RU2798229C2

RU2798229C2 - Il-17a binding peptides and their use in medicine

Info

Publication number: RU2798229C2
Application number: RU2021104667A
Authority: RU
Inventors: Марчелло Аллегретти; Андреа Арамини; Андреа Беккари; Марика ГЕМЕИ; Флавио МАНТЕЛЛИ
Original assignee: Домпе Фармачеутичи С.П.А.
Priority date: 2018-07-27
Filing date: 2019-07-26
Publication date: 2023-06-19

Abstract

FIELD: pharmaceuticals.

SUBSTANCE: invention relates to IL-17A binding peptides, inhibitors of the interaction of IL-17A with IL-17RA receptor, and to bioconjugates and pharmaceutical compositions that can be used, for example, for the treatment and/or prevention of a disease such as psoriasis or dry eye disease.

EFFECT: obtaining IL-17A binding peptides.

7 cl, 10 dwg, 11 tbl, 10 ex

Description

Настоящее изобретение относится к IL-17A-связывающим пептидам, ингибиторам связывания IL-17A с рецептором IL-17AR, и, тем самым, образования комплекса IL-17A/IL-17RA/IL17RC. Задачей изобретения также являются биоконъюгаты и димеры, содержащие указанные выше пептиды, фармацевтические композиции и медицинское применение указанных выше пептидов, биоконъюгатов и димеров.The present invention relates to IL-17A binding peptides that are inhibitors of the binding of IL-17A to the IL-17AR receptor and thereby the formation of the IL-17A/IL-17RA/IL17RC complex. The object of the invention is also bioconjugates and dimers containing the above peptides, pharmaceutical compositions and medical use of the above peptides, bioconjugates and dimers.

Уровень техники, к которому относится изобретениеThe state of the art to which the invention relates

Ассоциированный с цитотоксическими T-лимфоцитами антиген 8 (CTLA8), также называемый интерлейкином 17 (IL-17), впервые был клонирован в 1993 году. Первой биологической активностью, описанной для IL-17 человека, была индукция продуцирования интерлейкина 6 (IL-6) и интерлейкина 8 (IL-8) из синовиоцитов при ревматоидном артрите. Эти данные позволили сделать предположение о роли IL-17 в воспалении через IL-6, и в привлечении нейтрофилов через IL-8, Xu S et al, Cell Mol Immunol. 2010, 164-74; Murcia RY et al., PLOS ONE 2016, 11(5): e0154755doi:10.1371/journal.pone.0154755).Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen 8 (CTLA8), also called interleukin 17 (IL-17), was first cloned in 1993. The first biological activity reported for human IL-17 was the induction of interleukin 6 (IL-6) and interleukin 8 (IL-8) production from synoviocytes in rheumatoid arthritis. These data suggested a role for IL-17 in inflammation via IL-6, and in neutrophil recruitment via IL-8, Xu S et al, Cell Mol Immunol. 2010, 164-74; Murcia RY et al., PLOS ONE 2016, 11(5): e0154755doi:10.1371/journal.pone.0154755).

Позднее было обнаружено, что эта молекула, позднее названная IL-17A, является частью более крупного семейства, которое включает пять дополнительных представителей, а именно, с IL-17B по F. IL-17F обладает наибольшей гомологией (приблизительно 56%) с первым открытым IL-17, IL-17A, в то время как IL-17E проявляет наиболее низкую консервативность последовательности (приблизительно 16%). Представители семейства IL-17 проявляют их функции, связываясь с их рецепторами в форме гомодимеров, за исключением IL-17A и IL-17F, которые также могут выступать в качестве гетеродимеров (Goepfert A et al, Sci Rep. 2017, 7 (1), 8906).This molecule, later named IL-17A, was later found to be part of a larger family that includes five additional members, namely IL-17B to F. IL-17F shares the highest homology (approximately 56%) with the first discovered IL-17, IL-17A, while IL-17E exhibits the lowest sequence conservation (approximately 16%). Members of the IL-17 family exhibit their functions by binding to their receptors in the form of homodimers, with the exception of IL-17A and IL-17F, which can also act as heterodimers (Goepfert A et al, Sci Rep. 2017, 7(1), 8906).

Наиболее широко исследованный цитокин этого семейства, IL-17A, играет важную роль в защите хозяина против микробных инфекций, и он считается основным пусковым фактором для ряда воспалительных и аутоиммунных состояний. Патологическое продуцирование IL-17A приводит к избыточному воспалению и заметному повреждению тканей.The most widely studied cytokine of this family, IL-17A, plays an important role in host defense against microbial infections and is considered a major trigger for a number of inflammatory and autoimmune conditions. Abnormal production of IL-17A results in excessive inflammation and marked tissue damage.

В частности, посредством индукции различных молекул, включающих цитокины, хемокины, белки острой фазы, противомикробные пептиды, муцины и матриксные металлопротеиназы, IL-17A может усиливать каскады событий, которые приводят к привлечению нейтрофилов, воспалению и защите хозяина. Хотя IL-17A является характерным цитокином, продуцируемым хелперными T-клетками 17 (Th17), IL-17A, как и другие цитокины семейства IL-17, имеет множество источников в диапазоне от иммунных клеток до неиммунных клеток.In particular, through the induction of various molecules, including cytokines, chemokines, acute phase proteins, antimicrobial peptides, mucins, and matrix metalloproteinases, IL-17A can enhance the cascades of events that lead to neutrophil recruitment, inflammation, and host defense. Although IL-17A is a characteristic cytokine produced by helper T 17 (Th17) cells, IL-17A, like other cytokines of the IL-17 family, has many sources ranging from immune cells to non-immune cells.

IL-17B, IL-17C и IL-17D также считаются провоспалительными цитокинами, однако их роль до конца не известна. IL-17E, также известный как IL-25, имеет наименьшую гомологию и вовлечен в ответы Th2-клеток против паразитов и аллергии. CCL20 запускает привлечение Th17 и дендритных клеток в область воспаления. В свою очередь Th17 клетки активируются, таким образом, продуцируя медиаторы воспаления и вызывая хроническое воспаление.IL-17B, IL-17C, and IL-17D are also considered to be pro-inflammatory cytokines, but their role is not fully understood. IL-17E, also known as IL-25, has the least homology and is involved in Th2 cell responses against parasites and allergies. CCL20 triggers recruitment of Th17 and dendritic cells to the site of inflammation. In turn, Th17 cells are activated, thus producing inflammatory mediators and causing chronic inflammation.

Цитокины, принадлежащие семейству IL-17, передают сигнал через их родственные рецепторы и активируют нижеследующие каскады, которые включают NFκB, MAPK и C/EBP, индуцируя экспрессию противомикробных пептидов, цитокинов и хемокинов. Проксимальный адаптер Act1 является общим медиатором передачи сигнала всех цитокинов IL-17, и он вовлечен в IL-17-опосредуемую защиту хозяина и в запускаемые IL-17 аутоиммунные состояния.Cytokines belonging to the IL-17 family signal through their cognate receptors and activate downstream cascades, which include NFκB, MAPK, and C/EBP, inducing the expression of antimicrobial peptides, cytokines, and chemokines. The Act1 proximal adapter is a common signaling mediator for all IL-17 cytokines and is involved in IL-17 mediated host defense and IL-17 triggered autoimmune conditions.

Семейство рецепторов IL-17 состоит из пяти представителей, IL-17RA, RB, RC, RD и RE, все из которых, подобно их лигандам, обладают гомологией последовательностей.The IL-17 receptor family consists of five members, IL-17RA, RB, RC, RD and RE, all of which, like their ligands, share sequence homology.

IL-17RA широко экспрессируется в большом диапазоне тканей и типов клеток и связывается с IL-17-A, C, E и F. Передача сигнала рецептора происходит через гетеродимерные рецепторы, образованные из общей субъединицы IL17-RA и второй субъединицы, которая зависит от лиганда и регулирует специфичность передачи сигнала. При стимуляции лигандом IL-17RA образует гетеродимерный рецепторный комплекс с IL-17RB (для IL-17E), IL-17RC (для IL-17A и IL-17F) или IL-17RE (для IL-17C). Предполагается, что связывание лиганда с первой субъединицей рецептора IL-17RA способствует второму событию связывания, таким образом, индуцируя образование гетеродимерного рецепторного комплекса. В частности, сигнал IL-17A и IL-17F опосредуется комплексом между IL-17RA и IL-17RC. IL-17F связывается с IL-17RA с приблизительно в 100-1000 раз меньшей аффинностью, чем IL-17A, в то время как аффинность связывания в отношении IL-17RC является сравнимой между двумя цитокинами (Onishi RM et al, Immunology 2010, 129(3), 311-321; Gu C et al, Cytokine 2013, 64(2), 477-485).IL-17RA is widely expressed in a wide range of tissues and cell types and binds to IL-17-A, C, E, and F. Receptor signaling occurs through heterodimeric receptors formed from a common subunit of IL17-RA and a second subunit that is ligand dependent and regulates the specificity of signal transmission. Upon ligand stimulation, IL-17RA forms a heterodimeric receptor complex with IL-17RB (for IL-17E), IL-17RC (for IL-17A and IL-17F), or IL-17RE (for IL-17C). It is believed that ligand binding to the first subunit of the IL-17RA receptor facilitates the second binding event, thus inducing the formation of a heterodimeric receptor complex. In particular, the signal of IL-17A and IL-17F is mediated by a complex between IL-17RA and IL-17RC. IL-17F binds to IL-17RA with approximately 100-1000 times lower affinity than IL-17A, while binding affinity for IL-17RC is comparable between the two cytokines (Onishi RM et al, Immunology 2010, 129( 3), 311-321; Gu C et al, Cytokine 2013, 64(2), 477-485).

IL-17A у человека играет ключевую роль в различных аутоиммунных и воспалительных состояниях, таких как ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз, болезнь Крона, системная красная волчанка, астма, болезнь Бехчета и гипер-IgE-синдром (Fujino S et al Gut, 2003, 52, 65-70; Shabgah AG et al, Postepy Dermatol Allergol 2014, 31 (4), 256-261). Более того, блокада IL-17A продемонстрировала доклиническую и клиническую эффективность при анкилозирующем спондилите и ревматоидном артрите (Liu S et al, Nature-Scientific Reports 2016, doi:10,1038/srep26071; Lubberts E et al, Arthritis Rheum 2004, 50, 650-659).IL-17A in humans plays a key role in various autoimmune and inflammatory conditions such as rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, psoriasis, Crohn's disease, systemic lupus erythematosus, asthma, Behcet's disease, and hyper-IgE syndrome (Fujino S et al Gut, 2003 , 52, 65-70; Shabgah AG et al, Postepy Dermatol Allergol 2014, 31(4), 256-261). Moreover, IL-17A blockade has demonstrated preclinical and clinical efficacy in ankylosing spondylitis and rheumatoid arthritis (Liu S et al, Nature-Scientific Reports 2016, doi:10,1038/srep26071; Lubberts E et al, Arthritis Rheum 2004, 50, 650 -659).

Также было показано, что IL-17A вовлечен в заболевания глаз и, в частности, в патогенез заболеваний поверхности глаза и роговицы (DED), вирусный и бактериальный кератит. Антитела, разработанные для нейтрализации IL-17A, показали перспективные результаты в отношении снижения тяжести этих заболеваний (Garbutcheon-Singh KB et al, Curr Eye Res, 2018, DOI:10.1080/02713683.2018.1519834).IL-17A has also been shown to be involved in eye diseases and in particular in the pathogenesis of eye and corneal surface diseases (DED), viral and bacterial keratitis. Antibodies designed to neutralize IL-17A have shown promising results in reducing the severity of these diseases (Garbutcheon-Singh KB et al, Curr Eye Res, 2018, DOI:10.1080/02713683.2018.1519834).

DED представляет собой воспалительное и аутоиммунное офтальмологическое заболевание слезной системы и поверхности глаза, которое приводит к дискомфорту, нарушению зрения и нарушению слезной пленки. DED является одной из наиболее частых причин приобретенного нарушения зрения во взрослой популяции (Stern ME et al, Mucosal Immunol 2010, 3(5), 425-442; Stevenson W et al, Arch Ophthalmol 2012, 130(1), 90-100, Parul Singh, Parul Singh 2012, Hah, Chung et al. 2017). Заболевание вовлекает иммунный и воспалительный процесс, который поражает поверхность глаза и в тяжелых случаях может приводить к слепоте. Лечение DED на текущий момент в основном является симптоматическим, состоящим в глазных смазывающих средствах и неспецифических противовоспалительных средствах, таких как кортикостероиды, циклоспорин A и такролимус.DED is an inflammatory and autoimmune ophthalmic disease of the lacrimal system and ocular surface that results in discomfort, visual impairment, and tear film disruption. DED is one of the most common causes of acquired visual impairment in the adult population (Stern ME et al, Mucosal Immunol 2010, 3(5), 425-442; Stevenson W et al, Arch Ophthalmol 2012, 130(1), 90-100, Parul Singh, Parul Singh 2012, Hah, Chung et al. 2017). The disease involves an immune and inflammatory process that affects the surface of the eye and, in severe cases, can lead to blindness. Treatment for DED is currently mainly symptomatic, consisting of ocular lubricants and non-specific anti-inflammatory drugs such as corticosteroids, cyclosporine A, and tacrolimus.

IL-17A ассоциирован с нарушением барьерной функции эпителия роговицы, которое является наиболее угрожающим зрению осложнением DED. Описано увеличение количества Th17-клеток для тканей глаза пациентов с DED, которое индуцирует повышение концентраций IL-6, TGF-β, IL-23 и IL-17A на глазной поверхности, а также повышение концентрации IL-17 в слезах, и количество Th17-клеток на поверхности глаза в экспериментальных моделях DED. Кроме того, также было продемонстрировано, что нейтрализация IL-17A in vivo приводит к значительно ослабленной индукции и тяжести заболевания (De Paiva CS et al, Mucosal Immunol. 2009; 2(3): 243-253, Chauhan et al, Mucosal Immunol, 2009, 2(3), 243-253; Chauhan SK et al, Mucosal Immunol 2009, 2(4), 375-376; Chauhan, El Annan et al. 2009, De Paiva, Chotikavanich et al. 2009, de Paiva, Huang et al. 2014, Subbarayal, Chauhan et al. 2016).IL-17A is associated with impaired corneal epithelial barrier function, which is the most vision-threatening complication of DED. An increase in the number of Th17 cells in the tissues of the eye of patients with DED has been described, which induces an increase in the concentrations of IL-6, TGF-β, IL-23 and IL-17A on the ocular surface, as well as an increase in the concentration of IL-17 in tears, and the amount of Th17- cells on the surface of the eye in experimental models of DED. In addition, in vivo neutralization of IL-17A has also been shown to result in significantly reduced disease induction and severity (De Paiva CS et al, Mucosal Immunol. 2009; 2(3): 243-253, Chauhan et al, Mucosal Immunol, 2009, 2(3), 243-253; Chauhan SK et al, Mucosal Immunol 2009, 2(4), 375-376; Chauhan, El Annan et al. 2009, De Paiva, Chotikavanich et al. 2009, de Paiva, Huang et al. 2014, Subbarayal, Chauhan et al. 2016).

IL-17A также вовлечен в псориаз. Псориаз представляет собой хроническое воспалительное заболевание. Он проявляется как сухие, возвышающиеся красные очаги на коже (бляшки), покрытые серебристыми чешуйками. Существуют многочисленные клинические фенотипы (т.е. бляшковидный, каплевидный, пустулезный, инверсный), причем тяжесть заболевания находится диапазоне от нескольких рассеянных бляшек до вовлечения значительной поверхности тела. Индивидуумы с псориазом имеют увеличенный риск развития других хронических и серьезных заболеваний, таких как псориатический артрит, метаболический синдром, сердечно-сосудистые заболевания и депрессия. Была продемонстрирована центральная роль IL-17A в патофизиологии псориаза (Zeichner JA et al J Clin Aesthet Dermatol 2016, 9 (6 Suppl 1), S3-S6). При псориазе экспрессия мРНК IL-17 является более высокой в пораженной коже по сравнению с непораженной кожей. Кроме того, уровни IL-17A значительно коррелируют с тяжестью заболевания (Arican Oet al. Mediators Inflamm 2005, 2005, 273-279, Takahashi K et al. Clin Exp Dermatol 2010, 35, 645-649). Было показано, что блокада IL-17A снижает гиперпролиферацию кератиноцитов, инфильтрацию T-клеток в дерму и экспрессию мРНК ключевых усиливающих заболевание генов (Krueger JG et al, J Allergy Clin Immunol 2012, 130, 145-154).IL-17A is also implicated in psoriasis. Psoriasis is a chronic inflammatory disease. It appears as dry, raised red lesions on the skin (plaques) covered with silvery scales. There are numerous clinical phenotypes (ie, plaque-like, guttate, pustular, inverse) with disease severity ranging from a few scattered plaques to large body surface involvement. Individuals with psoriasis have an increased risk of developing other chronic and serious diseases such as psoriatic arthritis, metabolic syndrome, cardiovascular disease, and depression. The central role of IL-17A in the pathophysiology of psoriasis has been demonstrated (Zeichner JA et al J Clin Aesthet Dermatol 2016, 9 (6 Suppl 1), S3-S6). In psoriasis, IL-17 mRNA expression is higher in affected skin compared to unaffected skin. In addition, IL-17A levels correlate significantly with disease severity (Arican Oet al. Mediators Inflamm 2005, 2005, 273-279, Takahashi K et al. Clin Exp Dermatol 2010, 35, 645-649). Blockade of IL-17A has been shown to reduce keratinocyte hyperproliferation, T-cell infiltration into the dermis, and mRNA expression of key disease-enhancing genes (Krueger JG et al, J Allergy Clin Immunol 2012, 130, 145-154).

Антитела против IL-17A секукинумаб (AIN457, Consentyx^™), полностью человеческое mAb IgG1k против IL-17A, и иксекизумаб (LY2439821), гуманизированное IgG4-антитело, были протестированы в клинических испытаниях при псориазе и одобрены для лечения псориаза от умеренного до тяжелого. В ходе клинических испытаний оба антитела были способны снижать тяжесть заболевания по меньшей мере на 75% (PASI75) в 80% популяции пациентов. Более того, современные передовые клинические испытания показали перспективные результаты также для лечения анкилозирующего спондилита и псориатического артрита. Другие антитела в настоящее время проходят клинические испытания по тем же показаниям.The anti-IL-17A antibodies secukinumab (AIN457, Consentyx ^™ ), a fully human anti-IL-17A IgG1k mAb, and ixekizumab (LY2439821), a humanized IgG4 antibody, have been tested in psoriasis clinical trials and approved for the treatment of moderate to severe psoriasis. In clinical trials, both antibodies were able to reduce disease severity by at least 75% (PASI75) in 80% of the patient population. Moreover, modern cutting-edge clinical trials have shown promising results also for the treatment of ankylosing spondylitis and psoriatic arthritis. Other antibodies are currently in clinical trials for the same indications.

Описанные выше данные подтверждают разработку молекул, способных нацеливаться на IL-17A и ингибировать его передачу сигнала для лечения указанных выше патологий. До недавнего времени нацеливание на IL17-A и его рецепторы оставалось уделом антител. Причиной предпочтительности антител является то, что цитокины, такие как IL-17A, являются мишенью с белок-белковым взаимодействием (PPI), на которую трудно осуществить нацеливание, до настоящего время считавшуюся не поддающейся медикаментозному нацеливанию. Действительно, поверхности контакта PPI, как правило, являются плоскими и лишены глубоких подкарманов и бороздок, которые обычно необходимы для связывания низкомолекулярных (SMW) молекул. Несмотря на это, в последние годы в новом исследовании было идентифицировано несколько SMW-антагонистов IL-17A, способных связывать IL-17A и препятствовать его взаимодействию с рецептором IL-17RA, и, таким образом, ингибировать активацию каскада IL-17A (Espada A et al. J Med Chem 2016, 59(5), 2255-2260; Ting JP et al PLoS One 2018, 13(1), e0190850; Liu S et al, Scientific reports, 6:26071, doi: 10.1038/srep26071). Среди них был описан пептид с последовательностью IHVTIPADLWDWINK, который был назван высокоаффинным пептидом (HAP) (Liu S et al, Scientific reports, 6:26071, doi: 10.1038/srep26071).The data described above supports the development of molecules capable of targeting IL-17A and inhibiting its signaling for the treatment of the above pathologies. Until recently, targeting IL17-A and its receptors remained the domain of antibodies. The reason for the preference for antibodies is that cytokines, such as IL-17A, are difficult to target with protein-protein interaction (PPI), hitherto considered not amenable to drug targeting. Indeed, the contact surfaces of PPIs are generally flat and lack the deep pockets and grooves that are typically required for binding small molecular weight (SMW) molecules. Despite this, in recent years, a new study has identified several IL-17A SMW antagonists capable of binding IL-17A and interfering with its interaction with the IL-17RA receptor, and thus inhibiting the activation of the IL-17A cascade (Espada A et al. al J Med Chem 2016, 59(5), 2255-2260; Ting JP et al PLoS One 2018, 13(1), e0190850; Liu S et al, Scientific reports, 6:26071, doi: 10.1038/srep26071). Among them, a peptide with the sequence IHVTIPADLWDWINK has been described, which has been named high affinity peptide (HAP) (Liu S et al, Scientific reports, 6:26071, doi: 10.1038/srep26071).

Однако все существует необходимость в идентификации и охарактеризации новых молекул, способных связываться с высокой аффинностью с IL-17A и препятствовать активации каскада IL-17A, для разработки новых терапевтических возможностей для лечения нарушений, вовлекающих ось IL-17A/IL-17RA.However, there is a continuing need to identify and characterize new molecules that can bind with high affinity to IL-17A and interfere with the activation of the IL-17A cascade in order to develop new therapeutic options for the treatment of disorders involving the IL-17A/IL-17RA axis.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили пептиды, способные связываться с конкретным участком на N-концевой части IL-17A и, тем самым, ингибировать взаимодействие с IL-17RA и образование комплекса IL-17A7IL-17RA/IL17RC.The present inventors have surprisingly found peptides capable of binding to a specific site on the N-terminal portion of IL-17A and thereby inhibiting interaction with IL-17RA and the formation of the IL-17A7IL-17RA/IL17RC complex.

Ингибирование указанного взаимодействия блокирует каскад передачи сигнала IL-17A. Таким образом, пептиды по изобретению способны снижать связанное с TH17 воспаление и последующее повреждение, наблюдаемое при воспалительных и аутоиммунных заболеваниях, где эти клетки и IL-17A играют ключевую роль.Inhibition of this interaction blocks the IL-17A signaling cascade. Thus, the peptides of the invention are able to reduce TH17-associated inflammation and subsequent damage seen in inflammatory and autoimmune diseases where these cells and IL-17A play a key role.

Как будет показано в экспериментальном разделе, пептиды по изобретению обладают физико-химическими свойствами, которые делают их особенно пригодными для местного лечения офтальмологических и дерматологических заболеваний.As will be shown in the experimental section, the peptides of the invention have physicochemical properties that make them particularly suitable for the topical treatment of ophthalmic and dermatological disorders.

Такие пептиды являются пригодными для конструирования инновационного и специфического местного лечения заболеваний, зависимых от чрезмерного продуцирования или активности IL-17A.Such peptides are useful for constructing innovative and specific topical treatments for diseases dependent on excessive production or activity of IL-17A.

Задачей настоящего изобретения являются пептиды, способные ингибировать связывание IL-17A с IL-17RA, димерами и биоконъюгатами, фармацевтические композиции, содержащие указанные пептиды, димеры или биоконъюгаты, и применение вышеуказанных для предупреждения и/или лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний, зависимых от IL-17A.The present invention provides peptides capable of inhibiting the binding of IL-17A to IL-17RA, dimers and bioconjugates, pharmaceutical compositions containing said peptides, dimers or bioconjugates, and the use of the above for the prevention and/or treatment of autoimmune and inflammatory diseases dependent on IL- 17A.

Краткое описание чертежейBrief description of the drawings

На фиг. 1 представлены некоторые кривые доза-ответ, полученные в анализе димеризации IL-17RA-IL17RC, описанном в примере 5, с репрезентативными связывающими IL-17A пептидами по изобретению. Указан процент ингибирования димеризации IL-17RA/IL17RC, индуцированной IL-17A, при обработке различными пептидами.In FIG. 1 shows some dose-response curves obtained in the IL-17RA-IL17RC dimerization assay described in Example 5 with representative IL-17A binding peptides of the invention. The percent inhibition of IL-17RA/IL17RC dimerization induced by IL-17A upon treatment with various peptides is indicated.

На фиг. 2 представлена активность связывающего IL-17A пептида SEQ ID N.18 в отношении секреции IL6, IL-17A и IL23 дифференцированными и активированными клетками TH17 человека, измеренная, как описано в примере 6. Указана концентрация различных цитокинов в супернатанте клеток TH17 с или без (контрольного) пептида SEQ ID N.18.In FIG. 2 shows the activity of the IL-17A binding peptide of SEQ ID N.18 on secretion of IL6, IL-17A and IL23 by differentiated and activated human TH17 cells, measured as described in Example 6. The concentration of various cytokines in the supernatant of TH17 cells with or without ( control) peptide SEQ ID N.18.

На фиг. 3 представлена активность связывающего IL-17A пептида SEQ ID N.18 в отношении секреции металлопротеиназы 3 дифференцированными и активированными клетками TH17 человека, измеренная, как описано в примере 6. Указана концентрация металлопротеиназы 3 в супернатанте клеток TH17 с или без (контрольного) пептида SEQ ID N.18.In FIG. 3 shows the activity of IL-17A binding peptide SEQ ID N.18 on secretion of metalloproteinase 3 by differentiated and activated human TH17 cells measured as described in Example 6. The concentration of metalloproteinase 3 in the supernatant of TH17 cells with or without (control) SEQ ID peptide is shown. N.18.

На фиг. 4 представлена жизнеспособность клеток TH17 человека через 24 ч в присутствии и в отсутствии (контрольного) пептида SEQ ID N 18, как описано в примере 6.In FIG. 4 shows the viability of human TH17 cells after 24 hours in the presence and absence of the (control) peptide SEQ ID NO: 18 as described in Example 6.

На фиг. 5 представлен участок связывания на IL-17A для пептидов IL-17A по изобретению.In FIG. 5 shows the IL-17A binding site for the IL-17A peptides of the invention.

На фиг. 6 представлены сенсограммы, полученные в эксперименте примера 9 с пептидом SEQ ID N 2 (верхняя панель) или SEQ ID N 1 (нижняя панель).In FIG. 6 shows the sensorgrams obtained in the experiment of Example 9 with the peptide SEQ ID No. 2 (upper panel) or SEQ ID No. 1 (lower panel).

На фиг. 7 представлена величина константы аффинности при различных концентрациях пептида SEQ ID N 2 (верхняя панель) или SEQ ID N 1 (нижняя панель), полученная в эксперименте согласно примеру 9.In FIG. 7 shows the value of the affinity constant at different concentrations of the peptide SEQ ID N 2 (upper panel) or SEQ ID N 1 (lower panel) obtained in the experiment according to example 9.

На фиг. 8 представлен уровень экспрессии IL-8, измеренный посредством ПЦР в реальном времени, как описано в примере 10, в клетках HCEC, не обработанных (носитель) или обработанных пептидом SEQ ID N. 2 (панель A) или пептидом HAP (SEQ ID N. 1) (панель B). Планки погрешности соответствуют стандартному отклонению. Для статистического анализа использовали T-критерий. Значение P *<0,05, **<0,005, ***<0,0005.In FIG. 8 shows the expression level of IL-8 measured by real-time PCR as described in Example 10 in HCEC cells untreated (vehicle) or treated with SEQ ID N. 2 peptide (panel A) or HAP peptide (SEQ ID N. 1) (panel B). Error bars correspond to the standard deviation. T-test was used for statistical analysis. P-value *<0.05, **<0.005, ***<0.0005.

На фиг.9 представлено количество IL-6, измеренное посредством ПЦР в реальном времени, как описано в примере 10, в клетках HCEC, не обработанных (носитель) или обработанных пептидом SEQ ID N. 2 (панель A) или пептидом HAP (SEQ ID N. 1) (панель B). Планки погрешности соответствуют стандартному отклонению. Для статистического анализа использовали T-критерий. Значение P *<0,05, **<0,005, ***<0,0005.Figure 9 shows the amount of IL-6 measured by real-time PCR as described in Example 10 in HCEC cells untreated (vehicle) or treated with SEQ ID N. 2 peptide (panel A) or HAP peptide (SEQ ID N. 1) (panel B). Error bars correspond to the standard deviation. T-test was used for statistical analysis. P-value *<0.05, **<0.005, ***<0.0005.

На фиг.10 представлено количество TNF-α, измеренное посредством ПЦР в реальном времени, как описано в примере 10, в клетках HCEC, не обработанных (носитель) или обработанных пептидом SEQ ID N. 2 (панель A) или пептидом HAP (SEQ ID N. 1) (панель B). Планки погрешности соответствуют стандартному отклонению. Для статистического анализа использовали T-критерий. Значение P *<0,05, **<0,005, ***<0,0005.Figure 10 shows the amount of TNF-α measured by real-time PCR as described in Example 10 in HCEC cells untreated (vehicle) or treated with SEQ ID N. 2 peptide (panel A) or HAP peptide (SEQ ID N. 1) (panel B). Error bars correspond to the standard deviation. T-test was used for statistical analysis. P-value *<0.05, **<0.005, ***<0.0005.

ОпределенияDefinitions

Если не определено иначе, подразумевается, что все термины в данной области, обозначения и другая научная терминология, используемые в настоящем описании, имеют значения, часто подразумеваемые специалистами в области, к которой относится изобретение. В некоторых случаях термины с часто подразумеваемыми значениями определены в настоящем описании для ясности и/или для простоты отсылки; таким образом, включение таких определений в настоящее описание не следует истолковывать как отражение значительного отличия от того, что обычно подразумевается в данной области.Unless otherwise specified, all art terms, designations and other scientific terminology used in the present description are intended to have the meanings often implied by those skilled in the art to which the invention pertains. In some instances, terms with often implied meanings are defined herein for clarity and/or ease of reference; thus, the inclusion of such definitions in the present specification should not be construed as reflecting a significant departure from what is commonly understood in the art.

Термин "фармацевтически приемлемый эксципиент" относится к веществам, отличным от активного фармацевтического ингредиента (API), которые были надлежащим образом оценены в отношении безопасности и намеренно включены в систему доставки лекарственного средства. Фармацевтически приемлемые эксципиенты хорошо известны в данной области и описаны, например, в Handbook of Pharmaceutical Excipients, seventh edition 2013, которая включена в настоящее описание в качестве ссылки (Rowe, Sheskey et al. 2012).The term "pharmaceutically acceptable excipient" refers to substances other than the active pharmaceutical ingredient (API) that have been properly assessed for safety and intentionally included in a drug delivery system. Pharmaceutically acceptable excipients are well known in the art and are described, for example, in the Handbook of Pharmaceutical Excipients, seventh edition 2013, which is incorporated herein by reference (Rowe, Sheskey et al. 2012).

Эксципиенты обычно классифицируют в зависимости от функции, которую они выполняют в конечной фармацевтической композиции. Предпочтительно, подходящие эксципиенты в соответствии с настоящим изобретением представляют собой, например, разбавитель, адсорбент, вещество, способствующее скольжению, связующее вещество, смазывающее вещество, поверхностно-активное вещество, разрыхлитель, консерванты, антиоксидант или их смеси.Excipients are generally classified according to the function they perform in the final pharmaceutical composition. Preferably, suitable excipients in accordance with the present invention are, for example, a diluent, adsorbent, glidant, binder, lubricant, surfactant, disintegrant, preservatives, antioxidant, or mixtures thereof.

Термины "примерно" и "приблизительно" в настоящем описании относятся к экспериментальной погрешности, которая может возникать в ходе эксперимента.The terms "about" and "approximately" in the present description refer to the experimental error that may occur during the experiment.

Термины "содержащий", "имеющий", "включающий" и "охватывающий" следует истолковывать как открытые термины (т.е. означающие "включая, но не ограничиваясь ими"), и их следует считать дающими основание также для терминов "по существу состоит из", "по существу состоящий из", "состоит из" или "состоящий из".The terms "comprising", "having", "including", and "covering" should be construed as open terms (i.e., meaning "including, but not limited to"), and should be considered as giving rise to the terms "essentially consists of", "essentially consisting of", "consisting of", or "consisting of".

Термины "по существу состоит из", "по существу состоящий из" следует истолковывать как полузакрытые термины, что означает, что не включены никакие другие ингредиенты, которые значительно влияют на основные и новые характеристики изобретения (таким образом, могут быть включены необязательные эксципиенты).The terms "essentially consists of", "essentially consisting of" should be construed as semi-closed terms, which means that no other ingredients are included that significantly affect the essential and novel features of the invention (thus, optional excipients may be included).

Термины "состоит из", "состоящий из" следует истолковывать как закрытые термины.The terms "consists of", "consisting of" should be construed as closed terms.

Термин "биоконъюгат", как используют в рамках изобретения, относится к конъюгату, образованному посредством стабильного ковалентного связывания между различными молекулами, необязательно связанными посредством спейсера, по меньшей мере одна из которых представляет собой биомолекулу.The term "bioconjugate", as used herein, refers to a conjugate formed by stable covalent bonding between different molecules, optionally linked by a spacer, at least one of which is a biomolecule.

