RU2798872C9 - Strain lactobacillus gasseri kbl697 and its use - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention relates to a strain of Lactobacillus gasseri KBL697 and its use. A strain of Lactobacillus gasseri KBL697 identification number KCTC 13520BP for the alleviation, prevention or treatment of allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, intestinal diseases, and Malassezia spp infection is proposed. Also compositions containing the specified strain or a culture of the specified strain, methods of treatment using the specified strain and the use of the composition for treatment of allergic disease, an inflammatory disease, an autoimmune disease, an intestinal disease are proposed. Also, the said strain is used as an external skin treatment against Malassezia spp. infection, as well as in a cosmetic composition and patch for alleviating, preventing or treating atopic dermatitis.

EFFECT: invention can be effectively used in the prevention and treatment of allergic diseases, inflammatory diseases, autoimmune diseases, intestinal diseases, as well as Malassezia spp. infection.

33 cl, 18 dwg, 4 tbl, 9 ex

Description

Область техникиTechnical field

[1] Настоящее изобретение относится к штамму Lactobacillus gasseri KBL697 и к его применению. Конкретнее, настоящее изобретение относится к функциональной оздоровительной пищевой композиции, обладающей по меньшей мере одним эффектом, выбранным из группы, состоящей из смягчения симптомов аллергии, смягчения симптомов воспаления, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции; противогрибковой композиции; и фармацевтической композиции для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из нового пробиотического штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[1] The present invention relates to the Lactobacillus gasseri strain KBL697 and its use. More specifically, the present invention relates to a functional health food composition having at least one effect selected from the group consisting of allergy alleviation, inflammation alleviation, gut health improvement and immunoregulation; antifungal composition; and a pharmaceutical composition for the treatment of at least one disease selected from the group consisting of allergic diseases, inflammatory diseases, intestinal diseases and autoimmune diseases, containing at least one component selected from the group consisting of a new probiotic strain of Lactobacillus gasseri KBL697, cultures the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[2] [2]

Уровень техникиState of the art

[3] Пробиотики относятся к микроорганизмам и полученным из них продуктам, обладающим антимикробной активностью и ферментативной активностью, помогающими соблюдать равновесие микроорганизмов кишечника. Кроме того, пробиотики по определению представляют собой живые бактерии в виде одного или нескольких штаммов, улучшающих кишечную микрофлору при введении человеку или животным в виде сухих клеток или продуктов ферментации. Пробиотики должны населять кишечник человека, являться непатогенными и нетоксичными и выживать в течение достаточно продолжительного времени до поступления в кишечник. Кроме того, пробиотики должны поддерживать жизнеспособность и активность до потребления с продуктами питания, являться чувствительными к антибиотикам, используемым для профилактики инфекций, а также не содержат плазмид устойчивости к антибиотикам. Кроме того, пробиотики должны быть устойчивы к кислотам, ферментам и желчи в среде, присутствующей в кишечнике.[3] Probiotics refer to microorganisms and products derived from them that have antimicrobial activity and enzymatic activity that help maintain the balance of intestinal microorganisms. In addition, probiotics, by definition, are live bacteria in the form of one or more strains that improve intestinal microflora when administered to humans or animals in the form of dried cells or fermentation products. Probiotics must inhabit the human intestine, be non-pathogenic and non-toxic, and survive for a sufficiently long time before entering the intestine. In addition, probiotics must maintain viability and activity prior to consumption in food, be sensitive to antibiotics used to prevent infections, and do not contain antibiotic resistance plasmids. In addition, probiotics must be resistant to acids, enzymes and bile in the environment present in the intestines.

[4] Такие пробиотики могут включать, например, Bacillus sp., обладающие замечательной способностью продуцировать гидролизующие ферменты, например, амилазу, протеазу, липазу, целлюлазу и фосфатазу, Lactobacillus sp., продуцирующие молочную кислоту, и фотосинтезирующие бактерии, предотвращающие появление неприятного запаха за счет использования неприятно пахнущих веществ (например, аммиака, сероводорода и аминов), присутствующих в фекалиях скота, в процессах метаболизма. Согласно недавнему сообщению, пробиотики обладают различными эффектами, улучшающими функции организма, включая улучшение состояния кишечника, и поэтому активно рассматриваются в качестве основных терапевтических веществ, которые могут заменять существующие терапевтические агенты на основе соединений.[4] Such probiotics may include, for example, Bacillus sp., which has the remarkable ability to produce hydrolyzing enzymes, such as amylase, protease, lipase, cellulase and phosphatase, Lactobacillus sp., which produce lactic acid, and photosynthetic bacteria, which prevent the appearance of unpleasant odor for through the use of foul-smelling substances (for example, ammonia, hydrogen sulfide and amines) present in livestock feces in metabolic processes. According to a recent report, probiotics have various effects that improve body function, including improving gut health, and are therefore being actively considered as primary therapeutic agents that can replace existing compound-based therapeutic agents.

[5] [5]

[6] Аллергия является биохимическим явлением, характеризующимся уникальным искаженным ответом на чужеродное вещество (антиген, аллерген). Чужеродное вещество, вызывающее симптомы, называют аллергеном, а заболевания, при которых развиваются эти симптомы, называют аллергическими заболеваниями. Аллергия представляет собой патологический процесс в живом организме, причиной которого является реакция «антиген-антитело». В целом существует четыре типа аллергии в зависимости от периода времени, в течение которого возникает реакция, и вовлеченности комплемента. Аллергия 1 типа представляет собой реакцию анафилактического (немедленного) типа, при которой органами-мишенями в основном являются органы пищеварительной системы, кожа и легкие, а распространенные симптомы включают желудочно-кишечную аллергию, крапивницу, атрофический дерматит, аллергический ринит, бронхиальную астму и т.д. Известно, что патологические механизмы аллергии 1 типа развиваются следующим образом: при контакте антигенов с антителами IgE, присоединенными к поверхности тучных клеток и базофилов, клетки-мишени активируются и секретируют химические медиаторы, например, гистамин, лейкотриены и PAF с последующим сокращением кровеносных сосудов и гладких мышц. Такой механизм часто может наблюдаться в комбинации с аллергией 4 (замедленного) типа. Другими словами, такая анафилактическая и аллергическая реакция может возникать вследствие различных изменений в тучных клетках и т.д. Активация тучных клеток, ведущая к их дегрануляции, обусловлена связыванием антигена, антитела против IgE, лектина и т.д. с Fc-рецепторами, стимуляцией посредством анафилотоксина и т.д. или других лекарственных средств, например, кальциевого ионофора, соединения 48/80, кодеина и синтетического адренокортикотропина.[6] Allergy is a biochemical phenomenon characterized by a unique distorted response to a foreign substance (antigen, allergen). The foreign substance that causes symptoms is called an allergen, and the diseases that cause these symptoms are called allergic diseases. Allergy is a pathological process in a living organism, the cause of which is the antigen-antibody reaction. In general, there are four types of allergies, depending on the time period over which the reaction occurs and the complement involved. Type 1 allergy is an anaphylactic (immediate) type reaction in which the target organs are mainly the digestive system, skin and lungs, and common symptoms include gastrointestinal allergies, urticaria, atrophic dermatitis, allergic rhinitis, bronchial asthma, etc. d. It is known that the pathological mechanisms of type 1 allergy develop as follows: upon contact of antigens with IgE antibodies attached to the surface of mast cells and basophils, the target cells are activated and secrete chemical mediators, for example, histamine, leukotrienes and PAF, with subsequent contraction of blood vessels and smooth tissues. muscles. This mechanism can often be observed in combination with type 4 (delayed) allergies. In other words, this anaphylactic and allergic reaction may occur due to various changes in mast cells, etc. Activation of mast cells leading to their degranulation is due to the binding of antigen, anti-IgE antibody, lectin, etc. with Fc receptors, stimulation via anaphylotoxin, etc. or other drugs, for example, calcium ionophore, compound 48/80, codeine and synthetic adrenocorticotropin.

[7] Известно, что тучные клетки и базофилы крови являются основным клетками организма, вызывающими различные аллергические заболевания, например, аллергический ринит, аллергический дерматит, астму, пищевую аллергию и анафилактический шок. Эти клетки содержат на своей поверхности рецепторы (FcRI) для IgE, которые представляют собой антитела, вызывающие аллергию; данные клетки стимулируются веществами, вызывающими аллергию (антигенами, аллергенами и секретируют собственные вещества, вызывающие аллергию (Kim K et al., Eur J Pharmacol, 581:191-203, 2008).[7] It is known that mast cells and basophils in the blood are the main cells of the body that cause various allergic diseases, such as allergic rhinitis, allergic dermatitis, asthma, food allergies and anaphylactic shock. These cells contain receptors (FcRI) on their surface for IgE, which are antibodies that cause allergies; these cells are stimulated by substances that cause allergies (antigens, allergens) and secrete their own substances that cause allergies (Kim K et al., Eur J Pharmacol, 581:191-203, 2008).

[8] Среди аллергических заболеваний широко известен атопический дерматит, представляющий собой хроническое рецидивирующее кожное заболевание, которое возникает у новорожденных или детей и может сохраняться до зрелого возраста. Как и астма или аллергический ринит, атопический дерматит представляет собой воспалительное заболевание кожи, ассоциированное с местной инфильтрацией Т-лимфоцитов, продуцирующих ИЛ-4 и ИЛ-5. ИЛ-4, как хорошо известно, контролирует развитие T-хелперов 2 фенотипа (Th2), что приводит к избыточной продукции иммуноглобулинов (Ig) и эозинофилии, а также увеличению уровня IgE в сыворотке. Атопический дерматит обнаруживается у 80-90% субъектов с положительными результатами кожной пробы на пищевые и ингаляционные аллергены.[8] Among allergic diseases, atopic dermatitis is a well-known chronic, relapsing skin disease that occurs in newborns or children and can persist into adulthood. Like asthma or allergic rhinitis, atopic dermatitis is an inflammatory skin disease associated with local infiltration of T lymphocytes producing IL-4 and IL-5. IL-4 is well known to control the development of T helper 2 (Th2) phenotype, leading to excess immunoglobulin (Ig) production and eosinophilia, as well as increased serum IgE levels. Atopic dermatitis is found in 80-90% of subjects with positive skin tests for food and inhalant allergens.

[9] Существуют различные средства для лечения или профилактики аллергических заболеваний и атопического дерматита, однако эффективный способ лечения пока не найден. Известны некоторые варианты медикаментозной терапии, однако даже кратковременное применение лекарственного средства может привести к развитию устойчивости, а долговременное применение может вызвать серьезные побочные эффекты, и поэтому в последнее время таких вариантов медикаментозной терапии аллергических заболеваний и атопического дерматита избегают. В данных обстоятельствах при отсутствии вариантов лечения, обеспечивающих абсолютный очевидный эффект, попытки улучшения симптомов раздражения, например, зуда и гиперемии при аллергии часто не дают эффекта.[9] There are various drugs for the treatment or prevention of allergic diseases and atopic dermatitis, but an effective treatment has not yet been found. Some drug therapy options are known, but even short-term use of the drug can lead to the development of resistance, and long-term use can cause serious side effects, and therefore such drug therapy options for allergic diseases and atopic dermatitis have recently been avoided. In these circumstances, in the absence of treatment options that provide absolute demonstrable effect, attempts to improve symptoms of irritation, such as itching and hyperemia in allergies, often do not work.

[10] [10]

[11] При этом синдром раздраженного кишечника (IBS) представляет собой симптом, характеризующийся болью в брюшной полости и/или раздражением, ассоциированным с изменениями перистальтики кишечника или стула, причем такие симптомы невозможно объяснить анатомическими или биохимическими патологиями. Распространенные симптомы IBS также включают императивные позывы к мочеиспусканию, вздутие живота и чувство неполной дефекации. Соответственно, IBS можно классифицировать как функциональные желудочно-кишечные расстройства, включающие такие состояния, как функциональное вздутие живота, некардиогенную боль в грудной клетке, неязвенную диспепсию и хронический запор или диарею. В частности, поскольку связанные с IBS симптомы влияют как на самочувствие, так и на функциональные аспекты состояния пациентов, данное заболевание оказывает выраженное воздействие на заболеваемость и качество жизни, даже не учитывая боли и дискомфорт в брюшной полости.[11] Irritable bowel syndrome (IBS) is a symptom characterized by abdominal pain and/or irritation associated with changes in intestinal or stool motility, and such symptoms cannot be explained by anatomical or biochemical pathologies. Common symptoms of IBS also include urinary urgency, bloating, and a feeling of incomplete bowel movements. Accordingly, IBS can be classified as functional gastrointestinal disorders, including conditions such as functional bloating, noncardiogenic chest pain, nonulcer dyspepsia, and chronic constipation or diarrhea. In particular, because IBS-related symptoms affect both well-being and functional aspects of patients, the disease has a profound impact on morbidity and quality of life, even without considering abdominal pain and discomfort.

[12] Воспалительное заболевание кишечника (IBD) - это состояние, при котором развивается и рецидивирует хроническое воспаление в кишечнике, включающее все воспалительные кишечные заболевания, например, болезнь Крона, язвенный колит или болезнь Бехчета, но не ограничивается указанными. Многие исследователи работают в области разработки лекарственных средств для лечения IBS и IBD. В связи с этим широко используются различные антидепрессанты, несмотря на то, что их эффективность в клинических исследованиях является умеренной, а клиническая применимость - ограниченной вследствие значительных побочных эффектов. Кроме того, показано, что серотогенные лекарственные средства эффективно купируют общие симптомы IBS. Однако применение этих лекарственных средств ограничивается различным образом ввиду некоторых проблем с их безопасностью. Соответственно, имеет место растущий интерес к разработке нового терапевтического агента для лечения IBS.[12] Inflammatory bowel disease (IBD) is a condition in which chronic inflammation develops and recurs in the intestines, including, but not limited to, all inflammatory bowel diseases, such as Crohn's disease, ulcerative colitis, or Behçet's disease. Many researchers are working in the field of developing drugs to treat IBS and IBD. Therefore, various antidepressants are widely used, although their effectiveness in clinical trials is moderate and their clinical applicability is limited due to significant side effects. In addition, serotogenic drugs have been shown to be effective in relieving common symptoms of IBS. However, the use of these drugs is limited in various ways due to several safety concerns. Accordingly, there is growing interest in developing a new therapeutic agent for the treatment of IBS.

[13] В заявках WO 96/29083 и EP 554418 описаны два типа штаммов Lactobacillus, образующие колонии в кишечнике, т.е. Lactobacillus plantarum 299v (DSM 6595) и Lactobacillus casei ssp. rhamnosus 271 (DSM 6594), и т.д. В заявке EP 415941 описан способ получения композиции питательных веществ, включающий обработку овсяной каши ферментами с последующим смешиванием с лактобациллами. В патенте США № 7195906 описан штамм Bifidobacterium, выделенный из удаленного при резекции и промытого желудочно-кишечного тракта человека, для лечения воспалительных заболеваний, особенно воспалительной активности в желудочно-кишечном тракте, например, IBD и IBS.[13] Applications WO 96/29083 and EP 554418 describe two types of Lactobacillus strains that form colonies in the intestines, i.e. Lactobacillus plantarum 299v (DSM 6595) and Lactobacillus casei ssp. rhamnosus 271 (DSM 6594), etc. Application EP 415941 describes a method for preparing a nutrient composition comprising treating oatmeal with enzymes and then mixing it with lactobacilli. US Pat. No. 7,195,906 describes a strain of Bifidobacterium isolated from resected and washed human gastrointestinal tracts for the treatment of inflammatory diseases, especially inflammatory activity in the gastrointestinal tract, such as IBD and IBS.

[14] Однако до сих пор не найдено ни одного штамма, обладающего исключительными свойствами в отношении улучшения состояния кишечника, например, лечения IBD и IBS, и над поиском штаммов с такими свойствами работают многие исследовательские учреждения.[14] However, no strain has yet been found that has exceptional properties in improving gut health, such as treating IBD and IBS, and many research institutions are working to find strains with such properties.

[15] [15]

[16] В данных обстоятельствах авторы настоящего изобретения сосредоточились на исследованиях пробиотиков с целью поиска способа замены терапевтических средств на основе лекарственных веществ для лечения аллергических заболеваний (в том числе атопического дерматита) для которых отсутствуют удовлетворительные способы лечения. Таким образом, настоящее изобретение выполнено посредством подтверждения того, что новый штамм Lactobacillus gasseri демонстрировал исключительное терапевтическое действие по отношению к аллергическим заболеваниям, например, атопическому дерматиту, а также подтверждения того, что указанный штамм также демонстрировал превосходное действие в отношении противогрибковой активности, состояния кишечника, иммунорегуляции и подавления воспаления.[16] Under these circumstances, the inventors of the present invention focused on research on probiotics to find a way to replace drug-based therapeutics for the treatment of allergic diseases (including atopic dermatitis) for which there are no satisfactory treatments. Thus, the present invention is accomplished by confirming that the new strain of Lactobacillus gasseri exhibited excellent therapeutic effects against allergic diseases such as atopic dermatitis, and also confirming that the said strain also exhibited excellent effects regarding antifungal activity, intestinal health, immunoregulation and suppression of inflammation.

[17] [17]

[18] Краткое описание изобретения[18] Brief description of the invention

[19] Цель настоящего изобретения - предложить новый штамм, демонстрирующий исключительное действие в отношении смягчения симптомов аллергии, например, атопического дерматита, смягчения симптомов воспаления, противогрибковой активности, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции, а также ряд вариантов его применения.[19] The purpose of the present invention is to provide a new strain exhibiting exceptional effects in alleviating allergy symptoms, such as atopic dermatitis, alleviating inflammatory symptoms, antifungal activity, improving gut health and immunoregulation, as well as a number of options for its use.

[20] Для достижения этой цели в настоящем изобретении предложен штамм Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP).[20] To achieve this object, the present invention provides a strain of Lactobacillus gasseri KBL697 (ID No. KCTC 13520BP).

[21] Кроме того, в настоящем изобретении предложена пищевая композиция или композиция пищевой добавки, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[21] In addition, the present invention provides a food composition or food additive composition containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[22] В настоящем изобретении предложена кормовая композиция или композиция кормовой добавки, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[22] The present invention provides a feed composition or feed additive composition containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[23] Кроме того, в настоящем изобретении предложена противогрибковая композиция, например, композиция для лечения перхоти, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[23] In addition, the present invention provides an antifungal composition, for example, a composition for the treatment of dandruff, containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[24] Кроме того, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[24] In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment of allergic diseases, for example, atopic dermatitis, inflammatory diseases, intestinal diseases and/or autoimmune diseases, containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[25] Кроме того, в настоящем изобретении предложен способ лечения аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, в организм субъекта, нуждающегося в этом.[25] In addition, the present invention provides a method for treating allergic diseases, including atopic dermatitis, inflammatory diseases, intestinal diseases and/or autoimmune diseases, comprising administering at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain, into the body of a subject in need thereof.

[26] Кроме того, в настоящем изобретении предложена композиция, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, для применения при профилактике или лечении аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний.[26] In addition, the present invention provides a composition containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain, for use in the prevention or treatment of allergic diseases, in including atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases and/or autoimmune diseases.

[27] Кроме того, в настоящем изобретении предложено применение композиции для получения лекарственного средства для профилактики или лечения аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[27] In addition, the present invention proposes the use of a composition for the preparation of a medicinal product for the prevention or treatment of allergic diseases, including atopic dermatitis, inflammatory diseases, intestinal diseases and/or autoimmune diseases, containing at least one component selected from the group , consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[28] Кроме того, в настоящем изобретении предложена косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[28] In addition, the present invention provides a cosmetic composition containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[29] Кроме того, в настоящем изобретении предложен косметический пластырь или медицинский пластырь, содержащий по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[29] In addition, the present invention provides a cosmetic patch or medical patch containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[30][thirty]

Краткое описание чертежейBrief description of drawings

[31] На фиг. 1 показан результат, подтверждающий эффект ингибирования экспрессии ИЛ-4 за счет различных штаммов Lactobacillus, в том числе штамма Lactobacillus gasseri KBL697, после индукции аллергической реакции в линиях клеток EL4.[31] In FIG. 1 shows the result confirming the effect of inhibiting IL-4 expression by various Lactobacillus strains, including Lactobacillus gasseri strain KBL697, after inducing an allergic response in EL4 cell lines.

[32] На фиг. 2 показан результат, подтверждающий эффект ингибирования экспрессии ИЛ-5 за счет различных штаммов Lactobacillus, в том числе штамма Lactobacillus gasseri KBL697, после индукции аллергической реакции в линиях клеток EL4.[32] In FIG. 2 shows the result confirming the effect of inhibiting IL-5 expression by various Lactobacillus strains, including Lactobacillus gasseri strain KBL697, after inducing an allergic response in EL4 cell lines.

[33] На фиг. 3 показан результат, подтверждающий эффект ингибирования секреции гистамина при обработке различными штаммами Lactobacillus gasseri и антигистаминным агентом кетотифеном после индукции продукции гистамина реакцией антиген-антитело в линиях клеток RBL 2H3.[33] In FIG. 3 shows the result confirming the histamine secretion inhibition effect of treatment with various strains of Lactobacillus gasseri and the antihistamine agent ketotifen after induction of histamine production by antigen-antibody reaction in RBL 2H3 cell lines.

