, которых лечили субхроническим введением PCP и субхроническим введением ket, при введении rap (1,0 мг/кг) по сравнению с субхроническим введением PCP+sal или субхроническим введением ket+sal.

[0010] На Фиг. 3 изображено, что субэффективная доза (SED) рапастинела + SED луразидона (lur) существенно реверсирует дефицит NOR, вызванный субхроническим введением ket (scket) (##P<0,001), но ни одно из указанных лекарств, указанных выше, не было эффективным в указанных дозах. В частности, представлено влияние субхронического введения sal (0,9%), субхронического введения ket (30 мг/кг), субхронического введения ket+rap (0,3 мг/кг; субэффективная доза), субхронического введения ket+луразидона (0,1 мг/кг; lur; SED), субхронического введения ket + субэффективной дозы rap + субэффективной дозы lur в испытании NOR у самцов мышей C57BL/6J. Данные выражены как среднее ± СОС (N=8-10 на группу). DI, ***P<0,001; существенное снижение DI по сравнению с мышами, которым вводили sal. ###P<0,001: существенное увеличение DI, по сравнению с субхроническим введением ket+sal; субхроническим введением ket + субэффективной дозы rap; субхроническим введением ket + субэффективной дозы lur.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0011] Данное описание относится к комбинациям, содержащим один или более модуляторов NMDA, таких, как описаны в данном документе, например, рапастинела, и атипичный антипсихотик (каждый из которых иногда упомянут в данном документе как «компонент»). Преимущественный эффект указанной комбинации отчасти основан на обнаружении того факта, что введение модулятора NMDA, такого как рапастинел (например, суб-интенсивной или субэффективной дозы), вместе с атипичным антипсихотиком (например, луразидоном) может реверсировать и/или предупреждать когнитивное нарушение (например, когнитивное нарушение, вызванное антагонистом NMDAR) при распознавании нового объекта; например, вызванное многократным введением антагониста NMDAR. Указанные комбинации могут дополнительно содержать один или более других биологических активных ингредиентов (например, один или более других соединений-антидепрессантов) и/или одно или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и/или носителей. Компоненты указанной комбинации (иногда также упоминаемые в настоящем документе как химические вещества или химические соединения) можно вводить пациенту последовательно (каждый компонент вводят в разное время) или по существу одновременно. Следует понимать, что компоненты могут находиться в одном фармацевтически приемлемом носителе и, следовательно, могут быть введены одновременно. Альтернативно, каждый из компонентов может содержаться в отдельных фармацевтических носителях, например, в обычных пероральных лекарственных формах или в парентеральных формах (или один компонент может быть пероральным, а другой парентеральным), которые можно вводить либо одновременно, либо последовательно. В некоторых вариантах реализации предварительное лечение или по существу совместное введение атипичного (антипсихотика) с рапастинелом (или, например, описанным в данном документе модулятором NMDA) (т.е. введенным до введения одного или более атипичных антипсихотиков) может быть особенно эффективным.

Определения

[0012] «Рапастинел» (или «GLYX-13») представлен следующей формулой:

и включает полиморфы, гидраты, сольваты, свободные основания и/или подходящие солевые формы описанного выше соединения.

[0013] Термин «лечение» включает любой эффект, например, уменьшение, снижение, модулирование или устранение, которое приводит к улучшению состояния, заболевания, расстройства и т.п.

[0014] В данном контексте термины «антагонист рецептора NMDAR» и «антагонист NMDAR», в целом, относятся к химическому веществу, которое может связываться с глицин-связывающим сайтом рецептора NMDA и действует для антагонизирования или ингибирования действия рецептора N-метил-D-аспартата (NMDAR).

[0015] Выражение «фармацевтически или фармакологически приемлемый» относится к молекулярным объектам и композициям, которые не вызывают побочных, аллергических или других нежелательных реакций при введении животному или человеку в соответствующих случаях. Для введения человеку препараты должны отвечать требованиям стерильности, пирогенности, общей безопасности и стандартам чистоты в соответствии с требованиями Бюро стандартов биопрепаратов Управления по контролю качества пищевых продуктов и медикаментов США (FDA).

[0016] Термин «фармацевтически приемлемый носитель» или «фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество» в контексте данного документа относится к любым растворителям, дисперсионным средам, покрытиям, изотоническим и замедляющим абсорбцию агентам и т.п., которые подходят для фармацевтического введения. Применение таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. Комбинации, описанные в данном документе, могут также содержать другие активные соединения, обеспечивающие возможность вспомогательных, дополнительных или улучшенных терапевтических функций.

[0017] Термин «фармацевтическая композиция» в данном контексте относится к композиции, содержащей по меньшей мере один из компонентов комбинаций, описанных в данном документе, составленный вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями и/или вспомогательными веществами.

[0018] Термины «индивидуум», «пациент» или «субъект» используются взаимозаменяемо и относятся к любому животному, включая млекопитающих, предпочтительно мышей, крыс, других грызунов, кроликов, собак, котов, свиней, крупный рогатый скот, овец, лошадей или приматов, и наиболее предпочтительно к людям. Комбинации по данному изобретению можно вводить так, как описано в данном документе, млекопитающему, такому как человек, а также можно вводить другим млекопитающим, таким как животное, нуждающееся в ветеринарном лечении, например, домашним животным (например, собакам, кошкам и т.п.), сельскохозяйственным животным (например, коровам, овцам, свиньям, лошадям и т.п.) и лабораторным животным (например, крысам, мышам, морским свинкам и т.п.). В некоторых вариантах реализации млекопитающее, которое лечат способами по данному изобретению, представляет собой млекопитающее, у которого лечение, например, депрессии, является желательным.

[0019] Термин «фармацевтически приемлемая соль(-и)» в данном контексте относится к солям кислотных или основных групп, которые могут присутствовать в соединениях, применяемых в данных комбинациях. Соединения, входящие в данные комбинации, которые являются основными по своей природе, способны образовывать широкий спектр солей с различными неорганическими и органическими кислотами. Кислоты, которые можно использовать для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислот таких основных соединений, представляют собой кислоты, образующие нетоксичные соли присоединения кислот, то есть соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, включая, но не ограничиваясь ими, малатные, оксалатные, хлоридные, бромидные, йодидные, нитратные, сульфатные, бисульфатные, фосфатные, гидрофосфатные, изоникотинатные, ацетатные, лактатные, салицилатные, цитратные, тартратные, олеатные, таннатные, пантотенатные, битартратные, аскорбатные, сукцинатные, малеатные, гентизинатные, фумаратные, глюконатные, глюкуронатные, сахаратные, формиатные, бензоатные, глутаматные, метансульфонатные, этансульфонатные, бензолсульфонатные, п-толуолсульфонатные и памоатные (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоатные)) соли. Соединения, входящие в данные комбинации, которые являются кислотными по своей природе, способны образовывать основные соли с различными фармакологически приемлемыми катионами. Примеры таких солей включают соли щелочных металлов или щелочноземельных металлов и, в частности, соли кальция, магния, натрия, лития, цинка, калия и железа. Соединения, входящие в данные комбинации, которые содержат основной или кислотный фрагмент, также могут образовывать фармацевтически приемлемые соли с различными аминокислотами. Соединения, входящие в комбинации по данному изобретению, могут содержать и кислотные, и основные группы; например, одну аминогруппу и одну группу карбоновой кислоты. В таком случае соединение может существовать в виде соли присоединения кислоты, цвиттер-иона или соли с основанием. В тексте данного описания описанное соединение также может включать фармацевтически приемлемую соль.

Компоненты комбинации

[0020] Рапастинел может быть получен хорошо известными рекомбинантными методами или путем синтеза, например, как описано в патентах США № 5763393 и 4086196, включенных в данный документ посредством ссылки. Также предусмотрены полиморфы, гидраты, гомологи, сольваты, свободные основания и/или пригодные солевые формы рапастинела, такие как, но не ограничиваясь этим, ацетатная соль. Пептид может находиться в циклизованной или нециклизованной форме, как дополнительно описано в патенте США № 5763393. В некоторых вариантах реализации аналог рапастинела может содержать вставку или делецию фрагмента одной или более групп Thr или Pro, такую как делеция фрагмента CH₃, OH или NH₂. В других вариантах реализации рапастинел может быть необязательно замещен одним или более галогенами, C₁-C₃алкилом (необязательно замещенным галогеном или аминогруппой), гидроксилом и/или аминогруппой. Другие соединения, предусмотренные для применения в данном документе, включают частичные агонисты глицинового сайта NMDAR, описанные в патентах США 5763393, 6107271, и в публикации Wood et al., Neuro. Report, 19, 1059-1061, 2008, полное содержание которых включено в данный документ посредством ссылки.

[0021] Следует понимать, что пептиды, описанные в данном документе, могут содержать как природные, так и неприродные аминокислоты, например, все природные аминокислоты (или их производные), все неприродные аминокислоты (или их производные), или смесь природных и неприродных аминокислот. Например, одна, две, три или более аминокислот в рапастинеле, каждая независимо, могут иметь D- или L-конфигурацию.

[0022] Предусмотренные модуляторы NMDA также включают (S)-N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамид, (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамид, (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамид и N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)-2-бензилпирролидин-2-карбоксамид.

[0023] Предусмотренные атипичные антипсихотики включают луразидон, кветиапин, оланзапин, азенапин, рисперидон, зипрасидон, клозапин, мелперон, карипразин, арипипразол, пимавансерин, ITI-007, RP506 и ремоксиприд.

[0024] В некоторых вариантах реализации антагонист NMDAR выбран из группы, состоящей из кетамина, мемантина, ланицемина (AZD6765), CERC-301, декстрометорфана, декстрорфана, фенциклидина, дизоцилпина (MK-801), амантадина, ифенпродила, AV-101, AZD 6423 и рилузола или их фармацевтически приемлемой соли или пролекарства. Также предусмотрены производные вышеуказанных антагонистов NMDAR. В одном из вариантов реализации антагонисты NMDAR могут быть выбраны из группы, состоящей из оксида азота (I), атомоксетина, декстраллорфана, дифенидина, этициклидина, гациклидина, ибогаина, метоксетамина, нитромемантина, ролициклидина, теноциклидина, метоксидина, тилетамина, нерамексана, элипродила, дексоксадрола, метадона, WMS-2539, NEFA, ремацемида, делуцемина, 8A-PDHQ, аптиганела (церестат, CNS-1102), HU-211, ремацемида, ринхофиллина, TK-40, траксопродила (CP-101,606), 1-аминоциклопропанкарбоновой кислоты (ACPC), кинуреновой кислоты или ее производного, 2-карбокситетрагидрохинолина или его производного, 2-карбоксииндола или его производного, 4-гидрокси-2-хинолина или его производного, 4-гидроксихинолина или его производного, хиноксалин-2,3-диона или его производного, трициклических антагонистов, лакосамида, L-фенилаланина, мидафотела и аптиганела, или их фармацевтически приемлемых солей или пролекарств.

