RU2800042C1 - Spiro compounds as erk inhibitors and their use - Google Patents
Spiro compounds as erk inhibitors and their use Download PDFInfo
- Publication number
- RU2800042C1 RU2800042C1 RU2022118235A RU2022118235A RU2800042C1 RU 2800042 C1 RU2800042 C1 RU 2800042C1 RU 2022118235 A RU2022118235 A RU 2022118235A RU 2022118235 A RU2022118235 A RU 2022118235A RU 2800042 C1 RU2800042 C1 RU 2800042C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- compound
- pharmaceutically acceptable
- added
- mixture
- acceptable salt
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕFIELD OF TECHNOLOGY TO WHICH THE INVENTION RELATES
Настоящее изобретение касается спиросоединений в качестве ингибиторов ERK и их применения при изготовлении лекарственных средств для лечения заболеваний, связанных с ERK. В частности, настоящее изобретение касается соединений, представленных формулой (III), либо их фармацевтически приемлемых солей.The present invention relates to spiro compounds as ERK inhibitors and their use in the manufacture of medicaments for the treatment of diseases associated with ERK. In particular, the present invention relates to compounds represented by formula (III) or their pharmaceutically acceptable salts.
Уровень техникиState of the art
Путь Ras/Raf/MEK/ERK - классический путь сигнального каскада митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK), который участвует в передаче сигналов различных факторов роста, цитокинов, митогенов и рецепторов гормонов после активации и является одним из самых важных путей передачи сигналов для контроля роста, дифференцировки и выживания клеток.The Ras/Raf/MEK/ERK pathway is a classic pathway of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling cascade that is involved in the signaling of various growth factors, cytokines, mitogens, and hormone receptors after activation and is one of the most important signaling pathways for the control of cell growth, differentiation, and survival.
Исследования показали, что аномальная активация пути Ras/Raf/MEK/ERK, вызванная мутацией или амплификацией, является детерминантой различных раковых заболеваний. В опухолях у человека частота мутаций RAS составляет около 22%, частота мутаций BRAF - около 7%, а частота мутаций MEK - около 1%. Поэтому белки ключевых узлов на этом пути стали важными мишенями для лечения рака (Cancer Discov. 2019, 9, 329-341). В настоящее время ряд ингибиторов BRAF и ингибиторов MEK1/2, а также их комбинированные схемы одобрены FDA США для лечения меланомы, немелкоклеточного рака легких с мутацией BRAFV600E и других раковых заболеваний. Однако применение ингибиторов BRAF и MEK для этих вышестоящих узлов может быстро вызвать проблемы лекарственной устойчивости вследствие мутации или реактивации пути, что сильно ограничивает их клиническое применение.Studies have shown that abnormal activation of the Ras/Raf/MEK/ERK pathway caused by mutation or amplification is a determinant of various cancers. In human tumors, the RAS mutation rate is about 22%, the BRAF mutation rate is about 7%, and the MEK mutation rate is about 1%. Therefore, proteins of key nodes along this pathway have become important targets for cancer treatment (Cancer Discov. 2019, 9, 329-341). Currently, a number of BRAF inhibitors and MEK1/2 inhibitors, as well as their combined regimens, are approved by the US FDA for the treatment of melanoma, BRAFV600E-mutated non-small cell lung cancer, and other cancers. However, the use of BRAF and MEK inhibitors for these upstream nodes can quickly cause drug resistance problems due to pathway mutation or reactivation, which greatly limits their clinical use.
Регулируемые внеклеточными сигналами протеинкиназы (ERK) (особенно киназы ERK1 и ERK2) являются главными участниками и нижележащими ключевыми узлами пути Ras/Raf/MEK/ERK, и чрезмерная активация их встречается при многих раковых заболеваниях человека. У ERK, как терминальной сигнальной киназы этого пути, еще не обнаружено мутаций, вызывающих лекарственную устойчивость. Поэтому препараты, нацеленные на ERK-киназы, должны преодолеть проблему лекарственной устойчивости, вызванной применением ингибиторов вышележащих мишеней, и станут более перспективной стратегией терапии. Но пока что исследования ингибиторов ERK все еще находятся в клинической фазе, и ни один ингибитор ERK еще не был одобрен для продажи в качестве лекарственного средства.Extracellular signal-regulated protein kinases (ERKs) (especially ERK1 and ERK2 kinases) are major participants and downstream key nodes of the Ras/Raf/MEK/ERK pathway, and their overactivation occurs in many human cancers. ERK, as the terminal signaling kinase of this pathway, has not yet been found to be mutated to cause drug resistance. Therefore, drugs targeting ERK kinases should overcome the problem of drug resistance caused by the use of upstream inhibitors and become a more promising therapeutic strategy. But so far, studies of ERK inhibitors are still in the clinical phase, and no ERK inhibitor has yet been approved for sale as a drug.
Итак, существует настоятельная потребность в разработке безопасных и эффективных препаратов - ингибиторов ERK для удовлетворения потребности в лечении рака.Thus, there is an urgent need to develop safe and effective ERK inhibitor drugs to meet the demand in cancer treatment.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Настоящим изобретением предусмотрены соединения по формуле (III) либо их фармацевтически приемлемые соли:The present invention provides compounds of formula (III) or their pharmaceutically acceptable salts:
где: n равно 0 или 1;where: n is 0 or 1;
m равно 1 или 2;m is 1 or 2;
кольцо A означает или ;ring A means or ;
T1, T2 и T3 каждый независимо означает N или CH;T 1 , T 2 and T 3 are each independently N or CH;
E1 означает O, S или NH;E 1 means O, S or NH;
R1 означает H или C1-3-алкил, причем C1-3-алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 Ra;R 1 means H or C 1-3 -alkyl, and C 1-3 -alkyl is optionally substituted with 1, 2 or 3 R a ;
R2 и R3 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2 или C1-3-алкил, причем C1-3-алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 Rb;R 2 and R 3 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 or C 1-3 alkyl, with C 1-3 alkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 R b ;
R4 означает H;R 4 means H;
R5, R6, R7, R8 и R9 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2 или C1-3-алкил, причем C1-3-алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 Rc;R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 or C 1-3 alkyl, with C 1-3 alkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 R c ;
Ra, Rb и Rc каждый независимо означает F, Cl, Br, I, OH, CN или NH2.R a , R b and R c are each independently F, Cl, Br, I, OH, CN or NH 2 .
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенный R1 означает H или CH3, причем CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 Ra, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 1 means H or CH 3 and CH 3 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R a and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенный R1 означает CH3, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 1 means CH 3 and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R2 и R3 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2 или CH3, причем CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 Rb, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 2 and R 3 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 or CH 3 , wherein CH 3 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R b , and other variables are already defined herein.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R2 и R3 каждый независимо означает H или CH3, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 2 and R 3 each independently means H or CH 3 and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R2 и R3 каждый независимо означает H, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 2 and R 3 each independently means H, and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R5, R6, R7, R8 и R9 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, CH3 или -CH2-CH3, причем CH3 или -CH2-CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 Rc, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , CH 3 or -CH 2 -CH 3 , wherein CH 3 or -CH 2 -CH 3 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R c and other variables are already defined herein.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R5, R6, R7, R8 и R9 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN или NH2, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 each independently means H, F, Cl, Br, I, OH, CN or NH 2 and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенная структурная группировка означает , или , а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above structural grouping means , or , and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенная структурная группировка означает или , а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above structural grouping means or , and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенное кольцо A означает или , а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above ring A means or , and other variables are already defined in the present description.
Настоящим изобретением предусмотрены соединения по формуле (I) либо их фармацевтически приемлемые соли:The present invention provides compounds of formula (I) or their pharmaceutically acceptable salts:
где: n равно 0 или 1;where: n is 0 or 1;
T1, T2 и T3 каждый независимо означает N или CH;T 1 , T 2 and T 3 are each independently N or CH;
R1 означает H или C1-3-алкил, причем C1-3-алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 Ra;R 1 means H or C 1-3 -alkyl, and C 1-3 -alkyl is optionally substituted with 1, 2 or 3 R a ;
R2 и R3 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2 или C1-3-алкил, причем C1-3-алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 Rb;R 2 and R 3 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 or C 1-3 alkyl, with C 1-3 alkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 R b ;
R4 означает H;R 4 means H;
R5, R6, R7, R8 и R9 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2 или C1-3-алкил, причем C1-3-алкил необязательно замещен 1, 2 или 3 Rc;R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 or C 1-3 alkyl, with C 1-3 alkyl optionally substituted with 1, 2 or 3 R c ;
Ra, Rb и Rc каждый независимо означает F, Cl, Br, I, OH, CN или NH2.R a , R b and R c are each independently F, Cl, Br, I, OH, CN or NH 2 .
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенный R1 означает H или CH3, причем CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 Ra, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 1 means H or CH 3 and CH 3 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R a and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенный R1 означает CH3, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 1 means CH 3 and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R2 и R3 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2 или CH3, причем CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 Rb, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 2 and R 3 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 or CH 3 , wherein CH 3 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R b , and other variables are already defined herein.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R2 и R3 каждый независимо означает H, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 2 and R 3 each independently means H, and other variables are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R5, R6, R7, R8 и R9 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH2, CH3 или -CH2-CH3, причем CH3 или -CH2-CH3 необязательно замещен 1, 2 или 3 Rc, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are each independently H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH 2 , CH 3 or -CH 2 -CH 3 , wherein CH 3 or -CH 2 -CH 3 is optionally substituted with 1, 2 or 3 R c and other variables are already defined herein.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения вышеприведенные R5, R6, R7, R8 и R9 каждый независимо означает H, F, Cl, Br, I, OH, CN или NH2, а другие переменные уже определены в настоящем описании.In some embodiments of the present invention, the above R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 each independently means H, F, Cl, Br, I, OH, CN or NH 2 and other variables are already defined in the present description.
Настоящее изобретение также включает и некоторые воплощения, которые получаются при комбинировании каких-либо из вышеприведенных переменных.The present invention also includes certain embodiments that are obtained by combining any of the above variables.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предусмотрены вышеприведенные соединения либо их фармацевтически приемлемые соли, которые выбраны из числа:In some embodiments of the present invention, the above compounds, or pharmaceutically acceptable salts thereof, are provided, which are selected from among:
и , And ,
где m, n, E1, T1, T2, T3, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 и R9 уже определены в настоящем описании.where m, n, E 1 , T 1 , T 2 , T 3 ,
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предусмотрены вышеприведенные соединения либо их фармацевтически приемлемые соли, которые выбраны из числа:In some embodiments of the present invention, the above compounds, or pharmaceutically acceptable salts thereof, are provided, which are selected from among:
, и , , And ,
где R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, E1, T1, T2 и T3 уже определены в настоящем описании.where R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 , R 9 , E 1 , T 1 , T 2 and T 3 are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предусмотрены вышеприведенные соединения либо их фармацевтически приемлемые соли, которые выбраны из следующего:In some embodiments of the present invention, the above compounds, or pharmaceutically acceptable salts thereof, are provided, which are selected from the following:
, ,
где T1, T2, T3, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 и R9 уже определены в настоящем описании.where T 1 , T 2 , T 3 , R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are already defined in the present description.
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предусмотрены вышеприведенные соединения либо их фармацевтически приемлемые соли, которые выбраны из следующего:In some embodiments of the present invention, the above compounds, or pharmaceutically acceptable salts thereof, are provided, which are selected from the following:
, ,
где R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8 и R9 уже определены в настоящем описании.where R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 , R 8 and R 9 are already defined in the present description.
Настоящим изобретением также предусмотрены соединения, представленные следующими формулами, либо их фармацевтически приемлемые соли:The present invention also provides compounds represented by the following formulas, or pharmaceutically acceptable salts thereof:
, , , , , и . , , , , , And .
В некоторых воплощениях настоящего изобретения предусмотрены вышеприведенные соединения либо их фармацевтически приемлемые соли, которые выбраны из числа:In some embodiments of the present invention, the above compounds, or pharmaceutically acceptable salts thereof, are provided, which are selected from among:
и . And .
Настоящим изобретением также предусмотрено применение вышеприведенных соединений либо их его изомеров или фармацевтически приемлемых солей при изготовлении лекарственных средств для лечения заболеваний, связанных с ERK.The present invention also contemplates the use of the above compounds or their isomers or pharmaceutically acceptable salts in the manufacture of medicaments for the treatment of diseases associated with ERK.
Технический эффектtechnical effect
Соединения по настоящему изобретению проявляют превосходную активность ингибирования киназы ERK2 и пролиферации клеток HT29. К тому же соединения по настоящему изобретению проявляют превосходную пероральную экспозицию и биодоступность. Более того, соединения по настоящему изобретению могут значительно ингибировать рост опухолей. При введении не наблюдается существенного снижения веса тела животных, и переносимость хорошая.The compounds of the present invention exhibit excellent activity of inhibiting ERK2 kinase and proliferation of HT29 cells. In addition, the compounds of the present invention exhibit excellent oral exposure and bioavailability. Moreover, the compounds of the present invention can significantly inhibit the growth of tumors. When administered, no significant reduction in body weight of the animals is observed, and the tolerability is good.
Определения и терминыDefinitions and terms
Если не указано иначе, следующие термины и выражения в настоящем изобретении должны иметь следующие значения. Конкретные термины или выражения не должны считаться неопределенными или неясными в отсутствие конкретного определения, а должны пониматься в общепринятом смысле. При этом торговые названия служат для обозначения соответствующих товаров либо их активных ингредиентов.Unless otherwise indicated, the following terms and expressions in the present invention shall have the following meanings. Specific terms or expressions should not be considered vague or obscure in the absence of a specific definition, but should be understood in the generally accepted sense. In this case, trade names serve to designate the respective products or their active ingredients.
Термин “фармацевтически приемлемый” применяется здесь в отношении таких соединений, материалов, композиций и/или дозовых форм, которые подходят для применения в контакте с тканями человека и животных в рамках здравого медицинского суждения, без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергических реакций или других проблем или осложнений, соизмеримо с разумным соотношением польза/риск.The term “pharmaceutically acceptable” is used herein to refer to those compounds, materials, compositions and/or dosage forms that are suitable for use in contact with human and animal tissues within the framework of sound medical judgment, without undue toxicity, irritation, allergic reactions, or other problems or complications, commensurate with a reasonable benefit/risk ratio.