[34] На фиг. 4 показан результат наблюдения значимого количественного увеличения секреции противовоспалительного иммунорегуляторного цитокина ИЛ-10 посредством обработки штаммом KBL697 при обработке штаммами Lactobacillus gasseri после индукции воспалительной реакции в линиях клеток RAW 264.7.[34] In FIG. 4 shows the result of observing a significant quantitative increase in the secretion of the anti-inflammatory immunoregulatory cytokine IL-10 by treatment with strain KBL697 when treated with Lactobacillus gasseri strains after induction of an inflammatory response in RAW 264.7 cell lines.

[35] На фиг. 5 показан результат, подтверждающий значимое иммунорегуляторное и противовоспалительное действие обработки штаммом KBL697 с учетом значения ИЛ-10/ФНО-α при обработке Lactobacillus gasseri после индукции воспалительной реакции в линиях клеток RAW 264.7.[35] In FIG. Figure 5 shows the result confirming the significant immunoregulatory and anti-inflammatory effect of treatment with strain KBL697, taking into account the value of IL-10/TNF-α when treated with Lactobacillus gasseri after induction of an inflammatory response in RAW 264.7 cell lines.

[36] На фиг. 6 показан результат, подтверждающий значимое иммунорегуляторное и противовоспалительное действие обработки штаммом KBL697 с учетом значения ИЛ-10/ИЛ-6 при обработке различными штаммами Lactobacillus gasseri после индукции воспалительной реакции в линиях клеток RAW 264.7.[36] In FIG. Figure 6 shows the result confirming the significant immunoregulatory and anti-inflammatory effect of treatment with strain KBL697, taking into account the value of IL-10/IL-6 when treated with various strains of Lactobacillus gasseri after induction of an inflammatory response in RAW 264.7 cell lines.

[37] На фиг. 7 показан результат капельного анализа, подтверждающий противогрибковую активность штамма Lactobacillus gasseri KBL697.[37] In FIG. Figure 7 shows the result of a spot test confirming the antifungal activity of the Lactobacillus gasseri strain KBL697.

[38] На фиг. 8 показан результат, подтверждающий эффект снижения балльного показателя дерматита при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.[38] In FIG. 8 shows the result confirming the effect of reducing the dermatitis score upon oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to the mouse model of induced atopic dermatitis.

[39] На фиг. 9 показан результат, подтверждающий эффект смягчения зуда при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.[39] In FIG. 9 shows the result confirming the itching alleviation effect of oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to a mouse model of induced atopic dermatitis.

[40] На фиг. 10 показан результат, подтверждающий эффекты уменьшения толщины уха при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.[40] In FIG. 10 shows the result confirming the effects of reducing ear thickness upon oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to a mouse model of induced atopic dermatitis.

[41] На фиг. 11 показан результат, подтверждающий эффект уменьшения толщины кожи при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.[41] In FIG. 11 shows the result confirming the effect of reducing skin thickness upon oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to a mouse model of induced atopic dermatitis.

[42] На фиг. 12 показан результат, подтверждающий эффекты уменьшения концентрация IgE в крови при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 модели мыши с индуцированным атопическим дерматитом.[42] In FIG. 12 shows the result confirming the effects of reducing the concentration of IgE in the blood upon oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to a mouse model with induced atopic dermatitis.

[43] На фиг. 13 показан результат анализа TEER, подтверждающий эффект укрепления плотных контактов за счет штамма Lactobacillus gasseri KBL697.[43] In FIG. 13 shows the result of TEER analysis confirming the tight junction strengthening effect of Lactobacillus gasseri strain KBL697.

[44] На фиг. 14 показан результат наблюдения эффекта восстановления массы тела при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 в количестве 1 × 10⁹ КОЕ модели мыши с индуцированным колитом.[44] In FIG. Figure 14 shows the result of observing the effect of body weight restoration upon oral administration of the Lactobacillus gasseri strain KBL697 in an amount of 1 × 10 ⁹ CFU to a mouse model with induced colitis.

[45] На фиг. 15 показан результат наблюдения эффект восстановления длины толстого кишечника при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 моделям мыши с индуцированным колитом.[45] In FIG. 15 shows the result of observing the effect of restoration of colon length upon oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to mouse models with induced colitis.

[46] На фиг. 16 показан результат наблюдения эффекта смягчения симптомов PASI (индекса площади, пораженной псориазом, и его тяжести) и отека при пероральном введении штамма Lactobacillus gasseri KBL697 моделям мыши с индуцированным псориазом.[46] In FIG. 16 shows the result of observing the effect of alleviating PASI (psoriasis area and severity index) symptoms and edema upon oral administration of Lactobacillus gasseri strain KBL697 to psoriasis-induced mouse models.

[47] На фиг. 17 показан результат определения эффекта уменьшения уровня воспалительных цитокинов (ФНО-α, ИФН-γ, ИЛ-17) за счет штамма Lactobacillus gasseri KBL697 у моделей мыши с индуцированным псориазом.[47] In FIG. Figure 17 shows the result of determining the effect of reducing the level of inflammatory cytokines (TNF-α, IFN-γ, IL-17) due to the Lactobacillus gasseri KBL697 strain in mouse models with induced psoriasis.

[48] На фиг. 18 показан результат сравнения эффекта восстановления массы тела и длины толстого кишечника за счет штамма Lactobacillus gasseri KBL697 и инфликсимаба у моделей мыши с индуцированным колитом.[48] In FIG. 18 shows the result of a comparison of the effect of restoring body weight and colon length by Lactobacillus gasseri strain KBL697 and infliximab in mouse models of induced colitis.

[49] [49]

[50] Оптимальный способ выполнения изобретения[50] Optimal method for carrying out the invention

[51] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящей заявке, имеют значение, совпадающее с общепринятым среди специалистов в данной области техники. В целом номенклатура, используемая в настоящей заявке, хорошо известна и широко используется в данной области техники.[51] Unless otherwise specified, all technical and scientific terms used in this application have the meaning commonly accepted by those skilled in the art. In general, the nomenclature used in this application is well known and widely used in the art.

[52][52]

[53] Настоящее изобретение позволило обнаружить противоаллергическое действие микроорганизмов, полученных из организма человека, причем выбранный штамм Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP) обладает исключительным действием в отношении подавления аллергии. Анализ 16S рДНК указанного штамма демонстрирует, что указанный штамм является новым штаммом, который никогда не был известен общественности.[53] The present invention has revealed the antiallergic effect of microorganisms obtained from the human body, and the selected strain of Lactobacillus gasseri KBL697 (identification number KCTC 13520BP) has an exceptional effect in suppressing allergies. Analysis of the 16S rDNA of the said strain demonstrates that the said strain is a new strain that has never been known to the public.

[54] [54]

[55] Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к новому пробиотическому штамму Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP), и указанный штамм характеризуется наличием последовательности 16S рДНК SEQ ID NO: 1.[55] According to one embodiment of the present invention, the present invention relates to a new probiotic strain of Lactobacillus gasseri KBL697 (ID No. KCTC 13520BP), and the said strain is characterized by the presence of the 16S rDNA sequence SEQ ID NO: 1.

[56] <SEQ ID NO: 1> Последовательность 16S рДНК штамма Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP)[56] <SEQ ID NO: 1> 16S rDNA sequence of Lactobacillus gasseri strain KBL697 (KCTC ID number 13520BP)

[57] [57]

GGCAAGTGGGCGGCGTGCTATACATGCAGTCGAGCGAGCTTGCCTAGATGAATTTGGTGCTTGCACCAAATGAAACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAACAACACTAGACGCATGTCTAGAGTTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTGGATGGACCTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTAAGGCAACGGCTTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAGATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATTACTTAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAACCTAAGAGATTAGGAGTTCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGAAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGCAAGCGGATCTCTGAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTCAGCCGTCTAAGTAGACAGATGTTAGGCAAGTGGGCGGCGTGCTATACATGCAGTCGAGCGAGCTTGCCTAGATGAATTTGGTGCTTGCACCAAATGAAACTAGATACAAGCGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCAAGAGACTGGGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGGATAACAACACTAGACGCATGTCTAGAGTTTAAAAGATGGTTCTGCTATCACTCTTGGATGGACCTGCGGTGCATTAG CTAGTTGGTAAGGCAACGGCTTACCAAGGCAATGATGCATAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAGCTCTGTTGGTAGTGAAGAAAGATAGAGGTAGTAACTGGCCTTTATTTGACGGTAATTACT TAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGTGCAGGCGGTTCAATAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGGAGAATTGCATCAGAAACTGTTGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGC GGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGGAGGTTTCCGCCTCTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGA AGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCAGTGCAAACCTAAGAGATTAGGAGTTCCCTTCGGGGACGCTGAGACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCATTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAATGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGAAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGAC CTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGAAGCGAACCTGCGAAGGCAAGCGGATCTCTGAAAGCCGTTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTCTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGATAACCTTTATAGGAGTC AGCCGTCTAAGTAGACAGATGTTA

[58] Таким образом, при разработке настоящего изобретения выполнены эксперименты касательно эффективности указанного штамма, подтвердившие, что указанный штамм обладает исключительным действием в отношении подавления аллергических расстройств, например, атопического дерматита, смягчает воспалительную реакцию и обладает противогрибковой свойствами, иммунорегуляторными свойствами и терапевтическими эффектами в отношении кишечных заболеваний. Кроме того, авторы настоящего изобретения подтвердили, что указанные эффекты можно получить не только в условиях, подходящих для живых бактерий, но и в условиях низкотемпературной стерилизации или высокотемпературной стерилизации.[58] Thus, in developing the present invention, experiments were carried out regarding the effectiveness of the said strain, which confirmed that the said strain has an exceptional effect in suppressing allergic disorders such as atopic dermatitis, mitigates the inflammatory response and has antifungal properties, immunoregulatory properties and therapeutic effects in regarding intestinal diseases. In addition, the inventors of the present invention have confirmed that these effects can be obtained not only under conditions suitable for living bacteria, but also under low-temperature sterilization conditions or high-temperature sterilization conditions.

[59] [59]

[60] Соответственно, в еще одном варианте реализации настоящего изобретения настоящее изобретение относится к пищевой композиции или композиции пищевой добавки, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP), клеточных компонентов указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[60] Accordingly, in yet another embodiment of the present invention, the present invention relates to a food composition or food additive composition containing at least one component selected from the group consisting of Lactobacillus gasseri strain KBL697 (identification number KCTC 13520BP), cellular components of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[61] Композиция может характеризоваться тем, что она представляет собой функциональную оздоровительную пищевую композицию, обладающую по меньшей мере одним эффектом, выбранным из группы, состоящей из смягчения симптомов аллергии, например, атопического дерматита, смягчения симптомов воспаления, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции.[61] The composition may be characterized in that it is a functional health food composition having at least one effect selected from the group consisting of alleviation of allergy symptoms, for example, atopic dermatitis, alleviation of inflammatory symptoms, improvement of gut health, and immunoregulation.

[62] Указанную пищевую композицию или композицию пищевой добавки можно применять в качестве продукта питания, эффективно смягчающего симптомы аллергии, например, атопического дерматита, смягчающего симптомы воспаления, способствующего улучшению состоянию кишечника и/или иммунорегуляции, а также профилактике вышеуказанных явлений, например, в качестве основного или второстепенных ингредиентов продуктов питания, пищевых добавок, функциональной оздоровительной пищевой композиции или функциональных напитков, но не ограничиваясь указанными.[62] The specified food composition or food additive composition can be used as a food product that effectively alleviates the symptoms of allergies, for example, atopic dermatitis, alleviates the symptoms of inflammation, helps improve intestinal health and/or immunoregulation, as well as the prevention of the above phenomena, for example, as primary or secondary ingredients of a food, dietary supplement, functional health food composition or functional beverage, but not limited to those specified.

[63] Термин «пищевая композиция» относится к натуральному или искусственному продукту, содержащему по меньшей мере одно питательное вещество, и, более предпочтительно, относится к продукту, который стал съедобным в результате определенной обработки, и обычно охватывает все продукты питания, пищевые добавки, функциональную оздоровительную пищевую композицию и функциональные напитки.[63] The term "food composition" refers to a natural or artificial product containing at least one nutrient, and more preferably refers to a product that has been rendered edible by certain processing, and generally covers all foods, food additives, functional health food composition and functional drinks.

[64] Продукт питания, который может содержать указанную пищевую композицию согласно настоящему изобретению в качестве добавки, может включать, например, различные типы продуктов питания, напитков, жевательной резинки, чая, витаминного комплекса или функциональных продуктов питания. Кроме того, продукты питания согласно настоящему изобретению включают специальные обогащенные продукты питания (например, модифицированное молоко, детское питание), переработанные мясные продукты, рыбные продукты, тофу, мук, лапшу (например, лапшу-рамен, азиатскую лапшу), хлебобулочные изделия, биологически активные пищевые добавки, приправы (например, соевый соус, соевую пасту, пасту из красного перца, смешанную пасту), соусы, кондитерские изделия (например, закусочные продукты), конфеты, шоколад, жевательные резинки, мороженое, молочные продукты (например, ферментированное молоко, сыр), другие обработанные пищевые продукты, кимчхи, соленые продукты (например, различные виды кимчхи, маринованные продукты), напитки (например, фруктовый сок, овощной сок, соевое молоко, напитки, получаемые при брожении) и натуральные приправы (например, бульонный порошок для лапши-рамен), но не ограничиваясь указанными. Указанные продукты питания, напитки или пищевые добавки можно получать обычными способами.[64] The food product that may contain the food composition of the present invention as an additive may include, for example, various types of food, beverage, chewing gum, tea, vitamin complex or functional food. In addition, food products according to the present invention include special fortified foods (eg, modified milk, baby food), processed meat products, fish products, tofu, flour, noodles (eg, ramen noodles, Asian noodles), baked goods, organic active food additives, seasonings (eg, soy sauce, soybean paste, red pepper paste, mixed paste), sauces, confectionery (eg, snack foods), candy, chocolate, chewing gum, ice cream, dairy products (eg, fermented milk , cheese), other processed foods, kimchi, salty foods (for example, various types of kimchi, pickled foods), drinks (for example, fruit juice, vegetable juice, soy milk, fermented drinks), and natural seasonings (for example, broth ramen noodle powder), but not limited to those. These foods, beverages or nutritional supplements can be obtained by conventional methods.

[65] Термин «функциональная оздоровительная пищевая композиция» представляет собой группу продуктов питания, эффективность которых повышается за счет возможности проявления и выражения их функции для заранее определенной цели с использованием физических, биохимических или биоинженерных методик, или обработанные пищевые продукты, разработанные с учетом того, чтобы регулирующие функции соответствующей пищевой композиции in vivo, например, функция регулировки ритма дефекации при профилактике заболевания и выздоровлении, проявлялись в достаточной степени. Такой функциональный продукт питания может содержать пищевые добавки, приемлемые с точки зрения диетологии, и может дополнительно содержать подходящие носители, вспомогательные вещества и разбавители, обычно используемые при их производстве.[65] The term "functional health food composition" is a group of foods whose effectiveness is enhanced by the ability to manifest and express their function for a predetermined purpose using physical, biochemical or bioengineering techniques, or processed foods designed to so that the regulating functions of the corresponding food composition in vivo, for example, the function of regulating the rhythm of bowel movements in the prevention of disease and recovery, are manifested to a sufficient extent. Such a functional food product may contain nutritionally acceptable nutritional supplements and may further contain suitable carriers, auxiliaries and diluents commonly used in its manufacture.

[66] В настоящем изобретении термин «функциональные напитки» в совокупности относится к напиткам, предназначенным для утоления жажды или для наслаждения вкусом. Конкретные ограничения данного термина отсутствуют, за исключением того, что указанные напитки должны содержать композицию для смягчения симптомов аллергии, например, атопического дерматита, смягчения симптомов воспаления, улучшения состоянию кишечника и/или иммунорегуляции, а также для профилактики указанных явлений в качестве основных ингредиентов в указанном соотношении, а также, как и обычные напитки, могут содержать различные вкусоароматические добавки или натуральные углеводы в качестве дополнительных ингредиентов.[66] In the present invention, the term “functional drinks” collectively refers to beverages intended to quench thirst or provide taste gratification. There are no specific limitations to this term, except that said beverages must contain a composition for alleviating symptoms of allergies, such as atopic dermatitis, mitigating symptoms of inflammation, improving bowel health and/or immunoregulation, and for the prevention of these phenomena as the main ingredients in said ratio, and, like regular drinks, may contain various flavoring additives or natural carbohydrates as additional ingredients.

[67] В дополнение к вышесказанному, продукт питания, содержащий пищевую композицию или композицию пищевой добавки согласно настоящему изобретению, может содержать различные питательные вещества, витамины, минералы (электролиты), вкусоароматические добавки, например, синтетические и натуральные вкусоароматические добавки, красители и наполнители (сыр, шоколад и т.д.), пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, коллоидные загустители, агенты для контроля pH, стабилизирующие агенты, консерванты, глицерин, спирт, агенты для карбонизации, используемые в газированных напитках, и т.п., причем каждый из вышеуказанных ингредиентов можно использовать отдельно или в комбинации друг с другом.[67] In addition to the above, a food product containing a food or nutritional supplement composition according to the present invention may contain various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors, such as synthetic and natural flavors, colors and fillers ( cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, colloidal thickeners, pH control agents, stabilizing agents, preservatives, glycerin, alcohol, carbonation agents used in carbonated beverages , etc., each of the above ingredients can be used separately or in combination with each other.

[68] Продукт питания, содержащий пищевую композицию согласно настоящему изобретению, может содержать композицию согласно настоящему изобретению в количестве от 0,001 масс. % 100 мл масс. %, предпочтительно от 1 масс. % до 99 масс. % в пересчете на общую массу продукта питания; в случае напитков оно может составлять от 0,001 г до 10 г, предпочтительно от 0,01 г до 1 г из расчета на 100 мл. Однако при длительном приеме в оздоровительных или гигиенических целях или в целях поддержания состояния здоровья количество продукта может быть ниже вышеуказанного диапазона; и поскольку у эффективных ингредиентов нет проблем с точки зрения профиля безопасности, их можно использовать в количестве, превышающем указанный диапазон, и их количество не ограничивается вышеуказанным диапазоном.[68] A food product containing the food composition according to the present invention may contain the composition according to the present invention in an amount of from 0.001 wt. % 100 ml wt. %, preferably from 1 wt. % up to 99 wt. % based on the total weight of the food product; in the case of beverages it may be from 0.001 g to 10 g, preferably from 0.01 g to 1 g, per 100 ml. However, when taken over a long period of time for health or hygiene purposes or to maintain a health condition, the amount of the product may be below the above range; and since the effective ingredients do not have problems in terms of safety profile, they can be used in quantities exceeding the specified range and their quantity is not limited to the above range.

[69] Пищевая композиция согласно настоящему изобретению может содержать штамм Lactobacillus gasseri KBL697 сам по себе или в комбинации с приемлемым носителем, или может быть изготовлена в форме композиции, подходящей для употребления человеком или животными. Таким образом, указанную композицию можно добавлять к продукту питания, не содержащему пробиотических бактерий или пары пробиотических бактерий. Например, микроорганизмы, которые можно применять в комбинации со штаммом согласно настоящему изобретению при получении продуктов питания согласно настоящему изобретению, должны подходить для употребления человеком или животными и обладать пробиотической активностью в отношении подавления патогенных, вредных бактерий или улучшения баланса микрофлоры в кишечном тракте млекопитающих при приеме внутрь, но не ограничиваютсяуказанными. Такие пробиотические микроорганизмы могут включать, например, дрожжи, например, Saccharomyces, Candida, Pichia или Torulopsis, грибы, например, Aspergillus, Rhizopus, Mucor или Penicillium, и бактерии родов Lactobacillus, Bifidobacterium, Leuconostoc, Lactococcus, Bacillus, Streptococcus, Propionibacterium, Enterococcus или Pediococcus. Подходящие конкретные пробиотические микроорганизмы могут включать, например, Saccharomyces cerevisiae, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus casei, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckii, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, or Pediococcus acidilactici. Пищевая композиция согласно настоящему изобретению предпочтительно может дополнительно содержать смесь пробиотических микроорганизмов, обладающих выраженной пробиотической активностью и превосходной противоаллергической, противовоспалительной, иммунорегуляторной активностью или способностью улучшать состояния кишечника, дополнительно усиливающей их эффекты. Носители, которые можно включать в пищевую композицию согласно настоящему изобретению, могут включать, например, наполнители, добавки с высоким содержанием клетчатки, инкапсулирующие агенты и липиды, широко известные в данной области техники. Штамм Lactobacillus gasseri KBL697 согласно настоящему изобретению может находиться в лиофилизированной или инкапсулированной форме, либо в форме суспензий или сухих порошков культуры.[69] The food composition of the present invention may contain the Lactobacillus gasseri strain KBL697 alone or in combination with an acceptable carrier, or may be formulated into a composition suitable for human or animal consumption. Thus, the composition can be added to a food product that does not contain probiotic bacteria or a pair of probiotic bacteria. For example, microorganisms that can be used in combination with a strain according to the present invention to produce food products according to the present invention must be suitable for human or animal consumption and have probiotic activity in inhibiting pathogenic, harmful bacteria or improving the balance of microflora in the intestinal tract of mammals when taken inside, but not limited to those indicated. Such probiotic microorganisms may include, for example, yeasts, for example, Saccharomyces, Candida, Pichia or Torulopsis, fungi, for example, Aspergillus, Rhizopus, Mucor or Penicillium, and bacteria of the genera Lactobacillus, Bifidobacterium, Leuconostoc, Lactococcus, Bacillus, Streptococcus, Propionibacterium, Enterococcus or Pediococcus. Suitable specific probiotic microorganisms may include, for example, Saccharomyces cerevisiae, Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus alimentarius, Lactobacillus case i, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbruckii , Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus farciminus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus sakei, Lactococcus lactis, or Pediococcus acidilactici. The food composition according to the present invention may preferably further contain a mixture of probiotic microorganisms having strong probiotic activity and excellent anti-allergic, anti-inflammatory, immunoregulatory activity or ability to improve intestinal conditions, further enhancing their effects. Carriers that may be included in the nutritional composition of the present invention may include, for example, fillers, high fiber additives, encapsulating agents and lipids well known in the art. The Lactobacillus gasseri strain KBL697 according to the present invention may be in lyophilized or encapsulated form, or in the form of culture suspensions or dry powders.