Способы

[0025] В одном аспекте предложены способы по существу реверсирования или предупреждения расстройства нарушения когнитивной функции у пациента, включающие введение атипичного антипсихотика (например, выбранного из группы, состоящей из луразидона, кветиапина, оланзапина, азенапина, рисперидона, зипрасидона, клозапина, мелперона, карипразина, арипипразола, пимавансерина, ITI-007, RP506 и ремоксиприда) и модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела.

[0026] В другом аспекте предложены способы лечения расстройства нарушения когнитивной функции у пациента, нуждающегося в этом, включающие введение некоторого количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и атипичного антипсихотика. Расстройство нарушения когнитивной функции может быть обусловлено одним или более из: дефицита когнитивной способности, врожденного недостатка, фактора(-ов) окружающей среды или приема лекарственных препаратов, и включают, но не ограничиваются ими, нарушения способности к обучению и/или дислексию. В некоторых вариантах реализации введение определенного количества рапастинела (например, суб-интенсивного количества) осуществляют до или после введения одного или более атипичных антипсихотиков. В других вариантах реализации введение модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, осуществляют по существу одновременно с введением одного или более атипичных антипсихотиков.

[0027] В дополнительном аспекте предложены способы лечения расстройства, патологического состояния или заболевания, включая, но не ограничиваясь ими: неврологические или другие расстройства (например, инсульт, психотическое расстройство, боль (например, невропатическую боль), депрессию (например, клиническую депрессию), болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера); заболевание центральной нервной системы (например, нейродегенеративное заболевание, инсульт, травматическое повреждение головного мозга и повреждение спинного мозга); шизофрению; и/или депрессию (например, не поддающуюся лечению депрессию), включающие введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. Другие иллюстративные патологические состояния включают, но не ограничиваются ими, нарушение способности к обучению, аутическое расстройство, расстройство гиперактивности с дефицитом внимания, тревогу, мигрень, синдром Туретта, фобии, посттравматическое стрессовое расстройство, деменцию, дефицит внимания, связанный со старением, деменцию на фоне СПИДа, болезнь Хантингтона, спастичность, миоклонус, мышечный спазм, биполярное расстройство, невропатическую боль, расстройства, связанные со злоупотреблением психоактивных веществ, недержание мочи, ишемию, особые нарушения способности к обучения, судороги, спазмы после инсульта, ишемию головного мозга, гипогликемию, остановку сердца и эпилепсию. В некоторых вариантах реализации рапастинел и один или более атипичных антипсихотиков вводят по существу одновременно. В других вариантах реализации рапастинел и один или более атипичных антипсихотиков вводят последовательно, например, рапастинел вводят до или после одного или более атипичных антипсихотиков.

[0028] Предусмотренные способы включают способ лечения аутизма и/или расстройства аутического спектра у пациента, нуждающегося в этом, который включает введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. В одном из вариантов реализации предусмотрен способ уменьшения симптомов аутизма у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. Например, при введении указанные комбинации могут снижать частоту возникновения одного или более симптомов аутизма, таких как избегание визуального контакта, неспособность к социализации, дефицит внимания, плохое настроение, гиперактивность, патологическая чувствительность к звукам, неправильная речь, нарушение сна и персеверация. Снижение частоты возникновения можно измерять относительно частоты возникновения у индивидуума, не получающего лечение, или у индивидуумов, не получающих лечение.

[0029] В некоторых вариантов реализации пациенты, страдающие от аутизма, также страдают от другого медицинского состояния, такого как синдром ломкой X-хромосомы, туберозный склероз, синдром врожденной краснухи и нелеченная фенилкетонурия.

[0030] В некоторых вариантах реализации предусмотрены способы лечения расстройства у пациента, нуждающегося в этом, где указанное расстройство выбрано из группы, состоящей из: церебральной ишемии, инсульта, травмы головного мозга, опухолей головного мозга, острой невропатической боли, хронической невропатической боли, расстройств сна, наркотической зависимости, депрессии, некоторых нарушений зрения, алкогольного абстинентного синдрома, тревоги, неспособности к запоминанию и обучению, аутизма, эпилепсии, деменции на фоне СПИДа, множественной системной атрофии, прогрессирующего надъядерного паралича, атаксии Фридриха, синдрома Дауна, синдрома ломкой X-хромосомы, туберзоного склероза, оливопонтоцеребеллярной атрофии, церебрального паралича, медикаментозного неврита зрительного нерва, периферической невропатии, миелопатии, ишемической ретинопатии, диабетической ретинопатии, глаукомы, остановки сердца, поведенческих расстройств, расстройств контроля над побуждениями, болезни Альцгеймера, потери памяти, сопровождающей болезнь Альцгеймера на ранней стадии, расстройства дефицита внимания, СДВГ, шизофрении, уменьшение интенсивности опиатной, никотиновой зависимости, злоупотребления алкоголем, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, посттравматического стрессового синдрома и хореи Хантингтона, которые включают введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более антагонистов NMDAR.

[0031] В некоторых вариантах реализации в данном документе предусмотрены способы лечения расстройства дефицита внимания, СДВГ (расстройства гиперактивности с дефицитом внимания), шизофрении, тревоги, уменьшение интенсивности опиатной, никотиновой и/или алкогольной зависимости (например, способ лечения такой зависимости или облегчения побочных эффектов при выводе из такой зависимости), повреждения спинного мозга, диабетической ретинопатии, травматического повреждения головного мозга, посттравматического стрессового синдрома и/или хореи Хантингтона у пациента, нуждающегося в этом, включающие введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. Например, пациенты, страдающие от шизофрении, зависимости (например, алкогольной или опиатной), аутизма, хореи Хантингтона, травматического повреждения головного мозга, повреждения спинного мозга, посттравматического стрессового синдрома и диабетической ретинопатии, могут страдать от измененной экспрессии или функции рецептора NMDA.

[0032] Например, в данном документе предложен способ лечения депрессии у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. В некоторых вариантах реализации устойчивый к лечению пациент определен как пациент, которому перед введением комбинаций, описанных в данном документе, проводили по меньшей мере два типа антидепрессивного лечения. В других вариантах реализации устойчивый к лечению пациент является пациентом, который не желает или не может переносить побочные эффекты по меньшей мере одного типа антидепрессивного лечения.

[0033] Наиболее распространенные депрессивные состояния включают клиническую депрессию и дистимическое расстройство. Другие депрессивные состояния развиваются при особых обстоятельствах. Такие депрессивные состояния включают, но не ограничиваются ими, психотическую депрессию, послеродовую депрессию, сезонное аффективное расстройство (САР), расстройство настроения, депрессии, вызванные хроническими медицинскими состояниями, такими как рак или хроническая боль, химиотерапия, хронический стресс, посттравматические стрессовые расстройства и биполярное расстройство (или маниакально-депрессивное расстройство).

[0034] Устойчивая к лечению депрессия встречается у страдающих от депрессии пациентов, которые устойчивы к лечению стандартными медикаментозными средствами, включая трициклические антидепрессанты, ИМАО, СИОЗС и ингибиторы двойного и тройного захвата и/или анксиолитические лекарственные средства, а также к немедикаментозному лечению, такому как психотерапия, электрошоковая терапия, стимуляция блуждающего нерва и/или транскраниальная магнитная стимуляция. Устойчивый к лечению пациент может быть определен как тот, у которого невозможно добиться облегчения одного или более симптомов депрессии (например, постоянных чувств тревоги или грусти, чувств беспомощности, безнадежности, пессимизма), несмотря на проведение одного или более стандартных медикаментозных или немедикаментозных видов лечения. В определенных вариантах реализации настоящего изобретения устойчивый к лечению пациент представляет собой пациента, у которого невозможно добиться облегчения одного или более симптомов депрессии, несмотря на проведение лечения двумя разными антидепрессивными лекарственными средствами. В других вариантах реализации настоящего изобретения устойчивый к лечению пациент представляет собой пациента, у которого невозможно добиться облегчения одного или более симптомов депрессии несмотря на проведение лечения четырьмя разными антидепрессивными лекарственными средствами. Устойчивый к лечению пациент может быть определен как тот, который не желает или не в состоянии переносить побочные эффекты одного или более стандартных медикаментозных или немедикаментозных видов лечения.

[0035] Например, в данном документе предусмотрены способы лечения подмножества депрессивных пациентов, например, с униполярной или биполярной депрессией с психотическими признаками, которые, например, могут быть склонны к переживанию психоза. Так, предусмотренные пациенты с нарушениями настроения могут иметь более высокий риск дополнительного когнитивного нарушения или рецидива психоза под действием кетамина, чем под действием рапастинела, даже при однократном лечении, поскольку побочные эффекты кетамина на когнитивную функцию и психопатологию могут возникать в результате однократного введения в дозах, сопоставимых с дозами, необходимыми для лечения депрессии. При многократном введении кетамина для лечения трудноизлечимой, рецидивирующей резистентной депрессии, которое иногда проводят с кетамином, риск когнитивного нарушения и психоза может быть выше. В данном документе предусмотрено, например, введение субэффективной дозы рапастинела, которая может усиливать субэффективную дозу мультирецепторного атипичного антипсихотика (AAPD)/антидепрессанта луразидона. В одном из вариантов реализации атипичные AAPD, такие как луразидон, могут снижать риск когнитивного нарушения и психоза у устойчивых к лечению депрессивных пациентов (например, проходящих лечение кетамином).

[0036] В другом аспекте предложен способ усиления облегчения боли и обезболивания у животного. В некоторых вариантах реализации предложены способы лечения невропатической боли. Невропатическая боль может быть острой или хронической. В некоторых случаях невропатическая боль может быть связана с таким состоянием, как герпес, ВИЧ, травматическое повреждение нерва, инсульт, пост-ишемическое состояние, фибромиалгия, рефлекторная симпатическая дистрофия, комплексный региональный болевой синдром, повреждение спинного мозга, невралгия седалищного нерва, фантомная боль в амутированных конечностях, диабетическая невропатия и невропатическая боль, вызванная химиотерапевтическим лечением рака. Также предусмотрены способы усиления облегчения боли и обезболивания у пациента.

[0037] В некоторых вариантах реализации предложены способы лечения шизофрении. Например, с применением способов и композиций, предусмотренных в данном документе, можно лечить шизофрению параноидального типа, шизофрению дезорганизованного типа (т.е. геберфреническую шизофрению), шизофрению кататонического типа, шизофрению недифференцированного типа, шизофрению остаточного типа, пост-шизофреническую депрессию и простую шизофрению. С применением композиций, предусмотренных в данном документе, можно лечить также психотические расстройства, такие как шизоаффективные расстройства, бредовые расстройства, кратковременные психотические расстройства, индуцированные психотические расстройства и психотические расстройства с бредом или галлюцинациями.