Термин "биомолекула", как используют в рамках изобретения, относится к молекулам биологического происхождения. Термин включает макромолекулы, такие как углеводы, липиды и белки, или небольшие природные продукты. Для целей настоящего изобретения "биомолекулы" предпочтительно выбраны из аскорбиновой кислоты, каприновой кислоты, капроновой кислоты, N-ацетилглюкозамина (также обозначаемого как NAG), N-ацетилмурамовой кислоты (также обозначаемой как NAM), гиалуроновой кислоты, альгиновой кислоты, хитина, (GalNAc)₂, Gal-альфа1,3-GalNAc или тригалактуроновой кислоты.The term "biomolecule" as used herein refers to molecules of biological origin. The term includes macromolecules such as carbohydrates, lipids and proteins, or small natural products. For the purposes of the present invention, "biomolecules" are preferably selected from ascorbic acid, capric acid, caproic acid, N-acetylglucosamine (also referred to as NAG), N-acetylmuramic acid (also referred to as NAM), hyaluronic acid, alginic acid, chitin, (GalNAc ) ₂ , Gal-alpha1,3-GalNAc or trigalacturonic acid.

Определение "консервативная замена" в настоящем описании относится к консервативной перестановке (также называемой консервативной мутацией или консервативной заменой) и представляет собой аминокислотную замену, которая изменяет данную аминокислоту на другую аминокислоту со сходными биохимическими свойствами (Simon French 1983).The term "conservative substitution" as used herein refers to a conservative rearrangement (also called conservative mutation or conservative substitution) and is an amino acid substitution that changes a given amino acid to another amino acid with similar biochemical properties (Simon French 1983).

Описание изобретенияDescription of the invention

Авторы настоящего изобретения идентифицировали ряд пептидов, которые способны связываться с высокой аффинностью с IL-17A и ингибировать его взаимодействие с рецептором ILRA. Эти соединения действуют в качестве ингибиторов передачи сигнала IL-17A.The present inventors have identified a number of peptides that are able to bind with high affinity to IL-17A and inhibit its interaction with the ILRA receptor. These compounds act as inhibitors of IL-17A signaling.

Таким образом, первой задачей настоящего изобретения является пептид, способный ингибировать связывание IL-17A с ILRA, имеющий аминокислотную последовательность либо:Thus, the first object of the present invention is a peptide capable of inhibiting the binding of IL-17A to ILRA having the amino acid sequence of either:

формулы (I):formulas (I):

(I) X₁- X₂-X₃-X₄- X₅- X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅ (I) X ₁ - X ₂ -X ₃ -X ₄ - X ₅ - X ₆ -X ₇ -X ₈ -X ₉ -X ₁₀ -X ₁₁ -X ₁₂ -X ₁₃ -X ₁₄ -X ₁₅

где, независимо друг от друга: where, independently of each other:

X₁ представляет собой I, V, D, K, W, A, G, L или P;X ₁ is I, V, D, K, W, A, G, L, or P;

X₂ представляет собой H, M, K, N, R, E, Q, W или Y;X ₂ is H, M, K, N, R, E, Q, W, or Y;

X₃ представляет собой V, F, A, G, L, P, I, Y или W;X ₃ is V, F, A, G, L, P, I, Y, or W;

X₄ представляет собой T, Q, H, S, N или Y;X ₄ is T, Q, H, S, N or Y;

X₅ представляет собой I, F, A, G, L, P, V или Y;X ₅ is I, F, A, G, L, P, V or Y;

X₆ представляет собой P, G, A, L, V, I или N;X ₆ is P, G, A, L, V, I or N;

X₇ представляет собой A, Q, G, L, P, V, I, N или E;X ₇ is A, Q, G, L, P, V, I, N, or E;

X₈ представляет собой D, E, N, Q или Y;X ₈ is D, E, N, Q or Y;

X₉ представляет собой L, V, F, W, A, G, P, I или H;X ₉ is L, V, F, W, A, G, P, I, or H;

X₁₀ представляет собой W, Y, F или Q или он отсутствует;X ₁₀ is W, Y, F or Q or is absent;

X₁₁ представляет собой D, E или N или он отсутствует;X ₁₁ is D, E or N or is absent;

X₁₂ представляет собой W, F, V, H или Y или он отсутствует;X ₁₂ is W, F, V, H, or Y or is absent;

X₁₃ представляет собой I, V, F, E, K, A, G, L, P или Y или он отсутствует;X ₁₃ is I, V, F, E, K, A, G, L, P, or Y or is absent;

X₁₄ представляет собой N, R, E, F, Q или D или он отсутствует;X ₁₄ is N, R, E, F, Q or D or is absent;

X₁₅ представляет собой K, R, E, F, V, W, H или D или он отсутствует;X ₁₅ is K, R, E, F, V, W, H or D or is absent;

при условии, что указанная последовательность не является IHVTIPADLWDWINK (SEQ ID N. 1) или ее укороченной на C-конце последовательностью длиной 12-14 аминокислот IHVTIPADLWDWIN, IHVTIPADLWDWI или IHVTIPADLWDW; provided that said sequence is not IHVTIPADLWDWINK (SEQ ID N. 1) or its C-terminally truncated 12-14 amino acid sequence IHVTIPADLWDWIN, IHVTIPADLWDWI, or IHVTIPADLWDW;

либо формулы (II):or formulas (II):

(II) a_n-DLSAVCWAFPWDPECH-b_n’ (II) a _n -DLSAVCWAFPWDPECH-b _n'

a, b выбраны из A, R, N, D, C, E, Q, G, H, I, L, K, M, F, P, S, T, W, Y или V; a, b are selected from A, R, N, D, C, E, Q, G, H, I, L, K, M, F, P, S, T, W, Y, or V;

n=целое число от 0 до 3;n=an integer from 0 to 3;

n’ = целое число от 0 до 3.n' = integer from 0 to 3.

Предпочтительно, в формуле (II) каждая из аминокислот, отличных от a или b, может быть заменена консервативной заменой. Preferably, in formula (II), each of the amino acids other than a or b may be replaced by a conservative substitution.

Предпочтительным пептидом формулы (II) является DLSAVCWAFPWDPECH (SEQ ID N. 41).A preferred peptide of formula (II) is DLSAVCWAFPWDPECH (SEQ ID N. 41).

Особенно предпочтительными являются пептиды формулы (I). Especially preferred are the peptides of formula (I).

Согласно предпочтительному варианту осуществления в указанном пептиде формулы (I):According to a preferred embodiment, in said peptide of formula (I):

X₁ представляет собой I, V, D, K или W;X ₁ represents I, V, D, K or W;

X₂ представляет собой H, M, K или N;X ₂ is H, M, K or N;

X₃ представляет собой V или F;X ₃ is V or F;

X₄ представляет собой T, Q, H, V или Y;X ₄ is T, Q, H, V or Y;

X₅ представляет собой I или F;X ₅ is I or F;

X₆ представляет собой P или G;X ₆ is P or G;

X₇ представляет собой A или Q;X ₇ is A or Q;

X₈ представляет собой D, E, N;X ₈ is D, E, N;

X₉ представляет собой L, V, F или W;X ₉ is L, V, F or W;

X₁₀ представляет собой W, Y, F или он отсутствует;X ₁₀ is W, Y, F or none;

X₁₁ представляет собой D, E, N или он отсутствует;X ₁₁ is D, E, N or is absent;

X₁₂ представляет собой W, F, V или он отсутствует;X ₁₂ is W, F, V or none;

X₁₃ представляет собой I, V, F или он отсутствует;X ₁₃ is I, V, F or absent;

X₁₄ представляет собой N, R, E, F или он отсутствует;X ₁₄ is N, R, E, F or is absent;

X₁₅ представляет собой K, R, E, F, V, W или он отсутствует;X ₁₅ is K, R, E, F, V, W or is absent;

при условии, что указанная последовательность не является IHVTIPADLWDWINK (SEQ ID N. 1) или ее укороченной на C-конце последовательностью длиной 12-14 аминокислот IHVTIPADLWDWIN, IHVTIPADLWDWI или IHVTIPADLWDW.provided that said sequence is not IHVTIPADLWDWINK (SEQ ID N. 1) or its C-terminally truncated 12-14 amino acid sequence IHVTIPADLWDWIN, IHVTIPADLWDWI, or IHVTIPADLWDW.

В соответствии с альтернативным предпочтительным вариантом осуществления в указанном пептиде формулы (I):According to an alternative preferred embodiment, in said peptide of formula (I):

X₁ представляет собой I, V, A, G, L или P;X ₁ represents I, V, A, G, L or P;

X₂ представляет собой H, M, K, R, E, Q, W или Y;X ₂ is H, M, K, R, E, Q, W, or Y;

X₄ представляет собой T, Q, S, N или Y;X ₄ is T, Q, S, N or Y;

X₁₂ представляет собой W, F, H или Y или он отсутствует;X ₁₂ is W, F, H or Y or is absent;

X₁₄ представляет собой N, R, E, Q или D или он отсутствует;X ₁₄ is N, R, E, Q or D or is absent;

X₁₅ представляет собой K, R, E, V, W, H или D или он отсутствует;X ₁₅ is K, R, E, V, W, H or D or is absent;

Предпочтительно, в указанном выше пептиде формулы (I) все аминокислоты X₁-X₁₅ присутствуют и описанные выше пептиды формулы (I) имеют последовательность из 15 аминокислот. Предпочтительно, в пептидах (I), имеющих последовательность менее 15 аминокислот, когда отсутствует одна аминокислота, также отсутствуют все аминокислоты со стороны N-конца от указанной аминокислоты. Например, если аминокислота X₁₀ отсутствует, также отсутствуют аминокислоты X₁₁-X₁₅.Preferably, in the above peptide of formula (I) all amino acids X ₁ -X ₁₅ are present and the peptides of formula (I) described above have a sequence of 15 amino acids. Preferably, in peptides (I) having a sequence of less than 15 amino acids, when one amino acid is missing, all amino acids from the N-terminal side of said amino acid are also missing. For example, if amino acid X ₁₀ is missing, amino acids X ₁₁ -X ₁₅ are also missing.

Особенно предпочтительными пептидами формулы (I) являются пептиды, где X₁ представляет собой V.Particularly preferred peptides of formula (I) are those wherein X ₁ is V.

Конкретным предпочтительным пептидом, имеющим в качестве X₁ V, является пептид SEQ ID N 2.A particular preferred peptide having X ₁ V is SEQ ID NO: 2.

Как продемонстрировано в экспериментальном разделе, авторы настоящего изобретения обнаружили, что пептид SEQ ID N 2, где первая аминокислота изолейцин в пептиде HAP SEQ ID N.1 заменена валином, неожиданно демонстрирует поразительно отличающиеся функциональные и физико-химические свойства, а также улучшенную переносимость по сравнению с HAP.As demonstrated in the experimental section, the inventors of the present invention have found that the peptide of SEQ ID N.2, wherein the first amino acid isoleucine in the HAP peptide of SEQ ID N.1 is replaced by valine, unexpectedly exhibits strikingly different functional and physicochemical properties, as well as improved tolerability compared to with HAP.

В частности, как продемонстрировано в примерах, пептид демонстрирует улучшенные физико-химические свойства, которые являются особенно преимущественными для местного и офтальмологического применения, лучшую проницаемость и увеличенную аффинность в отношении IL-17A по сравнению с соответствующим пептидом SEQ ID N 1. Также авторы изобретения обнаружили, что пептид HAP, независимо от его активности в отношении передачи сигнала IL-17A, демонстрирует прямой эффект токсичности в отношении клеток роговицы путем индукции экспрессии воспалительных цитокинов. Неожиданно пептид SEQ ID N. 2 не демонстрирует этого эффекта и, таким образом, характеризуется улучшенной переносимостью по сравнению с HAP.In particular, as demonstrated in the examples, the peptide exhibits improved physico-chemical properties that are particularly advantageous for topical and ophthalmic applications, better permeability and increased affinity for IL-17A compared to the corresponding peptide of SEQ ID N 1. Also, the inventors found that the HAP peptide, regardless of its IL-17A signaling activity, exhibits a direct toxicity effect on corneal cells by inducing the expression of inflammatory cytokines. Surprisingly, the peptide of SEQ ID N. 2 does not show this effect and thus has improved tolerability compared to HAP.

Предпочтительно, в описанном выше пептиде формулы (I):Preferably, in the peptide of formula (I) described above:

X₁ представляет собой I, V или L;X ₁ represents I, V or L;

X₂ представляет собой H, M, R, K или E;X ₂ represents H, M, R, K or E;

X₃ представляет собой V, F или I;X ₃ is V, F or I;

X₄ представляет собой T, Q, S, Y или N;X ₄ is T, Q, S, Y or N;

X₅ представляет собой I, F или V;X ₅ represents I, F or V;

X₆ представляет собой P;X ₆ is P;

X₇ представляет собой A, Q или L;X ₇ is A, Q or L;

X₈ представляет собой D, E или Q;X ₈ is D, E or Q;

X₉ представляет собой L, W, F, V или I;X ₉ is L, W, F, V or I;

X₁₀ представляет собой W, Y или F;X ₁₀ is W, Y or F;

X₁₁ представляет собой D, E или N;X ₁₁ is D, E or N;

X₁₂ представляет собой W или F;X ₁₂ is W or F;

X₁₃ представляет собой I, V, F или L;X ₁₃ represents I, V, F or L;

X₁₄ представляет собой N, R, Q или E;X ₁₄ is N, R, Q or E;

X₁₅ представляет собой K, R, H или E; X ₁₅ is K, R, H or E;

при условии, что указанная последовательность не является IHVTIPADLWDWINK (SEQ ID N. 1);provided that said sequence is not IHVTIPADLWDWINK (SEQ ID N. 1);

илиor

X₁ представляет собой I или V;X ₁ represents I or V;

X₂ представляет собой H, M или R,X ₂ is H, M or R,

X₃ представляет собой V или F;X ₃ is V or F;

X₄ представляет собой T или Q;X ₄ is T or Q;

X₆ представляет собой P или G;X ₆ is P or G;

X₇ представляет собой A или Q;X ₇ is A or Q;

X₈ представляет собой D или E;X ₈ is D or E;

X₉ представляет собой L;X ₉ is L;

X₁₀ представляет собой W или Y;X ₁₀ is W or Y;

X₁₁ представляет собой D или E;X ₁₁ is D or E;

X₁₂ представляет собой W;X ₁₂ is W;

X₁₃ представляет собой I или V;X ₁₃ is I or V;

X₁₄ представляет собой N, R или E;X ₁₄ is N, R or E;

X₁₅ представляет собой K, R или E;X ₁₅ is K, R or E;

илиor

X₁ представляет собой I или V;X ₁ represents I or V;

X₂ представляет собой H или M,X ₂ is H or M,

X₃ представляет собой V;X ₃ is V;

X₄ представляет собой T;X ₄ is T;

X₅ представляет собой I;X ₅ is I;

X₆ представляет собой P;X ₆ is P;

X₇ представляет собой A;X ₇ is A;

X₈ представляет собой D;X ₈ is D;

X₁₀ представляет собой W или Y;X ₁₀ is W or Y;

X₁₁ представляет собой D или E;X ₁₁ is D or E;

X₁₂ представляет собой W;X ₁₂ is W;

X₁₃ представляет собой I или V;X ₁₃ is I or V;

илиor

X₂ представляет собой M, K, R, E, Q, W или Y;X ₂ is M, K, R, E, Q, W or Y;

X₁₀ представляет собой Y, F или Q;X ₁₀ is Y, F or Q;

X₁₂ представляет собой W, F, H или Y;X ₁₂ is W, F, H or Y;

X₁₃ представляет собой I, V, F, E, K, A, G, L, P;X ₁₃ is I, V, F, E, K, A, G, L, P;

X₁₄ представляет собой N, R, E, Q или D;X ₁₄ is N, R, E, Q or D;

X₁₅ представляет собой K, R, E, V, W, H или D;X ₁₅ is K, R, E, V, W, H, or D;

илиor

X₁ представляет собой V, A, G, L или P;X ₁ is V, A, G, L or P;

X₁₃ представляет собой I, V, F, E, K, A, G, L, P или Y;X ₁₃ is I, V, F, E, K, A, G, L, P, or Y;

или or

илиor

X₁₀ представляет собой W, Y, F или Q;X ₁₀ is W, Y, F or Q;

X₁₃ представляет собой V, F, E, K, A, G, L, P или Y;X ₁₃ is V, F, E, K, A, G, L, P, or Y;

илиor

X₂ представляет собой M, K, N, R, E, Q, W или Y;X ₂ is M, K, N, R, E, Q, W, or Y;

X₁₁ представляет собой E или N;X ₁₁ represents E or N;

илиor

ИлиOr

илиor

X₁₄ представляет собой R, E, Q или D;X ₁₄ is R, E, Q or D;

X₁₅ представляет собой R, E, V, W, H или D;X ₁₅ is R, E, V, W, H, or D;

илиor

X₁₅ представляет собой R, E, V, W, H или D.X ₁₅ is R, E, V, W, H, or D.

Особенно предпочтительными пептидами формулы (I) среди пептидов, описанных выше, являются пептиды, где X₁ представляет собой V.Particularly preferred peptides of formula (I) among those described above are those wherein X ₁ is V.

Как продемонстрировано в экспериментальном разделе, когда первая аминокислота в пептиде формулы (I) представляет собой валин, пептид неожиданно демонстрирует физико-химические свойства, особенно преимущественные для местного и офтальмологического применения, и увеличенную аффинность в отношении IL-17A.As demonstrated in the experimental section, when the first amino acid in the peptide of formula (I) is valine, the peptide unexpectedly exhibits physicochemical properties particularly advantageous for topical and ophthalmic applications and increased affinity for IL-17A.

Предпочтительно, в описанном выше пептиде формулы (I) присутствуют все аминокислоты с X₁ по X₁₅.Preferably, all amino acids X ₁ to X ₁₅ are present in the peptide of formula (I) as described above.

Предпочтительные индивидуальные пептиды формулы (I) в соответствии с настоящим изобретением приведены в таблице 1 ниже.Preferred individual peptides of formula (I) according to the present invention are shown in Table 1 below.

Таблица 1Table 1

SEQ ID N.SEQID N. ПоследовательностьSubsequence SEQ ID N. 2SEQ ID N. 2 VHVTIPADLWDWINKVHVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 3SEQID N. 3 IMVTIPADLWDWINKIMVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 4SEQ ID N. 4 VMVTIPADLWDWINKVMVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 5SEQ ID N. 5 IHVTIPAELWDWINKIHVTIPAELWDWINK SEQ ID N. 6SEQID N. 6 IHVTIPADLYDWINKIHVTIPADLYDWINK SEQ ID N. 7SEQ ID N. 7 IHVTIPADLYEWINKIHVTIPADLYEWINK SEQ ID N. 8SEQ ID N. 8 IHVTIPADLWDWVNKIHVTIPADLWDWVNK SEQ ID N. 9SEQ ID N. 9 IHVTIPADLWDWIRKIHVTIPADLWDWIRK SEQ ID N. 10SEQ ID N. 10 IHVTIPADLWDWINRIHVTIPADLWDWINR SEQ ID N. 11SEQ ID N. 11 IHVTIPADLWDWIEKIHVTIPADLWDWIEK SEQ ID N. 12SEQ ID N. 12 IHVTIPADLWDWINEIHVTIPADLWDWINE SEQ ID N. 13SEQ ID N. 13 IHVTIPADLYEWINKIHVTIPADLYEWINK SEQ ID N. 14SEQ ID N. 14 IHVTIPADLWDWVRRIHVTIPADLWDWVRR SEQ ID N. 15SEQ ID N. 15 IHVTIPADLWDWVEEIHVTIPADLWDWVEE SEQ ID N. 16SEQ ID N. 16 VMVTIPADLYEWINKVMVTIPADLYEWINK SEQ ID N. 17SEQ ID N. 17 VMVTIPADLYEWIRRVMVTIPADLYEWIRR SEQ ID N. 18SEQ ID N. 18 VMVTIPADLYEWIEEVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 42SEQ ID N.42 IMVTIPADLYEWIEEIMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 111SEQ ID N. 111 VHVTIPAELWEWVRRVHVTIPAELWEWVRR SEQ ID N. 112SEQ ID N. 112 VHFTIPADLWEWVRRVHFTIPADLWEWVRR SEQ ID N. 113SEQ ID N. 113 VHVQIPADLWEWVRRVHVQIPADLWEWVRR SEQ ID N. 114SEQ ID N. 114 VHVTFPADLWEWVRRVHVTFPADLWEWVRR SEQ ID N. 115SEQ ID N. 115 VHVTIPQDLWEWVRRVHVTIPQDLWEWVRR SEQ ID N. 116SEQ ID N. 116 VHVTIPANLWEWVRRVHVTIPANLWEWVRR SEQ ID N. 117SEQ ID N. 117 VHVTIPADFWEWVRRVHVTIPADFWEWVRR SEQ ID N. 118SEQ ID N. 118 VHVTIPADLYEWVRRVHVTIPADLYEWVRR SEQ ID N. 119SEQ ID N. 119 VHVTIPADLWNWVRRVHVTIPADLWNWVRR SEQ ID N. 120SEQ ID N. 120 VHVTIPADLWEFVRRVHVTIPADLWEFVRR SEQ ID N. 121SEQ ID N. 121 VHVTIPADLWEWFRRVHVTIPADLWEWFRRR SEQ ID N. 122SEQ ID N. 122 VHVYIPAELWEWVRRVHVYIPAELWEWVRR SEQ ID N. 123SEQ ID N. 123 VHVTIPAEWWEWVRRVHVTIPAEWWEWVRR SEQ ID N. 124SEQ ID N. 124 VHFTFPQDLWEWVRRVHFTFPQDLWEWVRR SEQ ID N. 125SEQ ID N. 125 VHFTFPQDFWEWVRRVHFTFPQDFWEWVRR SEQ ID N. 126SEQ ID N. 126 VHFTIPQDLYEWVRRVHFTIPQDLYEWVRR SEQ ID N. 127SEQ ID N. 127 VHFTFPQDLWNWVRRVHFTFPQDLWNWVRR SEQ ID N. 128SEQ ID N. 128 VHFTFPQDLWEFVRRVHFTFPQDLWEFVRR SEQ ID N. 129SEQ ID N. 129 VHFTFPQDLWEWFRRVHFTFPQDLWEWFRRR SEQ ID N. 130SEQ ID N. 130 VHFQFPADLWEWVRRVHFQFPADLWEWVRR SEQ ID N. 131SEQ ID N. 131 VHFQFPADFWEWVRRVHFQFPADFWEWVRR SEQ ID N. 132SEQ ID N. 132 VHFQFPADLYEWVRRVHFQFPADLYEWVRR SEQ ID N. 133SEQ ID N. 133 VHFQFPADLWNWVRRVHFQFPADLWNWVRR SEQ ID N. 134SEQ ID N. 134 VHFQFPADLWEFVRRVHFQFPADLWEFVRR SEQ ID N. 135SEQ ID N. 135 VHFQFPADLWEWFRRVHFQFPADLWEWFRRR SEQ ID N. 136SEQ ID N. 136 VHFQFPQDWWEWVRRVHFQFPQDWWEWVRR SEQ ID N. 137SEQ ID N. 137 VHFQIPQDWWEWVRRVHFQIPQDWWEWVRR SEQ ID N. 138SEQ ID N. 138 VHFQFPQDWYEWVRRVHFQFPQDWYEWVRR SEQ ID N. 139SEQ ID N. 139 VHFQFPQDWWNWVRRVHFQFPQDWWNWVRR SEQ ID N. 140SEQ ID N. 140 VHFQFPQDLWEFVRRVHFQFPQDLWEFVRR SEQ ID N. 141SEQ ID N. 141 VHFQFPQDWWEWFRRVHFQFPQDWWEWFRRR SEQ ID N. 142SEQ ID N. 142 VHFTIPADFWEWFRRVHFTIPADFWEWFRRR SEQ ID N. 143SEQ ID N. 143 VHVQIPADFWEWFRRVHVQIPADFWEWFRRR SEQ ID N. 144SEQ ID N. 144 VHVTFPADLWEWFRRVHVTFPADLWEWFRRR SEQ ID N. 145SEQ ID N. 145 VHVTIPQDFWEWFRRVHVTIPQDFWEWFRRR SEQ ID N. 146SEQ ID N. 146 VHFTIPQDWWEWVRRVHFTIPQDWWEWVRR SEQ ID N. 147SEQ ID N. 147 VHFTFPQDLYNWVRRVHFTFPQDLYNWVRR SEQ ID N. 148SEQ ID N. 148 VHFTFPQDLYNFVRRVHFTFPQDLYNFVRR SEQ ID N. 149SEQ ID N. 149 VHVTIPADLYNFFRRVHVTIPADLYNFFRR SEQ ID N. 150SEQ ID N. 150 VHFQFPQDLWEWVRRVHFQFPQDLWEWVRR SEQ ID N. 151SEQ ID N. 151 VHFTIPQDLYNWRRVHFTIPQDLYNWRR SEQ ID N. 152SEQ ID N. 152 VHFTIPADLYNFVRRVHFTIPADLYNFVRR SEQ ID N. 153SEQ ID N. 153 VHFQIPQDLYNFFRRVHFQIPQDLYNFFRR SEQ ID N. 154SEQ ID N. 154 VHFQFPQEWYNWFRRVHFQFPQEWYNWFRRR SEQ ID N. 155SEQ ID N. 155 VRFQFGQEWYNFFRRVRFQFGQEWYNFFRR SEQ ID N. 158 SEQ ID N. 158 AHVTIPADLWDWINKAHVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 159SEQ ID N. 159 GHVTIPADLWDWINKGHVTIPADLWDWINK SEQ ID N.160 SEQ ID N.160 LHVTIPADLWDWINKLHVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 161SEQ ID N. 161 PHVTIPADLWDWINKPHVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 162SEQ ID N. 162 IRVTIPADLWDWINKIRVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 163SEQ ID N. 163 IKVTIPADLWDWINKIKVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 164SEQ ID N. 164 IEVTIPADLWDWINKIEVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 165SEQ ID N. 165 IQVTIPADLWDWINKIQVTIPADLWDWINK SEQ ID N.166 SEQ ID N.166 IYVTIPADLWDWINKIYVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 167SEQ ID N. 167 IHATIPADLWDWINKIHATIPADLWDWINK SEQ ID N. 168SEQ ID N. 168 IHGTIPADLWDWINKIHGTIPADLWDWINK SEQ ID N. 169SEQ ID N. 169 IHLTIPADLWDWINKIHLTIPADLWDWINK SEQ ID N. 170SEQ ID N. 170 IHPTIPADLWDWINKIHPTIPADDLWDWINK SEQ ID N. 171SEQ ID N. 171 IHITIPADLWDWINKIHITIPADLWDWINK SEQ ID N. 172SEQ ID N. 172 IHYTIPADLWDWINKIHYTIPADLWDWINK SEQ ID N. 173SEQ ID N. 173 IHWTIPADLWDWINKIHWTIPADLWDWINK SEQ ID N. 174SEQ ID N. 174 IHFTIPADLWDWINKIHFTIPADLWDWINK SEQ ID N. 175SEQ ID N. 175 IHVSIPADLWDWINKIHVSIPADLWDWINK SEQ ID N. 176SEQ ID N. 176 IHVYIPADLWDWINKIHVYIPADLWDWINK SEQ ID N. 177SEQ ID N. 177 IHVNIPADLWDWINKIHVNIPADLWDWINK SEQ ID N. 178SEQ ID N. 178 IHVQIPADLWDWINKIHVQIPADLWDWINK SEQ ID N. 179SEQ ID N. 179 IHVTAPADLWDWINKIHVTAPADLWDWINK SEQ ID N. 180SEQ ID N. 180 IHVTGPADLWDWINKIHVTGPADLWDWINK SEQ ID N. 181SEQ ID N. 181 IHVTLPADLWDWINKIHVTLPADLWDWINK SEQ ID N. 182SEQ ID N. 182 IHVTPPADLWDWINKIHVTPPADLWDWINK SEQ ID N. 183SEQ ID N. 183 IHVTVPADLWDWINKIHVTVPADLWDWINK SEQ ID N. 184SEQ ID N. 184 IHVTFPADLWDWINKIHVTFPADLWDWINK SEQ ID N. 185SEQ ID N. 185 IHVTYPADLWDWINKIHVTYPADLWDWINK SEQ ID N. 186SEQ ID N. 186 IHVTIAADLWDWINKIHVTIAADLWDWINK SEQ ID N. 187SEQ ID N. 187 IHVTIGADLWDWINKIHVTIGADLWDWINK SEQ ID N. 188SEQ ID N. 188 IHVTILADLWDWINKIHVTILADLWDWINK SEQ ID N. 189SEQ ID N. 189 IHVTIVADLWDWINKIHVTIVADLWDWINK SEQ ID N. 190SEQ ID N. 190 IHVTIIADLWDWINKIHVTIIADLWDWINK SEQ ID N. 191SEQ ID N. 191 IHVTINADLWDWINKIHVTINADLWDWINK SEQ ID N. 192SEQ ID N. 192 IHVTIPGDLWDWINKIHVTIPGDLWDWINK SEQ ID N. 193SEQ ID N. 193 IHVTIPLDLWDWINKIHVTIPLDLWDWINK SEQ ID N. 194SEQ ID N. 194 IHVTIPPDLWDWINKIHVTIPPDLWDWINK SEQ ID N. 195SEQ ID N. 195 IHVTIPVDLWDWINKIHVTIPVDLWDWINK SEQ ID N. 196SEQ ID N. 196 IHVTIPIDLWDWINKIHVTIPIDLWDWINK SEQ ID N. 197SEQ ID N. 197 IHVTIPNDLWDWINKIHVTIPNDLWDWINK SEQ ID N. 198SEQ ID N. 198 IHVTIPQDLWDWINKIHVTIPQDLWDWINK SEQ ID N. 199SEQ ID N. 199 IHVTIPAQLWDWINKIHVTIPAQLWDWINK SEQ ID N. 200SEQ ID N. 200 IHVTIPAYLWDWINKIHVTIPAYLWDWINK SEQ ID N. 201SEQ ID N. 201 IHVTIPADAWDWINKIHVTIPADAWDWINK SEQ ID N. 202SEQ ID N. 202 IHVTIPADGWDWINKIHVTIPADGWDWINK SEQ ID N. 203SEQ ID N. 203 IHVTIPADPWDWINKIHVTIPADPWDWINK SEQ ID N. 204SEQ ID N. 204 IHVTIPADVWDWINKIHVTIPADVWDWINK SEQ ID N. 205SEQ ID N. 205 IHVTIPADIWDWINKIHVTIPADIWDWINK SEQ ID N. 206SEQ ID N. 206 IHVTIPADLHDWINKIHVTIPADLHDWINK SEQ ID N. 207SEQ ID N. 207 IHVTIPADLFDWINKIHVTIPADLFDWINK SEQ ID N. 208SEQ ID N. 208 IHVTIPADLWNWINKIHVTIPADLWNWINK SEQ ID N. 209SEQ ID N. 209 IHVTIPADLWDHINKIHVTIPADLWDHINK SEQ ID N. 210SEQ ID N. 210 IHVTIPADLWDFINKIHVTIPADLWDFINK SEQ ID N. 211SEQ ID N. 211 IHVTIPADLWDYINKIHVTIPADLWDYINK SEQ ID N. 212SEQ ID N. 212 IHVTIPADLWDWENKIHVTIPADLWDWENK SEQ ID N. 213SEQ ID N. 213 IHVTIPADLWDWKNKIHVTIPADLWDWKNK SEQ ID N. 214SEQ ID N. 214 IHVTIPADLWDWANKIHVTIPADLWDWANK SEQ ID N. 215SEQ ID N. 215 IHVTIPADLWDWGNKIHVTIPADLWDWGNK SEQ ID N. 216SEQ ID N. 216 IHVTIPADLWDWLNKIHVTIPADLWDWLNK SEQ ID N. 217SEQ ID N. 217 IHVTIPADLWDWPNKIHVTIPADLWDWPNK SEQ ID N. 218SEQ ID N. 218 IHVTIPADLWDWFNKIHVTIPADLWDWFNK SEQ ID N. 219SEQ ID N. 219 IHVTIPADLWDWYNKIHVTIPADLWDWYNK SEQ ID N. 220SEQ ID N. 220 IHVTIPADLWDWIQKIHVTIPADLWDWIQK SEQ ID N. 221SEQ ID N. 221 IHVTIPADLWDWIDKIHVTIPADLWDWIDK SEQ ID N. 222SEQ ID N. 222 IHVTIPADLWDWINHIHVTIPADLWDWINH SEQ ID N. 223SEQ ID N. 223 IHVTIPADLWDWINDIHVTIPADLWDWIND SEQ ID N. 224SEQ ID N. 224 VHVTVPQELWEWVRRVHVTVPQELWEWVRR SEQ ID N. 225SEQ ID N. 225 VHVTVPQELFEWVRRVHVTVPQELFEWVRR SEQ ID N. 226SEQ ID N. 226 VHVTVPQELYEWVRRVHVTVPQELYEWVRR SEQ ID N. 227SEQ ID N. 227 VHVTVPQELWEWVEEVHVTVPQELWEWVEE SEQ ID N. 228SEQ ID N. 228 VHVTVPQELFEWVEEVHVTVPQELFEWVEE SEQ ID N. 229SEQ ID N. 229 VHVTVPQELYEWVEEVHVTVPQELYEWVEE SEQ ID N. 230SEQ ID N. 230 VHVSIPQELWEWVRRVHVSIPQELWEWVRR SEQ ID N. 231SEQ ID N. 231 VHVSVPQELWEWVRRVHVSVPQELWEWVRR SEQ ID N. 232SEQ ID N. 232 VHVSVPQELYEWVRRVHVSVPQELYEWVRR SEQ ID N. 233SEQ ID N. 233 VRVTIPQELWEWVRRVRVTIPQELWEWVRR SEQ ID N. 234SEQ ID N. 234 VRVTVPQELYEWVRRVRVTVPQELYEWVRR SEQ ID N. 235SEQ ID N. 235 VRVTVPQELWEWVRRVRVTVPQELWEWVRR SEQ ID N. 236SEQ ID N. 236 VHVTVPQEIYEWVRRVHVTVPQEIYEWVRR SEQ ID N. 237SEQ ID N. 237 VHVTIPQEIWEWVRRVHVTIPQEIWEWVRR SEQ ID N. 238SEQ ID N. 238 VHFTVPQELYEWVRRVHFTVPQELYEWVRR SEQ ID N. 239SEQ ID N. 239 VKISVPADLWDWINKVKISVPADLWDWINK SEQ ID N. 240SEQ ID N. 240 LRISVPADLWDWINKLRISVPADLWDWINK SEQ ID N. 241SEQ ID N. 241 LRIYVPADLWDWINKLRIYVPADLWDWINK SEQ ID N. 242SEQ ID N. 242 VRGYVPADLWDWINKVRGYVPADLWDWINK SEQ ID N. 243SEQ ID N. 243 VRAYVPADLWDWINKVRAYVPADLWDWINK SEQ ID N. 244SEQ ID N. 244 VRLYVPADLWDWINKVRLYVPADLWDWINK SEQ ID N. 245SEQ ID N. 245 VRIYLPADLWDWINKVRIYLPADLWDWINK SEQ ID N. 246SEQ ID N. 246 IHVTIPLEIFEWLQHIHVTIPLEIFEWLQH SEQ ID N. 247SEQ ID N. 247 IHVTIPLEIFEWAQHIHVTIPLEIFEWAQH SEQ ID N. 248SEQ ID N. 248 IHVTIPLEIFEWLQRIHVTIPLEIFEWLQR SEQ ID N. 249SEQ ID N. 249 IHVTIPLEVFEWLQHIHVTIPLEVFEWLQH SEQ ID N. 250SEQ ID N. 250 IHVTIPGEIFEWLQHIHVTIPGEIFEWLQH SEQ ID N. 251SEQ ID N. 251 VRFSVPQEIYEWVRRVRFSVPQEIYEWVRR SEQ ID N. 252SEQ ID N. 252 LRISVPLEIFEWLQHLRISVPLEIFEWLQH SEQ ID N. 253SEQ ID N. 253 LRGSVPLEIFEWLQHLRGSVPLEIFEWLQH SEQ ID N. 254SEQ ID N. 254 VKISVPLEIFEWLQHVKISVPLEIFEWLQH SEQ ID N. 255SEQ ID N. 255 VEFNFPQQVYEWFDDVEFNFPQQVYEWFDD SEQ ID N. 256SEQ ID N. 256 VEFNFPQQVYEWVRRVEFNFPQQVYEWVRR SEQ ID N. 257SEQ ID N. 257 TWYVFNEQHQEYVRKTWYVFNEQHQEYVRK

Другими пептидными ингибиторами IL-17A согласно изобретению являются пептиды, приведенные в таблице 1AOther peptide inhibitors of IL-17A according to the invention are the peptides shown in table 1A

Таблица 1A:Table 1A:

SEQ ID N. 156SEQ ID N. 156 VPGAGVPGAGIHVTIVPGAGVPGAGIHVTI SEQ ID N. 157SEQ ID N. 157 VPGAGVPGAGIHVTIPAVPGAGVPGAGIHVTIPA

Другие аминокислотные последовательности могут быть добавлены к N- или C-концу пептидов согласно первой задаче настоящего изобретения.Other amino acid sequences may be added to the N- or C-terminus of the peptides according to the first object of the present invention.