[70] [70]

[71] Композиция согласно настоящему изобретению также может быть представлена в форме кормовой добавки или корма, содержащих указанный штамм.[71] The composition according to the present invention can also be presented in the form of a feed additive or feed containing the specified strain.

[72] Кормовая добавка согласно настоящему изобретению может находиться в форме сухого или жидкого состава и, кроме того, содержать другие непатогенные микроорганизмы в дополнение к указанному штамму Lactobacillus gasseri KBL697. Микроорганизмы, которые можно добавлять к кормовой добавке, могут включать, например, Bacillus subtilis, которая может продуцировать протеазу, липазу и ферменты, преобразующие углеводы, штамм Lactobacillus, обладающий физиологической активностью и способностью к разложению органических соединений в анаэробных условиях, например, в желудке коровы, мицелиальные грибы, например, Aspergillus oryzae, демонстрирующие влияние на увеличение массы тела животных, надои и усвояемость корма (Slyter, L.L. J. Animal Sci., 1976, 43. 910-926), и дрожжи, например, Saccharomyces cerevisiae (Johnson, D.E. et al. J. Anim. Sci., 1983, 56, 735-739; Williams, P.E.V. et al., 1990, 211).[72] The feed additive according to the present invention may be in the form of a dry or liquid composition and, furthermore, contain other non-pathogenic microorganisms in addition to the specified strain of Lactobacillus gasseri KBL697. Microorganisms that can be added to the feed additive may include, for example, Bacillus subtilis, which can produce protease, lipase and carbohydrate converting enzymes, a Lactobacillus strain that has physiological activity and the ability to degrade organic compounds under anaerobic conditions, such as in the stomach of a cow , filamentous fungi, such as Aspergillus oryzae, which have demonstrated effects on animal weight gain, milk yield and feed digestibility (Slyter, L.L. J. Animal Sci., 1976, 43. 910-926), and yeasts, such as Saccharomyces cerevisiae (Johnson, D.E. et al. J. Anim. Sci., 1983, 56, 735-739; Williams, P. E. V. et al., 1990, 211).

[73] [73]

[74] Кормовая добавка согласно настоящему изобретению может дополнительно содержать по меньшей мере один ферментативный агент в дополнение к указанному штамму Lactobacillus gasseri KBL697. Дополнительные ферментативные агенты могут находиться в сухой или жидкой форме и могут включать, например, стеатолитические ферменты, например, липазу, фитазу, образующую фосфат и инозитфосфат при разложении фитиновой кислоты, амилазу, т.е. фермент для гидролиза α-1,4-гликозидной связи в составе, например, крахмала и гликогена, фосфатазу, т.е. фермент для гидролиза сложного органического эфира фосфорной кислоты, карбоксиметилцеллюлазу для разложения целлюлозы, ксилазу для разложения ксилозы, мальтазу для гидролиза мальтозы на две молекулы глюкозы и ферменты, продуцирующие углеводы, например, инвертазу, образующую смесь глюкозы и фруктозы при гидролизе сахарозы.[74] The feed additive according to the present invention may further contain at least one enzymatic agent in addition to the specified strain of Lactobacillus gasseri KBL697. Additional enzymatic agents may be in dry or liquid form and may include, for example, steatolytic enzymes, e.g. lipase, phytase, which forms phosphate and inositol phosphate when decomposing phytic acid, amylase, i.e. an enzyme for the hydrolysis of the α-1,4-glycosidic bond in, for example, starch and glycogen, a phosphatase, i.e. an enzyme to hydrolyze the organic phosphate ester, carboxymethylcellulase to decompose cellulose, xylase to decompose xylose, maltase to hydrolyze maltose into two glucose molecules, and carbohydrate-producing enzymes such as invertase, which produces a mixture of glucose and fructose when hydrolyzing sucrose.

[75] При использовании штамма Lactobacillus gasseri KBL697 согласно настоящему изобретению в качестве кормовых добавок можно применять кормовое сырье, например, арахис, горох, свеклу, жмых, продукты переработки зерна, порошок кишок животных и рыбную муку, а также различные зерновые и соевый белок. Они могут быть обработанными или необработанными, и их можно использовать без ограничений. Обработка может включать такой процесс, при котором кормовое сырье загружают и продавливают под давлением через заданное отверстие, а для белков предпочтительно можно использовать экструзию, при которой белки подвергают дегенерации для увеличения их доступности. Экструзия денатурирует белки за счет термообработки с целью разрушения антиферментных факторов, что является выгодным. Кроме того, перевариваемость белков сои можно улучшить путем экструзии с целью инактивации веществ, снижающих питательность корма, например, ингибитора трипсина, одного из ингибиторов протеаз, присутствующего в сое. Кроме того, экструзия может способствовать улучшению гидролизуемости под действием протеаз, что повышает питательную ценность белков сои.[75] When using the Lactobacillus gasseri strain KBL697 according to the present invention, feed raw materials such as peanuts, peas, beets, cake, grain products, animal intestine powder and fish meal, as well as various grains and soy protein can be used as feed additives. They can be processed or unprocessed and can be used without restrictions. Processing may include a process in which the feed material is loaded and pressurized through a predetermined opening, and for proteins, extrusion may preferably be used, in which the proteins are degenerated to increase their availability. Extrusion denatures proteins by heat treatment to destroy antienzyme factors, which is beneficial. In addition, the digestibility of soybean proteins can be improved by extrusion to inactivate substances that reduce the nutritional value of the feed, such as trypsin inhibitor, one of the protease inhibitors present in soybeans. In addition, extrusion can improve hydrolyzability by proteases, which increases the nutritional value of soy proteins.

[76] [76]

[77] В соответствии с еще одним вариантом реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к противогрибковой композиции, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[77] In accordance with another embodiment of the present invention, the present invention relates to an antifungal composition containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[78] Композиция может характеризоваться проявлением противогрибковой активности по отношению к одному из организмов, выбранному из группы, состоящей из Malassezia furfur, Malassezia globosa и Malassezia restricta, но не ограничиваясь указанными.[78] The composition may be characterized by exhibiting antifungal activity against one of the organisms selected from the group consisting of, but not limited to, Malassezia furfur, Malassezia globosa and Malassezia restricta.

[79] Композиция может представлять собой композицию для профилактики, смягчения или лечения себорейного дерматита или перхоти, и указанный себорейный дерматит может располагаться на коже свода черепа.[79] The composition may be a composition for the prevention, mitigation or treatment of seborrheic dermatitis or dandruff, and said seborrheic dermatitis may be located on the scalp.

[80] Кроме того, указанная композиция может представлять собой композицию для профилактики, смягчения или лечения крапивницы, сыпи, дерматофитоза туловища, пахового дерматофитоза или дерматофитоза стоп, вызванных грибковой инфекцией.[80] In addition, the composition may be a composition for the prevention, mitigation or treatment of urticaria, rash, dermatophytosis of the trunk, dermatophytosis of the inguinal or dermatophytosis of the feet caused by a fungal infection.

[81] Указанный штамм и культуры указанного штамма, лизаты указанного штамма и экстракты указанного штамма могут содержаться в композиции в количестве от 0,1 масс. % до 50 масс. % от общей массы композиции.[81] The specified strain and cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain can be contained in the composition in an amount of 0.1 wt. % up to 50 wt. % of the total weight of the composition.

[82] Указанная противогрибковая композиция может представлять собой фармацевтическую композицию, косметическую композицию или оздоровительную пищевую композицию, а также может представлять собой вещество для наружной обработки кожи.[82] Said antifungal composition may be a pharmaceutical composition, a cosmetic composition or a health food composition, and may also be a skin topical treatment.

[83] Указанная косметическая композиция может быть представлена во всех лекарственных формах, подходящих для местного применения, например, в форме жидкости, эмульсии типа «масло в воде», эмульсии типа «вода в масле», суспензии, твердого вещества, геля, порошка, пасты, пены или аэрозоля. Указанные композиции вышеупомянутых лекарственных форм можно получить традиционными способами, используемыми в данной области техники.[83] Said cosmetic composition may be presented in all dosage forms suitable for topical use, for example, liquid, oil-in-water emulsion, water-in-oil emulsion, suspension, solid, gel, powder, paste, foam or aerosol. Said compositions of the above dosage forms can be prepared by conventional methods used in the art.

[84] Кроме вышеупомянутых ингредиентов, указанная композиция может содержать другие ингредиенты в количестве, не мешающем проявлению основного эффекта, предпочтительно в количестве, обеспечивающем синергический эффект по отношению к основному эффекту. Композиция согласно настоящему изобретению может содержать вещество, выбранное из группы, состоящей из витаминов, полипептидов, полисахаридов и сфинголипида. Кроме того, косметическая композиции согласно настоящему изобретению может содержать увлажнитель, мягчительный агент, поверхностно-активное вещество, поглотитель ультрафиолета, консервант, стерилизатор, антиоксидант, рН-регулирующий агент, органические или неорганические пигменты, вкусоароматическую добавку, охлаждающий агент или агент-антиперспирант. Специалисты в данной области техники могут выбрать комбинированное процентное содержание указанных ингредиентов в диапазоне, не мешающем достижению цели и проявлению эффекта согласно настоящему изобретению, и оно может находиться в диапазоне от 0,01 масс. % до 5 масс. %, конкретнее, от 0,01 масс. % до 3 масс. % от общей массы композиции.[84] In addition to the above-mentioned ingredients, the composition may contain other ingredients in an amount that does not interfere with the main effect, preferably in an amount that provides a synergistic effect with respect to the main effect. The composition according to the present invention may contain a substance selected from the group consisting of vitamins, polypeptides, polysaccharides and sphingolipid. In addition, the cosmetic compositions of the present invention may contain a humectant, an emollient, a surfactant, an ultraviolet absorber, a preservative, a sterilant, an antioxidant, a pH-regulating agent, organic or inorganic pigments, a flavoring agent, a cooling agent, or an antiperspirant agent. Those skilled in the art may select the combined percentage of these ingredients within a range that does not interfere with the purpose and effect of the present invention, and may range from 0.01 wt. % up to 5 wt. %, more specifically, from 0.01 wt. % up to 3 wt. % of the total weight of the composition.

[85] Согласно вышеупомянутому варианту реализации, противогрибковая композиция согласно настоящему изобретению может представлять собой средство для наружной обработки кожи, например, крем, мазь, шампунь или лекарственное средство.[85] According to the above embodiment, the antifungal composition of the present invention may be a skin topical treatment such as a cream, ointment, shampoo or drug.

[86] [86]

[87] Согласно еще одному варианту реализации настоящего изобретения, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения или профилактики аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[87] According to another embodiment of the present invention, the present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of allergic diseases, for example, atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases and/or autoimmune diseases, containing at least one component selected from the group , consisting of cellular components of the Lactobacillus gasseri KBL697 strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[88] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть представлена в форме клеточных компонентов живых бактерий, сухого штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма или композиции в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или средой. Носители или среды, которые можно использовать в настоящем изобретении, могут включать растворитель, диспергатор, покрытие, усилитель, состав с контролируемым высвобождением (т.е. состав с замедленным высвобождением) или по меньшей мере одно инертное вспомогательное вещество том числе крахмал, полиол, гранулы, мелкодисперсную целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, например, Celphere, гранулы Celphere, разбавитель, смазывающее вещество, связующее, разрыхлитель. На таблетку из вышеуказанной композиции можно при желании нанести покрытие с использованием стандартной водной или неводной методики. Примеры фармацевтически приемлемого носителя и вспомогательного вещества для применения в качестве фармацевтически приемлемого инертного носителя и указанных дополнительных ингредиентов могут включать, например, связующее вещество, наполнитель, разрыхлитель, смазывающее вещество, противомикробный агент и агент для получения покрытия, но не ограничиваются указанными.[88] The pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of cellular components of live bacteria, a dried strain, cultures of the strain, lysates of the strain, or a composition in combination with a pharmaceutically acceptable carrier or medium. Carriers or media that can be used in the present invention may include a solvent, dispersant, coating, enhancer, controlled release formulation (i.e., sustained release formulation), or at least one inert excipient including starch, polyol, granules , fine cellulose, microcrystalline cellulose, e.g. Celphere, Celphere granules, diluent, lubricant, binder, disintegrant. A tablet of the above composition may, if desired, be coated using standard aqueous or non-aqueous techniques. Examples of the pharmaceutically acceptable carrier and excipient for use as the pharmaceutically acceptable inert carrier and these additional ingredients may include, but are not limited to, a binder, a filler, a disintegrant, a lubricant, an antimicrobial agent, and a coating agent.

[89] Кроме того, фармацевтическую композицию согласно настоящее изобретению можно применять в качестве средства для наружного применения, содержащего лекарственную форму, выбранную из группы, состоящей из мазей, кремов, паст, жидкостей и растворов для нанесения на кожу, глицерожелатинов, мазей для растирания, порошков для нанесения на кожу, аэрозолей и пластырей.[89] In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention can be used as a topical agent containing a dosage form selected from the group consisting of ointments, creams, pastes, liquids and solutions for application to the skin, glycerogelatins, rubs, powders for application to the skin, aerosols and patches.

[90] В настоящем изобретении указанные аллергические заболевания относятся к состояниям, ассоциированным с экспрессией ИЛ-4 или ИЛ-5, и могут включать, например, экзему, аллергическую астму, атопический дерматит, аллергический ринит, аллергический конъюнктивит, крапивницу или анафилактическую реакцию. Настоящее изобретение предпочтительно может характеризоваться тем, что указанные заболевания выбраны из группы, состоящей из экземы у детей, аллергической астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, аллергического конъюнктивита и пищевой аллергии, но не ограничиваются указанными.[90] In the present invention, said allergic diseases refer to conditions associated with the expression of IL-4 or IL-5, and may include, for example, eczema, allergic asthma, atopic dermatitis, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, urticaria or anaphylactic reaction. The present invention may preferably be characterized in that said diseases are selected from the group consisting of, but not limited to, eczema in children, allergic asthma, allergic rhinitis, atopic dermatitis, allergic conjunctivitis and food allergy.

[91] Настоящее изобретение может характеризоваться тем, что указанные заболевания кишечника выбраны из группы, состоящей из метеоризма, дискомфорта в области живота, инфекционной диареи, вызванной патогенными микроорганизмами, гастроколита, воспалительных заболеваний кишечника, неврогенного кишечного синдрома, синдрома раздраженного кишечника, избыточного роста микроорганизмов тонкого кишечника и кишечной пищевой диареи, и указанные заболевания также включают заболевания, вызванные нарушением барьерной функции кишечника.[91] The present invention may be characterized in that said bowel diseases are selected from the group consisting of flatulence, abdominal discomfort, infectious diarrhea caused by pathogenic microorganisms, gastrocolitis, inflammatory bowel disease, neurogenic bowel syndrome, irritable bowel syndrome, microbial overgrowth small intestine and intestinal food diarrhea, and these diseases also include diseases caused by impaired intestinal barrier function.

[92] Воспалительное заболевание кишечника (IBD) может включать болезнь Крона, поражения кишечника, сопровождающееся болезнью Бехчета, язвенный колит, геморрагическую язву прямой кишки и резервуарный илеит и относится к группе заболеваний, включающих болезнь Крона и язвенный колит. Язвенный колит поражает только толстый кишечник. Воспаление и язвы при язвенном колите ограничиваются двумя внутренними слоями (слизистой и подслизистой) из четырех слоев толстого кишечника. Воспаление и язвы при болезни Крона могут распространяться через все слои стенки как тонкого, так и толстого кишечника.[92] Inflammatory bowel disease (IBD) may include Crohn's disease, intestinal lesions associated with Behçet's disease, ulcerative colitis, hemorrhagic rectal ulcer, and pouchitis, and belongs to the group of diseases that includes Crohn's disease and ulcerative colitis. Ulcerative colitis affects only the large intestine. Inflammation and ulcers in ulcerative colitis are limited to the inner two layers (mucosa and submucosa) of the four layers of the large intestine. Inflammation and ulcers in Crohn's disease can spread through all layers of the wall of both the small and large intestines.

[93] Синдром раздраженного кишечника представляет собой хроническое состояние, сопровождающееся не только стойким рецидивирующим дискомфортом и болью в брюшной полости, например, вздутием живота, но и изменениями стула, например, диареей или запором. Эти симптомы могут осложняться психологическими факторами или стрессовыми социальными обстоятельствами.[93] Irritable bowel syndrome is a chronic condition involving not only persistent, recurring abdominal discomfort and pain, such as bloating, but also changes in bowel habits, such as diarrhea or constipation. These symptoms may be complicated by psychological factors or stressful social circumstances.

[94] В настоящем изобретении воспалительные заболевания в совокупности относятся к состояниям, при которых воспаление является основным патологическим изменением, и могут включать, например, отек, конъюнктивит, пародонтит, ринит, отит среднего уха, хронический синусит, фаринголарингит, тонзиллит, бронхит, пневмонию, язву желудка, гастрит, колит, подагру, экзему, угри, атопический дерматит, контактный дерматит, себорейный дерматит, анкилозирующий спондилит, ревматизм, фибромиалгию, остеоартрит, псориатический артрит, ревматоидный артрит, периартрит плечевого сустава, тендинит, тендосиновит, миозит, гепатит, цистит, нефрит, синдром Шегрена, миастению гравис, сепсис, васкулит, бурсит, височный артериит и рассеянный склероз, но не ограничиваются указанными.[94] In the present invention, inflammatory diseases collectively refer to conditions in which inflammation is the main pathological change, and may include, for example, edema, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, chronic sinusitis, pharyngolaryngitis, tonsillitis, bronchitis, pneumonia , stomach ulcers, gastritis, colitis, gout, eczema, acne, atopic dermatitis, contact dermatitis, seborrheic dermatitis, ankylosing spondylitis, rheumatism, fibromyalgia, osteoarthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis of the shoulder joint, tendinitis, tenosynovitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjögren's syndrome, myasthenia gravis, sepsis, vasculitis, bursitis, temporal arteritis and multiple sclerosis, but are not limited to these.

[95] В настоящем изобретении аутоиммунные заболевания и симптомы, которые можно смягчить за счет иммунорегуляторного эффекта, могут включать, например, ревматоидный артрит, волчанку, системную склеродермию, атопический дерматит, псориаз, псориатический артрит, астму, синдром Гийена-Барре, миастению гравис, дерматомиозит, полимиозит, рассеянный склероз, аутоиммунный энцефаломиелит, узелковый периартериит, тиреоидит Хашимото, рассеянный склероз, височный артериит, юношеский диабет, очаговую алопецию, пузырчатку, афтозный стоматит, аутоиммунную гемолитическую анемию, гранулематоз Вегенера, синдром Шегрена, болезнь Аддисона, болезно Крона и болезнь Бехчета, но не ограничиваются указанными.[95] In the present invention, autoimmune diseases and symptoms that can be mitigated by the immunoregulatory effect may include, for example, rheumatoid arthritis, lupus, systemic scleroderma, atopic dermatitis, psoriasis, psoriatic arthritis, asthma, Guillain-Barre syndrome, myasthenia gravis, dermatomyositis, polymyositis, multiple sclerosis, autoimmune encephalomyelitis, periarteritis nodosa, Hashimoto's thyroiditis, multiple sclerosis, temporal arteritis, juvenile diabetes, alopecia areata, pemphigus, aphthous stomatitis, autoimmune hemolytic anemia, Wegener's granulomatosis, Sjögren's syndrome, Addison's disease, Crohn's disease and illness Behçet, but are not limited to those indicated.

[96] Настоящее изобретение может характеризоваться тем, что эффекты иммунорегуляции или облегчения, лечения или профилактики аутоиммунных заболеваний или воспалительных заболеваний, обусловленные штаммом согласно настоящему изобретению, можно индуцировать посредством по меньшей мере одного механизма, выбранного из повышения и снижения уровня цитокинов, ассоциированных с ингибированием воспаления и иммунорегуляции, конкретно, снижения секреции ФНО-α, ИФН-γ и ИЛ-17 и увеличения секреции ИЛ-10.[96] The present invention may be characterized in that the effects of immunoregulation or alleviation, treatment or prevention of autoimmune diseases or inflammatory diseases caused by the strain according to the present invention can be induced through at least one mechanism selected from increasing and decreasing the level of cytokines associated with inhibition inflammation and immunoregulation, specifically reducing the secretion of TNF-α, IFN-γ and IL-17 and increasing the secretion of IL-10.