[0038] Параноидальная шизофрения может характеризоваться наличием бреда или слуховых галлюцинаций, но отсутствием нарушения мышления, дезорганизованного поведения или аффективной тупости. Бред может быть бредом преследования и/или бредом грандиозного типа, но помимо этого могут присутствовать также другие темы, такие как ревность, религиозность или соматизация.

[0039] Шизофрения дезорганизованного типа может характеризоваться одновременным наличием нарушения мышления и уплощения эмоций.

[0040] Шизофрения кататонического типа может характеризоваться почти полной неподвижностью субъекта или встревоженным, бесцельным движением. Симптомы могут включать кататонический ступор и восковую гибкость.

[0041] Шизофрения недифференцированного типа может характеризоваться наличием психотических симптомов, но несоответствием критериям параноидального, дезорганизованного или кататонического типов.

[0042] Шизофрения остаточного типа может характеризоваться наличием положительных симптомов слабой интенсивности.

[0043] Пост-шизофреническая депрессия может характеризоваться возникновением депрессивных эпизодов после шизофренической болезни, при этом все еще могут присутствовать слабые шизофренические симптомы.

[0044] Простая шизофрения может характеризоваться постепенным и прогрессирующим развитием выраженных негативных симптомов при отсутствии психотических эпизодов в анамнезе.

[0045] В некоторых вариантах реализации предложены способы лечения психотических симптомов, которые могут присутствовать при других умственных расстройствах, включая, но не ограничиваясь ими, биполярное расстройство, пограничное расстройство личности, наркотическая интоксикация и наркотический психоз.

[0046] В другом варианте реализации предложены способы лечения бреда (например, «не причудливого»), который может быть, например, при бредовом расстройстве.

[0047] Также предложены способы лечения социального отчуждения при различных состояниях, включая, но не ограничиваясь ими, социальное тревожное расстройство, избегающее расстройство личности и шизотипичное расстройство личности.

[0048] Кроме того, предложены способы лечения обсессивно-компульсивного расстройства (OCD).

[0049] В другом варианте реализации предложен способ лечения болезни Альцгеймера или, например, лечения потери памяти, которая, например, сопровождает болезнь Альцгеймера на ранней стадии, у пациента, нуждающегося в этом, включающий введение комбинаций, описанных в данном документе, например, определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. В данном документе предложен также способ модулирования амилоидного белка Альцгеймера (например, бета-амилоидного пептида, например, изоформы Aβ_1-42), in-vitro или in-vivo (например, в клетке), включающий приведение в контакт указанного белка с комбинациями, описанными в данном документе, например, с определенным количеством модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков. Например, в некоторых вариантах реализации рапастинел или другое описанное соединение может блокировать способность такого амилоидного белка ингибировать долгосрочное потенциирование в гиппокапальных срезах, а также апоптическую гибель нейронных клеток. В некоторых вариантах реализации описанное соединение (например, рапастинел) может обеспечивать нейропротекцию для пациента с болезнью Альцгеймера, нуждающегося в этом, например, может обеспечивать терапевтический эффект на гибель нейронных клеток, связанную с поздней стадией болезни Альцгеймера.

[0050] В некоторых вариантах реализации пациентом является человек, например, педиатрический пациент.

[0051] Данное изобретение предусматривает «комбинированную терапию», которая включает (но не ограничивается этим) совместное введение определенного количества модулятора NMDA, описанного в данном документе, например, рапастинела, и одного или более атипичных антипсихотиков, как части специфической схемы лечения, предназначенной для обеспечения положительного эффекта от совместного действия указанных терапевтических агентов. Положительный эффект комбинации включает, но не ограничивается этим, совместное фармакокинетическое или фармакодинамическое действие, возникающее в результате комбинирования терапевтических агентов. Введение указанных терапевтических агентов в комбинации обычно осуществляют в течение определенного периода времени (обычно нескольких дней, недель, месяцев или лет, в зависимости от выбранной комбинации). Комбинированная терапия охватывает введение множества терапевтических агентов последовательным образом, т.е. введение каждого терапевтического агента в разное время, а также введение этих терапевтических агентов (или по меньшей мере двух из этих терапевтических агентов) по существу одновременно. По существу одновременное введение может быть осуществлено, например, путем введения субъекту одной таблетки или капсулы, содержащей фиксированное соотношение каждого терапевтического агента, или путем введения множества одиночных капсул каждого из терапевтических агентов. Последовательное или по существу одновременное введение каждого терапевтического агента может быть осуществлено с использованием любого подходящего способа введения, включая, но не ограничиваясь ими, пероральные способы ведения, внутривенные способы ведения, внутримышечные способы ведения и прямую абсорбцию через слизистую оболочку тканей. Терапевтические агенты можно вводить одним или разными способами введения. Например, первый терапевтический агент выбранной комбинации можно вводить путем внутривенной инъекции, в то время как другой терапевтический агент комбинации можно вводить перорально. В альтернативном варианте, например, все терапевтические агенты можно вводить перорально или все терапевтические агенты можно вводить путем внутривенной инъекции.

[0052] Комбинированная терапия также может включать введение терапевтических агентов, описанных выше, в дополнительной комбинации с другими биологически активными ингредиентами и немедикаментозными способами лечения. Если указанная комбинированная терапия дополнительно включает немедикаментозное лечение, то немедикаментозное лечение можно проводить в любое подходящее время, при условии достижения благоприятного эффекта от совместного введения указанной комбинации терапевтических агентов и немедикаментозного лечения. Например, в уместных случаях благоприятный эффект достигается даже при временном исключении немедикаментозного лечения из схемы введения терапевтических агентов, возможно на несколько дней или даже недель.

[0053] В некоторых вариантах реализации один или более компонентов комбинаций, описанных в данном документе, можно вводить пациенту парентерально, включая, но не ограничиваясь этим, подкожно или внутривенно. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения один или более компонентов комбинаций, описанных в данном документе, можно также вводить с помощью медленной контролируемой внутривенной инфузии или путем высвобождения из имплантируемого устройства. В некоторых вариантах реализации пациент достигает существенного улучшения, например, состояния когнитивного нарушения, через 1 час, 2 часа, 4 часа, 8 часов, 12 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделю или даже через 8 дней после введения одной (однократной) дозы рапастинела.

[0054] Терапевтически эффективное количество описанного соединения, необходимое для применения в терапии, варьируется в зависимости от природы состояния, подлежащего лечению, продолжительности требуемого лечения, возраста и состояния пациента, и в конечном счете определяется лечащим врачом. Однако в целом дозы, используемые для лечения взрослого человека, обычно составляют от около 0,01 мг/кг до около 1000 мг/кг в сутки (например, от около 0,01 мг/кг до около 100 мг/кг в сутки, от около 0,01 мг/кг до около 10 мг/кг в сутки, от около 0,1 мг/кг до около 100 мг/кг в сутки, от около 0,1 мг/кг до около 50 мг/кг в сутки, от около 0,1 мг/кг до около 10 мг/кг в сутки) каждого компонента комбинаций, описанных в данном документе. В некоторых вариантах реализации дозы рапастинела, используемые для лечения взрослого человека, обычно составляют от около 0,01 мг/кг до около 100 мг/кг в сутки (например, от около 0,01 мг/кг до около 10 мг/кг в сутки, от около 0,1 мг/кг до около 100 мг/кг в сутки, от около 0,1 мг/кг до около 50 мг/кг в сутки, от около 0,1 мг/кг до около 10 мг/кг, около 1 мг/кг в сутки). Требуемая доза может быть удобно введена в виде разовой дозы или в виде нескольких доз, введенных с соответствующими интервалами, например, в виде двух, трех, четырех или более дробных доз в сутки.

[0055] Множество факторов могут обусловливать введение каждого компонента комбинаций, описанных в данном документе, в пределах широкого диапазона доз. При введении в комбинации с другими терапевтическими агентами, дозы соединений по данному изобретению можно вводить в относительно сниженных дозах. В некоторых вариантах реализации доза рапастинела может составлять от около 1 нг/кг до около 100 мг/кг. Доза рапастинела может представлять собой любую дозу, включая, но не ограничиваясь этим, около 1 мкг/кг, 25 мкг/кг, 50 мкг/кг, 75 мкг/кг, 100 мкг/кг, 125 мкг/кг, 150 мкг/кг, 175 мкг/кг, 200 мкг/кг, 225 мкг/кг, 250 мкг/кг, 275 мкг/кг, 300 мкг/кг, 325 мкг/кг, 350 мкг/кг, 375 мкг/кг, 400 мкг/кг, 425 мкг/кг, 450 мкг/кг, 475 мкг/кг, 500 мкг/кг, 525 мкг/кг, 550 мкг/кг, 575 мкг/кг, 600 мкг/кг, 625 мкг/кг, 650 мкг/кг, 675 мкг/кг, 700 мкг/кг, 725 мкг/кг, 750 мкг/кг, 775 мкг/кг, 800 мкг/кг, 825 мкг/кг, 850 мкг/кг, 875 мкг/кг, 900 мкг/кг, 925 мкг/кг, 950 мкг/кг, 975 мкг/кг, 1 мг/кг, 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг, 20 мг/кг, 25 мг/кг, 30 мг/кг, 35 мг/кг, 40 мг/кг, 45 мг/кг, 50 мг/кг, 60 мг/кг, 70 мг/кг, 80 мг/кг, 90 мг/кг или 100 мг/кг.

[0056] В некоторых вариантах реализации описанное соединение, например, рапастинел, можно вводить в количестве, которое реверсирует или предотвращает когнитивное нарушение.

[0057] Описанные соединения могут быть представлены как часть жидкой или твердой лекарственной формы, например, водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов, и/или эликсиров. Композиции могут быть также приготовлены в виде сухого препарата для разведения водой или другим подходящим носителем перед использованием. Такие жидкие препараты могут содержать добавки, включая, но не ограничиваясь этим, суспендирующие агенты, эмульгаторы, неводные носители и консерванты. Суспендирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, сироп сорбита, метилцеллюлозу, глюкозный/сахарный сироп, желатин, гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гель стеарата алюминия и гидрогенизированные пищевые жиры. Эмульгаторы включают, но не ограничиваются ими, лецитин, моноолеат сорбита и гуммиарабик. Неводные носители включают, но не ограничиваются ими, пищевые масла, миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, масляные сложные эфиры, пропиленгликоль и этиловый спирт. Консерванты включают, но не ограничиваются ими, метил- или пропил-гидроксибензоат и сорбиновую кислоту. Предусмотренные соединения также могут быть составлены для парентерального введения, включая, но не ограничиваясь этим, введение посредством инъекции или непрерывной инфузии. Композиции для инъекций могут быть представлены в виде суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных носителях, и они могут содержать вспомогательные агенты, включая, но не ограничиваясь ими, суспендирующие, стабилизирующие и диспергирующие агенты. Композиция также может быть представлена в виде порошка для разведения подходящим носителем, включая, но не ограничиваясь перечисленным, стерильную апирогенную воду (например, воду для инъекций).