Согласно предпочтительному варианту осуществления, описанные выше пептиды формулы (I) или (II) связаны на их N- и/или C-конце с дополнительной аминокислотной последовательностью, причем последовательность A имеет аминокислотную последовательность формулы (III)According to a preferred embodiment, the peptides of formula (I) or (II) described above are linked at their N- and/or C-terminus with an additional amino acid sequence, the sequence A having the amino acid sequence of formula (III)

(III) Y₁-Y₂-Y₃- Y₄-Y₅-Y₆- Y₇-Y₈-Y₉- Y₁₀-Y₁₁-Y_12- Y₁₃-Y₁₄-Y₁₅-Y₁₆ (III) Y ₁ -Y ₂ -Y ₃ - Y ₄ -Y ₅ -Y ₆ - Y ₇ -Y ₈ -Y ₉ - Y ₁₀ -Y ₁₁ -Y ₁₂ - Y ₁₃ -Y ₁₄ -Y ₁₅ -Y ₁₆

где:Where:

Y₁ представляет собой A, T, V, K, R, I, L, X или G;Y ₁ is A, T, V, K, R, I, L, X, or G;

Y₂ представляет собой R, W, P, E, Q или A;Y ₂ represents R, W, P, E, Q or A;

Y₃ представляет собой K, W, G, T, I, R или P;Y ₃ is K, W, G, T, I, R or P;

Y₄ представляет собой K, T, E, W, A, R, D, G, X или F;Y ₄ is K, T, E, W, A, R, D, G, X, or F;

Y₅ представляет собой A, E, T, G, W, I, R, P или V;Y ₅ is A, E, T, G, W, I, R, P, or V;

Y₆ представляет собой A, W, E, R, G, P или отсутствует;Y ₆ is A, W, E, R, G, P or absent;

Y₇ представляет собой K, S, W, T, F, R, V, G или отсутствует;Y ₇ is K, S, W, T, F, R, V, G or absent;

Y₈ представляет собой A, Q, W, R, G или отсутствует;Y ₈ is A, Q, W, R, G or absent;

Y₉представляет собой N, G или отсутствует;Y ₉ is N, G or absent;

Y₁₀представляет собойR или отсутствует;Y₁₀representsR or missing;

Y₁₁представляет собой R или отсутствует;Y ₁₁ is R or absent;

Y₁₂ представляет собойM или отсутствует;Y₁₂ representsM or missing;

Y₁₃представляет собойK или отсутствует;Y₁₃representsK or missing;

Y₁₄представляет собойW или отсутствует;Y₁₄representsW or missing;

Y₁₅представляет собой K или отсутствует;Y ₁₅ is K or absent;

Y₁₆представляет собойK или отсутствует.Y₁₆representsK or missing.

Предпочтительно, в последовательности формулы (III), когда аминокислота отсутствует, также отсутствуют аминокислоты на N-конце указанных аминокислотных последовательностей. Например, если аминокислота Y₆ отсутствует, также отсутствуют аминокислоты Y₇-Y₁₆.Preferably, in the sequence of formula (III), when an amino acid is missing, the amino acids at the N-terminus of said amino acid sequences are also missing. For example, if amino acid Y ₆ is missing, amino acids Y ₇ -Y ₁₆ are also missing.

Предпочтительные последовательности формулы (III) в соответствии с настоящим изобретением приведены в таблице 2 ниже.Preferred sequences of formula (III) according to the present invention are shown in Table 2 below.

Таблица 2table 2

ID ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИSEQUENCE ID ПоследовательностьSubsequence SEQ ID N. 44SEQ ID N. 44 ARKKAAKAARKKAAAKA SEQ ID N. 45SEQ ID N. 45 TWWTEWSQTWWTEWSQ SEQ ID N. 46SEQ ID N. 46 TWWETWWTWWETWW SEQ ID N. 47SEQ ID N. 47 VPGWGVPGWG SEQ ID N. 48SEQ ID N. 48 KETWWETWKETWWETW SEQ ID N. 49SEQ ID N. 49 VPGKGVPGKG SEQ ID N. 50SEQ ID N.50 VPGAGVPGAG SEQ ID N. 51SEQ ID N.51 RQIKIWFQNRRMKWKKRQIKIWFQNRRMKWKK SEQ ID N. 52SEQ ID N.52 RRRRRRRRRRRRRRRR SEQ ID N. 53SEQ ID N.53 VPGDGVPGDG SEQ ID N. 54SEQ ID N.54 VPGXGVPGXG SEQ ID N. 55SEQ ID N. 55 IPGGIPGG SEQ ID N. 56SEQ ID N.56 AVGVPAVGVP SEQ ID N. 57SEQ ID N. 57 IPGXGIPGXG SEQ ID N. 58SEQ ID N.58 IPGVGIPGVG SEQ ID N. 59SEQ ID N.59 LPGXGLPGXG SEQ ID N. 60SEQ ID N.60 LPGVGLPGVG SEQ ID N. 61SEQ ID N.61 VAPGVGVAPGVG SEQ ID N. 62SEQ ID N.62 XPGVGXPGVG SEQ ID N. 63SEQ ID N.63 GVGVPGVGGVGVPGVG SEQ ID N. 64SEQ ID N.64 VPGFGVGAGVPGFGVGAG SEQ ID N. 65SEQ ID N.65 VPGGVPGGVPGGVPGG

Таким образом, второй задачей изобретения является пептид, имеющий аминокислотную последовательность, содержащую, предпочтительно состоящую из, последовательности пептида формулы (I) или (II) согласно первой задаче изобретения и на C- и/или N-конце указанной последовательности A, как описано выше.Thus, the second object of the invention is a peptide having an amino acid sequence containing, preferably consisting of, the sequence of the peptide of formula (I) or (II) according to the first object of the invention and at the C- and/or N-terminus of said sequence A, as described above .

Аминокислотная последовательность A может быть связана как с N-, так и с C-концом пептида формулы (I) или (II). В таком случае две аминокислотных последовательности A, связанных с N- и C-концом указанного пептида, могут быть одинаковыми или могут различаться.The amino acid sequence A can be linked to both the N- and C-terminus of the peptide of formula (I) or (II). In such a case, the two amino acid sequences A linked to the N- and C-terminus of said peptide may be the same or may be different.

Альтернативно аминокислотная последовательность A может быть связана либо с N-, либо с C-концом пептида.Alternatively, the amino acid sequence A may be linked to either the N- or C-terminus of the peptide.

Предпочтительные индивидуальные пептиды согласно этой задаче изобретения приведены в таблице 3 ниже.Preferred individual peptides according to this objective of the invention are shown in Table 3 below.

Таблица 3Table 3

SEQ ID N.SEQID N. ПоследовательностьSubsequence SEQ ID N. 21SEQ ID N. 21 VMVTIPADLYEWIEEARKKAAKAVMVTIPADLYEWIEEARKKAAKA SEQ ID N. 22SEQ ID N. 22 VMVTIPADLYEWIEEGGTWWTEWSQVMVTIPADLYEWIEEGGTWWTEWSQ SEQ ID N.23SEQ ID N.23 VMVTIPADLYEWIEETWWETWWVMVTIPADLYEWIEETWWETWW SEQ ID N. 24SEQ ID N. 24 VMVTIPADLYEWIEEVPGWGVMVTIPADLYEWIEEVPGWG SEQ ID N. 25SEQ ID N. 25 VMVTIPADLYEWIEEGGKETWWETWVMVTIPADLYEWIEEGGKETWWETW SEQ ID N. 26SEQ ID N. 26 VMVTIPADLYEWIEEVPGKGVMVTIPADLYEWIEEVPGKG SEQ ID N. 27SEQ ID N. 27 VMVTIPADLYEWIEEVPGAGVMVTIPADLYEWIEEVPGAG SEQ ID N. 28SEQ ID N. 28 VMVTIPADLYEWIEERQIKIWFQNRRMKWKKVMVTIPADLYEWIEERQIKIWFQNRRMKWKK SEQ ID N. 31SEQ ID N. 31 ARKKAAKAVMVTIPADLYEWIEEARKKAAKAVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 32SEQ ID N. 32 GGTWWTEWSQVMVTIPADLYEWIEEGGTWWTEWSQVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 33SEQ ID N. 33 GGKETWWETWVMVTIPADLYEWIEEGGKETWWETWVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 34SEQ ID N. 34 VPGWGVMVTIPADLYEWIEEVPGWGVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 35SEQ ID N. 35 VPGAGVMVTIPADLYEWIEEVPGAGVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 36SEQ ID N. 36 VPGKGVMVTIPADLYEWIEEVPGKGVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 37SEQ ID N. 37 VMVTIPADLYEWIEEVPGAGVPGAGVMVTIPADLYEWIEEVPGAGVPGAG SEQ ID N. 38SEQ ID N. 38 VPGAGVPGAGVMVTIPADLYEWIEEVPGAGVPGAGVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 39SEQ ID N. 39 VPGDGVMVTIPADLYEWIEEVPGDGVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 40SEQ ID N.40 VMVTIPADLYEWIEEVPGDGVMVTIPADLYEWIEEVPGDG

В одном варианте осуществления, альтернативном тому, что описан выше, указанные пептиды формулы (I) или (II) согласно первой задаче изобретения могут быть связаны на их N- и/или C-конце с аминокислотной последовательностью (A)_m, где A представляет собой аминокислоту, выбранную из R, K, G, E, Q или A, предпочтительно R, K, G, E или A, и m представляет собой целое число от 1 до 10.In one embodiment, alternative to that described above, said peptides of formula (I) or (II) according to the first object of the invention may be linked at their N- and/or C-terminus to the amino acid sequence (A) _m , where A represents is an amino acid selected from R, K, G, E, Q or A, preferably R, K, G, E or A, and m is an integer from 1 to 10.

Аминокислотная последовательность (A)_m может быть связана как с N-, так и с C-концом пептида формулы (I) или (II). В таком случае две аминокислотных последовательности (A)_m, связанных с N- и C-концом указанного пептида, могут быть одинаковыми или могут различаться.The amino acid sequence (A) _m can be linked to both the N- and C-terminus of the peptide of formula (I) or (II). In such a case, the two amino acid sequences (A) _m linked to the N- and C-terminus of said peptide may be the same or may be different.

Альтернативно аминокислотная последовательность (A)_m может быть связана либо с N-, либо с C-концом указанного пептида.Alternatively, the amino acid sequence (A) _m may be linked to either the N- or C-terminus of said peptide.

Таким образом, первой задачей изобретения является пептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая содержит, предпочтительно состоит из, последовательности пептида согласно первой задаче изобретения и на C- и/или N-конце указанной последовательности (A)_m, как определено выше.Thus, the first object of the invention is a peptide having an amino acid sequence which contains, preferably consists of, the peptide sequence according to the first object of the invention and at the C- and/or N-terminus of said sequence (A) _m as defined above.

Предпочтительные индивидуальные пептиды согласно этому варианту осуществления изобретения приведены в таблице 4 ниже.Preferred individual peptides according to this embodiment of the invention are shown in Table 4 below.

Таблица 4Table 4

SEQ ID N.SEQID N. ПоследовательностьSubsequence SEQ ID N. 19SEQ ID N. 19 VMVTIPADLYEWIEERRRRRRVMVTIPADLYEWIEERRRRRR SEQ ID N. 20SEQ ID N. 20 VMVTIPADLYEWIEERRRVMVTIPADLYEWIEERRR SEQ ID N. 29SEQ ID N. 29 RRRRRRRRVMVTIPADLYEWIEERRRRRRRRVMVTIPADLYEWIEE SEQ ID N. 30SEQ ID N. 30 VMVTIPADLYEWIEERRRRRRRRVMVTIPADLYEWIEERRRRRRRR SEQ ID N. 43SEQ ID N. 43 IMVTIPADLYEWIEEQIMVTIPADLYEWIEEQ

В конкретном варианте осуществления указанные пептиды формулы (I) или (II) связаны как с последовательностью A, так и с последовательностью (A)_m. В этом случае указанные пептиды связаны на их N- и/или C-конце с аминокислотной последовательностью (A)_m, как определено выше, которая связана на ее N- и/или C-конце с аминокислотной последовательностью A, как описано выше.In a particular embodiment, said peptides of formula (I) or (II) are linked to both sequence A and sequence (A) _m . In this case, said peptides are linked at their N- and/or C-terminus to the amino acid sequence (A) _m as defined above, which is linked at its N- and/or C-terminus to the amino acid sequence A as described above.

Таким образом, четвертой задачей изобретения является пептид, имеющий аминокислотную последовательность, которая содержит, предпочтительно состоит из, последовательности пептида согласно первой задаче изобретения, на C- и/или N-конце указанной последовательности (A)_m, как описано выше, или на C- и/или N-конце указанной последовательности A, как описано выше.Thus, the fourth object of the invention is a peptide having an amino acid sequence which contains, preferably consists of, the sequence of the peptide according to the first object of the invention, at the C- and/or N-terminus of said sequence (A) _m as described above, or at C - and/or N-terminus of said sequence A, as described above.

Согласно предпочтительному варианту осуществления пептида в соответствии с любой из описанных выше задач изобретения, указанный пептид связан на C- и/или N-конце с защитной кэп-группой, способной препятствовать деградации.According to a preferred embodiment of a peptide according to any of the objects of the invention described above, said peptide is linked at the C- and/or N-terminus with a protective cap group capable of preventing degradation.

Можно использовать любую защитную кэп-группу, известную в данной области.Any protective cap group known in the art can be used.

Предпочтительно, защитная группа, связанная с C-концом, выбрана из амидов, предпочтительно N-алкиламидов, альдегидов, сложных эфиров, предпочтительно метиловых и этиловых сложных эфиров, п-нитроанилида, 7-амино-4-метилкумарина.Preferably, the C-terminal protecting group is selected from amides, preferably N-alkyl amides, aldehydes, esters, preferably methyl and ethyl esters, p-nitroanilide, 7-amino-4-methylcoumarin.

Предпочтительно, защитная кэп-группа, связанная с N-концом, выбрана из ацетила, формила, пироглутамила, жирных кислот, мочевины, карбамата, сульфонамида, алкиламина.Preferably, the N-terminal protecting cap is selected from acetyl, formyl, pyroglutamyl, fatty acids, urea, carbamate, sulfonamide, alkylamine.

Предпочтительно, описанные выше пептиды связаны с защитной кэп-группой только на N-конце. Более предпочтительно, указанные пептиды связаны с защитной кэп-группой только на N-конце, и защитная кэп-группа представляет собой ацетил.Preferably, the peptides described above are capped at the N-terminus only. More preferably, these peptides are capped at the N-terminus only, and the protecting cap is acetyl.

Является особенно преимущественным получение димеров описанных выше пептидов согласно любой из различных задач по изобретению, предпочтительно пептидов формулы (I) или (II) согласно первой задаче изобретения, для повышения аффинности связывания и ингибиторной активности.It is particularly advantageous to prepare dimers of the peptides described above according to any of the various objects of the invention, preferably the peptides of formula (I) or (II) according to the first object of the invention, in order to increase binding affinity and inhibitory activity.

В соответствии с вышеуказанным, предпочтительно пептиды согласно различным задачам изобретения, описанные выше, предпочтительно пептиды формулы (I) или (II) согласно первой задаче изобретения, более предпочтительно пептиды формулы (I) согласно первой задаче изобретения, присутствуют в форме димеров.According to the above, preferably the peptides according to the various objects of the invention described above, preferably the peptides of formula (I) or (II) according to the first object of the invention, more preferably the peptides of formula (I) according to the first object of the invention, are present in the form of dimers.

Таким образом, пятой задачей настоящего изобретения является димер, образованный двумя пептидами согласно любой из указанных выше задач изобретения. Предпочтительно указанные пептиды представляют собой пептиды формулы (I) или (II) согласно первой задаче изобретения, более предпочтительно они представляют собой пептиды формулы (I) согласно первой задаче изобретения.Thus, the fifth object of the present invention is a dimer formed by two peptides according to any of the above objects of the invention. Preferably said peptides are peptides of formula (I) or (II) according to the first object of the invention, more preferably they are peptides of formula (I) according to the first object of the invention.

Предпочтительно, указанный димер представляет собой гомодимер, где два пептида, образующих димер, имеют идентичную последовательность. Предпочтительно, в указанном димере пептиды связаны посредством спейсерной молекулы, предпочтительно спейсера на основе полиэтиленгликоля.Preferably, said dimer is a homodimer, wherein the two peptides forming the dimer have an identical sequence. Preferably, in said dimer, the peptides are linked via a spacer molecule, preferably a polyethylene glycol based spacer.

Предпочтительно, согласно этому варианту осуществления, полиэтиленгликоль связан с N-концом пептидов согласно изобретению или с аминокислотами X₄, X₇ или X₁₄ двух пептидов формулы (I).Preferably, according to this embodiment, the polyethylene glycol is linked to the N-terminus of the peptides according to the invention or to the amino acids X ₄ , X ₇ or X ₁₄ of the two peptides of formula (I).

Согласно следующему варианту осуществления, в отсутствии защитной кэп-группы пептиды согласно различным задачам изобретения связаны, предпочтительно на их C- и/или N-конце, с биомолекулой с образованием биоконъюгата. Предпочтительно, указанная биомолекула выбрана из каприновой кислоты, капроновой кислоты, аскорбиновой кислоты, NAG-NAM, NAG, NAM, гиалуроновой кислоты, альгиновой кислоты, хитина, (GalNAc)₂, Gal-альфа1,3-GalNAc и тригалактуроновой кислоты.According to a further embodiment, in the absence of a protective cap group, the peptides according to various aspects of the invention are linked, preferably at their C- and/or N-terminus, to a biomolecule to form a bioconjugate. Preferably, said biomolecule is selected from capric acid, caproic acid, ascorbic acid, NAG-NAM, NAG, NAM, hyaluronic acid, alginic acid, chitin, (GalNAc) ₂ , Gal-alpha1,3-GalNAc and trigalacturonic acid.

Биолмолекулу связывают с пептидом либо для добавления пептиду конкретной функции, либо для модулирования физико-химических свойств пептида. Например, аскорбиновая кислота сообщает пептиду антиоксидантную активность, капроновая кислота способствует заякориванию пептида на клеточной мембране.The biomolecule is coupled to the peptide either to add a specific function to the peptide or to modulate the physicochemical properties of the peptide. For example, ascorbic acid imparts antioxidant activity to the peptide, while caproic acid promotes anchoring of the peptide on the cell membrane.

Таким образом, задачей изобретения является биоконъюгат, содержащий, предпочтительно состоящий из пептида согласно различным задачам изобретению, предпочтительно пептида формулы (I) или (II) согласно первой задаче изобретения, более предпочтительно пептида формулы (I) согласно первой задаче изобретения, и по меньшей мере биомолекулы, как описано выше.Thus, the object of the invention is a bioconjugate containing, preferably consisting of a peptide according to various objects of the invention, preferably a peptide of formula (I) or (II) according to the first object of the invention, more preferably a peptide of formula (I) according to the first object of the invention, and at least biomolecules as described above.

Предпочтительно, в указанном биоконъюгате указанная биомолекула связана с N- и/или C-концом указанного пептида.Preferably, in said bioconjugate, said biomolecule is linked to the N- and/or C-terminus of said peptide.

Предпочтительные биоконъюгаты согласно этому варианту осуществления приведены в таблице 5 ниже.Preferred bioconjugates according to this embodiment are shown in Table 5 below.

Таблица 5Table 5

Название биоконъюгатаBioconjugate name ПоследовательностьSubsequence Bio-1Bio-1 NAM-IMVTIPADLYEWIEENAM-IMVTIPADLYEWIEE Bio-2Bio-2 IMVTIPADLYEWIEEQ-NAGIMVTIPADLYEWIEEQ-NAG Bio-3Bio-3 NAG-NAM-IMVTIPADLYEWIEENAG-NAM-IMVTIPADLYEWIEE Bio-4Bio-4 каприновая кислота-IMVTIPADLYEWIEEcapric acid-IMVTIPADLYEWIEE Bio-5Bio-5 Аскорбиновая кислота-IMVTIPADLYEWIEEAscorbic acid-IMVTIPADLYEWIEE

Согласно одному варианту осуществления, в описанном выше биоконъюгате описанная выше биомолекула или защитная кэп-группа связана непосредственно с N- и/или C-концом пептида.In one embodiment, in the bioconjugate described above, the biomolecule or protective cap group described above is linked directly to the N- and/or C-terminus of the peptide.

Согласно одному варианту осуществления, указанная биомолекула связана как с N-, так и с C-концом пептида. В таком случае две биомолекулы, связанные с N- и C-концом указанного пептида могут быть одинаковыми или могут различаться.In one embodiment, said biomolecule is linked to both the N- and C-terminus of the peptide. In such a case, the two biomolecules associated with the N- and C-terminus of said peptide may be the same or may be different.

Согласно альтернативному варианту осуществления указанная биомолекула связана либо с N-, либо с C-концом пептида.In an alternative embodiment, said biomolecule is linked to either the N- or C-terminus of the peptide.

Согласно альтернативному варианту осуществления, описанная выше биомолекула или защитная кэп-группа связана с N- и/или C-концом пептида посредством линкера. Предпочтительно, указанный линкер выбран из 4-аминомасляной кислоты, бета-аланина, 2-аминоэтоксиуксусной кислоты, 5-аминовалериановой кислоты, 6-аминокапроновой кислоты, 8-амино-3,6-диоксаоктановой кислоты, 12-амино-4,7,10-триоксадодекановой кислоты, 15-амино-4,7,10,13-тетраоксапентадекановой кислоты и триоксатридекансукцинамовой кислоты. Предпочтительно, когда линкер связан с одной аминокислотой лизином, указанный линкер выбран из NHS-сложного эфира, изоцианатов, бензоилфторидов или карбаматов.In an alternative embodiment, the above-described biomolecule or protective cap group is linked to the N- and/or C-terminus of the peptide via a linker. Preferably, said linker is selected from 4-aminobutyric acid, beta-alanine, 2-aminoethoxyacetic acid, 5-aminovaleric acid, 6-aminocaproic acid, 8-amino-3,6-dioxaoctanoic acid, 12-amino-4,7,10 -trioxadodecanoic acid, 15-amino-4,7,10,13-tetraoxapentadecanoic acid and trioxatridecanosuccinamic acid. Preferably, when the linker is linked to one amino acid lysine, said linker is selected from NHS ester, isocyanates, benzoyl fluorides or carbamates.

В соответствии другими вариантами осуществления, описанными выше, настоящее изобретение относится к соединению, содержащему или состоящему из связывающего IL-17A пептида формулы (I) или (II), описанного выше, и имеющему следующую формулу (IV):According to other embodiments described above, the present invention relates to a compound comprising or consisting of an IL-17A binding peptide of formula (I) or (II) described above and having the following formula (IV):

(IV) [биомолекула или CAP]_a - [линкер]_b - (последовательность A)_n-A_m-[пептид] - A’_m’-(последовательность A)_n’-[линкер]_b’-[биомолекула или CAP]_a’ (IV) [biomolecule or CAP] _a - [linker] _b - (sequence A) _n -A _m - [peptide] - A'_m' - (sequence A) _n' - [linker] _b' - [biomolecule or CAP ] _a'

где независимо друг от друга:where independently of each other:

a=0 или 1;a=0 or 1;

b=0 или 1;b=0 or 1;

a’ = 0 или 1;a' = 0 or 1;

b’ = 0 или 1;b' = 0 or 1;

m=0-10;m=0-10;

m’ = 0-10;m' = 0-10;

n= 0 или 5;n=0 or 5;

n’= 0 или 5,n'= 0 or 5,

иAnd

пептид представляет собой полипептид формулы (I) или формулы (II);the peptide is a polypeptide of formula (I) or formula (II);

A или A’ представляет собой одну аминокислоту, выбранную из R, K, G, E или A, повторенную m или m’ раз;A or A' is one amino acid selected from R, K, G, E or A, repeated m or m' times;

и последовательность A содержит последовательность формулы (III), описанную выше;and sequence A contains the sequence of formula (III) described above;

биомолекула представляет собой, в каждом случае независимо, капроновую кислоту, аскорбиновую кислоту, NAG-NAM, NAG, NAM, гиалуроновую кислоту, альгиновую кислоту, хитин, (GalNAc)₂, Gal-альфа1,3-GalNAc или тригалактуроновую кислоту;the biomolecule is, in each case independently, caproic acid, ascorbic acid, NAG-NAM, NAG, NAM, hyaluronic acid, alginic acid, chitin, (GalNAc) ₂ , Gal-alpha1,3-GalNAc or trigalacturonic acid;

CAP представляет собой, в каждом случае независимо, амид, альдегид, сложный эфир, п-нитроанилид, 7-амино-4-метилкумарин, ацетил, формил, пироглутамил или жирную кислоту;CAP is, at each occurrence independently, an amide, an aldehyde, an ester, a p-nitroanilide, a 7-amino-4-methylcoumarin, an acetyl, a formyl, a pyroglutamyl, or a fatty acid;

Линкер представляет собой, в каждом случае независимо, 4-аминомасляную кислоту, бета-аланин, 2-аминоэтоксиуксусную кислоту, 5-аминовалериановую кислоту, 6-аминокапроновую кислоту, 8-амино-3,6-диоксаоктановую кислоту, 12-амино-4,7,10-триоксадодекановую кислоту, 15-амино-4,7,10,13-тетраоксапентадекановую кислоту или триоксатридекансукцинамовую кислоту.The linker is, in each case independently, 4-aminobutyric acid, beta-alanine, 2-aminoethoxyacetic acid, 5-aminovaleric acid, 6-aminocaproic acid, 8-amino-3,6-dioxaoctanoic acid, 12-amino-4, 7,10-trioxadodecanoic acid, 15-amino-4,7,10,13-tetraoxapentadecanoic acid or trioxatridecanosuccinamic acid.

Согласно предпочтительному варианту осуществления, указанная последовательность A связана с N-концом или C-концом пептида формулы (I) или (II).According to a preferred embodiment, said sequence A is linked to the N-terminus or C-terminus of a peptide of formula (I) or (II).

Некоторые примеры возможных соединений в соответствии с настоящим изобретением описаны в настоящем описании ниже, но могут присутствовать все другие возможные комбинации, соответствующие формуле (IV):Some examples of possible compounds in accordance with the present invention are described in the present description below, but all other possible combinations corresponding to formula (IV) may be present:

[биомолекула или кэп] - [линкер] - (последовательность A) -A-[пептид]-;[biomolecule or cap] - [linker] - (sequence A) -A - [peptide] -;

[биомолекула или кэп] - (последовательность A) -A-[пептид]-;[biomolecule or cap] - (sequence A) -A-[peptide]-;

[биомолекула или кэп] -A-[пептид]-;[biomolecule or cap] -A-[peptide]-;

[биомолекула или кэп] -[пептид]-;[biomolecule or cap] -[peptide]-;

-[пептид] - A_m’- (последовательность A)_n’- [биомолекула или кэп]_a’; -[peptide] - A _m' - (sequence A) _n' - [biomolecule or cap] _a';

-[пептид] - A_m’- [биомолекула или кэп]_a’; -[peptide] - A _m' - [biomolecule or cap] _a';

-[пептид]- [биомолекула или кэп]_a’.-[peptide]- [biomolecule or cap] _a' .

Согласно предпочтительному варианту осуществления, биомолекула в формуле (IV) по настоящему изобретению выбрана из аскорбиновой кислоты, капроновой кислоты, NAG или NAM.According to a preferred embodiment, the biomolecule in formula (IV) of the present invention is selected from ascorbic acid, caproic acid, NAG or NAM.

Согласно следующему предпочтительному варианту осуществления кэп в соответствии с настоящим изобретением представляет собой C-концевую модификацию, выбранную из амидов, предпочтительно N-алкиламидов, альдегидов, сложных эфиров, предпочтительно метиловых и этиловых сложных эфиров, п-нитроанилида, 7-амино-4-метилкумарина, или N-концевую модификацию, выбранную из ацетила, формила, пироглутамила, жирных кислот, предпочтительно капроновой кислоты, мочевины, карбамата, сульфонамида или алкиламина, предпочтительно указанный кэп выбран из амидов, жирных кислот, таких как капроновая кислота, и ацетила.According to a further preferred embodiment, the cap according to the present invention is a C-terminal modification selected from amides, preferably N-alkyl amides, aldehydes, esters, preferably methyl and ethyl esters, p-nitroanilide, 7-amino-4-methylcoumarin , or an N-terminal modification selected from acetyl, formyl, pyroglutamyl, fatty acids, preferably caproic acid, urea, carbamate, sulfonamide or alkylamine, preferably said cap is selected from amides, fatty acids such as caproic acid, and acetyl.

В соответствии с настоящим изобретением, указанные линкер, биомолекула или кэп в формуле (IV) могут быть одинаковыми или могут различаться.According to the present invention, said linker, biomolecule or cap in formula (IV) may be the same or may be different.

В следующем предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения линкер формулы (IV) выбран из 4-аминомасляной кислоты, бета-аланина, 2-аминоэтоксиуксусной кислоты, 5-аминовалериановой кислоты или триоксатридекансукцинамовой кислоты.In a further preferred embodiment of the present invention, the linker of formula (IV) is selected from 4-aminobutyric acid, beta-alanine, 2-aminoethoxyacetic acid, 5-aminovaleric acid, or trioxatridecanosuccinamic acid.

Предпочтительно, когда линкер связан с одной аминокислотой лизином, указанный линкер выбран из NHS-сложного эфира, изоцианатов, бензоилфторидов или карбаматов.Preferably, when the linker is linked to one amino acid lysine, said linker is selected from NHS ester, isocyanates, benzoyl fluorides or carbamates.

Седьмой задачей настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая указанный пептид, димер или биоконъюгат согласно задачам изобретения, как описано выше, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Седьмой задачей настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая указанный пептид, димер или биоконъюгат согласно задачам изобретения, как описано выше, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.The seventh object of the present invention is a pharmaceutical composition containing the specified peptide, dimer or bioconjugate according to the objectives of the invention, as described above, and at least one pharmaceutically acceptable excipient. The seventh object of the present invention is a pharmaceutical composition containing the specified peptide, dimer or bioconjugate according to the objectives of the invention, as described above, and at least one pharmaceutically acceptable excipient.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть составлена в форме, пригодной для местного или офтальмологического введения.The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated in a form suitable for topical or ophthalmic administration.

