RU2797343C2 - Pair-borphenylalanine derivative and a composition containing these, and a kit for obtaining the mentioned derivative and composition - Google Patents

Abstract

FIELD: pharmaceuticals.

SUBSTANCE: invention relates to a para-borophenylalanine derivative comprising a polymer linked, either directly or via a linker, to a group represented by formula (I). In formula (I): the arrows indicate the bond to the adjacent atom, X¹-X⁴ are each independently H, ¹⁸F or ¹⁹F. The polymer is selected from the group consisting of polyvinyl alcohol, polyether and polypeptide, and the number average molecular weight of the para-borophenylalanine derivative is 1,000 Da or more. Also pharmaceutical compositions containing a para-borophenylalanine derivative and a kit for preparing pharmaceutical compositions are proposed.

EFFECT: invention makes it possible to implement selective accumulation and long-term retention of boron in tumors, while achieving an excellent ratio of boron concentrations in tumor/normal tissues and a ratio of boron concentrations in tumor/blood.

12 cl, 34 dwg, 1 tbl, 24 ex

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕFIELD OF TECHNOLOGY TO WHICH THE INVENTION RELATES

[0001] [0001]

Настоящее изобретение относится к производному пара-борфенилаланина (в дальнейшем в данном документе также называемому «производным BPA»), композиции, содержащей таковое, и набору для получения таковых. The present invention relates to a para-borophenylalanine derivative (hereinafter also referred to as "BPA derivative"), a composition containing the same, and a kit for producing the same.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION

[0002] [0002]

Бор-нейтронозахватная терапия (BNCT) представляет собой способ, который включает в себя накопление бора (¹⁰В) в пораженной части и проведение облучения ее нейтронами с обеспечением ядерной реакции, которая позволяет локально вырабатывать α-лучи, которые уничтожают клетки-мишени. Накопление бора в пораженной части осуществляют введением борсодержащего лекарственного средства. Лекарственные средства, которые применяются на людях по состоянию на текущий момент, включают кластер бора меркаптоундекагидрододекаборат (BSH), который является борсодержащим лекарственным средством первого поколения, и пара-борфенилаланин (BPA), который является борсодержащим лекарственным средством второго поколения. Кроме того, появились сообщения о борсодержащих лекарственных средствах третьего поколения, где кластер бора является нанесенным на носитель, такой как липосома, полимер, полимерная мицелла, и т.д. (NPL1). Boron Neutron Capture Therapy (BNCT) is a method that involves accumulating boron ( ¹⁰ V) in the affected part and irradiating it with neutrons to provide a nuclear reaction that allows local production of α-rays that destroy target cells. The accumulation of boron in the affected part is carried out by the introduction of a boron-containing drug. Drugs currently used in humans include the boron cluster mercaptoundecahydrododecaborate (BSH), which is a first-generation boron drug, and para-borophenylalanine (BPA), which is a second-generation boron drug. In addition, third generation boron-containing drugs have been reported where the boron cluster is supported on a carrier such as a liposome, a polymer, a polymeric micelle, etc. (NPL1).

[0003] [0003]

BSH имеет превосходную растворимость в воде, но имеет плохую селективность в отношении опухолей. Борсодержащие лекарственные средства третьего поколения, содержащие BSH, могут селективно доставлять бор к опухолям благодаря эффекту улучшенной проницаемости и удерживания (эффекту EPR) в результате использования носителей, таких как липосомы, полимеры и полимерные мицеллы. Однако, поскольку эффект EPR, как правило, реализуется носителем, проявляющим длительное удерживание в крови, трудно повысить соотношение концентраций бора в опухоли/крови при использовании борсодержащих лекарственных средств третьего поколения. BSH has excellent water solubility but poor tumor selectivity. Third generation boron drugs containing BSH can selectively deliver boron to tumors due to the enhanced permeability and retention effect (EPR effect) resulting from the use of carriers such as liposomes, polymers and polymeric micelles. However, since the effect of EPR is generally realized by a carrier exhibiting long-term blood retention, it is difficult to increase the tumor/blood boron concentration ratio when using third-generation boron-containing drugs.

[0004] [0004]

Известно, что фенилаланиновая структура в BPA распознается, например, аминокислотным транспортером (LAT1), который сверхэкспрессируется в опухолевых клетках, и BPA селективно захватывается опухолевыми клетками (NPL2). Однако, BPA имеет плохую растворимость в воде. It is known that the phenylalanine structure in BPA is recognized by, for example, an amino acid transporter (LAT1), which is overexpressed in tumor cells, and BPA is selectively taken up by tumor cells (NPL2). However, BPA has poor water solubility.

[0005] [0005]

Сделано сообщение, что проблемный аспект, связанный с плохой растворимостью BPA, может быть улучшен в результате получения комплексов с сахарами, такими как фруктоза или сорбит, взятыми в качестве солюбилизаторов (PTL1). It has been reported that the problematic aspect of the poor solubility of BPA can be improved by complexing with sugars such as fructose or sorbitol taken as solubilizers (PTL1).

[СПИСОК ПРОТИВОПОСТАВЛЕННЫХ МАТЕРИАЛОВ] [LIST OF CONTRADING MATERIALS]

[ПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА] [PATENT LITERATURE]

[0006] [0006]

[PTL 1] Публикация Японского нерассмотренного патента (Kokai) № 2009-51766 [PTL 1] Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 2009-51766

[НЕПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА] [NON-PATENT LITERATURE]

[0007] [0007]

[NPL1] Luderer M.J. et al., Phar. Res., 32, 2824-2836 (2015) [NPL1] Luderer M.J. et al., Phar. Res., 32, 2824-2836 (2015)

[NPL2] Wongthai P. et al., Cancer Sci. 106, 279-286 (2015) [NPL2] Wongthai P. et al., Cancer Sci. 106, 279-286 (2015)

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

[ТЕХНИЧЕСКАЯ ЗАДАЧА] [TECHNICAL CHALLENGE]

[0008] [0008]

В случае борсодержащих лекарственных средств первого поколения и третьего поколения, трудно повысить их способность накапливаться в опухолях при поддерживании соотношения концентраций бора в опухолевой/нормальной ткани и соотношения концентраций бора в опухоли/крови на высоком уровне. С другой стороны, это может быть достигнуто в некоторый момент времени с помощью BPA второго поколения. In the case of first-generation and third-generation boron-containing drugs, it is difficult to increase their ability to accumulate in tumors while maintaining the tumor/normal tissue boron concentration ratio and the tumor/blood boron concentration ratio at a high level. On the other hand, this can be achieved at some point in time with second generation BPA.

[0009] [0009]

Однако, поскольку BPA захватывается раковыми клетками в основном посредством аминокислотного транспортера LAT1, который является обменным транспортером, по мере снижения концентрации внеклеточного BPA, внутриклеточный BPA вытекает из клетки. Таким образом, существует проблема, состоящая в том, что после накопления бора в опухолевой ткани, концентрация бора в опухоли будет снижаться на ранней стадии. However, since BPA is taken up by cancer cells primarily through the amino acid transporter LAT1, which is an exchange transporter, as the concentration of extracellular BPA decreases, intracellular BPA leaks out of the cell. Thus, there is a problem that after the accumulation of boron in the tumor tissue, the concentration of boron in the tumor will decrease at an early stage.

[0010] [0010]

Способ в PTL 1 может позволить улучшить растворимость в воде BPA, но не может разрешить проблему раннего выведения BPA из опухолевых клеток. В качестве подхода для решения этой проблемы, осуществляют способ, в котором BPA вводят постепенно для поддержания концентрации внутриопухолевого бора на уровне, требуемом для лечения при проведении облучения нейтронами пораженной части. Однако, в этом случае, поскольку в нормальных кровяных сосудах присутствует большое количество бора, возникает сложность, состоящая в том, что нормальная ткань подвергается воздействию излучения. The method in PTL 1 can improve the water solubility of BPA, but cannot solve the problem of early clearance of BPA from tumor cells. As an approach to solve this problem, a method is carried out in which BPA is introduced gradually to maintain the concentration of intratumoral boron at the level required for treatment while conducting neutron irradiation of the affected part. However, in this case, since a large amount of boron is present in normal blood vessels, there is a problem in that normal tissue is exposed to radiation.

[0011] [0011]

Таким образом, задачей настоящего изобретения является разрешение проблемы раннего выведения BPA из опухолевых клеток с тем, чтобы реализовать селективное накопление и длительное удерживание бора в опухолях, при одновременном достижении превосходного соотношения концентраций бора в опухолевых/нормальных тканях и соотношения концентраций бора в опухоли/крови. Thus, it is an object of the present invention to solve the problem of early clearance of BPA from tumor cells in order to realize the selective accumulation and long-term retention of boron in tumors, while achieving an excellent ratio of boron concentrations in tumor/normal tissues and a ratio of boron concentrations in tumor/blood.

[РЕШЕНИЕ ЗАДАЧИ] [THE SOLUTION OF THE PROBLEM]

[0012] [0012]

В отношении вышеупомянутой проблемы, в результате обширного исследования, выполненного авторами настоящего изобретения, обнаружено, что система доставки бора, в которой BPA нанесен на полимер, захватывается опухолевыми клетками в ходе эндоцитоза посредством аминокислотного транспортера, и, что высокие концентрации внутриклеточного бора могут поддерживаться в течение длительного времени в сравнении с обычно применяемым BPA. В результате этого обнаружения сделано настоящее изобретение. With respect to the above problem, as a result of extensive research by the present inventors, it has been found that a boron delivery system in which BPA is coated on a polymer is taken up by tumor cells during endocytosis through an amino acid transporter, and that high concentrations of intracellular boron can be maintained for long time compared to commonly used BPA. As a result of this discovery, the present invention has been made.

[0013] [0013]

Конкретно, настоящее изобретение охватывает следующие пункты <1> - <21>. Specifically, the present invention covers the following items <1> to <21>.

<1> <1>

Производное пара-борфенилаланина, включающее: A para-borophenylalanine derivative comprising:

полимер, связанный, либо непосредственно, либо через линкер, с группой, представленной формулой (I), приведенной ниже. a polymer linked, either directly or via a linker, to a group represented by formula (I) below.

[Хим. стр. 1] [Chem. page 1]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом, и the arrows show the bond to the adjacent atom, and

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F. X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F.

<2> <2>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <1>, где две или более групп, представленных формулой (I), связаны непосредственно или через линкер с полимером, и The para-borophenylalanine derivative according to <1>, wherein two or more groups represented by formula (I) are linked directly or via a linker to a polymer, and

где группы, представленные формулой (I), могут быть одинаковыми или различными. where the groups represented by formula (I) may be the same or different.

<3> <3>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <1> или <2>, где его среднечисловая молекулярная масса составляет 1000 Да или более. The para-borophenylalanine derivative according to <1> or <2>, wherein its number average molecular weight is 1000 Da or more.

<4> <4>

Производное пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <3>, где полимер выбирают из группы, состоящей из поливинилового спирта, сложного полиэфира, простого полиэфира, полиакрилата, полиакриламида, полипептида, полисахарида и их сополимеров. The para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <3>, wherein the polymer is selected from the group consisting of polyvinyl alcohol, polyester, polyether, polyacrylate, polyacrylamide, polypeptide, polysaccharide, and copolymers thereof.

<5> <5>

Производное пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <4>, где полимер представляет собой поливиниловый спирт. The para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <4>, wherein the polymer is polyvinyl alcohol.

<6> <6>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <5>, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (II), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью. The para-boronphenylalanine derivative according to <5>, wherein the para-boronphenylalanine derivative is a compound of formula (II) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[Хим. стр. 2] [Chem. page 2]

где, Where,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

L¹ и L², каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ¹ and L ² are each independently a linker or absent,

R¹ и R², каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹ and R ² are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

m имеет значение от 0 до 3998, m has a value from 0 to 3998,

n имеет значение от 1 до 2000, n has a value from 1 to 2000,

m+2n=от 10 до 4000, и m+2n=10 to 4000, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary.

<7> <7>

Производное пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <4>, где полимер представляет собой полипептид. The para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <4>, wherein the polymer is a polypeptide.

<8> <8>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <7>, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (III), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью. The para-boronphenylalanine derivative according to <7>, wherein the para-boronphenylalanine derivative is a compound of formula (III) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[Хим. стр. 3] [Chem. page 3]

где, Where,

L³ и L⁴, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ³ and L ⁴ are each independently a linker or absent,

R³ и R⁴, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ³ and R ⁴ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^5a, каждый независимо, представляют собой группу, представленную формулой (IV-a) или (IV-b), приведенной ниже, R ^5a each independently represent a group represented by formula (IV-a) or (IV-b) below,

[Хим. стр. 4] [Chem. page 4]

где, стрелки показывают связь с NH, where, the arrows show the connection with NH,

R^5b, каждый независимо, представляют собой группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных следующими формулами (IV-с) - (IV-g), R ^5b each independently represent a group selected from the group consisting of groups represented by the following formulas (IV-c) to (IV-g),

[Хим. стр. 5] [Chem. page 5]

где, Where,

стрелки показывают связь с NH, the arrows show the connection with NH,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

Y⁺ представляет собой H⁺, ион щелочного металла, или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония, Y ⁺ represents H ⁺ , an alkali metal ion, or a tetra-C _1-6 -alkyl-ammonium ion,

p=от 0 до 299, p=0 to 299,

q=от 1 до 300, q=1 to 300,

r=от 0 до 299, r=0 to 299,

p+q+r=от 10 до 300, и p+q+r=10 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary.

<9> <9>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <7>, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (V), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью, The para-boronphenylalanine derivative according to <7>, wherein the para-boronphenylalanine derivative is a compound of formula (V) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

[Хим. стр. 6] [Chem. page 6]

где, Where,

L⁵ и L⁶, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ⁵ and L ⁶ are each independently a linker or absent,

R⁶ и R⁷, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ⁶ and R ⁷ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^8a означает группу, представленную формулой (VI-a), приведенной ниже, R ^8a means a group represented by formula (VI-a) below,

[Хим. стр. 7] [Chem. page 7]

где, стрелка показывает связь с карбонильным углеродом, where, the arrow indicates the bond to the carbonyl carbon,

R^8b, каждый независимо, представляют собой группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных формулами (VI-b) - (VI-h), приведенными ниже, R ^8b each independently represent a group selected from the group consisting of groups represented by formulas (VI-b) - (VI-h) below,

[Хим. стр. 8] [Chem. page 8]

где, Where,

стрелки показывают связь с карбонильным углеродом, the arrows show the bond to the carbonyl carbon,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

s=от 0 до 299, s=0 to 299,

t=от 1 до 300, t=1 to 300,

u=от 0 до 299, u=0 to 299,

s+t+u=от 2 до 300, и s+t+u=2 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary.

<10> <10>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <7>, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (XX), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью, The para-boronphenylalanine derivative according to <7>, wherein the para-boronphenylalanine derivative is a compound of formula (XX) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

[Хим. стр. 9] [Chem. page 9]

где, Where,

L¹¹ и L¹², каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ¹¹ and L ¹² are each independently a linker or absent,

R¹⁵ и R¹⁶, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹⁵ and R ¹⁶ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^17a означает группу, представленную формулой (XXI-a), приведенной ниже, R ^17a means a group represented by formula (XXI-a) below,

[Хим. стр. 10] [Chem. page 10]

где, стрелка показывает связь с NH, where, the arrow shows the connection with NH,

R^17b, каждый независимо, представляют собой группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных формулами (XXI-b) - (XXI-h), приведенными ниже, R ^17b each independently represent a group selected from the group consisting of groups represented by formulas (XXI-b) - (XXI-h) below,

[Хим. стр. 11] [Chem. page 11]

где, Where,

стрелки показывают связь с NH, the arrows show the connection with NH,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

x=от 0 до 299, x=0 to 299,

y=от 1 до 300, y=1 to 300,

z=от 0 до 299, z=0 to 299,

x+y+z=от 10 до 300, и x+y+z=10 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary.