[0058] В некоторых вариантах реализации описанные соединения, например, рапастинел, могут быть представлены как часть водной композиции, подходящей для внутривенной инъекции. В некоторых вариантах реализации такие композиции могут содержать: (i) от 60 мг/мл до около 200 мг/мл (например, от около 125 мг/мл до около 175 мг/мл; например, около 150 мг/мл или около 75 мг/мл) фармацевтически активного соединения, имеющего формулу:; или его фармацевтически приемлемой соли; (ii) воду (например, воду для инъекций); и (iii) кислоту; где стабильная водная композиция имеет рН от около 3,9 до около 5,5 (например, от около 4,0 до около 5,0, от около 4,2 до около 5,0, от около 4,1 до около 4,7, от около 4,2 до около 4,8, около 4,0, около 4,5) при 25 °C. В некоторых вариантах реализации такие композиции могут быть помещены в емкость (например, наполненный шприц или ампулу), в которой количество соединения, которое может быть извлечено, составляет по меньшей мере одну однократную дозу. В некоторых вариантах реализации однократная доза может иметь объем от около 1 мл до около 4 мл (например, 3 мл).

[0059] В некоторых вариантах реализации водные композиции могут содержать от около 200 мг до около 500 мг (например, около 450 мг; около 375 мг; или около 225 мг) фармацевтически активного соединения.

[0060] В некоторых вариантах реализации указанная кислота может быть выбрана из группы, состоящей из фумаровой кислоты, яблочной кислоты, молочной кислоты, хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, уксусной кислоты, лимонной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты, серной кислоты и аскорбиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации указанная кислота обеспечивает хлорид-ионы в водной композиции (например, хлористоводородная кислота).

ПРИМЕРЫ

Материалы и способы для примеров 1-3

[0061] Три когорты самцов мышей C57BL/6J (2-1/2-3 месяцев, Jackson, штат Массачусетс, США), N = 40, 45 и 48, использовали в примерах 1, 2, 3, соответственно. Мышей содержали в группах (по пять в клетке) в контролируемых условиях, поддерживаемых при 21±2 °C и относительной влажности 50±15% с циклом 14:10 ч. света-темноты (включение света: 05:00 утра). Все эксперименты проводили светлой фазе. Корм и вода были доступны ad libitum. Мышей акклиматизировали в группе в течение одной недели после прибытия, и в течение этого времени с ними не работали. Все эксперименты проводили в соответствии с Институциональным комитетом по содержанию и использованию животных Северо-Западного университета Чикаго.

[0062] Рапастинел приобретали у компании SAI Life Sciences (Индия). PCP был щедрым подарком Национального института по проблемам наркомании. Кетамин приобретали у компании Sigma Aldrich (Сент-Луис, штат Миссури). Луразидон приобретали у компании Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. (Осака, Япония). Рапастинел, PCP и кетамин растворяли в стерильном 0,9% физиологическом растворе (Sal). PCP и кетамин вводили интраперитонеально (ip) в объеме 10 мл/кг массы тела. Рапастинел вводили внутривенно (iv). Такая доза рапастинела (1,0 мг/кг) выбрана на основании того, что она вызывает оптимальное улучшение способности к обучению у молодых и старых крыс, а также в испытании следовых условно-рефлекторных миганий у кроликов. Указанные дозы кетамина (30 мг/кг) и PCP (10 мг/кг) выбраны на основании предыдущих исследований, показавших, что такие дозы вызывает существенное когнитивное нарушение у мышей и крыс. Доза луразидона (0,1 мг/кг) выбрана на основании предыдущих исследований NOR на мышах C57BL/6J, в которых определена эффективная доза луразидона для восстановления NOR у мышей, подверженных субхроническому лечению PCP.

[0063] Для кратковременного лечения лекарствами, рапастинел (1,0 мг/кг, iv), луразидон (0,1 мг/кг, i.p.) или кетамин (30 мг/кг, ip) вводили за 30 минут до ознакомительного испытания задачи NOR (описано ниже) животным, подверженным субхроническому лечению кетамином или субхроническому лечению PCP. Для субхронического лечения лекарствами 7-10 мышей на когорту случайным образом определяли в группы, которым вводили Sal, PCP или кетамин. Мышам, которых лечили Sal, вводили 0,9% NaCl; в группах, которых лечили лекарствами, вводили PCP (10 мг/кг; ip) или кетамин (30 мг/кг; ip) два раза в сутки в течение 7 дней. После этого следовал 7-дневный период вымывания, в течение которых мышей не тревожили в их домашних клетках до начала привыкания (см. ниже).

[0064] Испытание NOR у мышей было немного модифицированным относительно способа Hashimoto et al (Hashimoto K.; Fujita Y.; Shimizu E.; Iyo M. European Journal of Pharmacology 2005, 519:114-7) (т.е. размер бокса, использование белого фона стен бокса вместо черных отражающих поверхностей и продолжительность испытаний) на основании предварительных экспериментов, показавших, что при использовании черных отражательных поверхностей для внутренних поверхностей бокса для испытаний NOR животные не могли исследовать большой объем. Подобные наблюдения были сделаны при использовании крупных объектов. Поэтому использовали белые стенки бокса и небольшие объекты изучения. Размеры бокса для испытаний NOR, использованного для мышей, сравнимы с размерами для крыс. Было отмечено, что мыши C57BL/6J исследовали меньший объем, если продолжительность испытаний составляла 3 или 5. Поэтому в обоих испытаниях животным давали возможность исследования в течение 10 минут и отмечали существенное увеличение времени исследования, и использовали более продолжительное время испытаний. Прибор для испытаний NOR состоял из открытого бокса из плексигласа (длина 52 см; ширина 52 см, высота 31 см) с белыми стенками и твердым полом. Бокс устанавливали примерно на 30 см над полом, центровали на столе так, чтобы верхний свет не мог создавать пространственные ориентиры. Через один день после 7-дневного периода вымывания после субхронического введения лекарства или Sal, мышей акклиматизировали к пустому полю NOR, в группе в течение одного часа, каждый день в течение трех дней до ознакомительного испытания. В процессе ознакомительного испытания мышам давали возможность исследовать два одинаковых объекта (например, A1 и A2) в течение 10 минут. После этого следовал 24-часовой интервал между испытаниями, после чего мышей возвращали в домашнюю клетку. Во время испытания запоминания мышам давали возможность исследовать знакомый объект (A) из ознакомительного испытания и новый объект (например, B). Положение нового объекта в испытании запоминания для каждой экспериментальной мыши назначали случайным образом, используя псевдослучайный план. Псевдослучайные последовательности соответствовали критерию, предложенному Геллерманом (1933), для снижения влияния предпочтительного объекта и места. Кроме того, во избежание предвзятых или ольфакторных следов, объекты использовали в трех экземплярах, т.е. тот объект, который использовали в ознакомительном испытании, не использовали в испытании запоминания. Поведение записывали на видеокамеру для слепой оценки исследования объекта. Исследование объекта определяли как облизывание, обнюхивание или касание объекта передними лапами при обнюхивании. Время исследования (с) каждого объекта в каждом испытании записывали вручную, используя два секундомера, и если мыши были не способны к исследованию в течение > 1 (с) во время ознакомительных испытаний и испытаний запоминания, их исключали из анализа. Затем рассчитывали индекс различения (DI) [(время, затраченное на изучение нового объекта - время, затраченное на изучение знакомого объекта)/общее время изучения] для испытаний запоминания.

[0065] Все данные выражали как среднее ± СОС (n=7-10 на группу). Данные исследования анализировали с использованием дисперсионного анализа повторных измерений (дисперсионный анализ), а затем попарным сравнением при обнаружении значительного эффекта в дисперсионном анализе. Данные DI анализировали с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим выполнением теста Бонферрони при обнаружении существенного эффекта в дисперсионном анализе.

Пример 1. Рапастинел предотвращает дефицит NOR, вызванный интенсивным воздействием кетамина, у самцов мышей C57BL/6J

[0066] Во время ознакомительных испытаний во всех группах не обнаружен существенный эффект на исследование объекта (F_{3, 31}=0,90; P=0,96; данные не показаны). В испытаниях запоминания наблюдали существенную взаимосвязь между лечением лекарством и временем изучения объекта (F_{3, 31}=24,76; ***P<0,001; данные не показаны). Последующий ретроспективный анализ выявил, что мыши дикого типа, которым вводили Sal и Sal + рапастинел (1,0 мг/кг), демонстрировали очевидное предпочтение новому объекту, по сравнению со знакомым объектом, т.е. проводили значительно больше времени, изучая новый объект, по сравнению со знакомым объектом (P<0,001). Указанный эффект исчезал у мышей, которым вводили большую дозу кетамина (30 мг/кг), т.е. указанные мыши тратили одинаковое время, изучая оба объекта. Кроме того, мыши, которым вводили рапастинел (1,0 мг/кг) перед введением большой дозы кетамина (30 мг/кг), демонстрировали очевидное предпочтение новому объекту, по сравнению со знакомым объектом (P<0,01).

[0067] Не наблюдали существенного эффекта на общее время изучения между группами (ознакомительное испытание + испытание запоминания). Мыши из всех экспериментальных групп проводили почти равное время, исследуя объекты в ознакомительном испытании и в испытании запоминания (sal+sal=72,5±5,7; rap+sal=76,876,8±3,8; ket+sal=82,4±11,0; rap+ket=79,2±8,3).

[0068] В DI наблюдали существенную взаимосвязь между группами (F_{3, 31}=28,23; ***P<0,001; Фиг. 1). DI для мышей, которым вводили интенсивную дозу кетамина + Sal, был существенно ниже, по сравнению с мышами, которым вводили Sal + Sal, Sal + рапастинел, и рапастинел (1,0 мг/кг) + кетамин (30 мг/кг) (***P<0,001; ###P<0,001; $$$P<0,001; Фиг. 1). Таким образом, рапастинел в дозе 1,0 мг/кг существенно препятствовал снижению DI, вызванному введением большой дозы кетамина.