Предпочтительно, когда введение фармацевтической композиции по изобретению проводят местным путем, фармацевтическую форму выбирают из крема, мази, геля, бальзама, раствора, жидкости для полоскания, суспензии, капель, буфера (буферного раствора), суспензии, глазных капель, капель, спрея, влажной салфетки или порошка, предпочтительно она выбрана из крема, геля, спрея или мази.Preferably, when the administration of the pharmaceutical composition according to the invention is carried out topically, the pharmaceutical form is selected from cream, ointment, gel, balm, solution, rinse, suspension, drops, buffer (buffer solution), suspension, eye drops, drops, spray, wet wipes or powder, preferably it is selected from a cream, gel, spray or ointment.

Для офтальмологического введения фармацевтическая форма предпочтительно выбрана из глазных капель, офтальмологических гелей, мазей, жидкостей для полоскания, влажных салфеток, спреев или кремов.For ophthalmic administration, the pharmaceutical form is preferably selected from eye drops, ophthalmic gels, ointments, rinses, wipes, sprays or creams.

Согласно конкретному варианту осуществления пептиды или биоконъюгаты по настоящему изобретению вводят местным путем с использованием микрочастиц или наночастиц.In a specific embodiment, the peptides or bioconjugates of the present invention are administered topically using microparticles or nanoparticles.

Согласно изобретению фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить животным и людям, определяемым как взрослые и как "педиатрическая популяция", где термин "педиатрическая популяция" указывает на часть популяции от рождения до восемнадцати лет.According to the invention, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered to animals and humans, defined as adults and as the "pediatric population", where the term "pediatric population" indicates the part of the population from birth to eighteen years.

Восьмой задачей настоящего изобретения является описанный выше пептид, димер или биоконъюгат согласно изобретению для применения для лечения и/или предупреждения воспалительного и аутоиммунного заболевания.An eighth object of the present invention is a peptide, dimer or bioconjugate according to the invention as described above for use in the treatment and/or prevention of an inflammatory and autoimmune disease.

Девятой задачей изобретения является способ лечения и/или предупреждения воспалительного и аутоиммунного заболевания, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества описанного выше пептида, димера или биоконъюгата согласно изобретению.The ninth object of the invention is a method for treating and/or preventing an inflammatory and autoimmune disease, comprising administering to a patient in need thereof a therapeutically effective amount of a peptide, dimer or bioconjugate of the invention as described above.

Предпочтительно, указанное воспалительное и аутоиммунное заболевание выбрано из ревматоидного артрита, рассеянного склероза, болезни Крона, системной красной волчанки, астмы, болезни Бехчета, гипер-IgE-синдрома, анкилозирующего спондилита, псориаза, псориатического артрита, ревматоидного артрита, сухого кератоконъюнктивита, весеннего кератоконъюнктивита, стромального герпетического кератита, отторжения аллотрансплантата роговицы, инфекций роговицы, предпочтительно обусловленного вирусом герпеса и Pseudomonas aeruginosa кератита, и болезни сухого глаза. Более предпочтительно указанное заболевание представляет собой аутоиммунное офтальмологическое или дерматологическое заболевание, еще более предпочтительно оно представляет собой болезнь сухого глаза или псориаз.Preferably, said inflammatory and autoimmune disease is selected from rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, Crohn's disease, systemic lupus erythematosus, asthma, Behcet's disease, hyper-IgE syndrome, ankylosing spondylitis, psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, keratoconjunctivitis sicca, keratoconjunctivitis sicca tivita, stromal herpetic keratitis, corneal allograft rejection, corneal infections, preferably due to herpes virus and Pseudomonas aeruginosa keratitis, and dry eye disease. More preferably said disease is an autoimmune ophthalmic or dermatological disease, even more preferably it is dry eye disease or psoriasis.

Общим для всех из указанных выше заболеваний и медицинских состояний является то, что их происхождение и/или симптомы связаны с IL-17A и/или Th-17.Common to all of the above diseases and medical conditions is that their origin and/or symptoms are associated with IL-17A and/or Th-17.

Более конкретно для последнего, болезни сухого глаза (DED), в высокой степени распространенного состояния, которое включает широкий спектр нарушений поверхности глаза, воспаление слизистой оболочки глаза является отличительной чертой, потенциально вызывающей снижение остроты зрения, если его не контролировать, вследствие индуцированной воспалением изъязвления и рубцевания роговицы. При прогрессировании DED, патогенные иммунные клетки, преимущественно Th17-клетки, непрерывно мигрируют на поверхность слизистой оболочки глаза и секретируют провоспалительные медиаторы, включая IL17, вызывая воспаление и эпителиопатию поверхности глаза.More specifically for the latter, dry eye disease (DED), a highly common condition that includes a wide range of ocular surface disorders, inflammation of the mucosal lining of the eye is a hallmark, potentially causing reduced visual acuity if not controlled due to inflammation-induced ulceration and corneal scarring. As DED progresses, pathogenic immune cells, predominantly Th17 cells, continuously migrate to the ocular mucosal surface and secrete pro-inflammatory mediators, including IL17, causing inflammation and epitheliopathy of the ocular surface.

Пептиды, димеры или биоконъюгаты по изобретению удобно и предпочтительно вводить местным путем в качестве глазных капель и офтальмологических гелей и мазей.The peptides, dimers or bioconjugates of the invention are conveniently and preferably administered topically as eye drops and ophthalmic gels and ointments.

В следующем варианте осуществления пептид, димер или биоконъюгат для применения в соответствии с настоящим изобретением вводят в качестве единственного активного вещества или в комбинации с другими активными веществами, и/или в комбинации с медицинскими устройствами для симптоматического лечения офтальмологических состояний, включая, но не ограничиваясь ими, DED, например, глазные смазывающие вещества или "искусственные слезы", местные вызывающие реэпителизацию средства, терапевтические контактные линзы и обтураторы слезных точек.In a further embodiment, a peptide, dimer, or bioconjugate for use in accordance with the present invention is administered as the sole active agent, or in combination with other active agents, and/or in combination with medical devices for the symptomatic treatment of ophthalmic conditions, including but not limited to , DED, such as ocular lubricants or "artificial tears", topical re-epithelializing agents, therapeutic contact lenses, and punctal obturators.

Предпочтительно, указанное дополнительное активное вещество представляет собой адъювант, иммуносупрессивное средство, иммуномодулирующее средство или противовоспалительное средство.Preferably, said additional active agent is an adjuvant, an immunosuppressive agent, an immunomodulatory agent, or an anti-inflammatory agent.

Например, связывающий IL-17A пептид по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с DMSO.For example, the IL-17A binding peptide of the present invention can be used in combination with DMSO.

Согласно предпочтительному варианту осуществления, связывающий IL-17A пептид по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с иммуносупрессивными моноклональными антителами, такими как моноклональные антитела, обладающие аффинностью к рецепторам лейкоцитов, выбранным из MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86, или их лигандам; другие иммуномодулирующие соединения, предпочтительно рекомбинантная связывающая молекула, имеющая по меньшей мере часть внеклеточного домена CTLA4 или ее мутант, по меньшей мере внеклеточной части CTLA4 или ее мутанта, связанных с белковой последовательностью не из CTLA4, например (например, CTLA4lg, обозначаемая как ATCC 68629) или ее мутантом, например LEA29Y; ингибиторы молекулы адгезии, антагонисты LFA-I, антагонисты ICAM-I или -3, антагонисты VCAM-4 или антагонисты VLA-4.According to a preferred embodiment, the IL-17A binding peptide of the present invention can be used in combination with immunosuppressive monoclonal antibodies, such as monoclonal antibodies having affinity for leukocyte receptors selected from MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28 , CD40, CD45, CD58, CD80, CD86, or their ligands; other immunomodulatory compounds, preferably a recombinant binding molecule having at least a portion of the extracellular domain of CTLA4 or a mutant thereof, at least an extracellular portion of CTLA4 or a mutant thereof, linked to a non-CTLA4 protein sequence, for example (e.g., CTLA4lg, referred to as ATCC 68629) or its mutant, for example LEA29Y; adhesion molecule inhibitors, LFA-I antagonists, ICAM-I or -3 antagonists, VCAM-4 antagonists or VLA-4 antagonists.

В следующем предпочтительном варианте осуществления связывающий IL-17A пептид по настоящему изобретению используют в комбинации с DMARD (модифицирующее заболевание противоревматическое лекарственное средство), предпочтительно солями золота, сульфасалазином, противомалярийными средствами, метотрексатом, D-пеницилламином, азатиоприном, микофеноловой кислотой, циклоспорином A, такролимусом, сиролимусом, миноциклином, лефлуномидом, глюкокортикоидами; ингибитором кальциневрина, предпочтительно циклоспорином A или FK 506; модулятором рециркуляции лимфоцитов, предпочтительно FTY720 и аналогами FTY720; ингибитором mTOR, предпочтительно рапамицином, 40-O-(2-гидроксиэтил)рапамицином, CCI779, ABT578, AP23573 или TAFA-93; аскомицином, имеющим иммуносупрессивные свойства, предпочтительно ABT-281, ASM981; кортикостероидами; циклофосфамидом; азатиопреном; метотрексатом; лефлуномидом; мизорибином; микофеноловой кислотой; микофенолатом мофетилом; 15-дезоксиспергуалином или их иммуносупрессивным гомологом, аналогом или производным; или химиотерапевтическим средством, предпочтительно паклитакселом, гемцитабином, цисплатином, доксорубицином или 5-фторурацилом; средствами против TNF, предпочтительно моноклональными антителами к TNF, предпочтительно инфликсимабом, адалимумабом, CDP870 или рецепторными конструкциями к TNF-RI или TNF-RII, предпочтительно этанерцептом, PEG-TNF-RI; блокаторами провоспалительных цитокинов, блокаторами IL-1, предпочтительно анакинрой или ловушкой IL-1, AAL160, ACZ 885, блокаторами IL-6; ингибиторами или активаторами протеаз, предпочтительно металлопротеиназ, антителами против IL-15, антителами против IL-6, антителами против IL-23, антителами против IL-22, антителами против IL-21, антителами против IL-12, антителами против IFN-гамма, антителами против IFN-альфа, антителами против CD20, противовоспалительными средствами, предпочтительно аспирином или противоинфекционным средством.In a further preferred embodiment, the IL-17A binding peptide of the present invention is used in combination with DMARD (disease-modifying antirheumatic drug), preferably gold salts, sulfasalazine, antimalarials, methotrexate, D-penicillamine, azathioprine, mycophenolic acid, cyclosporin A, tacrolimus , sirolimus, minocycline, leflunomide, glucocorticoids; a calcineurin inhibitor, preferably cyclosporine A or FK 506; a lymphocyte recirculation modulator, preferably FTY720 and FTY720 analogs; an mTOR inhibitor, preferably rapamycin, 40-O-(2-hydroxyethyl)rapamycin, CCI779, ABT578, AP23573 or TAFA-93; ascomycin having immunosuppressive properties, preferably ABT-281, ASM981; corticosteroids; cyclophosphamide; azathioprene; methotrexate; leflunomide; mizoribine; mycophenolic acid; mycophenolate mofetil; 15-deoxyspergualin or their immunosuppressive homologue, analog or derivative; or a chemotherapeutic agent, preferably paclitaxel, gemcitabine, cisplatin, doxorubicin or 5-fluorouracil; anti-TNF agents, preferably anti-TNF monoclonal antibodies, preferably infliximab, adalimumab, CDP870 or TNF-RI or TNF-RII receptor constructs, preferably etanercept, PEG-TNF-RI; pro-inflammatory cytokine blockers, IL-1 blockers, preferably anakinra or IL-1 decoy, AAL160, ACZ 885, IL-6 blockers; inhibitors or activators of proteases, preferably metalloproteinases, anti-IL-15 antibodies, anti-IL-6 antibodies, anti-IL-23 antibodies, anti-IL-22 antibodies, anti-IL-21 antibodies, anti-IL-12 antibodies, anti-IFN-gamma antibodies, anti-IFN-alpha antibodies, anti-CD20 antibodies, anti-inflammatory agents, preferably aspirin or an anti-infective agent.

Естественно, этот перечень средств для совместного введения не является ни ограничивающим, ни полным.Naturally, this list of agents for co-administration is neither limiting nor complete.

Следующей задачей настоящего изобретения является одни из пептидов, приведенных в таблице 6, для применения для лечения и/или предупреждения воспалительного и аутоиммунного заболевания, описанного выше.Another object of the present invention is one of the peptides listed in Table 6 for use in the treatment and/or prevention of the inflammatory and autoimmune disease described above.

Таблица 6.Table 6

SEQ ID N.SEQID N. ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬSUBSEQUENCE SEQ ID N. 1SEQ ID N. 1 IHVTIPADLWDWINKIHVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 66SEQ ID N.66 IVVTMPADLWDWIKAIVVTMPADLWDWIKA SEQ ID N. 67SEQ ID N.67 IVVTMPADLWDWIRAIVVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 68SEQ ID N.68 IVVTMPADLWDWIRKIVVTMPADLWDWIRK SEQ ID N. 69SEQ ID N.69 IVVTMPADLWDWIAAIVVTMPADLWDWIAA SEQ ID N. 70SEQ ID N. 70 IVVTMPADLWDWARAIVVTMPADLWDWARA SEQ ID N. 71SEQ ID N. 71 IVVTMPADLWAWIRAIVVTMPADLWAWIRA SEQ ID N. 72SEQ ID N. 72 IVVTMPADLADWIRAIVVTMPADLADWIRA SEQ ID N. 73SEQ ID N. 73 IVVTMPADAWDWIRAIVVTMPADAWDWIRA SEQ ID N. 74SEQ ID N. 74 IVVTMPADLWDWIRAIVVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 75SEQ ID N. 75 IVVTAPADLWDWIRAIVVTAPADLWDWIRA SEQ ID N. 76SEQ ID N. 76 IVVAMPADLWDWIRAIVVAMPADLWDWIRA SEQ ID N. 77SEQ ID N. 77 IAVTMPADLWDWIRAIAVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 78SEQ ID N. 78 AVVTMPADLWDWIRAAVVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 79SEQ ID N. 79 IHVTMPADLWDWIRAIHVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 80SEQ ID N. 80 IQVTMPADLWDWIRAIQVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 81SEQ ID N. 81 IRVTMPADLWDWIRAIRVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 82SEQ ID N.82 ITVTMPADLWDWIRAITVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 83SEQ ID N. 83 IWVTMPADLWDWIRAIWVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 84SEQ ID N. 84 IYVTMPADLWDWIRAIYVTMPADLWDWIRA SEQ ID N. 85SEQ ID N.85 IVVTIPADLWDWIRAIVVTIPADLWDWIRA SEQ ID N. 86SEQ ID N. 86 IVVTLPADLWDWIRAIVVTLPADLWDWIRA SEQ ID N. 87SEQ ID N. 87 IVVTVPADLWDWIRAIVVTVPADLWDWIRA SEQ ID N. 88SEQ ID N.88 IVVTMPADLWDWIMAIVVTMPADLWDWIMA SEQ ID N. 89SEQ ID N.89 IVVTMPADLWDWINAIVVTMPADLWDWINA SEQ ID N. 90SEQ ID N. 90 IVVTMPADLWDWIQAIVVTMPADLWDWIQA SEQ ID N. 91SEQ ID N. 91 IVVTIPADLWDWIRAIVVTIPADLWDWIRA SEQ ID N. 92SEQ ID N. 92 IVVTLPADLWDWIRAIVVTLPADLWDWIRA SEQ ID N. 93SEQ ID N. 93 IHVTIPADLWDWINKIHVTIPADLWDWINK SEQ ID N. 94SEQ ID N. 94 IHVTIPADLWDWINIHVTIPADLWDWIN SEQ ID N. 95SEQ ID N.95 IHVTIPADLWDWIIHVTIPADLWDWI SEQ ID N. 96SEQ ID N. 96 DSSAVCWAFPHHPLCHMKATDSSAVCWAFPHHPLCHMKAT SEQ ID N. 97SEQ ID N. 97 ADADMCWFFPTSPWCHADADMCWFFPTSPWCH SEQ ID N. 98SEQ ID N.98 DLSAVCWAFPWDPECHMDLSAVCWAFPWDPECHM SEQ ID N. 99SEQ ID N. 99 DSSAVCWAFPYLPECHDSSAVCWAFPYLPECH SEQ ID N. 100SEQ ID N. 100 DISAVCWAFPFDPECHDISAVCWAFPFDPECH SEQ ID N. 101SEQ ID N. 101 AYECPRLEYDMFGALHCLPSAYECPRLEYDMFGALHCLPS SEQ ID N. 102SEQ ID N. 102 CPRLEYDMFGALHCLCPRLEYDMFGALHCL SEQ ID N. 103SEQ ID N. 103 CLDLQYDPWGALHCICLDLQYDPWGALHCI SEQ ID N. 104SEQ ID N. 104 CFDLQYDPWGALHCICFDLQYDPWGALHCI SEQ ID N. 105SEQ ID N. 105 CLDLQYDMFGALHCVCLDLQYDMFGALHCV SEQ ID N. 106SEQ ID N. 106 CLDLVYDPWGALHCICLDLVYDPWGALHCI SEQ ID N. 107SEQ ID N. 107 CWVLEYDMFGALHCRCWVLEYDMFGALHCR SEQ ID N. 108SEQ ID N. 108 CWALEYDMFGYLHCRCWALEYDMFGYLHCR SEQ ID N. 109SEQ ID N. 109 CWVLEYDMFGFLHCRCWVLEYDMFGFLHCR SEQ ID N. 110SEQ ID N. 110 CWVLEYDMFGYLHCRCWVLEYDMFGYLHCR

Количество и путь введения пептидов в соответствии с настоящим изобретением варьируется в зависимости от конкретного пептидного ингибитора по изобретению, индивидуальной группы пациентов или пациента, присутствия других медицинских активных соединений и природы и тяжести подвергаемого лечению состояния.The amount and route of administration of the peptides of the present invention will vary depending on the particular peptide inhibitor of the invention, the individual patient population or patient, the presence of other medically active compounds, and the nature and severity of the condition being treated.

Согласно предпочтительному варианту осуществления дозировки для профилактического и/или терапевтического применения составляют приблизительно 5-50 мкг/мл, предпочтительно приблизительно 10-25 мкг/мл.In a preferred embodiment, dosages for prophylactic and/or therapeutic use are about 5-50 µg/ml, preferably about 10-25 µg/ml.

Предпочтительно, частота введения для профилактического и/или терапевтического применения находится в диапазоне применений от одного до двух раз в сутки, предпочтительно один раз в сутки.Preferably, the frequency of administration for prophylactic and/or therapeutic use is in the range of applications from one to two times a day, preferably once a day.

Кроме того, изобретение описывается посредством иллюстрации следующих примеров, ни один из которых не следует интерпретировать как ограничивающий объем изобретения, указанный в прилагаемой формуле изобретения.In addition, the invention is described by way of illustration of the following examples, none of which should be interpreted as limiting the scope of the invention as defined in the appended claims.

ПримерыExamples

Пример 1 Синтез и очистка пептидов:Example 1 Synthesis and purification of peptides:

Авторы изобретения разработали модель гомологии IL-17A с использованием доступных кристаллографических данных (PDB 5h13, PDB 5vb9 и PDB 4hsa) (Liu et al. Nat Commun 2013, 4, 1888, Liu et al. Sci Rep 2016, 6: 30859, Liu et al. Sci Rep 2016, 6, 26071, Ting, Tung et al. Plos One 2018, 13(1): e01908502018). В моделях авторов изобретения они также воссоздали петли, нерешенные в кристаллах и оптимизированных моделях посредством имитации молекулярной динамики, проведенной с использованием программного обеспечения Desmond, осуществленного в пакете программ Schrodinger Maestro macromodel suite. Все молекулярные имитации проводили в течение 1 микросекунды для гарантии стабильности системы.The inventors developed a homology model for IL-17A using available crystallographic data (PDB 5h13, PDB 5vb9 and PDB 4hsa) (Liu et al. Nat Commun 2013, 4, 1888, Liu et al. Sci Rep 2016, 6: 30859, Liu et al Sci Rep 2016, 6, 26071, Ting, Tung et al Plos One 2018, 13(1): e01908502018). In the inventors' models, they also recreated loops unresolved in crystals and optimized models through molecular dynamics simulations performed using the Desmond software implemented in the Schrodinger Maestro macromodel suite. All molecular simulations were performed within 1 microsecond to ensure system stability.

На основе структуры и свойств α-кармана IL-17A, были сконструированы различные пептидные последовательности, чтобы получить i) стабильную вторичную и третичную конформацию, которая вовлекает IL-17A с оптимизированной занятостью участка связывания белка, и ii) физико-химические свойства, пригодные для местного применения при офтальмологической и дерматологической патологии (Liu et al. Nat Commun 2013, 4, 1888, Espada et al J Med Chem 2016, 59(5), 2255-2260).Based on the structure and properties of the α-pocket of IL-17A, various peptide sequences were designed to obtain i) a stable secondary and tertiary conformation that involves IL-17A with optimized protein binding site occupancy, and ii) physicochemical properties suitable for topical application in ophthalmic and dermatological pathology (Liu et al. Nat Commun 2013, 4, 1888, Espada et al J Med Chem 2016, 59(5), 2255-2260).

Кроме того, авторы изобретения оптимизировали взаимодействия лиганд-IL-17A путем внесения водородных связей и оптимизации гидрофобных взаимодействий.In addition, the inventors have optimized ligand-IL-17A interactions by introducing hydrogen bonds and optimizing hydrophobic interactions.

a. Твердофазный синтез пептидов на основе Fmoca. Solid phase peptide synthesis based on Fmoc

Все химические реагенты приобретали и использовали без дальнейшей очистки.All chemicals were purchased and used without further purification.

Пептиды SEQ ID N. 1-43 и 111-257, приведенные в таблице 1, получали путем ручного или автоматического твердофазного синтеза пептидов на амидной MBHA смоле Ринка в качестве твердой подложки, как описано ниже, и с N-концевым амином, кэппированным ацетильной группой.The peptides SEQ ID N. 1-43 and 111-257 shown in Table 1 were prepared by manual or automated solid phase peptide synthesis on Rink's amide MBHA resin as a solid support as described below and with an N-terminal amine capped with an acetyl group .

Группу Fmoc (9-флуоренилметоксикарбонил), использованную для защиты Nα, расщепляли посредством обработки в течение 8 мин 20% пиперидином в диметилформамиде (DMF), за которой следовала дальнейшая обработка тем же реагентом в течение 10 мин. После отщепления Fmoc комплекс пептид-смола промывали DMF (×6). Затем включали следующий остаток с использованием протокола присоединения с использованием гексафторфосфата 3-оксида 1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиния (HATU) / N, N-диизопропиламина (DIPEA) [Fmoc-аминокислота (3 экв.), HATU (3 экв.) и DIPEA (6 экв.)]. После осторожного перемешивания (1 ч) и промывания DMF (×6), часть пептидной смолы анализировали посредством теста Кайзера. После завершения сборки пептидную смолу промывали DMF (×3), дихлорметаном (DCM) (×4), а затем сушили в вакууме.The Fmoc (9-fluorenylmethoxycarbonyl) group used to protect Nα was cleaved by treatment for 8 min with 20% piperidine in dimethylformamide (DMF) followed by further treatment with the same reagent for 10 min. After Fmoc cleavage, the peptide-resin complex was washed with DMF (×6). The next residue was then incorporated using an addition protocol using 1-[bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate (HATU)/N,N-diisopropylamine (DIPEA) [Fmoc-amino acid (3 eq.), HATU (3 eq.) and DIPEA (6 eq.)]. After gentle mixing (1 h) and washing with DMF (×6), a portion of the peptide resin was analyzed by means of the Kaiser test. After completion of assembly, the peptide resin was washed with DMF (x3), dichloromethane (DCM) (x4) and then dried in vacuo.

Расщепление и удаление защитной группыCleavage and removal of the protecting group

Пептид отщепляли от смолы и при необходимости защитную группу удаляли с использованием в качестве раствора для расщепления смеси трифторуксусная кислота/ 1,2-этандитиол/ тиоанизол/ фенол/ H2O/ триизопропилсилан в соотношении 68,5/ 10/ 10/ 5/ 3,5/ 1 об./об. Использовали 3 мл раствора для расщепления на 100 мг смолы. Полного удаления защитной группы достигали при перемешивании в течение 4 часов при 30°C. После реакции расщепления пептид в смеси преципитировали в холодном диэтиловом эфире и сушили в вакууме при 50°C.The peptide was cleaved from the resin and, if necessary, the protecting group was removed using a mixture of trifluoroacetic acid / 1,2-ethanedithiol / thioanisole / phenol / H2O / triisopropylsilane in the ratio of 68.5 / 10 / 10 / 5 / 3.5 / 1 rev/rev Used 3 ml of solution for splitting per 100 mg of resin. Complete removal of the protective group was achieved with stirring for 4 hours at 30°C. After the cleavage reaction, the peptide in the mixture was precipitated in cold diethyl ether and dried in vacuum at 50°C.

b. Образование дисульфидной связи в пептиде 41b. Formation of a disulfide bond in peptide 41

Образование дисульфидной связи в пептиде SEQ ID N. 41, приведенном в таблице 1, проводили путем инкубации пептида в смеси DMSO/H2O (20/80, об./об.), мониторинг которой проводили посредством ОФ-ВЭЖХ, MS и детекции свободных сульфгидрилов (способ с DTNB).The formation of a disulfide bond in the peptide SEQ ID N. 41 shown in Table 1 was carried out by incubation of the peptide in a mixture of DMSO/H2O (20/80, v/v), which was monitored by RP-HPLC, MS and detection of free sulfhydryls (method with DTNB).

c. Очистка посредством препаративной ОФ-ВЭЖХ и оценка чистоты посредством аналитической ВЭЖХc. Purification by preparative RP-HPLC and purity evaluation by analytical HPLC

Неочищенные образцы пептидов очищали посредством препаративной ОФ-ВЭЖХ (Agilent) с использованием колонки C18 (10 мкм, 100 Å, 50×250 мм). Для элюирования использовали систему растворителей, состоящую из растворителя A (0,1% TFA, 2% CH3CN в воде) и растворителя B (90% CH3CN/H2O) при скорости потока 25 мл/мин, и проводили детекцию поглощения при 220 нм. Растворитель удаляли посредством лиофилизации. Конечные продукты охарактеризовывали посредством MALDI-TOF-MS, и чистоту материала оценивали посредством аналитической ОФ-ВЭЖХ (C18-250 мм × 4,6 мм в.д., скорость потока 1 мл/мин), и детекцию поглощения проводили при 220 нм.Crude peptide samples were purified by preparative RP-HPLC (Agilent) using a C18 column (10 μm, 100 Å, 50 x 250 mm). A solvent system consisting of solvent A (0.1% TFA, 2% CH3CN in water) and solvent B (90% CH3CN/H2O) was used for elution at a flow rate of 25 ml/min and absorbance was detected at 220 nm. The solvent was removed by lyophilization. The final products were characterized by MALDI-TOF-MS and the purity of the material was assessed by analytical RP-HPLC (C18-250 mm×4.6 mm i.d., flow rate 1 ml/min) and absorbance detection was performed at 220 nm.

Пример 2: Получение биоконъюгированных с NAM и/или NAG пептидов BIO-1, BIO-2 и BIO-3Example 2 Preparation of NAM and/or NAG bioconjugated peptides BIO-1, BIO-2 and BIO-3

Биоконъюгированные пептиды BIO-1, BIO-2 и BIO-3 получали посредством реакции конъюгации пептида 42 или 43 по следующим методикам.Bioconjugated peptides BIO-1, BIO-2 and BIO-3 were obtained by peptide conjugation reaction 42 or 43 according to the following methods.

1. Получение донора и акцептора1. Obtaining a donor and an acceptor

Все реакции проводили в атмосфере N₂. Спектры ЯМР получали на устройстве Brucker 400 МГц. Анализ посредство ВЭЖХ-УФ проводили на системе Agilent 1260 Infinity System, оборудованной насосом для четырехкомпонентных смесей G1311B Agilent 1260, автоматическим пробоотборником G1329B Agilent 1260, детектором на диодной матрице G1315C Agilent 1260, и термостатными модулями колонки G1316A Agilent 1260. Использовали колонку Phenomenex GEMINI C18 150 × 4,6 мм² (5 мкм). Подвижная фаза A представляла собой воду MilliQ с 0,05% TFA, и B представляла собой ацетонитрил категории ВЭЖХ с 0,05% TFA при скорости потока 1,0 мл/мин. Система ВЭЖХ была сопряжена с масс-спектрометром LC/MS Agilent Quadrupole 6120, работающим в режиме положительных ионов. Ионы получали с использованием источника ионов с электрораспылительной ионизацией. Полученные данные обрабатывали с использованием программного обеспечения Agilent Chemstation Software.All reactions were carried out under N ₂ atmosphere. NMR spectra were obtained on a Brucker 400 MHz device. HPLC-UV analysis was performed on an Agilent 1260 Infinity System equipped with an Agilent 1260 G1311B quaternary pump, an Agilent 1260 G1329B autosampler, an Agilent 1260 G1315C diode array detector, and an Agilent 1260 G1316A column oven modules. column Phenomenex GEMINI C18 150 × 4.6 mm ² (5 µm). Mobile phase A was MilliQ water with 0.05% TFA and B was HPLC grade acetonitrile with 0.05% TFA at a flow rate of 1.0 ml/min. The HPLC system was coupled to an Agilent Quadrupole 6120 LC/MS mass spectrometer operating in positive ion mode. Ions were obtained using an ion source with electrospray ionization. The obtained data were processed using Agilent Chemstation Software.

a. Синтез 1-(2,2,2-трихлорацетимин)2-дезокси-3-O-ацетил-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (донор)a. Synthesis of 1-(2,2,2-trichloroacetimine)2-deoxy-3-O-acetyl-4,6-O-benzylidene-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-a-D-glucopyranoside (donor)

Трихлорэтоксикарбонилхлорид (2,1 мл, 15,3 ммоль) капельно добавляли при комнатной температуре к энергично перемешиваемому раствору гидрохлорида D-глюкозамина (3 г, 13,9 ммоль) и NaHCO₃, (3,5 г, 41,7 ммоль) в воде (30 мл). Смесь перемешивали в течение 2 ч, затем нейтрализовывали 1 M HCl, концентрировали и сушили в вакууме. Получали 2-дезокси-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозид (промежуточное соединение A).Trichloroethoxycarbonyl chloride (2.1 ml, 15.3 mmol) was added dropwise at room temperature to a vigorously stirred solution of D-glucosamine hydrochloride (3 g, 13.9 mmol) and NaHCO ₃ (3.5 g, 41.7 mmol) in water (30 ml). The mixture was stirred for 2 h, then neutralized with 1 M HCl, concentrated and dried in vacuo. 2-deoxy-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate A) was obtained.

Полученный неочищенный продукт прямо использовали для следующей стадии реакции без дальнейшей очистки.The resulting crude product was directly used for the next reaction step without further purification.

В деталях, хлорид цинка (1,9 г, 13,9 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения A (4,9 г, 13,9 ммоль) в бензальдегиде (24 мл) и молекулярных сит 4 Å (4 Å MS, 600 мг). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре добавляли насыщенный водный NaHCO₃ (30 мл) и диэтиловый эфир (90 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин. Образовавшийся преципитат фильтровали, промывали водой, диэтиловым эфиром и сушили. Остаток растворяли в пиридине (13 мл), охлаждали до 0°C, обрабатывали уксусным ангидридом (6,4 мл, 68 ммоль) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, затем раствор концентрировали с толуолом, охлаждали до 0°C и экстрагировали DCM и насыщенным водным NaHCO₃ (3x), а затем промывали насыщенным раствором NaCl. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и неочищенный материал очищали посредством Isolera (EtPet/EtOAc) с получением 1,3-ди-O-ацетил 2-дезокси-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение B), в виде белого твердого вещества (3,05 г, выход 41,7%).In detail, zinc chloride (1.9 g, 13.9 mmol) was added to a solution of intermediate A (4.9 g, 13.9 mmol) in benzaldehyde (24 ml) and 4 Å molecular sieves (4 Å MS, 600 mg). After stirring overnight at room temperature, saturated aqueous NaHCO ₃ (30 ml) and diethyl ether (90 ml) were added and the reaction mixture was stirred for 15 minutes. The resulting precipitate was filtered, washed with water, diethyl ether, and dried. The residue was dissolved in pyridine (13 ml), cooled to 0°C, treated with acetic anhydride (6.4 ml, 68 mmol) and stirred overnight at room temperature, then the solution was concentrated with toluene, cooled to 0°C and extracted with DCM and saturated aqueous NaHCO ₃ (3x), and then washed with saturated NaCl solution. The combined organic layers were dried, concentrated and the crude material was purified with Isolera (EtPet/EtOAc) to give 1,3-di-O-acetyl 2-deoxy-4,6-O-benzylidene-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino )-aD-glucopyranoside (intermediate B), as a white solid (3.05 g, 41.7% yield).