<11> <11>

Производное пара-борфенилаланина согласно пункту <5>, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (XXII), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью, The para-boronphenylalanine derivative according to <5>, wherein the para-boronphenylalanine derivative is a compound of formula (XXII) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

[Хим. стр. 12] [Chem. page 12]

где, Where,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

L¹³ и L¹⁴, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ¹³ and L ¹⁴ are each independently a linker or absent,

R¹⁸ и R¹⁹, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹⁸ and R ¹⁹ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R²⁰, каждый независимо, представляют собой С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, -NR²¹R²²-группу, или следующую группу, R ²⁰ are each independently a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a -NR ²¹ R ²² group, or the following group,

[Хим. стр. 13] [Chem. page 13]

где, стрелка показывает связь с карбонильным углеродом, where, the arrow indicates the bond to the carbonyl carbon,

R²¹ и R²², каждый независимо, представляют собой водород или С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, R ²¹ and R ²² are each independently hydrogen or a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen,

а=от 1 до 3998, a=from 1 to 3998,

b=от 0 до 3997, b=0 to 3997,

с=от 1 до 2000, c=from 1 to 2000,

a+b+2c=от 10 до 4000, и a+b+2c=10 to 4000, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary.

<12> <12>

Композиция, содержащая производное пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11>. A composition containing a para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11>.

<13> <13>

Композиция согласно пункту <12> для лечения опухолей. The composition according to paragraph <12> for the treatment of tumors.

<14> <14>

Композиция согласно пункту <12> для диагностирования и обнаружения опухолей. Composition according to item <12> for diagnosing and detecting tumors.

<15> <15>

Набор для получения композиции согласно любому из пунктов <10> - <12> или для получения производного пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <9>, включающий в себя соединение, представленное формулой (VII), A kit for producing a composition according to any one of <10> to <12> or a para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <9>, comprising a compound represented by formula (VII),

[Хим. стр. 14] [Chem. page 14]

где, Where,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, и X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F, or ¹⁹ F, and

полимер, который может вступать в реакцию с соединением, представленным формулой (VII), с образованием производного пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11>. a polymer that can react with a compound represented by formula (VII) to form a para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11>.

<16> <16>

Способ лечения опухоли, включающий в себя введение субъекту, нуждающемуся в том, эффективной дозировки производного пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11>. A method for treating a tumor, comprising administering to a subject in need an effective dosage of a para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11>.

<17> <17>

Способ обнаружения или диагностирования опухолей, включающий в себя введение субъекту, нуждающемуся в том, эффективной дозировки производного пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11>. A method for detecting or diagnosing tumors, comprising administering to a subject in need an effective dosage of a para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11>.

<18> <18>

Производное пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11> для лечения опухолей. A para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11> for treating tumors.

<19> <19>

Производное пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11> для диагностирования и обнаружения опухолей. A para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11> for diagnosing and detecting tumors.

<20> <20>

Применение производного пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11> в получении лекарственного средства для лечения опухолей. Use of the para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11> in the preparation of a medicament for the treatment of tumors.

<21> <21>

Применение производного пара-борфенилаланина согласно любому из пунктов <1> - <11> в получении лекарственного средства для диагностирования и обнаружения опухолей. The use of the para-borophenylalanine derivative according to any one of <1> to <11> in the preparation of a medicament for diagnosing and detecting tumors.

[ПРЕИМУЩЕСТВЕННЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ] [ADVANTAGE EFFECTS OF THE INVENTION]

[0014] [0014]

При помощи использования производного пара-борфенилаланина по настоящему изобретению, может быть реализовано селективное накопление и длительное удерживание бора в опухолях, при одновременном достижении превосходного соотношения концентраций бора в опухолевой/нормальной ткани и соотношение концентраций бора в опухоли/крови. By using the para-borophenylalanine derivative of the present invention, selective accumulation and long-term retention of boron in tumors can be realized while achieving excellent tumor/normal tissue boron concentration ratio and tumor/blood boron concentration ratio.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

[0015] [0015]

[ФИГ. 1] показывает результат измерений ¹¹B-NMR (500 МГц, D₂O) для ¹¹B-BPA, Fru-¹¹B-BPA и PVA-¹¹B-BPA. [FIG. 1] shows the measurement result of ¹¹ B-NMR (500 MHz, D ₂ O) for ¹¹ B-BPA, Fru- ¹¹ B-BPA and PVA- ¹¹ B-BPA.

[ФИГ. 2] показывает полученные методом конфокальной микроскопии изображения клеток ВхPC3, обработанных посредством Cy5-PVA-BPA и Fru-BPA. На фигуре, контрольные пробы представляют собой клетки ВхPC3, которые не были обработаны каким-либо из образцов (были добавлены Lysotracker (флуоресцентный краситель) для окрашивания и реагент для обнаружения BPA (DAHMI)). [FIG. 2] shows confocal microscopy images of BxPC3 cells treated with Cy5-PVA-BPA and Fru-BPA. In the figure, controls are BxPC3 cells that were not treated with any of the samples (Lysotracker (fluorescent dye) for staining and BPA detection reagent (DAHMI) were added).

[ФИГ. 3-1] предоставляет график, показывающий концентрацию внутриклеточного бора. Результаты показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=3). Статистическую значимость вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 3-1] provides a graph showing intracellular boron concentration. Results are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=3). Statistical significance is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 3-2] предоставляет график, показывающий концентрацию внутриклеточного бора. Результаты показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=3). Статистическую значимость вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. На фигуре, «+ 30-минутное вытеснение метки» означает 30 минут дополнительного выдерживания. [FIG. 3-2] provides a graph showing intracellular boron concentration. Results are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=3). Statistical significance is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01. In the figure, "+ 30 minute mark extrusion" means 30 minutes of additional exposure.

[ФИГ. 4-1] показывает результаты внутриклеточного захвата Cy5-PVA и Cy5-PVA-BPA в том случае, когда BCH не добавляют. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=3). P-значение вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 4-1] shows the results of intracellular uptake of Cy5-PVA and Cy5-PVA-BPA when no BCH is added. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=3). P-value is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 4-2] показывает результаты внутриклеточного захвата Cy5-PVA и Cy5-PVA-BPA в том случае, когда BCH добавляют. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=3). P-значение вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 4-2] shows the results of intracellular uptake of Cy5-PVA and Cy5-PVA-BPA when BCH is added. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=3). P-value is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 5-1] показывает результаты накопления в опухолях PVA-BPA и Fru-BPA у подвергнутых трансплантации клеток CT-26 мышей. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=3). P-значение вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 5-1] shows the results of tumor accumulation of PVA-BPA and Fru-BPA in transplanted CT-26 mice. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=3). P-value is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 5-2] показывает соотношение накопления в опухоли/крови PVA-BPA и Fru-BPA у подвергнутых трансплантации клеток CT-26 мышей. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=4). P-значение вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 5-2] shows the tumor/blood accumulation ratio of PVA-BPA and Fru-BPA in transplanted CT-26 mice. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=4). P-value is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 6-1] показывает результаты накопления в опухолях PVA-BPA и Fru-BPA у подвергнутых трансплантации BxPC3 мышей. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=4). P-значение вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 6-1] shows the results of tumor accumulation of PVA-BPA and Fru-BPA in BxPC3 transplanted mice. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=4). P-value is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 6-2] показывает соотношение накопления в опухоли/крови PVA-BPA и Fru-BPA у подвергнутых трансплантации BxPC3 мышей. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=4). P-значение вычисляют с помощью t-критерия Стьюдента. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 6-2] shows the tumor/blood accumulation ratio of PVA-BPA and Fru-BPA in BxPC3 transplanted mice. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=4). P-value is calculated using Student's t-test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 7] показывает CLSM-изображение опухоли CT26 через шесть часов после внутривенной инъекции Cy5-PVA-BPA. Красный: Cy5; Голубой: Hoechst33342 (клеточное ядро); Зеленый: DyLight488 (кровеносные сосуды). [FIG. 7] shows a CLSM image of a CT26 tumor six hours after intravenous injection of Cy5-PVA-BPA. Red: Cy5; Cyan: Hoechst33342 (cell nucleus); Green: DyLight488 (blood vessels).

[ФИГ. 8-1] показывает относительное изменение размера опухолей с течением времени после введения образцов. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n= 4 или 8). P-значение вычисляют с помощью критерия множественных сравнений Бонферрони. *p<0,05, **p<0,01. [FIG. 8-1] shows the relative change in tumor size over time after sample administration. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n= 4 or 8). The p-value is calculated using the Bonferroni multiple comparison test. *p<0.05, **p<0.01.

[ФИГ. 8-2] показывает кривые Каплана-Мейера в отношении относительного размера опухоли после введения образца. [FIG. 8-2] shows Kaplan-Meier curves for relative tumor size after sample injection.

[ФИГ. 9-1] показывает изображения окрашенных гематоксилин-эозином (HE) опухолей после обработки для Контрольной группы (Холодная). [FIG. 9-1] shows images of hematoxylin-eosin (HE) stained tumors after treatment for the Control group (Cold).

[ФИГ. 9-2] показывает изображения HE-окрашенных опухолей после обработки для Контрольной группы (Горячая). [FIG. 9-2] shows post-treatment images of HE-stained tumors for the Control group (Hot).

[ФИГ. 9-3] показывает изображения HE-окрашенных опухолей через 3 часа после обработки посредством Fru-BPA (Горячая группа). [FIG. 9-3] shows images of HE-stained tumors 3 hours after treatment with Fru-BPA (Hot Group).

[ФИГ. 9-4] показывает изображения HE-окрашенных опухолей через 3 часа после обработки посредством PVA-BPA (Горячая группа). [FIG. 9-4] shows images of HE-stained tumors 3 hours after treatment with PVA-BPA (Hot Group).

[ФИГ. 10-1] показывает спектр ¹⁹F-NMR для ¹⁹F-BPA. [FIG. 10-1] shows the spectrum of ¹⁹ F-NMR for ¹⁹ F-BPA.

[ФИГ. 10-2] показывает спектр ¹⁹F-NMR для Fru-¹⁹F-BPA. [FIG. 10-2] shows the ¹⁹ F-NMR spectrum for Fru- ¹⁹ F-BPA.

[ФИГ. 10-3] показывает спектр ¹⁹F-NMR для PVA-¹⁹F-BPA. [FIG. 10-3] shows the ¹⁹ F-NMR spectrum for PVA- ¹⁹ F-BPA.

[ФИГ. 11] показывает результаты накопления в опухолях PVA-¹⁹F-BPA и Fru-¹⁹F-BPA. На фигуре, Fru-BPA представляет результаты для Fru-¹⁹F-BPA, и PVA-BPA представляет результаты для PVA-¹⁹F-BPA. [FIG. 11] shows the results of PVA- ¹⁹ F-BPA and Fru- ¹⁹ F-BPA accumulation in tumors. In the figure, Fru-BPA represents the results for Fru- ¹⁹ F-BPA and PVA-BPA represents the results for PVA- ¹⁹ F-BPA.

[ФИГ. 12-1] показывает результаты накопления в опухолях PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA. [FIG. 12-1] shows the results of PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA accumulation in tumors.

[ФИГ. 12-2] показывает соотношение накопления в опухоли/крови PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA. [FIG. 12-2] shows the tumor/blood accumulation ratio of PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA.

[ФИГ. 13-1] показывает относительное изменение размера опухолей с течением времени после введения образцов. Статистически значимое различие вычисляют с помощью критерия наименьшей значимой разности (LSD) Фишера на 18-ый день. [FIG. 13-1] shows the relative change in tumor size over time after sample administration. A statistically significant difference is calculated using Fisher's Least Significant Difference (LSD) test on day 18.

[ФИГ. 13-2] показывает подвергнутую облучению пучком нейтронов группу, изъятую из ФИГ. 13-1. Статистически значимое различие вычисляют с помощью критерия наименьшей значимой разности (LSD) Фишера на 18-ый день. На фигуре, «Полимер-BPA» относится к PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA. [FIG. 13-2] shows the neutron beam irradiated group removed from FIG. 13-1. A statistically significant difference is calculated using Fisher's Least Significant Difference (LSD) test on day 18. In the figure, "Polymer-BPA" refers to PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA.

[ФИГ. 14-1] показывает накопление в опухолях P[Asp(Глюкамин)/Asp]-BPA. [FIG. 14-1] shows the accumulation of P[Asp(Glucamine)/Asp]-BPA in tumors.

[ФИГ. 14-2] показывает соотношение накопления в опухоли/крови P[Asp(Глюкамин)/Asp]-BPA. [FIG. 14-2] shows the tumor/blood accumulation ratio of P[Asp(Glucamine)/Asp]-BPA.

[ФИГ. 15] показывает относительное изменение размера опухолей с течением времени после введения образцов. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (Контрольная группа: n=8, фруктоза-BPA: n= 6, PVA-BPA: n=6). [FIG. 15] shows the relative change in tumor size over time after sample administration. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (Control group: n=8, fructose-BPA: n=6, PVA-BPA: n=6).

[ФИГ. 16] показывает относительное изменение размера опухолей с течением времени после введения образцов. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=8). [FIG. 16] shows the relative change in tumor size over time after sample administration. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=8).

[ФИГ. 17] показывает результаты оценивания констант взаимодействия в ПРИМЕРЕ 19. На фигуре, (А), (В) и (С), соответственно, представляют N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(A), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(B), и N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(C). [FIG. 17] shows the results of evaluating the interaction constants in EXAMPLE 19. In the figure, (A), (B) and (C), respectively, represent N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(A), N ₃ -P [Lys(Gluconate)/Lys]_(B), and N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C).

[ФИГ. 18] показывает полученные методом конфокальной микроскопии изображения клеток ВхPC3, обработанных посредством Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](C)-BPA и Сорбит-BPA. На фигуре, «Полимер» относится к «Cy5- P[Lys(Глюконат)/Lys](C)». [FIG. 18] shows confocal microscopy images of BxPC3 cells treated with Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA and Sorbitol-BPA. In the figure, "Polymer" refers to "Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C)".

[ФИГ. 19] показывает результаты накопления в опухолях N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(A)-BPA ((A)-BPA на фигуре), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(B)-BPA ((B)-BPA на фигуре), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(C)-BPA ((C)-BPA на фигуре), mPEG10k-P[Lys(Глюконат)/Lys]_-BPA ((D)-BPA на фигуре) и Сорбит-BPA. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=3). [FIG. 19] shows the results of accumulation in tumors of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(A)-BPA ((A)-BPA in the figure), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(B )-BPA ((B)-BPA in the figure), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C)-BPA ((C)-BPA in the figure), mPEG10k-P[Lys(Gluconate)/ Lys]_-BPA ((D)-BPA in the figure) and Sorbitol-BPA. Data are shown as mean ± standard deviation (SD) (n=3).

[ФИГ. 20] показывает относительное изменение размера опухолей с течением времени после введения образцов в ПРИМЕРЕ 22. Данные показаны в виде среднего значения ± стандартное отклонение (S.D.) (n=6). [FIG. 20] shows the relative change in tumor size over time after administration of the samples in EXAMPLE 22. Data are shown as mean ± standard deviation (S.D.) (n=6).

[ФИГ. 21] показывает кривые Каплана-Мейера в отношении относительного размера опухоли после введения образца в ПРИМЕРЕ 22. [FIG. 21] shows Kaplan-Meier curves for relative tumor size after sample injection in EXAMPLE 22.