Пример 2. Рапастинел существенно реверсирует дефицит NOR, вызванный субхроническим введением PCP и субхроническим введением кетамина, у мышей C57BL/6J

[0069] Во время ознакомительных испытаний во всех группах не обнаружен существенный эффект на исследование объекта (F_{4, 47}=0,76; P=0,23; данные не показаны). В испытаниях запоминания наблюдали существенную взаимосвязь между лечением лекарством и временем изучения объекта (F_{4, 47}=10,45; ***P<0,001; данные не показаны). Последующий ретроспективный анализ выявил, что мыши дикого типа, которым вводили Sal, демонстрировали очевидное предпочтение новому объекту, по сравнению со знакомым объектом (P<0,001). Указанный эффект исчезал у мышей, которых лечили субхроническим введением кетамина или субхроническим введением PCP. Животные, которым вводили интенсивнуюдозу рапастинела (1,0 мг/кг), исследовали новый объект гораздо дольше, по сравнению со знакомым объектом, что свидетельствует о реверсировании дефицита, вызванного субхроническим введением PCP или субхроническим введением кетамина (P<0,001; данные не показаны). В DI наблюдали существенную взаимосвязь между группами (F_{4, 47}=9,30; ***P<0,001; Фиг. 2). DI для мышей, которых лечили субхроническим введением PCP и субхроническим введением кетамина, был существенно ниже, по сравнению с контрольными мышами, которым вводили Sal + Sal (*P<0,05 и **P<0.01; Фиг. 2). DI для животных, которых лечили субхроническим введением PCP и субхроническим введением кетамина, после введения 1,0 мг/кг рапастинела был существенно выше, что свидетельствует о существенном реверсировании нарушения NOR, вызванного субхроническим лечением PCP и субхроническим лечением кетамином (###P<0,001; Фиг. 2).

[0070] Общее время исследования: Не наблюдали существенного эффекта на общее время изучения между группами (ознакомительное испытание + испытание запоминания). Мыши из всех экспериментальных групп проводили почти равное время, исследуя объекты в ознакомительном испытании и в испытании запоминания (sal+sal=74,5±5,7; субхронический PCP=74,8±5,5; субхронический кетамин=80,3±7,2; субхронический PCP + рапастинел=73,8±3,8; субхронический кетамин + рапастинел=86,2±8,3).

[0071] Полученные результаты позволят предположить, что рапастинел отличается от действия неконкурентных антагонистов NMDAR, таких как PCP, кетамин и дизоцилпин (MK-801), тем, что не ухудшает NOR у мышей.

Пример 3. Субэффективная доза рапастинела + субэффективная доза луразидона реверсируют дефицит NOR, вызванный субхроническим введением кетамина

[0072] Во время ознакомительных испытаний во всех группах не обнаружен существенный эффект на исследование объекта (F_{4, 43}=0,92; P=0,13; данные не показаны). В испытаниях запоминания наблюдали существенную взаимосвязь между лечением лекарством и временем изучения объекта (F_{4, 43}=12,45; ***P<0,001; данные не показаны). Последующий ретроспективный анализ выявил, что мыши дикого типа, которым вводили Sal, демонстрировали очевидное предпочтение новому объекту, по сравнению со знакомым объектом (P<0,001). Этот эффект исчезал у мышей, которых лечили субхроническим (sc) введением кетамина, и у животных, которых лечили sc кетамином + субэффективной дозой рапастинела (0,3 мг/кг), а также sc кетамином + субэффективной дозой луразидона (0,1 мг/кг). Однако при sc введении кетамина и субэффективной дозы луразидона + субэффективной дозы рапастинела животные исследовали новый объект гораздо дольше, по сравнению со знакомым объектом (P<0,001; данные не показаны). В DI наблюдали существенную взаимосвязь между группами (F_{4, 43}=10,04; ***P<0,001; Фиг. 3). Мыши, которым вводили sc кетамин + Sal, sc кетамин + рапастинел (0,3 мг/кг), а также sc кетамин + луразидон (0,1 мг/кг), демонстрировали существенное снижение DI, по сравнению с контрольными мышами, которым вводили физиологический раствор (***P<0,001). Влияние комбинации субэффективной дозы рапастинела и луразидона существенно не отличалось от влияния эффективных доз каждого лекарства, введенных по отдельности.

[0073] Комбинация субэффективной дозы рапастинела (0,3 мг/кг) + субэффективной дозы луразидона (0,1 мг/кг) существенно реверсировала снижение DI, вызванное sc кетамином (###P<0,001; Фиг. 3). Усиленный рапастинелем атипичный антипсихотик/антидепрессант, луразидон, восстанавливает NOR у мышей, которым вводили (sc) кетамин.

[0074] Общее время исследования: Не наблюдали существенного эффекта на общее время изучения между группами (ознакомительное испытание + испытание запоминания). Мыши из всех экспериментальных групп проводили почти равное время, исследуя объекты в ознакомительном испытании и в испытании запоминания (sal+sal=77,5±6,7; субхронический кетамин=86,3±5,2; субхронический кетамин + субэффективная доза рапастинела=73,2±4,7; субхронический кетамин + субэффективная доза луразидона=71,5±6,2; субхронический кетамин + субэффективная доза рапастинела + субэффективная доза луразидона=78,5±5).

[0075] Исследование, проведенное в примерах 1-3, позволяет предположить, что рапастинел, функциональный частичный агонист глицинового сайта NMDAR, (i) не вызывает дефицит NOR; (ii) существенно предупреждает дефицит NOR, вызванный введением интенсивной дозы кетамина, и реверсирует дефицит NOR, вызванный субхроническим введением антагонистов NMDAR, кетамином и PCP; и (iii) при введении в субэффективной дозе в комбинации с субэффективной дозой антипсихотика/антидепрессанта луразидона восстанавливает NOR у мышей, которым вводили (sc) кетамин. Поскольку такие лекарства, как луразидон, которые являются облегчающими в модели scNMDAR когнитивного нарушения при шизофрении, также являются эффективными для улучшения состояния когнитивного нарушения у некоторых пациентов с шизофренией, то рапастинел также может иметь некоторые непосредственные когнитивные преимущества для пациентов с шизофренией или расстройством настроения.

Пример 4. Синтез (S)-N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пиролидин-2-карбоксамида (Соединение A).

[0076] Использовали следующую последовательность реакций (Схема A) для синтеза (S)-N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида.

Схема A. Синтез Соединения A.

[0077] Синтез (S)-трет-бутил-1-((S)-3-ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)пропаноил)пирролидин-2-карбоксилата (2):

[0078] (S)-3-Ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)пропановую кислоту (1,5 г, 5,33 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (15 мл). Добавляли N-метилморфолин (NMM) (0,64 мл, 5,87 ммоль) и изобутилхлорформиат (IBCF) (0,72 мл, 6,12 ммоль) при -15°С и перемешивали в течение 30 минут в инертной атмосфере. К реакционной смеси по каплям добавляли смесь (S)-трет-бутилпирролидин-2-карбоксилата (1) (998 мг, 5,87 ммоль) и NMM (0,64 мл, 5,87 ммоль) в ДМФА (5 мл) и продолжали перемешивание еще 3 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл), промывали водой (50 мл), раствором лимонной кислоты (10 мл) и насыщенным солевым раствором (10 мл). Отделенный органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30% смесью EtOAc/гексана, с получением соединения 2 (1,6 г, 69,5%).

[0079] ¹H ЯМР: (200 МГц, ДМСО-d6): δ 7,81-7,76 (д, J = 20,5 Гц, 1H), 7,35-7,30 (м, 5H), 5,03-4,97 (м, 2H), 4,61-4,55 (м, 1H), 4,32-4,16 (м, 2H), 4,08-3,87 (м, 2H), 3,65-3,59 (м, 1H), 2,21-2,11 (м, 2H), 1,98 (с, 3H), 1,91-1,75 (м, 2H), 1,37 (с, 9H); масса m/z: 435,0 [M++1].

[0080] Синтез (S)-1-((S)-3-ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)пропаноил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (3):

[0081] К раствору соединения 2 (1 г, 2,30 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл) добавляли 20% смесь ТФК-ДХМ (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали EtOAc (2 × 15 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 3 (800 мг, 92%).

[0082] ¹H ЯМР: (200 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,58 (шс, 1H), 7,81-7,77 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 7,35-7,27 (м, 5H), 5,04-4,96 (м, 2H), 4,66-4,60 (м, 1H), 4,32-4,24 (м, 2H), 4,04-3,86 (м, 1H), 3,66-3,59 (т, J = 12,6 Гц, 2H), 2,17-2,07 (м, 3H), 1,98-1,80 (м, 4H); Масса m/z: 379,0 [M⁺+1].

[0083] Синтез (2S,3R)-метил-2-((S)-1-((S)-1-((R)-3-ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)пропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамидо-3-гидроксибутаноата (5):

[0084] Соединение 3 (1,0 г, 2,64 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (10 мл), к реакционной смеси добавляли NMM (0,32 г, 3,17 ммоль) и IBCF (0,41 г, 3,04 ммоль) при -15 °С и перемешивали в течение 30 минут в инертной атмосфере. К реакционной смеси по каплям добавляли смесь (2S,3R)-метил-3-гидрокси-2-((S)-пирролидин-2-карбоксамидо)бутаноата (4) (0,73 г, 3,17 ммоль) и NMM (0,35 мл) в ДМФА (3 мл) при -15 °С и продолжали перемешивание еще 3 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл), промывали водой (20 мл), раствором лимонной кислоты (2 × 20 мл) и насыщенным солевым раствором (2 × 50 мл). Отделенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% смесью CH₃OH/EtOAc, с получением соединения (5) (0,29 г, 19%).

[0085] ¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,83-7,81 (м, 1H), 7,72-7,70 (м, 1H), 7,36-7,35 (м, 5H), 5,07-5,01 (м, 2H), 4,99-4,93 (м, 1H), 4,58 (с, 1H), 4,50-4,48 (м, 1H), 4,26-4,22 (м, 2H), 4,07-4,00 (м, 2H), 3,89-3,86 (м, 1H), 3,61-3,55 (м, 5H), 3,53 (с, 1H), 3,39 (с, 1H), 2,12 (с, 1H), 1,98 (с, 3H), 1,94-1,83 (м, 4H), 1,81-1,80 (м, 3H), 1,05 (д, J = 6,5 Гц, 3H). Масса m/z: 591,0 [M⁺+1].

[0086] Синтез бензил-(R)-1-((S)-2-((S)-2-((2S,3R)-1-(аминоокси)-3-гидрокси-1-оксобутан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил)пирролидин-1-ил)-3-гидрокси-1-оксопропан-2-илкарбамата (6):

[0087] Метанольный раствор аммиака (3 мл) добавляли к соединению 5 (0,28 г, 0,47 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением соединения 6 (0,21 г, 82,3%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,38-7,31 (м, 5H), 7,26 (с, 1H), 7,10-7,03 (м, 2H), 6,65 (шс, 1H), 5,04-5,01 (м, 2H), 4,98-4,84 (м, 1H), 4,76-4,75 (м, 1H), 4,61 (с, 1H), 4,38-4,31 (м, 2H), 4,02-4,00 (м, 2H), 3,77-3,74 (м, 1H), 3,67-3,56 (м, 3H), 3,44-3,37 (м, 2H), 2,14-1,86 (м, 8H), 1,01-1,00 (м, 3H).

Масса m/z: 550 [M⁺+1].