Термин “фармацевтически приемлемая соль” означает такие соли приведенных здесь соединений, которые получают при реакции соединений, содержащих определенные заместители, приведенные здесь, с относительно нетоксичными кислотами или основаниями. Когда приведенные здесь соединения содержат сравнительно кислые функциональные группы, можно получить соли с основаниями при обработке этих соединений достаточным количеством основания в чистом растворе или в подходящем инертном растворителе. Фармацевтически приемлемые соли с основаниями включают соли натрия, калия, кальция, аммония, органических аминов или магния либо аналогичные соли. Когда приведенные здесь соединения содержат сравнительно щелочные функциональные группы, можно получить соли с кислотами при обработке этих соединений достаточным количеством кислоты в чистом растворе или в подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемых солей с кислотами включают соли неорганических кислот, причем неорганические кислоты включают, к примеру, соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, азотную кислоту, угольную кислоту, бикарбонаты, фосфорную кислоту, монозамещенные фосфаты, двузамещенные фосфаты, серную кислоту, бисульфаты, йодистоводородную кислоту, фосфиновую кислоту и т.п.; и соли органических кислот, причем органические кислоты включают, к примеру, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, изомасляную кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, бензойную кислоту, янтарную кислоту, пробковую кислоту, фумаровую кислоту, молочную кислоту, миндальную кислоту, фталевую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, лимонную кислоту, винную кислоту, метансульфоновую кислоту и т.п.; а также соли аминокислот (типа аргинина и др.) и соли органических кислот типа глюкуроновой кислоты и т.п. Некоторые из приведенных здесь соединений содержат как щелочные, так и кислотные функциональные группы и могут быть преобразованы в любые соли с основаниями или кислотами.The term “pharmaceutically acceptable salt” means those salts of the compounds listed here that are obtained by reacting compounds containing certain substituents listed here with relatively non-toxic acids or bases. When compounds herein contain relatively acidic functional groups, salts with bases can be prepared by treating these compounds with a sufficient amount of base in pure solution or in a suitable inert solvent. Pharmaceutically acceptable base salts include sodium, potassium, calcium, ammonium, organic amine or magnesium salts or the like. When compounds herein contain relatively basic functional groups, acid salts can be prepared by treating these compounds with sufficient acid in pure solution or in a suitable inert solvent. Examples of pharmaceutically acceptable salts with acids include salts of inorganic acids, and inorganic acids include, for example, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, carbonic acid, bicarbonates, phosphoric acid, monosubstituted phosphates, disubstituted phosphates, sulfuric acid, bisulfates, hydroiodic acid, phosphinic acid, and the like; and organic acid salts, the organic acids including, for example, acetic acid, propionic acid, isobutyric acid, maleic acid, malonic acid, benzoic acid, succinic acid, subic acid, fumaric acid, lactic acid, mandelic acid, phthalic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, tartaric acid, methanesulfonic acid and the like; as well as amino acid salts (such as arginine, etc.) and organic acid salts such as glucuronic acid, and the like. Some of the compounds shown here contain both basic and acid functional groups and can be converted to any salt with bases or acids.
Фармацевтически приемлемые соли, приведенные здесь, могут быть получены из исходных соединений, содержащих кислотные или щелочные группировки, стандартными химическими методами. Как правило, такие соли можно получить при реакции соединения в виде свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или органическом растворителе либо их смеси.The pharmaceutically acceptable salts provided herein can be prepared from parent compounds containing acidic or alkaline moieties by standard chemical methods. Typically, such salts can be prepared by reacting the free acid or base compound with a stoichiometric amount of the corresponding base or acid in water or an organic solvent, or mixtures thereof.
Приведенные здесь соединения могут присутствовать в виде определенных геометрических или стереоизомеров. Настоящим изобретением предусмотрены все такие соединения, включая цис- и транс-изомеры, (-)- и (+)-энантиомеры, (R)- и (S)-энантиомеры, диастереоизомеры, (D)-изомеры, (L)-изомеры, рацемические смеси и другие смеси, например, смеси, обогащенные энантиомерами или диастереоизомерами, которые все входят в рамки настоящего изобретения. Заместители типа алкилов могут содержать дополнительные асимметрические атомы углерода. Все эти изомеры и их смеси входят в рамки настоящего изобретения.The compounds provided herein may be present as certain geometric or stereoisomers. The present invention contemplates all such compounds, including cis- and trans-isomers, (-)- and (+)-enantiomers, (R)- and (S)-enantiomers, diastereoisomers, (D)-isomers, (L)-isomers, racemic mixtures, and other mixtures, for example, mixtures enriched in enantiomers or diastereoisomers, all of which are within the scope of the present invention. Substituents such as alkyls may contain additional asymmetric carbon atoms. All of these isomers and mixtures thereof are within the scope of the present invention.
Если не указано иначе, термины “энантиомер” или “оптический изомер” означают такие стереоизомеры, которые находятся в зеркальном соотношении друг с другом.Unless otherwise indicated, the terms "enantiomer" or "optical isomer" means those stereoisomers that are in mirror relationship with each other.
Если не указано иначе, термины “цис-транс-изомер” или “геометрический изомер” возникают вследствие отсутствия свободного вращения у двойной связи или одинарной связи между кольцевыми атомами углерода.Unless otherwise indicated, the terms "cis-trans isomer" or "geometric isomer" arise from the lack of free rotation of the double bond or single bond between ring carbon atoms.
Если не указано иначе, термин “диастереомер” означает такой стереоизомер, у которого в молекуле содержатся два или больше хиральных центров, которые не находятся в зеркальном соотношении между молекулами.Unless otherwise indicated, the term "diastereomer" means a stereoisomer in which the molecule contains two or more chiral centers that are not in a mirror relation between the molecules.
Если не указано иначе, “(+)” означает декстроизомер, “(-)” означает левоизомер, а “(±)” означает рацемат.Unless otherwise indicated, "(+)" means dextroisomer, "(-)" means left isomer, and "(±)" means racemate.
Если не указано иначе, клиновидная сплошная связь () и клиновидная пунктирная связь () обозначают абсолютную конфигурацию стереоцентра; прямая сп лошная связь () и прямая пунктирная связь () обозначают относительную конфигурацию стереоцентра; волнистая линия () означает клиновидную сплошную связь () или клиновидную пунктирную связь (); или же волнистая линия () означает прямую сплошную связь () либо прямую пунктирную связь ().Unless otherwise noted, a wedge solid bond ( ) and a wedge-shaped dotted connection ( ) denote the absolute configuration of the stereocenter; direct continuous connection ( ) and a direct dotted relationship ( ) denote the relative configuration of the stereocenter; wavy line ( ) means a wedge-shaped continuous bond ( ) or wedge-shaped dotted connection ( ); or a wavy line ( ) means direct solid connection ( ) or a direct dotted connection ( ).
Если не указано иначе, когда у соединения присутствует структура двойной связи типа двойной связи углерод-углерод, двойной связи углерод-азот или двойной связи азот-азот и каждый атом у двойной связи соединяется с двумя различными заместителями (в двойной связи, содержащей атом азота, одна пара неподеленных пар электронов на атоме азота рассматривается как один из заместителей, с которыми он соединяется), то соединение представляет собой (Z)-изомер, (E)-изомер либо смесь из двух изомеров соединения, если в соединении атомы у двойной связи соединяются со своими заместителями волнистой линией (). Например, если соединение имеет следующую формулу (А), то это значит, что соединение присутствует в виде отдельного изомера по формуле (А-1) или по формуле (А-2) либо в виде смеси двух изомеров по формуле (А-1) и формуле (А-2); а если соединение имеет следующую формулу (B), то это значит, что соединение присутствует в виде отдельного изомера по формуле (B-1) или по формуле (B-2) либо в виде смеси двух изомеров по формуле (B-1) и формуле (B-2). Если же соединение имеет следующую формулу (C), то это означает, что соединение присутствует в виде отдельного изомера по формуле (C-1) или по формуле (C-2) либо в виде смеси двух изомеров по формуле (C-1) и формуле (C-2):Unless otherwise stated, when a compound has a double bond structure such as a carbon-carbon double bond, a carbon-nitrogen double bond, or a nitrogen-nitrogen double bond, and each atom on the double bond connects to two different substituents (in a double bond containing a nitrogen atom, one pair of lone pairs of electrons on the nitrogen atom is considered as one of the substituents to which it connects), then the compound is a (Z)-isomer, an (E)-isomer, or a mixture of two isomers of the compound, if in the compound the atoms at the double bond connect with their deputies a wavy line ( ). For example, if a compound has the following formula (A), this means that the compound is present as a single isomer of formula (A-1) or formula (A-2), or as a mixture of two isomers of formula (A-1) and formula (A-2); and if the compound has the following formula (B), it means that the compound is present as a single isomer of formula (B-1) or formula (B-2), or as a mixture of two isomers of formula (B-1) and formula (B-2). If the compound has the following formula (C), this means that the compound is present as a single isomer of formula (C-1) or formula (C-2), or as a mixture of two isomers of formula (C-1) and formula (C-2):
Если не указано иначе, термины “таутомер” или “таутомерная форма’ означают то, что различные функциональные группы находятся в динамическом равновесии при комнатной температуре и могут быстро превращаться друг в друга. Если возможны таутомеры (как-то в растворе), то может достигаться химическое равновесие таутомеров. Например, протонные таутомеры (также известные как прототропные таутомеры) включают взаимные превращения при переносе протонов типа кето-енольной изомеризации и имин-енаминовой изомеризации. Таутомеры по валентности включают взаимные превращения при рекомбинации некоторых образующих связи электронов. Конкретным примером кето-енольной таутомеризации являются взаимные превращения между двумя таутомерами: пентан-2,4-дионом и 4-гидроксипент-3-ен-2-оном.Unless otherwise stated, the terms "tautomer" or "tautomeric form" means that the various functional groups are in dynamic equilibrium at room temperature and can rapidly transform into each other. If tautomers are possible (such as in solution), then a chemical equilibrium of the tautomers can be achieved. For example, protic tautomers (also known as prototropic tautomers) include proton transfer interconversions such as keto-enol isomerization and imine-enamine isomerization. Tautomers by valency include mutual transformations during the recombination of some of the bonding electrons. A specific example of keto-enol tautomerization is the interconversion between two tautomers: pentan-2,4-dione and 4-hydroxypent-3-en-2-one.
Если не указано иначе, термин “обогащенный одним изомером”, “обогащенный изомером”, “обогащенный одним энантиомером” или “обогащенный энантиомером” означает то, что содержание одного изомера или энантиомера составляет менее 100%, причем содержание изомера или энантиомера составляет 60% и более или 70% и более или 80% и более или 90% и более или 95% и более или 96% и более или 97% и более или 98% и более или 99% и более или 99,5% и более или 99,6% и более или 99,7% и более или 99,8% и более или 99,9% и более.Unless otherwise specified, the term "enriched in one isomer", "enriched in isomer", "enriched in one enantiomer" or "enriched in enantiomer" means that the content of one isomer or enantiomer is less than 100%, and the content of the isomer or enantiomer is 60% or more or 70% or more or 80% or more or 90% or more or 95% or more or 96% or more or 97% or more or 98% or more or 99% or more or 99.5% or more or 99.6% or more or 99.7% or more or 99.8% or more or 99.9% or more.
Если не указано иначе, термин “изомерный избыток” или “энантиомерный избыток” означает разность между относительным содержанием двух изомеров или двух энантиомеров в процентах. Например, если один изомер или энантиомер присутствует в количестве 90%, а другой изомер или энантиомер присутствует в количестве 10%, то изомерный избыток или энантиомерный избыток (значение ee) составляет 80%.Unless otherwise indicated, the term "isomeric excess" or "enantiomeric excess" means the difference between the relative percentage of two isomers or two enantiomers. For example, if one isomer or enantiomer is present at 90% and the other isomer or enantiomer is present at 10%, then the isomeric excess or enantiomeric excess (ee value) is 80%.
Оптически активные (R)- и (S)-изомеры или D- и L-изомеры можно получить с помощью хирального синтеза или хиральных реагентов или другими стандартными методами. Если нужно получить один из энантиомеров определенного соединения, приведенного здесь, то требуемый чистый энантиомер можно получить путем асимметрического синтеза или производного действия хирального вспомогательного вещества с последующим разделением полученной диастереомерной смеси и отщеплением вспомогательной группы. С другой стороны, если молекула содержит основную функциональную группу (типа аминогруппы) или кислотную функциональную группу (типа карбоксильной), то проводится реакция соединения с соответствующей оптически активной кислотой или основанием с образованием соли диастереомерного изомера, которая затем подвергается разделению диастереомеров принятым в данной области методом с получением чистого энантиомера. Кроме того, энантиомеры и диастереоизомеры обычно выделяют методами хроматографии с использованием хиральной неподвижной фазы, необязательно в сочетании с методом химической дериватизации (например, получением карбамата из амина).Optically active (R)- and (S)-isomers or D- and L-isomers can be obtained using chiral synthesis or chiral reagents or other standard methods. If one of the enantiomers of a particular compound listed here is to be obtained, the desired pure enantiomer can be obtained by asymmetric synthesis or derivative action of a chiral auxiliary, followed by separation of the resulting diastereomeric mixture and elimination of the auxiliary group. On the other hand, if the molecule contains a basic functional group (amino group type) or an acidic functional group (carboxyl type), then the compound is reacted with the corresponding optically active acid or base to form a salt of the diastereomeric isomer, which is then subjected to separation of diastereomers by a method accepted in this field to obtain a pure enantiomer. In addition, enantiomers and diastereoisomers are usually isolated by chromatographic methods using a chiral stationary phase, optionally in combination with a chemical derivatization method (eg, preparation of a carbamate from an amine).
Приведенные здесь соединения могут содержать неестественные доли атомных изотопов у одного или нескольких атомов, входящих в состав соединения. Например, соединение может быть помечено радиоизотопом типа трития (3H), йода-125 (125I) или C-14 (14C). В другом случае водород может быть заменен на тяжелый водород для получения дейтерированного препарата. Связь между дейтерием и углеродом прочнее, чем между простым водородом и углеродом. По сравнению с недейтерированными препаратами дейтерированные препараты обладают такими преимуществами, как снижение токсических побочных эффектов, повышение стабильности препаратов, повышение эффективности и продление биологического периода полураспада препаратов. Все изменения изотопного состава приведенных здесь соединений, независимо от радиоактивности, входят в рамки настоящего изобретения.The compounds listed here may contain unnatural proportions of atomic isotopes on one or more of the atoms that make up the compound. For example, a compound may be labeled with a radioisotope such as tritium ( 3 H), iodine-125 ( 125 I), or C-14 ( 14 C). Alternatively, the hydrogen may be replaced by heavy hydrogen to form a deuterated preparation. The bond between deuterium and carbon is stronger than between simple hydrogen and carbon. Compared to non-deuterated drugs, deuterated drugs have the advantages of reducing toxic side effects, improving drug stability, improving efficacy, and extending the biological half-life of drugs. All changes in the isotopic composition of the compounds listed here, regardless of radioactivity, are within the scope of the present invention.
Термин “необязательный” или “необязательно” означает, что последующее событие или условие может произойти, но не обязательно, причем этот термин включает случаи, когда событие или условие происходит, и случаи, когда событие или условие не происходит.The term “optional” or “optional” means that the subsequent event or condition may, but need not, occur, which term includes cases where the event or condition occurs and cases where the event or condition does not occur.