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯDESCRIPTION OF EMBODIMENTS

[0016] [0016]

<<Определения>> <<Definitions>>

В данном документе, «С_1-10-алкильная группа» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей 1-10 атомов углерода. Примеры С_1-10-алкильной группы включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, 1-этилпропил, н-гексил, изогексил, 1,1-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 2-этилбутил, н-гептил, н-октил, н-нонил, и н-децил. С_1-10-алкильные группы включают С_1-8-алкильные группы, С_1-7-алкильные группы, С_1-6-алкильные группы, С_1-5-алкильные группы, и С_1-4-алкильные группы. As used herein, "C _1-10 alkyl group" refers to a straight or branched alkyl group having 1-10 carbon atoms. Examples of the C _1-10 alkyl group include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, 1-ethylpropyl, n-hexyl, isohexyl , 1,1-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, and n-decyl. C _1-10 alkyl groups include C _1-8 alkyl groups, C _1-7 alkyl groups, C _1-6 alkyl groups, C _1-5 alkyl groups, and C _1-4 alkyl groups.

[0017] [0017]

В данном документе, «С_1-10-алкоксигруппа» относится к группе, где атом кислорода связан с С_1-10-алкилом. Примеры С_1-10-алкоксигруппы включают метокси-, этокси-, пропокси-, изопропокси-, бутокси-, изобутокси-, втор-бутокси-, трет-бутокси-, пентилокси-, изопентилокси-, неопентилокси-, 1-этилпропокси-, гексилокси-, изогексилокси-, 1,1-диметилбутокси-, 2,2-диметилбутокси-, 3,3-диметилбутокси-, 2-этилбутокси-, гептилокси-, октилокси-, нонилокси-, и децилокси-группы. С_1-10-алкоксигруппы включают С_1-8-алкоксигруппы, С_1-7-алкоксигруппы, С_1-6-алкоксигруппы, С_1-5-алкоксигруппы, и С_1-4-алкоксигруппы. As used herein, "C _1-10 alkoxy" refers to a group where an oxygen atom is bonded to a C _1-10 alkyl. Examples of C _1-10 alkoxy groups include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert-butoxy, pentyloxy, isopentyloxy, neopentyloxy, 1-ethylpropoxy, hexyloxy, isohexyloxy, 1,1-dimethylbutoxy, 2,2-dimethylbutoxy, 3,3-dimethylbutoxy, 2-ethylbutoxy, heptyloxy, octyloxy, nonyloxy, and decyloxy groups. C _1-10 alkoxy groups include C _1-8 alkoxy groups, C _1-7 alkoxy groups, C _1-6 alkoxy groups, C _1-5 alkoxy groups, and C _1-4 alkoxy groups.

[0018] [0018]

В данном документе, «атом галогена» относится к атомам фтора, атомам хлора, атомам брома или атомам йода. As used herein, "halogen atom" refers to fluorine atoms, chlorine atoms, bromine atoms, or iodine atoms.

[0019] [0019]

В данном документе, «С_1-10-алкильная группа, которая может быть замещена галогеном», включает «С_1-10-алкильные группы», где замещаемые атомы водорода в них замещены одним или более, например, одним - пятью атомами галогена. Конкретные примеры включают дифторметил, трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 3,3,3-трифторпропил, 4-фторбутил, и 4,4,4-трифторбутил. As used herein, "C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen" includes "C _1-10 alkyl groups" where the substituted hydrogen atoms therein are substituted with one or more, for example, one to five halogen atoms. Specific examples include difluoromethyl, trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 3,3,3-trifluoropropyl, 4-fluorobutyl, and 4,4,4-trifluorobutyl.

[0020] [0020]

В данном документе, «С_1-10-алкоксигруппа, которая может быть замещена галогеном», включает «С_1-10-алкоксигруппы», где замещаемые атомы водорода в них замещены одним или более, например, одним - пятью атомами галогена. Конкретные примеры включают дифторметокси-, трифторметокси-, 2,2,2-трифторэтокси-, 3,3,3-трифторпропокси-, 4-фторбутокси-, и 4,4,4-трифторбутокси-группы. As used herein, “C _1-10 alkoxy which may be substituted by halogen” includes “C _1-10 alkoxy groups” where the substituted hydrogen atoms therein are substituted with one or more, for example, one to five halogen atoms. Specific examples include the difluoromethoxy, trifluoromethoxy, 2,2,2-trifluoroethoxy, 3,3,3-trifluoropropoxy, 4-fluorobutoxy, and 4,4,4-trifluorobutoxy groups.

[0021] [0021]

В данном документе, «С_1-40-алкиленовая группа» относится к линейной или разветвленной алкильной группе, имеющей 1-40 атомов углерода. Конкретные примеры включают метиленовую группу, этиленовую группу, пропиленовую группу, бутиленовую группу, пентиленовую группу, гексиленовую группу, гептиленовую группу, октиленовую группу, нониленовую группу, дециленовую группу, ундециленовую группу, додециленовую группу, тридециленовую группу, тетрадециленовую группу, пентадециленовую группу, гексадециленовую группу, гептадециленовую группу, октадециленовую группу, нонадециленовую группу, эйкозаниленовую группу, геникозаниленовую группу, докозаниленовую группу, трикозаниленовую группу, тетракозаниленовую группу, пентакозаниленовую группу, гексакозаниленовую группу, гептакозаниленовую группу, октакозаниленовую группу, нонакозаниленовую группу, триаконтаниленовую группу, гентриаконтаниленовую группу, дотриаконтаниленовую группу, тритриаконтаниленовую группу, тетратриаконтаниленовую группу, пентатриаконтаниленовую группу, гексатриаконтаниленовую группу, гептатриаконтаниленовую группу, октатриаконтаниленовую группу, нонатриаконтаниленовую группу, и тетраконтаниленовую группу. С_1-40-алкиленовые группы включают С_1-20-алкиленовые группы, С_1-10-алкиленовые группы, и С_1-5-алкиленовые группы. As used herein, "C _1-40 alkylene group" refers to a linear or branched alkyl group having 1-40 carbon atoms. Specific examples include methylene group, ethylene group, propylene group, butylene group, pentylene group, hexylene group, heptylene group, octylene group, nonylene group, decylene group, undecylene group, dodecylene group, tridecylene group, tetradecylene group, pentadecylene group, hexadecylene group. , heptadecylene group, octadecylene group, nonadecylene group, eicosanylene group, genicosanylene group, docosanylene group, tricosanylene group, tetracosanylene group, pentacosanylene group, hexacosanylene group, heptacosanylene group, octacosanylene group, nonacosanylene group, triacontanylene group, gantry acontanylene group, dotriacontanylene group, tritriacontanylene group a tetratriacontanylene group, a pentatriacontanylene group, a hexatriacontanylene group, a heptatriacontanylene group, an octatriacontanylene group, a nonatriacontanylene group, and a tetracontanylene group. C _1-40 alkylene groups include C _1-20 alkylene groups, C _1-10 alkylene groups, and C _1-5 alkylene groups.

[0022] [0022]

В данном документе, «С_6-14-ариленовая группа» относится к двухвалентной группе, содержащей ароматический карбоцикл, имеющий 6-14 атомов углерода, например, к фениленовой группе, нафтиленовой группе, и антрацениленовой группе. As used herein, "C _6-14 arylene group" refers to a divalent group containing an aromatic carbocycle having 6-14 carbon atoms, such as a phenylene group, a naphthylene group, and an anthracenylene group.

[0023] [0023]

В данном документе, «5-10-членная гетероариленовая группа» относится к двухвалентной группе, включающей 5-10-членный ароматический гетероцикл. Примеры ароматического гетероцикла включают пиррольное кольцо, индольное кольцо, тиофеновое кольцо, бензотиофеновое кольцо, фурановое кольцо, бензофурановое кольцо, пиридиновое кольцо, хинолиновое кольцо, изохинолиновое кольцо, тиазольное кольцо, бензотиазольное кольцо, изотиазольное кольцо, бензисотиазольное кольцо, пиразольное кольцо, индазольное кольцо, оксазольное кольцо, бензоксазольное кольцо, изоксазольное кольцо, бензисоксазольное кольцо, имидазольное кольцо, бензимидазольное кольцо, триазольное кольцо, бензотриазольное кольцо, пиримидиновое кольцо, уридиновое кольцо, пиразиновое кольцо, и пиридазиновое кольцо. As used herein, "5-10 membered heteroarylene group" refers to a divalent group including a 5-10 membered aromatic heterocycle. Examples of the aromatic heterocycle include pyrrole ring, indole ring, thiophene ring, benzothiophene ring, furan ring, benzofuran ring, pyridine ring, quinoline ring, isoquinoline ring, thiazole ring, benzothiazole ring, isothiazole ring, benzisothiazole ring, pyrazole ring, indazole ring, oxazole ring, benzoxazole ring, isoxazole ring, benzoxazole ring, imidazole ring, benzimidazole ring, triazole ring, benzotriazole ring, pyrimidine ring, uridine ring, pyrazine ring, and pyridazine ring.

[0024] [0024]

В данном документе, «оксогруппа» относится к группе, которая образует карбонильную группу с атомом углерода, с которым она связана. As used herein, "oxo group" refers to a group that forms a carbonyl group with the carbon atom to which it is attached.

[0025] [0025]

В данном документе, «полимер» относится к соединению, имеющему, по меньшей мере, 2 повторяющихся звена, предпочтительно 3 повторяющихся звена, более предпочтительно, по меньшей мере, 5 повторяющихся звеньев, и даже более предпочтительно, по меньшей мере, 10 повторяющихся звеньев. As used herein, "polymer" refers to a compound having at least 2 repeat units, preferably 3 repeat units, more preferably at least 5 repeat units, and even more preferably at least 10 repeat units.

[0026] [0026]

В данном документе, «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли свободного соединения, которая является фармацевтически приемлемой и имеет желательную фармакологическую активность. «Фармацевтически приемлемая соль» особым образом не ограничивается, но может представлять собой, например: As used herein, a "pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt of the free compound that is pharmaceutically acceptable and has the desired pharmacological activity. The "pharmaceutically acceptable salt" is not particularly limited, but may be, for example:

соль неорганической кислоты, такой как серная кислота, соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота или азотная кислота; a salt of an inorganic acid such as sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid or nitric acid;

соль органической кислоты, такой как уксусная кислота, щавелевая кислота, молочная кислота, винная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, лимонная кислота, бензолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, бензойная кислота, камфорсульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, глюкогептоновая кислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гликолевая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, галактаровая кислота, или нафталин-2-сульфоновая кислота; an organic acid salt such as acetic acid, oxalic acid, lactic acid, tartaric acid, fumaric acid, maleic acid, citric acid, benzenesulfonic acid, methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, benzoic acid, camphorsulfonic acid, ethanesulfonic acid, glucoheptonic acid, gluconic acid, glutamic acid, glycolic acid, malic acid, malonic acid, mandelic acid, galactaric acid, or naphthalene-2-sulfonic acid;

соль одного или нескольких ионов металла, таких как ионы лития, ионы натрия, ионы калия, ионы кальция, ионы магния, ионы цинка, ионы алюминия; или a salt of one or more metal ions such as lithium ions, sodium ions, potassium ions, calcium ions, magnesium ions, zinc ions, aluminum ions; or

соль амина, такого как аммиак, аргинин, лизин, пиперазин, холин, диэтиламин, 4-фенилциклогексиламин, 2-аминоэтанол, или бензатин. an amine salt such as ammonia, arginine, lysine, piperazine, choline, diethylamine, 4-phenylcyclohexylamine, 2-aminoethanol, or benzathine.

[0027] [0027]

В данном документе, «опухоль» относится к клеточной совокупности, которая проявляет неконтролируемую пролиферацию вследствие генетической мутации и включает доброкачественные и злокачественные опухоли. В данном документе, термин «злокачественная опухоль» может быть использован взаимозаменяемо с термином «рак». Термин «рак» используется в широком смысле с включением раковых заболеваний, которые представляют собой карциномы эпителиального происхождения, саркомы, и гематологические злокачественные образования, такие как лейкемия. Примеры раковых заболеваний, которые представляют собой карциномы эпителиального происхождения, включают рак желудка, рак толстой кишки, рак желчного пузыря, рак желчного протока, рак поджелудочной железы, рак двенадцатиперстной кишки, рак почки, рак предстательной железы, рак яичника, рак матки, рак молочной железы, рак кожи, печеночноклеточный рак, рак языка, рак пищевода, и фарингеальный рак, но не ограничиваются этим. Примеры сарком включают фибросаркому, злокачественную фиброзную гистиоцитому, кожную фибросаркому, липосаркому, миосаркому, ангиосаркому, саркому Капоши, лимфангиосаркому, синовиальную саркому, и остеосаркому, но не ограничиваются этим. Примеры гематологических злокачественных заболеваний включют лейкемию, злокачественную лимфому, и множественную миелому, но не ограничиваются этим. В данном документе, «клетки опухоли» представляют собой клетки, которые образуют опухоли и относятся к клеткам, которые обычно пролиферируют аномально независимо от нормальной окружающей ткани (то есть, клеткам, которые стали раковыми). As used herein, "tumor" refers to a cell population that exhibits uncontrolled proliferation due to a genetic mutation and includes benign and malignant tumors. In this document, the term "malignant tumor" can be used interchangeably with the term "cancer". The term "cancer" is used in a broad sense to include cancers, which are carcinomas of epithelial origin, sarcomas, and hematological malignancies such as leukemia. Examples of cancers that are carcinomas of epithelial origin include gastric cancer, colon cancer, gallbladder cancer, bile duct cancer, pancreatic cancer, duodenal cancer, kidney cancer, prostate cancer, ovarian cancer, uterine cancer, breast cancer. gland, skin cancer, hepatocellular cancer, tongue cancer, esophageal cancer, and pharyngeal cancer, but are not limited to. Examples of sarcomas include, but are not limited to, fibrosarcoma, malignant fibrous histiocytoma, cutaneous fibrosarcoma, liposarcoma, myosarcoma, angiosarcoma, Kaposi's sarcoma, lymphangiosarcoma, synovial sarcoma, and osteosarcoma. Examples of hematological malignancies include, but are not limited to, leukemia, malignant lymphoma, and multiple myeloma. As used herein, "tumor cells" are cells that form tumors and refer to cells that normally proliferate abnormally independently of normal surrounding tissue (ie, cells that have become cancerous).

[0028] [0028]

В данном документе, «субъект» относится к любому млекопитающему. «Субъект» особым образом не ограничивается, но включает, например, людей, приматов, мышей, крыс, собак, кошек, коров, лошадей, свиней, овец, коз, и верблюдов. Субъект предпочтительно представляет собой человека. As used herein, "subject" refers to any mammal. "Subject" is not particularly limited, but includes, for example, humans, primates, mice, rats, dogs, cats, cows, horses, pigs, sheep, goats, and camels. The subject is preferably a human.

[0029] [0029]

<<Производное пара-борфенилаланина (BPA)>> <<Para-borophenylalanine (BPA) derivative>>

BPA-производное по настоящему изобретению включает полимер, связанный напрямую или через линкер с полученной от BPA группой, представленной формулой (I), приведенной ниже: The BPA derivative of the present invention includes a polymer linked directly or through a linker to a BPA-derived group represented by formula (I) below:

[Хим. стр. 15] [Chem. page 15]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом и the arrows show the bond to the adjacent atom and

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F, или ¹⁹F. X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F, or ¹⁹ F.