[0088] Синтез (S)-N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида (Соединение A): К раствору соединения 6 (0,21 г, 0,39 ммоль) в метаноле (5 мл) добавляли 10% Pd/C (30 мг) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали через целит, выпаривали растворитель в вакууме и растирали полученный неочищенный остаток с диэтиловым эфиром с получением соединения A (130 мг, 83,3%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆) (ротамеры): δ 7,39 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 7,08-7,03 (м, 2H), 6,65 (шс, 1H), 4,89-4,85 (м, 1H), 1,61-1,59 (м, 1H), 4,39-4,38 (м, 1H), 4,02-4,00 (м, 2H), 3,68-3,52 (м, 4H), 3,43-3,36 (м, 2H), 3,22-3,10 (м, 2H), 2,19-2,13 (м, 1H), 2,07-1,98 (м, 1H), 1,93-1,81 (м, 5H), 1,75 (с, 2H), 1,01-1,00 (м, 3H).

ЖХМС m/z: 400,2 [M⁺+1].

Чистота по ВЭЖХ: 99,27%.

[0089] Синтез (S)-1-(бензилоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (8): К перемешиваемому раствору (S)-пирролидин-2-карбоновой кислоты (7) (2,0 г, 17,39 ммоль) в ТГФ:H₂O (20 мл, 1:1) добавляли Na₂CO₃ (2,76 г, 26,08 ммоль) и Cbz-Cl (3,54 г, 20,80 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь промывали EtOAc (10 мл) и подкисляли водный слой 3 н раствором HCl, и экстрагировали EtOAc (2 × 20 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 8 (3,0 г, 69,7%).

[0090] ¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,62 (шс, 1H), 7,36-7,22 (м, 5H), 5,12-5,00 (м, 2H), 4,24-4,15 (дд, J = 5,0, 36,0 Гц, 1H), 3,46-3,31 (м, 2H), 2,25-2,15 (м, 1H), 1,94-1,79 (м, 3H).

Масса m/z:250,0 [M⁺+1].

Синтез (S)-бензил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1-метокси-1-оксобутан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоксилата (9):

[0091] Соединение 8 (5,0 г, 20,08 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (50 мл), добавляли NMM (2,43 мл, 22,08 ммоль) и IBCF (2,74 мл, 23,09 ммоль) и перемешивали при -15 °С в течение 30 минут в инертной атмосфере. По каплям добавляли смесь (2S,3R)-метил-2-амино-3-гидроксибутаноата (2,93 г, 22,08 ммоль) и NMM (2,43 мл, 22,08 ммоль) в ДМФА (15 мл) при -15 °С. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Смесь разбавляли ДХМ (200 мл) и промывали органический слой водой (50 мл), насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 30% смесью EtOAc/гексана, с получением соединения 9 (3,1 г, 42%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆)(ротамеры): δ 7,98-7,94 (м, 1H), 7,35-7,27 (м, 5H), 5,09-4,94 (м, 3H), 4,44 (дд, J = 5,5, 8,5 Гц, 1H), 4,29-4,27 (м, 1H), 4,12 (с, 1H), 3,62 (с, 3H), 3,44-3,30 (м, 2H), 2,20-2,08 (м, 1H), 1,87-1,78 (м, 3H), 1,08-0,94 (2д, 3H).

Масса m/z: 365,0 [M⁺+1].

Пример 5. Синтез (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида (Соединение B):

[0092] Использовали следующую последовательность реакций (Схема B) для синтеза (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида:

Схема B. Синтез Соединения B

[0093] Синтез (S)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2):

[0094] К ледяному перемешиваемому раствору (S)-пирролидин-2-карбоновой кислоты (1) (3,0 г, 26,08 ммоль) в ТГФ:H₂O (60 мл, 1:1) добавляли Na₂CO₃ (5,52 г, 52,16 ммоль), Boc₂O (6,25 г, 26,69 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли водой и промывали EtOAc (50 мл). Водный слой подкисляли 2 н раствором HCl и экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл). Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением (S)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2) (4,8 г, 86%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,49 (шс, 1H), 4,08-4,03 (м, 1H), 3,36-3,24 (м, 2H), 2,22-2,11 (м, 1H), 1,87-1,76 (м, 3H), 1,39 (с, 9H).

Масса m/z: 216,0 [M⁺+1].

[0095] Синтез (S)-трет-бутил-2-((S)-3-гидрокси-1-метокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоксилата (3):

[0096] Соединение 2 (2,0 г, 9,00 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (10 мл), охлажденном до -15 °С, добавляли NMM (1,12 мл, 10,2 ммоль) и IBCF (1,26 мл, 1,15 ммоль) и перемешивали при 0 °С в течение 20 минут. По каплям добавляли смесь (S)-метил-2-амино-3-гидроксипропаноата (1,59 г, 10,2 ммоль) и NMM (1,12 мл) в ДМФА (3 мл) при -15 °С и перемешивали полученную реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь разбавляли ДХМ (200 мл), водой (50 мл) и промывали 2 н раствором HCl (20 мл) и насыщенным солевым раствором (2 × 50 мл). Отделенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% смесью EtOAc/гексана, с получением соединения 3 (2,3 г) в виде сиропообразного вещества.

Масса m/z: 317,0 [M⁺+1].

[0097] Синтез (S)-метил-3-гидрокси-2-((S)-пирролидин-2-карбоксамидо)пропионата (4):

(S)-Трет-бутил-2-((S)-3-гидрокси-1-метокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоксилат (3) (500 мг, 1,58 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (3 мл) и добавляли раствор HCl в диоксане (3,16 мл, 3,16 ммоль), и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением соединения 4 (280 мг) в виде твердого вещества.

¹H ЯМР: (200 МГц, ДМСО-d₆): δ 9,99 (шс, 1H), 9,12-9,08 (м, 1H), 8,53 (шс, 1H), 5,48 (шс, 2H), 4,43-4,22 (м, 2H), 3,82-3,67 (м, 4H), 3,56 (с, 3H), 2,36-2,27 (м, 1H), 1,93-1,86 (м, 3H).

Масса m/z: 217,0 [M⁺+1].

[0098] Синтез (S)-метил-2-((S)-1-((S)-1-((2R,3S)-3-ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)бутаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамидо)-3-гидроксипропаноата (6):

[0099] (2S)-1-((2R)-3-ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)бутаноил)пирролидин-2-карбоновую кислоту (5) (1,3 г, 2,62 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (15 мл), добавляли NMM (0,43 мл) и IBCF (0,51 мл) при -10 °С и перемешивали в течение 30 минут в инертной атмосфере. К реакционной смеси по каплям добавляли (S)-метил-3-гидрокси-2-((S)-пирролидин-2-карбоксамидо)пропионат (4) (992 мг, 3,93 ммоль) и NMM (0,43 мл) в ДМФА (5 мл) и продолжали перемешивание еще 3 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл), промывали водой (20 мл), раствором лимонной кислоты (2 × 20 мл) и насыщенным солевым раствором (2 × 50 мл). Отделенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% смесью CH₃OH/CH₂Cl₂, с получением соединения 6 (270 мг, 17,5%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,13 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 7,74 (д, J = 7,5 Гц, 1H), 7,38-7,31 (м, 5H), 5,08-4,96 (м, 3H), 4,85-4,82 (м, 1H), 4,56 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 4,44-4,42 (м, 2H), 4,27 (д, J = 7,0 Гц, 1H), 4,10 (д, J = 10,5 Гц, 2H), 3,81-3,78 (м, 1H), 3,72-3,70 (м, 1H), 3,61-3,59 (м, 3H), 3,54-3,50 (м, 2H), 2,16-2,14 (м, 1H), 2,05-2,01 (м, 1H), 1,90 (с, 3H), 1,87-1,86 (м, 3H), 1,85-1,84 (м, 3H), 1,21-1,20 (д, J = 6,0 Гц, 3H).

Масса m/z: 591,0 [M⁺+1].

[00100] Синтез бензил-(2R,3S)-1-((S)-2-((S)-2-((S)-1-(аминоокси)-3-гидрокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил)пирролидин-1-ил)-3-гидрокси-1-оксобутан-2-илкарбамата (7):

[00101] К раствору соединения 6 (250 г, 0,42 ммоль) в CH₃OH (2 мл) добавляли MeOH-NH₃ (10 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением соединения 7 (190 мг, 84%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,60 (д, J = 7,5 Гц, 1H), 7,35-7,30 (м, 5H), 7,18 (д, J = 7,0 Гц, 1H), 7,11-7,06 (м, 2H), 5,05-4,97 (м, 2H), 4,82-4,81 (м, 1H), 4,60-4,59 (м, 2H), 4,33-4,31 (м, 1H), 4,15-4,08 (м, 2H), 3,81-3,79 (м, 1H), 3,72-3,64 (м, 2H), 3,59-3,53 (м, 4H), 2,14 (с, 1H), 2,03 (д, J = 9,0 Гц, 1H), 1,95-1,85 (м, 5H), 1,75 (с, 1H), 1,10 (д, J = 6,5 Гц, 3H).

Масса m/z: 550,0 [M⁺+1].

[00102] Синтез (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида (B):

[00103] К раствору соединения 7 (190 мг, 0,35 ммоль) в метаноле (5 мл) добавляли 10% Pd/C (50 мг) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, растворитель выпаривали в вакууме, а неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на основном оксиде алюминия, используя 0-5% CH₃OH в CH₂Cl₂ в качестве элюента, с получением соединения B (130 мг, 73%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,65-7,60 (м, 1H), 7,12-7,03 (м, 2H), 4,81 (шс, 1H), 4,58-4,57 (м, 1H), 4,49 (м, 1H), 4,38-4,19 (м, 1H), 4,10-4,06 (м, 1H), 3,69-3,62 (м, 2H), 3,59-3,56 (м, 4H), 3,49-3,45 (м, 2H), 3,37-3,26 (м, 2H), 2,19-2,15 (м, 1H), 2,09-1,99 (м, 1H), 1,95-1,84 (м, 5H), 1,75 (с, 1H), 1,06 (д, J = 13,0 Гц, 3H).

ЖХМС m/z: 400,8 [M⁺+1].

Чистота по ВЭЖХ: 97,71%.

Пример 6. Синтез (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида (Соединение C):

[00104] Использовали следующую последовательность реакций (Схема C) для синтеза (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида.

Схема C. Синтез Соединения C.

[00105] Синтез (S)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (2):

[00106] К перемешиваемому раствору (S)-пирролидин-2-карбоновой кислоты (3,0 г, 26,08 ммоль) в ТГФ:H₂O (60 мл, 1:1) при 0 °С добавляли Na₂CO₃ (5,52 г, 52,16 ммоль) и Boc₂O (6,25 г, 26,69 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Реакционную смесь разбавляли водой и промывали EtOAc (50 мл). Водный слой подкисляли 2 н раствором HCl и экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением (S)-1-(трет-бутоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты 2 (4,8 г, 85,7%).

Масса m/z: 216,0 [M⁺+1].