Термин “замещенный” означает то, что один или несколько атомов водорода у определенного атома замещены заместителем, включая варианты дейтерия и водорода, если только валентность данного атома остается нормальной, а замещенное соединение стабильно. Если заместителем является оксо (т.е. =O), то это значит, что замещены два атома водорода. Положения в ароматическом кольце не могут быть замещены оксогруппой. Термин “необязательно замещенный” означает то, что атом может быть замещен заместителем или нет, если не указано иначе, а вид и количество заместителей могут быть произвольными, если только они химически достижимы.The term "substituted" means that one or more hydrogen atoms on a particular atom are replaced by a substituent, including deuterium and hydrogen variants, as long as the valency of that atom remains normal and the substituted compound is stable. If the substituent is oxo (i.e. =O), then this means that two hydrogen atoms are substituted. Positions on the aromatic ring cannot be substituted by an oxo group. The term "optionally substituted" means that an atom may or may not be substituted with a substituent, unless otherwise indicated, and the type and number of substituents may be arbitrary, as long as they are chemically achievable.
Когда какая-либо переменная (типа R) встречается в строении или структуре соединения более одного раза, то определение переменной в каждом случае является независимым. Так, например, если какая-то группа замещена 0-2 R, то она может быть необязательно замещена максимум двумя R, причем определение R в каждом случае будет независимым. Кроме того, комбинации заместителей и/или их вариантов допустимы лишь в том случае, если эти комбинации дают стабильные соединения.When any variable (of type R) occurs more than once in a structure or compound structure, the definition of the variable is independent in each case. Thus, for example, if a group is substituted with 0-2 R, then it may optionally be substituted with up to two R, and the definition of R in each case will be independent. In addition, combinations of substituents and/or variants thereof are only allowed if these combinations give stable compounds.
Когда количество соединительных групп равно 0 типа -(CRR)0-, то это значит, что соединительная группа представляет собой простую связь.When the number of link groups is 0 of type -(CRR) 0 -, it means that the link group is a single bond.
Когда одна из переменных представляет собой простую связь, то это значит, что две группы, связанные простой связью, соединяются напрямую. Например, когда L в A-L-Z означает простую связь, то структура A-L-Z фактически представляет собой A-Z.When one of the variables is a simple link, it means that two groups related by a simple link are directly connected. For example, when the L in A-L-Z means a single bond, then the A-L-Z structure is actually A-Z.
Когда заместитель является вакантным, то это значит, что заместитель не существует. Например, когда X является вакантным в A-X, то структура A-X фактически представляет собой A. Когда у пронумерованного заместителя не указано, через какой атом он связан с замещаемой группой, такой заместитель может быть связан через любой из своих атомов. Например, пиридильная группа в качестве заместителя может быть связана с замещаемой группой через любой из атомов углерода в кольце пиридина.When a substitute is vacant, it means that a substitute does not exist. For example, when X is vacant in A-X, then the A-X structure is effectively A. When a numbered substituent does not have an indication through which atom it is bonded to the substituting group, such substituent may be bonded through any of its atoms. For example, a pyridyl group as a substituent may be linked to the substituting group through any of the carbon atoms on the pyridine ring.
Когда у пронумерованной соединительной группы не указано направление связи, то ее направление связи является произвольным. Например, когда соединительная группа L в представлена -M-W-, то -M-W- может соединяться с кольцом A и кольцом B в том же направлении, что и при чтении слева направо, составляя , или же может соединяться с кольцом A и кольцом B в обратном направлении, чем при чтении слева направо, составляя . Комбинации соединительных групп, заместителей и/или их вариантов допускаются только в том случае, если такие комбинации могут дать стабильные соединения.When a numbered connecting group does not have a link direction, its link direction is arbitrary. For example, when the connecting group L in represented by -MW-, then -MW- can be connected to ring A and ring B in the same direction as when read from left to right, making , or it can connect with ring A and ring B in the opposite direction than when reading from left to right, making . Combinations of connecting groups, substituents and/or variants thereof are only permitted if such combinations can give stable compounds.
Если не указано иначе, когда группа содержит один или несколько соединяемых участков, то какой-либо один или несколько участков этой группы могут соединяться с другими группами через химические связи. Химическая связь между этим участком и другими группами может быть представлена в виде прямой сплошной связи (), прямой пунктирной связи () или волнистой линии (). К примеру, прямая сплошная связь в -OCH3 означает, что эта группа соединяется с другими группами через атом кислорода в группе; прямая пунктирная связь в означает, что эта группа соединяется с другими группами через два конца атома азота в группе; а волнистая линия в означает, что эта группа соединяется с другими группами через 1-й и 2-й атомы углерода фенильной группы.Unless otherwise stated, when a group contains one or more connectable sites, then any one or more sections of this group can be connected to other groups through chemical bonds. The chemical bond between this site and other groups can be represented as a direct solid bond ( ), direct dotted connection ( ) or wavy line ( ). For example, a direct solid bond in -OCH 3 means that this group is connected to other groups through an oxygen atom in the group; direct dotted connection in means that this group connects to other groups through the two ends of the nitrogen atom in the group; and the wavy line means that this group is connected to other groups through the 1st and 2nd carbon atoms of the phenyl group.
Если не указано иначе, термин “C1-3-алкил” применяется для обозначения линейной или разветвленной насыщенной углеводородной группы, состоящей из 1-3 атомов углерода. C1-3-алкильные группы включают C1-2- и C2-3-алкильные группы и т.п. Они могут быть одновалентными (напр., метил), двухвалентными (напр., метилен) или поливалентными (напр., метенил). Примеры C1-3-алкильных групп включают, без ограничения, метил (Me), этил (Et), пропил (включая н-пропил и изопропил) и т.п.Unless otherwise indicated, the term "C 1-3 -alkyl" is used to refer to a linear or branched saturated hydrocarbon group consisting of 1-3 carbon atoms. C 1-3 alkyl groups include C 1-2 and C 2-3 alkyl groups, and the like. They can be monovalent (eg methyl), divalent (eg methylene) or polyvalent (eg methenyl). Examples of C 1-3 alkyl groups include, without limitation, methyl (Me), ethyl (Et), propyl (including n-propyl and isopropyl), and the like.
Если не указано иначе, термин “C1-3-алкокси” обозначает алкильные группы, содержащие 1-3 атома углерода и соединенные с остальной частью молекулы через атом кислорода. C1-3-алкоксигруппы включают C1-2-, C2-3-, C3- и C2-алкоксигруппы и т.п. Примеры C1-3-алкоксигрупп включают, без ограничения, метокси, этокси, пропокси (в том числе н-пропокси и изопропокси) и др.Unless otherwise indicated, the term "C 1-3 -alkoxy" means alkyl groups containing 1-3 carbon atoms and connected to the rest of the molecule through an oxygen atom. C 1-3 alkoxy groups include C 1-2 -, C 2-3 -, C 3 - and C 2 alkoxy groups, and the like. Examples of C 1-3 alkoxy groups include, without limitation, methoxy, ethoxy, propoxy (including n-propoxy and isopropoxy), and others.
Если не указано иначе, термин “гало” или “галоген” сам по себе или в составе другого заместителя означает атом фтора, хлора, брома или йода.Unless otherwise indicated, the term "halo" or "halogen" by itself or as part of another substituent means a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom.
Если не указано иначе, Cn-n+m или Cn-Cn+m включает все конкретные случаи от n до n+m атомов углерода, например, C1-12 включает C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 и C12, а также включает любые диапазоны от n до n+m, например, C1-12 включает C1-3, C1-6, C1-9, C3-6, C3-9, C3-12, C6-9, C6-12 и C9-12 и т.д; точно так же число членов от n до n+m означает, что количество атомов в кольце составляет от n до n+m, например, 3-12-членное кольцо включает 3-членное кольцо, 4-членное кольцо, 5-членное кольцо, 6-членное кольцо, 7-членное кольцо, 8-членное кольцо, 9-членное кольцо, 10-членное кольцо, 11-членное кольцо и 12-членное кольцо, а также включает любые диапазоны от n до n+m, к примеру, 3-12-членное кольцо включает и 3-6-членное кольцо, 3-9-членное кольцо, 5-6-членное кольцо, 5-7-членное кольцо, 6-7-членное кольцо, 6-8-членное кольцо и 6-10-членное кольцо и т.д.Unless otherwise indicated, C n-n+m or C n -C n+m includes all specific occurrences of n to n+m carbon atoms, e.g., C 1-12 includes C 1 , C 2 , C 3 , C 4 , C 5 , C 6 , C 7 , C 8 , C 9 , C 10 , C 11 and C 12 and also includes any range from n to n +m, for example, C 1-12 includes C 1-3 , C 1-6 , C 1-9 , C 3-6 , C 3-9 , C 3-12 , C 6-9 , C 6-12 and C 9-12 etc ; in the same way, the number of members from n to n+m means that the number of atoms in the ring is from n to n+m, for example, 3-12-membered ring includes 3-membered ring, 4-membered ring, 5-membered ring, 6-membered ring, 7-membered ring, 8-membered ring, 9-membered ring, 10-membered ring, 11-membered ring and 12-membered ring, and also includes any range s from n to n+m, for example, a 3-12-membered ring includes both a 3-6-membered ring, a 3-9-membered ring, a 5-6-membered ring, a 5-7-membered ring, a 6-7-membered ring, a 6-8-membered ring and a 6-10-membered ring, etc.
Термин “уходящая группа” означает такую функциональную группу или атом, которая может быть заменена другой функциональной группой или атомом при реакции замещения (типа реакции нуклеофильного замещения). Например, репрезентативные уходящие группы включают трифлат; хлор, бром и йод; сульфонатные группы типа мезилата, тозилата, п-бромбензолсульфоната, п-толуолсульфоната и т.п.; ацилокси типа ацетокси, трифторацетокси и др.The term “leaving group” means a functional group or atom that can be replaced by another functional group or atom in a substitution reaction (such as a nucleophilic substitution reaction). For example, representative leaving groups include triflat; chlorine, bromine and iodine; sulfonate groups such as mesylate, tosylate, p-bromobenzenesulfonate, p-toluenesulfonate and the like; acyloxy such as acetoxy, trifluoroacetoxy, etc.
Термин “защитная группа” включает, без ограничения, “аминозащитные группы”, “гидроксизащитные группы” или “тиозащитные группы”. Термин “аминозащитные группы” означает защитные группы, пригодные для блокирования побочных реакций у азота аминогруппы. Репрезентативные аминозащитные группы включают, без ограничения: формил; ацилы типа алканоилов (напр., ацетил, трихлорацетил или трифторацетил); алкоксикарбонилы типа трет-бутоксикарбонила (Boc); арилметоксикарбонилы типа бензилоксикарбонила (Cbz) и 9-фторенилметоксикарбонила (Fmoc); арилметилы типа бензила (Bn), тритила (Tr), 1,1-бис-(4'-метоксифенил)метила; силилы типа триметилсилила (TMS) и трет-бутилдиметилсилила (TBS) и др. Термин “гидроксизащитные группы” означает защитные группы, пригодные для блокирования побочных реакций у гидроксила. Репрезентативные гидроксизащитные группы включают, без ограничения: алкилы типа метила, этила и трет-бутила; ацилы типа алканоилов (напр., ацетил); арилметилы типа бензила (Bn), п-метоксибензила (PMB), 9-фторенилметила (Fm) и дифенилметила (бензгидрила, DPM); силилы типа триметилсилила (TMS) и трет-бутилдиметилсилила (TBS) и др.The term “protecting group” includes, without limitation, “amino protecting groups”, “hydroxy protecting groups”, or “thio protecting groups”. The term "amino protecting groups" means protecting groups suitable for blocking side reactions at the nitrogen of the amino group. Representative amino protecting groups include, without limitation: formyl; acyls of the alkanoyl type (eg acetyl, trichloroacetyl or trifluoroacetyl); alkoxycarbonyls of the t-butoxycarbonyl type (Boc); arylmethoxycarbonyls of the benzyloxycarbonyl (Cbz) and 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) type; arylmethyls such as benzyl (Bn), trityl (Tr), 1,1-bis-(4'-methoxyphenyl)methyl; silyls such as trimethylsilyl (TMS) and tert-butyldimethylsilyl (TBS); Representative hydroxy protecting groups include, without limitation: methyl, ethyl, and t-butyl type alkyls; acyls of the alkanoyl type (eg acetyl); arylmethyls such as benzyl (Bn), p-methoxybenzyl (PMB), 9-fluorenylmethyl (Fm), and diphenylmethyl (benzhydryl, DPM); silyls such as trimethylsilyl (TMS) and tert-butyldimethylsilyl (TBS), etc.
Приведенные здесь соединения могут быть получены различными методами синтеза, хорошо известными специалистам в данной области, включая следующие пронумерованные воплощения, воплощения, полученные по следующим перечисленным воплощениям в сочетании с другими методами химического синтеза, и эквивалентные замены, хорошо известные специалистам в данной области. Альтернативные воплощения включают, без ограничения, приведенные здесь воплощения.The compounds provided herein may be prepared by various synthetic methods well known to those skilled in the art, including the following numbered embodiments, embodiments obtained from the following listed embodiments in combination with other chemical synthesis methods, and equivalent substitutions well known to those skilled in the art. Alternative embodiments include, without limitation, the embodiments provided herein.
Структура приведенных здесь соединений может быть проверена стандартными методами, хорошо известными специалистам в данной области. Если в настоящем изобретении приводится абсолютная конфигурация соединения, то абсолютная конфигурация может быть проверена стандартными методами типа рентгеновской дифракции на монокристалле (SXRD). При рентгеновской дифракции на монокристалле (SXRD) данные по интенсивности дифракции на выращенном монокристалле получают на коммерческом дифрактометре Bruker D8 с источником излучения типа CuKα в режиме сканирования ϕ/ω; после получения соответствующих данных проводится дальнейший анализ кристаллической структуры прямым методом (Shelxs97) для проверки абсолютной конфигурации.The structure of the compounds herein can be verified by standard methods well known to those skilled in the art. When the absolute configuration of a compound is given in the present invention, the absolute configuration can be checked by standard methods such as single crystal X-ray diffraction (SXRD). Single crystal X-ray diffraction (SXRD) data on the intensity of diffraction on the grown single crystal is obtained on a commercial Bruker D8 diffractometer with a CuKα type radiation source in the ϕ/ω scan mode; after obtaining the relevant data, further analysis of the crystal structure by the direct method (Shelxs97) is carried out to check the absolute configuration.
Растворители, используемые в настоящем изобретении, являются коммерчески доступными. В настоящем описании применяется следующее сокращение: aq означает водный.The solvents used in the present invention are commercially available. In the present description, the following abbreviation is used: aq means water.
Краткое описание фигурBrief description of the figures
Фиг. 1. Кривая роста опухолей HCT116 рака толстой кишки человека на модели у животных после введения растворителя и WX007, соответственно.Fig. 1. Growth curve of human colon cancer HCT116 tumors in an animal model after solvent and WX007 administration, respectively.