В деталях, хлорид цинка (1,9 г, 13,9 ммоль) добавляли к раствору промежуточного соединения A (4,9 г, 13,9 ммоль) в бензальдегиде (24 мл) и молекулярных сит 4 Å (4 Å MS, 600 мг). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре добавляли насыщенный водный NaHCO₃ (30 мл) и диэтиловый эфир (90 мл) и реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин. Образовавшийся преципитат фильтровали, промывали водой, диэтиловым эфиром и сушили. Остаток растворяли в пиридине (13 мл), охлаждали до 0°C, обрабатывали уксусным ангидридом (6,4 мл, 68 ммоль) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре, затем раствор концентрировали с толуолом, охлаждали до 0°C и экстрагировали DCM и насыщенным водным NaHCO₃ (3x), а затем промывали насыщенным раствором NaCl. Объединенные органические слои сушили, концентрировали и неочищенный материал очищали посредством Isolera (EtPet/EtOAc) с получением 1,3-ди-O-ацетил-2-дезокси-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение B) в виде белого твердого вещества (3,05 г, выход 41,7%).In detail, zinc chloride (1.9 g, 13.9 mmol) was added to a solution of intermediate A (4.9 g, 13.9 mmol) in benzaldehyde (24 ml) and 4 Å molecular sieves (4 Å MS, 600 mg). After stirring overnight at room temperature, saturated aqueous NaHCO ₃ (30 ml) and diethyl ether (90 ml) were added and the reaction mixture was stirred for 15 minutes. The resulting precipitate was filtered, washed with water, diethyl ether, and dried. The residue was dissolved in pyridine (13 ml), cooled to 0°C, treated with acetic anhydride (6.4 ml, 68 mmol) and stirred overnight at room temperature, then the solution was concentrated with toluene, cooled to 0°C and extracted with DCM and saturated aqueous NaHCO ₃ (3x), and then washed with saturated NaCl solution. The combined organic layers were dried, concentrated and the crude material was purified by Isolera (EtPet/EtOAc) to give 1,3-di-O-acetyl-2-deoxy-4,6-O-benzylidene-2-(2,2,2- trichloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate B) as a white solid (3.05 g, 41.7% yield).

Затем к раствору промежуточного соединения B (3,05 г, 5,8 ммоль) в сухом этилацетате (EtOAc) (12,2 мл) добавляли морфолин (1,2 мл, 13,9 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь гасили 3 Н раствором HCl (3,5 мл), а затем перемешивали в течение 20 мин. Экстрагировали EtOAc и промывали водой, насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным раствором NaCl, сушили и концентрировали. Неочищенный материал очищали посредством Isolera (EtPet/EtOAc) с получением 2-дезокси-3-O-ацетил-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение C) в виде белого твердого вещества (2,2 г, 78,4%). К раствору промежуточного соединения C (2,2 г, 4,54 ммоль) в сухом DCM (44 мл), добавляли Cs₂CO₃ (680 мг, 2,1 ммоль) и CCl₃CN (4,4 мл, 43,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, затем фильтровали через целит и концентрировали с получением 1-(2,2,2-трихлорацетимин)2-дезокси-3-O-ацетил-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (донор) в виде светло-желтого твердого вещества (2,2 г, 77%).Morpholine (1.2 ml, 13.9 mmol) was then added to a solution of intermediate B (3.05 g, 5.8 mmol) in dry ethyl acetate (EtOAc) (12.2 ml). After stirring overnight at room temperature, the reaction mixture was quenched with 3 N HCl (3.5 ml) and then stirred for 20 minutes. Was extracted with EtOAc and washed with water, saturated aqueous NaHCO ₃ and saturated NaCl solution, dried and concentrated. The crude material was purified with Isolera (EtPet/EtOAc) to give 2-deoxy-3-O-acetyl-4,6-O-benzylidene-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (Intermediate C) as a white solid (2.2 g, 78.4%). To a solution of intermediate C (2.2 g, 4.54 mmol) in dry DCM (44 ml) was added Cs ₂ CO ₃ (680 mg, 2.1 mmol) and CCl ₃ CN (4.4 ml, 43 8 mmol). The reaction mixture was stirred for 2 h at room temperature, then filtered through Celite and concentrated to give 1-(2,2,2-trichloroacetimine)2-deoxy-3-O-acetyl-4,6-O-benzylidene-2- (2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (donor) as a light yellow solid (2.2 g, 77%).

b. Синтез 1,6-ди-O-бензил 2-дезокси-3-O-((R)-10-этоксикарбонилэтил)-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (акцептор)b. Synthesis of 1,6-di-O-benzyl 2-deoxy-3-O-((R)-10-ethoxycarbonylethyl)-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-a-D-glucopyranoside (acceptor)

Аллилхлорформиат (6,6 мл, 62,2 ммоль) капельно добавляли при комнатной температуре к энергично перемешиваемому раствору D-глюкозамина гидрохлорида (12,2 г, 56,6 ммоль) и NaHCO₃, (14,3 г, 169,7 ммоль) в воде (61 мл). Смесь перемешивали в течение 2 ч, затем нейтрализовывали 1 M HCl, концентрировали и сушили в вакууме. Получали неочищенный 2-дезокси-2-(аллилоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозид (промежуточное соединение D). Продукт использовали для следующей стадии реакции без дальнейшей очистки. Промежуточное соединение D (14,9 г, 56,6 ммоль) растворяли в бензиловом спирте (89 мл) и капельно добавляли ацетилхлорид (15,4 мл, 215,2 ммоль) при 0°C. После перемешивания в течение 3 ч при 80°C реакционную смесь гасили холодным насыщенным водным NaHCO₃ (20 мл) и перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Добавляли холодную воду и диэтиловый эфир и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Две фазы разделяли и водную фазу концентрировали и сушили в вакууме. Добавляли 30 мл воды и 200 мл этилового эфира до образования преципитата, который фильтровали и промывали несколько раз холодным диэтиловым эфиром (до тех пор, пока больше не обнаруживалось следов бензилового спирта). Бензил 2-дезокси-2-(аллилоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозид (промежуточное соединение E) получали в виде белого твердого вещества (11 г, 55%) и использовали непосредственно для следующей стадии реакции без дальнейшей очистки. К раствору промежуточного соединения E (11 г, 31,1 ммоль) в бензальдегиде (55 мл) и 4 Å MS (4,9 г) добавляли хлорид цинка (4,2 г, 31,1 ммоль). Через 2 ч добавляли дополнительный хлорид цинка (4,2 г, 31,1 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь обрабатывали насыщенным водным NaHCO₃ (70 мл), петролейным эфиром (420 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Преципитат фильтровали, промывали петролейным эфиром и растворяли в DCM. Органический раствор экстрагировали насыщенным водным NaHCO₃, водой и насыщенным раствором NaCl, сушили и концентрировали. Неочищенный материал очищали посредством Isolera (DCM/EtOAc) с получением бензил 2-дезокси-4,6-O-бензилиден-2-(аллилоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение F) в виде белого твердого вещества (2,75 г, 20%).Allyl chloroformate (6.6 ml, 62.2 mmol) was added dropwise at room temperature to a vigorously stirred solution of D-glucosamine hydrochloride (12.2 g, 56.6 mmol) and NaHCO ₃ , (14.3 g, 169.7 mmol ) in water (61 ml). The mixture was stirred for 2 h, then neutralized with 1 M HCl, concentrated and dried in vacuo. Received crude 2-deoxy-2-(allyloxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate D). The product was used for the next reaction step without further purification. Intermediate D (14.9 g, 56.6 mmol) was dissolved in benzyl alcohol (89 ml) and acetyl chloride (15.4 ml, 215.2 mmol) was added dropwise at 0°C. After stirring for 3 h at 80° C., the reaction mixture was quenched with cold saturated aqueous NaHCO ₃ (20 ml) and stirred for an additional 30 min. Cold water and diethyl ether were added and the reaction mixture was stirred for 30 minutes. The two phases were separated and the aqueous phase was concentrated and dried in vacuo. 30 ml of water and 200 ml of ethyl ether were added until a precipitate formed, which was filtered and washed several times with cold diethyl ether (until no more traces of benzyl alcohol were detected). Benzyl 2-deoxy-2-(allyloxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate E) was obtained as a white solid (11 g, 55%) and used directly for the next reaction step without further purification. To a solution of intermediate E (11 g, 31.1 mmol) in benzaldehyde (55 ml) and 4 Å MS (4.9 g) was added zinc chloride (4.2 g, 31.1 mmol). After 2 hours additional zinc chloride (4.2 g, 31.1 mmol) was added. After stirring overnight at room temperature, the reaction mixture was treated with saturated aqueous NaHCO ₃ (70 ml), petroleum ether (420 ml) and stirred for 10 min. The precipitate was filtered, washed with petroleum ether and dissolved in DCM. The organic solution was extracted with saturated aqueous NaHCO ₃ , water and saturated NaCl solution, dried and concentrated. The crude material was purified with Isolera (DCM/EtOAc) to give benzyl 2-deoxy-4,6-O-benzylidene-2-(allyloxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (Intermediate F) as a white solid (2.75 g, 20%).

К раствору промежуточного соединения F (2,75 г, 6,2 ммоль) в сухом DCM (40,6 мл), охлажденному до 0°C, добавляли гидрид натрия (NaH, 348,8 мг, 8,7 ммоль, 60% дисперсия в масле), и смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем смесь капельно обрабатывали чистым (-)-этил (S)-2-трифторметансульфонилпропионатом и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили добавлением льда и экстрагировали DCM. Органический раствор промывали насыщенным водным NaHCO₃, насыщенным раствором NaCl, сушили и концентрировали. Остаток очищали посредством Isolera (DCM/EtOAc) с получением бензил 2-дезокси-3-O-((R)-10-этоксикарбонилэтил)-4,6-O-бензилиден-2-(аллилоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение G) в виде белого твердого вещества (2,35 г, 69,7%).Sodium hydride (NaH, 348.8 mg, 8.7 mmol, 60% dispersion in oil) and the mixture was stirred for 30 minutes at room temperature. The mixture was then treated dropwise with pure (-)-ethyl (S)-2-trifluoromethanesulfonylpropionate and stirred for 2 hours at room temperature. The reaction mixture was quenched with ice and extracted with DCM. The organic solution was washed with saturated aqueous NaHCO ₃ , saturated NaCl solution, dried and concentrated. The residue was purified with Isolera (DCM/EtOAc) to give benzyl 2-deoxy-3-O-((R)-10-ethoxycarbonylethyl)-4,6-O-benzylidene-2-(allyloxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate G) as a white solid (2.35 g, 69.7%).

К раствору промежуточного соединения G (2,35 г, 4,34 ммоль) в сухом DCM (42,7 мл) добавляли тетракис(трифенилфосфин)палладий (1,5 г, 1,3 ммоль) и уксусную кислоту (AcOH, 0,385 мл, 6,725 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, а затем капельно добавляли 2,2,2-трихлорэтилхлорформиат (TrocCl, 1,224 мл, 8,895 ммоль), и полученный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили насыщенным водным NaHCO₃, экстрагировали DCM, промывали H₂O и насыщенным раствором NaCl. После концентрирования в вакууме остаток растворяли в диэтиловом эфире (100 мл), и нерастворимые материалы отфильтровывали. Органическую фазу сушили, концентрировали и очищали посредством Isolera (циклогексан/AcOEt) с получением бензил 2-дезокси-3-O-((R)-10-этоксикарбонилэтил)-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-три-хлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение H) в виде белого твердого вещества (2,3 г, 83,7%).To a solution of intermediate G (2.35 g, 4.34 mmol) in dry DCM (42.7 ml) was added tetrakis(triphenylphosphine)palladium (1.5 g, 1.3 mmol) and acetic acid (AcOH, 0.385 ml , 6.725 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 15 minutes and then 2,2,2-trichloroethyl chloroformate (TrocCl, 1.224 mL, 8.895 mmol) was added dropwise and the resulting solution was stirred for 1 hour at room temperature. The reaction mixture was quenched with saturated aqueous NaHCO ₃ , extracted with DCM, washed with H ₂ O and saturated NaCl solution. After concentration in vacuo, the residue was dissolved in diethyl ether (100 ml) and insoluble materials were filtered off. The organic phase was dried, concentrated and purified with Isolera (cyclohexane/AcOEt) to give benzyl 2-deoxy-3-O-((R)-10-ethoxycarbonylethyl)-4,6-O-benzylidene-2-(2.2, 2-tri-chloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate H) as a white solid (2.3 g, 83.7%).

К раствору промежуточного соединения H (2,4g, 3,8ммоль) в сухом CH₃CN (38 мл) при 0°C капельно добавляли раствор Me₃N-BH₃ (332 мг, 4,55 ммоль) в CH₃CN (2,2 мл), а затем раствор BF₃-OEt₂ (2,89 мл, 23,4ммоль) в CH₃CN (8 мл). После перемешивания в течение 3 ч при 0°C смесь гасили холодным насыщенным водным NaHCO₃(30 мл), разбавляли EtOAc (350 мл) и промывали насыщенным водным NaHCO₃ (100 мл), 5% лимонной кислотой (4×50 мл), насыщенным водным NaHCO₃ (50 мл) и насыщенным раствором NaCl (40 мл). Органический слой сушили, концентрировали и неочищенный материал очищали посредством Isolera (циклогексан/AcOEt) с получением 1,6-ди-O-бензил 2-дезокси-3-O-((R)-10-этоксикарбонилэтил)-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (акцептор) в виде бесцветной пены (1,2 г, 49,8%).To a solution of intermediate H (2.4g, 3.8 mmol) in dry CH ₃ CN (38 ml) at 0°C was added dropwise a solution of Me ₃ N-BH ₃ (332 mg, 4.55 mmol) in CH ₃ CN ( 2.2 ml) followed by a solution of BF ₃ -OEt ₂ (2.89 ml, 23.4 mmol) in CH ₃ CN (8 ml). After stirring for 3 h at 0°C, the mixture was quenched with cold saturated aqueous NaHCO ₃ (30 ml), diluted with EtOAc (350 ml) and washed with saturated aqueous NaHCO ₃ (100 ml), 5% citric acid (4×50 ml), saturated aqueous NaHCO ₃ (50 ml) and saturated NaCl solution (40 ml). The organic layer was dried, concentrated and the crude material was purified by Isolera (cyclohexane/AcOEt) to give 1,6-di-O-benzyl 2-deoxy-3-O-((R)-10-ethoxycarbonylethyl)-2-(2, 2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (acceptor) as a colorless foam (1.2 g, 49.8%).

2. Синтез конъюгированного с NAG-NAM пептида BIO-32. Synthesis of NAG-NAM-conjugated peptide BIO-3

Донор (1,6 г, 2,6 ммоль) и акцептор (1,1 г, 1,73 ммоль), суспендированные в сухом DCM (55 мл) с 4 Å молекулярными ситами (200 мг), обрабатывали триметилсилилтрифторметансульфонатом (TMSOTf, 188 мкл, 1,04 ммоль) при -15°C. После перемешивания в течение 20 мин добавляли дополнительные 0,75 экв. донора и 0,3 экв. TMSOTf. После перемешивания в течение 20 мин добавляли дополнительные 0,75 экв. донора и 0,3 экв. TMSOTf. Затем смесь гасили холодным насыщенным водным раствором NaHCO₃ (15 мл) и экстрагировали DCM (60 мл). Органический слой промывали насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным раствором NaCl, сушили и концентрировали. Остаток очищали посредством обращенной фазы Isolera (нейтральные фазы H2O/ACN) с получением бензил 6-O-бензил-4-O-[2-дезокси-3-O-ацетил-4,6-O-бензилиден-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-b-D-глюкопиранозил]-2-дезокси-3-O-[(R)-1’-этоксикарбонилэтил]-2-(2,2,2-трихлорэтоксикарбониламино)-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение L) в виде белой пены (1,2 г, 62,9%).Donor (1.6 g, 2.6 mmol) and acceptor (1.1 g, 1.73 mmol) suspended in dry DCM (55 mL) with 4 Å molecular sieves (200 mg) were treated with trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate (TMSOTf, 188 µl, 1.04 mmol) at -15°C. After stirring for 20 minutes, an additional 0.75 eq. donor and 0.3 eq. TMSOTf. After stirring for 20 minutes, an additional 0.75 eq. donor and 0.3 eq. TMSOTf. The mixture was then quenched with cold saturated aqueous NaHCO ₃ (15 ml) and extracted with DCM (60 ml). The organic layer was washed with saturated aqueous NaHCO ₃ and saturated NaCl solution, dried and concentrated. The residue was purified with reverse phase Isolera (neutral H2O/ACN phases) to give benzyl 6-O-benzyl-4-O-[2-deoxy-3-O-acetyl-4,6-O-benzylidene-2-(2, 2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-bD-glucopyranosyl]-2-deoxy-3-O-[(R)-1'-ethoxycarbonylethyl]-2-(2,2,2-trichloroethoxycarbonylamino)-aD-glucopyranoside (intermediate L ) as a white foam (1.2 g, 62.9%).

Раствор промежуточного соединения L (1,2 г, 1,09 ммоль) и пары цинк-медь (3,12 г, 24,2 ммоль) в смеси AcOH/Ac2O/THF 1:1:1 (12 мл) перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывали EtOAc и концентрировали. Неочищенный материал концентрировали и очищали колоночной хроматографией (циклогексан/AcOEt) с получением бензил 6-O-бензил-4-O-[2-дезокси-3-O-ацетил-4,6-O-бензилиден-2-ацетиламино-b-D-глюкопиранозил]-2-дезокси-3-O-[(R)-10-этоксикарбонилэтил]-2-ацетиламино-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение M) в виде белого твердого вещества (560 мг, 0,67 ммоль, 61,6%). ВЭЖХ-MS (ESI+) m/z: C₄₄H₅₄N₂O₁₄+Na: 857,3472. Найдено: 857,6124.A solution of intermediate L (1.2 g, 1.09 mmol) and zinc-copper pair (3.12 g, 24.2 mmol) in AcOH/Ac2O/THF 1:1:1 (12 mL) was stirred for 4 hours at room temperature. The reaction mixture was filtered through Celite, washed with EtOAc and concentrated. The crude material was concentrated and purified by column chromatography (cyclohexane/AcOEt) to give benzyl 6-O-benzyl-4-O-[2-deoxy-3-O-acetyl-4,6-O-benzylidene-2-acetylamino-bD- glucopyranosyl]-2-deoxy-3-O-[(R)-10-ethoxycarbonylethyl]-2-acetylamino-aD-glucopyranoside (Intermediate M) as a white solid (560 mg, 0.67 mmol, 61.6 %). HPLC-MS (ESI+) m/z: C ₄₄ H ₅₄ N ₂ O ₁₄ +Na: 857.3472. Found: 857.6124.

К раствору промежуточного соединения M (91 мг, 0,109 ммоль) в THF/1,4-диоксане/H₂O 4:2:1 (2,8 мл) добавляли LiOH.H₂O (56 мг, 1,34 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре реакционную смесь фильтровали через Dowex H+ (свежеактивированный посредством 1 Н HCl). Остаток очищали посредством хроматографии на колонке diaion HP-20 (2×7 см), предварительно промытой водой, MeOH и водой. Колонку элюировали сначала посредством H₂O (50 мл), а затем посредством MeOH (30 мл). Спиртовые фракции концентрировали с получением бензил 6-O-бензил-4-O-[2-дезокси-4,6-O-бензилиден-2-ацетиламино-b-D-глюкопиранозил]-2-дезокси-3-O-[(R)-10-этоксикарбонилэтил]-2-ацетиламино-a-D-глюкопиранозида (промежуточное соединение N), в виде беловатого твердого вещества (57,4 мг, 69%). Mp 102-105 °C, 1H-ЯМР (600 МГц, CD₃OD) δH 7,51-7,27 (м, 15H, ArH), 5,59 (с, 1H, CHPh), 5,36 (д, J 3,1 Гц, H-1), 4,85 (м) H₂O, H-10, ½ CH₂Ph), 4,66-4,57 (м, 3H, J 12,1 Гц, CHCH₃, CH₂-Ph), 4,46 (д, 1H, J 12,2 Гц, ½ CH₂Ph), 4,29 (дд, 1H, J 10,3 Гц, J 5,0 Гц, H-60b), 4,07 (т, 1H, J 9,6 Гц, H-30), 3,95 (т, 1H, J 9,1 Гц, H-4), 3,82-3,77 (м, 2H, H-6b, H-3), 3,72-3,62 (м, 3H, H-60a, H-5,H-6a), 3,55-3,40 (м, 3H, H-20 , H-40,H-2), 3,30-3,27 (м, 1H, H-50),1,98 (с, 3H, COCH₃), 1,96 (c, 3H, COCH₃), 1,37 (д, J 6,9 Гц, 3H, CHCH₃). ВЭЖХ-MS (ESI+) m/z: C₄₀H₄₈N₂O₁₃+Na: 787,3054, найдено: 787,7830.To a solution of intermediate M (91 mg, 0.109 mmol) in THF/1,4-dioxane/H ₂ O 4:2:1 (2.8 ml) was added LiOH.H ₂ O (56 mg, 1.34 mmol) . After stirring for 2 hours at room temperature, the reaction mixture was filtered through Dowex H+ (freshly activated with 1 N HCl). The residue was purified by chromatography on a diaion HP-20 (2×7 cm) column pre-washed with water, MeOH and water. The column was eluted first with H ₂ O (50 ml) and then with MeOH (30 ml). The alcohol fractions were concentrated to give benzyl 6-O-benzyl-4-O-[2-deoxy-4,6-O-benzylidene-2-acetylamino-bD-glucopyranosyl]-2-deoxy-3-O-[(R) -10-ethoxycarbonylethyl]-2-acetylamino-aD-glucopyranoside (intermediate N), as an off-white solid (57.4 mg, 69%). Mp 102-105°C, 1H-NMR (600 MHz, CD ₃ OD) δH 7.51-7.27 (m, 15H, ArH), 5.59 (s, 1H, CHPh), 5.36 (d , J 3.1 Hz, H-1), 4.85 (m) H ₂ O, H-10, ½ CH ₂ Ph), 4.66-4.57 (m, 3H, J 12.1 Hz, CHCH ₃ , CH ₂ -Ph), 4.46 (d, 1H, J 12.2 Hz, ½ CH ₂ Ph), 4.29 (dd, 1H, J 10.3 Hz, J 5.0 Hz, H -60b), 4.07 (t, 1H, J 9.6 Hz, H-30), 3.95 (t, 1H, J 9.1 Hz, H-4), 3.82-3.77 ( m, 2H, H-6b, H-3), 3.72-3.62 (m, 3H, H-60a, H-5,H-6a), 3.55-3.40 (m, 3H, H-20, H-40, H-2), 3.30-3.27 (m, 1H, H-50), 1.98 (s, 3H, COCH ₃ ), 1.96 (s, 3H, COCH ₃ ), 1.37 (d, J 6.9 Hz, 3H, CHCH ₃ ). HPLC-MS (ESI+) m/z: C ₄₀ H ₄₈ N ₂ O ₁₃ +Na: 787.3054, found: 787.7830.

Пептид SEQ ID N. 42 присоединяли к соединению N в условиях, использованных для присоединения аминокислот, и полученный биоконъюгат отщепляли от твердой подложки посредством обработки трифторуксусной кислотой (1% раствор в DCM). Полученный биоконъюгат (0,026 ммоль) растворяли в уксусной кислоте (8 мл) и добавляли Pd(OH)2/C (58 мг). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере водорода. Смесь фильтровали через целит и концентрировали с получением биоконъюгата BIO-3 с количественным выходом.Peptide SEQ ID N. 42 was attached to compound N under the conditions used for attaching amino acids, and the resulting bioconjugate was cleaved from the solid support by treatment with trifluoroacetic acid (1% solution in DCM). The resulting bioconjugate (0.026 mmol) was dissolved in acetic acid (8 ml) and Pd(OH)2/C (58 mg) was added. The resulting mixture was stirred at room temperature for 6 hours under a hydrogen atmosphere. The mixture was filtered through Celite and concentrated to give the BIO-3 bioconjugate in quantitative yield.

Биоконъюгат отщепляли от смолы и из последнего остатка удаляли защитную группу с использованием в качестве раствора для расщепления смеси трифторуксусная кислота/ 1,2-этандитиол/ тиоанизол/ фенол/ H2O/ триизопропилсилан в соотношении 68,5/10/10/5/3,5/1 об./об. Использовали 3 мл раствора для расщепления на 100 мг смолы. Полного удаления защитной группы достигали после 4 часов при 30°C. После реакции расщепления неочищенный пептид преципитировали добавлением холодного диэтилового эфира и сушили в вакууме при 50°C.The bioconjugate was cleaved from the resin and the last residue was deprotected using a mixture of trifluoroacetic acid/1,2-ethanedithiol/thioanisole/phenol/H2O/triisopropylsilane as a cleavage solution in a ratio of 68.5/10/10/5/3.5 /1 rev./rev. Used 3 ml of solution for splitting per 100 mg of resin. Complete removal of the protective group was achieved after 4 hours at 30°C. After the cleavage reaction, the crude peptide was precipitated by adding cold diethyl ether and dried in vacuo at 50°C.

Неочищенный биоконъюгат очищали посредством препаративной ОФ-ВЭЖХ (Agilent) с использованием колонки C18 (10 мкм, 100 Å, 50°250 мм). Для элюирования использовали смесь растворителей, состоящую из растворителя A (0,1% TFA, 2% CH₃CN в H₂O) и растворителя B (90% CH₃CN/H₂O) при скорости потока 25 мл/мин, и проводили детекцию поглощения при 220 нм. Растворитель удаляли посредством лиофилизации и конечные продукты охарактеризовывали посредством MALDI-TOF-MS. Чистоту очищенного материала оценивали посредством аналитической ОФ-ВЭЖХ (C18-250 мм × 4,6 мм в.д., скорость потока 1 мл/мин), и проводили детекцию поглощения при 220 нм.The crude bioconjugate was purified by preparative RP-HPLC (Agilent) using a C18 column (10 μm, 100 Å, 50°250 mm). A solvent mixture was used for elution, consisting of solvent A (0.1% TFA, 2% CH ₃ CN in H ₂ O) and solvent B (90% CH ₃ CN/H ₂ O) at a flow rate of 25 ml/min, and absorption detection was performed at 220 nm. The solvent was removed by lyophilization and the final products were characterized by MALDI-TOF-MS. The purity of the purified material was assessed by analytical RP-HPLC (C18-250 mm×4.6 mm i.d., flow rate 1 ml/min) and absorbance was detected at 220 nm.

3. Синтез биоконъюгатов с NAG и NAM BIO-1 и BIO-23. Synthesis of bioconjugates with NAG and NAM BIO-1 and BIO-2

Синтез NAM-пептида и пептид-NAG проводили, начиная со смолы с заякоренным пептидом (пример 1), где пептид представлял собой пептид SEQ ID N. 42 (для BIO-1) или пептид SEQ ID N. 43 (для BIO-2), соответственно, и донор и акцептор представляли собой молекулы, описанные выше, в соответствии с методикой, описанной в Swaminathan et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2006, 17;103 (3):684-9.Synthesis of NAM peptide and peptide-NAG was carried out starting with an anchored peptide resin (Example 1) where the peptide was SEQ ID N. 42 (for BIO-1) or SEQ ID N. 43 (for BIO-2) peptide , respectively, and the donor and acceptor were the molecules described above, in accordance with the methodology described in Swaminathan et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2006, 17;103(3):684-9.

Пример 3: Синтез биоконъюгата с каприновой кислотой BIO-4Example 3 Synthesis of Capric Acid Bioconjugate BIO-4

Пептиды, кэппированные каприновой кислотой, синтезировали в соответствии с методикой, описанной в примере 1, с использованием N-концевого амина, кэппированного каприновой кислотой.Capric acid capped peptides were synthesized according to the procedure described in Example 1 using capric acid capped N-terminal amine.

Пример 4: Синтез биоконъюгата с аскорбиновой кислотой BIO-5Example 4 Synthesis of Ascorbic Acid Bioconjugate BIO-5

5,6-O-изопропилиден-L-аскорбиновую кислоту (iASA) синтезировали способом Jung (Jung, M. E.; Shaw, T. J. J. Am. Chem. Soc. 1980, 102, 6304). Для активации к смоле с заякоренным пептидом добавляли CDI (10 экв.) в течение 2 ч. Активацию N-концевого амина пептида после отщепления смолы подтверждали посредством ОФ-ВЭЖХ с использованием следующих условий: A-B (A: 0,1% TFA в H₂O, B: 0,1% TFA в CH₃CN; от 0% до 60% B в течение 30 мин, при скорости потока 1,0 мл/мин); детекция, УФ 230 нм. Далее в активированную смолу с заякоренным пептидом вносили iASA. Продукт отделяли от смолы посредством обработки 50% TFA/DCM (об./об.) в течение 1 ч. Смолу фильтровали, фильтрат концентрировали в высоком вакууме и преципитировали холодным диэтиловым эфиром. Структуру полученного биоконъюгата BIO-5 подтверждали посредством LC/MS с использованием 0,1% муравьиной кислоты/метанола в качестве элюента при скорости потока 250 мкл/мин в течение 30 мин, и проводили мониторинг при 230 нм.5,6-O-isopropylidene-L-ascorbic acid (iASA) was synthesized by the Jung method (Jung, ME; Shaw, TJJ Am. Chem. Soc. 1980, 102, 6304). For activation, CDI (10 eq.) was added to the anchored peptide resin for 2 hours. Activation of the N-terminal amine of the peptide after resin cleavage was confirmed by RP-HPLC using the following conditions: AB (A: 0.1% TFA in H ₂ O, B: 0.1% TFA in CH ₃ CN, 0% to 60% B over 30 min, at a flow rate of 1.0 ml/min); detection, UV 230 nm. Next, iASA was added to the activated peptide-anchored resin. The product was separated from the resin by treatment with 50% TFA/DCM (v/v) for 1 hour. The resin was filtered, the filtrate was concentrated under high vacuum and precipitated with cold diethyl ether. The structure of the resulting BIO-5 bioconjugate was confirmed by LC/MS using 0.1% formic acid/methanol as eluent at a flow rate of 250 μl/min for 30 min and monitored at 230 nm.

Пример 5: Анализ димеризации IL-17RA/IL17RC в ответ на IL-17AExample 5: IL-17RA/IL17RC dimerization assay in response to IL-17A

Пептиды, приведенные в таблице 7, тестировали в отношении их способности ингибировать связывание IL-17A с его рецептором и последующее взаимодействие IL-17RA и IL17RC.The peptides shown in Table 7 were tested for their ability to inhibit the binding of IL-17A to its receptor and the subsequent interaction of IL-17RA and IL17RC.

Для измерения взаимодействия цепей рецепторов IL-17RA и IL17RC при активации IL-17A в отсутствии или в присутствии пептидов, приведенных в таблице 7, использовали анализ димеризации рецепторов интерлейкина RA и RC (DiscoverX).Interleukin RA and RC receptor dimerization assay (DiscoverX) was used to measure the interaction of IL-17RA and IL17RC receptor chains upon IL-17A activation in the absence or presence of the peptides listed in Table 7.

В анализе рецепторов цитокинов PathHunter® одну цепь рецептора цитокина метят небольшим пептидным эпитопом ProLink (PK), а другую цепь метят ферментным акцептором (EA). Связывание лиганда индуцирует димеризацию двух рецепторов, способствуя комплементации фрагментов PK и EA. Это взаимодействие приводит к образованию активной единицы b-галактозидазы, которое определяют с использованием хемилюминесцентного субстрата. Клеточные линии PathHunter увеличивали в количестве из замороженных исходных культур в соответствии со стандартными методиками. Клетки высевали в общем объеме 20 мкл в 384-луночные микропланшеты с белыми стенками и инкубировали в течение надлежащего периода времени перед тестированием. Для ингибирования активности агониста клетки инкубировали с образцом для индукции ответа. Промежуточное разведение исходных культур образца проводили для получения 5X образца в буфере для анализа. 5 мкл 5X образца добавляли к клеткам и инкубировали при 37°C или комнатной температуре в течение 60 минут. Концентрация носителя составляла 1%. К клеткам добавляли 5 мкл 6X агониста EC₈₀ (IL-17A) в буфере для анализа и инкубировали при 37°C в течение 6-16 часов в зависимости от анализа. 1. Сигнал в анализе генерировали посредством однократного добавления 12,5 или 15 мкл (50% об./об.) коктейля реагентов для детекции PathHunter для анализа агонистов (IL-17A) и антагонистов (пептиды, приведенные в таблице 7), соответственно, а затем проводили инкубацию в течение одного часа при комнатной температуре. Для некоторых анализов детекцию активности проводили с использованием высокочувствительного реагента для детекции (набор PathHunter Flash Kit) для повышения эффективности анализа. В этих анализах в лунки добавляли равный объем реагента для детекции (25 или 30 мкл), а затем проводили инкубацию в течение одного часа при комнатной температуре. Считывание микропланшетов проводили после генерирования сигнала с использованием устройства PerkinElmer Envision^™ для детекции хемилюминесцентного сигнала. Активность соединения анализировали с использованием пакета программ для анализа данных CBIS (ChemInnovation, CA). % ингибирование =100% × (1 - (среднее количество RLU для тестируемого образца - среднее количество RLU для контроля в виде носителя) / (среднее количество RLU для контроля в виде EC80 - среднее количество RLU для контроля в виде носителя)).In the PathHunter® Cytokine Receptor Assay, one cytokine receptor chain is labeled with a ProLink small peptide epitope (PK) and the other chain is labeled with an enzyme acceptor (EA). Ligand binding induces dimerization of the two receptors, promoting complementation of the PK and EA fragments. This interaction leads to the formation of the active unit of b-galactosidase, which is determined using a chemiluminescent substrate. PathHunter cell lines were expanded from frozen stock cultures according to standard procedures. Cells were seeded in a total volume of 20 μl in 384-well white-walled microplates and incubated for the appropriate period of time prior to testing. To inhibit agonist activity, cells were incubated with a sample to induce a response. An intermediate dilution of the original sample cultures was performed to obtain a 5X sample in assay buffer. 5 μl of 5X sample was added to the cells and incubated at 37°C or room temperature for 60 minutes. The carrier concentration was 1%. Cells were added with 5 μl of 6X EC ₈₀ agonist (IL-17A) in assay buffer and incubated at 37° C. for 6-16 hours depending on the assay. 1. The assay signal was generated by a single addition of 12.5 or 15 µl (50% v/v) PathHunter Detection Reagent Cocktail for the agonist (IL-17A) and antagonist assay (peptides shown in Table 7), respectively, and then incubated for one hour at room temperature. For some assays, activity detection was performed using a highly sensitive detection reagent (PathHunter Flash Kit) to increase the efficiency of the assay. In these assays, an equal volume of detection reagent (25 or 30 µl) was added to the wells and then incubated for one hour at room temperature. Microplate readings were performed after signal generation using a PerkinElmer Envision ^™ chemiluminescent signal detection device. Compound activity was analyzed using the CBIS data analysis software package (ChemInnovation, CA). % inhibition = 100% × (1 - (average RLU for test sample - average RLU for vehicle control) / (average RLU for EC80 control - average RLU for vehicle control)).