[0030] [0030]

Производное BPA по настоящему изобретению связывается с аминокислотным транспортером (в частности, LAT1) на опухолевых клетках с помощью группы, представленной формулой (I), присутствующей в производном BPA. После связывания с аминокислотным транспортером, BPA-производное по настоящему изобретению захватывается опухолевой клеткой в результате эндоцитоза. Таким образом, BPA-производное по настоящему изобретению обеспечивает селективное накопление бора в опухолевых клетках. Далее, BPA-производное по настоящему изобретению перемещается в эндосому. В результате, скорость клеточной экскреции бора из опухолевых клеток сравнительно ниже, чем при использовании BPA как такового. Таким образом, бор может удерживаться в течение длительного периода в опухолевых клетках. Кроме того, BPA-производное по настоящему изобретению может позволить достигать превосходного соотношения концентраций бора в опухоли/нормальной ткани и соотношения концентраций бора в опухоли/крови. The BPA derivative of the present invention binds to an amino acid transporter (particularly LAT1) on tumor cells via a group represented by formula (I) present in the BPA derivative. After binding to an amino acid transporter, the BPA derivative of the present invention is taken up by the tumor cell by endocytosis. Thus, the BPA derivative of the present invention provides selective accumulation of boron in tumor cells. Further, the BPA derivative of the present invention moves into the endosome. As a result, the rate of cellular excretion of boron from tumor cells is comparatively lower than when using BPA as such. Thus, boron can be retained for a long period in tumor cells. In addition, the BPA derivative of the present invention can achieve an excellent tumor/normal tissue boron concentration ratio and a tumor/blood boron concentration ratio.

[0031] [0031]

Трехмерная структура группы, представленной формулой (I), особым образом не ограничивается при условии, что селективный захват BPA-производного в опухолевые клетки при этом не затрудняется, и форма трехмерных структур может быть представлена формулой (I-a) или (I-b), приведенной ниже. Кроме того, обе нижеприведенные группы, представленные формулой (I-a) и формулой (I-b), могут быть внедрены в BPA-производное по настоящему изобретению. Группа формулы (I) предпочтительно представляет собой группу, представленную формулой (I-a), имеющую L-фенилаланиновый фрагмент. The three-dimensional structure of the group represented by formula (I) is not particularly limited as long as the selective uptake of the BPA derivative into tumor cells is not impeded, and the shape of the three-dimensional structures can be represented by formula (I-a) or (I-b) below. In addition, both of the following groups represented by formula (I-a) and formula (I-b) can be incorporated into the BPA derivative of the present invention. The group of formula (I) is preferably a group represented by formula (I-a) having an L-phenylalanine moiety.

[Хим. стр. 16] [Chem. page 16]

[0032] [0032]

Если, по меньшей мере, один из X¹-X⁴ в формуле (1) представляет собой ¹⁸F, BPA-производное по настоящему изобретению может быть использовано для диагностики и обнаружения опухолей при использовании, например, PET (позитронно-эмиссионной томографии). Если, по меньшей мере, один из X¹-X⁴ в формуле (1) представляет собой ¹⁹F, BPA-производное по настоящему изобретению может быть использовано для диагностики и обнаружения опухолей при использовании, например, ¹⁹F-MRI (магнитно-резонансной визуализации). If at least one of X ¹ -X ⁴ in the formula (1) is ¹⁸ F, the BPA derivative of the present invention can be used to diagnose and detect tumors using, for example, PET (positron emission tomography). If at least one of X ¹ -X ⁴ in formula (1) is ¹⁹ F, the BPA derivative of the present invention can be used to diagnose and detect tumors using, for example, ¹⁹ F-MRI (Magnetic Resonance visualization).

[0033] [0033]

Способ, которым связывают группу формулы (I) с полимером или линкером, особым образом не ограничивается. Например, фрагмент бороновой кислоты может быть подвергнут реакции с диольным фрагментом, присутствующим в полимере или линкере, с получением структуры сложного эфира бороновой кислоты, представленной следующими формулами (VIII-a)-(VIIIc). The method by which the group of formula (I) is attached to the polymer or linker is not particularly limited. For example, a boronic acid moiety can be reacted with a diol moiety present in a polymer or linker to give a boronic acid ester structure represented by the following formulas (VIII-a) to (VIIIc).

[Хим. стр. 17] [Chem. page 17]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом, и the arrows show the bond to the adjacent atom, and

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F, или ¹⁹F. X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F, or ¹⁹ F.

[0034] [0034]

Далее, если получают сложноэфирную структуру, такую как в формулах (VIII-a) и (VIII-b), приведенных выше, то она может быть подвергнута реакции с дополнительной гидроксильной группой, присутствующей в полимере или линкере, с получением триольно-боратной структуры. Триольно-боратная структура представляет собой структуру, представленную, например, формулой (IV-a), приведенной ниже. Further, if an ester structure such as in formulas (VIII-a) and (VIII-b) above is obtained, it can be reacted with an additional hydroxyl group present in the polymer or linker to form a triol borate structure. The triol borate structure is the structure represented by, for example, formula (IV-a) below.

[Хим. стр. 18] [Chem. page 18]

где, Where,

стрелка показывает связь со смежным атомом, the arrow shows the bond with the adjacent atom,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F, или ¹⁹F, и X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F, or ¹⁹ F, and

Y⁺ представляет собой, например, Н⁺, ион щелочного металла, или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония. Y ⁺ is, for example, H ⁺ , an alkali metal ion, or a tetra-C _1-6 alkyl ammonium ion.

[0035] [0035]

Далее, если получают сложноэфирную структуру, такую как в формулах (VIII-a) и (VIII-b), приведенных выше, то может быть получена структура сложного эфира бороновой кислоты, где гидроксильная группа связана с бором, в водном растворе. Такие структуры сложного эфира бороновой кислоты имеют структуры, представленные, например, формулами (IV-b) и (IV-c), приведенными ниже. Further, if an ester structure such as in the formulas (VIII-a) and (VIII-b) above is obtained, a boronic acid ester structure wherein the hydroxyl group is bonded to boron can be obtained in an aqueous solution. Such boronic acid ester structures have structures represented by, for example, formulas (IV-b) and (IV-c) below.

[Хим. стр. 19] [Chem. page 19]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом, the arrows show the bond with the adjacent atom,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F, или ¹⁹F, и X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F, or ¹⁹ F, and

Y⁺ представляет собой, например, Н⁺, ион щелочного металла, или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония. Y ⁺ is, for example, H ⁺ , an alkali metal ion, or a tetra-C _1-6 alkyl ammonium ion.

[0036] [0036]

Кроме того, например, фрагмент бороновой кислоты может быть подвергнут реакции с фрагментом дикарбоновой кислоты, присутствующим на полимере или линкере, с получением структуры, такой как структура, представленная формулой (VIII-d), приведенной ниже. In addition, for example, a boronic acid moiety can be reacted with a dicarboxylic acid moiety present on a polymer or a linker to obtain a structure such as that represented by formula (VIII-d) below.

[Хим. стр. 20] [Chem. page 20]

где, Where,

стрелка показывает связь со смежным атомом, и the arrow shows the bond to the adjacent atom, and

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F, или ¹⁹F. X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F, or ¹⁹ F.

[0037] [0037]

Число групп, представленных формулой (I), в производном BPA по настоящему изобретению особым образом не ограничивается при условии, что действие производного BPA не ингибируется. Нижний предел числа вышеупомянутых групп составляет, например, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, или 100, и верхний предел числа вышеупомянутых групп составляет, например, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, или 5000. Число вышеупомянутых групп составляет предпочтительно 2 или более. В том случае, когда число групп, представленных формулой (I), в производном BPA по настоящему изобретению составляет 2 или более, группы, представленные формулой (I), могут быть одинаковыми или различными. В результате образования многочисленных связей со множеством аминокислотных транспортеров (в частности, LAT1) на опухолевых клетках посредством множества групп, представленных формулой (I), способность к связыванию производного BPA по настоящему изобретению с аминокислотными транспортерами значительно повышается по сравнению со способностью к связыванию BPA как такового с аминокислотным транспортером. Более предпочтительно, число групп, представленных формулой (I), составляет 2-5000, 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-300, 2-200, 10-5000, 10-2000, 10-1000, 10-500, 10-300, или 10-200. Следует отметить, что реакция между бороновой кислотой и гидроксильной группой является равновесной реакцией. Так, в том случае, когда производное BPA по настоящему изобретению имеет структуру сложного эфира бороновой кислоты, число групп, представленных формулой (I), содержащихся в производном BPA по настоящему изобретению, варьируется в зависимости от концентрации бороновой кислоты и полимера в растворе, который образует производное BPA по настоящему изобретению. The number of groups represented by formula (I) in the BPA derivative of the present invention is not particularly limited as long as the action of the BPA derivative is not inhibited. The lower limit of the number of the above groups is, for example, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, or 100, and the upper the limit of the number of the above groups is, for example, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, or 5000. The number of the above groups is preferably 2 or more. When the number of groups represented by formula (I) in the BPA derivative of the present invention is 2 or more, the groups represented by formula (I) may be the same or different. By forming numerous bonds with a plurality of amino acid transporters (particularly LAT1) on tumor cells through a plurality of groups represented by formula (I), the binding ability of the BPA derivative of the present invention to amino acid transporters is greatly enhanced compared to the binding ability of BPA itself. with an amino acid transporter. More preferably, the number of groups represented by formula (I) is 2-5000, 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-300, 2-200, 10-5000, 10-2000, 10-1000, 10 -500, 10-300, or 10-200. It should be noted that the reaction between boronic acid and the hydroxyl group is an equilibrium reaction. Thus, in the case where the BPA derivative of the present invention has a boronic acid ester structure, the number of groups represented by formula (I) contained in the BPA derivative of the present invention varies depending on the concentration of boronic acid and polymer in the solution that forms the BPA derivative of the present invention.

[0038] [0038]

Полимер, содержащийся в производном BPA по настоящему изобретению, особым образом не ограничивается при условии, что не ингибируется действие производного BPA. Полимер может быть линейным или разветвленным и может представлять собой гомополимер или сополимер. В случае сополимеров, сополимер может быть статистическим сополимером или блок-сополимером. Полимер, содержащийся в производном BPA по настоящему изобретению, предпочтительно представляет собой водорастворимый полимер. Полимеры, которые могут быть использованы в производном BPA по настоящему изобретению, включают, например, поливиниловый спирт, полиуретан, сложный полиэфир, полиамид, поликарбонат, полиимид, простой полиэфир, полиакрилат, полиакриламид, полисилоксан, поливинил, полипептид, полисахарид, полинуклеотид, и их сополимеры. Предпочтительно, полимер представляет собой поливиниловый спирт, сложный полиэфир, простой полиэфир, полиакрилат, полиакриламид, полипептид, полисахарид, и их сополимеры. Более предпочтительно, полимер представляет собой поливиниловый спирт или полипептид. The polymer contained in the BPA derivative of the present invention is not particularly limited as long as the action of the BPA derivative is not inhibited. The polymer may be linear or branched and may be a homopolymer or copolymer. In the case of copolymers, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer. The polymer contained in the BPA derivative of the present invention is preferably a water-soluble polymer. Polymers that can be used in the BPA derivative of the present invention include, for example, polyvinyl alcohol, polyurethane, polyester, polyamide, polycarbonate, polyimide, polyether, polyacrylate, polyacrylamide, polysiloxane, polyvinyl, polypeptide, polysaccharide, polynucleotide, and their copolymers. Preferably, the polymer is polyvinyl alcohol, polyester, polyether, polyacrylate, polyacrylamide, polypeptide, polysaccharide, and their copolymers. More preferably, the polymer is a polyvinyl alcohol or a polypeptide.

[0039] [0039]

Нижний предел среднечисловой молекулярной массы производного BPA по настоящему изобретению составляет, например, 1000 Да, 2000 Да, 3000 Да, 4000 Да, 5000 Да, 6000 Да или 7000 Да (предпочтительно 5000 Да), и ее верхний предел, хотя и не ограничивается особым образом, составляет, например, 1500000 Да, 1000000 Да, 500000 Да, 300000 Да, 100000 Да, 70000 Да или 50000 Да. Среднечисловая молекулярная масса производного BPA по настоящему изобретению составляет предпочтительно 1000 Да или более, более предпочтительно от 3000 Да до 150000 Да, и еще более предпочтительно от 6000 Да до 70000 Да. В данном документе, если не задано иное, среднечисловая молекулярная масса имеет значение, определяемое вычислением на основе интегрированного значения по ¹Н-ЯМР спектру. The lower limit of the number average molecular weight of the BPA derivative of the present invention is, for example, 1000 Da, 2000 Da, 3000 Da, 4000 Da, 5000 Da, 6000 Da or 7000 Da (preferably 5000 Da), and its upper limit, although not particularly limited thus is, for example, 1500000 Da, 1000000 Da, 500000 Da, 300000 Da, 100000 Da, 70000 Da or 50000 Da. The number average molecular weight of the BPA derivative of the present invention is preferably 1,000 Da or more, more preferably 3,000 Da to 150,000 Da, and even more preferably 6,000 Da to 70,000 Da. In this document, unless otherwise specified, the number average molecular weight has a value determined by calculation based on the integrated value of ¹ H-NMR spectrum.

[0040] [0040]

В том случае, когда группа, представленная формулой (I), связана с полимером через линкер, линкер содержит группу, которая может связываться с BPA. Предпочтительно, эта группа представляет собой гидроксильную группу или карбоксильную группу. Предпочтительно, линкер содержит, по меньшей мере, 2 гидроксильные группы или, по меньшей мере, 2 карбоксильные группы. Линкер особым образом не ограничивается при условии, что не ингибируется функция производного BPA по настоящему изобретению, но может представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу, замещенную посредством 2 гидроксильных групп. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 гидроксильных групп, смежные метиленовые группы могут быть соединены друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, или 5-10-членный гетероарилен. Кроме того, линкер включает, например, полиолы (например, катехолы и полифенолы), сахара (например, фруктозу), сахарные спирты (например, сорбит) и глюкамин. К тому же, линкер включает, например, соединения, представленные формулой (X-a) и формулой (XII-a), приведенными ниже. When the group represented by formula (I) is linked to the polymer via a linker, the linker contains a group that can bind to BPA. Preferably, this group is a hydroxyl group or a carboxyl group. Preferably, the linker contains at least 2 hydroxyl groups or at least 2 carboxyl groups. The linker is not particularly limited as long as the function of the BPA derivative of the present invention is not inhibited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group substituted with 2 hydroxyl groups. Herein, the methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, the methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, the methylene groups in C _1-40 - alkylene group can be substituted by 1-10 hydroxyl groups, adjacent methylene groups can be connected to each other by 1-10 unsaturated bonds, and among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N( C _1-10 alkyl), O, S, C _6-14 arylene, or 5-10 membered heteroarylene. In addition, the linker includes, for example, polyols (eg catechols and polyphenols), sugars (eg fructose), sugar alcohols (eg sorbitol) and glucamine. In addition, the linker includes, for example, compounds represented by formula (Xa) and formula (XII-a) below.

[Хим. стр. 21] [Chem. page 21]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом. the arrows show the bond to the adjacent atom.