Фиг. 2. Степень изменения веса (%) на модели у животных с раком толстой кишки HCT116 человека при введении.Fig. 2. Rate of change in weight (%) in an animal model with human colon cancer HCT116 upon administration.
Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the essence of the invention
Далее настоящее изобретение описано подробно на примерах. Однако это не означает, что данные примеры имеют какие-либо неблагоприятные ограничения для настоящего изобретения. Настоящее изобретение подробно описано здесь, и воплощения также изложены здесь. Специалистам в данной области должно быть ясно, что в приведенные здесь воплощения могут вноситься различные изменения и модификации, не выходящие за рамки изложенной здесь сущности и объема изобретения.Hereinafter, the present invention is described in detail by examples. However, this does not mean that these examples have any unfavorable limitations for the present invention. The present invention is described in detail here, and embodiments are also set forth here. It should be clear to those skilled in the art that various changes and modifications may be made to the embodiments herein without departing from the spirit and scope of the invention as set forth herein.
Контрольный пример 1. Фрагмент A-1
Стадия 1. Синтез соединения A-1-2
В сухую одногорлую колбу вносили раствор ацетата натрия (4,64 г, 56,60 ммоль, 5 экв.), моноперсульфата калия (13,92 г, 22,64 ммоль, 2 экв.) и воду (47 мл). Смесь охлаждали до 0°C. По каплям добавляли раствор A-1-1 (4,7 г, 11,32 ммоль, 1 экв.), растворитель тетрагидрофуран (47 мл) и метанол (47 мл) и перемешивали смесь при 0°C в течение 1 часа. Затем смесь перемешивали на масляной бане при 29°C в течение 15 часов. По завершении реакции реакционный раствор выливали в воду (200 мл) и экстрагировали водную фазу этилацетатом (3×50 мл). Органические фазы объединяли, а объединенную органическую фазу последовательно промывали насыщенным раствором NaCl (200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат собирали и упаривали при пониженном давлении, получая остаток. Остаток очищали методом колоночной флэш-хроматографии, получая A-1-2. 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ppm 8,67 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 7,64 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 3,37 (s, 3H), 1,63-1,53 (m, 6H), 1,39-1,30 (m, 6H), 1,26-1,12 (m, 6H), 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 9H).A dry single-necked flask was charged with a solution of sodium acetate (4.64 g, 56.60 mmol, 5 eq.), potassium monopersulfate (13.92 g, 22.64 mmol, 2 eq.) and water (47 ml). The mixture was cooled to 0°C. A-1-1 solution (4.7 g, 11.32 mmol, 1 eq.), tetrahydrofuran solvent (47 ml) and methanol (47 ml) were added dropwise and the mixture was stirred at 0°C for 1 hour. The mixture was then stirred in an oil bath at 29° C. for 15 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was poured into water (200 ml) and the aqueous phase was extracted with ethyl acetate (3×50 ml). The organic phases were combined and the combined organic phase was washed successively with saturated NaCl solution (200 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was collected and evaporated under reduced pressure to give a residue. The residue was purified by flash column chromatography to give A-1-2. 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ ppm 8.67 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 1.63-1.53 (m, 6H), 1.39-1.30 (m, 6H), 1.26-1.12 ( m, 6H), 0.90 (t, J = 7.3 Hz, 9H).
Стадия 2. Синтез соединения A-1Stage 2. Synthesis of compound A-1
В реакционную колбу вносили A-1-2 (3,9 г, 8,72 ммоль, 1 экв.), A-1-3 (1,02 г, 10,46 ммоль, 1,2 экв.) и тетрагидрофуран (117 мл). Заменяли атмосферу на газообразный азот, а затем по каплям добавляли гексаметилдисилазид лития (1 М, 18,31 мл, 2,1 экв.) при -35°C. Раствор этой смеси инкубировали при -35°C в течение 10 минут. По завершении реакции реакционный раствор гасили насыщенным водным раствором хлористого аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×100 мл) и дихлорметаном (100 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха на роторном испарителе, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая A-1. 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ ppm 8.17 (d, J=4.85 Hz, 1H), 7.46 (d, J=1.76 Hz, 1H), 6.91 (d, J=4.63 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 6.32 (d, J=1.98 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 1.52-1.61 (m, 6H), 1.28-1.40 (m, 6H), 1.03-1.20 (m, 6H), 0.89 (t, J=7.28 Hz, 9H).A-1-2 (3.9 g, 8.72 mmol, 1 eq.), A-1-3 (1.02 g, 10.46 mmol, 1.2 eq.) and tetrahydrofuran (117 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was changed to nitrogen gas and then lithium hexamethyldisilazide (1 M, 18.31 ml, 2.1 eq.) was added dropwise at -35°C. A solution of this mixture was incubated at -35°C for 10 minutes. After completion of the reaction, the reaction solution was quenched with saturated aqueous ammonium chloride (100 ml) and extracted with ethyl acetate (2×100 ml) and dichloromethane (100 ml). The organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness on a rotary evaporator to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography to give A-1. 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ ppm 8.17 (d, J=4.85 Hz, 1H), 7.46 (d, J=1.76 Hz, 1H), 6.91 (d, J=4.63 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 6.32 (d, J=1.98 Hz, 1H), 3. 79 (s, 3H), 1.52-1.61 (m, 6H), 1.28-1.40 (m, 6H), 1.03-1.20 (m, 6H), 0.89 (t, J=7.28 Hz, 9H).
Пример 1Example 1
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX001-3
В реакционную колбу вносили WX001-1 (5 г, 24,03 ммоль, 1 экв.) и тетрагидрофуран (200 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, охлаждали смесь до -78°C и медленно по каплям добавляли диизопропиламид лития (2 М, 28,84 мл, 2,4 экв.) и тетраметилэтилендиамин (4,19 г, 36,05 ммоль, 5,44 мл, 1,5 экв.). Смесь перемешивали при -78°C в течение 0,5 часа, а затем добавляли WX001-2 (3,10 г, 36,05 ммоль, 1,5 экв.). Смесь инкубировали при -78°C в течение 2 часов. По завершении реакции реакционный раствор гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (250 мл), доводили до pH 2-3 с помощью 2 М соляной кислоты и экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCl (100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая WX001-3.WX001-1 (5 g, 24.03 mmol, 1 eq.) and tetrahydrofuran (200 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas, the mixture was cooled to -78°C and lithium diisopropylamide (2 M, 28.84 ml, 2.4 eq.) and tetramethylethylenediamine (4.19 g, 36.05 mmol, 5.44 ml, 1.5 eq.) were slowly added dropwise. The mixture was stirred at -78°C for 0.5 hour and then WX001-2 (3.10 g, 36.05 mmol, 1.5 eq.) was added. The mixture was incubated at -78°C for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was quenched with saturated aqueous ammonium chloride (250 ml), adjusted to pH 2-3 with 2 M hydrochloric acid, and extracted with ethyl acetate (3×100 ml). The organic phase was washed with saturated NaCl solution (100 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45°C to give WX001-3.
Стадия 2. Синтез WX001-4Stage 2. Synthesis of WX001-4
В реакционную колбу вносили WX001-3 (1 г, 3,40 ммоль, 1 экв.) и ацетонитрил (10 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем охлаждали смесь до 0°C. Медленно по каплям добавляли эфират трифторида бора (579,06 мг, 4,08 ммоль, 503,53 мкл, 1,2 экв.). Раствор этой смеси инкубировали при 20°C в течение 2 часов, затем нагревали до 50°C и инкубировали еще 16 часов, а затем нагревали до 60°C и инкубировали еще 8 часов. По завершении реакции реакционный раствор разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCl (20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX001-4. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 4.18 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.06-4.13 (m, 2H), 3.76 (d, J=8.6 Hz, 1H), 2.76-2.87 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.16 (dt, J=12.9, 7.5 Hz, 1H).WX001-3 (1 g, 3.40 mmol, 1 eq.) and acetonitrile (10 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas, and then the mixture was cooled to 0°C. Boron trifluoride etherate (579.06 mg, 4.08 mmol, 503.53 µl, 1.2 eq.) was added slowly dropwise. A solution of this mixture was incubated at 20°C for 2 hours, then heated to 50°C and incubated for another 16 hours, and then heated to 60°C and incubated for another 8 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was diluted with water (20 ml) and extracted with ethyl acetate (3×20 ml). The organic phase was washed with saturated NaCl solution (20 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness under reduced pressure with a water pump at 45° C. to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography to give WX001-4. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 4.18 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.06-4.13 (m, 2H), 3.76 (d, J=8.6 Hz, 1H), 2.76-2.87 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.16 (dt , J=12.9, 7.5 Hz, 1H).
Стадия 3. Синтез WX001-5Stage 3. Synthesis of WX001-5
В реакционную колбу вносили WX001-4 (250 мг, 788,25 мкмоль, 1 экв.), соляную кислоту (2 М, 1,97 мл, 5 экв.) и этанол (2 мл). Раствор этой смеси инкубировали при 70°C в течение 16 часов. По завершении реакции реакционный раствор разбавляли водой (2 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×5 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCl (2 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX001-5. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 9.23 (br s, 1H), 3.97-4.14 (m, 2H), 3.84-3.95 (m, 1H), 3.76 (br d, J=8.7 Hz, 1H), 2.17-2.33 (m, 1H).WX001-4 (250 mg, 788.25 µmol, 1 eq.), hydrochloric acid (2 M, 1.97 ml, 5 eq.) and ethanol (2 ml) were added to the reaction flask. A solution of this mixture was incubated at 70°C for 16 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was diluted with water (2 ml) and extracted with ethyl acetate (3×5 ml). The organic phase was washed with saturated NaCl solution (2 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness under reduced pressure with a water pump at 45° C. to give the crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX001-5. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.23 (br s, 1H), 3.97-4.14 (m, 2H), 3.84-3.95 (m, 1H), 3.76 (br d, J=8.7 Hz, 1H), 2.17-2.33 (m, 1H).
Стадия 4. Синтез WX001-7
В реакционную колбу вносили WX001-5 (150 мг, 545,21 мкмоль, 1 экв.) и N,N-диметилформамид (2 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем охлаждали смесь до 0°C. Добавляли гидрид натрия (26,17 мг, 654,25 мкмоль, чистота 60%, 1,2 экв.). Смесь перемешивали в течение 0,5 часа, а затем добавляли WX001-6 (134,44 мг, 654,25 мкмоль, 85,63 мкл, 1,2 экв.). Смесь медленно нагревали до 20°C и инкубировали в течение 0,5 часа. По завершении реакции реакционный раствор разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×10 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором NaCl (2 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX001-7. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 7.30-7.39 (m, 3H), 7.23-7.29 (m, 1H), 4.62-4.79 (m, 2H), 4.02-4.11 (m, 1H), 3.95 (q, J=8.4 Hz, 1H), 3.72-3.82 (m, 2H), 2.30-2.38 (m, 2H).WX001-5 (150 mg, 545.21 µmol, 1 eq.) and N,N-dimethylformamide (2 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas, and then the mixture was cooled to 0°C. Sodium hydride (26.17 mg, 654.25 µmol, 60% purity, 1.2 eq) was added. The mixture was stirred for 0.5 hour and then WX001-6 (134.44 mg, 654.25 µmol, 85.63 µl, 1.2 eq.) was added. The mixture was slowly heated to 20°C and incubated for 0.5 hour. After completion of the reaction, the reaction solution was diluted with water (20 ml) and extracted with ethyl acetate (3×10 ml). The organic phase was washed with saturated NaCl solution (2 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness under reduced pressure with a water pump at 45° C. to give a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX001-7. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 7.30-7.39 (m, 3H), 7.23-7.29 (m, 1H), 4.62-4.79 (m, 2H), 4.02-4.11 (m, 1H), 3.95 (q, J=8.4 Hz, 1H), 3.72- 3.82 (m, 2H), 2.30-2.38 (m, 2H).
Стадия 5. Синтез WX001-8
В реакционную колбу вносили WX001-7 (100 мг, 250,19 мкмоль, 1 экв.), A-1 (127,76 мг, 275,21 мкмоль, 1,1 экв.) и толуол (2 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (57,82 мг, 50,04 мкмоль, 0,2 экв.). Раствор этой смеси инкубировали при 125°C в течение 14 часов. По завершении реакции реакционный раствор непосредственно упаривали досуха на роторном испарителе, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX001-8.WX001-7 (100 mg, 250.19 µmol, 1 eq), A-1 (127.76 mg, 275.21 µmol, 1.1 eq) and toluene (2 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then tetrakis(triphenylphosphine)palladium (57.82mg, 50.04µmol, 0.2eq) was added. A solution of this mixture was incubated at 125°C for 14 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was directly evaporated to dryness on a rotary evaporator to obtain a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX001-8.
Стадия 6. Синтез WX001A или WX001BStage 6. Synthesis of WX001A or WX001B
Проводили хиральное разделение WX001-8 методом сверхкритической жидкостной хроматографии (условия разделения: хроматографическая колонка Daicel Chiralcel OJ (250×30 мм внутренний диаметр, 10 мкм); подвижная фаза: A - CO2, B - этанол (с 0,1% NH3 в H2O), B% = 50%; скорость подачи: 70 мл/мин), получая WX001A
или WX001B. Время удерживания WX001A составляло 1,782 мин, а время удерживания WX001B составляло 1,969 мин.Chiral separation of WX001-8 was carried out by supercritical fluid chromatography (separation conditions: Daicel Chiralcel OJ chromatography column (250×30 mm inner diameter, 10 µm); mobile phase: A - CO 2 , B - ethanol (with 0.1% NH 3 in H 2 O), B% = 50%; feed rate: 70 ml/min), obtaining WX001A
or WX001B. The retention time of WX001A was 1.782 minutes and the retention time of WX001B was 1.969 minutes.
Пример 2Example 2
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX002-2
В реакционную колбу вносили WX001-1 (5 г, 24,03 ммоль, 1 экв.) и тетрагидрофуран (250 мл) в атмосфере азота и медленно добавляли диизопропиламид лития (2 М, 28,84 мл, 2,4 экв.) и тетраметилэтилендиамин (4,19 г, 36,05 ммоль, 5,44 мл, 1,5 экв.) при -78°C. Смесь инкубировали при -78°C в течение 0,5 часа, а затем добавляли раствор WX002-1 (4,81 г, 48,07 ммоль, 4,42 мл, 2 экв.) в тетрагидрофуране (10 мл). Смесь инкубировали при -78°C в течение 2 часов. По завершении реакции реакционный раствор медленно выливали в 100 мл насыщенного водного раствора хлористого аммония при 0°C, доводили до pH 3-4 с помощью соляной кислоты (2 М) и экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (3×200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая WX002-2.WX001-1 (5 g, 24.03 mmol, 1 eq.) and tetrahydrofuran (250 ml) were added to the reaction flask under nitrogen atmosphere and lithium diisopropylamide (2 M, 28.84 ml, 2.4 eq.) and tetramethylethylenediamine (4.19 g, 36.05 mmol, 5.44 ml, 1.5 eq.) were added slowly at -78°C. The mixture was incubated at -78°C for 0.5 hour, and then a solution of WX002-1 (4.81 g, 48.07 mmol, 4.42 ml, 2 eq.) in tetrahydrofuran (10 ml) was added. The mixture was incubated at -78°C for 2 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was slowly poured into 100 ml of a saturated aqueous ammonium chloride solution at 0° C., adjusted to pH 3-4 with hydrochloric acid (2 M), and extracted with ethyl acetate (3×200 ml). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (3×200 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45°C to give WX002-2.