[97] ФНО-α (фактор некроза опухолей-α) представляет собой пептид массой 17 кДа, продуцируемый макрофагами и различными другими клетками, активируемыми во время иммунных реакций хозяина на бактериальные инфекции и онкологические заболевания. Известно, что данный цитокин является важным медиатором иммунных и воспалительных реакций, а также провоспалительным цитокином, играющим важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний и воспалительных заболеваний, например, ревматоидного артрита (РА), псориатического артрита, болезни Крона, псориаза и анкилозирующего спондилита (AS).[97] TNF-α (tumor necrosis factor-α) is a 17 kDa peptide produced by macrophages and various other cells activated during host immune responses to bacterial infections and cancer. This cytokine is known to be an important mediator of immune and inflammatory responses, as well as a pro-inflammatory cytokine, playing an important role in the development of autoimmune diseases and inflammatory diseases, such as rheumatoid arthritis (RA), psoriatic arthritis, Crohn's disease, psoriasis and ankylosing spondylitis (AS). .

[98] С другой стороны, CD4⁺ T-клетки можно классифицировать на такие подтипы, как Th1 (T-хелперы 1 типа), Th2 (T-хелперы 2 типа), CD4⁺ CD25⁺ иммунорегуляторные T-клетки и Th17-клетки (T-хелперы 17) в зависимости от экспрессии специфических цитокинов и факторов транскрипции. Известно, что ИЛ-17, продуцируемый Th17-клетками, в наибольшей степени вовлечен в аутоиммунные заболевания, аллергические реакции или защиту хозяина от бактериальной или грибковой инфекции.[98] On the other hand, CD4 ⁺ T cells can be classified into subtypes such as Th1 (T helper type 1 cells), Th2 (T helper type 2 cells), CD4 ⁺ CD25 ⁺ immunoregulatory T cells and Th17 cells ( T helper cells 17) depending on the expression of specific cytokines and transcription factors. IL-17, produced by Th17 cells, is known to be most involved in autoimmune diseases, allergic reactions, or host defense against bacterial or fungal infection.

[99] Кроме того, ИЛ-10 представляет собой пептид массой 35-40 кДа, продуцируемый T-хелперами, B-клетками, моноцитами и другими клетками, и обладает иммунодепрессивными и противовоспалительными свойствами, например, ингибирует продукцию цитокинов, в том числе, ФНО-α и ИФН-γ.[99] In addition, IL-10 is a 35-40 kDa peptide produced by T helper cells, B cells, monocytes and other cells, and has immunosuppressive and anti-inflammatory properties, for example, inhibiting the production of cytokines, including TNF -α and IFN-γ.

[100] [100]

[101] Термин «лечение», относится к купированию или смягчению заболеваний или состояний, используемых вместе с указанным термином, или одного или более из их симптомов, подавлению их прогрессирования или их профилактике, если он не употребляется в ином смысле. Термин «терапия» в настоящем изобретении относится к акту «лечения», определение которого приведено выше. Соответственно, схемы лечения или терапии заболевания у млекопитающих могут включать одно или более из следующего:[101] The term “treatment” refers to the reversal or mitigation of diseases or conditions used with the term, or one or more of their symptoms, suppression of their progression, or prevention thereof, unless otherwise used. The term "therapy" in the present invention refers to the act of "treating", as defined above. Accordingly, treatment or therapy regimens for a disease in mammals may include one or more of the following:

[102] (1) Подавление прогрессирования заболевания, т.е. подавление его развития[102] (1) Suppression of disease progression, i.e. suppression of its development

[103] (2) Предотвращение распространения заболевания[103] (2) Preventing the spread of disease

[104] (3) Смягчение заболевания[104] (3) Disease mitigation

[105] (4) Предотвращение рецидива заболевания и[105] (4) Prevention of disease relapse and

[106] (5) Временное облегчение симптома заболевания[106] (5) Temporary relief of disease symptoms

[107] [107]

[108] Композиция согласно настоящему изобретению для профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний может содержать фармацевтически эффективное количество штамма Lactobacillus gasseri KBL697 самого по себе или в комбинации с по меньшей мере одним из фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ или разбавителей.[108] The composition of the present invention for the prevention or treatment of allergic diseases, for example, atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases and/or autoimmune diseases may contain a pharmaceutically effective amount of Lactobacillus gasseri strain KBL697 alone or in combination with at least one of pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents.

[109] [109]

[110] В настоящем изобретении термин «эффективное количество» означает количество, достаточно высокое для вызывания желательного эффекта, но достаточно низкое для предотвращения серьезных побочных эффектов, согласно оценкам медиков. Количество микроорганизмов, вводимых в организм с композицией согласно настоящему изобретению, можно корректировать соответственно пути введения и цели введения.[110] In the present invention, the term "effective amount" means an amount high enough to produce the desired effect, but low enough to prevent serious side effects, as determined by medical professionals. The number of microorganisms introduced into the body with the composition according to the present invention can be adjusted according to the route of administration and the purpose of administration.

[111] [111]

[112] Композицию согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту один или более раз в день. Лекарственная форма означает физически дискретную единицу, подходящую для стандартного введения субъектам-людям и другим млекопитающим, причем каждая единица содержит подходящий фармацевтический носитель и заранее определенное количество штамма Lactobacillus gasseri KBL697 согласно настоящему изобретению, обеспечивающее терапевтический эффект. Лекарственная форма для перорального введения взрослому пациенту предпочтительно содержит 0,001 г или более микроорганизма согласно настоящему изобретению, и дозировка композиции согласно настоящему изобретению для перорального применения составляет о 0,001 г до 10 г, предпочтительно от 0,01 г до 5 г на дозу. Фармацевтически эффективное количество микроорганизма согласно настоящему изобретению составляет от 0,01 г до 10 г/день. В то же время дозировка зависит от тяжести заболевания пациента, микроорганизма и совместно используемых вспомогательных эффективных ингредиентов. Кроме того, общую суточную дозировку можно разделить в несколько раз и постоянно вводить по мере необходимости. Соответственно, вышеуказанные диапазоны дозировок никоим образом не ограничивают рамки настоящего изобретения.[112] The composition of the present invention can be administered to a subject one or more times per day. Dosage form means a physically discrete unit suitable for routine administration to human subjects and other mammals, each unit containing a suitable pharmaceutical carrier and a predetermined amount of the Lactobacillus gasseri KBL697 strain of the present invention to provide a therapeutic effect. The dosage form for oral administration to an adult patient preferably contains 0.001 g or more of the microorganism of the present invention, and the dosage of the composition according to the present invention for oral administration is about 0.001 g to 10 g, preferably 0.01 g to 5 g per dose. The pharmaceutically effective amount of the microorganism according to the present invention is from 0.01 g to 10 g/day. At the same time, the dosage depends on the severity of the patient’s disease, the microorganism and the auxiliary effective ingredients used together. In addition, the total daily dosage can be divided into several times and continuously administered as needed. Accordingly, the above dosage ranges do not limit the scope of the present invention in any way.

[113] [113]

[114] Кроме того, используемый выше термин «фармацевтически приемлемый» относится к композиции, которая является физиологически приемлемой и не вызывает аллергической реакции, например, желудочно-кишечного расстройства, головокружения или аналогичной реакции при введении человеку.[114] In addition, as used above, the term "pharmaceutically acceptable" refers to a composition that is physiologically acceptable and does not cause an allergic reaction, such as gastrointestinal upset, dizziness or the like, when administered to a human.

[115] Композицию согласно настоящему изобретению можно составить с использованием способов, известных в данной области техники, обеспечивающих быстрое, замедленное или отсроченное высвобождение активных ингредиентов после введения млекопитающему. Лекарственные формы могут представлять собой порошки, гранулы, таблетки, эмульсии, сиропы, аэрозоли, мягкие или твердые желатиновые капсулы, стерильные растворы для инъекций или стерильные порошки. Кроме того, композицию согласно настоящему изобретению для профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний можно вводить различными путями, включая пероральное, трансдермальное, подкожное, внутривенное или внутримышечное введение. Дозировку активных ингредиентов можно выбирать в зависимости от различных факторов, например, пути введения, возраста, пола, массы тела пациента и тяжести его состояния. Композицию согласно настоящему изобретению для лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний можно вводить в комбинации с известным соединением, способным предотвращать, смягчать или лечить соответствующие симптомы.[115] The composition of the present invention can be formulated using methods known in the art to provide rapid, delayed or delayed release of active ingredients after administration to a mammal. Dosage forms may be powders, granules, tablets, emulsions, syrups, aerosols, soft or hard gelatin capsules, sterile injectable solutions or sterile powders. In addition, the composition according to the present invention for the prevention or treatment of allergic diseases, for example, atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases and/or autoimmune diseases can be administered by various routes, including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular administration. The dosage of the active ingredients can be selected depending on various factors, such as the route of administration, age, sex, body weight of the patient and the severity of the patient's condition. The composition according to the present invention for the treatment of allergic diseases, for example, atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases and/or autoimmune diseases can be administered in combination with a known compound capable of preventing, mitigating or treating the corresponding symptoms.

[116] [116]

[117] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может быть представлена, в частности, в виде лекарственной формы для перорального применения в составе с кишечнорастворимым покрытием. В настоящем документе термин «кишечнорастворимое покрытие» включает любое фармацевтически приемлемое покрытие, которое может сохраняться в желудке, не поддаваясь разрушению под действием кислого желудочного сока, и может в достаточной степени разрушаться в кишечнике, высвобождая там активные ингредиенты. «Кишечнорастворимое покрытие» согласно настоящему изобретению относится к покрытию, которое может сохраняться в течение 2 часов или более при контакте с искусственным желудочным соком, например, раствором HCl с pH 1 при 36-38 °C, и в дальнейшем может разрушаться, предпочтительно в искусственном кишечном соке, например, буферном растворе KH₂PO₄ с pH 6,8 в течение 30 минут.[117] The pharmaceutical composition according to the present invention can be presented, in particular, in the form of an oral dosage form in an enteric-coated formulation. As used herein, the term “enteric coating” includes any pharmaceutically acceptable coating that can be retained in the stomach without being destroyed by acidic gastric juices and can be sufficiently degraded in the intestine to release the active ingredients there. "Enteric coating" according to the present invention refers to a coating that can last for 2 hours or more when in contact with artificial gastric juice, for example, a solution of HCl with pH 1 at 36-38 ° C, and can subsequently degrade, preferably in artificial intestinal juice, for example, a KH ₂ PO ₄ buffer solution with a pH of 6.8 for 30 minutes.

[118] Кишечнорастворимое покрытие согласно настоящему изобретению наносят на одно ядро в количестве от приблизительно 16 мг до 30 мг, предпочтительно от 16 мг до 20 мг или 25 мг или менее. При толщине кишечнорастворимого покрытия согласно настоящему изобретению от 5 мкм до 100 мкм, предпочтительно от 20 мкм до 80 мкм можно получить удовлетворительные результаты. Материал кишечнорастворимого покрытия можно выбрать из известных полимерных материалов. Подходящие полимерные материалы перечислены в ряде известных документов [L. Lachman et al., The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, 3^rd ed., 1986, pp. 365~373; H. Sucker et al., Pharmazeutische Technologie, Thieme, 1991, pp. 355-359; Hagers Handbuchder pharmazeutischen Praxis, 4^th ed., Vol. 7, pp. 739~742, and 766~778, (SpringerVerlag, 1971); and Remington's Pharmaceutical Sciences, 13^th ed., pp. 1689~1691 (Mack Publ., Co., 1970)], и в них можно включать производные сложных эфиров целлюлозы, простые эфиры целлюлозы, сополимер акриловой смолы и метилакрилата и сополимер малеиновой кислоты и производных фталевой кислоты.[118] The enteric coating of the present invention is applied to one core in an amount of from about 16 mg to 30 mg, preferably from 16 mg to 20 mg or 25 mg or less. When the thickness of the enteric coating according to the present invention is from 5 μm to 100 μm, preferably from 20 μm to 80 μm, satisfactory results can be obtained. The enteric coating material can be selected from known polymeric materials. Suitable polymeric materials are listed in a number of known documents [L. Lachman et al., The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, ^3rd ed., 1986, pp. 365~373; H. Sucker et al., Pharmazeutische Technologie, Thieme, 1991, pp. 355-359; Hagers Handbuchder pharmazeutischen Praxis, ^4th ed., Vol. 7, pp. 739~742, and 766~778, (SpringerVerlag, 1971); and Remington's Pharmaceutical Sciences, ^13th ed., pp. 1689~1691 (Mack Publ., Co., 1970)], and may include cellulose ester derivatives, cellulose ethers, acrylic resin-methyl acrylate copolymer, and maleic acid-phthalic acid derivative copolymer.

[119] Кишечнорастворимое покрытие согласно настоящему изобретению можно получить с использованием общепринятого способа нанесения кишечнорастворимого покрытия, при котором раствор кишечнорастворимого покрытия напыляют на ядро. Подходящие растворители, используемые в процессе получения кишечнорастворимого покрытия, представляют собой спирты, например, этанол, кетоны, например, ацетон, галогенированные углеводородные растворители, например, дихлорметан (CH₂Cl₂), и смеси этих растворителей. Пластификатор, например, ди-n-бутилфталат или триацетилглицерин, добавляют к раствору покрытия в соотношении от приблизительно 1 : 0,05 до приблизительно 1 : 0,3 (материал покрытия : пластификатор) Допустимо выполнять процесс напыления непрерывно, и можно регулировать распыляемое количество с учетом условий нанесения покрытия. Давление распыления можно регулировать различным образом, и в общем случае удовлетворительные результаты можно получить при давлении распыления от приблизительно 1 бар до приблизительно 1,5 бар.[119] The enteric coating of the present invention can be prepared using a conventional enteric coating method in which an enteric coating solution is sprayed onto the core. Suitable solvents used in the enteric coating process include alcohols, eg ethanol, ketones, eg acetone, halogenated hydrocarbon solvents, eg dichloromethane (CH ₂ Cl ₂ ), and mixtures of these solvents. A plasticizer, such as di-n-butyl phthalate or triacetylglycerol, is added to the coating solution in a ratio of about 1:0.05 to about 1:0.3 (coating material: plasticizer) It is acceptable to carry out the spraying process continuously, and the spray amount can be adjusted with taking into account the coating application conditions. The spray pressure can be adjusted in various ways, and in general satisfactory results can be obtained with a spray pressure of from about 1 bar to about 1.5 bar.

[120] [120]

[121] Между тем, фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить в комбинации с обычными лекарственными средствами, которые, как известно, оказывают профилактическое или терапевтическое действие в отношении аллергических заболеваний, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний. Например, лекарственные средства, которые можно вводить в комбинации с фармацевтической композицией согласно настоящему изобретению, могут включать лекарственные средства на основе антител, используемые для лечения воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника или аутоиммунных заболеваний, например, инфликсимаб, адалимумаб, голимумаб, абциксимаб, алемтузумаб, атлизумаб, базиликсимаб, белимумаб, бевацизумаб, ипилимумаб, брентуксимаб ведотин, канакинумаб, капромаб пендетид, катумаксомаб, цертолизумаб пэгол, цетуксимаб, даклизумаб, деносумаб, экулизумаб, эдреколомаб, эфализумаб, эфунгумаб, эртумаксомаб, этанерцепт, этарацизумаб, фонтолизумаб, гемтузумаб озогамицин, гирентуксимаб, ибритумомаб тиуксетан, иговомаб, имциромаб, ипилимумаб, лабетузумаб, меполизумаб, мотавизумаб, натализумаб, нимотузумаб, нофетумомаб мерпентан, офатумумаб, омализумаб, ореговомаб, паливизумаб, панитумумаб, пемтумомаб, пертузумаб, ранибизумаб, раксибакумаб, ритуксимаб, ровелизумаб, руплизумаб, такатузумаб тетраксетан, тефибазумаб, тоцилизумаб, тозитумомаб, трастузумаб, устекинумаб, секукинумаб, ведолизумаб, визилизумаб, вотумумаб, залутумумаб и занолимумаб, но не ограничиваются указанными.[121] Meanwhile, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered in combination with conventional drugs that are known to have prophylactic or therapeutic effects against allergic diseases, inflammatory diseases, intestinal diseases and/or autoimmune diseases. For example, drugs that can be administered in combination with the pharmaceutical composition of the present invention may include antibody drugs used to treat inflammatory diseases, bowel diseases or autoimmune diseases, for example, infliximab, adalimumab, golimumab, abciximab, alemtuzumab, atlizumab , basiliximab, belimumab, bevacizumab, ipilimumab, brentuximab vedotin, canakinumab, capromab pendetide, catumaxomab, certolizumab pegol, cetuximab, daclizumab, denosumab, eculizumab, edrecolomab, efalizumab, efungumab, ertumaxomab, etanercept, eta racizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicin, girentuximab, ibritumomab tiuxetan, igovomab, imciromab, ipilimumab, labetuzumab, mepolizumab, motavizumab, natalizumab, nimotuzumab, nofetumomab merpentane, ofatumumab, omalizumab, oregovomab, palivizumab, panitumumab, pemtumomab, pertuzumab, ranibizumab, raxibacumab, rit uximab, rovelizumab, ruplizumab, takatuzumab tetraxetane, tefibazumab, but not limited to, tocilizumab, tositumomab, trastuzumab, ustekinumab, secukinumab, vedolizumab, visilizumab, votumumab, zalutumumab and zanolimumab.

[122] Кроме того, фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно применять в комбинации с антигистаминными средствами, стероидами, салициловой кислотой, мочевиной, такролимусом, циклофосфорином, фототерапией и т.п. для лечения экземы и аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, и можно применять в комбинации с сульфасалазином, азатиоприном, меркаптопурином, метотрексатом, циклоспорином, блокаторами ФНО (адалимумабом, этанерцептом и т.д.) или антителами против интегрина (ведолизумабом, натализумабом и т.д.) для лечения заболеваний кишечника, например, воспалительных заболеваний кишечника.[122] In addition, the pharmaceutical composition of the present invention can be used in combination with antihistamines, steroids, salicylic acid, urea, tacrolimus, cyclophosphorine, phototherapy and the like. for the treatment of eczema and allergic diseases, such as atopic dermatitis, and can be used in combination with sulfasalazine, azathioprine, mercaptopurine, methotrexate, cyclosporine, TNF blockers (adalimumab, etanercept, etc.) or anti-integrin antibodies (vedolizumab, natalizumab, etc.) .d.) for the treatment of intestinal diseases, for example, inflammatory bowel diseases.

[123] [123]

[124] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения в настоящем изобретении предложено применение указанного штамма или указанной композиции для профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, и применению указанного штамма или указанной композиции для получения терапевтического агента для лечения вышеупомянутых заболеваний.[124] In another embodiment of the present invention, the present invention provides the use of said strain or said composition for the prevention or treatment of allergic diseases, for example, atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases and/or autoimmune diseases, and the use of said strain or said composition to obtain a therapeutic agent for the treatment of the above-mentioned diseases.

[125] Конкретно, в настоящем изобретении предложена композиция, содержащая по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, для применения при профилактике или лечении аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника, например, колита, и/или аутоиммунных заболеваний, например, псориаза.[125] Specifically, the present invention provides a composition containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain, for use in the prevention or treatment of allergic diseases, including including atopic dermatitis, inflammatory diseases, intestinal diseases such as colitis, and/or autoimmune diseases such as psoriasis.

[126] Кроме того, настоящее изобретение относится к применению композиции для получения лекарственного средства для профилактики или лечения аллергических заболеваний, в том числе атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника, например, колита, и/или аутоиммунных заболеваний, например, псориаза, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[126] In addition, the present invention relates to the use of a composition for the preparation of a medicament for the prevention or treatment of allergic diseases, including atopic dermatitis, inflammatory diseases, intestinal diseases, for example, colitis, and/or autoimmune diseases, for example, psoriasis, containing at least one component selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[127] В настоящем документе термин «профилактика» связан с предотвращением, задержкой, препятствованием или замедлением заболеваний с целью ослабления их влияния.[127] As used herein, the term “prevention” is associated with preventing, delaying, preventing, or delaying diseases in order to reduce their impact.

[128] В настоящем документе термин «лечение» связан с уходом за субъектом, страдающим от заболеваний, с целью смягчения, излечивания или ослабления симптомов заболеваний или ослабления или остановки прогрессирования заболеваний.[128] As used herein, the term “treatment” relates to the care of a subject suffering from diseases with the purpose of mitigating, curing or ameliorating the symptoms of diseases or reducing or stopping the progression of diseases.

[129] [129]

[130] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения в настоящем изобретении предложен способ профилактики или лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника и/или аутоиммунных заболеваний, включающий введение фармацевтически эффективного количества указанного штамма или указанной композиции в организм субъекта, нуждающегося в профилактике или лечении указанных заболеваний или в смягчении состояния кишечника, аллергических реакций, воспалительных реакций или аутоиммунных реакций.[130] In yet another embodiment, the present invention provides a method for preventing or treating allergic diseases, such as atopic dermatitis, inflammatory diseases, bowel diseases, and/or autoimmune diseases, comprising administering a pharmaceutically effective amount of said strain or said composition to a subject. needing the prevention or treatment of these diseases or the mitigation of intestinal conditions, allergic reactions, inflammatory reactions or autoimmune reactions.

[131] Конкретно, в настоящем изобретении предложен способ лечения аллергических заболеваний, например, атопического дерматита, воспалительных заболеваний, заболеваний кишечника, например, колита, и/или аутоиммунных заболеваний, например, псориаза, включающий введение терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из указанного штамма, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма в организм субъекта, нуждающегося в этом.[131] Specifically, the present invention provides a method for treating allergic diseases, such as atopic dermatitis, inflammatory diseases, intestinal diseases, such as colitis, and/or autoimmune diseases, such as psoriasis, comprising administering a therapeutically effective amount of at least one component, selected from the group consisting of the specified strain, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain into the body of a subject in need thereof.