[0041] [0041]

Производное BPA по настоящему изобретению может содержать, по меньшей мере, один тип детектируемой метки. В данном документе, «детектируемая метка» представляет собой любой атом или соединение, который(-ое) может быть детектирован(-о) любым существующим средством детектирования. Средство детектирования особым образом не ограничивается, но может включать, например, визуальное обследование, использование оптических контрольно-измерительных приборов (например, оптического микроскопа, флюоресцентного микроскопа, фазоконтрастного микроскопа, оборудования для визуализации in vivo), рентгеновского оборудования (например, простого рентгеновского прибора, оборудования для CT (компьютерной томографии)), оборудования для MRI (магнитно-резонансной визуализации), оборудования для обследования методом медицинской радиологии (например, оборудования для сцинтиграфии, оборудования для PET (позитронно-эмиссионной томографии), оборудования для SPECT (однофотонной эмиссионной компьютерной томографии)), оборудования для ультразвукового обследования и оборудования для термографии. Специалист в данной области знает соответственные метки для каждого средства обнаружения, что раскрыто, например, в публикации Lecchi et al., Q J Nucl Med Mol Imaging. 2007; 51 (2): pp. 111-26. Детектируемая метка особым образом не ограничивается, но может, например, включать флуоресцентные метки, люминесцентные метки, контрастные агенты, атомы металла, соединения, содержащие один или более атомов металла, радиоизотопы, соединения, содержащие один или более радиоизотопов, наночастицы, и липосомы. Местоположение, в которое вводят детектируемую метку в производное BPA по настоящему изобретению, особым образом не ограничивается. Например, детектируемая метка может быть введена в концевые группы полимера или может быть введена напрямую или через линкер в заместитель (например, гидроксильную группу), имеющийся в полимере. The BPA derivative of the present invention may contain at least one type of detectable label. As used herein, a "detectable label" is any atom or compound that can be detected by any existing detection means. The detection means is not particularly limited, but may include, for example, visual examination, use of optical inspection instruments (for example, an optical microscope, fluorescence microscope, phase contrast microscope, in vivo imaging equipment), X-ray equipment (for example, a simple X-ray instrument, CT (Computed Tomography) equipment), MRI (Magnetic Resonance Imaging) equipment, Medical Radiology equipment (e.g. Scintigraphy equipment, PET (Positron Emission Tomography) equipment), SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography) equipment )), equipment for ultrasound examination and equipment for thermography. One skilled in the art knows the appropriate labels for each detection means, as disclosed, for example, in Lecchi et al., QJ Nucl Med Mol Imaging. 2007; 51(2): pp. 111-26. The detectable label is not particularly limited, but may, for example, include fluorescent labels, luminescent labels, contrast agents, metal atoms, compounds containing one or more metal atoms, radioisotopes, compounds containing one or more radioisotopes, nanoparticles, and liposomes. The location at which the detectable label is introduced into the BPA derivative of the present invention is not particularly limited. For example, a detectable label may be introduced at the end groups of the polymer, or may be introduced directly or through a linker into a substituent (eg, a hydroxyl group) present in the polymer.

[0042] [0042]

Метки, подходящие для детектирования путем визуального обследования или путем использования оптических контрольно-измерительных приборов, включают, например, различные флуоресцентные и люминесцентные метки. Конкретные флуоресцентные метки не ограничиваются особым образом, но могут быть использованы, например, серия Cy™ (например, Cy™ 2, 3, 5, 5.5, 7, и т.д.), серия DyLight™ (например, DyLight™ 405, 488, 549, 594, 633, 649, 680, 750, 800, и т.д.), серия Alexa Fluor® (например, Alexa Fluor® 405, 488, 549, 594, 633, 647, 680, 750, и т.д.), серия HiLyte Fluor® (например, HiLyte Fluor™ 488, 555, 647, 680, 750, и т.д.), серия ATTO (например, ATTO 488, 550, 633, 647N, 655, 740, и т.д.), FAM, FITC, Texas Red, GFP, RFP, Qdot, IRDye® (например, IRDye® 700DX). Labels suitable for detection by visual inspection or by using optical instrumentation include, for example, various fluorescent and luminescent labels. Specific fluorescent labels are not particularly limited, but may be used, for example, Cy™ series (for example, Cy™ 2, 3, 5, 5.5, 7, etc.), DyLight™ series (for example, DyLight™ 405, 488, 549, 594, 633, 649, 680, 750, 800, etc.), Alexa Fluor® series (e.g. Alexa Fluor® 405, 488, 549, 594, 633, 647, 680, 750, and etc.), HiLyte Fluor® series (e.g. HiLyte Fluor™ 488, 555, 647, 680, 750, etc.), ATTO series (e.g. ATTO 488, 550, 633, 647N, 655, 740 , etc.), FAM, FITC, Texas Red, GFP, RFP, Qdot, IRDye® (e.g. IRDye® 700DX).

[0043] [0043]

Далее, конкретные люминесцентные метки особым образом не ограничиваются, но могут быть использованы, например, люминол, люциферин, люцигенин, и экворин. Further, specific luminescent labels are not particularly limited, but luminol, luciferin, lucigenin, and aequorin, for example, can be used.

[0044] [0044]

Метки, подходящие для детектирования при помощи использования рентгеновского оборудования, включают, например, различные контрастные агенты. Конкретные контрастные агенты особым образом не ограничиваются, но могут быть использованы, например, атомы йода, ионы йода, и йод-содержащие соединения. Labels suitable for detection using x-ray equipment include, for example, various contrast agents. Specific contrast agents are not particularly limited, but iodine atoms, iodine ions, and iodine-containing compounds, for example, can be used.

[0045] [0045]

Метки, подходящие для детектирования с использованием оборудования для MRI, включают, например, различные атомы металла или соединения, содержащие1 или более типов атома металла, например, комплекс, содержащий один или более атомов металла. Конкретно, метки особым образом не ограничиваются, но могут включать, например, гадолиний (III) (Gd(III)), иттрий-88 (⁸⁸Y), индий-111 (¹¹¹In); их комплексы с лигандами, такими как диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA), тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксуснаякислота (DOTA), (1,2-этандиилдинитрило)тетрауксусная кислота (EDTA), этилендиамин, 2,2'-бипиридин (bipy), 1,10-фенантролин (phen), 1,2-бис(дифенилфосфино)этан (DPPE), 2,4-пентандион (acac), оксалат (ox); и суперпарамагнитный оксид железа (SPIO), и оксид марганца (MnO). Labels suitable for detection using MRI equipment include, for example, various metal atoms or compounds containing 1 or more types of metal atom, for example, a complex containing one or more metal atoms. Specifically, the labels are not particularly limited, but may include, for example, gadolinium (III) (Gd(III)), yttrium-88 ( ⁸⁸ Y), indium-111 ( ¹¹¹ In); their complexes with ligands such as diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA), tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid (DOTA), (1,2-ethanediyldinitrilo)tetraacetic acid (EDTA), ethylenediamine, 2,2'-bipyridine ( bipy), 1,10-phenanthroline (phen), 1,2-bis(diphenylphosphino)ethane (DPPE), 2,4-pentanedione (acac), oxalate (ox); and superparamagnetic iron oxide (SPIO), and manganese oxide (MnO).

[0046] [0046]

Примеры меток, подходящих для детектирования с использованием оборудования для обследования методом медицинской радиологии, включают, например, различные радиоизотопы и соединения, содержащие один или более радиоизотопов, например, комплекс одного или более радиоизотопов. Радиоизотопы особым образом не ограничиваются, но могут включать, например, технеций-99m (^99mTc), индий-111 (¹¹¹In), йод-123 (¹²³I), йод-124 (¹²⁴I), йод-125 (¹²⁵I), йод-131 (¹³¹I), таллий-201 (²⁰¹Tl), углерод-11 (¹¹C), азот-13 (¹³C), кислород-15 (¹⁵O), фтор-18 (¹⁸F), медь-64 (⁶⁴Cu), галлий-67 (⁶⁷Ga), криптон-81m (^81mKr), ксенон-133 (¹³³Xe), стронций-89 (⁸⁹Sr), иттрий-90 (⁹⁰Y). Кроме того, соединения, которые содержат радиоизотопы, особым образом не ограничиваются, но могут включать, например, ¹²³I-IMP, ^99mTc-HMPAO, ^99mTc-ECD, ^99mTc-MDP, ^99mTc-тетрофосмин, ^99mTc-MIBI, ^99mTcO₄-, ^99mTc-MAA, ^99mTc-MAG3, ^99mTc-DTPA, ^99mTc-DMSA, ¹⁸F-FDG. Examples of labels suitable for detection using medical radiology equipment include, for example, various radioisotopes and compounds containing one or more radioisotopes, such as a complex of one or more radioisotopes. Radioisotopes are not particularly limited, but may include, for example, technetium-99m ( ^99m Tc), indium-111 ( ¹¹¹ In), iodine-123 ( ¹²³ I), iodine-124 ( ¹²⁴ I), iodine-125 ( ¹²⁵ I ), iodine-131 ( ¹³¹ I), thallium-201 ( ²⁰¹ Tl), carbon-11 ( ¹¹ C), nitrogen-13 ( ¹³ C), oxygen-15 ( ¹⁵ O), fluorine-18 ( ¹⁸ F), copper-64 ( ⁶⁴ Cu), gallium-67 ( ⁶⁷ Ga), krypton-81m ( ^81m Kr), xenon-133 ( ¹³³ Xe), strontium-89 ( ⁸⁹ Sr), yttrium-90 ( ⁹⁰ Y). In addition, compounds that contain radioisotopes are not particularly limited, but may include, for example, ¹²³ I-IMP, ^99m Tc-HMPAO, ^99m Tc-ECD, ^99m Tc-MDP, ^99m Tc-tetrofosmin, ^99m Tc-MIBI, ^99m TcO ₄ -, ^99m Tc-MAA, ^99m Tc-MAG3, ^99m Tc-DTPA, ^99m Tc-DMSA, ¹⁸ F-FDG.

[0047] [0047]

Метки, подходящие для детектирования с помощью оборудования для ультразвукового обследования, особым образом не ограничиваются, но могут включать, например, наночастицы или липосомы. Labels suitable for detection by ultrasound equipment are not particularly limited, but may include, for example, nanoparticles or liposomes.

[0048] [0048]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (II), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль. In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (II) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[Хим. стр. 22] [Chem. page 22]

где, Where,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

L¹ и L², каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ¹ and L ² are each independently a linker or absent,

R¹ и R², каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹ and R ² are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

m имеет значение от 0 до 3998, m has a value from 0 to 3998,

n имеет значение от 1 до 2000, n has a value from 1 to 2000,

m+2n=от 10 до 4000, и m+2n=10 to 4000, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным (то есть, сополимер может представлять собой статистический сополимер или блок-сополимер). the order of repeating units is arbitrary (ie, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer).

[0049] [0049]

m и n представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для m составляет 0, но предпочтительно составляет 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для m имеет значение 3998, но предпочтительно имеет значение 3998, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20, или 10. Нижний предел для n имеет значение 1, но предпочтительно составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, или 10. Верхний предел для n составляет 2000, но предпочтительно имеет значение 2000, 1990, 1980, 1970, 1960, 1950, 1900, 1800, 1700, 1600, 1500, 1400, 1300, 1200, 1100, или 500. Нижний предел для (m+2n) составляет 10, но предпочтительно имеет значение 10, 20, 30, 40, или 50. Верхний предел для (m+2n) составляет 4000, но предпочтительно имеет значение 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, или 200. m и n могут быть вычислены проведением количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. m and n represent the degree of polymerization. The lower limit for m is 0, but is preferably 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for m is 3998, but preferably is 3998, 3500, 3000, 2500 , 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20, or 10. The lower limit for n is 1, but is preferably 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10. The upper limit for n is 2000, but is preferably 2000, 1990, 1980, 1970, 1960, 1950, 1900, 1800, 1700, 1600, 1500 , 1400, 1300, 1200, 1100, or 500. The lower limit for (m+2n) is 10, but is preferably 10, 20, 30, 40, or 50. The upper limit for (m+2n) is 4000, but preferably has a value of 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, or 200. m and n can be calculated by quantifying the integrated value over the spectrum ¹ H-NMR.

[0050] [0050]

L¹ и/или L², в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, или 2-10. Линкер может иметь, например, следующую структуру. L ¹ and/or L ² when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene or polyoxyalkylene having a degree of polymerization of 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, or 2-10. The linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 23] [Chem. page 23]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

Кроме того, линкер может иметь, например, следующую структуру. In addition, the linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 24] [Chem. page 24]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0051] [0051]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (III), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль. In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (III) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[Хим. стр. 25] [Chem. page 25]

где, Where,

L³ и L⁴, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ³ and L ⁴ are each independently a linker or absent,

R³ и R⁴, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ³ and R ⁴ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^5a, каждый независимо, представляют собой группу, представленную формулой (IV-a) или (IV-b), приведенной ниже, R ^5a each independently represent a group represented by formula (IV-a) or (IV-b) below,

[Хим. стр. 26] [Chem. page 26]

где, стрелки показывают связь с NH, where, the arrows show the connection with NH,

R^5b, каждый независимо, представляют собой группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных формулами (IV-с) - (IV-g), приведенными ниже, R ^5b each independently represent a group selected from the group consisting of groups represented by formulas (IV-c) - (IV-g) below,

[Хим. стр. 27] [Chem. page 27]

где, Where,

стрелки показывают связь с NH, the arrows show the connection with NH,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

Y⁺ представляет собой H⁺, ион щелочного металла, или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония (например, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, тетра-n-пропиламмония, тетра-n-бутиламмония, тетра-n-пентиламмония, тетра-n-гексиламмония), Y ⁺ represents H ⁺ , an alkali metal ion, or a tetra-C _1-6 -alkyl-ammonium ion (for example, tetramethylammonium, tetraethylammonium, tetra-n-propylammonium, tetra-n-butylammonium, tetra-n-pentylammonium, tetra- n-hexylammonium),

p=от 0 до 299, p=0 to 299,

q=от 1 до 300, q=1 to 300,

r=от 0 до 299, r=0 to 299,

p+q+r=от 10 до 300, и p+q+r=10 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным (то есть, сополимер может представлять собой статистический сополимер или блок-сополимер). the order of repeating units is arbitrary (ie, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer).

[0052] [0052]

В данном документе, «R^5a, каждый независимо,» означает, что, когда имеется множество повторяющихся звеньев, также имеется множество R^5a, которые находятся в повторяющихся звеньях, но эти R^5a могут совпадать или отличаться друг от друга. «R^5b, каждый независимо,» имеет притом аналогичное значение. Here, "R ^5a each independently" means that when there are multiple repeat units, there are also multiple R ^5a that are in repeat units, but these R ^5a may be the same or different from each other. "R ^5b , each independently," has a similar meaning, moreover.

[0053] [0053]

p, q и r представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для p составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для p составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для q составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для q составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для r составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для r составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для (p+q+r) составляет 10, но предпочтительно имеет значение 10, 20 или 30. Верхний предел для (p+q+r) составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. p, q и r могут быть вычислены в результате проведения количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. p, q and r represent the degree of polymerization. The lower limit for p is 0, but preferably is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for p is 299, but preferably is 299, 290, 280, 270 , 260, or 250. The lower limit for q is 1, but preferably is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for q is 300, but preferably is 300, 290 , 280, 270, 260, or 250. The lower limit for r is 0, but is preferably 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for r is 299, but preferably 299, 290, 280, 270, 260, or 250. The lower limit for (p+q+r) is 10, but preferably it is 10, 20, or 30. The upper limit for (p+q+r) is 300, but preferably has a value of 300, 290, 280, 270, 260, or 250. p, q and r can be calculated as a result of quantification based on the integrated value of ^{the 1} H-NMR spectrum.

[0054] [0054]

L³ и/или L⁴, в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, или 2-10. Линкер может иметь, например, следующую структуру. L ³ and/or L ⁴ when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene or polyoxyalkylene having a degree of polymerization of 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, or 2-10. The linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 28] [Chem. page 28]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

Кроме того, линкер может иметь, например, следующую структуру. In addition, the linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 29] [Chem. page 29]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0055] [0055]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (V), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль. In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (V) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[Хим. стр. 30] [Chem. page 30]

где, Where,

L⁵ и L⁶, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ⁵ and L ⁶ are each independently a linker or absent,

R⁶ и R⁷, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ⁶ and R ⁷ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^8a, каждый независимо, представляют собой группу, представленную формулой (VI-a), приведенной ниже, R ^8a are each independently a group represented by formula (VI-a) below,

[Хим. стр. 31] [Chem. page 31]

где, стрелка показывает связь с карбонильным углеродом, where, the arrow indicates the bond to the carbonyl carbon,

R^8b, каждый независимо, представляют собой группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных формулами (VI-b)-(VI-h), приведенными ниже, R ^8b each independently represent a group selected from the group consisting of groups represented by formulas (VI-b)-(VI-h) below,

[Хим. стр. 32] [Chem. page 32]

где, Where,

стрелки показывают связь с карбонильным углеродом, the arrows show the bond to the carbonyl carbon,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

s=от 0 до 299, s=0 to 299,

t=от 1 до 300, t=1 to 300,

u=от 0 до 299, u=0 to 299,

s+t+u=от 2 до 300, и s+t+u=2 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным (то есть, сополимер может представлять собой статистический сополимер или блок-сополимер). the order of repeating units is arbitrary (ie, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer).