Стадия 2. Синтез WX002-3Stage 2. Synthesis of WX002-3
В реакционную колбу вносили WX002-2 (1 г, 3,25 ммоль, 1 экв.) и ацетонитрил (20 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли эфират трифторида бора (552,70 мг, 3,89 ммоль, 480,61 мкл, 1,2 экв.). Раствор этой смеси инкубировали при 60°C в течение 16 часов. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (20 мл) и экстрагировали смесь этилацетатом (3×30 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (3×30 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт растирали с этилацетатом (10 мл), получая WX002-3.WX002-2 (1 g, 3.25 mmol, 1 eq.) and acetonitrile (20 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then boron trifluoride etherate (552.70 mg, 3.89 mmol, 480.61 µl, 1.2 eq.) was added. A solution of this mixture was incubated at 60°C for 16 hours. After completion of the reaction, a saturated sodium bicarbonate aqueous solution (20 ml) was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with ethyl acetate (3×30 ml). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (3×30 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45° C. to give a crude product. The crude product was triturated with ethyl acetate (10 ml) to give WX002-3.
Стадия 3. Синтез WX002-4Stage 3. Synthesis of WX002-4
В сухую реакционную колбу вносили WX002-3 (260 мг, 785,06 мкмоль, 1 экв.), соляную кислоту (2 М, 4 мл, 10,19 экв.) и этанол (6 мл). Смесь инкубировали при 50°C в течение 16 часов, а затем нагревали до 70°C и инкубировали в течение 4 часов. По завершении реакции реакционный раствор экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (3×50 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт растирали с этилацетатом (10 мл), получая WX002-4. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 9.32 (s, 1H), 3.73-3.79 (m, 2H), 3.56-3.63 (m, 2H), 2.27-2.34 (m, 1H), 1.86-1.91 (m, 2H), 1.80-1.82 (m, 1H).WX002-3 (260 mg, 785.06 µmol, 1 eq.), hydrochloric acid (2 M, 4 ml, 10.19 eq.) and ethanol (6 ml) were added to a dry reaction flask. The mixture was incubated at 50°C for 16 hours and then heated to 70°C and incubated for 4 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was extracted with ethyl acetate (3×50 ml). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (3×50 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45° C. to give a crude product. The crude product was triturated with ethyl acetate (10 ml) to give WX002-4. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.32 (s, 1H), 3.73-3.79 (m, 2H), 3.56-3.63 (m, 2H), 2.27-2.34 (m, 1H), 1.86-1.91 (m, 2H), 1.80-1.82 (m, 1H).
Стадия 4. Синтез WX002-5
В сухую реакционную колбу вносили WX002-4 (50 мг, 172,92 мкмоль, 1 экв.) и N,N-диметилформамид (2 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли гидрид натрия (10,37 мг, 259,38 мкмоль, чистота 60%, 1,5 экв.) при 0°C. Смесь инкубировали при 0°C в течение 0,5 часа, а затем добавляли WX001-6 (35,53 мг, 172,92 мкмоль, 22,63 мкл, 1 экв.). Реакционный раствор медленно нагревали до 25°C и инкубировали еще 1,5 часа. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли 30 мл воды и экстрагировали смесь этилацетатом (3×50 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (3×50 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX002-5. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 7.42 (s, 1H), 7.29-7.38 (m, 3H), 4.77 (s, 2H), 4.03 (br dd, J = 12.3, 4.1 Hz, 2H), 3.45 (br t, J = 12.0 Hz, 2H), 2.17-2.25 (m, 4.8 Hz, 2H), 1.38 (br d, J = 13.0 Hz, 2H).WX002-4 (50 mg, 172.92 µmol, 1 eq.) and N,N-dimethylformamide (2 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then sodium hydride (10.37 mg, 259.38 µmol, 60% purity, 1.5 eq.) was added at 0°C. The mixture was incubated at 0° C. for 0.5 hour and then WX001-6 (35.53 mg, 172.92 µmol, 22.63 µl, 1 eq.) was added. The reaction solution was slowly heated to 25°C and incubated for another 1.5 hours. After completion of the reaction, 30 ml of water was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with ethyl acetate (3×50 ml). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (3×50 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45° C. to give a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX002-5. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 7.42 (s, 1H), 7.29-7.38 (m, 3H), 4.77 (s, 2H), 4.03 (br dd, J = 12.3, 4.1 Hz, 2H), 3.45 (br t, J = 12.0 Hz, 2H), 2.17–2.25 (m, 4.8 Hz, 2H), 1.38 (br d, J = 13.0 Hz, 2H).
Стадия 5. Синтез WX002
В реакционную колбу вносили WX002-5 (50 мг, 120,86 мкмоль, 1 экв.), A-1 (65,66 мг, 120,86 мкмоль, 1 экв.) и толуол (1 мл) и заменяли атмосферу газообразным азотом. Смесь нагревали до 125°C, а затем медленно добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (27,93 мг, 24,17 мкмоль, 0,2 экв.). Смесь инкубировали при 125°C в течение 48 часов. По завершении реакции реакционный раствор упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматографическая колонка: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 мм×10 мкм; подвижная фаза: [вода с 10 мМ бикарбонатом аммония-ацетонитрил]; ацетонитрил: 28%-58%, 8 мин), получая WX002.WX002-5 (50 mg, 120.86 µmol, 1 eq), A-1 (65.66 mg, 120.86 µmol, 1 eq) and toluene (1 ml) were added to the reaction flask and the atmosphere replaced with nitrogen gas. The mixture was heated to 125° C. and then tetrakis(triphenylphosphine)palladium (27.93 mg, 24.17 µmol, 0.2 eq.) was added slowly. The mixture was incubated at 125°C for 48 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45° C. to obtain a crude product. The crude product was purified by high performance liquid chromatography (chromatographic column: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 mm×10 µm; mobile phase: [water with 10 mM ammonium bicarbonate-acetonitrile]; acetonitrile: 28%-58%, 8 min) to give WX002.
Пример 3Example 3
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX003-1
В сухую реакционную колбу вносили WX002-5 (100 мг, 241,71 мкмоль, 1 экв.), A-1-2 (108,10 мг, 241,71 мкмоль, 1 экв.) и толуол (2 мл) и заменяли атмосферу газообразным азотом. Добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (55,86мг, 48,34 мкмоль, 0,2 экв.) при 125°C и инкубировали смесь с перемешиванием в течение 48 часов. По завершении реакции реакционный раствор упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX003-1. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 9.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.31-7.39 (m, 3H), 4.83 (s, 2H), 4.07 (m, J = 12.3, 4.4 Hz, 2H), 3.64 (m, J = 12.0 Hz, 2H), 3.54 (s, 3H), 2.24-2.31 (m, 2H), 1.43 (m, J = 12.9 Hz, 2H).WX002-5 (100 mg, 241.71 µmol, 1 eq), A-1-2 (108.10 mg, 241.71 µmol, 1 eq) and toluene (2 ml) were added to a dry reaction flask and the atmosphere replaced with nitrogen gas. Tetrakis(triphenylphosphine)palladium (55.86mg, 48.34µmol, 0.2eq) was added at 125°C and the mixture was incubated with stirring for 48 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was evaporated under reduced pressure with a water pump at 45° C. to obtain a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX003-1. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.29 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.31-7.39 (m, 3H), 4.83 (s, 2H), 4.07 (m, J = 12.3, 4.4 Hz, 2H), 3.64 (m, J = 12.0 Hz, 2H), 3.54 (s, 3H), 2.24–2.31 (m, 2H), 1.43 (m, J = 12.9 Hz, 2H).
Стадия 2. Синтез WX003Stage 2. Synthesis of WX003
В сухую реакционную колбу вносили WX003-1 (50 мг, 101,84 мкмоль, 1 экв.), тетрагидропиран-4-амин (10,30 мг, 101,84 мкмоль, 1 экв.) и диметилсульфоксид (1 мл). Смесь инкубировали с перемешиванием при 100°C в течение 16 часов. По завершении реакции реакционный раствор очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматографическая колонка: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 мм×10 мкм; подвижная фаза: [вода с 10 мМ бикарбонатом аммония-ацетонитрил]; ацетонитрил: 32%-62%, 8 мин), получая WX003.WX003-1 (50 mg, 101.84 µmol, 1 eq), tetrahydropyran-4-amine (10.30 mg, 101.84 µmol, 1 eq) and dimethyl sulfoxide (1 ml) were added to a dry reaction flask. The mixture was incubated with stirring at 100°C for 16 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was purified by high performance liquid chromatography (chromatography column: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 mm×10 μm; mobile phase: [water with 10 mM ammonium bicarbonate-acetonitrile]; acetonitrile: 32%-62%, 8 min) to obtain WX003.
Пример 4Example 4
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX004-1
В реакционную колбу вносили WX001-1 (10 г, 48,07 ммоль, 1 экв.) и тетрагидрофуран (200 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем медленно по каплям добавляли раствор боран-тетрагидрофуранового комплекса (1 М, 144,21 мл, 3 экв.) в атмосфере азота. Смесь инкубировали при 25°C в течение 5 часов. По завершении реакции в реакционный раствор медленно по каплям добавляли метанол (100 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 25°C в течение 16 часов, а затем упаривали досуха на роторном испарителе при 40°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX004-1. 1H-ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ (ppm) 7.47 (s, 1H), 4.52 (d, J = 1.0 Hz, 2H).WX001-1 (10 g, 48.07 mmol, 1 eq.) and tetrahydrofuran (200 ml) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas, and then a solution of borane-tetrahydrofuran complex (1 M, 144.21 ml, 3 eq.) was slowly added dropwise under nitrogen atmosphere. The mixture was incubated at 25°C for 5 hours. After completion of the reaction, methanol (100 ml) was slowly added dropwise to the reaction solution under nitrogen atmosphere. The mixture was stirred at 25°C for 16 hours and then evaporated to dryness on a rotary evaporator at 40°C to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography to give WX004-1. 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ (ppm) 7.47 (s, 1H), 4.52 (d, J = 1.0 Hz, 2H).
Стадия 2. Синтез WX004-3Stage 2. Synthesis of WX004-3
В реакционную колбу вносили WX004-1 (7,86 г, 40,51 ммоль, 1 экв.) и тетрагидрофуран (78,6 мл) и заменяли атмосферу газообразным азотом. Смесь охлаждали до -78°С. Медленно добавляли диизопропиламид лития (2 М, 48,61 мл, 2,4 экв.), а затем добавляли тетраметилэтилендиамин (7,06 г, 60,76 ммоль, 9,17 мл, 1,5 экв.). Смесь инкубировали при -78°C в течение 0,5 часа, а затем добавляли смесь WX004-2 (10,65 г, 60,76 ммоль, 1,5 экв.) и тетрагидрофурана (10 мл). Смесь инкубировали при -78°C в течение 1 часа. По завершении реакции реакционный раствор гасили насыщенным водным раствором хлорида аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха на роторном испарителе при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX004-3. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 6.39 (s, 1H), 5.42 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.84-5.03 (m, 4H), 4.38 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.12 (s, 9H).WX004-1 (7.86 g, 40.51 mmol, 1 eq.) and tetrahydrofuran (78.6 ml) were added to the reaction flask and the atmosphere replaced with nitrogen gas. The mixture was cooled to -78°C. Lithium diisopropylamide (2 M, 48.61 ml, 2.4 eq.) was added slowly, followed by tetramethylethylenediamine (7.06 g, 60.76 mmol, 9.17 ml, 1.5 eq.). The mixture was incubated at -78°C for 0.5 hour, and then a mixture of WX004-2 (10.65 g, 60.76 mmol, 1.5 eq.) and tetrahydrofuran (10 ml) was added. The mixture was incubated at -78°C for 1 hour. After completion of the reaction, the reaction solution was quenched with saturated aqueous ammonium chloride (100 ml) and extracted with ethyl acetate (3×50 ml). The organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness on a rotary evaporator at 45° C. to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography to give WX004-3. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO- d6 ): δ (ppm) 6.39 (s, 1H), 5.42 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.84–5.03 (m, 4H), 4.38 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.12 (s, 9H).
Стадия 3. Синтез WX004-4Stage 3. Synthesis of WX004-4
В реакционную колбу вносили тетрагидрофуран (56 мл), WX004-3 (5,6 г, 11,07 ммоль, чистота 73%, 1 экв.) и трибутилфосфин (4,48 г, 22,14 ммоль, 5 ,46 мл, 2 экв.). По завершении растворения заменяли атмосферу газообразным азотом. Смесь охлаждали до 0°C и медленно добавляли диизопропилазодикарбоксилат (4,48 г, 22,14 ммоль, 4,30 мл, 2 экв.). Смесь медленно нагревали до 20°C и инкубировали в течение 2 часов. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли воду (60 мл) и экстрагировали смесь этилацетатом (3×30 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха на роторном испарителе при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX004-4. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 5.30 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.75-4.87 (m, 3H), 4.61 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.27 (s, 9H).Tetrahydrofuran (56 ml), WX004-3 (5.6 g, 11.07 mmol, 73% purity, 1 eq.) and tributylphosphine (4.48 g, 22.14 mmol, 5.46 ml, 2 eq.) were added to the reaction flask. Upon completion of the dissolution, the atmosphere was replaced with nitrogen gas. The mixture was cooled to 0° C. and diisopropyl azodicarboxylate (4.48 g, 22.14 mmol, 4.30 ml, 2 eq.) was added slowly. The mixture was slowly heated to 20°C and incubated for 2 hours. After completion of the reaction, water (60 ml) was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with ethyl acetate (3×30 ml). The organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness on a rotary evaporator at 45° C. to give the crude product. The crude product was purified by column chromatography to give WX004-4. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 5.30 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.75-4.87 (m, 3H), 4.61 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.27 (s, 9H).
Стадия 4. Синтез WX004-5
В реакционную колбу вносили WX004-4 (500 мг, 1,42 ммоль, 1 экв.), тетрагидрофуран (8,3 мл), воду (1,6 мл) и йод (72,25 мг, 284, 67 мкмоль, 57,34 мкл, 0,2 экв.). Заменяли атмосферу газообразным азотом и инкубировали смесь при 30°C в течение 16 часов. По завершении реакции получали реакционный раствор, содержащий WX004-5, который непосредственно использовали в следующей реакции.WX004-4 (500 mg, 1.42 mmol, 1 eq.), tetrahydrofuran (8.3 ml), water (1.6 ml) and iodine (72.25 mg, 284.67 μmol, 57.34 μl, 0.2 eq.) were added to the reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and the mixture was incubated at 30° C. for 16 hours. After completion of the reaction, a reaction solution containing WX004-5 was obtained, which was directly used in the next reaction.