[132] Поскольку фармацевтическая композиция, применяемая в способе профилактики или лечения указанных заболеваний, а также способ ее введения описаны выше, перекрывающиеся элементы композиции и способа не будут включены в настоящий документ во избежание избыточной сложности настоящего описания.[132] Since the pharmaceutical composition used in the method of preventing or treating these diseases, as well as the method of administration thereof, are described above, overlapping elements of the composition and method will not be included herein in order to avoid unnecessary complexity of the present description.

[133] Указанный субъект, которому можно вводить композицию для профилактики или лечения указанных заболеваний, включает всех животных, в том числе человека. Например, субъект может представлять собой животное, например, собаку, кошку или мышь.[133] The specified subject to which the composition can be administered for the prevention or treatment of these diseases includes all animals, including humans. For example, the subject may be an animal, such as a dog, cat or mouse.

[134] [134]

[135] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения настоящее изобретение относится к косметической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма.[135] In yet another embodiment of the present invention, the present invention relates to a cosmetic composition containing a pharmaceutically effective amount of at least one component selected from the group consisting of cellular components of the Lactobacillus gasseri strain KBL697, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain.

[136] Косметическая композиция может характеризоваться функцией смягчения по меньшей мере одного состояния чувствительной кожи, выбранного из группы, состоящей из кожной аллергии, крапивницы, атопического дерматита, псориаза, грибковой инфекции и экземы, но не ограничивается указанными.[136] The cosmetic composition may be characterized by the function of alleviating at least one sensitive skin condition selected from the group consisting of, but not limited to, skin allergies, urticaria, atopic dermatitis, psoriasis, fungal infection and eczema.

[137] В настоящем документе термин «косметическая композиция» относится к композиции, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, которая может быть представлена в виде лекарственной формы любого типа. Например, косметика, полученная с использованием указанной косметической композиции, может включать кремы, тампоны, лосьоны, эссенции, тоники, кремы-основы и косметические основы, и может быть коммерциализована в виде любых вышеперечисленных лекарственных форм для достижения цели настоящего изобретения, но не ограничивается указанными. Ингредиенты, содержащиеся в косметической композиции согласно настоящему изобретению, в дополнение к вышеупомянутым ингредиентам включают ингредиенты, обычно используемые в косметических композициях, например, традиционные адьюванты, например, антиоксиданты, стабилизаторы, солюбилизаторы, витамины, пигменты и ароматизаторы, а также носители.[137] As used herein, the term “cosmetic composition” refers to a composition containing at least one component selected from the group consisting of cellular components of the Lactobacillus gasseri strain KBL697, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain, which may be presented in the form of a dosage form of any type. For example, cosmetics prepared using said cosmetic composition may include, but are not limited to, creams, tampons, lotions, essences, tonics, base creams and cosmetic bases, and may be commercialized in any of the above dosage forms to achieve the purpose of the present invention. . The ingredients contained in the cosmetic composition according to the present invention, in addition to the above ingredients, include ingredients commonly used in cosmetic compositions, for example, traditional adjuvants, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavors, as well as carriers.

[138] [138]

[139] В еще одном варианте реализации настоящего изобретения настоящее изобретение относится к функциональному пластырю, содержащему по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из клеточных компонентов штамма Lactobacillus gasseri KBL697, культур указанного штамма, лизатов указанного штамма и экстрактов указанного штамма, причем указанный функциональный пластырь можно использовать для косметической или медицинской цели.[139] In yet another embodiment of the present invention, the present invention relates to a functional patch containing at least one component selected from the group consisting of cellular components of the Lactobacillus gasseri strain KBL697, cultures of the specified strain, lysates of the specified strain and extracts of the specified strain, and Said functional patch can be used for cosmetic or medical purposes.

[140] Пластырь может характеризоваться функцией смягчения по меньшей мере одного состояния чувствительной кожи, выбранного из группы, состоящей из кожной аллергии, крапивницы, атопического дерматита, псориаза, грибковой инфекции и экземы, но не ограничивается указанными.[140] The patch may be characterized by the function of alleviating at least one sensitive skin condition selected from the group consisting of, but not limited to, skin allergies, urticaria, atopic dermatitis, psoriasis, fungal infection and eczema.

[141] В настоящем изобретении пластырь обычно представляет собой небольшой липкий пластырь, содержащий доставляемые вещества, причем указанный пластырь может быть представлен в различных формах. Простейшая форма представляет собой липкое цельное изделие, содержащее резервуар, содержащий доставляемые вещества, помещенные на подложку. Резервуар обычно образован косметически или фармацевтически приемлемым самоклеящимся материалом, однако в некоторых случаях он также может быть образован неадгезивными материалами, представленными в тонком липком слое, подходящем для поверхности, контактирующей с кожей. Скорость введения веществ, доставляемых из пластыря в организм субъекта, носящего пластырь, можно изменить, поскольку проницаемость кожи для доставляемых веществ, обычно зависит от индивидов и места на коже, которое могут выбрать специалисты в данной области техники.[141] In the present invention, the patch is typically a small adhesive patch containing the substances to be delivered, which patch may be in various forms. The simplest form is an adhesive one-piece product containing a reservoir containing the substances to be delivered placed on a support. The reservoir is typically formed by a cosmetically or pharmaceutically acceptable self-adhesive material, but in some cases it may also be formed by non-adhesive materials presented in a thin adhesive layer suitable for the surface in contact with the skin. The rate of administration of the substances delivered from the patch into the body of the subject wearing the patch can be varied, since the permeability of the skin to the delivered substances generally depends on the individuals and the location on the skin, which may be selected by those skilled in the art.

[142] [142]

[143] Настоящее изобретение будет подробно описано далее в настоящем документе посредством примеров. Эти примеры приведены исключительно в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и для специалистов в данной области техники очевидно, что не следует считать, что сущность настоящего изобретения ограничивается этими примерами.[143] The present invention will be described in detail later herein by way of examples. These examples are provided solely for the purpose of illustrating the present invention, and those skilled in the art will appreciate that the spirit of the present invention should not be construed to be limited by these examples.

[144] [144]

[145] Пример 1. Эффекты смягчения и терапевтические эффекты, оказываемые KBL697 по отношению к аллергическим реакциям, обусловленные ингибированием цитокинов Th2-типа в Т-клетках.[145] Example 1: The mitigating and therapeutic effects of KBL697 on allergic reactions due to the inhibition of Th2-type cytokines in T cells.

[146] Согласно сообщениям, цитокины, имеющие отношение к T-хелперам 2 типа (Th2), например, ИЛ-4 и ИЛ-5, вносят вклад в хронические аллергические реакции за счет усиления иммунных реакций, имеющих отношение к Th2, и увеличения продукции IgE (Passante E, Inflamm. Res. 2009). В настоящем изобретении выполнена попытка скрининга пробиотических штаммов, которые можно использовать в качестве терапевтических агентов для лечения различных аллергических заболеваний, включая хронические аллергические заболевания, путем проверки эффекта ингибирования секреции ИЛ-4 и ИЛ-5 различными штаммами Lactobacillus. С этой целью эффект ингибирования секреции ИЛ-4 и ИЛ-5 тестировали следующим образом, используя линию клеток EL4, представлявшую собой линию T-клеток мыши.[146] T helper type 2 (Th2)-related cytokines, such as IL-4 and IL-5, have been reported to contribute to chronic allergic reactions by enhancing Th2-related immune responses and increasing production IgE (Passante E, Inflamm. Res. 2009). The present invention attempts to screen probiotic strains that can be used as therapeutic agents for the treatment of various allergic diseases, including chronic allergic diseases, by testing the effect of inhibiting the secretion of IL-4 and IL-5 by various Lactobacillus strains. To this end, the effect of inhibiting the secretion of IL-4 and IL-5 was tested as follows using the EL4 cell line, which is a mouse T cell line.

[147] [147]

[148] 1-1. Инкубирование линий клеток EL-4[148] 1-1. Incubation of EL-4 cell lines

[149] Клетки EL4 (ATCC NO. TIB-39) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS (эмбриональной телячьей сыворотки), пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO₂, а затем пересевали раз в три дня. Клетки EL4 высевали на 24-луночный планшет в концентрации 4 × 10⁵ клеток/лунку, затем культивировали в течение 16 - 20 часов для индукции аллергических реакций и обрабатывали штаммами.[149] EL4 cells (ATCC NO. TIB-39) were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS (fetal bovine serum), penicillin (100 μg/ml), and streptomycin (100 μg/ml) at 37 °C in the atmosphere 5% CO ₂ and then subcultured every three days. EL4 cells were seeded into a 24-well plate at a concentration of 4 × 10 ⁵ cells/well, then cultured for 16 to 20 hours to induce allergic reactions and treated with strains.

[150] [150]

[151] 1-2 Инкубирование штаммов и восстановление[151] 1-2 Strain incubation and recovery

[152] Используемые штаммы Lactobacillus gasseri культивировали в среде MRS с добавлением 0,5% цистеина, активировали на протяжении в общей сложности двух пересевов с 18-часовым интервалом, а затем использовали в экспериментах. Полученный культуральный раствор центрифугировали при 15000 × g в течение 3 минут, осадок промывали PBS-буфером. Штаммы окрашивали в течение 15 минут SYTO9 и PI с использованием набора для подсчета и оценки жизнеспособности бактерий LIVE/DEAD™ BacLight™ для проточной цитометрии (Thermo Fisher Scientific, США). Затем добавляли гранулы, содержащиеся в наборе, и рассчитывали количество окрашенных живых бактерий с использованием анализа на основе проточной цитометрии.[152] The Lactobacillus gasseri strains used were cultured in MRS medium supplemented with 0.5% cysteine, activated for a total of two subcultures at 18-hour intervals, and then used in experiments. The resulting culture solution was centrifuged at 15,000 × g for 3 minutes, and the sediment was washed with PBS buffer. Strains were stained for 15 minutes with SYTO9 and PI using the LIVE/DEAD™ BacLight™ Flow Cytometry Enumeration and Viability Kit (Thermo Fisher Scientific, USA). The beads contained in the kit were then added and the number of stained live bacteria was calculated using a flow cytometry-based assay.

[153] [153]

[154] 1-3. Обработка штаммов и количественное измерение секреции ИЛ-4 и ИЛ-5 после индукции аллергических реакций[154] 1-3. Treatment of strains and quantitative measurement of IL-4 and IL-5 secretion after induction of allergic reactions

[155] Для индукции аллергических реакций в клетках EL4, ранее высеянных на 24-луночный планшет, каждую лунку обрабатывали 100 мкл PMA (20 нг/мл ) и иономицина (1 мкг/мл). Затем выполняли обработку 300 мкл ранее полученных штаммов в соотношении клетки:штамм, равном 1:10. После инкубирования в течение 24 часов в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37 °C собирали надосадочную жидкость и использовали наборы для твердофазного ИФА Mouse IL-4 (№ в каталоге 555232, BD OptEIA™) и Mouse IL-5 (№ в каталоге 555236, BD OptEIA™) для измерения количества секретированных ИЛ-4 и ИЛ-5 в соответствии с инструкциями производителя.[155] To induce allergic reactions in EL4 cells previously seeded in a 24-well plate, each well was treated with 100 μl of PMA (20 ng/ml) and ionomycin (1 μg/ml). Then, 300 μl of previously obtained strains were treated at a cell:strain ratio of 1:10. After incubation for 24 hours in a 5% CO ₂ incubator at 37°C, the supernatant was collected and the Mouse IL-4 (cat. no. 555232, BD OptEIA™) and Mouse IL-5 (cat. no. 555236, BD OptEIA™) to measure secreted IL-4 and IL-5 according to the manufacturer's instructions.

[156] [156]

[157] В результате, как показано на фиг. 1 и 2, получили подтверждение того, что KBL697 эффективно ингибировал секрецию как ИЛ-4, так и ИЛ-5, и его терапевтическое и профилактическое действие в отношении аллергии могло достигаться за счет ингибирования секреции цитокина Th2-типа, опосредующего аллергическую реакцию.[157] As a result, as shown in FIG. 1 and 2, obtained confirmation that KBL697 effectively inhibited the secretion of both IL-4 and IL-5, and its therapeutic and preventive effects on allergies could be achieved by inhibiting the secretion of Th2-type cytokine mediating the allergic response.

[158] [158]

[159] Пример 2. Эффекты смягчения и лечения, оказываемые KBL697 по отношению к аллергическим реакциям, обусловленные ингибированием секреции гистамина в базофилах.[159] Example 2: The mitigating and healing effects of KBL697 on allergic reactions due to inhibition of histamine secretion in basophils.

[160] Согласно сообщениям, при аллергической реакции в тканях продуцируется гистамин, вызывающий воспалительную реакцию, и подавление секреции гистамина приводит к смягчению симптомов аллергии за счет блокирования реакции, вызываемой гистамином В настоящем изобретении получено дальнейшее подтверждение смягчения аллергических реакций и терапевтического эффекта по отношению к ним путем ингибирования секреции гистамина за счет KBL697. Кроме того, чтобы подтвердить, является ли терапевтический и профилактический эффект в отношении хронических аллергических заболеваний, выявленный в примере 1, является характерным признаком Lactobacillus gasseri, или характерен ли место выраженный эффект конкретно для KBL697 среди штаммов Lactobacillus gasseri, выполнили оценку способности подавлять секрецию гистамина для еще девяти штаммов Lactobacillus gasseri в дополнение к KBL697. После индукции дегрануляции после культивирования клеток линии RBL-2H3 проверяли способность подавлять секрецию гистамина путем измерения активности β-гексозаминидазы, совместно секретируемой с гистамином, с помощью колориметрической реакции с субстратом.[160] It is reported that during an allergic reaction, histamine is produced in the tissues, causing an inflammatory response, and suppression of histamine secretion leads to alleviation of allergy symptoms by blocking the reaction caused by histamine. The present invention further confirms the mitigation of allergic reactions and the therapeutic effect on them by inhibiting histamine secretion via KBL697. In addition, to confirm whether the therapeutic and prophylactic effect against chronic allergic diseases identified in Example 1 is a characteristic feature of Lactobacillus gasseri, or whether the pronounced effect is specific to KBL697 among Lactobacillus gasseri strains, the ability to suppress histamine secretion was evaluated for nine more Lactobacillus gasseri strains in addition to KBL697. Following induction of degranulation following culture of RBL-2H3 cells, the ability to inhibit histamine secretion was tested by measuring the activity of β-hexosaminidase co-secreted with histamine using a colorimetric substrate reaction.

[161] [161]

[162] 2-1. Инкубирование линий клеток RBL-2H3[162] 2-1. Incubation of RBL-2H3 cell lines

[163] Клетки RBL-2H3 (ATCC NO. CRL-2256) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS, пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO₂, а затем пересевали раз в три дня. Клетки RBL-2H3 высевали на 6-луночный планшет в концентрации 1 × 10⁶ клеток/лунку, затем культивировали в течение 3 часов, а затем обрабатывали IgE (0,5 мкг/мл) и инкубировали в течение 16 - 20 часов.[163] RBL-2H3 cells (ATCC NO. CRL-2256) were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS, penicillin (100 μg/ml), and streptomycin (100 μg/ml) at 37 °C in an atmosphere of 5% CO ₂ and then reseeded every three days. RBL-2H3 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 1 × 10 ⁶ cells/well, then cultured for 3 hours, and then treated with IgE (0.5 μg/ml) and incubated for 16 - 20 hours.

[164] [164]

[165] 2-2. Инкубирование штаммов и получение культурального раствора[165] 2-2. Incubation of strains and obtaining a culture solution

[166] Используемые штаммы Lactobacillus gasseri культивировали в среде MRS с добавлением 0,5% цистеина, активировали на протяжении в общей сложности двух пересевов с 18-часовым интервалом, а затем использовали в экспериментах. Полученный культуральный раствор центрифугировали при 15000 × g в течение 3 минут, а затем собирали надосадочную жидкость.[166] The Lactobacillus gasseri strains used were cultured in MRS medium supplemented with 0.5% cysteine, activated for a total of two subcultures at 18-hour intervals, and then used in experiments. The resulting culture solution was centrifuged at 15,000 × g for 3 minutes, and then the supernatant was collected.

[167] [167]

[168] 2-3. Индукция дегрануляции после обработки штаммами[168] 2-3. Induction of degranulation after treatment with strains

[169] После удаления среды для клеток RBL-2H3, ранее высеянных на 6-луночный планшет, клетки дважды промывали 1 мл буфера Сираганяна (pH 7,2). Затем клетки обрабатывали 120 мкл ранее полученного культурального раствора бактерий или, в группе положительного контроля - кетотифеном (20 мкг/мл) в каждой лунке, инкубировали в течение 20 минут в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37° C, а затем обрабатывали 60 мкл антигена (DNP-HAS, 1 мкг/мл) для индукции дегрануляции за счет реакции антиген-антитело. В качестве отрицательного контроля дегрануляцию индуцировали после обработки 120 мкл буфера Сираганяна. Реакцию выполняли в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37 °C в течение 20 минут, а затем собирали надосадочную жидкость.[169] After removing the medium for RBL-2H3 cells previously seeded in a 6-well plate, the cells were washed twice with 1 ml of Siraganian buffer (pH 7.2). The cells were then treated with 120 μl of the previously obtained bacterial culture solution or, in the positive control group, ketotifen (20 μg/ml) in each well, incubated for 20 minutes in an incubator with an atmosphere of 5% CO ₂ at 37 ° C, and then treated with 60 µl of antigen (DNP-HAS, 1 µg/ml) to induce degranulation due to the antigen-antibody reaction. As a negative control, degranulation was induced after treatment with 120 μl of Siraganian buffer. The reaction was performed in an incubator with an atmosphere of 5% CO ₂ at 37 °C for 20 minutes, and then the supernatant was collected.

[170] [170]

[171] 2-4. Выявление цветной реакции[171] 2-4. Detection of color reaction

[172] Для выявления активности β-гексозаминидазы 25 мкл надосадочной жидкости, собранной в примере 2-3, переносили в каждую лунку 96-луночного планшета, а затем в каждую лунку добавляли 25 мкл субстрата (p-нитрофенил-N-ацетил-D-глюкозаминидазы) с последующей реакцией при 37 °C в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ в течение 90 минут. Затем добавляли 200 мкл стоп-раствора Na₂CO₃/NaHCO₃) для остановки реакции и измеряли поглощение при 405 нм. Поглощение после обработки Lactobacillus gasseri каждого типа сравнивали с группой отрицательного контроля и преобразовывали в процентный показатель для демонстрации уровня ингибирования дегрануляции.[172] To detect β-hexosaminidase activity, 25 μl of the supernatant collected in Example 2-3 was transferred to each well of a 96-well plate, and then 25 μl of substrate (p-nitrophenyl-N-acetyl-D- glucosaminidase) followed by reaction at 37 °C in an incubator with an atmosphere of 5% CO ₂ for 90 minutes. Then 200 µl of Na ₂ CO ₃ /NaHCO ₃ stop solution was added to stop the reaction and the absorbance was measured at 405 nm. The absorbance after treatment with Lactobacillus gasseri of each type was compared with the negative control group and converted into a percentage to demonstrate the level of degranulation inhibition.

[173] [173]

[174] В результате, как можно видеть на фиг. 3 и в таблице 1, KBL697 демонстрировал количественное снижение секреции β-гексозаминидазы до 4-кратного по сравнению с другими штаммами Lactobacillus gasseri, для которых подтвержденный эффект был ниже по сравнению с доступным для приобретения антигистаминным агентом кетотифеном - положительным контролем. В результате обнаружено, что KBL697 демонстрировал замечательную активность в отношении предотвращения дегрануляции для эффективного смягчения симптомов аллергии, вызванных избыточной секрецией гистамина.[174] As a result, as can be seen in FIG. 3 and Table 1, KBL697 demonstrated a quantitative reduction in β-hexosaminidase secretion up to 4-fold compared to other Lactobacillus gasseri strains, for which the confirmed effect was lower compared to the commercially available antihistamine agent ketotifen, a positive control. The result found that KBL697 exhibited remarkable anti-degranulation activity to effectively alleviate allergy symptoms caused by excess histamine secretion.

[175] [175]

[176] [176]

Таблица 1Table 1

ВидView Штамм или лекарственное средство, используемое для обработкиStrain or drug used for treatment β-гексозаминидаза (кратность изменения)β-hexosaminidase (fold change) - (Отрицательный контроль)- (Negative control) Буфер СираганянаSiraganyan buffer 1,01.0 - (Положительный контроль)- (Positive control) КетотифенKetotifen 0,38610.3861 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL697KBL697 0,22130.2213 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL695KBL695 0,46010.4601 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL698KBL698 0,46200.4620 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL685KBL685 0,44500.4450 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL686KBL686 0,42130.4213 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL688KBL688 0,45710.4571 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri KBL373KBL373 0,56910.5691 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri SNUG50243SNUG50243 0,53090.5309 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri SNUG60080SNUG60080 1,00911.0091 Lactobacillus gasseriLactobacillus gasseri SNUG60134SNUG60134 0,92360.9236

[177][177]

[178] Пример 3. Анализ иммунорегуляторных эффектов и эффектов ингибирования воспаления KBL697[178] Example 3 Analysis of the Immunoregulatory and Inflammation Inhibitory Effects of KBL697

[179] В дополнение к антиаллергической эффективности KBL697, также проверяли его иммунорегуляторные эффекты и эффекты ингибирования воспаления. С этой целью измеряли соотношение между ИЛ-10, типичным цитокином, обладающим иммуномодулирующей функцией, и ФНО-α и ИЛ-6, представляющими собой цитокины - основные индикаторы воспалительной реакции (ИЛ-10/ФНО-α, ИЛ-10/ИЛ-6), с использованием макрофагов, играющих важную роль в воспалительной реакции.[179] In addition to the antiallergic efficacy of KBL697, its immunoregulatory and inflammation-inhibiting effects were also tested. For this purpose, we measured the ratio between IL-10, a typical cytokine with an immunomodulatory function, and TNF-α and IL-6, which are cytokines that are the main indicators of the inflammatory response (IL-10/TNF-α, IL-10/IL-6 ), using macrophages, which play an important role in the inflammatory response.