Как описано в таблице 7, ниже, было обнаружено, что все протестированные молекулы являются активными в отношении ингибирования димеризации IL-17RA/IL17RC, таким образом, ингибируя активацию каскада IL-17A с величиной IC50 в среднем наномолярном диапазоне.As described in Table 7 below, all molecules tested were found to be active in inhibiting IL-17RA/IL17RC dimerization, thus inhibiting activation of the IL-17A cascade with an IC50 value in the average nanomolar range.

Таблица 7Table 7

ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ SUBSEQUENCE НАЗВАНИЕNAME IC₅₀ в анализе димеризации IL-17RA/IL7RC IC ₅₀ in IL-17RA/IL7RC dimerization assay SEQ ID N. 1SEQ ID N. 1 <0,2 мкМ<0.2 µM SEQ ID N. 2SEQ ID N. 2 <0,2 мкМ<0.2 µM SEQ ID N. 3SEQID N. 3 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 4SEQ ID N. 4 <0,1 мкМ<0.1 µM SEQ ID N. 5SEQ ID N. 5 <0,1 мкМ<0.1 µM SEQ ID N. 6SEQID N. 6 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 7SEQ ID N. 7 <0,1 мкМ<0.1 µM SEQ ID N. 8SEQ ID N. 8 <0,2 мкМ<0.2 µM SEQ ID N. 9SEQ ID N. 9 <0,3 мкМ<0.3 µM SEQ ID N. 10SEQ ID N. 10 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 11SEQ ID N. 11 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 12SEQ ID N. 12 <0,2 мкМ<0.2 µM SEQ ID N. 13SEQ ID N. 13 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 14SEQ ID N. 14 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 15SEQ ID N. 15 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 16SEQ ID N. 16 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 17SEQ ID N. 17 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 18SEQ ID N. 18 <0,4 мкМ<0.4 µM SEQ ID N. 19SEQ ID N. 19 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 20SEQ ID N. 20 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 21SEQ ID N. 21 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 22SEQ ID N. 22 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N.23SEQ ID N.23 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 24SEQ ID N. 24 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 25SEQ ID N. 25 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 26SEQ ID N. 26 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 27SEQ ID N. 27 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 28SEQ ID N. 28 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 29SEQ ID N. 29 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 30SEQ ID N. 30 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 31SEQ ID N. 31 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 32SEQ ID N. 32 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 33SEQ ID N. 33 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 34SEQ ID N. 34 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 35SEQ ID N. 35 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 36SEQ ID N. 36 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 37SEQ ID N. 37 < 0,2 мкМ< 0.2 µM SEQ ID N. 38SEQ ID N. 38 < 0,2 мкМ< 0.2 µM SEQ ID N. 39SEQ ID N. 39 < 0,2 мкМ< 0.2 µM SEQ ID N. 40SEQ ID N.40 < 0,2 мкМ< 0.2 µM SEQ ID N. 41SEQ ID N. 41 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 111SEQ ID N. 111 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 112SEQ ID N. 112 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 113SEQ ID N. 113 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 114SEQ ID N. 114 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 115SEQ ID N. 115 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 116SEQ ID N. 116 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 117SEQ ID N. 117 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 118SEQ ID N. 118 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 119SEQ ID N. 119 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 120SEQ ID N. 120 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 121SEQ ID N. 121 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 122SEQ ID N. 122 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 123SEQ ID N. 123 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 124SEQ ID N. 124 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 125SEQ ID N. 125 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 126SEQ ID N. 126 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 127SEQ ID N. 127 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 128SEQ ID N. 128 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 129SEQ ID N. 129 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 130SEQ ID N. 130 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 131SEQ ID N. 131 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 132SEQ ID N. 132 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 133SEQ ID N. 133 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 134SEQ ID N. 134 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 135SEQ ID N. 135 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 136SEQ ID N. 136 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 137SEQ ID N. 137 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 138SEQ ID N. 138 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 139SEQ ID N. 139 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 140SEQ ID N. 140 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 141SEQ ID N. 141 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 142SEQ ID N. 142 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 143SEQ ID N. 143 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 144SEQ ID N. 144 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 145SEQ ID N. 145 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 146SEQ ID N. 146 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 147SEQ ID N. 147 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 148SEQ ID N. 148 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 149SEQ ID N. 149 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 150SEQ ID N. 150 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 151SEQ ID N. 151 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 152SEQ ID N. 152 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 153SEQ ID N. 153 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 154SEQ ID N. 154 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 155SEQ ID N. 155 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 156SEQ ID N. 156 <0,5 мкМ<0.5 µM SEQ ID N. 157SEQ ID N. 157 <0,5 мкМ<0.5 µM NAM-IMVTIPADLYEWIEENAM-IMVTIPADLYEWIEE BIO-1BIO-1 < 1 мкМ< 1 µM IMVTIPADLYEWIEEQ-NAGIMVTIPADLYEWIEEQ-NAG BIO-2BIO-2 < 1 мкМ< 1 µM NAG-NAM- IMVTIPADLYEWIEENAG-NAM- IMVTIPADLYEWIEE BIO-3BIO-3 < 1 мкМ< 1 µM каприновая кислота- IMVTIPADLYEWIEEcapric acid - IMVTIPADLYEWIEE BIO-4BIO-4 < 1 мкМ< 1 µM Аскорбиновая кислота - IMVTIPADLYEWIEEAscorbic acid - IMVTIPADLYEWIEE BIO-5BIO-5 < 1 мкМ< 1 µM SEQ ID N. 158 SEQ ID N. 158 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 159SEQ ID N. 159 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N.160 SEQ ID N.160 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 161SEQ ID N. 161 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 162SEQ ID N. 162 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 163SEQ ID N. 163 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 164SEQ ID N. 164 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 165SEQ ID N. 165 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N.166 SEQ ID N.166 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 167SEQ ID N. 167 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 168SEQ ID N. 168 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 169SEQ ID N. 169 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 170SEQ ID N. 170 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 171SEQ ID N. 171 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 172SEQ ID N. 172 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 173SEQ ID N. 173 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 174SEQ ID N. 174 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 175SEQ ID N. 175 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 176SEQ ID N. 176 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 177SEQ ID N. 177 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 178SEQ ID N. 178 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 179SEQ ID N. 179 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 180SEQ ID N. 180 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 181SEQ ID N. 181 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 182SEQ ID N. 182 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 183SEQ ID N. 183 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 184SEQ ID N. 184 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 185SEQ ID N. 185 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 186SEQ ID N. 186 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 187SEQ ID N. 187 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 188SEQ ID N. 188 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 189SEQ ID N. 189 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 190SEQ ID N. 190 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 191SEQ ID N. 191 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 192SEQ ID N. 192 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 193SEQ ID N. 193 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 194SEQ ID N. 194 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 195SEQ ID N. 195 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 196SEQ ID N. 196 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 197SEQ ID N. 197 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 198SEQ ID N. 198 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 199SEQ ID N. 199 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 200SEQ ID N. 200 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 201SEQ ID N. 201 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 202SEQ ID N. 202 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 203SEQ ID N. 203 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 204SEQ ID N. 204 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 205SEQ ID N. 205 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 206SEQ ID N. 206 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 207SEQ ID N. 207 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 208SEQ ID N. 208 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 209SEQ ID N. 209 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 210SEQ ID N. 210 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 211SEQ ID N. 211 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 212SEQ ID N. 212 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 213SEQ ID N. 213 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 214SEQ ID N. 214 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 215SEQ ID N. 215 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 216SEQ ID N. 216 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 217SEQ ID N. 217 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 218SEQ ID N. 218 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 219SEQ ID N. 219 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 220SEQ ID N. 220 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 221SEQ ID N. 221 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 222SEQ ID N. 222 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 223SEQ ID N. 223 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 224SEQ ID N. 224 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 225SEQ ID N. 225 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 226SEQ ID N. 226 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 227SEQ ID N. 227 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 228SEQ ID N. 228 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 229SEQ ID N. 229 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 230SEQ ID N. 230 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 231SEQ ID N. 231 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 232SEQ ID N. 232 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 233SEQ ID N. 233 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 234SEQ ID N. 234 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 235SEQ ID N. 235 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 236SEQ ID N. 236 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 237SEQ ID N. 237 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 238SEQ ID N. 238 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 239SEQ ID N. 239 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 240SEQ ID N. 240 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 241SEQ ID N. 241 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 242SEQ ID N. 242 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 243SEQ ID N. 243 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 244SEQ ID N. 244 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 245SEQ ID N. 245 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 246SEQ ID N. 246 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 247SEQ ID N. 247 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 248SEQ ID N. 248 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 249SEQ ID N. 249 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 250SEQ ID N. 250 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 251SEQ ID N. 251 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 252SEQ ID N. 252 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 253SEQ ID N. 253 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 254SEQ ID N. 254 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 255SEQ ID N. 255 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 256SEQ ID N. 256 < 10 мкМ< 10 µM SEQ ID N. 257SEQ ID N. 257 < 10 мкМ< 10 µM

На фиг.1 представлен профиль доза-ответ для иллюстративных пептидов.Figure 1 shows the dose-response profile for exemplary peptides.

Пример 6: Фенотипический анализ в дифференцированных TH17-клетках человека и анализ жизнеспособностиExample 6 Phenotypic Analysis in Differentiated Human TH17 Cells and Viability Assay

Для оценки эффекта пептидов по изобретению на клетки-мишени, ответственные за воспаление при офтальмологических или дерматологических патологиях, авторы изобретения протестировали способность пептида SEQ ID N. 18 ингибировать in vitro секрецию провоспалительных цитокинов и металлопротеиназ клетками Th17 человека.To evaluate the effect of the peptides of the invention on target cells responsible for inflammation in ophthalmic or dermatological pathologies, the inventors tested the ability of SEQ ID N. 18 peptide to inhibit in vitro secretion of pro-inflammatory cytokines and metalloproteinases by human Th17 cells.

Первичные CD4 T-клетки человека дифференцировали в Th17-клетки in vitro посредством культивирования клеток в среде для дифференцировки Th17 в течение 10 суток. Подробно, очищенные CD4 T-клетки периферической крови человека культивировали в среде для дифференцировки Th-17 (CellXVivo Human Th17, Tocris) в соответствии с инструкциями изготовителя. В кратком изложении: 96-луночные планшеты для культивирования тканей покрывали антителами-антагонистами CD3 и CD28. Клетки подсчитывали по исключению трипанового синего и суспендировали в концентрации 1E5 клеток/мл в среде для дифференцировки Th-17. 0,2 мл этой суспензии высевали в индивидуальные лунки 96-луночного планшета. Клетки инкубировали при 37°C с 5% CO2 в течение 10 суток с заменой среды по необходимости. После дифференцировки клеток в течение 10 суток пептиды, синтезированные согласно примеру 1, такие как пептид Seq.ID No 18, разбавляли до надлежащей концентрации в CGM (среда для роста клеток, XVivo-15, Lonza). Планшет с клетками центрифугировали при 300×g в течение 5 мин и среду для дифференцировки Th17 удаляли.Primary human CD4 T cells were differentiated into Th17 cells in vitro by culturing the cells in Th17 differentiation medium for 10 days. In detail, purified human peripheral blood CD4 T cells were cultured in Th-17 differentiation medium (CellXVivo Human Th17, Tocris) according to the manufacturer's instructions. Briefly: 96-well tissue culture plates were coated with CD3 and CD28 antagonist antibodies. Cells were counted by trypan blue exclusion and suspended at 1E5 cells/ml in Th-17 differentiation medium. 0.2 ml of this suspension was seeded into individual wells of a 96-well plate. Cells were incubated at 37°C with 5% CO2 for 10 days with medium change as needed. After cell differentiation for 10 days, the peptides synthesized according to example 1, such as peptide Seq.ID No 18, were diluted to the appropriate concentration in CGM (cell growth medium, XVivo-15, Lonza). The cell plate was centrifuged at 300×g for 5 min and the Th17 differentiation medium was removed.

После дифференцировки клетки стимулировали как активирующим коктейлем, содержащим форбол 12-миристат 13-ацетат, так и лономицин, в присутствии варьирующих концентраций тестируемых изделий.After differentiation, cells were stimulated with both an activating cocktail containing phorbol 12-myristate 13-acetate and lonomycin in the presence of varying concentrations of test articles.

Через 24 ч после стимуляции культуральные супернатанты анализировали в отношении экспрессии IL-17, IL-6, IL-23, MMP3 и исследовали в отношении жизнеспособности с использованием флуоресцентного красителя для определения жизнеспособности, аламарового синего. CD4 клетки секретировали высокие уровни IL-17A в ответ на стимуляцию активирующим коктейлем, что указывает на успешную дифференцировку в Th17-клетки. Кроме того, стимулированные клетки секретировали IL-6, IL23 и MMP3.24 hours after stimulation, culture supernatants were analyzed for expression of IL-17, IL-6, IL-23, MMP3 and examined for viability using a fluorescent viability dye, Alamar Blue. CD4 cells secreted high levels of IL-17A in response to activating cocktail stimulation, indicating successful differentiation into Th17 cells. In addition, stimulated cells secreted IL-6, IL23 and MMP3.

Супернатант удаляли и заменяли 200 мкл разбавленного пептида или носителя (CGM+DMSO, разбавленный в соответствии с концентрацией TI) в соответствующих группах. Клетки инкубировали с тестируемыми пептидами в течение 1 часа перед стимуляцией. Получали следующие растворы для стимуляции: 10x коктейль для активации клеток: разбавленный от 500x до 10x рабочего раствора в CGM. В лунки добавляли 22 мкл соответствующих стимуляторов через 1 ч после добавления TI. Наконец, в каждую лунку добавляли 25 мкл реагента аламарового синего (10x) через 20 часов после стимулятора (4 ч перед сбором сыворотки через 24 ч) для определения жизнеспособности клеток. Через 24 ч после добавления стимулятора определяли флуоресценцию аламарового синего в соответствии с инструкциями изготовителя. Остальные супернатанты собирали для последующего мультиплексного анализа белка. Уровни экспрессии IL-6, IL-17 и IL-23, а также MMP3 в супернатантах стимулированной в течение 24 часов культуры оценивали с использованием мультиплексной платформы Luminex на устройстве MAGPIX.The supernatant was removed and replaced with 200 μl of diluted peptide or vehicle (CGM+DMSO diluted according to TI concentration) in the respective groups. Cells were incubated with test peptides for 1 hour prior to stimulation. The following stimulation solutions were prepared: 10x cell activation cocktail: diluted 500x to 10x working solution in CGM. 22 μl of the respective stimulants were added to the wells 1 hour after the addition of TI. Finally, 25 μl of Alamar Blue reagent (10x) was added to each well 20 hours after the stimulator (4 hours before serum collection at 24 hours) to determine cell viability. Alamar blue fluorescence was determined 24 hours after the addition of the stimulant according to the manufacturer's instructions. The remaining supernatants were collected for subsequent multiplex protein analysis. Expression levels of IL-6, IL-17, and IL-23, as well as MMP3 in supernatants stimulated for 24 hours culture was assessed using the Luminex multiplex platform on the MAGPIX device.

На фиг.2 и 3 показан эффект пептида SEQ ID N. 18. Как можно видеть, этот пептид способен значительно уменьшать секрецию IL-17A, IL-6 и IL-23, а также секрецию MMP3. Как показано на фиг.4 ингибирование секреции цитокинов и металлопротеиназ не снижает жизнеспособность клеток, поскольку обработка клеток пептидом SEQ.ID N. 18 в течение одиннадцати суток не снижает жизнеспособность клеток.Figures 2 and 3 show the effect of the peptide SEQ ID N. 18. As can be seen, this peptide is able to significantly reduce the secretion of IL-17A, IL-6 and IL-23, as well as the secretion of MMP3. As shown in figure 4, inhibition of the secretion of cytokines and metalloproteinases does not reduce cell viability, since treatment of cells with the peptide SEQ.ID N. 18 for eleven days does not reduce cell viability.

Пример 7: Физико-химический анализ пептидовExample 7 Physicochemical Analysis of Peptides

Физико-химические свойства пептида HAP уровня техники и некоторых пептидов по изобретению (см. таблицу 8) тестировали, как описано ниже.The physicochemical properties of the prior art HAP peptide and some of the peptides of the invention (see Table 8) were tested as described below.

i. Способыi. Ways

a. Изоэлектрическая точка IP log D и logPa. Isoelectric point IP log D and log P

Основные физико-химические свойства (изоэлектрическая точка (IP), log D (7,4) и logP) пептидов, приведенных в таблице 8 ниже, определяли с использованием устройства SiriusT3 (Sirius Analytical Instruments Ltd., East Sussex, Великобритания), оборудованного двухконтактным эталонным pH-электродом Ag/AgCl, спектрометра Sirius D-PAS и устройства для определения мутности. pH-электрод калибровали титрометрически в диапазоне pH 1,8-12,2. Использовали верхнеприводную мешалку, и температурный зонд (контроллер Пельтье) осуществлял мониторинг температуры в ходе титрования. Эксперименты по титрованию проводили в 0,15 M растворе KCl со скорректированной ионной силой (вода ISA) в атмосфере азота при температуре 25±1°C. Все тесты проводили с использованием стандартизованного 0,5 M KOH и 0,5 M HCl в качестве реагентов для титрования, для тестирования коэффициентов распределения использовали насыщенный октанол в воде ISA (5% воды ISA) в качестве распределяющего растворителя. pKas определяли потенциометрическим способом посредством pH-метрического титрования. Порошок (around 0,5 мг) растворяли в 1,5 мл воды ISA и титрование проводили в трех экземплярах в диапазоне pH 2,0-12,0. Каждое значение Log P получали в трех экземплярах путем растворения порошка (приблизительно 1 мг) в 1 мл воды ISA с последующим pH-метрическим титрованием при трех различных процентах октанола (как правило, 50%, 60%, 70%).The main physicochemical properties (isoelectric point (IP), log D (7.4) and logP) of the peptides shown in Table 8 below were determined using a SiriusT3 device (Sirius Analytical Instruments Ltd., East Sussex, UK) equipped with a two-prong pH reference electrode Ag/AgCl, Sirius D-PAS spectrometer and turbidity device. The pH electrode was titrimetrically calibrated in the pH range of 1.8-12.2. An overhead stirrer was used and a temperature probe (Peltier controller) monitored the temperature during the titration. Titration experiments were carried out in 0.15 M ionic strength corrected KCl solution (ISA water) under nitrogen at 25±1°C. All tests were performed using standardized 0.5 M KOH and 0.5 M HCl as titration reagents, for partition coefficient testing using saturated octanol in ISA water (5% ISA water) as partitioning solvent. pKas was determined potentiometrically by pH metric titration. The powder (around 0.5 mg) was dissolved in 1.5 ml of ISA water and titrated in triplicate over a pH range of 2.0-12.0. Each Log P value was obtained in triplicate by dissolving the powder (approximately 1 mg) in 1 ml ISA water followed by pH metric titration at three different percentages of octanol (typically 50%, 60%, 70%).

b. Растворимость в воде и стабильностьb. Solubility in water and stability

Общая методика получения исходных растворовGeneral procedure for preparing stock solutions

Каждый лиофилизированный пептид отвешивали во флакон янтарного цвета. Добавляли вычисленный объем фосфатно-солевого буфера при pH 7,8 для прямого получения 10 мМ исходных растворов. Извлеченные суспензии перемешивали в течение 30 посредством инкубатора с орбитальным встряхивателем при 37°C. Последующие разведения проводили для получения более разбавленных исходных растворов для менее растворимых соединений.Each lyophilized peptide was weighed into an amber vial. Added the calculated volume of phosphate-buffered saline at pH 7.8 to directly obtain 10 mm stock solutions. The recovered suspensions were stirred for 30 minutes with an orbital shaker incubator at 37°C. Subsequent dilutions were made to obtain more dilute stock solutions for less soluble compounds.

Для оценки стабильности и растворимости все исходные растворы хранили при 25°C. Указанное в заголовке соединение оценивали посредством анализа UHPLC-MS по сравнению со стандартными растворами в 3 момента времени: T0, 3 суток, 1 неделя.To assess stability and solubility, all stock solutions were stored at 25°C. The title compound was evaluated by UHPLC-MS analysis against standard solutions at 3 time points: T0, 3 days, 1 week.

Хроматографический профиль оценивали для количественного анализа, в то время как для испытаний стабильности проводили детекцию MS-спектров.The chromatographic profile was evaluated for quantitative analysis, while MS detection was performed for stability tests.

Общая методика получения стандартного раствораGeneral procedure for preparing a standard solution

Каждый пептид взвешивали и прямо разбавляли до 100 мкМ фосфатным буфером при pH 7,8. Растворы перемешивали в течение 5 минут с использованием встряхивателя и нагревали при 37°C в течение 20 минут. Полученный стандартный раствор хранили при 25°C в темноте с контролируемой температурой.Each peptide was weighed and directly diluted to 100 μM with phosphate buffer at pH 7.8. The solutions were stirred for 5 minutes using a shaker and heated at 37°C for 20 minutes. The resulting standard solution was stored at 25°C in the dark with controlled temperature.

Общая методика подготовки образцаGeneral sample preparation procedure

Часть исходных растворов собирали во флакон янтарного цвета и разбавляли до 100 мкМ фосфатным буфером при pH 7,8 (фактор разведения 1:100).Part of the stock solutions were collected in an amber vial and diluted to 100 μM with phosphate buffer at pH 7.8 (dilution factor 1:100).

Приборный способInstrument method

Обращенно-фазовую UHPLC проводили при скорости потока 0,3 мл/мин с использованием колонки Luna Omega Polar C18 column (размер пор 1,6 мкм, 2,1×100 мм). Растворитель A представлял собой 0,5% муравьиную кислоту в воде и растворитель B представлял собой 0,5% муравьиную кислоту в ацетонитриле. Сначала образцы загружали в колонку и промывали изократически при 10% B в течение 3 мин. Затем прогоняли градиент 10-95% B в течение 22 мин, удерживали при 95% в течение 2 мин, а затем снижали до 10% в течение 1 мин и удерживали для стабилизации давления в течение 5 мин. Мониторинг УФ-поглощения проводили посредством DAD (220-400 нм). Для мониторинга TIC использовали ионную ловушку ESI-MS.Reverse-phase UHPLC was performed at a flow rate of 0.3 ml/min using a Luna Omega Polar C18 column (pore size 1.6 μm, 2.1×100 mm). Solvent A was 0.5% formic acid in water and solvent B was 0.5% formic acid in acetonitrile. Samples were first loaded onto the column and washed isocratically at 10% B for 3 min. A gradient of 10-95% B was then run over 22 min, held at 95% for 2 min, then lowered to 10% over 1 min and held to stabilize the pressure for 5 min. Monitoring of UV absorption was performed by DAD (220-400 nm). An ESI-MS ion trap was used to monitor TIC.

ii. Результатыii. results

Все протестированные пептиды продемонстрировали стабильность при 25°C вплоть до 1 недели, поскольку не было обнаружено значительного варьирования хроматографического профиля и спектра масс.All peptides tested showed stability at 25° C. up to 1 week as no significant variation in chromatographic profile and mass spectrum was found.

Физико-химические свойства протестированных пептидов представлены в таблице 8 нижеThe physicochemical properties of the tested peptides are presented in Table 8 below.

Таблица 8Table 8

ПЕПТИДPEPTIDE IPIP Log D (7,4)LogD(7.4) logPlogP РАСТВОРИМОСТЬSOLUBILITY SEQ ID N. 1 SEQ ID N. 1 5,145.14 -3,68 -3.68 -5,98-5.98 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 2SEQ ID N. 2 5,145.14 -0,56-0.56 0,990.99 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 3SEQ ID N. 3 3,903.90 -1,87-1.87 1,331.33 10 мкМ10 µM SEQ ID N. 4SEQ ID N. 4 3,903.90 -1,32-1.32 1,881.88 20 мкМ20 µM SEQ ID N. 5SEQ ID N. 5 5,195.19 -1,26-1.26 -0,51-0.51 1 мМ1 mM SEQ ID N. 6SEQID N. 6 5,145.14 -3,65-3.65 -0,37-0.37 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 7SEQ ID N. 7 5,195.19 -1,41-1.41 -0,86-0.86 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 8SEQ ID N. 8 5,145.14 -4,06-4.06 -5,12-5.12 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 9SEQ ID N. 9 8,288.28 -1,08-1.08 -0,53-0.53 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 10SEQ ID N. 10 5,145.14 -3,66-3.66 0,090.09 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 11SEQ ID N. 11 4,254.25 -2,92-2.92 1,051.05 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 12SEQ ID N. 12 3,663.66 -5,24-5.24 1,311.31 10 мкМ10 µM SEQ ID N. 13SEQ ID N. 13 6,066.06 1,151.15 -0,49-0.49 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 14SEQ ID N. 14 8,998.99 -2,80-2.80 -5,40-5.40 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 15SEQ ID N. 15 3,513.51 1,881.88 1,661.66 50 мкМ 50 µM SEQ ID N. 16SEQ ID N. 16 5,195.19 0,240.24 0,130.13 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 17SEQ ID N. 17 8,058.05 -3,68-3.68 -0,44-0.44 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 18SEQ ID N. 18 3,553.55 -3,79-3.79 1,891.89 50 мкМ50 µM SEQ ID N. 41SEQ ID N. 41 3,543.54 -1,94-1.94 1,241.24 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 19SEQ ID N. 19 12,4912.49 -3,94-3.94 -8-8 100 мкМ100 µM SEQ ID N. 20SEQ ID N. 20 11,2911.29 -3,69-3.69 -6,79-6.79 100 мкМ100 µM SEQ ID N. 21SEQ ID N. 21 10,610.6 -0,55-0.55 -4,99-4.99 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 22SEQ ID N. 22 4,264.26 -3,18-3.18 0,40.4 >10 мМ>10 mM SEQ ID N.23SEQ ID N.23 4,264.26 -2,24-2.24 1,011.01 50 мкМ 50 µM SEQ ID N. 24SEQ ID N. 24 5,145.14 2,152.15 2,452.45 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 25SEQ ID N. 25 4,664.66 -5,64-5.64 0,40.4 100 мкМ 100 µM SEQ ID N. 26SEQ ID N. 26 8,138.13 0,1480.148 0,690.69 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 27SEQ ID N. 27 5,145.14 0,1480.148 0,690.69 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 28SEQ ID N. 28 12,2512.25 -6,44-6.44 -6,36-6.36 100 мкМ100 µM SEQ ID N. 29SEQ ID N. 29 12,2512.25 -6,44-6.44 -6,39-6.39 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 30SEQ ID N. 30 12,9612.96 -3,89-3.89 -7,44-7.44 100 мкМ100 µM SEQ ID N. 31SEQ ID N. 31 12,512.5 -3,59-3.59 -4,9-4.9 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 32SEQ ID N. 32 nana -3,59-3.59 -10-10 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 33SEQ ID N. 33 4,464.46 -1,06-1.06 1,991.99 100 мкМ100 µM SEQ ID N. 34SEQ ID N. 34 5,145.14 -3,38-3.38 -5,43-5.43 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 35SEQ ID N. 35 5,145.14 -3,52-3.52 -5,43-5.43 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 36SEQ ID N. 36 8,138.13 -1,24-1.24 -1,09-1.09 100 мкМ100 µM SEQ ID N. 37SEQ ID N. 37 5,145.14 -3,9-3.9 -6,89-6.89 >10 мМ>10 mM SEQ ID N.38SEQ ID N.38 5,145.14 -3,46-3.46 -5,88-5.88 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 39SEQ ID N. 39 4,24.2 -2,86-2.86 -5,36-5.36 >10 мМ>10 mM SEQ ID N.40SEQ ID N.40 4,214.21 -3,5-3.5 -4,93-4.93 >10 мМ>10 mM SEQ ID N. 111SEQ ID N. 111 8,998.99 -0,93-0.93 -0,38-0.38 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 112SEQ ID N. 112 8,998.99 -7,295-7.295 -4,76-4.76 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 113SEQ ID N. 113 8,998.99 -3,472-3.472 -0,13-0.13 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 114SEQ ID N. 114 8,998.99 -3,591-3.591 -0,21-0.21 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 115SEQ ID N. 115 8,998.99 -3,914-3.914 -5,94-5.94 <50 мкМ<50 µM SEQ ID N. 121SEQ ID N. 121 8,998.99 -1,474-1.474 -0,51-0.51 <50 мкМ<50 µM

Как можно видеть из вышеуказанного, большинство пептидов по изобретению имеют оптимальные физико-химические свойства, демонстрируя хорошее равновесие между растворимостью и липофильностью. Среднее значение LogD для пептидов составляло -2,64±2,06, в то время как для большинства пептидов растворимость, наблюдаемая в воде, была очень хорошей (> 10 мМ). Наблюдаемые свойства делают их особенно пригодными для применения в офтальмологических и дерматологических применениях, поскольку как гидрофобные, так и гидрофильные компоненты присутствуют в дерме и на поверхности глаза. Также они могут объяснять хорошую проницаемость, наблюдаемую для пептидов (см. пример 8).As can be seen from the above, most of the peptides of the invention have optimal physicochemical properties, showing a good balance between solubility and lipophilicity. The average LogD value for the peptides was -2.64±2.06, while for most of the peptides the solubility observed in water was very good (>10 mM). The observed properties make them particularly suitable for ophthalmic and dermatological applications since both hydrophobic and hydrophilic components are present in the dermis and on the surface of the eye. They may also explain the good permeability observed for peptides (see Example 8).

Пример 8: Тест проницаемостиExample 8: Permeability Test

Протестированные пептиды представляли собой пептиды SEQ ID N. 1, SEQ ID N. 2, SEQ ID N. 7, SEQ ID N. 11, SEQ ID N. 14, SEQ ID N. 38, SEQ ID N. 111, SEQ ID N. 113, SEQ ID N. 115 и SEQ ID N. 121. Их растворяли воде для культивирования клеток (Coming, Manassas, VA, США) до получения 10 мМ исходного раствора.The peptides tested were SEQ ID N. 1, SEQ ID N. 2, SEQ ID N. 7, SEQ ID N. 11, SEQ ID N. 14, SEQ ID N. 38, SEQ ID N. 111, SEQ ID N. 113, SEQ ID N. 115 and SEQ ID N. 121. They were dissolved in cell culture water (Coming, Manassas, VA, USA) to obtain a 10 mM stock solution.

i. Способыi. Ways

Модель in vitroin vitro model

I-HCEC, линия иммотрализованных эпителиальных клеток роговицы человека, происходила из первичных эпителиальных клеток роговицы человека (чистота >99%). Эти клетки являются пригодными для исследований роговицы человека в здоровом состоянии и при заболевании. Клетки культивировали в соответствии с протоколом и с использованием среды, предлагаемой Innoprot, Bizkaia, Испания (IM-Corneal Epithelial Cell Medium, ссылочный номер P60131).I-HCEC, an immotralized human corneal epithelial cell line, was derived from primary human corneal epithelial cells (>99% purity). These cells are suitable for studies of human corneas in healthy and diseased conditions. The cells were cultured according to the protocol and using the medium offered by Innoprot, Bizkaia, Spain (IM-Corneal Epithelial Cell Medium, ref. P60131).