Стадия 5. Синтез WX004-6
В полученный на стадии 4 реакционный раствор, содержащий WX004-5, последовательно добавляли тетрагидрофуран (8,3 мл), воду (1,6 мл), ди-трет-бутилдикарбонат (465,00 мг, 2,13 ммоль, 489,47 мкл, 1,5 экв.) и карбонат натрия (301,10 мг, 2,84 ммоль, 2 экв.) и инкубировали смесь при 25°C в течение 4 часов. По завершении реакции реакционный раствор гасили водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×5 мл). Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха на роторном испарителе при 45°C, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX004-6. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 5.46 (br d, J = 5.8 Hz, 1H), 5.32 (br d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.64 (br d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.55 (br d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.49 (br d, J = 9.5 Hz, 2H), 1.47-1.57 (m, 9H).To the reaction solution obtained in
Стадия 6. Синтез WX004-7Stage 6. Synthesis of WX004-7
В сухую реакционную колбу вносили WX004-6 (150 мг, 431,99 мкмоль, 1 экв.), триоксид хрома (86,39 мг, 863,99 мкмоль, 32,00 мкл, 2 экв.) и уксусную кислоту (3 мл) и инкубировали смесь при 25°C в течение 12 часов. По завершении реакции реакционный раствор разбавляли водой (3 мл) и трижды экстрагировали дихлорметаном (по 5 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (5 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX004-7.WX004-6 (150 mg, 431.99 µmol, 1 eq.), chromium trioxide (86.39 mg, 863.99 µmol, 32.00 µl, 2 eq.) and acetic acid (3 ml) were added to a dry reaction flask and the mixture was incubated at 25°C for 12 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was diluted with water (3 ml) and extracted three times with dichloromethane (5 ml each). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (5 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump to give a crude product. The crude product was purified by column chromatography to give WX004-7.
Стадия 7. Синтез WX004-8
В сухую реакционную колбу вносили WX004-7 (70 мг, 193,79 мкмоль, 1 экв.), дихлорметан (1 мл) и трифторуксусную кислоту (287,47 мг, 2,52 ммоль, 186,67 мкл, 13,01 экв.) и инкубировали смесь при 25°C в течение 1 часа. По завершении реакции реакционный раствор непосредственно упаривали, получая неочищенный продукт, который очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX004-8. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 9.59 (br, s, 1H), 4.89 (s, 4H).WX004-7 (70 mg, 193.79 µmol, 1 eq.), dichloromethane (1 ml) and trifluoroacetic acid (287.47 mg, 2.52 mmol, 186.67 µl, 13.01 eq.) were added to a dry reaction flask and the mixture was incubated at 25°C for 1 hour. After completion of the reaction, the reaction solution was directly evaporated to give a crude product, which was purified by thin layer chromatography on a silica gel-coated plate to give WX004-8. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.59 (br, s, 1H), 4.89 (s, 4H).
Стадия 8. Синтез WX004-10Stage 8. Synthesis of WX004-10
В сухую реакционную колбу вносили WX004-8 (45 мг, 172,35 мкмоль, 1 экв.), N,N-диметилформамид (2 мл), карбонат цезия (84,23 мг, 258,53 мкмоль, 5 экв.) и WX004-9 (39,09 мг, 206,82 мкмоль, 25,39 мкл, 1,2 экв.). Заменяли атмосферу газообразным азотом и инкубировали смесь при 25°C в течение 12 часов. По завершении реакции реакционный раствор разбавляли водой (2 мл) и трижды экстрагировали дихлорметаном (по 2 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса, получая неочищенный продукт, который очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX004-10.WX004-8 (45 mg, 172.35 µmol, 1 eq.), N,N-dimethylformamide (2 ml), cesium carbonate (84.23 mg, 258.53 µmol, 5 eq.) and WX004-9 (39.09 mg, 206.82 µmol, 25.39 µl, 1, 2 eq.). The atmosphere was replaced with nitrogen gas and the mixture was incubated at 25° C. for 12 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was diluted with water (2 ml) and extracted three times with dichloromethane (2 ml each). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (20 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump to give a crude product, which was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX004-10.
Стадия 9. Синтез WX004Stage 9. Synthesis of WX004
В сухую реакционную колбу вносили WX004-10 (45 мг, 121,88 мкмоль, 1 экв.), A-1 (62,24 мг, 134,07 мкмоль, 1,1 экв.) и толуол (1 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (28,17 мг, 24,38 мкмоль, 0,2 экв.). Смесь нагревали до 125°C и инкубировали в течение 16 часов. По завершении реакции реакционный раствор непосредственно упаривали, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, а затем очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматографическая колонка: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 мм×10 мкм; подвижная фаза: [H2O с 10 мМ бикарбонатом аммония-ацетонитрил]; ацетонитрил: 25%-45%, 8 мин), получая WX004.WX004-10 (45 mg, 121.88 µmol, 1 eq), A-1 (62.24 mg, 134.07 µmol, 1.1 eq) and toluene (1 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then tetrakis(triphenylphosphine)palladium (28.17 mg, 24.38 µmol, 0.2 eq.) was added. The mixture was heated to 125°C and incubated for 16 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was directly evaporated to give a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate and then purified by high performance liquid chromatography (chromatographic column: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 mm×10 μm; mobile phase: [H 2 O with 10 mM ammonium bicarbonate-acetonitrile]; acetonitrile: 25%-45 %, 8 min) to give WX004.
Пример 5Example 5
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX005-1
В сухую реакционную колбу вносили WX004-8 (300 мг, 1,15 ммоль, 1 экв.), N,N-диметилформамид (6 мл), карбонат цезия (561,55 мг, 1,72 ммоль, 5 экв.) и WX001-6 (283,32 мг, 1,38 ммоль, 180,46 мкл, 1,2 экв.). Заменяли атмосферу газообразным азотом и инкубировали смесь при 25°C в течение 16 часов. По завершении реакции реакционный раствор разбавляли водой (10 мл) и трижды экстрагировали этилацетатом (по 20 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (5×20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом колоночной хроматографии, получая WX005-1. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 7.42 (s, 1H), 7.32-7.40 (m, 2H), 7.26-7.32 (m, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.79-4.89 (m, 4H).To a dry reaction flask were added WX004-8 (300 mg, 1.15 mmol, 1 eq.), N,N-dimethylformamide (6 ml), cesium carbonate (561.55 mg, 1.72 mmol, 5 eq.) and WX001-6 (283.32 mg, 1.38 mmol, 180.46 μl, 1.2 equiv.). The atmosphere was replaced with nitrogen gas and the mixture was incubated at 25° C. for 16 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was diluted with water (10 ml) and extracted three times with ethyl acetate (20 ml each). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (5×20 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump to give a crude product. The crude product was purified by column chromatography to give WX005-1. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 7.42 (s, 1H), 7.32-7.40 (m, 2H), 7.26-7.32 (m, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.79-4.89 (m, 4H).
Стадия 2. Синтез WX005Stage 2. Synthesis of WX005
В сухую реакционную колбу вносили WX005-1 (30 мг, 77,79 мкмоль, 1 экв.), A-1 (39,72 мг, 85,57 мкмоль, 1,1 экв.) и толуол (1 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (17,98 мг, 15,56 мкмоль, 0,2 экв.). Смесь нагревали до 125°C и инкубировали в течение 16 часов. Еще добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (8,99 мг, 7,78 мкмоль, 0,1 экв.) и инкубировали смесь при 125°C в течение 3 часов. По завершении реакции реакционный раствор непосредственно упаривали, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, а затем очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматографическая колонка: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 мм×10 мкм; подвижная фаза: [вода с 10 мМ бикарбонатом аммония-ацетонитрил]; ацетонитрил: 25%-55%, 8 мин), получая WX005.WX005-1 (30 mg, 77.79 µmol, 1 eq.), A-1 (39.72 mg, 85.57 µmol, 1.1 eq.) and toluene (1 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then tetrakis(triphenylphosphine)palladium (17.98 mg, 15.56 µmol, 0.2 eq.) was added. The mixture was heated to 125°C and incubated for 16 hours. Tetrakis(triphenylphosphine)palladium (8.99 mg, 7.78 µmol, 0.1 eq.) was further added and the mixture was incubated at 125° C. for 3 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was directly evaporated to give a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate, and then purified by high performance liquid chromatography (chromatographic column: Waters Xbridge BEH C18, 100×30 mm×10 μm; mobile phase: [water with 10 mM ammonium bicarbonate-acetonitrile]; acetonitrile: 25%-55%, 8 min) to get WX005.
Пример 6Example 6
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX006-2
В сухую реакционную колбу вносили WX004-10 (105 мг, 284,39 мкмоль, 1 экв.), тетрагидрофуран (1 мл) и хлорид цинка (0,7 М, 406,27 мкл, 1 экв.). Заменяли атмосферу газообразным азотом и добавляли н-бутиллитий (2,5 М, 170,64 мкл, 1,5 экв.) при -30°C. Смесь перемешивали при 25°C в течение 1 часа, а затем охлаждали до -30°C. Добавляли раствор B-1 (75,68 мг, 284,39 мкмоль, 1 экв.) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (16,43 мг, 14,22 мкмоль, 0,05 экв.) в тетрагидрофуране (0,5 мл), нагревали смесь до 60°C и инкубировали в течение 16 часов. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли 2 мл насыщенного водного раствора хлорида аммония и экстрагировали смесь этилацетатом (3×5 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали, растирая с 2 мл метил-трет-бутилового эфира, получая WX006-2. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 8.77 (s, 1H), 7.37-7.42 (m, 1H), 7.20 (br d, J = 8.6 Hz, 3H), 5.04 (s, 2H), 4.94 (d, J =7.5 Hz, 2H), 4.86 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.62 (s, 3H).WX004-10 (105 mg, 284.39 µmol, 1 eq), tetrahydrofuran (1 ml) and zinc chloride (0.7 M, 406.27 µl, 1 eq) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and n-butyl lithium (2.5 M, 170.64 μl, 1.5 eq.) was added at -30°C. The mixture was stirred at 25°C for 1 hour and then cooled to -30°C. A solution of B-1 (75.68 mg, 284.39 µmol, 1 eq.) and tetrakis(triphenylphosphine)palladium (16.43 mg, 14.22 µmol, 0.05 eq.) in tetrahydrofuran (0.5 ml) was added, the mixture was heated to 60°C and incubated for 16 hours. After completion of the reaction, 2 ml of a saturated ammonium chloride aqueous solution was added to the reaction solution, and the mixture was extracted with ethyl acetate (3×5 ml). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (20 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump to give a crude product. The crude product was purified by trituration with 2 ml of methyl tert-butyl ether to give WX006-2. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 8.77 (s, 1H), 7.37-7.42 (m, 1H), 7.20 (br d, J = 8.6 Hz, 3H), 5.04 (s, 2H), 4.94 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 4.86 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.62 (s, 3H).
Стадия 2. Синтез WX006-3Stage 2. Synthesis of WX006-3
В сухую реакционную колбу вносили WX006-2 (20 мг, 46,67 мкмоль, 1 экв.) и дихлорметан (1 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли м-хлорпероксибензойную кислоту (30,20 мг, 140,02 мкмоль, чистота 80%, 3 экв.) при 0°C. Смесь медленно нагревали до 25°C и инкубировали в течение 3 часов. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли насыщенный раствор тиосульфата натрия (10 мл) до тех пор, пока крахмальная индикаторная бумажка с KI не посинеет. Смесь разбавляли дихлорметаном (10 мл). Проводили разделение слоев. Затем собирали органическую фазу, которую промывали 10 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 10 мл насыщенного раствора NaCl, соответственно, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха на роторном испарителе, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX006-3. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 9.20 (s, 1H), 7.37-7.45 (m, 1H), 7.21 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.09-7.15 (m, 1H), 5.05(s, 2H), 4.93-4.96 (m, 2H), 4.89-4.91 (m, 2H), 3.51 (s, 3H), 2.82 (s, 3H).WX006-2 (20 mg, 46.67 µmol, 1 eq.) and dichloromethane (1 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then m-chloroperoxybenzoic acid (30.20 mg, 140.02 µmol, 80% purity, 3 eq.) was added at 0°C. The mixture was slowly heated to 25°C and incubated for 3 hours. After completion of the reaction, a saturated sodium thiosulfate solution (10 ml) was added to the reaction solution until the KI starch indicator paper turned blue. The mixture was diluted with dichloromethane (10 ml). The layers were separated. The organic phase was then collected, which was washed with 10 ml of saturated sodium bicarbonate solution and 10 ml of saturated NaCl solution, respectively, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness on a rotary evaporator to give the crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX006-3. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.20 (s, 1H), 7.37-7.45 (m, 1H), 7.21 (br d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.09-7.15 (m, 1H), 5.05(s, 2H), 4.93-4.96 (m, 2H), 4.89-4.91 (m, 2H), 3.51 (s, 3H), 2.82 (s, 3H).
Стадия 3. Синтез WX006Stage 3. Synthesis of WX006
В сухую реакционную колбу вносили WX006-3 (28 мг, 60,80 мкмоль, 1 экв.), A-1-3 (11,81 мг, 121,61 мкмоль, 2 экв.), дихлорметан (1 мл) и тетрагидрофуран (1 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом и добавляли гексаметилдисилазид лития (1 М, 127,69 мкл, 2,1 экв.) при -30°C. Смесь инкубировали при 25°C в течение 1 часа. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли 1 мл воды. Органический растворитель в реакционном растворе упаривали на роторном испарителе, а твердые вещества выпадали в осадок. Смесь фильтровали и собирали твердые частицы, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматографическая колонка: Waters Xbridge BEH C18 100×25 мм×5 мкм; подвижная фаза: [H2O с 10 мМ бикарбонатом аммония-ацетонитрил]; ацетонитрил: 25%-60%, 10 мин), получая WX006.WX006-3 (28 mg, 60.80 µmol, 1 eq.), A-1-3 (11.81 mg, 121.61 µmol, 2 eq.), dichloromethane (1 ml) and tetrahydrofuran (1 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and lithium hexamethyldisilazide (1 M, 127.69 µl, 2.1 eq.) was added at -30°C. The mixture was incubated at 25°C for 1 hour. After completion of the reaction, 1 ml of water was added to the reaction solution. The organic solvent in the reaction solution was evaporated on a rotary evaporator, and solids precipitated. The mixture was filtered and the solids were collected to give the crude product. The crude product was purified by high performance liquid chromatography (chromatographic column: Waters Xbridge BEH C18 100×25 mm×5 μm; mobile phase: [H 2 O with 10 mM ammonium bicarbonate-acetonitrile]; acetonitrile: 25%-60%, 10 min) to give WX006.