[180] [180]

[181] 3-1. Инкубирование линий клеток RAW264.7[181] 3-1. Incubation of RAW264.7 cell lines

[182] Клетки RAW264.7 (ATCC NO. TIB -71) культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS, пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO2, а затем пересевали раз в три дня. Инкубированные клетки RAW264.7 высевали на 24-луночный планшет в концентрации 1 × 10⁵ клеток/лунку, затем культивировали в течение 16 - 20 часов, а затем использовали для примера 3-3.[182] RAW264.7 cells (ATCC NO. TIB -71) were cultured in DMEM supplemented with 10% FBS, penicillin (100 μg/ml), and streptomycin (100 μg/ml) at 37 °C in an atmosphere of 5% CO2 , and then replanted every three days. The incubated RAW264.7 cells were seeded into a 24-well plate at a concentration of 1 x 10 ⁵ cells/well, then cultured for 16 - 20 hours, and then used for Example 3-3.

[183] [183]

[184] 3-2. Инкубирование штаммов и получение образцов[184] 3-2. Incubation of strains and obtaining samples

[185] Культуральные растворы корректировали из расчета одинакового количества живых бактерий, а затем получали в виде трех образцов: живых бактерий, бактерий после пастеризации и бактерий, убитых нагреванием. Образцы живых бактерий, бактерий после пастеризации и бактерий, убитых нагреванием получали в соответствии со способом, использованным в примере 1-2. Затем на образец для пастеризации воздействовали температурой 70 °C в течение 30 минут, и получали образец с использованием того же процесса центрифугирования. Образец бактерий, убитых нагреванием, стерилизовали при 121 °C в течение 15 минут, и получали с использованием того же процесса. В качестве группы отрицательного контроля использовали среду MRS с добавлением 0,5% цистеина.[185] Culture solutions were adjusted to equal numbers of live bacteria and then prepared as three samples: live bacteria, pasteurized bacteria, and heat-killed bacteria. Samples of live bacteria, pasteurized bacteria and heat-killed bacteria were prepared according to the method used in Example 1-2. The pasteurization sample was then exposed to 70 °C for 30 minutes, and the sample was obtained using the same centrifugation process. The heat-killed bacteria sample was sterilized at 121°C for 15 minutes and prepared using the same process. MRS medium supplemented with 0.5% cysteine was used as a negative control group.

[186] [186]

[187] 3-3. Обработка штаммов и измерение количества секретированных воспалительных цитокинов после индукции воспалительных реакций[187] 3-3. Treatment of strains and measurement of secreted inflammatory cytokines after induction of inflammatory responses

[188] Для индукции воспалительных реакций в клетках RAW264.7 ранее высеянных на 24-луночный планшет, каждую лунку обрабатывали 500 мкл LPS (20 нг/мл). Затем выполняли обработку 300 мкл ранее полученных штаммов в соотношении клетки:штамм, равном 1:10, и инкубировали в течение 24 часов в инкубаторе с атмосферой 5% CO₂ при 37 °C. Надосадочную жидкость культивированной смеси клетки-штамм собирали и использовали набор для твердофазного ИФА ФНО мыши (Mouse TNF ELISA Set II, № в каталоге 558534, BD OptEIA™), набор для твердофазного ИФА ИЛ-6 мыши (Mouse IL-6 ELISA Set, № в каталоге 555240, BD OptEIA™) и набор для твердофазного ИФА ИЛ-6 мыши (Mouse IL-10 ELISA Set, Cat No. 555252, BD OptEIA™) для измерения количества каждого цитокина в соответствии с инструкциями производителя.[188] To induce inflammatory responses in RAW264.7 cells previously seeded in a 24-well plate, each well was treated with 500 μl of LPS (20 ng/ml). Then, 300 μl of previously obtained strains were treated at a cell:strain ratio of 1:10 and incubated for 24 hours in an incubator with an atmosphere of 5% CO ₂ at 37 °C. The supernatant of the cultured cell-strain mixture was collected and a mouse TNF ELISA Set II, cat. no. 558534, BD OptEIA™, a mouse IL-6 ELISA Set, no. Catalog 555240, BD OptEIA™) and a mouse IL-6 ELISA kit (Mouse IL-10 ELISA Set, Cat No. 555252, BD OptEIA™) to measure each cytokine according to the manufacturer's instructions.

[189] [189]

[190] В результате, как показано на фиг. 4, получили подтверждение того, что среди штаммов Lactobacillus gasseri KBL697 особенно эффективно индуцировал секрецию ИЛ-10 и тем самым оказывал замечательный эффект с точки зрения иммунорегуляции и подавления воспалительной реакции. Как показано на фиг. 5 и 6, на основании способности к секреции ИЛ-10 с поправкой на провоспалительные цитокины ФНО-α и ИЛ-6 получили подтверждение того, что группа, обработанная KBL697, демонстрировала значительно усиленный эффект подавления воспаления способность к иммунорегуляции по сравнению с контрольной группой. Соответственно, обнаружено, что KBL697 обладал иммунорегуляторной и противовоспалительной активностью за счет секреции IL-10. Кроме того, эти эффекты аналогичным образом подтвердили не только у живых бактерий, но и у бактерий после пастеризации или бактерий, убитых нагреванием (см. таблицу 2 и таблицу 3), что указывает на возможность использования KBL697 для подавления воспалительных реакций в различных формах, например, в форме мертвых бактерий.[190] As a result, as shown in FIG. 4, obtained confirmation that among Lactobacillus gasseri strains, KBL697 was particularly effective in inducing the secretion of IL-10 and thereby had a remarkable effect in terms of immunoregulation and suppression of the inflammatory response. As shown in FIG. 5 and 6, based on IL-10 secretion ability adjusted for the pro-inflammatory cytokines TNF-α and IL-6, confirmed that the KBL697-treated group exhibited a significantly enhanced inflammatory suppression effect and immunoregulatory ability compared with the control group. Accordingly, KBL697 was found to have immunoregulatory and anti-inflammatory activities through the secretion of IL-10. Moreover, these effects were similarly confirmed not only in live bacteria, but also in pasteurized bacteria or heat-killed bacteria (see Table 2 and Table 3), indicating the possibility of using KBL697 to suppress inflammatory responses in various forms, e.g. , in the form of dead bacteria.

[191] [191]

[192] Таблица 2[192] Table 2

ИЛ-10/ФНО-αIL-10/TNF-α ЖивыеAlive Убитые нагреваниемKilled by Heat ПастеризованныеPasteurized КонтрольControl -2,4509342 (Н/О)-2.4509342 (N/O) -2,0474707 (Н/О)-2.0474707 (N/A) -1,9242497 (Н/О)-1.9242497 (N/A) KBL697KBL697 1,811143951.81114395 6,281303886.28130388 4,435158474.43515847

Н/О: не определялиN/A: not determined

[193] Таблица 3[193] Table 3

ИЛ-10/ИЛ-6IL-10/IL-6 ЖивыеAlive Убитые нагреваниемKilled by Heat ПастеризованныеPasteurized КонтрольControl -6,010433 (Н/О)-6.010433 (N/O) -4,6669667(Н/О)-4.6669667(N/O) -4,5960301 (Н/О)-4.5960301 (N/A) KBL697KBL697 2,47095382.4709538 8,16652688.1665268 5,654890035.65489003

Н/О: не определялиN/A: not determined

[194] [194]

[195] Пример 4. Анализ противогрибкового действия KBL697[195] Example 4 Antifungal Analysis of KBL697

[196] Противогрибковое действие KBL697 подтверждали с помощью капельного анализа. Приблизительно 1% KBL697 инокулировали в жидкую среду MRS, а затем инкубировали в инкубаторе при 37 °C в течение приблизительно 24 часов в анаэробных условиях для стационарного культивирования. Капли культурального раствора, в котором инкубировали клетки, наносили на твердую среду MRS, полученную в анаэробных условиях, в количестве 10 мкл за раз, а затем инкубировали при 37 °C в анаэробных условиях в течение приблизительно 24 часов. Malassezia furfur KCTC 7545, микроскопический грибок, получали путем посева в жидкую среду mYPG, полученную в аэробных условиях, в количестве 1% с последующим инкубированием в инкубаторе при 37 °C в течение приблизительно 24 - 48 часов. Мягкий агар mYPG для использования при оценке противогрибковой эффективности получали с добавлением компонентов, указанных в таблице 4, и 2,5 мл полученной культуральной среды засевали культуральным раствором, в котором инкубировали 500 мкл M. furfur. 2,5 мл мягкого агара mYPG, засеянного M. furfur, выливали на среду MRS с нанесенными каплями KBL697 и высушивали в течение 1 часа. Высушенную среду инкубировали в аэробных условиях C в инкубаторе при 37 °C в течение 24 - 48 часов. При выявлении чистой зоны в культуральной среде определяли противогрибковую активность путем измерения расстояния от внешней границы нанесенной капли с молочнокислыми бактериями до чистой зоны. Чистая зона представляет собой область с ингибированным ростом грибов, и противогрибковую активность молочнокислых бактерий определяли на основании расстояния до чистой зоны.[196] The antifungal effect of KBL697 was confirmed using a droplet assay. Approximately 1% KBL697 was inoculated into liquid MRS medium and then incubated in an incubator at 37 °C for approximately 24 h under anaerobic conditions for steady-state culture. Drops of the culture solution in which the cells were incubated were applied to anaerobically prepared MRS solid medium at a rate of 10 μl at a time and then incubated at 37°C anaerobically for approximately 24 hours. Malassezia furfur KCTC 7545, a microscopic fungus, was obtained by inoculation into aerobically prepared mYPG liquid medium at 1% followed by incubation in an incubator at 37°C for approximately 24 to 48 hours. mYPG soft agar for use in assessing antifungal efficacy was prepared with the addition of the components listed in Table 4, and 2.5 ml of the resulting culture medium was inoculated with a culture solution in which 500 μl of M. furfur was incubated. 2.5 ml mYPG soft agar inoculated with M. furfur was poured onto MRS medium coated with KBL697 drops and dried for 1 hour. The dried medium was incubated under aerobic conditions C in an incubator at 37 °C for 24 - 48 hours. When a clean zone was identified in the culture medium, antifungal activity was determined by measuring the distance from the outer boundary of the applied drop with lactic acid bacteria to the clean zone. The clean zone is an area where fungal growth is inhibited, and the antifungal activity of lactic acid bacteria was determined based on the distance to the clean zone.

[197] В результате трех повторных экспериментов выявили чистые зоны с интервалом приблизительно 6,00 мм в области нанесенных капель KBL697 (фиг. 7), что указывало на способность KBL697 эффективно подавлять рост микроскопических грибов.[197] Three replicate experiments revealed clear zones at approximately 6.00 mm intervals in the region of KBL697 droplets applied (Figure 7), indicating the ability of KBL697 to effectively inhibit the growth of microscopic fungi.

[198] [198]

[199] Таблица 4[199] Table 4

КомпонентыComponents Доля (г/л)Share (g/l) Солодовый экстрактMalt extract 5,05.0 ПептонPeptone 10,010.0 ГлюкозаGlucose 20,020.0 Твин-40Twin-40 1,01.0 Твин-80Twin-80 1,01.0 АгарAgar 4,54.5

[200] [200]

[201] Пример 5. Влияние KBL697 на смягчение атопических состояний[201] Example 5: Effect of KBL697 in Mitigating Atopic Conditions

[202] С целью проверки смягчающего влияния на атопические состояния в ряду эффектов KBL697, улучшающих состояние при аллергии, использовали мышей NC/Nga - модель атопического заболевания кожи у животных.[202] NC/Nga mice, an animal model of atopic skin disease, were used to test the allergy-improving effects of KBL697 on atopic conditions.

[203] После разделения мышей NC/Nga на группы по пять мышей на спине каждой мыши от нижней части уха до верхней части хвоста удаляли шерсть и оставляли мышей на 24 часа. Затем на область с удаленной шерстью наносили 200 мкл 1% раствора DNCB (динитрохлорбензола) (ацетон: оливковое масло = 3:1) два раза в неделю для индукции атопического дерматита. С третьей недели индукции дерматита мышам в контрольной группе раз в день перорально вводили 200 мкл PBS; культивируемый штамм KBL697 центрифугировали, промывали путем разбавления PBS и восстановления, а затем получали образцы, содержавшие по меньшей мере 2 × 10⁹ (KBL697-9) / 2 × 10⁸ (KBL697-8) / 2 × 10⁷ (KBL697-7) КОЕ на 200 мкл PBS, которые перорально вводили мышам в экспериментальной группе в количестве 200 мкл/день. При этом мышам в группе положительного контроля вводили 200 мкл дексаметазона (60 мкг/мл). Затем в течение трех недель введения бактерий еженедельно измеряли балльный показатель дерматита у мышей в контрольной и экспериментальных группах, и на 3 неделе после введения бактерий измеряли время почесывания мышей, толщину кожи и концентрацию IgE в крови после выполнения аутопсии.[203] After dividing the NC/Nga mice into groups of five mice, hair was removed from the back of each mouse from the bottom of the ear to the top of the tail and the mice were left for 24 hours. Then, 200 μl of 1% DNCB (dinitrochlorobenzene) solution (acetone:olive oil = 3:1) was applied to the dehaired area twice a week to induce atopic dermatitis. From the third week of dermatitis induction, mice in the control group were orally administered 200 μL of PBS once daily; The cultured strain KBL697 was centrifuged, washed by dilution with PBS and reconstitution, and then samples containing at least 2 × 10 ⁹ (KBL697-9) / 2 × 10 ⁸ (KBL697-8) / 2 × 10 ⁷ (KBL697-7) were obtained. CFU per 200 μl of PBS, which were orally administered to mice in the experimental group at a rate of 200 μl/day. In this case, mice in the positive control group were injected with 200 μl of dexamethasone (60 μg/ml). Then, during three weeks of bacterial administration, dermatitis scores were measured weekly in mice in the control and experimental groups, and at week 3 after bacterial administration, mice scratching time, skin thickness, and blood IgE concentrations were measured after necropsy.

[204] [204]

[205] 5-1. Выполнение балльной оценки дерматита[205] 5-1. Performing a Dermatitis Score

[206] Для оценки поражений кожи, вызванных DNCB, измеряли балльный показатель дерматита следующим образом. Состояние кожи отслеживали, получая снимки в течение 3 недель с недельным интервалом, начиная с 3 недели после введения штамма. Проверяли четыре показателя - сухость, отек, эритему/кровотечение и эрозию/отделение кожи. Состояние без поражений оценивали как 0 баллов, легкое состояние - как 1 балл, умеренное состояние - как 2 балла, а тяжелое состояние - как 3 балла, и выполняли оценку общего балльного показателя.[206] To evaluate skin lesions caused by DNCB, a dermatitis score was measured as follows. The skin condition was monitored by taking images for 3 weeks at weekly intervals, starting 3 weeks after strain administration. Four parameters were checked - dryness, edema, erythema/bleeding and skin erosion/separation. The unaffected condition was scored as 0 points, the mild condition as 1 point, the moderate condition as 2 points, and the severe condition as 3 points, and the overall score was assessed.

[207] В результате, как показано на фиг. 8, балльный показатель дерматита, вызванного DNCB, значимо снижался в группе, получавшей штамм KBL697, по сравнению с контрольной группой (отрицательный контроль), где индуцировали атопический дерматит, и, в частности, экспериментальная группа (KBL697-9), получавшая KBL697 в количестве 2 × 10⁹ КОЕ, демонстрировала даже более низкий балльный показатель дерматита по сравнению с положительной контрольной группой, получавшей дексаметазон. В результате проверили эффект лечения атопического дерматита при введении штамма KBL697.[207] As a result, as shown in FIG. 8, the DNCB dermatitis score was significantly reduced in the group receiving the KBL697 strain compared with the control group (negative control) where atopic dermatitis was induced, and in particular the experimental group (KBL697-9) receiving KBL697 in an amount 2 × 10 ⁹ CFU, showed an even lower dermatitis score compared to the positive control group receiving dexamethasone. As a result, the effect of treating atopic dermatitis with the introduction of the KBL697 strain was tested.

[208] [208]

[209] 5-2 Влияние на облегчение зуда[209] 5-2 Effect on itch relief

[210] С целью проверки смягчающего влияния на зуд при введении штамма KBL697 моделям мышей, страдающим атопическим дерматитом, вызванным DCNB, измеряли время почесывания, снимая видеозапись моделей мыши в течение 10 минут через 3 недели после введения штамма.[210] To test the alleviating effect on itch when administered strain KBL697 to mouse models suffering from atopic dermatitis caused by DCNB, scratching time was measured by video recording the mouse models for 10 minutes 3 weeks after strain administration.

[211] В результате, как можно видеть на фиг. 9, оказалось, что время почесывания значимо снизилось во всех экспериментальных группах, получавших KBL697, по сравнению с группой, получавшей PBS, что подтвердило выраженное смягчение симптомов зуда при атопическом дерматите за счет введения штамма KBL697.[211] As a result, as can be seen in FIG. 9, scratching time was found to be significantly reduced in all experimental groups receiving KBL697 compared with the PBS group, which confirmed the significant alleviation of the symptoms of itching in atopic dermatitis due to the administration of the KBL697 strain.

[212] [212]

[213] 5-3. Уменьшение толщины кожи[213] 5-3. Reduced skin thickness

[214] С целью проверки эффекта уменьшения толщины кожи после введения KBL697 моделям мышей, страдающим атопическим дерматитом, вызванным DCNB, штангенциркулем измеряли толщину уха мыши и толщину кожи на спине через три недели после введения штамма и наблюдали снижение симптомов отека вследствие атопического дерматита.[214] To test the effect of reducing skin thickness after administration of KBL697 to mouse models suffering from atopic dermatitis caused by DCNB, the thickness of the mouse's ear and the thickness of the skin on the back were measured with a caliper three weeks after the introduction of the strain and a decrease in symptoms of edema due to atopic dermatitis was observed.

[215] В результате, как можно видеть на фиг. 10 и 11, наблюдали значимое снижение толщины уха и кожи на спине в экспериментальной группе, получавшей KBL697, и группе положительного контроля.[215] As a result, as can be seen in FIG. 10 and 11, observed a significant reduction in ear and dorsal skin thickness in the experimental group receiving KBL697 and the positive control group.

[216] [216]

[217] 5-4. Уменьшение концентрации IgE в крови[217] 5-4. Decrease in IgE concentration in the blood

[218] Обнаружено, что концентрация IgE у пациентов с атопическим дерматитом в основном увеличивалась с увеличением клинической тяжести атопического дерматита (Matsumoto M, J. Immunol. 1999). Поэтому концентрацию IgE, типичного гематологического фактора, появляющегося при атопическом дерматите, измеряли путем сбора крови через три недели после введения штамма, отделяя сыворотку и используя набор для твердофазного ИФА IgE мыши (№ по каталогу 555248, BD OptEIA™).[218] IgE concentrations in patients with atopic dermatitis were found to generally increase with increasing clinical severity of atopic dermatitis (Matsumoto M, J. Immunol. 1999). Therefore, the concentration of IgE, a typical hematologic factor found in atopic dermatitis, was measured by collecting blood three weeks after strain administration, separating the serum, and using a mouse IgE ELISA kit (cat. no. 555248, BD OptEIA™).

[219] В результате, как показано на фиг. 12, обнаружили, что концентрация IgE в крови значимо снижалась в экспериментальной группе, перорально получавшей KBL697, что указывало на противоаллергический эффект после введения KBL697.[219] As a result, as shown in FIG. 12 found that the concentration of IgE in the blood was significantly reduced in the experimental group receiving KBL697 orally, indicating an antiallergic effect after administration of KBL697.

[220] [220]

[221] Пример 6. Влияние KBL697 на укрепление плотных контактов клеток брыжейки[221] Example 6. Effect of KBL697 on strengthening tight junctions of mesenteric cells

[222] В случае пациентов с колитом экспрессия белков, вовлеченных в формирование плотных контактов энтероцитов, снижается, что приводит к более высокой проницаемости клеток и, таким образом, к увеличению тяжести воспалительных реакций (J. Landy, World J. Gastroenterol., 2016). В связи с этим в настоящем изобретении выполнена попытка проверки способности KBL697 усиливать плотные контакты в линиях клеток Caco-2 - типичной модели эпителиальных клеток кишечника.[222] In patients with colitis, the expression of proteins involved in the formation of enterocyte tight junctions is reduced, leading to higher cell permeability and thus increased severity of inflammatory reactions (J. Landy, World J. Gastroenterol., 2016) . In this regard, the present invention attempts to test the ability of KBL697 to enhance tight junctions in Caco-2 cell lines, a typical model of intestinal epithelial cells.