ИммунофлуоресценцияImmunofluorescence

Были разработаны качественные и количественные способы, сначала для подтверждения, а затем и для количественного определения целостности барьера перед продолжения тестирования лекарственного средства. Сначала авторы изобретения проводили иммунофлуоресценцию для охарактеризации белков плотных контактов (Z0-1) (Sugrue SP et al., (1997) Exp Eye Res. Jan;64 (1): 11-20). Клетки высевали на покровные стекла, покрытые коллагеном I 50 мкг/мл (исходный раствор 3 мг/мл от Gibco, NY, США) с плотностью 1*104 клеток/см² и культивировали в течение 14 DIV и после смыкания монослоя среду обновляли каждые сутки. Клетки фиксировали в метаноле при -20°C в течение 10 мин, ополаскивали фосфатно-солевым буфером (PBS), инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре (к.т.) в PBS, содержавшем 4% бычий сывороточный альбумин (BSA; Sigma-Aldrich), а затем последовательно инкубировали с первичными и вторичными антителами в течение 60 мин в каждом случае при к.т. Первичное антитело представляло собой антитело козы против Z0-1 человека (1:100, Thermo Fisher) в течение ночи при 4°C а затем с антителом против антител козы с Alexafluor 488 (1:10000). Наконец, клетки контрастно окрашивали посредством DAPI (0,5 мг/мл) (Sigma-Aldrich) в течение 5 мин при комнатной температуре, заливали средой Vectashield Mounting Medium (Vector Laboratories Inc, Burlingame, CA) и наблюдали под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом (Leica TCS SP5, Wetzlar, Германия).Qualitative and quantitative methods have been developed, first to confirm and then to quantify the integrity of the barrier before proceeding with drug testing. First, the inventors performed immunofluorescence to characterize tight junction proteins (Z0-1) (Sugrue SP et al., (1997) Exp Eye Res. Jan; 64 (1): 11-20). Cells were seeded on coverslips coated with collagen I 50 μg/ml (stock solution 3 mg/ml from Gibco, NY, USA) at a density of 1*104 cells/cm ² and cultured for 14 DIV and after closing the monolayer, the medium was renewed every day . Cells were fixed in methanol at -20°C for 10 min, rinsed with phosphate buffered saline (PBS), incubated for 10 min at room temperature (RT) in PBS containing 4% bovine serum albumin (BSA; Sigma -Aldrich) and then sequentially incubated with primary and secondary antibodies for 60 min in each case at rt. The primary antibody was goat anti-human Z0-1 (1:100, Thermo Fisher) overnight at 4°C followed by anti-goat with Alexafluor 488 (1:10,000). Finally, cells were counterstained with DAPI (0.5 mg/mL) (Sigma-Aldrich) for 5 min at room temperature, embedded in Vectashield Mounting Medium (Vector Laboratories Inc, Burlingame, CA) and observed under a confocal laser scanning microscope ( Leica TCS SP5, Wetzlar, Germany).

Анализ MTSMTS Analysis

Жизнеспособность клеток определяли через 24 ч с использованием анализа пролиферации клеток Cell Titer One Solution Cell Proliferation Assay (Promega Corporation Madison, WI, CIF), колориметрического способа на основе 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2H-тетразолия (MTS). Количество образовавшегося формазана в качестве функции жизнеспособности измеряли при 492 нм с использованием устройства для считывания планшетов ELISA, Infinite F200 (Tecan, Mannedorf, Швейцария). Анализ проводили при 50 и 100 мкМ (N=9). Результаты выражали в качестве поглощения при 492 нм.Cell viability was determined 24 hours later using the Cell Titer One Solution Cell Proliferation Assay (Promega Corporation Madison, WI, CIF), a colorimetric method based on 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3 -carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS). The amount of formazan formed as a function of viability was measured at 492 nm using an ELISA plate reader, Infinite F200 (Tecan, Mannedorf, Switzerland). The assay was performed at 50 and 100 μM (N=9). The results are expressed as absorbance at 492 nm.

Анализ TEERTEER Analysis

Целостность барьера культур эпителиальных роговицы подтверждали с использованием измерения TEER (трансэпителиальное/трансэндотелиальное электрическое сопротивление)) и проницаемости параклеточных проникающих веществ (например, маннит, 6-карбоксифлуоресцеин) (Ronkko S et al., (2016) Drug Deliv Transl Res 6: 660-675). TEER является широко признанным количественным способом измерения динамики целостности плотных контактов в моделях клеточных культур эндотелиальнных и эпителиальных монослоев. Величины TEER являются индикаторами целостности клеточных барьеров до их оценки в отношении транспорта лекарственных веществ или химических веществ. Измерение TEER можно проводить в реальном времени без повреждения клеток, и оно, как правило, основано на измерении осмотического сопротивления или измерении импеданса в широком спектре частот (Snirivasan et al., 2015 J Lab Autom. 20(2): 107-126). Для проведения этого анализа использовали Millicell ERS-2, системы для определения электрического сопротивления от EMD Millipore (Burlington, MA, США) в соответствии с инструкциями изготовителя. Анализ проводили при 50 и 100 мкМ (N=9). Результаты выражали в качестве сопротивления (кл/см²).The barrier integrity of corneal epithelial cultures was confirmed using measurements of TEER (transepithelial/transendothelial electrical resistance)) and permeability of paracellular permeants (e.g. mannitol, 6-carboxyfluorescein) (Ronkko S et al., (2016) Drug Deliv Transl Res 6: 660- 675). TEER is a widely accepted quantitative measure of tight junction integrity dynamics in cell culture models of endothelial and epithelial monolayers. TEER values are indicators of the integrity of cellular barriers prior to being evaluated for drug or chemical transport. TEER measurement can be done in real time without cell damage and is typically based on osmotic resistance measurement or broadband impedance measurement (Snirivasan et al., 2015 J Lab Autom. 20(2): 107-126). Millicell ERS-2 electrical resistance systems from EMD Millipore (Burlington, MA, USA) were used to perform this analysis according to the manufacturer's instructions. The assay was performed at 50 and 100 μM (N=9). The results were expressed as resistance (cells/cm ² ).

Испытание проницаемостиPermeability test

Задачей этого исследования была оценка величины кажущегося коэффициента проницаемости (Papp) для пептидов через пласт эпителиальных клеток роговицы человека. Все пептиды тестировали в концентрации 50 мкМ в двух экземплярах.The objective of this study was to evaluate the magnitude of the apparent permeability coefficient (Papp) for peptides through a layer of human corneal epithelial cells. All peptides were tested at a concentration of 50 μm in duplicate.

В частности, эпителиальные клетки роговицы человека (hCEPIC) наслаивали на вкладыши для культивирования клеток Transwell (Coming, NY, США). Эксперименты по проницаемости проводили, отбирая образцы из приемных камер в моменты времени 5, 30, 60 минут и из донорных камер в те же моменты времени. Каждую полученную аликвоту анализировали с использованием устройства ВЭЖХ (Knauer), оборудованного колонкой C18 Vertex Plus Column (Knauer), термостатически контролируемой при 40°C. Скорость (кажущийся коэффициент проницаемости, Papp) исследуемых соединений вычисляли и сравнивали с величинами Papp для маркеров с низкой и высокой проницаемостью 6-карбоксифлуоресцеина и родамина B, соответственно.Specifically, human corneal epithelial cells (hCEPIC) were layered onto Transwell cell culture inserts (Coming, NY, USA). Permeability experiments were performed by taking samples from the receiving chambers at time points of 5, 30, 60 minutes and from donor chambers at the same time points. Each aliquot obtained was analyzed using an HPLC device (Knauer) equipped with a C18 Vertex Plus Column (Knauer) thermostatically controlled at 40°C. The velocity (apparent permeability coefficient, Papp) of the test compounds was calculated and compared with the Papp values for the low and high permeability markers 6-carboxyfluorescein and rhodamine B, respectively.

Кажущийся коэффициент проницаемости (Papp) вычисляли по следующему уравнению:The apparent permeability coefficient (Papp) was calculated using the following equation:

Papp=(l/A *C0)(dM/dt)Papp=(l/A*C0)(dM/dt)

где dM/dt представляет собой поток (наномоли в секунду) через клеточные слои;where dM/dt is the flux (nanomoles per second) through the cell layers;

A (квадратные сантиметры) представляет собой площадь подвергнутой воздействию поверхности мембраны вкладыша;A (square centimetres) is the exposed surface area of the liner membrane;

C0 представляет собой первоначальную концентрацию лекарственного средства (микромолярная) в донорном отделении при t=0 (Xiang et al., Drug Metab Dispos. 2009 May;37(5):992-8.C0 is the initial drug concentration (micromolar) in the donor compartment at t=0 (Xiang et al., Drug Metab Dispos. 2009 May;37(5):992-8.

СтатистикаStatistics

Все группы (исследованное соединение и родамин) сравнивали с контролем с низкой проницаемостью. Все другие экспериментальные результаты выражали в качестве среднего значения ± S.E. и значимость вычисляли посредством t-критерия Стьюдента против контрольных клеток. Отличие считали статистически значимым (p < 0,05) при определении посредством t-критерия Стьюдента.All groups (test compound and rhodamine) were compared to a low permeability control. All other experimental results were expressed as mean ± S.E. and significance was calculated by Student's t-test against control cells. The difference was considered statistically significant (p < 0.05) when determined by Student's t-test.

ii. Результатыii. results

Анализы MTS и TEERMTS and TEER analyzes

В экспериментальных условиях авторов изобретения пептиды считались не влияющими на значимом уровне на жизнеспособность клеток или TEER при тестируемой концентрации 50 мкМ и 100 мкМ.Under the experimental conditions of the inventors, the peptides were considered to have no significant effect on cell viability or TEER at the tested concentrations of 50 μM and 100 μM.

Тест проницаемостиPermeability test

Результаты, полученные для каждого пептида, представлены в таблице 9 ниже.The results obtained for each peptide are shown in Table 9 below.

Таблица 9Table 9

Пептид N/названиеPeptide N/name ПоследовательностьSubsequence Проницаемость
(10^-6 см/с)Permeability
(10 ^-6 cm/s) SEQ ID N. 1SEQ ID N. 1 IHVTIPADLWDWINKIHVTIPADLWDWINK 19,33319.333 SEQ ID N. 7SEQ ID N. 7 IHVTIPADLWEWINKIHVTIPADLWEWINK 24,25224.252 SEQ ID N. 11SEQ ID N. 11 IHVTIPADLWDWIEKIHVTIPADLWDWIEK 28,02028.020 SEQ ID N. 2 SEQ ID N. 2 VHVTIPADLWDWINKVHVTIPADLWDWINK 28,86228.862 SEQ ID N. 14SEQ ID N. 14 IHVTIPADLWDWVRRIHVTIPADLWDWVRR 28,87328.873 SEQ ID N. 38SEQ ID N. 38 VPGAGVPGAGIHVTIPADLWDWINKVPGAGVPGAGIHVTIPADLWDWINK 30,41730.417 SEQ ID N. 121SEQ ID N. 121 VHVTIPADLWEWFRRVHVTIPADLWEWFRRR 47,08347.083 SEQ ID N. 115SEQ ID N. 115 VHVTIPQDLWEWVRRVHVTIPQDLWEWVRR 68,80068,800 SEQ ID N. 113SEQ ID N. 113 VHVQIPADLWEWVRRVHVQIPADLWEWVRR 76,79776.797 SEQ ID N. 111SEQ ID N. 111 VHVTIPAELWEWVRRVHVTIPAELWEWVRR 83,69883.698 Родамин BRhodamine B 51,2651.26 6-карбоксифлуоресцеин6-carboxyfluorescein 0,610.61

Для подтверждения того, что клеточная культура HCE является пригодной для скрининга пептидов, определяли проницаемость липофильного транклеточного маркера родамина B. Как и ожидалось, родамин B демонстрировал высокую проницаемость клеточной культуры HCE (51,26±5,44 10^-6 см/с). Затем оценивали проницаемость 6-карбоксифлуоресцеина в соответствии с литературой (0,61±0,33 10^-6 см/с). Этот маркер имеет очень низкую липофильность и он проходит через биологические мембраны только через внутриклеточное пространство. To confirm that the HCE cell culture is suitable for peptide screening, the permeability of the transcellular lipophilic marker Rhodamine B was determined. As expected, Rhodamine B showed high permeability of the HCE cell culture (51.26±5.44 10 ^-6 cm/s). Then the permeability of 6-carboxyfluorescein was evaluated in accordance with the literature (0.61±0.33 10 ^-6 cm/s). This marker has a very low lipophilicity and it passes through biological membranes only through the intracellular space.

Протестированные пептиды продемонстрировали очень хорошую проницаемость через иммортализованный эпителия роговицы человека по сравнению со стандартом с высокой проницаемостью родамином B. Очевидно, что модель проницаемости HCE не включает строму или эндотелий, однако эти слои не являются ключевыми барьерами для всасывания лекарственного средства через роговицу. Авторы изобретения обнаружили пептиды с высокой проницаемостью (SEQ ID N. 2) и пептиды с более высокой проницаемостью по сравнению с родамином B (SEQ ID N. 115, SEQ ID N. 113 и SEQ ID N. 111).The tested peptides showed very good permeability through immortalized human corneal epithelium compared to the high permeability standard rhodamine B. It appears that the HCE permeability model does not include stroma or endothelium, however these layers are not key barriers to drug absorption across the cornea. The inventors found high permeability peptides (SEQ ID N. 2) and higher permeability peptides compared to rhodamine B (SEQ ID N. 115, SEQ ID N. 113 and SEQ ID N. 111).

Пример 9: Испытание аффинности пептид-IL-17AExample 9 Peptide-IL-17A Affinity Test

Пептид уровня техники HAP (SEQ ID N.1) и пептид SEQ ID N.2 тестировали в отношении аффинности к mIL-17A, как описано ниже.The prior art peptide HAP (SEQ ID N.1) and the peptide SEQ ID N.2 were tested for affinity for mIL-17A as described below.

a. Иммобилизация mIL-17Aa. Immobilization of mIL-17A

Для иммобилизации белка IL-17A мыши использовали химию присоединения аминов. На поверхности сенсорного чипа декстрановую матрицу сначала активировали посредством смеси 1-этил-3-карбодиимида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) для получения реакционноспособных сложных сукцинимидоэфиров. 10 мкг/мл IL17 разбавляли в 10 мМ ацетатном буфере при pH=5,0, а затем лиганд пропускали над поверхностью, чтобы позволить сложным эфирам реагировать спонтанно с незаряженными аминогруппами, таким образом, лиганд ковалентно связывается с декстраном. Ковалентная иммобилизация mIL17 приводит к стабильному связыванию 3000 RU лиганда с поверхностью.Amine addition chemistry was used to immobilize mouse IL-17A protein. On the surface of the sensor chip, the dextran matrix was first activated with a mixture of 1-ethyl-3-carbodiimide (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) to obtain reactive succinimide esters. 10 μg/ml IL17 was diluted in 10 mM acetate buffer at pH=5.0 and then the ligand was passed over the surface to allow the esters to react spontaneously with uncharged amino groups, thus the ligand binds covalently to the dextran. Covalent immobilization of mIL17 leads to stable binding of 3000 RU ligand to the surface.

b. Охарактеризация взаимодействия пептиды/IL17b. Characterization of the peptide/IL17 interaction

Пептиды SEQ ID N. 1 (HAP) и SEQ ID N 2 анализировали в отношении их способности связывать иммобилизованный mIL-17A. Молекулы разбавляли в различных концентрациях (от 62,5 до 1000 нМ) в буфере HBS-EP и инжектировали на сенсорный чип в течение 4 минут, и позволяли диссоциировать в течение 5 минут. После каждого прогона сенсорный чип регенерировали посредством инжектирования 2 M NaCl. На основе сенсограмм (фиг.1, панель A) и с использованием программного обеспечения BIAevaluation, анализ Скэтчарда для величин RU в равновесии позволил определить константу аффинности в качестве функции концентрации анализируемого соединения в растворе (фиг. 6, панель B). Полученные результаты представлены в таблице 10 ниже.The peptides SEQ ID N. 1 (HAP) and SEQ ID N 2 were analyzed for their ability to bind immobilized mIL-17A. The molecules were diluted at various concentrations (62.5 to 1000 nM) in HBS-EP buffer and injected onto the sensor chip for 4 minutes and allowed to dissociate for 5 minutes. After each run, the sensor chip was regenerated by injection of 2 M NaCl. Based on the sensograms (FIG. 1, panel A) and using the BIAevaluation software, Scatchard analysis for RU values at equilibrium determined the affinity constant as a function of the analyte concentration in solution (FIG. 6, panel B). The results obtained are presented in table 10 below.

Таблица 10Table 10

СоединениеCompound Kdea (нМ)Kdea (nM) SEQ ID N. 1SEQ ID N. 1 37003700 SEQ ID N. 2SEQ ID N. 2 130130

Как показано в таблице 8, пептид SEQ ID N. 2 связывается с IL-17A с величиной аффинности, равной 130 нМ, в то время как пептид SEQ ID N. 1 связывается с IL17-A с очень низкой величиной аффинности (3700 нМ).As shown in Table 8, SEQ ID N. 2 peptide binds to IL-17A with an affinity value of 130 nM, while SEQ ID N. 1 peptide binds to IL17-A with a very low affinity value (3700 nM).

Ввиду результатов, полученных в примере 8 и 9, модификация изолейцина в положении 1 пептида HAP уровня техники на валин, как в пептиде SEQ ID N. 2, приводит к поразительным различиям, касающимся физико-химических свойств, проницаемости и аффинности в отношении лиганда.In view of the results obtained in Examples 8 and 9, modification of the isoleucine at position 1 of the prior art HAP peptide to valine, as in the peptide of SEQ ID N. 2, results in striking differences in terms of physicochemical properties, permeability and ligand affinity.

Ниже обобщены свойства двух пептидов:The properties of the two peptides are summarized below:

Таблица 11Table 11

СвойствоProperty SEQ ID N. 1
(HAP)SEQ ID N. 1
(HAP) SEQ ID N. 2 SEQ ID N. 2 ПоследовательностьSubsequence IHVTIPADLWDWINKIHVTIPADLWDWINK VHVTIPADLWDWINKVHVTIPADLWDWINK logPlogP -5,98-5.98 0,990.99 logD (7,4)logD(7.4) -3,68-3.68 -0,56-0.56 Проницаемость (Papp±SE)Permeability (Papp±SE) 19,319.3 28,8628.86 SPR Kdeq (нМ)SPR Kdeq (nM) 37003700 130130

В таблице 11 показаны данные сравнения пептидов SEQ ID N. 1 и SEQ ID N. 2.Table 11 shows the comparison of the peptides of SEQ ID N. 1 and SEQ ID N. 2.

Авторы изобретения обнаружили значительные отличия с точки зрения logP и logD (отличие 6-log и 3-log, соответственно): это объяснило более высокую проницаемость, наблюдаемую для SEQ ID N. 2, по сравнению с SEQ ID N. 1 (28,8 против 19,3). Kd (нМ), измеренная в анализе с использованием поверхностного плазмонного резонанса (SPR), проведенном на IL-17A мыши, показала, что SEQ ID N. 2 был в 28 раз более аффинным, чем SEQ ID N. 1.The inventors found significant differences in terms of logP and logD (6-log and 3-log difference, respectively): this explained the higher permeability observed for SEQ ID N. 2 compared to SEQ ID N. 1 (28.8 against 19.3). Kd (nM) measured in a surface plasmon resonance (SPR) assay performed on mouse IL-17A showed that SEQ ID N. 2 was 28 times more affinity than SEQ ID N. 1.

Более того, также проводили исследования имитации молекулярной динамики, которые показали, что валин (SEQ ID N. 2) вместо изолейцина (HAP) в значительной степени стабилизирует свернутую структуру: было спрогнозировано, что SEQ ID N. 2 был на 80% более стабильным.Moreover, molecular dynamics simulation studies were also performed which showed that valine (SEQ ID N. 2) instead of isoleucine (HAP) significantly stabilized the folded structure: SEQ ID N. 2 was predicted to be 80% more stable.

Пример 10: Оценка in vitro экспрессии воспалительных цитокиновExample 10 In Vitro Evaluation of Inflammatory Cytokine Expression

Пептид HAP (SEQ ID N.1) и пептид SEQ ID N.2 тестировали in vitro для оценки их прямого влияния на экспрессию воспалительных цитокинов в роговице.The HAP peptide (SEQ ID N.1) and the peptide SEQ ID N.2 were tested in vitro to evaluate their direct effect on the expression of inflammatory cytokines in the cornea.

Тесты проводили на иммортализованной линии клеток эпителия роговицы человека (I-HCEC) (Innoprot, Bizkaia, Испания, ссылочный номер P10871). Она происходит из первичных эпителиальных клеток роговицы человека (чистота >99%) и является пригодной для исследований роговицы человека в здоровом состоянии и при заболевании. Клетки культивировали в соответствии с протоколом и с использованием среды, предложенной Innoprot (IM-Corneal Epithelial Cell Medium, ссылочный номер P60131). Клеточную среду дополняли 5% эмбриональной телячьей сывороткой (FBS).Tests were performed on an immortalized human corneal epithelial cell line (I-HCEC) (Innoprot, Bizkaia, Spain, ref. P10871). It is derived from primary human corneal epithelial cells (>99% purity) and is suitable for examination of healthy and diseased human corneas. The cells were cultured according to the protocol and using the medium provided by Innoprot (IM-Corneal Epithelial Cell Medium, ref. P60131). The cell medium was supplemented with 5% fetal calf serum (FBS).

Клетки высевали в количестве 320000 клеток/лунка в 6-ячеечный планшет и 15000 клеток/лунка в 96-луночный планшет. Когда клетки достигали 80% смыкания монослоя, их обрабатывали соединениями SEQ ID N. 1 и SEQ ID N. 2 в соответствии с кривой дозы (0,01-500 мкМ) в течение 24 часов.Cells were seeded at 320,000 cells/well in a 6-well plate and 15,000 cells/well in a 96-well plate. When the cells reached 80% confluence, they were treated with SEQ ID N. 1 and SEQ ID N. 2 according to the dose curve (0.01-500 μM) for 24 hours.

Тотальную РНК выделяли из планшета с 6 ячейками с использованием набора Quick-Start RNeasy Mini Kit (Qiagen, каталожный номер N 74104) в соответствии с инструкциями изготовителя. Обратную транскрипцию проводили с использованием SuperScript Vilo (ссылочный номер 11755050, Life technologies) и ПЦР в реальном времени с использованием протокола TaqMan (ссылочный номер 4444557, Applied Biosystem), адаптированного для системы для исследования в реальном времени CFX96. Эксперименты проводили три раза, каждый раз в двух экземплярах. Использованные зонды от Thermo Fisher Scientific представляют собой: CXCL8 человека (Hs00174103_m1), IL6 человека (Hs00174131_m1), TNFα человека (Hs99999043_m1). В качестве гена домашнего хозяйства использовали GAPDH (зонд Hs02758991_g1).Total RNA was isolated from a 6-well plate using the Quick-Start RNeasy Mini Kit (Qiagen, cat. no. 74104) according to the manufacturer's instructions. Reverse transcription was performed using SuperScript Vilo (ref. 11755050, Life technologies) and real-time PCR using the TaqMan protocol (ref. 4444557, Applied Biosystem) adapted for the CFX96 real-time assay system. The experiments were carried out three times, each time in duplicate. The probes used from Thermo Fisher Scientific are: human CXCL8 (Hs00174103_m1), human IL6 (Hs00174131_m1), human TNFα (Hs99999043_m1). GAPDH (probe Hs02758991_g1) was used as the housekeeping gene.

Экспрессию IL-8, IL-6 и TNF-α в I-HCEC оценивали после обработки в течение 24 часов различными концентрациями пептида SEQ ID N. 1 или SEQ ID N. 2 (0,01, 0,1, 1, 10, 100, 500 мкМ). В качестве отрицательного контроля (носитель) использовали необработанные I-HCEC.The expression of IL-8, IL-6 and TNF-α in I-HCEC was assessed after treatment for 24 hours with different concentrations of the peptide of SEQ ID N. 1 or SEQ ID N. 2 (0.01, 0.1, 1, 10, 100, 500 μM). Untreated I-HCECs were used as a negative control (vehicle).

Результаты показывают, что соединение SEQ ID N. 2 не изменяет экспрессию никакого из измеренных воспалительных цитокинов (фиг.8A, 9A и 10A), в то время как обработка посредством 500 мкМ соединения SEQ ID N. 1 в значительной степени индуцирует экспрессию двух воспалительных цитокинов, IL-6 и TNFα (фиг.9B и 10B).The results show that compound SEQ ID N. 2 does not alter the expression of any of the measured inflammatory cytokines (FIGS. 8A, 9A and 10A), while treatment with 500 μM compound SEQ ID N. 1 significantly induces the expression of two inflammatory cytokines , IL-6 and TNFα (FIGS. 9B and 10B).

Полученные данные демонстрируют, что пептид SEQ ID N. 1 имеет прямую провоспалительную активность и индуцирует в значительной степени экспрессию воспалительных цитокинов IL-6 и TNF-α посредством HCEC с повышением в 10 и 8 раз, соответственно. Напротив, пептид SEQ ID N. 2 не демонстрирует никакого эффекта на экспрессию цитокинов.The data obtained demonstrate that the peptide of SEQ ID N. 1 has a direct pro-inflammatory activity and induces to a large extent the expression of the inflammatory cytokines IL-6 and TNF-α by HCEC with an increase of 10 and 8 times, respectively. In contrast, the peptide of SEQ ID N. 2 does not show any effect on cytokine expression.

Ввиду вышесказанного, можно сделать заключение, что пептид SEQ ID N. 2 неожиданно демонстрирует значительно лучшую переносимость и отсутствие токсичности по сравнению с пептидом HAP SEQ ID N. 1.In view of the foregoing, it can be concluded that the peptide of SEQ ID N. 2 unexpectedly shows significantly better tolerance and lack of toxicity compared to the HAP peptide of SEQ ID N. 1.

--->--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ:SEQUENCE LIST:

<110> DOMPE<110> DOMPE

<120> IL-17A-СВЯЗЫВАЮЩИЕ ПЕПТИДЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В МЕДИЦИНЕ<120> IL-17A BINDING PEPTIDES AND THEIR USE IN MEDICINE

<130> 19LG52E<130> 19LG52E

<140> PCT/EP2019/070265<140> PCT/EP2019/070265

<141> 2019-07-26<141> 2019-07-26

<150> EP18186029.7<150>EP18186029.7

<151> 2018-07-27<151> 2018-07-27

<160> 257<160> 257

<170> BiSSAP 1.3.6<170> BiSSAP 1.3.6

<210> 1<210> 1

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 1<400> 1

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 2<210> 2

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 2<400> 2

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 3<210> 3

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 3<400> 3

Ile Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 4<210> 4

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 4<400> 4

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 5<210> 5

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 5<400> 5

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Glu Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Glu Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 6<210> 6

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 6<400> 6

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 7<210> 7

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 7<400> 7

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 8<210> 8

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 8<400> 8

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Val Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Val Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 9<210> 9

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 9<400> 9

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 10<210> 10

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 10<400> 10

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Arg Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 11<210> 11

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 11<400> 11

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Glu Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Glu Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 12<210> 12

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 12<400> 12

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Glu Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 13<210> 13

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 13<400> 13

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 14<210> 14

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 14<400> 14

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Val Arg Arg Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 15<210> 15

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 15<400> 15

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Val Glu Glu Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Val Glu Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 16<210> 16

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 16<400> 16

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Asn Lys Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 17<210> 17

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 17<400> 17

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Arg Arg Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 18<210> 18

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 18<400> 18

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 19<210> 19

<211> 21<211> 21

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 19<400> 19

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Arg Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

20 20

<210> 20<210> 20

<211> 18<211> 18

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 20<400> 20

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Arg Arg Arg

<210> 21<210> 21

<211> 23<211> 23

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 21<400> 21

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Ala Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Lys Lys Ala Ala Lys Ala Arg Lys Lys Ala Ala Lys Ala

20 20

<210> 22<210> 22

<211> 25<211> 25

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 22<400> 22

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Gly

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Gly Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln

20 25 20 25

<210> 23<210> 23

<211> 22<211> 22

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 23<400> 23

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Thr Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Thr

1 5 10 15 1 5 10 15

Trp Trp Glu Thr Trp Trp Trp Trp Glu Thr Trp Trp

20 20

<210> 24<210> 24

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 24<400> 24

Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Val Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Val

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Gly Trp Gly Pro Gly Trp Gly

20 20

<210> 25<210> 25

<211> 25<211> 25

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 25<400> 25

1 5 10 15 1 5 10 15

Gly Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Gly Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp

20 25 20 25

<210> 26<210> 26

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 26<400> 26

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Gly Lys Gly Pro Gly Lys Gly

20 20

<210> 27<210> 27

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 27<400> 27

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly

20 20

<210> 28<210> 28

<211> 31<211> 31

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 28<400> 28

1 5 10 15 1 5 10 15

Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

20 25 30 20 25 30

<210> 29<210> 29

<211> 23<211> 23

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 29<400> 29

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

20 20

<210> 30<210> 30

<211> 23<211> 23

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 30<400> 30

1 5 10 15 1 5 10 15

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

20 20

<210> 31<210> 31

<211> 23<211> 23

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 31<400> 31

Ala Arg Lys Lys Ala Ala Lys Ala Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Ala Arg Lys Lys Ala Ala Lys Ala Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp

1 5 10 15 1 5 10 15

Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

20 20

<210> 32<210> 32

<211> 25<211> 25

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 32<400> 32

Gly Gly Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Val Met Val Thr Ile Pro Gly Gly Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Val Met Val Thr Ile Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

20 25 20 25

<210> 33<210> 33

<211> 25<211> 25

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 33<400> 33

Gly Gly Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Val Met Val Thr Ile Pro Gly Gly Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Val Met Val Thr Ile Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

20 25 20 25

<210> 34<210> 34

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 34<400> 34

Val Pro Gly Trp Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Val Pro Gly Trp Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Trp Ile Glu Glu Trp Ile Glu Glu

20 20

<210> 35<210> 35

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 35<400> 35

Val Pro Gly Ala Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Val Pro Gly Ala Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Trp Ile Glu Glu Trp Ile Glu Glu

20 20

<210> 36<210> 36

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 36<400> 36

Val Pro Gly Lys Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Val Pro Gly Lys Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Trp Ile Glu Glu Trp Ile Glu Glu

20 20

<210> 37<210> 37

<211> 25<211> 25

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 37<400> 37

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly

20 25 20 25

<210> 38<210> 38

<211> 25<211> 25

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 38<400> 38

Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Met Val Thr Ile Pro Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Val Met Val Thr Ile Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

20 25 20 25

<210> 39<210> 39

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 39<400> 39

Val Pro Gly Asp Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Val Pro Gly Asp Gly Val Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

Trp Ile Glu Glu Trp Ile Glu Glu

20 20

<210> 40<210> 40

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 40<400> 40

1 5 10 15 1 5 10 15

Pro Gly Asp Gly Pro Gly Asp Gly

20 20

<210> 41<210> 41

<211> 16<211> 16

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 41<400> 41

Asp Leu Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro Trp Asp Pro Glu Cys His Asp Leu Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro Trp Asp Pro Glu Cys His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 42<210> 42

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 42<400> 42

Ile Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Ile Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 43<210> 43

<211> 16<211> 16

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 43<400> 43

Ile Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Gln Ile Met Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Ile Glu Glu Gln

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 44<210> 44

<211> 8<211> 8

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 44<400> 44

Ala Arg Lys Lys Ala Ala Lys Ala Ala Arg Lys Lys Ala Ala Lys Ala

1 5 15

<210> 45<210> 45

<211> 8<211> 8

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 45<400> 45

Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln Thr Trp Trp Thr Glu Trp Ser Gln

1 5 15

<210> 46<210> 46

<211> 7<211> 7

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 46<400> 46

Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp Thr Trp Trp Glu Thr Trp Trp

1 5 15

<210> 47<210> 47

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 47<400> 47

Val Pro Gly Trp Gly Val Pro Gly Trp Gly

1 5 15

<210> 48<210> 48

<211> 8<211> 8

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 48<400> 48

Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp Lys Glu Thr Trp Trp Glu Thr Trp

1 5 15

<210> 49<210> 49

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 49<400> 49

Val Pro Gly Lys Gly Val Pro Gly Lys Gly

1 5 15

<210> 50<210> 50

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 50<400> 50

Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly

1 5 15

<210> 51<210> 51

<211> 16<211> 16

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 51<400> 51

Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 52<210> 52

<211> 8<211> 8

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 52<400> 52

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

1 5 15

<210> 53<210> 53

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 53<400> 53

Val Pro Gly Asp Gly Val Pro Gly Asp Gly

1 5 15

<210> 54<210> 54

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence

<220> <220>

<223> Синтетический полученный пептид<223> Synthetic derived peptide

<220> <220>

<221> ВАРИАНТ<221> OPTION

<222> 4<222> 4

<223> Xaa = Любая аминокислота<223> Xaa = Any amino acid

<400> 54<400> 54

Val Pro Gly Xaa Gly Val Pro Gly Xaa Gly

1 5 15

<210> 55<210> 55

<211> 4<211> 4

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 55<400> 55

Ile Pro Gly Gly Ile Pro Gly Gly

1 1

<210> 56<210> 56

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 56<400> 56

Ala Val Gly Val Pro Ala Val Gly Val Pro

1 5 15

<210> 57<210> 57

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<220> <220>

<223> Синтетически полученный пептид<223> Synthetically derived peptide

<220> <220>

<221> ВАРИАНТ<221> OPTION

<222> 4<222> 4

<223> Xaa = Любая аминокислота<223> Xaa = Any amino acid

<400> 57<400> 57

Ile Pro Gly Xaa Gly Ile Pro Gly Xaa Gly

1 5 15

<210> 58<210> 58

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 58<400> 58

Ile Pro Gly Val Gly Ile Pro Gly Val Gly

1 5 15

<210> 59<210> 59

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<220> <220>

<221> ВАРИАНТ<221> OPTION

<222> 4<222> 4

<223> Xaa = Любая аминокислота<223> Xaa = Any amino acid

<400> 59<400> 59

Leu Pro Gly Xaa Gly Leu Pro Gly Xaa Gly

1 5 15

<210> 60<210> 60

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 60<400> 60

Leu Pro Gly Val Gly Leu Pro Gly Val Gly

1 5 15

<210> 61<210> 61

<211> 6<211> 6

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 61<400> 61

Val Ala Pro Gly Val Gly Val Ala Pro Gly Val Gly

1 5 15

<210> 62<210> 62

<211> 5<211> 5

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<220> <220>

<221> ВАРИАНТ<221> OPTION

<222> 1<222> 1

<223> Xaa = Любая аминокислота<223> Xaa = Any amino acid

<400> 62<400> 62

Xaa Pro Gly Val Gly Xaa Pro Gly Val Gly

1 5 15

<210> 63<210> 63

<211> 8<211> 8

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 63<400> 63

Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly

1 5 15

<210> 64<210> 64

<211> 9<211> 9

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 64<400> 64

Val Pro Gly Phe Gly Val Gly Ala Gly Val Pro Gly Phe Gly Val Gly Ala Gly

1 5 15

<210> 65<210> 65

<211> 8<211> 8

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 65<400> 65

Val Pro Gly Gly Val Pro Gly Gly Val Pro Gly Gly Val Pro Gly Gly

1 5 15

<210> 66<210> 66

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 66<400> 66

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Lys Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Lys Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 67<210> 67