Пример 7Example 7
Схема синтеза:Synthesis scheme:
Стадия 1. Синтез WX007-1
В сухую реакционную колбу вносили WX005-1 (100 мг, 259,29 мкмоль, 1 экв.), хлорид цинка (0,7 М, 370,42 мкл, 1 экв.) и тетрагидрофуран (1,5 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем охлаждали смесь до -30°C. Добавляли н-бутиллитий (2,5 М, 155,58 мкл, 1,5 экв.) и инкубировали смесь при 20°C в течение 1 часа. Затем охлаждали смесь до -30°C. Медленно по каплям добавляли раствор тетракис(трифенилфосфин)палладия (14,98 мг, 12,96 мкмоль, 0,05 экв) и B-1 (69,00 мг, 259,29 мкмоль, 1 экв) в тетрагидрофуране (0,5 мл) и инкубировали смесь при 60°C в течение 15 часов. По завершении реакции реакционный раствор гасили 5 мл насыщенного раствора хлорида аммония и трижды экстрагировали этилацетатом (по 10 мл). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным раствором NaCl (10 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали при пониженном давлении с помощью водяного насоса, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX007-1. 1H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ (ppm) 8.78 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.30-7.42 (m, 3H), 5.03 (s, 2H), 4.91-4.96 (m, 2H), 4.83-4.89 (m, 2H), 2.59-2.71 (m, 6H).WX005-1 (100 mg, 259.29 µmol, 1 eq), zinc chloride (0.7 M, 370.42 µl, 1 eq) and tetrahydrofuran (1.5 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas, and then the mixture was cooled to -30°C. n-Butyl lithium (2.5 M, 155.58 μl, 1.5 eq.) was added and the mixture was incubated at 20° C. for 1 hour. The mixture was then cooled to -30°C. A solution of tetrakis(triphenylphosphine)palladium (14.98 mg, 12.96 µmol, 0.05 eq) and B-1 (69.00 mg, 259.29 µmol, 1 eq) in tetrahydrofuran (0.5 ml) was slowly added dropwise and the mixture was incubated at 60°C for 15 hours. After completion of the reaction, the reaction solution was quenched with 5 ml of saturated ammonium chloride solution and extracted three times with ethyl acetate (10 ml each). The organic phases were combined, washed with saturated NaCl solution (10 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated under reduced pressure with a water pump to give a crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX007-1. 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 8.78 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.30-7.42 (m, 3H), 5.03 (s, 2H), 4.91-4.96 (m, 2H), 4.83-4.89 (m, 2H), 2.59-2 .71(m, 6H).
Стадия 2. Синтез WX007-2Stage 2. Synthesis of WX007-2
В сухую реакционную колбу вносили WX007-1 (40 мг, 89,90 мкмоль, 1 экв.) и дихлорметан (1 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом, а затем добавляли м-хлорпероксибензойную кислоту (58,18 мг, 269,69 мкмоль, чистота 80%, 3 экв.) при 0°C. Смесь медленно нагревали до 25°C и инкубировали в течение 3 часов. По завершении реакции в реакционный раствор добавляли насыщенный раствор тиосульфата натрия (10 мл) до тех пор, пока крахмальная индикаторная бумажка с KI не посинеет. Раствор этой смеси разбавляли дихлорметаном (10 мл). Проводили разделение слоев. Затем собирали органическую фазу, которую промывали 10 мл насыщенного раствора бикарбоната натрия и 10 мл насыщенного раствора NaCl, соответственно, сушили над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Фильтрат упаривали досуха на роторном испарителе, получая неочищенный продукт. Неочищенный продукт очищали методом тонкослойной хроматографии на покрытой силикагелем пластинке, получая WX007-2.WX007-1 (40 mg, 89.90 µmol, 1 eq.) and dichloromethane (1 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas and then m-chloroperoxybenzoic acid (58.18 mg, 269.69 µmol, 80% purity, 3 eq) was added at 0°C. The mixture was slowly heated to 25°C and incubated for 3 hours. After completion of the reaction, a saturated sodium thiosulfate solution (10 ml) was added to the reaction solution until the KI starch indicator paper turned blue. A solution of this mixture was diluted with dichloromethane (10 ml). The layers were separated. The organic phase was then collected, which was washed with 10 ml of saturated sodium bicarbonate solution and 10 ml of saturated NaCl solution, respectively, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to dryness on a rotary evaporator to give the crude product. The crude product was purified by thin layer chromatography on a silica gel coated plate to give WX007-2.
Стадия 3. Синтез WX007Stage 3. Synthesis of WX007
В сухую реакционную колбу вносили WX007-2 (35 мг, 73,38 мкмоль, 1 экв.), A-1-3 (14,97 мг, 154,10 мкмоль, 2,1 экв.), дихлорметан ( 0,5 мл) и тетрагидрофуран (0,5 мл). Заменяли атмосферу газообразным азотом. Смесь охлаждали до 0°C и по каплям добавляли гексаметилдисилазид лития (1 М, 146,76 мкл, 2 экв.). Смесь инкубировали при 0°C в течение 0,5 часа и еще 1 час при 25°С. По завершении реакции реакционный раствор гасили 10 мл воды и экстрагировали 20 мл дихлорметана. Проводили разделение слоев. Собирали органическую фазу, а водную фазу экстрагировали дихлорметаном (3×20 мл). Органические фазы объединяли, а затем последовательно промывали насыщенным раствором NaCl (3×20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении, получая остаток. Неочищенный продукт очищали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (хроматографическая колонка: Phenomenex Gemini-NX C18, 75×30 мм×3 мкм; подвижная фаза: [H2O с 10 мМ бикарбонатом аммония-ацетонитрил]; ацетонитрил: 35%-55%, 8 мин), получая WX007.WX007-2 (35 mg, 73.38 µmol, 1 eq.), A-1-3 (14.97 mg, 154.10 µmol, 2.1 eq.), dichloromethane (0.5 ml) and tetrahydrofuran (0.5 ml) were added to a dry reaction flask. The atmosphere was replaced with nitrogen gas. The mixture was cooled to 0° C. and lithium hexamethyldisilazide (1 M, 146.76 μl, 2 eq.) was added dropwise. The mixture was incubated at 0°C for 0.5 hour and another 1 hour at 25°C. After completion of the reaction, the reaction solution was quenched with 10 ml of water and extracted with 20 ml of dichloromethane. The layers were separated. The organic phase was collected and the aqueous phase was extracted with dichloromethane (3×20 ml). The organic phases were combined and then washed successively with saturated NaCl solution (3×20 ml), dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated under reduced pressure to give a residue. The crude product was purified by high performance liquid chromatography (chromatographic column: Phenomenex Gemini-NX C18, 75×30 mm×3 μm; mobile phase: [H 2 O with 10 mM ammonium bicarbonate-acetonitrile]; acetonitrile: 35%-55%, 8 min) to give WX007.
В табл. 1 представлены данные спектров 1H-ЯМР и масс-спектров из каждого примера.In table. 1 shows 1 H-NMR and mass spectral data from each example.
[M+H]+ 494.2
[M+H] +
[M+H]+ 494.1
[M+H] +
[M+H]+ 508.3
[M+H] +
[M+H]+ 512.3
[M+H] +
[M+H]+ 464.0
[M+H] +
[M+1]+ 480.1
[M+1] +
[M+1]+ 478.1
[M+1] +
[M+1]+ 494.1
[M+1] +
Тест-пример 1. Анализ активности киназы in vitroTest Example 1 In Vitro Kinase Activity Assay
1. Цель исследования1. Purpose of the study
Измеряли способность соединений ингибировать активность киназы ERK2.The ability of compounds to inhibit ERK2 kinase activity was measured.
2. Буфер для анализа2. Buffer for analysis
20 мМ Hepes (рН 7,5), 10 мМ MgCl2, 1 мМ этиленбис(оксиэтиленнитрило)тетрауксусная кислота (EGTA), 0,02% Brij35, 0,02 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA), 0,1 мМ Na3VO4, 2 мМ дитиотреитол (DTT), 1% DMSO.20 mM Hepes (pH 7.5), 10 mM MgCl 2 , 1 mM ethylenebis(oxyethylenenitrile)tetraacetic acid (EGTA), 0.02% Brij35, 0.02 mg/ml bovine serum albumin (BSA), 0.1 mM Na 3 VO 4 , 2 mM dithiothreitol (DTT ), 1% DMSO.
3. Обработка соединений3. Handling connections
Исследуемые соединения растворяли в 100% DMSO, получая маточные растворы в определенной концентрации. Делали серийные разведения соединений в растворе DMSO с помощью смарт-пипетки Integra Viaflo Assist.The test compounds were dissolved in 100% DMSO to obtain stock solutions at a certain concentration. Serial dilutions of compounds were made in DMSO solution using an Integra Viaflo Assist smart pipette.
4. Методика исследования4. Research methodology
1) Готовили субстрат MBP в свежеприготовленном буфере для реакции.1) MBP substrate was prepared in freshly prepared reaction buffer.
2) В данный раствор MBP добавляли киназу ERK2 и осторожно перемешивали.2) ERK2 kinase was added to this MBP solution and mixed gently.
3) В систему для киназной реакции вносили соединения, растворенные в 100% DMSO, по ультразвуковой технологии (Echo550; диапазон: нанолитры), и инкубировали смеси при комнатной температуре в течение 20 минут.3) Compounds dissolved in 100% DMSO were added to the kinase reaction system by ultrasonic technology (Echo550; range: nanoliters) and the mixtures were incubated at room temperature for 20 minutes.
4) В реакционную систему добавляли 33P-АТФ (удельная концентрация: 10 мкКи/мкл) и сразу же запускали реакцию.4) 33 P-ATP (specific concentration: 10 μCi/μl) was added to the reaction system, and the reaction was immediately started.
5) Инкубировали смеси при комнатной температуре в течение 2 часов.5) Incubate mixtures at room temperature for 2 hours.
6) Определяли уровень радиоактивности методом связывания на фильтре.6) Determined the level of radioactivity by the method of binding on the filter.
7) Рассчитывали активность киназы ERK2 как отношение остающейся в исследуемом образце активности киназы к активности киназы в контрольной группе (DMSO). Строили кривые с помощью Prism (программное обеспечение GraphPad) и рассчитывали значения IC50.7) The ERK2 kinase activity was calculated as the ratio of the kinase activity remaining in the test sample to the kinase activity in the control group (DMSO). Curves were built using Prism (GraphPad software) and IC 50 values were calculated.
Результаты исследования представлены в табл. 2.The results of the study are presented in table. 2.
Вывод. Соединения по настоящему изобретению проявляют превосходную активность ингибирования киназы ERK2.Conclusion. The compounds of the present invention exhibit excellent ERK2 kinase inhibitory activity.
Тест-пример 2. Анализ ингибирования пролиферации клеток in vitroTest Example 2 In Vitro Cell Proliferation Inhibition Assay
1. Цель исследования1. Purpose of the study
Измеряли способность соединений ингибировать пролиферацию раковых клеток НТ29.The ability of the compounds to inhibit the proliferation of HT29 cancer cells was measured.
2. Обработка соединений2. Handling connections
Исследуемые соединения растворяли в 100% DMSO, получая 10 мМ маточные растворы.Test compounds were dissolved in 100% DMSO to give 10 mM stock solutions.
3. Методика и стадии исследования3. Methodology and stages of the study
1) Включали УФ-освещение в кабинете биологической безопасности и начинали отсчет 30 минут.1) Turn on the UV light in the biological safety cabinet and start the 30 minute countdown.
2) На водяной бане подогревали среду RPMI 1640 и трипсин при 37°C.2) RPMI 1640 medium and trypsin were heated in a water bath at 37°C.
3) По завершении УФ-облучения открывали кабинет биологической безопасности. Подогретую среду, трипсин и фосфатно-солевой буфер (PBS) и т.д. протирали спиртом и помещали в кабинет биологической безопасности.3) Upon completion of UV irradiation, a biological safety cabinet was opened. Warm medium, trypsin and phosphate buffered saline (PBS), etc. wiped with alcohol and placed in a biological safety cabinet.
4) Извлекали клетки НТ29 из инкубатора и удаляли старую среду в кабинете биологической безопасности. Добавляли 10 мл PBS. Смесь осторожно встряхивали, а затем удаляли PBS.4) Removed HT29 cells from the incubator and removed the old medium in the biological safety cabinet. 10 ml PBS was added. The mixture was gently shaken and then removed with PBS.
5) Добавляли 1,5 мл подогретого 0,25% трипсина. Встряхивали горизонтально сосуд для культивирования с тем, чтобы трипсин равномерно покрывал клетки на дне, и помещали в инкубатор на 2 минуты.5) 1.5 ml warmed 0.25% trypsin was added. The culture vessel was shaken horizontally so that the trypsin evenly covered the cells at the bottom, and placed in the incubator for 2 minutes.
6) Останавливали расщепление клеток добавлением полной среды, пипеткой доводили суспензию клеток до гомогенности и проводили подсчет клеток.6) Cleavage of cells was stopped by adding complete medium, the cell suspension was brought to homogeneity with a pipette, and cells were counted.
7) По результатам подсчета клеток доводили плотность клеточной суспензии до 1500 клеток на лунку и высеивали суспензию клеток по 50 мкл на лунку.7) According to the results of cell counting, the density of the cell suspension was adjusted to 1500 cells per well and the cell suspension was seeded at 50 μl per well.
8) Делали серийные разведения маточных растворов соединений в растворе DMSO и вносили соединения на планшет с помощью Tecan.8) Serial dilutions of stock solutions of compounds were made in DMSO solution and compounds were plated onto the plate with Tecan.
9) Уравновешивали планшет с клетками и добавленными соединениями и CellTiterGlo при комнатной температуре, а затем в каждую лунку добавляли 25 мкл CellTiterGlo. Планшет с клетками встряхивали 1-2 минуты, а затем оставляли на 10 минут. Затем определяли значения сигналов. Данные анализировали с помощью XL-Fit и рассчитывали IC50 для каждого соединения.9) The plate with cells and added compounds and CellTiterGlo was equilibrated at room temperature, and then 25 μl of CellTiterGlo was added to each well. The cell plate was shaken for 1-2 minutes and then left for 10 minutes. Then the signal values were determined. The data was analyzed with XL-Fit and the IC 50 was calculated for each compound.
4. Результаты исследования представлены в табл. 3.4. The results of the study are presented in table. 3.
Вывод. Соединения по настоящему изобретению проявляют превосходную активность ингибирования пролиферации клеток HT29.Conclusion. The compounds of the present invention exhibit excellent activity in inhibiting the proliferation of HT29 cells.
Тест-пример 3. Исследование DMPK in vivoTest Example 3 DMPK in vivo study
Исследование DMPK in vivo на мышах.An in vivo study of DMPK in mice.