[223] [223]

[224] 6-1. Инкубирование линий клеток Caco-2[224] 6-1. Incubation of Caco-2 cell lines

[225] Клетки Caco-2 (ATCC NO. HTB -37) инкубировали в среде MEM с добавлением 10% FBS, пенициллина (100 мкг/мл), и стрептомицина (100 мкг/мл) при 37 °C в атмосфере 5% CO₂, заменяя среду раз в 2 суток, а затем пересевали раз в 4 дня.[225] Caco-2 cells (ATCC NO. HTB -37) were incubated in MEM supplemented with 10% FBS, penicillin (100 μg/ml), and streptomycin (100 μg/ml) at 37 °C in an atmosphere of 5% CO ₂ , replacing the medium every 2 days, and then subcultured every 4 days.

[226] [226]

[227] 6-2. Измерение плотного контакта[227] 6-2. Tight contact measurement

[228] 200 мкл клеток Caco-2 высевали в верхний слой 24-луночного планшета Transwell (Corning, США) в концентрации 3 × 10⁵ клеток/мл, а затем инкубировали в течение семи дней. На следующий день после замены среды на среду, содержащую только MEM без FBS, клетки инкубировали в течение ночи и вставляли в них набор палочковидных электродов для измерения TEER (трансэпителиального электрического сопротивления) с помощью вольтомметра для эпителиальной ткани EVOM Epithelial Tissue Voltohmmeter (World Precision Instruments, Флорида, США) (0 ч TEER). Затем выполняли обработку штаммами так, чтобы соотношение клетки:штамм составляло 1:100, и инкубировали в течение 24 часов, а затем измеряли TEER (24 ч TEER).[228] 200 μl of Caco-2 cells were seeded into the top layer of a 24-well Transwell plate (Corning, USA) at a concentration of 3 × 10 ⁵ cells/ml and then incubated for seven days. The day after changing the medium to medium containing only MEM without FBS, the cells were incubated overnight and a set of rod electrodes were inserted into them to measure TEER (transepithelial electrical resistance) using an EVOM Epithelial Tissue Voltohmmeter (World Precision Instruments, Florida, USA) (0 h TEER). The strains were then treated so that the cell:strain ratio was 1:100 and incubated for 24 hours, and then the TEER was measured (24 h TEER).

[229] После расчета по уравнению:[229] After calculation using the equation:

TEER (Ом·см²) = (сопротивление (Ом) – фоновое сопротивление (Ом)) × площадь мембраны (см²), использовали следующее уравнение:TEER (Ohm cm ² ) = (resistance (Ohm) – background resistance (Ohm)) × membrane area (cm ² ), the following equation was used:

[230] Изменение TEER (%) = 24 ч TEER (Ом·см²)/0 ч TEER (Ом·см²) × 100[230] TEER change (%) = 24 h TEER (Ohm cm ² )/0 h TEER (Ohm cm ² ) × 100

[231] В результате, как показано на фиг. 13, линии клеток Caco-2, обработанные KBL697, демонстрировали усиление плотных контактов на 20% по сравнению с контрольной группой, что указывало на то, что KBL697 оказывает влияние на восстановление ослабленных межклеточных контактов между энтероцитами при колите. С другой стороны, такой эффект не обнаруживался у других штаммов Lactobacillus gasseri - KBL342 и KBL381.[231] As a result, as shown in FIG. 13, Caco-2 cell lines treated with KBL697 exhibited a 20% increase in tight junctions compared with the control group, indicating that KBL697 has an effect on restoring weakened intercellular junctions between enterocytes in colitis. On the other hand, such an effect was not found in other strains of Lactobacillus gasseri - KBL342 and KBL381.

[232] [232]

[233] Пример 7. Терапевтический и профилактический эффект KBL697 по отношению к колиту[233] Example 7: Therapeutic and prophylactic effect of KBL697 on colitis

[234] С целью проверки терапевтического действия KBL697 при колите использовали модели мышей с индуцированным колитом. С этой целью модельных мышей разделили на группы по пять мышей C57BL/6, а затем давали им водопроводную воду с 3% раствором DSS в течение 5 дней, тем самым вызывая у них колит. Затем мышам в группе положительного контроля перорально вводили стероидное лекарственное средство преднизолон в 200 мкл PBS из расчета 1 мг/кг/сут, а мышам в экспериментальной группе ежедневно перорально вводили 200 мкл штамма KBL697, полученного таким же образом, что и в примере 5, а затем разбавленного до концентрации 5 × 10⁹ КОЕ/мл, 5 × 10⁸ КОЕ/мл и 5 × 10⁷ КОЕ/мл. Мышам в контрольной группе перорально вводили 200 мкл PBS раз в день. PBS, использованный в данном примере, получали с добавлением 0,05% цистеина для исключения влияния небольших количеств цистеина, содержащихся в композиции культурального раствора штамма и остававшегося в ней даже после отмывки, в соответствии с сообщением о том, что цистеин ассоциирован с противовоспалительными эффектами в некоторых клетках (Hasegawa, S et al., Clin Exp Immunol. 2012, 167, 269-27). С дня начала потребления DSS до 21 дня ежедневно измеряли изменения массы мышей в контрольной группе и экспериментальной группе, а на 21 день после подачи DSS мышей подвергали аутопсии с целью измерения длины толстой кишки.[234] To test the therapeutic effect of KBL697 on colitis, mouse models of induced colitis were used. To this end, model mice were divided into groups of five C57BL/6 mice and then given tap water containing 3% DSS for 5 days, thereby inducing colitis. Then, mice in the positive control group were orally administered the steroid drug prednisolone in 200 μl of PBS at the rate of 1 mg/kg/day, and mice in the experimental group were orally administered daily with 200 μl of strain KBL697 obtained in the same way as in Example 5, and then diluted to a concentration of 5 × 10 ⁹ CFU/ml, 5 × 10 ⁸ CFU/ml and 5 × 10 ⁷ CFU/ml. Mice in the control group were orally administered 200 μL of PBS once a day. The PBS used in this example was prepared with the addition of 0.05% cysteine to eliminate the influence of small amounts of cysteine contained in the strain culture solution composition and remaining in it even after washing, in accordance with the report that cysteine is associated with anti-inflammatory effects in some cells (Hasegawa, S et al., Clin Exp Immunol. 2012, 167, 269-27). From the day of DSS consumption until day 21, changes in the weight of mice in the control group and experimental group were measured daily, and on day 21 after DSS supplementation, mice were autopsied to measure colon length.

[235] В результате, как показано на фиг. 14, обнаружили, что у мышей с индуцированным колитом, получавших 1 × 10⁹ КОЕ KBL697, как и у мышей в контрольной группе, масса тела быстро снижалась до 10 дня, а затем постепенно восстанавливалась, достигая нормального уровня на 21 день. В частности, как показано на фиг. 15, обнаружили, что у мышей, которым перорально вводили 1 × 10⁹ КОЕ KBL697 (KBL697 × 10^9), длина толстой кишки восстанавливалась до 90% уровня по сравнению с группой, не подвергавшейся воздействию, а симптом уменьшения длины толстой кишки значительно смягчался, составляя менее 80% по сравнению с группой отрицательного контроля. В результате обнаружили, что KBL697 демонстрировал эффект улучшения состояния при колите.[235] As a result, as shown in FIG. 14 found that mice with induced colitis treated with 1 × ¹⁰⁹ CFU of KBL697, like mice in the control group, rapidly decreased body weight until day 10 and then gradually recovered, reaching normal levels by day 21. In particular, as shown in FIG. 15 found that in mice orally administered 1 × ¹⁰⁹ CFU of KBL697 (KBL697 × 10^9), colon length was restored to 90% of the level compared to the unexposed group, and the symptom of decreased colon length was significantly alleviated , being less than 80% compared to the negative control group. The result found that KBL697 showed an effect on improving colitis.

[236] [236]

[237] Пример 8. Терапевтический и профилактический эффект KBL697 по отношению к псориазу[237] Example 8: Therapeutic and prophylactic effect of KBL697 on psoriasis

[238] Для проверки влияния KBL697 на смягчение псориаза использовали модельных мышей Balb/c.[238] Balb/c mouse model was used to test the effect of KBL697 in alleviating psoriasis.

[239] После разделения мышей Balb/c на группы по пять особей мышам контрольной группы перорально вводили 200 мкл PBS раз в день в течение десяти дней, тогда как мышам в экспериментальной группе перорально вводили раз в день 200 мкл каждого исследуемого штамма, разбавленного PBS до концентрации не менее 1 × 10⁹ КОЕ/0,2 мл. Штаммы и контрольную группу получали таким же образом, как в примере 7. Через две недели после введения бактерий на спине каждой мыши удаляли шерсть от нижней части уха до середины спины, после чего мышей оставляли на 24 часа. Затем на часть тела с удаленной шерстью раз в день наносили 62,5 мг 5% крема имиквимода, вызывая псориаз. После индукции псориаза мышам в группе положительного контроля ежедневно вводили 200 мкл дексаметазона (0,25 мг/мл). Аналогичное количество KBL697 ежедневно вводили даже во время индукции псориаза. В течение десяти дней в ходе индукции псориаза с двухдневными интервалами измеряли площадь, пораженную псориазом, и индекс тяжести (PASI) мышей в контрольной и экспериментальной группах, а на 10 день после индукции псориаза измеряли толщину кожи у каждой мыши, после чего мышь подвергали аутопсии для определения концентрации цитокинов в тканях кожи и в крови.[239] After dividing Balb/c mice into groups of five, mice in the control group were orally administered 200 μl of PBS once daily for ten days, while mice in the experimental group were orally administered once daily with 200 μl of each test strain diluted in PBS to concentrations of at least 1 × 10 ⁹ CFU/0.2 ml. The strains and the control group were prepared in the same manner as in Example 7. Two weeks after the introduction of bacteria, the hair from the bottom of the ear to the middle of the back was removed from the back of each mouse, after which the mice were left for 24 hours. Then 62.5 mg of 5% imiquimod cream was applied to the dehaired part of the body once a day to induce psoriasis. After psoriasis induction, mice in the positive control group were administered 200 μL of dexamethasone (0.25 mg/mL) daily. A similar amount of KBL697 was administered daily even during psoriasis induction. During ten days of psoriasis induction, the psoriasis area and severity index (PASI) of mice in the control and experimental groups were measured at two-day intervals, and on the 10th day after psoriasis induction, the skin thickness of each mouse was measured, after which the mouse was necropsied for determining the concentration of cytokines in skin tissues and blood.

[240] [240]

[241] 8-1. Измерение PASI и изменений толщины кожи[241] 8-1. Measuring PASI and changes in skin thickness

[242] Для оценки псориатических поражений кожи, вызванных имиквимодом, измеряли показатель PASI следующим образом. Проверяли три показателя: эритему, шелушение и толщину кожи. Состояние без поражений оценивали как 0 баллов, легкое состояние - как 1 балл, умеренное состояние - как 2 балла, тяжелое состояние - как 3 балла, а очень тяжелое состояние - как 4 балла, и выполняли оценку общего балльного показателя.[242] To evaluate psoriatic skin lesions caused by imiquimod, PASI was measured as follows. Three indicators were checked: erythema, peeling and skin thickness. The unaffected condition was scored as 0 points, the mild condition as 1 point, the moderate condition as 2 points, the severe condition as 3 points, and the very severe condition as 4 points, and the overall score was assessed.

[243] В результате, как показано на фиг. 16 (A), PASI был значительно понижен в группе с псориазом, индуцированным имиквимодом, получавшей дозу KBL697, аналогично группе положительного контроля, получавшей дексаметазон (DXM), по сравнению с контрольной группой (NC) мышей с индуцированным псориазом. Кроме того, в результате измерения толщины кожи уха и спины мышей с помощью штангенциркуля и наблюдения за эффектом ослабления симптома отека, вызванного псориазом, как показано на фиг. 16(B), обнаружили, что толщина кожи уха и спины значительно уменьшилась в экспериментальной группе, получавшей дозу KBL697, аналогично группе положительного контроля.[243] As a result, as shown in FIG. 16(A), PASI was significantly reduced in the imiquimod-induced psoriasis group dosed with KBL697, similar to the dexamethasone (DXM)-treated positive control group, compared with the control (NC) group of psoriasis-induced mice. In addition, by measuring the skin thickness of the ear and back of mice using a caliper and observing the effect of reducing the symptom of swelling caused by psoriasis, as shown in FIG. 16(B) found that the skin thickness of the ear and back was significantly decreased in the experimental group dosed with KBL697, similar to the positive control group.

[244] [244]

[245] 8-2. Измерение цитокинов[245] 8-2. Cytokine measurement

[246] Известно, что в развитии и обострении симптомов псориаза важную роль играют реакции цитокинов Th1, например, ИФН-γ и ФНО-α, а также ответы Th17, в типичном случае - IL-17 (Brembilla NC, Front Immunol. 2018). Мышей с псориазом, индуцированным имиквимодом, подвергали аутопсии для определения концентрации цитокинов в тканях кожи и в крови. Концентрацию цитокинов определяли с использованием образца белка, полученного из тканей кожи, и образца сыворотки, полученного из крови, так же, как в примере 5-4, с использованием набора для твердофазного ИФА ФНО-α мыши (№ в каталоге 555138, BD OptEIA™), набора для твердофазного ИФА ИФН-γ мыши (№ в каталоге 558534, BD OptEIA™), набора для твердофазного ИФА IgE мыши (№ в каталоге 555248, BD OptEIA™) и набора для твердофазного ИФА ИЛ-17 DuoSet (№ в каталоге DY421-05, R&D SYSTEMS).[246] It is known that Th1 cytokine responses, such as IFN-γ and TNF-α, as well as Th17 responses, typically IL-17, play an important role in the development and exacerbation of psoriasis symptoms (Brembilla NC, Front Immunol. 2018) . Mice with imiquimod-induced psoriasis were necropsied to determine cytokine concentrations in skin tissue and blood. Cytokine concentrations were determined using a protein sample obtained from skin tissue and a serum sample obtained from blood in the same manner as in Example 5-4 using the Mouse TNF-α ELISA Kit (cat. no. 555138, BD OptEIA™ ), Mouse IFN-γ ELISA Kit (cat. no. 558534, BD OptEIA™), Mouse IgE ELISA kit (cat. no. 555248, BD OptEIA™), and IL-17 DuoSet ELISA kit (cat. no. DY421-05, R&D SYSTEMS).

[247] Как можно видеть на фиг. 17, получено подтверждение того, что уровни воспалительных цитокинов, например, ФНО-α и ИФН-γ, повышенные в тканях кожи у мышей с индуцированным псориазом, снижались за счет KBL697. Кроме того, получено подтверждение того, что уровень Th17-специфичного ИЛ-17 также увеличивался в тканях кожи и сыворотке при индукции псориаза, но снижался при введении KBL697. В результате получили подтверждение возможности снижения уровня воспалительных цитокинов, повышающихся, в частности, в начале развития псориаза, за счет введения KBL697, и продемонстрированы терапевтические или профилактические эффекты в отношении данного заболевания за счет эффекта ослабления признаков.[247] As can be seen in FIG. 17, confirmed that the levels of inflammatory cytokines, such as TNF-α and IFN-γ, increased in skin tissues of mice with induced psoriasis, were reduced by KBL697. In addition, it was confirmed that the level of Th17-specific IL-17 also increased in skin tissues and serum upon induction of psoriasis, but decreased upon administration of KBL697. The results confirmed the possibility of reducing the level of inflammatory cytokines, which increase, in particular, at the beginning of the development of psoriasis, due to the administration of KBL697, and demonstrated therapeutic or preventive effects in relation to this disease due to the effect of weakening the symptoms.

[248] [248]

[249] Пример 9. Терапевтический и профилактический эффект по отношению к колиту при одновременном введении антител для лечения колита и KBL697[249] Example 9. Therapeutic and prophylactic effect on colitis when administered simultaneously with antibodies for the treatment of colitis and KBL697

[250] Инфликсимаб (название продукта Remicade) представляет собой лекарственное средство на основе терапевтического рекомбинантного антитела, используемый в виде инъекций при таких аутоиммунных заболеваниях, как ревматоидный артрит, анкилозирующий спондилит, язвенный колит, болезнь Крона у детей, псориаз и псориатический артрит. Цель настоящего исследования заключалась в подтверждении эффекта улучшения симптомов заболевания кишечника in vivo при одновременном введении KBL697 и инфликсимаба.[250] Infliximab (product name Remicade) is a therapeutic recombinant antibody drug used by injection for autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, ankylosing spondylitis, ulcerative colitis, pediatric Crohn's disease, psoriasis, and psoriatic arthritis. The aim of the present study was to confirm the in vivo improvement effect of KBL697 and infliximab on bowel symptoms.

[251] После разделения мышей C57BL/6 на группы по восемь мышей им давали водопроводную воду с 2% раствором DSS в течение 8 дней (с D0 до D7), вызывая у них колит. В то же время мышам в контрольной группе в течение 14 дней (с D0 до D13) раз в день перорально вводили 200 мкл PBS, в то время как мышам в экспериментальной группе, получавшей KBL697, раз в день перорально вводили 200 мкл штамма KBL697, разбавленного PBS до концентрации 1 × 10¹⁰ КОЕ/мл, так что ежедневно вводимое количество можно было задать как 2 × 10⁹ КОЕ. В группе введения терапевтического антитела антитело инфликсимаб вводили раз в 3 дня в дозе 5 мг/кг на мышь, и перорально вводили 200 мкл PBS раз в день в течение периода введения штамма KBL697. В экспериментальной группе одновременного введения перорально вводили раз в день 200 мкл раствора штамма KBL697, разбавленного PBS до концентрации 1 × 10¹⁰ КОЕ/мл, а на третий день внутривенно вводили антитело инфликсимаб в дозе 5 мг/кг на мышь. Экспериментальным группам без введения антитела инфликсимаб внутривенно вводили такой же объем PBS. В течение 14 дней происходила индукция колита за счет DSS, ежедневно измеряли изменения массы тела мышей в контрольной группе и каждой экспериментальной группе, а на 14 день после подачи DSS (D14) мышей подвергали аутопсии с целью измерения длины толстой кишки.[251] After dividing C57BL/6 mice into groups of eight mice, they were given tap water with 2% DSS for 8 days (D0 to D7), causing them to develop colitis. At the same time, mice in the control group were orally administered 200 μL of PBS once a day for 14 days (from D0 to D13), while mice in the experimental group treated with KBL697 were orally administered 200 μL of strain KBL697 diluted once a day for 14 days (D0 to D13). PBS to a concentration of 1 × 10 ¹⁰ CFU/ml, so that the daily administered amount could be set to 2 × 10 ⁹ CFU. In the therapeutic antibody administration group, infliximab antibody was administered every 3 days at a dose of 5 mg/kg per mouse, and 200 μL of PBS was orally administered once a day during the KBL697 strain administration period. In the co-administration experimental group, 200 μl of a solution of strain KBL697 diluted in PBS to a concentration of 1 × ¹⁰ CFU/ml was administered orally once a day, and on the third day, the antibody infliximab was administered intravenously at a dose of 5 mg/kg per mouse. The experimental groups without infliximab antibody administration received the same volume of PBS intravenously. Colitis was induced by DSS for 14 days, changes in body weight of mice in the control group and each experimental group were measured daily, and on day 14 after DSS administration (D14), mice were necropsied to measure colon length.

[252] В результате, как показано на фиг. 18(А), в отношении изменения длины толстой кишки, отмечено значительное улучшение степени уменьшения длины толстой кишки в группах, получавших штамм KBL697 сам по себе (DSS + KBL697) и инфликсимаб сам по себе (DSS+IFX), по сравнению с мышами в контрольной группе (DSS + PBS). В группе, одновременно получавшей инфликсимаб и KBL697 (DSS + комбин.), подтвердили значительное улучшение длины толстой кишки по сравнению с группой, получавшей инфликсимаб или KBL697 по отдельности.[252] As a result, as shown in FIG. 18(A), with regard to changes in colon length, there was a significant improvement in the degree of reduction in colon length in the groups receiving strain KBL697 alone (DSS + KBL697) and infliximab alone (DSS + IFX), compared with mice in control group (DSS + PBS). The group co-treated with infliximab and KBL697 (DSS + combination) confirmed a significant improvement in colon length compared to the group treated with infliximab or KBL697 alone.

[253] В отношении изменения массы тела, как показано на фиг.18 (B), через 14 дней после введения влияние на снижение массы тела значительно улучшилось в группах, получавших только KBL697 (DSS + KBL697) и только инфликсимаб (DSS + IFX) по сравнению с мышами в контрольной группе, не получавшими лечения. Через три дня после введения подтвердили сохранение высокой массы тела в группе, одновременно получавшей инфликсимаб и KBL697 (DSS + комбин.), по сравнению со всеми экспериментальными группами, получавшими DSS, что позволило подтвердить эффект смягчения симптома снижения массы тела из-за индукции колита. Соответственно, в отношении применения указанного штамма для лечения синдрома раздраженного кишечника исследование подтвердило возможность получения выраженного терапевтического эффекта при введении штамма в комбинации с доступными для приобретения терапевтическими антителами.[253] In terms of body weight change, as shown in Figure 18 (B), 14 days after administration, the effect on weight loss was significantly improved in the KBL697 only (DSS + KBL697) and infliximab only (DSS + IFX) groups. compared to mice in the control group that received no treatment. Three days after administration, the maintenance of high body weight in the group co-treated with infliximab and KBL697 (DSS + combination) was confirmed compared with all experimental groups receiving DSS, which confirmed the effect of mitigating the symptom of weight loss due to induction of colitis. Accordingly, with regard to the use of this strain for the treatment of irritable bowel syndrome, the study confirmed the possibility of obtaining a pronounced therapeutic effect when administered in combination with commercially available therapeutic antibodies.