[0056] [0056]

В данном документе, «R^8b, каждый независимо,» означает, что, когда имеется множество повторяющихся звеньев, также существует множество R^8b, которые находятся в повторяющихся звеньях, но эти R^8b могут совпадать или отличаться друг от друга. Herein, "R ^8b each independently" means that when there are multiple repeat units, there are also multiple R ^8b that are in repeat units, but these R ^8b may be the same or different from each other.

[0057] [0057]

s, t и u представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для s составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для s составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для t составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для t составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для u составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для u составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для (s+t+u) составляет 2, но предпочтительно имеет значение 2, 3, 4 или 5. Верхний предел для (s+t+u) составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. s, t и u могут быть вычислены в результате проведения количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. s, t and u represent the degree of polymerization. The lower limit for s is 0, but preferably is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for s is 299, but preferably is 299, 290, 280, 270 , 260, or 250. The lower limit for t is 1, but preferably is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for t is 300, but preferably is 300, 290 , 280, 270, 260, or 250. The lower limit for u is 0, but is preferably 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for u is 299, but preferably has a value of 299, 290, 280, 270, 260, or 250. The lower limit for (s+t+u) is 2, but preferably has a value of 2, 3, 4, or 5. The upper limit for (s+t+u ) is 300, but preferably has a value of 300, 290, 280, 270, 260, or 250. s, t and u can be calculated as a result of quantification based on the integrated value of ^{the 1} H-NMR spectrum.

[0058] [0058]

L⁵ и/или L⁶, в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 50-500. Линкер может иметь, например, следующую структуру, L ⁵ and/or L ⁶ when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene, or polyoxyalkylene, having a degree of polymerization of 50-500. A linker may have, for example, the following structure,

[Хим. стр. 33] [Chem. page 33]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

Кроме того, линкер может иметь, например, следующую структуру. In addition, the linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 34] [Chem. page 34]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0059] [0059]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (IX), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль. In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (IX) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[Хим. стр. 35] [Chem. page 35]

где, Where,

L⁷ и L⁸, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ⁷ and L ⁸ are each independently a linker or absent,

R⁹ и R¹⁰, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ⁹ and R ¹⁰ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^11a представлено формулой (X-a), приведенной ниже, R ^11a is represented by formula (Xa) below,

[Хим. стр. 36] [Chem. page 36]

где, стрелка показывает связь с NH, where, the arrow shows the connection with NH,

R^11b, каждый независимо, представляют собой группу, представленную формулой (X-b), приведенной ниже, R ^11b each independently represent a group represented by formula (Xb) below,

[Хим. стр. 37] [Chem. page 37]

где, Where,

стрелка показывает связь с NH, the arrow shows the connection with NH,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

Y⁺ представляет собой H⁺, ион щелочного металла, или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония (например, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, тетра-n-пропиламмония, тетра-n-бутиламмония, тетра-n-пентиламмония, тетра-n-гексиламмония), Y ⁺ represents H ⁺ , an alkali metal ion, or a tetra-C _1-6 -alkyl-ammonium ion (for example, tetramethylammonium, tetraethylammonium, tetra-n-propylammonium, tetra-n-butylammonium, tetra-n-pentylammonium, tetra- n-hexylammonium),

e=от 0 до 299, e=0 to 299,

f=от 1 до 300, f=from 1 to 300,

g=от 0 до 299, g=0 to 299,

e+f+g=от 10 до 300, и e+f+g=10 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным (то есть, сополимер может представлять собой статистический сополимер или блок-сополимер). the order of repeating units is arbitrary (ie, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer).

[0060] [0060]

В данном документе, «R^11b, каждый независимо,» означает, что, когда имеется множество повторяющихся звеньев, также имеется множество R^11b, которые находятся в повторяющихся звеньях, но эти R^11b могут совпадать или отличаться друг от друга. Herein, "R ^11b each independently" means that when there are multiple repeat units, there are also multiple R ^11b that are in repeat units, but these R ^11b may be the same or different from each other.

[0061] [0061]

e, f и g представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для e составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для e составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для f составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для f составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для g составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для g составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для (e+f+g) составляет 10, но предпочтительно имеет значение 10, 20 или 30. Верхний предел для (e+f+g) составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. e, f и g могут быть вычислены в результате проведения количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. e, f and g represent the degree of polymerization. The lower limit for e is 0, but preferably is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for e is 299, but preferably is 299, 290, 280, 270 , 260, or 250. The lower limit for f is 1, but preferably is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for f is 300, but preferably is 300, 290 , 280, 270, 260, or 250. The lower limit for g is 0, but is preferably 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for g is 299, but preferably 299, 290, 280, 270, 260, or 250. The lower limit for (e+f+g) is 10, but preferably it is 10, 20, or 30. The upper limit for (e+f+g) is 300, but preferably has a value of 300, 290, 280, 270, 260, or 250. e, f and g can be calculated as a result of quantitative evaluation based on the integrated value of ^{the 1} H-NMR spectrum.

[0062] [0062]

L⁷ и/или L⁸, в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, или 2-10. Линкер может иметь, например, следующую структуру. L ⁷ and/or L ⁸ when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene or polyoxyalkylene having a degree of polymerization of 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, or 2-10. The linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 38] [Chem. page 38]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

Кроме того, линкер может иметь, например, следующую структуру, In addition, the linker may have, for example, the following structure,

[Хим. стр. 39] [Chem. page 39]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0063] [0063]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (XI), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль, In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (XI) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

[Хим. стр. 40] [Chem. page 40]

где, Where,

L⁹ и L¹⁰, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ⁹ and L ¹⁰ are each independently a linker or absent,

R¹² и R¹³, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹² and R ¹³ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^14a представлено формулой (XII-a), приведенной ниже, R ^14a is represented by formula (XII-a) below,

[Хим. стр. 41] [Chem. page 41]

где, стрелка показывает связь с NH, where, the arrow shows the connection with NH,

R^14b, каждый независимо, представлен формулой (XII-b), приведенной ниже, R ^14b is each independently represented by formula (XII-b) below,

[Хим. стр. 42] [Chem. page 42]

где, Where,

стрелка показывает связь с NH, the arrow shows the connection with NH,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

Y⁺ представляет собой H⁺, ион щелочного металла, или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония (например, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, тетра-n-пропиламмония, тетра-n-бутиламмония, тетра-n-пентиламмония, тетра-n-гексиламмония), Y ⁺ represents H ⁺ , an alkali metal ion, or a tetra-C _1-6 -alkyl-ammonium ion (for example, tetramethylammonium, tetraethylammonium, tetra-n-propylammonium, tetra-n-butylammonium, tetra-n-pentylammonium, tetra- n-hexylammonium),

h=от 0 до 299, h=0 to 299,

i=от 1 до 300, i=1 to 300,

k=от 0 до 299, k=0 to 299,

h+i+k=от 10 до 300, и h+i+k=10 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным (то есть, сополимер может представлять собой статистический сополимер или блок-сополимер). the order of repeating units is arbitrary (ie, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer).

[0064] [0064]

В данном документе, «R^14b, каждый независимо,» означает, что, когда имеется множество повторяющихся звеньев, также имеется множество R^14b, которые находятся в повторяющихся звеньях, но эти R^14b могут совпадать или отличаться друг от друга. Herein, "R ^14b each independently" means that when there are multiple repeat units, there are also multiple R ^14b that are in repeat units, but these R ^14b may be the same or different from each other.

[0065] [0065]

h, i и k представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для h составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для h составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для i составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для i составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для k составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для k составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для (h+i+k) составляет 10, но предпочтительно имеет значение 10, 20 или 30. Верхний предел для (h+i+k) составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. h, i и k могут быть вычислены в результате проведения количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. h, i and k represent the degree of polymerization. The lower limit for h is 0, but preferably is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for h is 299, but preferably is 299, 290, 280, 270 , 260, or 250. The lower limit for i is 1, but preferably is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for i is 300, but preferably is 300, 290 , 280, 270, 260, or 250. The lower limit for k is 0, but is preferably 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for k is 299, but preferably 299, 290, 280, 270, 260, or 250. The lower limit for (h+i+k) is 10, but preferably it is 10, 20, or 30. The upper limit for (h+i+k) is 300, but preferably has a value of 300, 290, 280, 270, 260, or 250. h, i and k can be calculated as a result of quantitative evaluation based on the integrated value of ^{the 1} H-NMR spectrum.

[0066] [0066]

L⁹ и/или L¹⁰, в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, или 2-10. Линкер может иметь, например, следующую структуру. L ⁹ and/or L ¹⁰ when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene or polyoxyalkylene having a degree of polymerization of 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, or 2-10. The linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 43] [Chem. page 43]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

Кроме того, линкер может иметь, например, следующую структуру, In addition, the linker may have, for example, the following structure,

[Хим. стр. 44] [Chem. page 44]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0067] [0067]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (XX), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль, In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (XX) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

[Хим. стр. 45] [Chem. page 45]

где, Where,

L¹¹ и L¹², каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ¹¹ and L ¹² are each independently a linker or absent,

R¹⁵ и R¹⁶, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹⁵ and R ¹⁶ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R^17a означает группу, представленную формулой (XXI-a), приведенной ниже, R ^17a means a group represented by formula (XXI-a) below,

[Хим. стр. 46] [Chem. page 46]

где, стрелка показывает связь с NH, where, the arrow shows the connection with NH,

R^17b, каждый независимо, представляет собой группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных формулами (XXI-b)-(XXI-h), приведенными ниже, R ^17b each independently represents a group selected from the group consisting of groups represented by formulas (XXI-b)-(XXI-h) below,

[Хим. стр. 47] [Chem. page 47]

где, Where,

стрелки показывают связь с NH, the arrows show the connection with NH,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

x=от 0 до 299, x=0 to 299,

y=от 1 до 300, y=1 to 300,

z=от 0 до 299, z=0 to 299,

x+y+z=от 10 до 300, и x+y+z=10 to 300, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным (то есть, сополимер может представлять собой статистический сополимер или блок-сополимер). the order of repeating units is arbitrary (ie, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer).

[0068] [0068]

В данном документе, «R^17b, каждый независимо,» означает, что, когда имеется множество повторяющихся звеньев, также имеется множество R^17b, которые находятся в повторяющихся звеньях, но эти R^17b могут совпадать или отличаться друг от друга. Herein, "R ^17b each independently" means that when there are multiple repeat units, there are also multiple R ^17b that are in repeat units, but these R ^17b may be the same or different from each other.

[0069] [0069]

x, y и z представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для x составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для x составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для y составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для y составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для z составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для z составляет 299, но предпочтительно имеет значение 299, 290, 280, 270, 260, или 250. Нижний предел для (x+y+z) составляет 10, но предпочтительно имеет значение 10, 20 или 30. Верхний предел для (x+y+z) составляет 300, но предпочтительно имеет значение 300, 290, 280, 270, 260, или 250. x, y и z могут быть вычислены в результате проведения количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. x, y and z represent the degree of polymerization. The lower limit for x is 0, but preferably is 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for x is 299, but preferably is 299, 290, 280, 270 , 260, or 250. The lower limit for y is 1, but preferably is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for y is 300, but preferably is 300, 290 , 280, 270, 260, or 250. The lower limit for z is 0, but is preferably 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for z is 299, but preferably 299, 290, 280, 270, 260, or 250. The lower limit for (x+y+z) is 10, but preferably it is 10, 20, or 30. The upper limit for (x+y+z) is 300, but preferably has a value of 300, 290, 280, 270, 260, or 250. x, y and z can be calculated as a result of quantification based on the integrated value of ^{the 1} H-NMR spectrum.

[0070] [0070]

L¹¹ и/или L¹², в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, или 2-10. Линкер может иметь, например, следующую структуру. L ¹¹ and/or L ¹² when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene or polyoxyalkylene having a degree of polymerization of 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, or 2-10. The linker may have, for example, the following structure.

[Хим. стр. 48] [Chem. page 48]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0071] [0071]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, производное BPA по настоящему изобретению представляет собой соединение, представленное формулой (XXII), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемую соль, In one embodiment of the present invention, the BPA derivative of the present invention is a compound represented by formula (XXII) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

[Хим. стр. 49][Chem. page 49]

где, Where,

X¹-X⁴, каждый независимо, представляют собой Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ each independently represent H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

L¹³ и L¹⁴, каждый независимо, представляют собой линкер или отсутствуют, L ¹³ and L ¹⁴ are each independently a linker or absent,

R¹⁸ и R¹⁹, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA ¹ ) ₂ , или детектируемую метку, R ¹⁸ and R ¹⁹ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ , or a detectable label ,

А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group,

R²⁰, каждый независимо, представляют собой С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, -NR²¹R²²-группу, или следующую группу, R ²⁰ are each independently a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a -NR ²¹ R ²² group, or the following group,

[Хим. стр. 50] [Chem. page 50]

где, стрелка показывает связь с карбонильным углеродом, where, the arrow indicates the bond to the carbonyl carbon,

R²¹ и R²² представляют собой, каждый независимо, водород или С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, R ²¹ and R ²² are each independently hydrogen or a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen,

а=от 1 до 3998, a=from 1 to 3998,

b=от 0 до 3997, b=0 to 3997,

с=от 1 до 2000, c=from 1 to 2000,

a+b+2c=от 10 до 4000, и a+b+2c=10 to 4000, and

порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary.

[0072] [0072]

a, b и c представляют собой степень полимеризации. Нижний предел для a составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для a составляет 3998, но предпочтительно имеет значение 3998, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20, или 10. Нижний предел для b составляет 0, но предпочтительно имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, или 9. Верхний предел для b составляет 3997, но предпочтительно имеет значение 3997, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20, или 10. Нижний предел для c составляет 1, но предпочтительно имеет значение 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, или 10. Верхний предел для с составляет 2000, но предпочтительно имеет значение 2000, 1990, 1980, 1970, 1960, 1950, 1900, 1800, 1700, 1600, 1500, 1400, 1300, 1200, 1100, или 500. Нижний предел для (a+b+2c) составляет 10, но предпочтительно имеет значение 10, 20, 30, 40, или 50. Верхний предел для (a+b+2c) составляет 4000, но предпочтительно имеет значение 4000, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, или 200. a, b, и c могут быть вычислены в результате проведения количественной оценки в расчете на интегрированное значение по спектру ¹Н-ЯМР. a, b and c represent the degree of polymerization. The lower limit for a is 1, but preferably is 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for a is 3998, but preferably is 3998, 3500, 3000, 2500, 2000 , 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20, or 10. The lower limit for b is 0, but is preferably 0, 1, 2 , 3, 4, 5, 6, 7, 8, or 9. The upper limit for b is 3997, but is preferably 3997, 3500, 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500 , 400, 300, 200, 100, 50, 40, 30, 20, or 10. The lower limit for c is 1, but is preferably 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10. The upper limit for c is 2000, but is preferably 2000, 1990, 1980, 1970, 1960, 1950, 1900, 1800, 1700, 1600, 1500, 1400, 1300, 1200, 1100, or 500. The lower limit for ( a+b+2c) is 10, but preferably has a value of 10, 20, 30, 40, or 50. The upper limit for (a+b+2c) is 4000, but preferably has a value of 4000, 3500, 3000, 2500, 2000 , 1500, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, or 200. a, b, and c can be calculated as a result of quantification based on the integrated value of ^{the 1} H-NMR spectrum.