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 67<400> 67

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 68<210> 68

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 68<400> 68

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Lys Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 69<210> 69

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 69<400> 69

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Ala Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Ala Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 70<210> 70

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 70<400> 70

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ala Arg Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ala Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 71<210> 71

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 71<400> 71

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Ala Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Ala Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 72<210> 72

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 72<400> 72

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Ala Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Ala Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 73<210> 73

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 73<400> 73

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Ala Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Ala Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 74<210> 74

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 74<400> 74

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 75<210> 75

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 75<400> 75

Ile Val Val Thr Ala Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Ala Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 76<210> 76

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 76<400> 76

Ile Val Val Ala Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Ala Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 77<210> 77

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 77<400> 77

Ile Ala Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Ala Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 78<210> 78

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 78<400> 78

Ala Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ala Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 79<210> 79

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 79<400> 79

Ile His Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile His Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 80<210> 80

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 80<400> 80

Ile Gln Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Gln Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 81<210> 81

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 81<400> 81

Ile Arg Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Arg Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 82<210> 82

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 82<400> 82

Ile Thr Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Thr Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 83<210> 83

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 83<400> 83

Ile Trp Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Trp Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 84<210> 84

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 84<400> 84

Ile Tyr Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Tyr Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 85<210> 85

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 85<400> 85

Ile Val Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 86<210> 86

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 86<400> 86

Ile Val Val Thr Leu Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Leu Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 87<210> 87

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 87<400> 87

Ile Val Val Thr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala Ile Val Val Thr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Arg Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 88<210> 88

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 88<400> 88

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Met Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Met Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 89<210> 89

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 89<400> 89

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 90<210> 90

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 90<400> 90

Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Gln Ala Ile Val Val Thr Met Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Gln Ala

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 91<210> 91

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 91<400> 91

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 92<210> 92

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 92<400> 92

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 93<210> 93

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 93<400> 93

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 94<210> 94

<211> 14<211> 14

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 94<400> 94

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn

1 5 10 1 5 10

<210> 95<210> 95

<211> 13<211> 13

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 95<400> 95

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile

1 5 10 1 5 10

<210> 96<210> 96

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 96<400> 96

Asp Ser Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro His His Pro Leu Cys His Asp Ser Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro His His Pro Leu Cys His

1 5 10 15 1 5 10 15

Met Lys Ala Thr Met Lys Ala Thr

20 20

<210> 97<210> 97

<211> 16<211> 16

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 97<400> 97

Ala Asp Ala Asp Met Cys Trp Phe Phe Pro Thr Ser Pro Trp Cys His Ala Asp Ala Asp Met Cys Trp Phe Phe Pro Thr Ser Pro Trp Cys His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 98<210> 98

<211> 17<211> 17

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 98<400> 98

1 5 10 15 1 5 10 15

Met Met

<210> 99<210> 99

<211> 16<211> 16

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 99<400> 99

Asp Ser Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro Tyr Leu Pro Glu Cys His Asp Ser Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro Tyr Leu Pro Glu Cys His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 100<210> 100

<211> 16<211> 16

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 100<400> 100

Asp Ile Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro Phe Asp Pro Glu Cys His Asp Ile Ser Ala Val Cys Trp Ala Phe Pro Phe Asp Pro Glu Cys His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 101<210> 101

<211> 20<211> 20

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 101<400> 101

Ala Tyr Glu Cys Pro Arg Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Ala Tyr Glu Cys Pro Arg Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His

1 5 10 15 1 5 10 15

Cys Leu Pro Ser Cys Leu Pro Ser

20 20

<210> 102<210> 102

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 102<400> 102

Cys Pro Arg Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Cys Leu Cys Pro Arg Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Cys Leu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 103<210> 103

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 103<400> 103

Cys Leu Asp Leu Gln Tyr Asp Pro Trp Gly Ala Leu His Cys Ile Cys Leu Asp Leu Gln Tyr Asp Pro Trp Gly Ala Leu His Cys Ile

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 104<210> 104

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 104<400> 104

Cys Phe Asp Leu Gln Tyr Asp Pro Trp Gly Ala Leu His Cys Ile Cys Phe Asp Leu Gln Tyr Asp Pro Trp Gly Ala Leu His Cys Ile

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 105<210> 105

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 105<400> 105

Cys Leu Asp Leu Gln Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Cys Val Cys Leu Asp Leu Gln Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Cys Val

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 106<210> 106

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 106<400> 106

Cys Leu Asp Leu Val Tyr Asp Pro Trp Gly Ala Leu His Cys Ile Cys Leu Asp Leu Val Tyr Asp Pro Trp Gly Ala Leu His Cys Ile

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 107<210> 107

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 107<400> 107

Cys Trp Val Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Cys Arg Cys Trp Val Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Ala Leu His Cys Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 108<210> 108

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 108<400> 108

Cys Trp Ala Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Tyr Leu His Cys Arg Cys Trp Ala Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Tyr Leu His Cys Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 109<210> 109

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 109<400> 109

Cys Trp Val Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Phe Leu His Cys Arg Cys Trp Val Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Phe Leu His Cys Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 110<210> 110

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 110<400> 110

Cys Trp Val Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Tyr Leu His Cys Arg Cys Trp Val Leu Glu Tyr Asp Met Phe Gly Tyr Leu His Cys Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 111<210> 111

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 111<400> 111

Val His Val Thr Ile Pro Ala Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 112<210> 112

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 112<400> 112

Val His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 113<210> 113

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 113<400> 113

Val His Val Gln Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Gln Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 114<210> 114

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 114<400> 114

Val His Val Thr Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 115<210> 115

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 115<400> 115

Val His Val Thr Ile Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 116<210> 116

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 116<400> 116

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asn Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asn Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 117<210> 117

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 117<400> 117

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 118<210> 118

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 118<400> 118

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 119<210> 119

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 119<400> 119

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asn Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asn Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 120<210> 120

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 120<400> 120

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 121<210> 121

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 121<400> 121

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 122<210> 122

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 122<400> 122

Val His Val Tyr Ile Pro Ala Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Tyr Ile Pro Ala Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 123<210> 123

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 123<400> 123

Val His Val Thr Ile Pro Ala Glu Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Glu Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 124<210> 124

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 124<400> 124

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 125<210> 125

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 125<400> 125

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Phe Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Phe Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 126<210> 126

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 126<400> 126

Val His Phe Thr Ile Pro Gln Asp Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Ile Pro Gln Asp Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 127<210> 127

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 127<400> 127

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Asn Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Asn Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 128<210> 128

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 128<400> 128

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 129<210> 129

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 129<400> 129

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 130<210> 130

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 130<400> 130

Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 131<210> 131

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 131<400> 131

Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 132<210> 132

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 132<400> 132

Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 133<210> 133

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 133<400> 133

Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Asn Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Asn Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 134<210> 134

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 134<400> 134

Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 135<210> 135

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 135<400> 135

Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 136<210> 136

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 136<400> 136

Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 137<210> 137

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 137<400> 137

Val His Phe Gln Ile Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Ile Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 138<210> 138

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 138<400> 138

Val His Phe Gln Ile Phe Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Ile Phe Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 139<210> 139

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 139<400> 139

Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Trp Trp Asn Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Trp Trp Asn Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 140<210> 140

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 140<400> 140

Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Phe Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 141<210> 141

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 141<400> 141

Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 142<210> 142

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 142<400> 142

Val His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 143<210> 143

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 143<400> 143

Val His Val Gln Ile Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Val Gln Ile Pro Ala Asp Phe Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 144<210> 144

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 144<400> 144

Val His Val Thr Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Val Thr Phe Pro Ala Asp Leu Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 145<210> 145

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 145<400> 145

Val His Val Thr Ile Pro Gln Asp Phe Trp Glu Trp Phe Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Gln Asp Phe Trp Glu Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 146<210> 146

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 146<400> 146

Val His Phe Thr Ile Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Ile Pro Gln Asp Trp Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 147<210> 147

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 147<400> 147

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 148<210> 148

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 148<400> 148

Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Phe Val Arg Arg Val His Phe Thr Phe Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Phe Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 149<210> 149

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 149<400> 149

Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Asn Phe Phe Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Asn Phe Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 150<210> 150

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 150<400> 150

Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Gln Asp Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 151<210> 151

<211> 14<211> 14

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 151<400> 151

Val His Phe Thr Ile Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Trp Arg Arg Val His Phe Thr Ile Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Trp Arg Arg

1 5 10 1 5 10

<210> 152<210> 152

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 152<400> 152

Val His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Asn Phe Val Arg Arg Val His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Leu Tyr Asn Phe Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 153<210> 153

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 153<400> 153

Val His Phe Gln Ile Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Phe Phe Arg Arg Val His Phe Gln Ile Pro Gln Asp Leu Tyr Asn Phe Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 154<210> 154

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 154<400> 154

Val His Phe Gln Phe Pro Gln Glu Trp Tyr Asn Trp Phe Arg Arg Val His Phe Gln Phe Pro Gln Glu Trp Tyr Asn Trp Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 155<210> 155

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 155<400> 155

Val Arg Phe Gln Phe Gly Gln Glu Trp Tyr Asn Phe Phe Arg Arg Val Arg Phe Gln Phe Gly Gln Glu Trp Tyr Asn Phe Phe Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 156<210> 156

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 156<400> 156

Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile His Val Thr Ile Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile His Val Thr Ile

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 157<210> 157

<211> 17<211> 17

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 157<400> 157

Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile His Val Thr Ile Pro Val Pro Gly Ala Gly Val Pro Gly Ala Gly Ile His Val Thr Ile Pro

1 5 10 15 1 5 10 15

Ala Ala

<210> 158<210> 158

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 158<400> 158

Ala His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ala His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 159<210> 159

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 159<400> 159

Gly His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Gly His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 160<210> 160

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 160<400> 160

Leu His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Leu His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 161<210> 161

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 161<400> 161

Pro His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Pro His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 162<210> 162

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 162<400> 162

Ile Arg Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile Arg Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 163<210> 163

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 163<400> 163

Ile Lys Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile Lys Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 164<210> 164

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 164<400> 164

Ile Glu Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile Glu Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 165<210> 165

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 165<400> 165

Ile Gln Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile Gln Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 166<210> 166

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 166<400> 166

Ile Tyr Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile Tyr Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 167<210> 167

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 167<400> 167

Ile His Ala Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Ala Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 168<210> 168

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 168<400> 168

Ile His Gly Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Gly Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 169<210> 169

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 169<400> 169

Ile His Leu Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Leu Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 170<210> 170

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 170<400> 170

Ile His Pro Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Pro Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 171<210> 171

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 171<400> 171

Ile His Ile Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Ile Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 172<210> 172

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 172<400> 172

Ile His Tyr Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Tyr Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 173<210> 173

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 173<400> 173

Ile His Trp Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Trp Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 174<210> 174

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 174<400> 174

Ile His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Phe Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 175<210> 175

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 175<400> 175

Ile His Val Ser Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Ser Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 176<210> 176

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 176<400> 176

Ile His Val Tyr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Tyr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 177<210> 177

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 177<400> 177

Ile His Val Asn Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Asn Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 178<210> 178

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 178<400> 178

Ile His Val Gln Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Gln Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 179<210> 179

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 179<400> 179

Ile His Val Thr Ala Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ala Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 180<210> 180

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 180<400> 180

Ile His Val Thr Gly Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Gly Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 181<210> 181

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 181<400> 181

Ile His Val Thr Leu Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Leu Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 182<210> 182

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 182<400> 182

Ile His Val Thr Pro Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Pro Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 183<210> 183

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 183<400> 183

Ile His Val Thr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 184<210> 184

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 184<400> 184

Ile His Val Thr Phe Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Phe Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 185<210> 185

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 185<400> 185

Ile His Val Thr Tyr Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Tyr Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 186<210> 186

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 186<400> 186

Ile His Val Thr Ile Ala Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Ala Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 187<210> 187

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 187<400> 187

Ile His Val Thr Ile Gly Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Gly Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 188<210> 188

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 188<400> 188

Ile His Val Thr Ile Leu Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Leu Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 189<210> 189

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 189<400> 189

Ile His Val Thr Ile Val Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Val Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 190<210> 190

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 190<400> 190

Ile His Val Thr Ile Ile Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Ile Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 191<210> 191

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 191<400> 191

Ile His Val Thr Ile Asn Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Asn Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 192<210> 192

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 192<400> 192

Ile His Val Thr Ile Pro Gly Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Gly Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 193<210> 193

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 193<400> 193

Ile His Val Thr Ile Pro Leu Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Leu Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 194<210> 194

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 194<400> 194

Ile His Val Thr Ile Pro Pro Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Pro Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 195<210> 195

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 195<400> 195

Ile His Val Thr Ile Pro Val Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Val Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 196<210> 196

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 196<400> 196

Ile His Val Thr Ile Pro Ile Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ile Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 197<210> 197

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 197<400> 197

Ile His Val Thr Ile Pro Asn Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Asn Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 198<210> 198

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 198<400> 198

Ile His Val Thr Ile Pro Gln Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Gln Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 199<210> 199

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 199<400> 199

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Gln Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Gln Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 200<210> 200

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 200<400> 200

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Tyr Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Tyr Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 201<210> 201

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 201<400> 201

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Ala Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Ala Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 202<210> 202

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 202<400> 202

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Gly Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Gly Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 203<210> 203

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 203<400> 203

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Pro Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Pro Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 204<210> 204

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 204<400> 204

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Val Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Val Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 205<210> 205

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 205<400> 205

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Ile Trp Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Ile Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 206<210> 206

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 206<400> 206

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu His Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu His Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 207<210> 207

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 207<400> 207

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Phe Asp Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Phe Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 208<210> 208

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 208<400> 208

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asn Trp Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asn Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 209<210> 209

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 209<400> 209

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp His Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp His Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 210<210> 210

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 210<400> 210

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Phe Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Phe Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 211<210> 211

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 211<400> 211

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Tyr Ile Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Tyr Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 212<210> 212

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 212<400> 212

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Glu Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Glu Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 213<210> 213

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 213<400> 213

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Lys Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Lys Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 214<210> 214

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 214<400> 214

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ala Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ala Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 215<210> 215

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 215<400> 215

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Gly Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Gly Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 216<210> 216

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 216<400> 216

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Leu Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Leu Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 217<210> 217

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 217<400> 217

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Pro Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Pro Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 218<210> 218

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 218<400> 218

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Phe Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Phe Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 219<210> 219

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 219<400> 219

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Tyr Asn Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Tyr Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 220<210> 220

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 220<400> 220

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Gln Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Gln Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 221<210> 221

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 221<400> 221

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asp Lys Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asp Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 222<210> 222

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 222<400> 222

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn His Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 223<210> 223

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 223<400> 223

Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Asp Ile His Val Thr Ile Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Asp

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 224<210> 224

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 224<400> 224

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 225<210> 225

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 225<400> 225

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Phe Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Phe Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 226<210> 226

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 226<400> 226

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 227<210> 227

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 227<400> 227

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Glu Glu Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Glu Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 228<210> 228

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 228<400> 228

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Phe Glu Trp Val Glu Glu Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Phe Glu Trp Val Glu Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 229<210> 229

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 229<400> 229

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Glu Glu Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Glu Glu

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 230<210> 230

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 230<400> 230

Val His Val Ser Ile Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Ser Ile Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 231<210> 231

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 231<400> 231

Val His Val Ser Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Ser Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 232<210> 232

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 232<400> 232

Val His Val Ser Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Ser Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 233<210> 233

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 233<400> 233

Val Arg Val Thr Ile Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val Arg Val Thr Ile Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 234<210> 234

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 234<400> 234

Val Arg Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val Arg Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 235<210> 235

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 235<400> 235

Val Arg Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg Val Arg Val Thr Val Pro Gln Glu Leu Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 236<210> 236

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 236<400> 236

Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Ile Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Val Pro Gln Glu Ile Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 237<210> 237

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 237<400> 237

Val His Val Thr Ile Pro Gln Glu Ile Trp Glu Trp Val Arg Arg Val His Val Thr Ile Pro Gln Glu Ile Trp Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 238<210> 238

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 238<400> 238

Val His Phe Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val His Phe Thr Val Pro Gln Glu Leu Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 239<210> 239

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 239<400> 239

Val Lys Ile Ser Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val Lys Ile Ser Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 240<210> 240

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 240<400> 240

Leu Arg Ile Ser Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Leu Arg Ile Ser Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 241<210> 241

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 241<400> 241

Leu Arg Ile Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Leu Arg Ile Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 242<210> 242

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 242<400> 242

Val Arg Gly Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val Arg Gly Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 243<210> 243

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 243<400> 243

Val Arg Ala Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val Arg Ala Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 244<210> 244

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 244<400> 244

Val Arg Leu Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val Arg Leu Tyr Val Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 245<210> 245

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 245<400> 245

Val Arg Ile Tyr Leu Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys Val Arg Ile Tyr Leu Pro Ala Asp Leu Trp Asp Trp Ile Asn Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 246<210> 246

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 246<400> 246

Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 247<210> 247

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 247<400> 247

Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Ala Gln His Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Ala Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 248<210> 248

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 248<400> 248

Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln Arg Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 249<210> 249

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 249<400> 249

Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Val Phe Glu Trp Leu Gln His Ile His Val Thr Ile Pro Leu Glu Val Phe Glu Trp Leu Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 250<210> 250

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 250<400> 250

Ile His Val Thr Ile Pro Gly Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His Ile His Val Thr Ile Pro Gly Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 251<210> 251

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 251<400> 251

Val Arg Phe Ser Val Pro Gln Glu Ile Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val Arg Phe Ser Val Pro Gln Glu Ile Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 252<210> 252

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 252<400> 252

Leu Arg Ile Ser Val Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His Leu Arg Ile Ser Val Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 253<210> 253

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 253<400> 253

Leu Arg Gly Ser Val Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His Leu Arg Gly Ser Val Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 254<210> 254

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 254<400> 254

Val Lys Ile Ser Val Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His Val Lys Ile Ser Val Pro Leu Glu Ile Phe Glu Trp Leu Gln His

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 255<210> 255

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 255<400> 255

Val Glu Phe Asn Phe Pro Gln Gln Val Tyr Glu Trp Phe Asp Asp Val Glu Phe Asn Phe Pro Gln Gln Val Tyr Glu Trp Phe Asp Asp

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 256<210> 256

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 256<400> 256

Val Glu Phe Asn Phe Pro Gln Gln Val Tyr Glu Trp Val Arg Arg Val Glu Phe Asn Phe Pro Gln Gln Val Tyr Glu Trp Val Arg Arg

1 5 10 15 1 5 10 15

<210> 257<210> 257

<211> 15<211> 15

<212> БЕЛОК<212> PROTEIN

<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens

<400> 257<400> 257

Thr Trp Tyr Val Phe Asn Glu Gln His Gln Glu Tyr Val Arg Lys Thr Trp Tyr Val Phe Asn Glu Gln His Gln Glu Tyr Val Arg Lys

1 5 10 15 1 5 10 15

<---<---

Claims

1. Пептид, способный ингибировать связывание IL-17A с ILRA, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из:1. A peptide capable of inhibiting the binding of IL-17A to ILRA, having an amino acid sequence selected from:

SEQ ID N. 2, SEQ ID N. 3, SEQ ID N. 4, SEQ ID N. 5, SEQ ID N. 6, SEQ ID N. 7, SEQ ID N. 8, SEQ ID N. 9, SEQ ID N. 10, SEQ ID N. 11, SEQ ID N. 12, SEQ ID N. 13, SEQ ID N. 14, SEQ ID N. 15, SEQ ID N. 16, SEQ ID N. 17, SEQ ID N. 18, SEQ ID N. 42, SEQ ID N. 111, SEQ ID N. 112, SEQ ID N. 113, SEQ ID N. 114, SEQ ID N. 115, SEQ ID N. 116, SEQ ID N. 117, SEQ ID N. 118, SEQ ID N. 119, SEQ ID N. 120, SEQ ID N. 121, SEQ ID N. 122, SEQ ID N. 123, SEQ ID N. 124, SEQ ID N. 125, SEQ ID N. 126, SEQ ID N. 127, SEQ ID N. 128, SEQ ID N. 129, SEQ ID N. 130, SEQ ID N. 131, SEQ ID N. 132, SEQ ID N. 133, SEQ ID N. 134, SEQ ID N. 135, SEQ ID N. 136, SEQ ID N. 137, SEQ ID N. 138, SEQ ID N. 139, SEQ ID N. 140, SEQ ID N. 141, SEQ ID N. 142, SEQ ID N. 143, SEQ ID N. 144, SEQ ID N. 145, SEQ ID N. 146, SEQ ID N. 147, SEQ ID N. 148, SEQ ID N. 149, SEQ ID N. 150, SEQ ID N. 151, SEQ ID N. 152, SEQ ID N. 153, SEQ ID N. 154, SEQ ID N. 155, SEQ ID N. 158, SEQ ID N. 159, SEQ ID N. 160, SEQ ID N. 161, SEQ ID N. 162, SEQ ID N. 163, SEQ ID N. 164, SEQ ID N. 165, SEQ ID N. 166, SEQ ID N. 167, SEQ ID N. 168, SEQ ID N. 169, SEQ ID N. 170, SEQ ID N. 171, SEQ ID N. 172, SEQ ID N. 173, SEQ ID N. 174, SEQ ID N. 175, SEQ ID N. 176, SEQ ID N. 177, SEQ ID N. 178, SEQ ID N. 179, SEQ ID N. 180, SEQ ID N. 181, SEQ ID N. 182, SEQ ID N. 183, SEQ ID N. 184, SEQ ID N. 185, SEQ ID N. 186, SEQ ID N. 187, SEQ ID N. 188, SEQ ID N. 189, SEQ ID N. 190, SEQ ID N. 191, SEQ ID N. 192, SEQ ID N. 193, SEQ ID N. 194, SEQ ID N. 195, SEQ ID N. 196, SEQ ID N. 197, SEQ ID N. 198, SEQ ID N. 200, SEQ ID N. 201, SEQ ID N. 202, SEQ ID N. 203, SEQ ID N. 204, SEQ ID N. 205, SEQ ID N. 206, SEQ ID N. 207, SEQ ID N. 208, SEQ ID N. 209, SEQ ID N. 210, SEQ ID N. 211, SEQ ID N. 212, SEQ ID N. 213, SEQ ID N. 214, SEQ ID N. 215, SEQ ID N. 216, SEQ ID N. 217, SEQ ID N. 218, SEQ ID N. 219, SEQ ID N. 220, SEQ ID N. 221, SEQ ID N. 222, SEQ ID N. 223, SEQ ID N. 224, SEQ ID N. 225, SEQ ID N. 226, SEQ ID N. 227, SEQ ID N. 228, SEQ ID N. 229, SEQ ID N. 230, SEQ ID N. 231, SEQ ID N. 232, SEQ ID N. 233, SEQ ID N. 234, SEQ ID N. 235, SEQ ID N. 236, SEQ ID N. 237, SEQ ID N. 238, SEQ ID N. 239, SEQ ID N. 240, SEQ ID N. 241, SEQ ID N. 242, SEQ ID N. 243, SEQ ID N. 244, SEQ ID N. 245, SEQ ID N. 246, SEQ ID N. 247, SEQ ID N. 248, SEQ ID N. 249, SEQ ID N. 250, SEQ ID N. 251, SEQ ID N. 252, SEQ ID N. 253, SEQ ID N. 254, SEQ ID N. 255, SEQ ID N. 256, or SEQ ID N. 257;SEQ ID N. 2, SEQ ID N. 3, SEQ ID N. 4, SEQ ID N. 5, SEQ ID N. 6, SEQ ID N. 7, SEQ ID N. 8, SEQ ID N. 9, SEQ ID N. 10, SEQ ID N. 11, SEQ ID N. 12, SEQ ID N. 13, SEQ ID N. 14, SEQ ID N. 15, SEQ ID N. 16, SEQ ID N. 17, SEQ ID N. 18, SEQ ID N. 42, SEQ ID N. 111, SEQ ID N. 112, SEQ ID N. 113, SEQ ID N. 114, SEQ ID N. 115, SEQ ID N. 116, SEQ ID N. 117, SEQ ID N. 118, SEQ ID N. 119, SEQ ID N. 120, SEQ ID N. 121, SEQ ID N. 122, SEQ ID N. 123, SEQ ID N. 124, SEQ ID N. 125, SEQ ID N. 126, SEQ ID N. 127, SEQ ID N. 128, SEQ ID N. 129, SEQ ID N. 130, SEQ ID N. 131, SEQ ID N. 132, SEQ ID N. 133, SEQ ID N. 134, SEQ ID N. 135, SEQ ID N. 136, SEQ ID N. 137, SEQ ID N. 138, SEQ ID N. 139, SEQ ID N. 140, SEQ ID N. 141, SEQ ID N. 142, SEQ ID N. 143, SEQ ID N. 144, SEQ ID N. 145, SEQ ID N. 146, SEQ ID N. 147, SEQ ID N. 148, SEQ ID N. 149, SEQ ID N. 150, SEQ ID N. 151, SEQ ID N. 152, SEQ ID N. 153, SEQ ID N. 154, SEQ ID N. 155, SEQ ID N. 158, SEQ ID N. 159, SEQ ID N. 160, SEQ ID N. 161, SEQ ID N. 162, SEQ ID N. 163, SEQ ID N. 164, SEQ ID N. 165, SEQ ID N. 166, SEQ ID N. 167, SEQ ID N. 168, SEQ ID N. 169, SEQ ID N. 170, SEQ ID N. 171, SEQ ID N. 172, SEQ ID N. 173, SEQ ID N. 174, SEQ ID N. 175, SEQ ID N. 176, SEQ ID N. 177, SEQ ID N. 178, SEQ ID N. 179, SEQ ID N. 180, SEQ ID N. 181, SEQ ID N. 182, SEQ ID N. 183, SEQ ID N. 184, SEQ ID N. 185, SEQ ID N. 186, SEQ ID N. 187, SEQ ID N. 188, SEQ ID N. 189, SEQ ID N. 190, SEQ ID N. 191, SEQ ID N. 192, SEQ ID N. 193, SEQ ID N. 194, SEQ ID N. 195, SEQ ID N. 196, SEQ ID N. 197, SEQ ID N. 198, SEQ ID N. 200, SEQ ID N. 201, SEQ ID N. 202, SEQ ID N. 203, SEQ ID N. 204, SEQ ID N. 205, SEQ ID N. 206, SEQ ID N. 207, SEQ ID N. 208, SEQ ID N. 209, SEQ ID N. 210, SEQ ID N. 211, SEQ ID N. 212, SEQ ID N. 213, SEQ ID N. 214, SEQ ID N. 215, SEQ ID N. 216, SEQ ID N. 217, SEQ ID N. 218, SEQ ID N. 219, SEQ ID N. 220, SEQ ID N. 221, SEQ ID N. 222, SEQ ID N. 223, SEQ ID N. 224, SEQ ID N. 225, SEQ ID N. 226, SEQ ID N. 227, SEQ ID N. 228, SEQ ID N. 229, SEQ ID N. 230, SEQ ID N. 231, SEQ ID N. 232, SEQ ID N. 233, SEQ ID N. 234, SEQ ID N. 235, SEQ ID N. 236, SEQ ID N. 237, SEQ ID N. 238, SEQ ID N. 239, SEQ ID N. 240, SEQ ID N. 241, SEQ ID N. 242, SEQ ID N. 243, SEQ ID N. 244, SEQ ID N. 245, SEQ ID N. 246, SEQ ID N. 247, SEQ ID N. 248, SEQ ID N. 249, SEQ ID N. 250, SEQ ID N. 251, SEQ ID N. 252, SEQ ID N. 253, SEQ ID N. 254, SEQ ID N. 255, SEQ ID N. 256, or SEQ ID N. 257;

где пептид может быть связанным на C- и/или N-конце с защитной кэп-группой, причем предпочтительно защитная кэп-группа, связанная с C-концом, выбрана из амидов, альдегидов, сложных эфиров, п-нитроанилида, 7-амино-4-метилкумарина, и защитная кэп-группа, связанная с N-концом, выбрана из ацетила, формила, пироглутамила, жирных кислот, мочевины, карбамата, сульфонамида, алкиламина.where the peptide may be connected at the C- and/or N-terminus with a protective cap group, and preferably the protective cap group associated with the C-terminus is selected from amides, aldehydes, esters, p-nitroanilide, 7-amino- 4-methylcoumarin, and the N-terminal protecting cap group is selected from acetyl, formyl, pyroglutamyl, fatty acids, urea, carbamate, sulfonamide, alkylamine.

2. Пептид по п.1, имеющий последовательность из 15 аминокислот. 2. A peptide according to claim 1 having a sequence of 15 amino acids.

3. Пептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID N. 21, SEQ ID N. 22, SEQ ID N. 23, SEQ ID N. 24, SEQ ID N. 25, SEQ ID N. 26, SEQ ID N. 27, SEQ ID N. 28, SEQ ID N. 31, SEQ ID N. 32, SEQ ID N. 33 SEQ ID N. 34, SEQ ID N. 35, SEQ ID N. 36, SEQ ID N. 37, SEQ ID N. 38, SEQ ID N. 39 или SEQ ID N. 40;3. A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID N. 21, SEQ ID N. 22, SEQ ID N. 23, SEQ ID N. 24, SEQ ID N. 25, SEQ ID N. 26, SEQ ID N. 27, SEQ ID N. 28, SEQ ID N. 31, SEQ ID N. 32, SEQ ID N. 33 SEQ ID N. 34, SEQ ID N. 35, SEQ ID N. 36, SEQ ID N. 37, SEQ ID N No. 38, SEQ ID N. 39 or SEQ ID N. 40;

4. Пептид, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID N. 19, SEQ ID N. 20, SEQ ID N. 29, SEQ ID N. 30 или SEQ ID N. 43;4. A peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID N. 19, SEQ ID N. 20, SEQ ID N. 29, SEQ ID N. 30 or SEQ ID N. 43;

где пептид может быть связанным на C- и/или N-конце с защитной кэп-группой, причем предпочтительно защитная кэп-группа, связанная с C-концом, выбрана из амидов, альдегидов, сложных эфиров, п-нитроанилида, 7-амино-4-метилкумарина, и защитная кэп-группа, связанная с N-концом, выбрана из ацетила, формила, пироглутамила, жирных кислот, мочевины, карбамата, сульфонамида, алкиламина. where the peptide may be connected at the C- and/or N-terminus with a protective cap group, and preferably the protective cap group associated with the C-terminus is selected from amides, aldehydes, esters, p-nitroanilide, 7-amino- 4-methylcoumarin, and the N-terminal protecting cap group is selected from acetyl, formyl, pyroglutamyl, fatty acids, urea, carbamate, sulfonamide, alkylamine.

5. Пептид по любому из пп.1, 3 или 4, связанный на C- и/или N-конце с защитной кэп-группой, причем предпочтительно защитная кэп-группа, связанная с C-концом, выбрана из амидов, альдегидов, сложных эфиров, п-нитроанилида, 7-амино-4-метилкумарина, и защитная кэп-группа, связанная с N-концом, выбрана из ацетила, формила, пироглутамила, жирных кислот, мочевины, карбамата, сульфонамида, алкиламина. 5. The peptide according to any one of claims 1, 3 or 4, connected at the C- and / or N-terminus with a protective cap group, and preferably the protective cap group associated with the C-terminus is selected from amides, aldehydes, complex esters, p-nitroanilide, 7-amino-4-methylcoumarin, and an N-terminal protecting cap group selected from acetyl, formyl, pyroglutamyl, fatty acids, urea, carbamate, sulfonamide, alkylamine.

6. Биоконъюгат, содержащий пептид по любому из пп.1-5 и биомолекулу, причем предпочтительно указанная молекула связана с N- и/или C-концом указанного пептида, где, если указанная молекула находится на N-конце, она представляет собой одну из ацетила, формила, жирных кислот, мочевины, карбамата, сульфонамида или алкиламина; и где, если указанная молекула находится на С-конце, она представляет собой один из амидов, альдегидов, сложных эфиров, п-нитроанилида или 7-амино-4-метилкумарина.6. A bioconjugate containing a peptide according to any one of claims 1 to 5 and a biomolecule, wherein said molecule is preferably linked to the N- and/or C-terminus of said peptide, where, if said molecule is at the N-terminus, it is one of acetyl, formyl, fatty acids, urea, carbamate, sulfonamide or alkylamine; and where, if said molecule is at the C-terminus, it is one of amides, aldehydes, esters, p-nitroanilide, or 7-amino-4-methylcoumarin.

7. Фармацевтическая композиция для лечения и/или предупреждения заболевания, выбранного из ревматоидного артрита, рассеянного склероза, болезни Крона, системной красной волчанки, астмы, болезни Бехчета, гипер-IgE-синдрома, анкилозирующего спондилита, псориаза, псориатического артрита, ревматоидного артрита, сухого кератоконъюнктивита, весеннего кератоконъюнктивита, стромального герпетического кератита, отторжения аллотрансплантата роговицы, инфекций роговицы, обусловленного вирусом герпеса или Pseudomonas aeruginosa кератита и болезни сухого глаза, предпочтительно псориаза или болезни сухого глаза, содержащая в эффективном количестве пептид по любому из пп.1-5 или биоконъюгат по п.6 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.7. Pharmaceutical composition for the treatment and/or prevention of a disease selected from rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, Crohn's disease, systemic lupus erythematosus, asthma, Behçet's disease, hyper-IgE syndrome, ankylosing spondylitis, psoriasis, psoriatic arthritis, rheumatoid arthritis, dry keratoconjunctivitis, vernal keratoconjunctivitis, stromal herpetic keratitis, corneal allograft rejection, corneal infections caused by herpes virus or Pseudomonas aeruginosa keratitis and dry eye disease, preferably psoriasis or dry eye disease, containing an effective amount of a peptide according to any one of claims 1 to 5 or bioconj yugat 6 and at least one pharmaceutically acceptable excipient.