[254] [254]

[255] Специфические аспекты настоящего изобретения подробно описаны выше, и для специалистов в данной области техники очевидно, что эти специфические аспекты являются лишь конкретными вариантами реализации, которые не ограничивают рамки настоящего изобретения. Таким образом, рамки настоящего изобретения в значительной степени определяются следующей формулой изобретения с эквивалентами пунктов формулы[255] Specific aspects of the present invention have been described in detail above, and those skilled in the art will appreciate that these specific aspects are merely specific embodiments and are not intended to limit the scope of the present invention. Thus, the scope of the present invention is largely defined by the following claims with equivalent claims

[256][256]

[257] Название депонирующей организации: Корейский исследовательский институт биологических наук и биотехнологии (Korea Research Institute of Bioscience & Biotechnology)[257] Name of depositing organization: Korea Research Institute of Bioscience & Biotechnology

[258] Индетификационный номер: KCTC13520BP[258] ID number: KCTC13520BP

[259] Дата доступа: 20180427[259] Access date: 20180427

[260][260]

Возможность промышленного примененияPossibility of industrial application

[261] Штамм Lactobacillus gasseri KBL697 (идентификационный номер KCTC 13520BP) в соответствии с настоящим изобретением ослабляет аллергические клеточные реакции, значительно улучшает симптомы атопического дерматита, и обладает противовоспалительным, иммунорегуляторным и противогрибковым действием, а также терапевтическим действием по отношению к заболеваниям кишечника, например, синдрому раздраженного кишечника. Таким образом, указанный одиночный штамм сам по себе может обеспечивать достижение всех целей смягчения аллергических заболеваний и воспалительных заболеваний, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции и за счет этого успешно находить применение в качестве пробиотического вещества. Кроме того, указанный штамм на основании его противогрибковой активности можно успешно использовать в качестве средства для наружной обработки кожи против различных заболеваний кожи, вызванных грибками, а также в косметической композиции и функциональном пластыре для смягчения чувствительности кожи.[261] The Lactobacillus gasseri strain KBL697 (KCTC ID 13520BP) according to the present invention attenuates allergic cellular responses, significantly improves the symptoms of atopic dermatitis, and has anti-inflammatory, immunoregulatory and antifungal effects, as well as therapeutic effects against intestinal diseases, e.g. irritable bowel syndrome. Thus, said single strain alone can achieve all the goals of mitigating allergic diseases and inflammatory diseases, improving gut health and immunoregulation, and thereby be useful as a probiotic substance. In addition, this strain, due to its antifungal activity, can be successfully used as a topical skin treatment against various skin diseases caused by fungi, as well as in a cosmetic composition and a functional patch for alleviating skin sensitivity.

Текст списка последовательностейSequence list text

[262] Электронный файл списка последовательностей прилагается[262] Electronic sequence list file attached

[263] [263]

--->--->

Список последовательностейList of sequences

<110> Ko BioLabs, Inc.<110> Ko BioLabs, Inc.

<120> Штамм Lactobacillus Gasseri KBL 697 и его применение<120> Lactobacillus Gasseri strain KBL 697 and its application

<130> P18-B094<130> P18-B094

<160> 1<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1<210> 1

<211> 1482<211> 1482

<212> ДНК<212> DNA

<213> Lactobacillus gasseri<213> Lactobacillus gasseri

<400> 1<400> 1

ggcaagtggg cggcgtgcta tacatgcagt cgagcgagct tgcctagatg aatttggtgc 60ggcaagtggg cggcgtgcta tacatgcagt cgagcgagct tgcctagatg aatttggtgc 60

ttgcaccaaa tgaaactaga tacaagcgag cggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac 120ttgcaccaaa tgaaactaga tacaagcgag cggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac 120

ctgcccaaga gactgggata acacctggaa acagatgcta ataccggata acaacactag 180ctgcccaaga gactgggata acacctggaa acagatgcta ataccggata acaacactag 180

acgcatgtct agagtttaaa agatggttct gctatcactc ttggatggac ctgcggtgca 240acgcatgtct agagtttaaa agatggttct gctatcactc ttggatggac ctgcggtgca 240

ttagctagtt ggtaaggcaa cggcttacca aggcaatgat gcatagccga gttgagagac 300ttagctagtt ggtaaggcaa cggcttacca aggcaatgat gcatagccga gttgagagac 300

tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360tgatcggcca cattgggact gagacacggc ccaaactcct acgggaggca gcagtaggga 360

atcttccaca atggacgcaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420atcttccaca atggacgcaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgagtgaag aagggtttcg 420

gctcgtaaag ctctgttggt agtgaagaaa gatagaggta gtaactggcc tttatttgac 480gctcgtaaag ctctgttggt agtgaagaaa gatagaggta gtaactggcc tttatttgac 480

ggtaattact tagaaagtca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540ggtaattact tagaaagtca cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg 540

gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagtgca ggcggttcaa taagtctgat 600gcaagcgttg tccggattta ttgggcgtaa agcgagtgca ggcggttcaa taagtctgat 600

gtgaaagcct tcggctcaac cggagaattg catcagaaac tgttgaactt gagtgcagaa 660gtgaaagcct tcggctcaac cggagaattg catcagaaac tgttgaactt gagtgcagaa 660

gaggagagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720gagggagagtg gaactccatg tgtagcggtg gaatgcgtag atatatggaa gaacaccagt 720

ggcgaaggcg gctctctggt ctgcaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac 780ggcgaaggcg gctctctggt ctgcaactga cgctgaggct cgaaagcatg ggtagcgaac 780

aggattagat accctggtag tccatgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tgggaggttt 840aggattagat accctggtag tccatgccgt aaacgatgag tgctaagtgt tgggaggttt 840

ccgcctctca gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag 900ccgcctctca gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta cgaccgcaag 900

gttgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960gttgaaactc aaaggaattg acggggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 960

gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccagt gcaaacctaa gagattagga 1020gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccagt gcaaacctaa gagattagga 1020

gttcccttcg gggacgctga gacaggtggt gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080gttcccttcg gggacgctga gacaggtggt gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1080

tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgtcatt agttgccatc attaagttgg 1140tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttgtcatt agttgccatc attaagttgg 1140

gcactctaat gagactgccg gtgacaaacc ggagaaaggt ggggatgacg tcaagtcatc 1200gcactctaat gagactgccg gtgacaaacc ggagaaaggt ggggatgacg tcaagtcatc 1200

atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cggtacaacg agaagcgaac 1260atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatgga cggtacaacg agaagcgaac 1260

ctgcgaaggc aagcggatct ctgaaagccg ttctcagttc ggactgtagg ctgcaactcg 1320ctgcgaaggc aagcggatct ctgaaagccg ttctcagttc ggactgtagg ctgcaactcg 1320

cctacacgaa gctggaatcg ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg aatacgttcc 1380cctacacgaa gctggaatcg ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg aatacgttcc 1380

cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtctg taacacccaa agccggtggg 1440cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca tgagagtctg taacacccaa agccggtggg 1440

ataaccttta taggagtcag ccgtctaagt agacagatgt ta 1482ataaccttta taggagtcag ccgtctaagt agacagatgt ta 1482

<---<---

Claims (34)

1. Штамм Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения аллергического заболевания.1. Lactobacillus gasseri strain KBL697 with identification number KCTC 13520BP for the mitigation, prevention or treatment of allergic disease. 2. Штамм по п. 1, характеризующийся тем, что указанный штамм содержит последовательность 16S рДНК SEQ ID NO: 1.2. The strain according to claim 1, characterized in that said strain contains the 16S rDNA sequence SEQ ID NO: 1. 3. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения воспалительного заболевания.3. Use of Lactobacillus gasseri strain KBL697 with identification number KCTC 13520BP for the mitigation, prevention or treatment of an inflammatory disease. 4. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения заболевания кишечника.4. Use of Lactobacillus gasseri strain KBL697 with identification number KCTC 13520BP for the mitigation, prevention or treatment of intestinal disease. 5. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения аутоиммунного заболевания.5. Use of Lactobacillus gasseri strain KBL697 with identification number KCTC 13520BP for the mitigation, prevention or treatment of an autoimmune disease. 6. Применение штамма Lactobacillus gasseri KBL697 с идентификационным номером KCTC 13520BP для смягчения, профилактики или лечения инфекции Malassezia spp.6. Use of Lactobacillus gasseri strain KBL697 with identification number KCTC 13520BP for the mitigation, prevention or treatment of Malassezia spp. infection. 7. Пищевая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по любому из пп. 1-6 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.7. A food composition containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of a strain according to any one of paragraphs. 1-6 and cultures of the specified strain, and an acceptable carrier. 8. Пищевая композиция по п. 7, характеризующаяся тем, что указанная композиция представляет собой функциональную оздоровительную пищевую композицию, обладающую по меньшей мере одним эффектом, выбранным из группы, состоящей из смягчения симптомов аллергии, смягчения симптомов воспаления, улучшения состояния кишечника и иммунорегуляции.8. The food composition according to claim 7, characterized in that said composition is a functional health food composition having at least one effect selected from the group consisting of alleviation of allergy symptoms, alleviation of inflammatory symptoms, improvement of intestinal health and immunoregulation. 9. Пищевая композиция по п. 8, характеризующаяся тем, что указанные симптомы аллергии выбраны из группы, состоящей из атопического дерматита, экземы, аллергической астмы, аллергического ринита, аллергического конъюнктивита и пищевой аллергии; указанное смягчение состояния кишечника представляет собой смягчение по меньшей мере одного состояния, выбранного из группы, состоящей из метеоризма, дискомфорта в области живота, инфекционной диареи, вызванной патогенными микроорганизмами, гастроколита, воспалительных заболеваний кишечника, неврогенного кишечного синдрома, синдрома раздраженного кишечника, избыточного роста микроорганизмов тонкого кишечника и кишечной пищевой диареи.9. The food composition according to claim 8, characterized in that said allergy symptoms are selected from the group consisting of atopic dermatitis, eczema, allergic asthma, allergic rhinitis, allergic conjunctivitis and food allergy; said bowel alleviation is the alleviation of at least one condition selected from the group consisting of flatulence, abdominal discomfort, infectious diarrhea caused by pathogens, gastrocolitis, inflammatory bowel disease, neurogenic bowel syndrome, irritable bowel syndrome, microbial overgrowth small intestine and intestinal food diarrhea. 10. Кормовая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по любому из пп. 1-6 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.10. A feed composition containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of a strain according to any one of paragraphs. 1-6 and cultures of the specified strain, and an acceptable carrier. 11. Противогрибковая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 6 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель,11. An antifungal composition containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of the strain of claim 6 and cultures of said strain, and an acceptable carrier, причем указанная композиция проявляет противогрибковую активность в отношении Malassezia spp. wherein said composition exhibits antifungal activity against Malassezia spp. 12. Противогрибковая композиция по п. 11, характеризующаяся тем, что указанная композиция проявляет противогрибковую активность в отношении Malassezia furfur.12. Antifungal composition according to claim 11, characterized in that said composition exhibits antifungal activity against Malassezia furfur . 13. Средство для наружной обработки кожи для смягчения, профилактики или лечения инфекции кожи Malassezia spp, содержащее эффективное количество противогрибковой композиции по п. 11 и приемлемый носитель.13. A topical skin treatment for the mitigation, prevention or treatment of Malassezia spp skin infection, comprising an effective amount of the antifungal composition of claim 11 and an acceptable carrier. 14. Медицинский пластырь для смягчения, профилактики или лечения атопического дерматита, содержащий резервуар, содержащий эффективное количество доставляемых веществ, помещенных на подложку, причем указанные доставляемые вещества представляют собой меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма.14. A medical patch for the mitigation, prevention or treatment of atopic dermatitis, comprising a reservoir containing an effective amount of delivery substances placed on a support, wherein said delivery substances are at least one component selected from the group consisting of a strain according to claim 1 and cultures the specified strain. 15. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения аллергических заболеваний, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.15. A pharmaceutical composition for the treatment or prevention of allergic diseases, containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 1 and cultures of the specified strain, and an acceptable carrier. 16. Фармацевтическая композиция по п. 15, характеризующаяся тем, что указанные аллергические заболевания выбраны из группы, состоящей из экземы, аллергической астмы, аллергического ринита, атопического дерматита, аллергического конъюнктивита и пищевой аллергии.16. The pharmaceutical composition according to claim 15, characterized in that said allergic diseases are selected from the group consisting of eczema, allergic asthma, allergic rhinitis, atopic dermatitis, allergic conjunctivitis and food allergies. 17. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительных заболеваний, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 3 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.17. A pharmaceutical composition for the treatment of inflammatory diseases, containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 3 and cultures of the specified strain, and an acceptable carrier. 18. Фармацевтическая композиция по п. 17, характеризующаяся тем, что указанные воспалительные заболевания выбраны из группы, состоящей из отека, конъюнктивита, пародонтита, ринита, отита среднего уха, хронического синусита, фаринголарингита, тонзиллита, бронхита, пневмонии, язвы желудка, гастрита, колита, подагры, экземы, угрей, атопического дерматита, контактного дерматита, себорейного дерматита, анкилозирующего спондилита, ревматизма, фибромиалгии, остеоартрита, псориатического артрита, ревматоидного артрита, периартрита плечевого сустава, тендинита, тендосиновита, миозита, гепатита, цистита, нефрита, синдрома Шегрена, миастении гравис, сепсиса, васкулита, бурсита, височного артериита и рассеянного склероза.18. The pharmaceutical composition according to claim 17, characterized in that these inflammatory diseases are selected from the group consisting of edema, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, chronic sinusitis, pharyngolaryngitis, tonsillitis, bronchitis, pneumonia, stomach ulcers, gastritis, colitis, gout, eczema, acne, atopic dermatitis, contact dermatitis, seborrheic dermatitis, ankylosing spondylitis, rheumatism, fibromyalgia, osteoarthritis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis of the shoulder joint, tendinitis, tenosynovitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome , myasthenia gravis, sepsis, vasculitis, bursitis, temporal arteritis and multiple sclerosis. 19. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний кишечника, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 4 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.19. A pharmaceutical composition for the treatment of intestinal diseases, containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 4 and cultures of the specified strain, and an acceptable carrier. 20. Фармацевтическая композиция по п. 19, характеризующаяся тем, что указанные заболевания кишечника выбраны из группы, состоящей из метеоризма, дискомфорта в области живота, инфекционной диареи, вызванной патогенными микроорганизмами, гастроколита, воспалительных заболеваний кишечника, неврогенного кишечного синдрома, синдрома раздраженного кишечника, избыточного роста микроорганизмов тонкого кишечника и кишечной пищевой диареи.20. The pharmaceutical composition according to claim 19, characterized in that said intestinal diseases are selected from the group consisting of flatulence, abdominal discomfort, infectious diarrhea caused by pathogenic microorganisms, gastrocolitis, inflammatory bowel diseases, neurogenic intestinal syndrome, irritable bowel syndrome, overgrowth of small intestinal microorganisms and intestinal food diarrhea. 21. Фармацевтическая композиция для лечения аутоиммунных заболеваний, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 5 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.21. A pharmaceutical composition for the treatment of autoimmune diseases, containing an effective amount of at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 5 and cultures of the specified strain, and an acceptable carrier. 22. Фармацевтическая композиция по п. 21, характеризующаяся тем, что указанные аутоиммунные заболевания выбраны из группы, состоящей из псориаза, псориатического артрита, ревматоидного артрита, волчанки, системной склеродермии, атопического дерматита, астмы, синдрома Гийена-Барре, миастении гравис, дерматомиозита, полимиозита, рассеянного склероза, аутоиммунного энцефаломиелита, узелкового периартериита, тиреоидита Хашимото, рассеянного склероза, височного артериита, юношеского диабета, очаговой алопеции, пузырчатки, афтозного стоматита, аутоиммунной гемолитической анемии, гранулематоза Вегенера, синдрома Шегрена, болезни Аддисона, болезни Крона и болезни Бехчета.22. The pharmaceutical composition according to claim 21, characterized in that said autoimmune diseases are selected from the group consisting of psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, lupus, systemic scleroderma, atopic dermatitis, asthma, Guillain-Barre syndrome, myasthenia gravis, dermatomyositis, polymyositis, multiple sclerosis, autoimmune encephalomyelitis, periarteritis nodosa, Hashimoto's thyroiditis, multiple sclerosis, temporal arteritis, juvenile diabetes, alopecia areata, pemphigus, aphthous stomatitis, autoimmune hemolytic anemia, Wegener's granulomatosis, Sjögren's syndrome, Addison's disease, Crohn's disease and Behçet's disease a. 23. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 15-22, характеризующаяся тем, что указанную фармацевтическую композицию применяют в комбинации с по меньшей мере одним лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из инфликсимаба, адалимумаба, голимумаба, абциксимаба, алемтузумаба, атлизумаба, базиликсимаба, белимумаба, бевацизумаба, ипилимумаба, брентуксимаба ведотина, канакинумаба, капромаба пендетида, катумаксомаба, цертолизумаба пэгола, цетуксимаба, даклизумаба, деносумаба, экулизумаба, эдреколомаба, эфализумаба, эфунгумаба, эртумаксомаба, этанерцепта, этарацизумаба, фонтолизумаба, гемтузумаба озогамицина, гирентуксимаба, ибритумомаба тиуксетана, иговомаба, имциромаба, ипилимумаба, лабетузумаба, меполизумаба, мотавизумаба, натализумаба, нимотузумаба, нофетумомаба мерпентана, офатумумаба, омализумаба, ореговомаба, паливизумаба, панитумумаба, пемтумомаба, пертузумаба, ранибизумаба, раксибакумаба, ритуксимаба, ровелизумаба, руплизумаба, такатузумаба тетраксетана, тефибазумаба, тоцилизумаба, тозитумомаба, трастузумаба, устекинумаба, секукинумаба, ведолизумаба, визилизумаба, вотумумаба, залутумумаба и занолимумаба.23. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 15-22, characterized in that the specified pharmaceutical composition is used in combination with at least one drug selected from the group consisting of infliximab, adalimumab, golimumab, abciximab, alemtuzumab, atlizumab, basiliximab, belimumab, bevacizumab, ipilimumab, brentuximab vedotin , canakinumab, capromab pendetide, catumaxomab, certolizumab pegol, cetuximab, daclizumab, denosumab, eculizumab, edrecolomab, efalizumab, efungumab, ertumaxomab, etanercept, etaracizumab, fontolizumab, gemtuzumab ozogamicin, girentuximab, ibritumomab tiuxetan, igovomab, imciromab, ipilimumab, labetuzumab, mepolizumab , motavizumab, natalizumab, nimotuzumab, nofetumomab merpentane, ofatumumab, omalizumab, oregovomab, palivizumab, panitumumab, pemtumomab, pertuzumab, ranibizumab, raxibacumab, rituximab, rovelizumab, ruplizumab, takatuzumab tetraxetane, tefibazumab, tocilizumab, tositumomab, trastuzumab, ustekinumab, secukinumab, vedolizumab , visilizumab, votumumab, zalutumumab and zanolimumab. 24. Способ лечения аллергических заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.24. A method for treating allergic diseases, comprising administering at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 1 and cultures of said strain to a subject in need thereof. 25. Способ лечения воспалительных заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 3 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.25. A method for treating inflammatory diseases, comprising administering at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 3 and cultures of said strain to a subject in need thereof. 26. Способ лечения заболеваний кишечника, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 4 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.26. A method for treating intestinal diseases, comprising administering at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 4 and cultures of said strain to a subject in need thereof. 27. Способ лечения аутоиммунных заболеваний, включающий введение по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 5 и культур указанного штамма, субъекту, нуждающемуся в этом.27. A method for treating autoimmune diseases, comprising administering at least one component selected from the group consisting of the strain of claim 5 and cultures of said strain to a subject in need thereof. 28. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против аллергических заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма.28. Use of a composition for the production of a preventive or therapeutic medicinal product against allergic diseases, containing at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 1 and cultures of said strain. 29. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против воспалительных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 3 и культур указанного штамма.29. Use of a composition for the production of a preventive or therapeutic medicinal product against inflammatory diseases, containing at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 3 and cultures of said strain. 30. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против заболеваний кишечника, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 4 и культур указанного штамма.30. Use of a composition for the production of a preventive or therapeutic medicinal product against intestinal diseases, containing at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 4 and cultures of said strain. 31. Применение композиции для получения профилактического или терапевтического лекарственного средства против аутоиммунных заболеваний, содержащей по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из штамма по п. 5 и культур указанного штамма.31. Use of a composition for the production of a preventive or therapeutic medicinal product against autoimmune diseases, containing at least one component selected from the group consisting of the strain according to claim 5 and cultures of said strain. 32. Косметическая композиция для смягчения или профилактики атопического дерматита, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного компонента, выбранного из группы, состоящей из штамма по п. 1 и культур указанного штамма, и приемлемый носитель.32. A cosmetic composition for mitigating or preventing atopic dermatitis, comprising an effective amount of at least one component selected from the group consisting of the strain of claim 1 and cultures of said strain, and an acceptable carrier. 33. Косметическая композиция по п. 32, отличающаяся тем, что указанная косметическая композиция представлена в виде косметического пластыря.33. Cosmetic composition according to claim 32, characterized in that said cosmetic composition is presented in the form of a cosmetic patch.