[0073] [0073]

L¹³ и/или L¹⁴, в том случае, когда они являются линкерами, особым образом не ограничиваются, но могут представлять собой, например, С_1-40-алкиленовую группу. В данном документе, метильные группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 оксогрупп, метиленовые группы в С_1-40-алкиленовой группе могут быть замещены посредством 1-10 галогенов, смежные метиленовые группы могут быть связаны друг с другом посредством 1-10 ненасыщенных связей, и из числа метиленовых групп в алкиленовой группе, 1-20 метиленовых групп могут быть заменены на NH, N(C_1-10-алкил), O, S, C_6-14-арилен, 5-10-членный гетероарилен, или полиоксиалкилен, имеющий степень полимеризации 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, или 2-10. Линкер может иметь, например, следующую структуру, L ¹³ and/or L ¹⁴ when they are linkers are not particularly limited, but may be, for example, a C _1-40 alkylene group. Herein, methyl groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 oxo groups, methylene groups in the C _1-40 alkylene group may be substituted with 1-10 halogens, adjacent methylene groups may be bonded to each other. another via 1-10 unsaturated bonds, and from among the methylene groups in the alkylene group, 1-20 methylene groups can be replaced by NH, N(C _1-10 -alkyl), O, S, C _6-14 -arylene, 5 -10-membered heteroarylene or polyoxyalkylene having a degree of polymerization of 2-2000, 2-1000, 2-500, 2-400, 2-300, 2-200, 2-100, 2-50, or 2-10. A linker may have, for example, the following structure,

[Хим. стр. 51] [Chem. page 51]

где, w имеет значение 1-2000, и Z представляет собой С_1-5-алкиленовую группу. where w is 1-2000 and Z is a C _1-5 alkylene group.

[0074] [0074]

Производное BPA по настоящему изобретению может быть получено в результате введения группы, представленной формулой (I), в полимер с применением любого из различных общеизвестных способов. Например, соединение, представленное формулой (VII), приведенной ниже, The BPA derivative of the present invention can be obtained by introducing a group represented by formula (I) into a polymer using any of various well-known methods. For example, the compound represented by the formula (VII) below,

[Хим. стр. 52] [Chem. page 52]

где, Where,

X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, и X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, and

полимер, который, при реагировании с соединением, представленным формулой (VII), может образовывать группу, представленную формулой (I), приведенной ниже a polymer which, when reacted with a compound represented by formula (VII), can form a group represented by formula (I) below

[Хим. стр. 53] [Chem. page 53]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом, и the arrows show the bond to the adjacent atom, and

X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F,

смешивают в воде или в содержащем воду растворителе (например, забуференном фосфатом физиологическом растворе) и подвергают реакции, например, при 4-100°С в течение 10 минут - 1 часа с получением производного BPA. mixed in water or a water-containing solvent (eg, phosphate buffered saline) and subjected to a reaction, for example, at 4-100° C. for 10 minutes to 1 hour to obtain a BPA derivative.

[0075] [0075]

<<КОМПОЗИЦИЯ>> <<COMPOSITION>>

Композиция по настоящему изобретению содержит производное BPA по настоящему изобретению. Композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые носители, разбавители, буферные растворы, эксципиенты и их комбинации. Композиция по настоящему изобретению может быть использована в лечении, диагностировании и детектировании опухолей. В том случае, когда композицию по настоящему изобретению вводят субъекту, путь введения особым образом не ограничивается, но может включать внутривенное, подкожное, внутримышечное, внутрисуставное, интраперитонеальное и внутриглазное введение. Кроме того, дозировку выбирают надлежащим образом в зависимости от типа заболевания и возраста, веса, и пола субъекта. The composition of the present invention contains the BPA derivative of the present invention. The composition of the present invention may further contain pharmaceutically acceptable carriers, diluents, buffers, excipients, and combinations thereof. The composition of the present invention can be used in the treatment, diagnosis and detection of tumors. When the composition of the present invention is administered to a subject, the route of administration is not particularly limited, but may include intravenous, subcutaneous, intramuscular, intraarticular, intraperitoneal, and intraocular administration. In addition, the dosage is appropriately selected depending on the type of disease and the age, weight, and sex of the subject.

[0076] [0076]

<<НАБОР>> <<SET>>

Набор по настоящему изобретению содержит соединение, представленное формулой (VII), приведенной ниже, The kit of the present invention contains a compound represented by formula (VII) below,

[Хим. стр. 54] [Chem. page 54]

где, Where,

X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, и X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, and

полимер, который, при реагировании с соединением, представленным формулой (VII), может образовывать группу, представленную формулой (I), приведенной ниже a polymer which, when reacted with a compound represented by formula (VII), can form a group represented by formula (I) below

[Хим. стр. 55] [Chem. page 55]

где, Where,

стрелки показывают связь со смежным атомом, и the arrows show the bond to the adjacent atom, and

X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F. X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F.

[0077] [0077]

Полимер, который может образовывать группу, представленную формулой (I), в результате реакции с соединением, представленным формулой (VII), может быть линейным или разветвленным и может представлять собой гомополимер или сополимер. В случае сополимеров, сополимер может быть статистическим сополимером или блок-сополимером. Полимер предпочтительно представляет собой водорастворимый полимер. Полимер может включать, например, поливиниловый спирт, полиуретан, сложный полиэфир, полиамид, поликарбонат, полиимид, простой полиэфир, полиакрилат, полиакриламид, полисилоксан, поливинил, полипептид, полисахарид, полинуклеотид, и их сополимеры. Предпочтительно, полимер включает поливиниловый спирт, сложный полиэфир, простой полиэфир, полиакрилат, полиакриламид, полипептид, полисахарид, или их сополимеры, и более предпочтительно, полимер включает поливиниловый спирт или полипептид. Полимер, который может образовывать группу, представленную формулой (I), в результате реакции с соединением, представленным формулой (VII), может иметь фрагмент, который образует группу, представленную формулой (I), при реагировании с соединением, представленным формулой (VII), связанный с боковой цепью. Этот фрагмент может образовывать линкер между полимером и группой, представленной формулой (I). The polymer that can form a group represented by formula (I) by reaction with a compound represented by formula (VII) may be linear or branched, and may be a homopolymer or a copolymer. In the case of copolymers, the copolymer may be a random copolymer or a block copolymer. The polymer is preferably a water-soluble polymer. The polymer may include, for example, polyvinyl alcohol, polyurethane, polyester, polyamide, polycarbonate, polyimide, polyether, polyacrylate, polyacrylamide, polysiloxane, polyvinyl, polypeptide, polysaccharide, polynucleotide, and their copolymers. Preferably, the polymer comprises polyvinyl alcohol, polyester, polyether, polyacrylate, polyacrylamide, polypeptide, polysaccharide, or copolymers thereof, and more preferably, the polymer comprises polyvinyl alcohol or polypeptide. A polymer that can form a group represented by formula (I) by reaction with a compound represented by formula (VII) may have a moiety that forms a group represented by formula (I) by reaction with a compound represented by formula (VII) associated with the side chain. This fragment can form a linker between the polymer and the group represented by formula (I).

[0078] [0078]

Полимер, который может образовывать группу, представленную формулой (I), в результате реакции с соединением, представленным формулой (VII), может быть представлен формулами (XV-a)-(XV-g), приведенными ниже. Определение символов в формулах и их диапазоны являются такими, как описано выше. A polymer that can form a group represented by formula (I) by reaction with a compound represented by formula (VII) can be represented by formulas (XV-a) to (XV-g) below. The definition of symbols in formulas and their ranges are as described above.

[Хим. стр. 56] [Chem. page 56]

[Хим. стр. 57] [Chem. page 57]

[Хим. стр. 58] [Chem. page 58]

[Хим. стр. 59] [Chem. page 59]

[Хим. стр. 60] [Chem. page 60]

[Хим. стр. 61] [Chem. page 61]

[Хим. стр. 62] [Chem. page 62]

[0079] [0079]

Набор по настоящему изобретению может включать инструкции в отношении способа получения производного BPA по настоящему изобретению. Набор также может включать инструкции в отношении способа применения производного BPA по настоящему изобретению в лечении, диагностировании, и детектировании опухолей. The kit of the present invention may include instructions on how to prepare the BPA derivative of the present invention. The kit may also include instructions on how to use the BPA derivative of the present invention in the treatment, diagnosis, and detection of tumors.

[0080] [0080]

Все документы, упомянутые в этом описании, включены в данный документ посредством ссылки в полном их объеме. All documents referred to in this specification are incorporated herein by reference in their entirety.

[0081] [0081]

Варианты осуществления настоящего изобретения, описанные ниже, предоставляются лишь с иллюстративными целями и не ограничивают технический объем настоящего изобретения. Технический объем настоящего изобретения ограничивается только пунктами Формулы изобретения. Модификации настоящего изобретения, например, добавление, исключение и замена составляющих признаков настоящего изобретения, могут быть сделаны при условии, что при этом не возникнет никакого отклонения от сущности настоящего изобретения. The embodiments of the present invention described below are provided for illustrative purposes only and do not limit the technical scope of the present invention. The technical scope of the present invention is limited only by the claims. Modifications of the present invention, such as adding, deleting and substituting the constituent features of the present invention, may be made provided that no deviation from the spirit of the present invention occurs.

ПРИМЕРЫEXAMPLES

[0082] [0082]

ПРИМЕР 1 EXAMPLE 1

Синтез Поливинилового Спирта (PVA) Synthesis of Polyvinyl Alcohol (PVA)

<Реагенты> <Reagents>

Если не задано иное, то коммерчески доступные реагенты и растворители используются так, как они есть. Unless otherwise specified, commercially available reagents and solvents are used as they are.

Винилацетат: используют товарный продукт (), подвергнутый перегонке в атмосфере аргона. Vinyl acetate: use commercial product (), distilled in an argon atmosphere.

Цианометил-метил(фенил)карбамодитиоат: Sigma Aldrich Cyanomethyl-methyl(phenyl)carbamodithioate: Sigma Aldrich

α,α’-азобисизобутиронитрил (AIBN): Sigma Aldrich α,α'-azobisisobutyronitrile (AIBN): Sigma Aldrich

Метанол (MeOH) (особая степень чистоты): Nacalai Tesque Methanol (MeOH) (Special Purity): Nacalai Tesque

Соляная кислота 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Hydrochloric acid 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидроксид натрия 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Бензол (особая степень чистоты): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Benzene (Special Purity): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Тетрагидрофуран (THF): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Tetrahydrofuran (THF): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Дигидрофосфат натрия (NaH₂PO₃): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium dihydrogen phosphate (NaH ₂ PO ₃ ): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидрофосфат динатрия: Nacalai Tesque Disodium hydrogen phosphate: Nacalai Tesque

<Оборудование> <Equipment>

NMR (Ядерный Магнитный Резонанс=ЯМР): BRUKER AVANCE III 400 (400 МГц, BRUKER BioSpin) NMR (Nuclear Magnetic Resonance=NMR): BRUKER AVANCE III 400 (400 MHz, BRUKER BioSpin)

GPC (Гельпроникающая хроматография): JASCO Corporation GPC (Gel Permeation Chromatography): JASCO Corporation

Колонка для измерения PVAc: колонка TSK-gel superAW3000, superAW4000, и superAWL-guard (Tosoh Corporation) PVAc column: TSK-gel superAW3000, superAW4000, and superAWL-guard column (Tosoh Corporation)

Колонка для измерения PVA: Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare) PVA column: Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare)

Детектор: RI-2031 Detector: RI-2031

[0083] [0083]

(1) Синтез поли(винилацетата) (PVAc) (1) Synthesis of poly(vinyl acetate) (PVAc)

[Хим. стр. 63] [Chem. page 63]

2,86 мг (0,0174 ммоль) инициатора AIBN и 38,68 мг (0,174 ммоль) агента RAFT (обратимой передачи цепи по механизму присоединение-фрагментация) цианометил-метил(фенил)-карбамодитиоата взвешивают и добавляют в двугорлую грушевидную колбу объемом 100 мл в атмосфере аргона в ледяной бане. После этого, 3,22 мл (34,8 ммоль) винилацетата добавляют в систему в атмосфере аргона, и проводят дегазирование по схеме замораживание-откачивание-оттаивание 4 раза. Систему заполняют аргоном и перемешивают при 60°С в течение 24 часов. После этого, реакционный раствор помещают в диализную мембрану (MWCO (показатель пористости ультрамембран) = 3,5 кД), диализируют 3 раза в течение 12 часов против 300 мл раствора THF и затем лиофилизируют из раствора бензола. Целевой PVAc получают в виде твердого вещества светло-желтого цвета с выходом 2,97 г. Получающийся в результате PVAc анализируют методами ¹Н-NMR и GPC. 2.86 mg (0.0174 mmol) of the AIBN initiator and 38.68 mg (0.174 mmol) of the RAFT agent cyanomethyl-methyl(phenyl)-carbamodithioate are weighed and added to a 100 pear-shaped 2-necked flask. ml in an argon atmosphere in an ice bath. After that, 3.22 ml (34.8 mmol) of vinyl acetate is added to the system under argon atmosphere, and degassing is carried out according to the freeze-pump-thaw scheme 4 times. The system is filled with argon and stirred at 60° C. for 24 hours. Thereafter, the reaction solution was put into a dialysis membrane (MWCO (Ultra Membrane Porosity Index) = 3.5 KD), dialyzed 3 times for 12 hours against 300 ml of THF solution, and then lyophilized from benzene solution. The target PVAc was obtained as a light yellow solid with a yield of 2.97 g. The resulting PVAc was analyzed by ¹ H-NMR and GPC methods.

[0084] [0084]

На основе данных ¹Н-NMR, вычисляют, что степень полимеризации PVAc составляет 172 и Mn=14800. Конкретно, с использованием полученного от агента RAFT сигнала ароматического кольца (7,56-7,28 ppm (м.д.), (шир., Ar-H)) в качестве эталона (5Н), среднечисловую молекулярную массу вычисляют на основе полученного от каркаса основной цепи сигнала (1,84-1,66 ppm (шир., -СН₂)) и полученного от сложноэфирной группы сигнала (2,04-1,85 ppm (шир., О-СО-СН₃)). Кривая GPC является унимодальной, молекулярно-массовое распределение Mw/Mn=1,31 является узким, и молекулярную массу вычисляют как Mn=12800. Поскольку молекулярная масса, определяемая методом GPC, является относительной молекулярной массой, рассчитанной относительно стандартного полиэтиленгликоля, в дальнейшем в данном документе, Mn будет означать молекулярную массу, которая получена методом ¹Н-NMR. Based on the ¹ H-NMR data, the degree of polymerization of PVAc is calculated to be 172 and Mn=14800. Specifically, using the aromatic ring signal (7.56-7.28 ppm (ppm), (br., Ar-H)) obtained from the RAFT agent as a reference (5H), the number average molecular weight is calculated based on the obtained from backbone signal backbone (1.84-1.66 ppm (br., -CH ₂ )) and signal derived from ester group (2.04-1.85 ppm (br., O-CO-CH ₃ )) . The GPC curve is unimodal, the molecular weight distribution Mw/Mn=1.31 is narrow and the molecular weight is calculated as Mn=12800. Since the molecular weight determined by the GPC method is a relative molecular weight calculated relative to standard polyethylene glycol, hereinafter, Mn will mean the molecular weight, which is obtained by the ¹ H-NMR method.