1. Цель исследования1. Purpose of the study
Определение концентрации соединений в крови и оценка фармакокинетического поведения после однократного введения, используя самок мышей BALB/c в качестве подопытных животных.Determination of the concentration of compounds in the blood and evaluation of the pharmacokinetic behavior after a single injection, using female BALB/c mice as experimental animals.
2. Процедура исследования2. Research procedure
Отбирали 8 здоровых взрослых самок мышей BALB/c, причем 4 мыши были в группе внутривенного введения и 4 мыши - в группе перорального введения. Носителем в группе внутривенного введения был 5% DMSO + 95% (20% HP-β-CD). Исследуемые соединения смешивали с соответствующим количеством носителя для внутривенной инъекции, обрабатывали на вибромешалке и ультразвуком, получая прозрачный раствор в 0,5 мг/мл. Прозрачный раствор фильтровали через микропористую мембрану и готовили к использованию. Носителем в группе перорального введения был 5% DMSO + 95% (20% HP-β-CD). Исследуемые соединения смешивали с носителем, обрабатывали на вибромешалке и ультразвуком, получая раствор в 0,3 мг/мл. Мышам вводили по 1 мг/кг внутривенно или 3 мг/кг перорально, а затем в течение определенного времени собирали цельную кровь. Выделяли плазму. Концентрацию препаратов анализировали методом LC-MS/MS, а фармакокинетические параметры рассчитывали с помощью программы Phoenix WinNonlin (Pharsight, США).8 healthy adult female BALB/c mice were selected, with 4 mice in the intravenous group and 4 mice in the oral group. The vehicle in the IV group was 5% DMSO + 95% (20% HP-β-CD). Test compounds were mixed with an appropriate amount of vehicle for intravenous injection, vibrated and sonicated to give a clear 0.5 mg/mL solution. The clear solution was filtered through a microporous membrane and prepared for use. The vehicle in the oral administration group was 5% DMSO + 95% (20% HP-β-CD). Test compounds were mixed with vehicle, vibrated and sonicated to give a 0.3 mg/mL solution. Mice were injected with 1 mg/kg intravenously or 3 mg/kg orally, and then whole blood was collected for a certain time. Plasma was isolated. Drug concentrations were analyzed by LC-MS/MS, and pharmacokinetic parameters were calculated using the Phoenix WinNonlin program (Pharsight, USA).
Примечания. DMSO: диметилсульфоксид; HP-β-CD: гидроксипропил-β-циклодекстрин.Notes. DMSO: dimethyl sulfoxide; HP-β-CD: hydroxypropyl-β-cyclodextrin.
3. Результаты исследования представлены в табл. 4.3. The results of the study are presented in table. 4.
Примечания. Cmax - максимальная концентрация; F% - пероральная биодоступность; DNAUC = AUCPO/доза, где AUCPO - AUC при пероральном введении, а доза - доза препарата; Vdss - объем распределения; Cl - скорость клиренса; а T½ - период полувыведения.Notes. C max - maximum concentration; F% - oral bioavailability; DNAUC = AUC PO /dose, where AUC PO is the oral AUC and dose is the dose of the drug; Vd ss - volume of distribution; Cl - clearance rate; and T ½ is the half-life.
Вывод. Соединения по настоящему изобретению проявляют превосходную пероральную экспозицию и биодоступность.Conclusion. The compounds of the present invention exhibit excellent oral exposure and bioavailability.
Тест-пример 4. Анализ эффективности in vivo на модели подкожных ксенотрансплантатов клеток HCT-116 рака толстой кишки человека у мышей BALB/c nudeTest Example 4 In Vivo Efficacy Analysis in BALB/c Nude Mice Human Colon Cancer Subcutaneous Xenograft Model of HCT-116 Cells
1. Цель исследования1. Purpose of the study
Оценка противоопухолевого действия WX007 на модели подкожных ксенотрансплантатов клеток HCT-116 рака толстой кишки человека у мышей nude.Evaluation of the antitumor activity of WX007 in a model of subcutaneous xenografts of human colon cancer HCT-116 cells in nude mice.
2. Животные для исследования2. Animals for research
Вид: мышь; линия: мыши BALB/c nude; возраст: 6-8 недель; пол: самки; вес: 17-23 грамм; поставщик: Отдел содержания лабораторных животных, Шанхайский институт биомедицинских и фармацевтических технологий; сертификат на животных № 20180006020214.Kind: mouse; line: BALB/c nude mice; age: 6-8 weeks; gender: female; weight: 17-23 grams; Supplier: Laboratory Animal Welfare Department, Shanghai Institute of Biomedical and Pharmaceutical Technology; animal certificate no. 20180006020214.
3. Процедура исследования3. Research procedure
1) Клетки и их культивирование. Клетки HCT-116 рака толстой кишки человека культивировали в монослое in vitro. Условия культивирования: среда McCoy's 5a плюс 10% фетальной телячьей сыворотки и инкубатор на 37°C с 5% CO2. Обычно для пересева проводилась обработка клеток трипсином с ЭДТА три раза в неделю. Когда конфлюэнтность клеток достигала 80%-90% и их количество соответствовало потребности, клетки собирали, подсчитывали и высеивали.1) Cells and their cultivation. Human colon cancer HCT-116 cells were cultured in a monolayer in vitro. Culture conditions: McCoy's 5a medium plus 10% fetal calf serum and 37° C. incubator with 5% CO 2 . Cells were usually treated with EDTA trypsin three times a week for subculturing. When the confluence of cells reached 80%-90% and their number corresponded to the requirement, the cells were collected, counted and seeded.
2) Инокуляция опухолевой ткани и разбивка на группы. Инокулировали подкожно по 0,2 мл (5×106) клеток HCT-116 в правую подмышечную ямку каждой мыши. Когда средний объем опухолей достигал 149 мм3, животных случайным образом разбивали на 2 группы и начинали введение. Схема распределения по группам и введения при исследовании представлена в табл. 5.2) Tumor tissue inoculation and grouping. 0.2 ml (5×10 6 ) HCT-116 cells were inoculated subcutaneously into the right axillary fossa of each mouse. When the average tumor volume reached 149 mm 3 , the animals were randomly divided into 2 groups and administration was started. The distribution scheme for groups and administration during the study is presented in table. 5.
3) Ежедневное наблюдение подопытных животных. Разработка данной методики исследования и ее модификаций проводилась с одобрения Институтского комитета по содержанию и использованию животных (IACUC). Использование и благосостояние исследуемых животных контролировалось в соответствии с правилами Ассоциации по оценке и аккредитации лабораторий по содержанию животных (AAALAC). Животных ежедневно обследовали на предмет здоровья и смертности. Плановые обследования включали отслеживание роста опухолей и влияния приема препаратов на повседневное поведение животных типа поведенческой активности, приема пищи и воды (только визуальный осмотр), изменения веса (измеряли вес два раза в неделю), внешних признаков или других аномалий. Отмечали гибель животных и побочные эффекты в каждой группе, исходя из количества животных в каждой группе.3) Daily observation of experimental animals. The development of this research methodology and its modifications was carried out with the approval of the Institute Committee for the Care and Use of Animals (IACUC). The use and welfare of study animals was controlled in accordance with the Association for the Evaluation and Accreditation of Laboratories for Animal Care (AAALAC) regulations. Animals were examined daily for health and mortality. Routine examinations included monitoring the growth of tumors and the effect of drug administration on the daily behavior of animals such as behavioral activity, food and water intake (visual inspection only), weight changes (weight measured twice a week), external signs or other abnormalities. The death of animals and side effects in each group were noted based on the number of animals in each group.
4) Рецептуры исследуемых соединений. Группа носителя: кукурузное масло. Группа исследуемого соединения: делали навеску исследуемого соединения в рецептурном флаконе. Добавляли соответствующий объем кукурузного масла, а затем обрабатывали смесь на вибромешалке до получения прозрачного раствора. Соединения готовили раз в неделю.4) Formulations of the studied compounds. Carrier group: corn oil. Study Compound Group: Weighed the study compound in a prescription vial. An appropriate volume of corn oil was added and then the mixture was vibrated until a clear solution was obtained. Compounds were prepared once a week.
5) Измерение опухолей и показателей при исследовании. a) Измеряли диаметр опухолей два раза в неделю с помощью штангенциркуля. Рассчитывали объем опухолей по формуле: TV=1/2×a×b2, где a и b -длинный и короткий диаметр опухоли, соответственно. b) Определяли эффективность ингибирования опухолей соединениями по TGI (%). TGI (%) отражает степень ингибирования роста опухоли. TGI (%) рассчитывали следующим образом: TGI (%) = {[1 - (средний объем опухолей под конец введения в опытной группе - средний объем опухолей в начале введения в той же опытной группе)]/(средний объем опухолей под конец обработки в контрольной группе растворителя - средний объем опухолей в начале обработки в контрольной группе растворителя)}×100%.5) Measurement of tumors and indicators in the study. a) The diameter of the tumors was measured twice a week with a caliper. The volume of tumors was calculated by the formula: TV=1/2×a×b 2 where a and b are the long and short diameters of the tumor, respectively. b) The tumor inhibition efficacy of the compounds was determined by TGI (%). TGI (%) reflects the degree of tumor growth inhibition. TGI (%) was calculated as follows: TGI (%) = {[1 - (average volume of tumors at the end of treatment in the treatment group - average volume of tumors at the beginning of treatment in the same treatment group)]/(average volume of tumors at the end of treatment in the solvent control group - average volume of tumors at the beginning of treatment in the solvent control group)} × 100%.
4. Результаты исследования4. Research results
1) Как видно из табл. 6 и фиг. 1, на модели подкожных ксенотрансплантатов клеток HCT-116 рака толстой кишки человека у мышей nude, при пероральном введении до 18-го дня, WX007 в дозе 15 мг/кг оказывал значительное ингибирующее действие на рост опухолей со значением TGI = 62%.1) As can be seen from Table. 6 and FIG. 1, in a subcutaneous xenograft model of human colon cancer HCT-116 cells in nude mice, when administered orally up to day 18, WX007 at a dose of 15 mg/kg had a significant inhibitory effect on tumor growth with a TGI value of 62%.
2) В качестве показателя для косвенного определения токсичности препарата использовали вес тела исследуемых животных. Как видно из фиг. 2, при введении до 18-го дня, у всех животных в контрольной группе растворителя и в группе WX007 при 15 мг/кг не было существенного снижения веса тела и не отмечалось болезненности или смертности.2) As an indicator for indirect determination of the toxicity of the drug, the body weight of the studied animals was used. As can be seen from FIG. 2, when administered before day 18, all animals in the vehicle control group and in the WX007 group at 15 mg/kg had no significant reduction in body weight and no morbidity or mortality was noted.
Заключение. Соединения по настоящему изобретению могут значительно ингибировать рост опухолей. При введении не наблюдается существенного снижения веса тела животных, и переносимость хорошая.Conclusion. The compounds of the present invention can significantly inhibit the growth of tumors. When administered, no significant reduction in body weight of the animals is observed, and the tolerability is good.
Claims (48)
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911244788.X | 2019-12-06 | ||
| CN201911257998.2 | 2019-12-10 | ||
| CN202010106897.1 | 2020-02-20 | ||
| CN202011068937.4 | 2020-09-30 | ||
| CN202011410488.7 | 2020-12-03 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2800042C1 true RU2800042C1 (en) | 2023-07-17 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2525389C2 (en) * | 2008-02-21 | 2014-08-10 | Мерк Шарп И Доум Корп. | Compounds which are erk inhibitors |
| CN107074874A (en) * | 2014-12-22 | 2017-08-18 | 伊莱利利公司 | Erk inhibitor |
| CN107108648A (en) * | 2014-12-22 | 2017-08-29 | 伊莱利利公司 | It is used as the ketone derivatives of thieno [2,3 c] pyrroles 4 of ERK inhibitor |
| WO2019223632A1 (en) * | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Js Innomed Holdings Ltd. | Heterocyclic compounds as kinase inhibitors, compositions comprising the heterocyclic compound, and methods of use thereof |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2525389C2 (en) * | 2008-02-21 | 2014-08-10 | Мерк Шарп И Доум Корп. | Compounds which are erk inhibitors |
| CN107074874A (en) * | 2014-12-22 | 2017-08-18 | 伊莱利利公司 | Erk inhibitor |
| CN107108648A (en) * | 2014-12-22 | 2017-08-29 | 伊莱利利公司 | It is used as the ketone derivatives of thieno [2,3 c] pyrroles 4 of ERK inhibitor |
| WO2019223632A1 (en) * | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Js Innomed Holdings Ltd. | Heterocyclic compounds as kinase inhibitors, compositions comprising the heterocyclic compound, and methods of use thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11059805B2 (en) | Alkynyl-substituted heterocyclic compound, preparation method therefor and medical use thereof | |
| CN114761411B (en) | Spiro compounds as ERK inhibitors and application thereof | |
| JP2021075543A (en) | Compositions and methods for inhibiting arginase activity | |
| TW200806664A (en) | Azaindoles useful as inhibitors of janus kinases | |
| JP7088906B2 (en) | FGFR4 inhibitor and its production method and use | |
| TW201034690A (en) | Technetium-and rhenium-bis (heteroaryl) complexes and methods of use thereof for inhibiting PSMA | |
| JP7409719B2 (en) | Thiazololactam compounds and their use as ERK inhibitors | |
| US20200140419A1 (en) | Indazole compound for use in inhibiting kinase activity, composition and application thereof | |
| WO2021098859A1 (en) | Aza seven-membered ring inhibitor, and preparation method therefor and use thereof | |
| EP4087570A1 (en) | Methods of treating erythropoietic protoporphyria, x-linked protoporphyria, or congenital erythropoietic porphyria with glycine transport inhibitors | |
| ES2529295T3 (en) | Anvenous crystalline form of orvepitant maleate | |
| JP7311207B2 (en) | Pyrrolotriazine compounds as MNK inhibitors | |
| SA08280759B1 (en) | Compounds of Cannabinoid-CB1 Antagonists and Structural Components of the Serotonin Reuptake Inhibitors Indalpine or Fluvoxamine | |
| RU2800042C1 (en) | Spiro compounds as erk inhibitors and their use | |
| JP2015529660A (en) | Novel compounds and their use | |
| CN114805331B (en) | N-linked heteroaromatic compounds | |
| JP2021528368A (en) | Inhibitor of RAS neoplastic protein, its preparation method and its usage method | |
| JP2021501778A (en) | Pyridopyrimidine compounds as mTORC1 / 2 double inhibitors | |
| RU2805569C1 (en) | Thiazolactam compounds as erk inhibitors and their applications | |
| TWI825811B (en) | Thiazololactam-spiroheterocyclic compound and application thereof | |
| CN115551842B (en) | Biphenyl compounds | |
| JPH0789920A (en) | New compound | |
| WO2023224128A1 (en) | Pharmaceutical composition for treating or preventing fibrosis | |
| KR20240024961A (en) | Dimethyl-substituted thiazololactam compounds and uses thereof | |
| JP2024509265A (en) | Compositions and methods for treating polycythemia |