[00107] Синтез (S)-трет-бутил-2-((S)-3-гидрокси-1-метокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоксилата (3):

[00108] Соединение 2 (2,0 г, 9,00 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (10 мл), охлажденном до -15 °С, добавляли NMM (1,12 мл, 10,2 ммоль) и IBCF (1,26 мл, 1,15 ммоль) и перемешивали при 0 °С в течение 20 минут. По каплям добавляли смесь (S)-метил-2-амино-3-гидроксипропаноата (1,59 г, 10,2 ммоль) и NMM (1,12 мл) в ДМФА (3 мл) при -15 °С. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл) и водой (25 мл) и промывали 2 н раствором HCl (20 мл) и насыщенным солевым раствором (10 мл). Отделенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 20% смесью EtOAc/гексана, с получением соединения 3 (2,3 г) в виде твердого вещества.

Масса m/z: 317,0 [M⁺+1].

[00109] Синтез (S)-метил-3-гидрокси-2-((S)-пирролидин-2-карбоксамидо)пропаноата (4):

[00110] К раствору (S)-трет-бутил-2-((S)-3-гидрокси-1-метокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоксилата 3 (500 мг, 1,58 ммоль) в 1,4-диоксане (3 мл) добавляли раствор HCl в диоксане (3,16 мл, 3,16 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением соединения 4 (280 мг) в виде твердого вещества.

Масса m/z: 217,0 [M⁺+1].

[00111] Синтез (S)-метил-2-((S)-1-((S)-1-((S)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамидо)-3-гидроксипропаноата (6):

[00112] (S)-1-((S)-3-Ацетокси-2-(бензилоксикарбониламино)пропаноил)пирролидин-2-карбоновую кислоту (5) (400 мг, 1,05 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂(2 мл), добавляли NMM (0,13 мл) и IBCF (0,14 мл) при -15 °С и перемешивали в течение 30 минут в инертной атмосфере. К реакционной смеси по каплям добавляли смесь (S)-метил-3-гидрокси-2-((S)-пирролидин-2-карбоксамидо)пропаноата гидрохлорида (4) (293 мг, 1,16 ммоль) и NMM (0,13 мл) в ДМФА (2 мл) и продолжали перемешивание еще 3 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли ДХМ (200 мл), промывали водой (20 мл) и насыщенным солевым раствором (10 мл). Отделенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% смесью CH₃OH/CH₂Cl₂, с получением соединения 6 (80 мг, 13%).

[00113] ¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,09 (д, J = 7,5 Гц, 1H), 7,71 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 7,36-7,31 (м, 6H), 5,07-4,99 (м, 3H), 4,59-4,58 (м, 2H), 4,41-4,40 (м, 1H), 4,29-4,24 (м, 3H), 3,86 (т, J = 9,5 Гц, 1H), 3,72-3,68 (м, 1H), 3,64-3,57 (м, 3H), 3,40-3,38 (м, 3H), 2,14-2,01 (м, 2H), 1,98 (с, 3H), 1,90-1,80 (м, 6H).

Масса m/z: 535,0 [M⁺+1].

[00114] Синтез бензил-(S)-1-((S)-2-((S)-2-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил)пирролидин-1ил)-3-гидрокси-1-оксопропан-2-илкарбамата (7):

[00115] К раствору (S)-метил-2-((S)-1-((S)-1-((S)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамидо-3-гидроксипропаноата (6) (60 мг, 1,04 ммоль) в MeOH добавляли MeOH-NH₃ (3 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением соединения 7 (30 мг, 55%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,60 (д, J = 7,5 Гц, 1H), 7,36-7,31 (м, 6H), 7,11-7,06 (м, 2H), 5,04-4,98 (м, 2H), 4,82-4,74 (м, 2H), 4,61-4,59 (м, 1H), 4,36-4,30 (м, 2H), 4,10-4,07 (м, 1H), 3,67-3,65 (м, 2H), 3,59-3,55 (м, 6H), 3,44-3,40 (м, 2H), 1,95-1,92 (м, 6H).

Масса m/z: 520,0 [M⁺+1].

[00116] Синтез (S)-N-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-ил)-1-((S)-1-((S)-2-амино-3-гидроксипропаноил)пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамида (C):

Бензил-(S)-1-((S)-2-((S)-2-((S)-1-амино-3-гидрокси-1-оксопропан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбонил)пирролидин-1-ил)-3-гидрокси-1-оксопропан-2-илкарбамат 7 (300 мг, 0,57 ммоль) растворяли в метаноле (8 мл), добавляли 10% Pd/C (50 мг) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением соединения C (150 мг, 68%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆) (ротамеры): δ 7,62 (д, J = 8,0 Гц, 1H), 7,24 (шс, 1H), 7,14-7,07 (м, 2H), 4,87-4,82 (м, 2H), 4,59-4,57 (м, 1H), 4,37-4,31 (м, 2H), 4,11-4,07 (м, 2H), 3,70-3,39 (м, 8H), 2,17-2,01 (м, 2H), 1,95-1,79 (м, 6H).

ЖХМС m/z: 386,4 [M⁺+1].

Чистота по ВЭЖХ: 98,45%.

Пример 7. Синтез N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)-2-бензилпирролидин-2-карбоксамида (Соединение D и E):

Использовали следующую последовательность реакций (Схема D) для синтеза N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)-2-бензилпирролидин-2-карбоксмида (Соединение D и E):

Схема D. Синтез Соединения D и E.

[00117] Синтез 1-бензил-2-этил-2-бензилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (2):

[00118] К раствору (S)-1-бензил-2-этилпирролидин-1,2-дикарбоксилата (1) (10 г, 36,10 ммоль) в ТГФ (150 мл) в инертной атмосфере добавляли LiHMDS (1 М в ТГФ) (43,3 мл, 43,3 ммоль) при -25 °С и перемешивали в течение 2 часов. К реакционной смеси по каплям добавляли бензилбромид (5,17 мл, 43,26 ммоль) при -25 °С. Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь охлаждали до 5 °С, гасили насыщенным раствором NH₄Cl и экстрагировали водный слой EtOAc (2 × 200 мл). Объединенные органические экстракты сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 5% смесью EtOAc/гексана, с получением соединения 2 (13 г, 75%) в виде жидкого вещества.

¹H ЯМР: (200 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,47-7,32 (м, 5H), 7,27-7,16 (м, 3H), 7,07-7,04 (м, 2H), 5,29-5,06 (м, 2H), 4,16-3,89 (м, 2H), 3,57-3,33 (м, 2H), 3,02-2,78 (м, 2H), 2,13-1,89 (м, 2H), 1,56-1,51 (м, 1H), 1,21-1,04 (м, 3H), 0,93-0,79 (м, 1H).

Масса m/z: 368,2 [M⁺+1].

[00119] Синтез 2-бензил-1-(бензилоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (3):

К перемешиваемому раствору соединения 2 (8,0 г, 21,79 ммоль) в CH₃OH (20 мл) добавляли 2 н. водный раствор KOH (20 мл) и нагревали до 100 °С, и перемешивали в течение 16 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток разбавляли ледяной водой (50 мл) и промывали эфиром (50 мл). Водный слой подкисляли до pH~2 раствором HCl и экстрагировали EtOAc (2 × 100 мл). Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 3 (6 г, 81%) в виде грязновато-белого твердого вещества.

¹H ЯМР: (200 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,71 (шс, 1H), 7,40-7,30 (м, 5H), 7,25-7,19 (м, 3H), 7,07-7,00 (м, 2H), 5,27-5,02 (м, 2H), 3,59-3,32 (м, 2H), 3,02-2,83 (м, 2H), 2,13-1,91 (м, 2H), 1,58-1,49 (м, 1H), 0,90-0,77 (м, 1H).

Масса m/z: 340,1 [M⁺+1].

[00120] Синтез бензил-2-бензил-2-((2S,3R)-3-гидрокси-1-метокси-1-оксобутан-2-илкарбамоил)пирролидин-1-карбоксилата (4):

[00121] К суспензии соединения 3 (1,0 г, 2,94 ммоль), метилового эфира L-треонина (471 мг, 3,53 ммоль) в ДМФА (20 мл) добавляли HATU (1,12 г, 2,94 ммоль) и DIPEA (1,58 мл, 8,84 ммоль) при 5 °С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Смесь разбавляли EtOAc (150 мл) и промывали водой (2 × 30 мл). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, концентрировали и очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя 50% смесь EtOAc/гексана в качестве элюента, с получением соединения 4 (1,0 г, 74%).

¹H ЯМР: (200 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,62-7,59 (м, 1H), 7,44-7,31 (м, 5H), 7,21-7,18 (м, 3H), 7,06-6,99 (м, 2H), 5,25-5,24 (м, 1H), 5,12-4,94 (м, 2H), 4,30 (с, 1H), 4,15-4,08 (м, 1H), 3,66-3,64 (м, 3H), 3,63-3,49 (м, 2H), 3,14 (с, 1H), 2,89 (с, 1H), 2,09-2,02 (м, 2H), 1,56-1,51 (м, 1H), 1,09-0,98 (м, 4H).

Масса m/z: 455,1 [M⁺+1], 477,3 [M+Na].

[00122] Синтез бензил-2-((2S,3R)-3-ацетокси-1-метокси-1-оксобутан-2-илкарбамоил)-2-бензилпирролидин-1-карбоксилата (5):

[00123] Соединение 4 (3 г, 6,60 ммоль) растворяли в ТГФ (30 мл), добавляли Et₃N (1,11 мл, 7,92 ммоль) и Ac₂O (742 мг, 7,26 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении и разбавляли полученный остаток в CH₂Cl₂, и промывали разбавленной HCl. Объединенные органические экстракты сушили над Na₂SO₄и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией, используя 30% смесь EtOAc/гексана в качестве элюента, с получением соединения 5 (2,5 г, 76%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆) (ротамеры): δ 8,15-7,71 (м, 1H), 7,42-7,04 (м, 10H), 5,30-5,19 (м, 2H), 5,11-5,09 (м, 1H), 4,99-4,93 (м, 1H), 4,67-4,62 (м, 1H), 3,66-3,64 (м, 3H), 3,55-3,46 (м, 2H), 3,38-3,35 (м, 1H), 2,88-2,69 (м, 1H), 2,17-2,00 (м, 2H), 1,98-1,92 (м, 3H), 1,56-1,46 (м, 1H), 1,23-1,17 (м, 3H), 1,02-0,86 (м, 1H).

ЖХМС m/z: 497,4 [M⁺+1].

[00124] Синтез (2S,3R)-метил-3-ацетокси-2-(2-бензилпирролидин-2-карбоксамидо)бутаноата (6):

[00125] К перемешиваемому раствору соединения 5 (4 г, 8,06 ммоль) в этаноле (50 мл) добавляли 10% Pd/C (1,2 г) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере H₂ (баллонное давление) в течение 4 часов. Смесь фильтровали через слой целита и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением соединения 6 (2,2 г, 75%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆) (ротамеры): δ 8,22-8,17 (м, 1H), 7,24-7,16 (м, 5H), 5,17 (т, J = 11,5 Гц, 1H), 4,48-4,42 (м, 1H), 3,60-3,54 (с, 3H), 3,20 (т, J = 13,5 Гц, 1H), 3,06-2,97 (м, 1H), 2,82-2,68 (м, 3H), 2,08-2,02 (м, 1H), 1,89 (с, 3H), 1,72-1,51 (м, 3H), 1,10 (2д, 3H).

ЖХМС m/z: 363 [M⁺+1], 385 [M+Na].

[00126] Синтез (S)-бензил-2-(2-((2S,3R)-3-ацетокси-1-метокси-1-оксобутан-2-илкарбамоил)-2-бензилпирролидин-1-карбонил)пирролидин-1-карбоксилата (7):

[00127] К перемешиваемому раствору соединения 6 (1 г, 2,76 ммоль) и Na₂CO₃ (732 мг, 6,90 ммоль) в смеси CH₂Cl₂:H₂O (20 мл, 1:1) добавляли раствор хлорангидрида кислоты [К раствору (S)-1-(бензилоксикарбонил)пирролидин-2-карбоновой кислоты (825 мг, 3,31 ммоль) в CH₂Cl₂ (20 мл) по каплям добавляли SOCl₂ (0,60 мл) при 0 °С и нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 2 часов. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением (S)-бензил-2-(хлоркарбонил)пирролидин-1-карбоксилата] в CH₂Cl₂ и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 часов. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении. Остаток разбавляли CH₂Cl₂ (100 мл), фильтровали и концентрировали фильтрат под вакуумом. Неочищенный остаток очищали колоночной хроматографией, используя 60% смесь EtOAc/гексана в качестве элюента, с получением соединения 7 (750 мг, 45%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆) (ротамеры): δ 7,36-7,23 (м, 8H), 7,15-7,12 (м, 3H), 5,21-5,15 (м, 2H), 5,04-4,92 (м, 1H), 4,57-4,50 (м, 2H), 3,88 (д, J = 14,5 Гц, 1H), 3,65 (с, 3H), 3,54-3,46 (м, 3H), 3,21-3,13 (м, 1H), 3,02-2,90 (м, 2H), 2,19-2,02 (м, 4H), 1,97 (с, 3H), 1,89 (с, 1H), 1,77-1,65 (м, 1H), 1,17 (с, 2H), 1,06 (с, 2H).

Масса m/z: 594,1 [M⁺+1].

[00128] Синтез (2S,3R)-метил-3-ацетокси-2-(2-бензил-1-((S)-пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамидо)бутаноата (8):

[00129] К раствору соединения 7 (200 мг, 0,336 ммоль) в EtOAc (15 мл) добавляли 10% Pd/C (40 мг) в инертной атмосфере и перемешивали в течение 12 часов в атмосфере H₂ (баллонное давление). Реакционную смесь фильтровали через слой целита и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растирали с эфиром (10 мл) с получением соединения 8 (125 мг, 81%) в виде твердого вещества.

¹H ЯМР: (500 МГц, CDCl₃) (ротамеры): δ 7,88-7,87 (д, 1H, J= 8,5), 7,30-7,26 (м, 2H), 7,24-7,21 (м, 1H), 7,13-7,12 (д, 2H, J = 7), 5,44-5,43 (м, 1H), 4,76-4,74 (м, 1H), 3,94-3,92 (м, 1H), 3,84-3,81 (м, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,50 (м, 1H), 3,26-3,12 (м, 3H), 2,90-2,88 (м, 1H), 2,23-2,15 (м, 4H), 2,04 (с, 3H), 1,87-1,77 (м, 5H), 1,27-1,24 (м, 3H).

Масса m/z: 460 (M+1).

[00130] Синтез бензил-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-гидроксибутаноата (10):

[00131] К раствору 2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-гидроксибутановой кислоты (3,0 г, 13,69 ммоль) в ДМФА (50 мл) добавляли K₂CO₃ (3,73 г, 27,39 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Добавляли (бромметил)бензол (2,81 г, 16,43 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (2 × 50 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным солевым раствором (50 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя 20% смесь EtOAc/гексана в качестве элюента, с получением бензил-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-гидроксибутаноата 10 (2,8 г, 66%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,37-7,30 (м, 5H), 6,60 (д, J = 8,5 Гц, 1H), 5,18-5,08 (м, 2H), 4,76 (д, J = 7 Гц, 1H), 4,08-4,00 (м, 2H), 1,38 (с, 9H), 1,09 (д, J = 6,0 Гц, 3H).

Масса m/z: 310,0 [M⁺+1], 210 [M⁺-De Boc].

[00132] Синтез бензил-3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутаноата (11):

[00133] К перемешиваемому раствору бензил-2-(трет-бутоксикарбониламино)-3-гидроксибутаноата (2,8 г, 9,06 ммоль) в ТГФ (80 мл) добавляли Ac₂O (1,1 г, 10,87 ммоль), Et₃N (1,51 мл, 10,87 ммоль) и DMAP (280 мг) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. Летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток разбавляли EtOAc (150 мл) и промывали холодным 0,5 н раствором HCl (2 × 20 мл). Органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении с получением 3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутаноата 11 (2,8 г, 88%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 7,35-7,34 (м, 5H), 7,27-7,25 (д, J = 8,5 Гц, 1H), 5,18-5,06 (м, 3H), 4,34-4,32 (м, 1H), 1,90 (с, 3H), 1,39 (с, 9H), 1,16 (д, J = 3 Гц, 3H).

Масса m/z: 252 [M⁺+1-De Boc].

[00134] Синтез (2S,3R)-3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутановой кислоты (12):

[00135] Бутил-3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутаноат 11 (1,4 г, 3,98 ммоль) растворяли в EtOAc (40 мл), добавляли 10% Pd/C (600 мг) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в течение 16 часов. Реакционную смесь фильтровали через целит, растворитель выпаривали в вакууме и растирали неочищенный остаток с гексаном с получением (2S,3R)-3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутановой кислоты 12 (0,7 г, 70%).

¹H ЯМР: (500 МГц, ДМСО-d₆): δ 12,78 (шс, 1H), 6,94 (д, J = 9,5 Гц, 1H), 5,16-5,14 (м, 1H), 4,17-4,15 (м, 1H), 1,95 (с, 3H), 1,39 (с, 9H), 1,10 (д, J = 6,0 Гц, 3H).

Масса m/z: 260,0 [M-1].

[00136] Синтез (2S,3R)-метил-3-ацетокси-2-(1-((S)-1-((2S,3R)-3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутаноил)пирролидин-2-карбонил)-2-бензилпирролидин-2-карбоксамидо)бутаноата (13):

[00137] К раствору соединения (2S,3R)-3-ацетокси-2-(трет-бутоксикарбониламино)бутановой кислоты 12 (199 мг, 0,76 ммоль) в CH₂Cl₂ (6 мл) в инертной атмосфере добавляли IBCF (125 мг, 0,91 ммоль) и NMM (154 мг, 1,52 ммоль) при -15 °С и перемешивали в течение 1 часа. К реакционной смеси добавляли раствор (2S,3R)-метил-3-ацетокси-2-(2-бензил-1-((S)-пирролидин-2-карбонил)пирролидин-2-карбоксамидо)бутаноата 8 (350 мг, 0,76 ммоль) в ДМФА (2 мл) и перемешивали в течение 1 часа при -15 °С. Полученную реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 19 часов. Реакционную смесь экстрагировали EtOAc и промывали отделенный органический слой водой (20 мл), затем насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное вещество очищали препаративной ВЭЖХ с получением соединения 13 (100 мг, 20%).

¹H ЯМР: (500 МГц, CD₃OD) (ротамеры): δ 7,30-7,24 (м, 3H), 7,15-7,13 (м, 2H), 4,62-4,55 (м, 2H), 4,29-3,97 (м, 1H), 3,98-3,79 (м, 4H), 3,75 (с, 3H), 3,62-3,22 (м, 2H), 3,23 (д, J = 13,5 Гц, 1H), 3,00-2,95 (к, 1H), 2,37-2,31 (м, 1H), 2,23-2,10 (м, 2H), 2,02-1,88 (м, 3H), 1,46-1,28 (м, 2H), 0,97 (д, J = 7,0 Гц, 6H).

[00138] Синтез N-((2S,3R)-1-амино-3-гидрокси-1-оксобутан-2-ил)-1-((S)-1-((2S,3R)-2-амино-3-гидроксибутаноил)пирролидин-2-карбонил)-2-бензилпирролидин-2-карбоксамида (D и E):

[00139] Раствор соединения 13 (100 мг, 0,153 ммоль) в метанольном растворе NH₃ (10 мл) перемешивали в закрытой пробирке при комнатной температуре в течение 72 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток промывали эфиром (2 × 2 мл) с получением диастереомерной смеси Соединения D и E (85 мг). 85 мг полученной смеси дополнительно очищали хиральной препаративной ВЭЖХ с получением 15 мг каждого из Соединений D и E.

¹H ЯМР: (500 МГц, CD₃OD) (ротамеры): δ 7,33-7,26 (м, 3H), 7,16 (с, 2H), 4,55-4,54 (м, 1H), 4,39 (с, 1H), 4,14 (с, 1H), 4,01-3,98 (м, 1H), 3,91-3,71 (м, 3H), 3,59 (с, 2H), 3,25-3,16 (м, 1H), 3,04-3,00 (м, 1H), 2,33-2,10 (м, 3H), 2,01-1,91 (м, 2H), 1,86-1,80 (м, 1H), 1,46-1,44 (м, 1H), 1,34-1,29 (м, 1H), 1,25-1,19 (м, 3H), 0,99-0,97 (д, J = 14,0 Гц, 3H).

Масса m/z: 503 [M⁺]; чистота по ВЭЖХ: 98,1%.

ЭКВИВАЛЕНТЫ

[00140] Специалистам в данной области техники будут понятны, или они смогут установить на основе не более чем стандартного проведения экспериментов, многие эквиваленты конкретных вариантов реализации данного изобретения, описанных в данном документе. Подразумевается, что такие эквиваленты включены в объем нижеследующей формулы изобретения.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

[00141] Полное содержание всех патентов, опубликованных патентных заявок, веб-сайтов и других ссылок, упомянутых в данном описании, специально включено в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

Claims

1. Способ реверсирования или предупреждения когнитивного нарушения у пациента, которому субхронически вводили антагонист NMDAR, включающий введение указанному пациенту субэффективного количества рапастинела и субэффективного количества луразидона.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что антагонист NMDAR представляет собой кетамин.

3. Применение комбинации субэффективного количества рапастинела и субэффективного количества луразидона для реверсирования или предупреждения когнитивного нарушения у пациента, которому субхронически вводили антагонист NMDAR.

4. Применение по п. 3, отличающееся тем, что антагонист NMDAR представляет собой кетамин.