[Хим. стр. 64] [Chem. page 64]

¹Н-NMR (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7,56-7,28 (шир., -Ar-H), 4,90-4,68 (шир., -СНСН₂-), 2,04-1,85 (шир., -ОСОСН₃), 1,84-1,66 (шир., -СНСН₂-) ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 7.56-7.28 (br, -Ar-H), 4.90-4.68 (br, -CHCH ₂ -), 2 .04-1.85 (broad, -OSOSH ₃ ), 1.84-1.66 (broad, -CHCH ₂ -)

[0085] [0085]

(2) Синтез Поливинилового Спирта (PVA) (2) Synthesis of Polyvinyl Alcohol (PVA)

[Хим. стр. 65] [Chem. page 65]

1,00 г (0,062 ммоль) PVAc, полученного в приведенном выше пункте (1), взвешивают и растворяют в 30 мл MeOH в грушевидной колбе объемом 300 мл. 2,32 г (57,94 ммоль) гидроксида натрия (5 эквивалентов) добавляют к сложному эфиру PVAc, к этому дополнительно добавляют чистую воду, затем смесь перемешивают при 60°С в течение 24 часов. Реакционный раствор помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют 3 раза против 2 л чистой воды. Получающийся в результате полимерный раствор фильтруют через фильтр с размером ячеек 0,45 мкм и затем лиофилизируют. Целевой PVA получают в виде твердого вещества светло-желтого цвета с выходом 240 мг. Полученный PVA анализируют методами ¹Н-NMR и GPC. На основе данных ¹Н-NMR, определяют, что степень омыления составляет 99% по моль. Кроме того, подтверждают, что кривая GPC для полученного PVA является унимодальной. Следует отметить, что «*» и «**» в вышеприведенных химических формулах означают неустановленные структуры. 1.00 g (0.062 mmol) of the PVAc obtained in the above (1) was weighed and dissolved in 30 ml of MeOH in a 300 ml pear-shaped flask. 2.32 g (57.94 mmol) of sodium hydroxide (5 equivalents) was added to the PVAc ester, pure water was further added thereto, then the mixture was stirred at 60° C. for 24 hours. The reaction solution is placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 KD) and dialyzed 3 times against 2 L of pure water. The resulting polymer solution is filtered through a 0.45 µm filter and then lyophilized. The title PVA was obtained as a light yellow solid with a yield of 240 mg. The resulting PVA was analyzed by ¹ H-NMR and GPC methods. Based on the ¹ H-NMR data, it is determined that the degree of saponification is 99% by mole. Furthermore, the GPC curve for the obtained PVA was confirmed to be unimodal. It should be noted that "*" and "**" in the above chemical formulas mean unidentified structures.

[Хим. стр. 66] [Chem. page 66]

¹Н-NMR (400 МГц, DMSO-d₆): δ 4,76-4,18 (шир., -ОH), 4,08-3,75 (шир., -СНСН₂-), 1,78-1,08 (шир., -СНСН₂-) ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 4.76-4.18 (br, -OH), 4.08-3.75 (br, -CHCH ₂ -), 1.78 -1.08 (broad, -CHCH ₂ -)

[0086] [0086]

ПРИМЕР 2 EXAMPLE 2

Оценивание связывания производного BPA (PVA-BPA), в котором BPA связан с PVA BPA derivative binding evaluation (PVA-BPA) in which BPA is bound to PVA

<Реагенты> <Reagents>

Если не задано иное, то коммерчески доступные реагенты и растворители используются так, как они есть. Unless otherwise specified, commercially available reagents and solvents are used as they are.

Соляная кислота 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Hydrochloric acid 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидроксид натрия 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Дигидрофосфат натрия (NaH₂PO₃): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium dihydrogen phosphate (NaH ₂ PO ₃ ): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

4-Бороно-L-фенилаланин (BPA) (бор в этом реагенте представляет собой ¹⁰B): Katchem 4-Borono-L-phenylalanine (BPA) (the boron in this reagent is ¹⁰ B): Katchem

4-Бороно-L-фенилаланин (¹¹B-BPA) (бор в этом реагенте имеет смешанную форму: ¹¹B-BPA и ¹⁰B-BPA): Sigma-Aldrich 4-Borono-L-phenylalanine ( ¹¹ B-BPA) (the boron in this reagent is a mixed form: ¹¹ B-BPA and ¹⁰ B-BPA): Sigma-Aldrich

Ализариновый красный С (ARS): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Alizarin Red C (ARS): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидрофосфат динатрия: Nacalai Tesque Disodium hydrogen phosphate: Nacalai Tesque

D-фруктоза (также называемая «Fru» ниже по тексту): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. D-fructose (also called "Fru" below): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Следует отметить, что производное BPA, полученное проведением реакции между Fru и BPA, также называется «Fru-BPA» ниже по тексту. Note that a BPA derivative obtained by reacting Fru and BPA is also referred to as "Fru-BPA" hereinafter.

<Оборудование> <Equipment>

NMR (Ядерный Магнитный Резонанс=ЯМР): BRUKER AVANCE III HD500 (500 МГц, BRUKER BioSpin) NMR (Nuclear Magnetic Resonance=NMR): BRUKER AVANCE III HD500 (500 MHz, BRUKER BioSpin)

Флуоресцентный спектрофотометр (FP8300): JASCO Corporation Fluorescence Spectrophotometer (FP8300): JASCO Corporation

[0087] [0087]

Раствор ¹¹В-BPA, раствор Fru-¹¹B-BPA и раствор PVA-¹¹B-BPA приготавливают в следующих концентрациях с использованием 10 мМ PBS (140 мМ NaCl, рН 9,5). ¹¹ B-BPA solution, Fru- ¹¹ B-BPA solution and PVA- ¹¹ B-BPA solution were prepared at the following concentrations using 10 mM PBS (140 mM NaCl, pH 9.5).

Раствор ¹¹В-BPA: концентрация ¹¹В-BPA 191,3 мМ=40 мг/мл ¹¹ B-BPA solution: ¹¹ B-BPA concentration 191.3 mM=40 mg/ml

Раствор Fru-¹¹B-BPA: концентрация ¹¹В-BPA 191,3 мМ=40 мг/мл, концентрация фруктозы 103,2 мг/мл Fru- ¹¹ B-BPA solution: ¹¹ B-BPA concentration 191.3 mM=40 mg/ml, fructose concentration 103.2 mg/ml

Раствор PVA-¹¹B-BPA: концентрация ¹¹В-BPA 191,3 мМ=40 мг/мл, концентрация диола в PVA 573,9 мМ=50,4 мг/мл PVA- ¹¹ B-BPA solution: concentration of ¹¹ B-BPA 191.3 mM=40 mg/ml, diol concentration in PVA 573.9 mM=50.4 mg/ml

[0088] [0088]

450 мкл каждого образца и 50 мкл D₂O смешивают, и ¹¹В-ЯМР измеряют. Результат ¹¹В-ЯМР-спектроскопии проиллюстрирован на ФИГ. 1. Пик с самой высокой интенсивностью сигнала соответствует раствору BPA (шир., 2,1 ppm до 10,0 ppm). Пики для раствора PVA-BPA и раствора Fru-BPA отчетливо отличаются от сигнала раствора BPA, и, кроме того, так как интенсивность сигнала BPA самого по себе снижается, качественно определено, что PVA и BPA связываются. 450 μl of each sample and 50 μl of D ₂ O are mixed and ¹¹ B-NMR measured. The result of ¹¹ B-NMR spectroscopy is illustrated in FIG. 1. The peak with the highest signal intensity corresponds to the BPA solution (broad, 2.1 ppm to 10.0 ppm). The peaks for the PVA-BPA solution and the Fru-BPA solution are distinctly different from the signal from the BPA solution, and furthermore, since the intensity of the BPA signal itself decreases, it is qualitatively determined that PVA and BPA bind.

[0089] [0089]

В вышеупомянутом растворе ¹¹В-BPA, вычислено, с учетом константы равновесия (рН 7,4), что (свободный BPA):(BPA, связанный с PVA) = 10:90-0:100 (молярное соотношение). Следует отметить, что поскольку рН для раствора PVA-¹¹B-BPA имеет значение 9,5, и чем выше рН, тем выше константа равновесия, предполагается, что почти 100% BPA является связанным с PVA в растворе. In the above ^11B -BPA solution, it was calculated, considering the equilibrium constant (pH 7.4), that (free BPA):(BPA bound to PVA) = 10:90-0:100 (molar ratio). It should be noted that since the pH for a solution of PVA- ¹¹ B-BPA is 9.5, and the higher the pH, the higher the equilibrium constant, it is assumed that almost 100% of BPA is associated with PVA in solution.

[0090] [0090]

Константу равновесия для PVA и BPA вычисляют с использованием способа ARS в соответствии со способом, описанным в публикации Springsteen G., Wang B. H. Tetrahedron 58, 5291-5300 (2002). Первоначально, приготавливают каждый из следующих растворов A, B, C, и D. The equilibrium constant for PVA and BPA is calculated using the ARS method according to the method described in Springsteen G., Wang B. H. Tetrahedron 58, 5291-5300 (2002). Initially, prepare each of the following solutions A, B, C, and D.

Раствор A: ARS (9,0 × 10^-6 M)Solution A: ARS (9.0 × 10 ^-6 M)

Раствор B: ARS (9,0 × 10^-6 M) + BPA (2,0 × 10^-3 M )Solution B: ARS (9.0 × 10 ^-6 M) + BPA (2.0 × 10 ^-3 M )

Раствор C: ARS (9,0 × 10^-6 M) + BPA (2,0 × 10^-3 M) + PVA (концентрация диола=5,0 × 10^-1 M) Solution C: ARS (9.0 × 10 ^-6 M) + BPA (2.0 × 10 ^-3 M) + PVA (diol concentration=5.0 × 10 ^-1 M)

Раствор D: ARS (9,0 × 10^-6 M) + BPA (2,0 × 10^-3 M) + фруктоза (0,8 × 10^-1 M) Solution D: ARS (9.0 × 10 ^-6 M) + BPA (2.0 × 10 ^-3 M) + fructose (0.8 × 10 ^-1 M)

Раствор E: ARS (9,0 × 10^-6 M) + BPA (2,0 × 10^-3 M) + глюкоза (0,8 × 10^-1 M) Solution E: ARS (9.0 × 10 ^-6 M) + BPA (2.0 × 10 ^-3 M) + glucose (0.8 × 10 ^-1 M)

[0091] [0091]

Раствор А и Раствор В смешивают в различных соотношениях, и измеряют флуоресценцию с использованием одноразовой ячейки (PS, TGK) (E_x=468 нм, E_m=572 нм). Константу равновесия К₀ для ARS-BPA вычисляют на основе полученной интенсивности флуоресценции. Далее, Раствор В смешивают с Раствором C, D, или E, каждый из которых содержит диольное соединение, в различных соотношениях, и измеряют флуоресценцию с использованием одноразовой ячейки (E_x=468 нм, E_m=572 нм). Кажущуюся константу относительного равновесия К₁ для каждого соединения (эквивалент с концентрацией диола [2ОН])-BPA вычисляют с использованием этих результатов и вышеупомянутого значения К₀. Результаты проиллюстрированы ниже в Таблице 1. Solution A and Solution B are mixed in various ratios, and fluorescence is measured using a disposable cell (PS, TGK) (E _x =468 nm, _Em =572 nm). The equilibrium constant K ₀ for ARS-BPA is calculated based on the obtained fluorescence intensity. Next, Solution B is mixed with Solution C, D, or E, each containing a diol compound, in various ratios, and fluorescence is measured using a disposable cell (E _x =468 nm, _Em =572 nm). The apparent relative equilibrium constant K ₁ for each compound (equivalent with diol concentration [2OH])-BPA is calculated using these results and the above K ₀ value. The results are illustrated below in Table 1.

[Таблица 1] [Table 1]

Таблица 1 Table 1

Глюкоза
(диол)-BPAGlucose
(diol)-BPA PVA (диол)-BPAPVA (diol)-BPA Фруктоза
(диол)-BPAFructose
(diol)-BPA Константа относительного равновесия (K₁) Relative equilibrium constant (K ₁ ) 1,01.0 1,91.9 4646

[0092] [0092]

В упомянутом растворе С, вычислено, на основе константы равновесия (рН 7,4), что (свободный BPA):(BPA, связанный с PVA) = приблизительно 50:50 (молярное соотношение). In said solution C, it is calculated, based on the equilibrium constant (pH 7.4), that (free BPA):(BPA bound to PVA) = approximately 50:50 (molar ratio).

[0093] [0093]

ПРИМЕР 3 EXAMPLE 3

Внутриклеточный захват PVA-BPA Intracellular uptake of PVA-BPA

<Реагенты> <Reagents>

Питательная среда, Онкологический институт Розуэлла Парка (RPMI): Sigma Aldrich Culture media, Roswell Park Cancer Institute (RPMI): Sigma Aldrich

Фосфатно-солевой буфер D-PBS (-): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Phosphate buffered saline D-PBS (-): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Фетальная бычья сыворотка (FBS): Biosera Fetal bovine serum (FBS): Biosera

Раствор Трипсин-EDTA: Sigma life science Trypsin-EDTA solution: Sigma life science

Пенициллин/ Стрептомицин: Sigma life science Penicillin/ Streptomycin: Sigma life science

Cy5-NHS: Thermo Fisher Scientific Cy5-NHS: Thermo Fisher Scientific

Флуоресцентный краситель LysoTracker® Красный DND-99: Thermo Fisher Scientific LysoTracker® Fluorescent Dye Red DND-99: Thermo Fisher Scientific

4-Диэтиламиносалицилальдегид: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. 4-Diethylaminosalicylaldehyde: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.

Метиламин: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. Methylamine: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.

DMSO: Nacalai Tesque DMSO: Nacalai Tesque

2-Аминонорборнан-2-карбоновая кислота (BCH): Sigma-Aldrich 2-Aminonorbornane-2-carboxylic acid (BCH): Sigma-Aldrich

Hoechst® 33342: Thermo Fischer Scientific. Hoechst® 33342: Thermo Fischer Scientific.

4-Бром-L-фенилаланин (BPA): Katchem 4-Bromo-L-Phenylalanine (BPA): Katchem

PVA, произведенный тем же способом, что и в ПРИМЕРЕ 1 (Mn=6500-9500) PVA produced in the same manner as in EXAMPLE 1 (Mn=6500-9500)

Гидрофосфат динатрия: Nacalai Tesque Disodium hydrogen phosphate: Nacalai Tesque

DAHMI: Полученный согласно способу, описанному в публикации Springsteen G., et al., Acs Sensors 1, 1394-1397 (2016). DAHMI: Obtained according to the method described in Springsteen G., et al., Acs Sensors 1, 1394-1397 (2016).

Клеточное сито: клеточное сито Falcon с размером ячеек 35 мкм для пробирок на 5 мл Cell sieve: Falcon 35 µm cell sieve for 5 ml tubes

Клетки BxPC3 (клеточная линия рака поджелудочной железы человека): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) BxPC3 cells (human pancreatic cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

<Оборудование> <Equipment>

Проточный цитометр (FCM): Guava easy Cyte 6-2L (Merck Millipore) Flow Cytometer (FCM): Guava easy Cyte 6-2L (Merck Millipore)

Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп (CLSM): LSM710 (Carl Zeiss) Confocal Laser Scanning Microscope (CLSM): LSM710 (Carl Zeiss)

Прибор для ICP-MS Agilent 7900 (Масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой) (Agilent Technology Co., Ltd.) Agilent 7900 ICP-MS Instrument (Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry) (Agilent Technology Co., Ltd.)

ЯМР=NMR (Ядерный Магнитный Резонанс): BRUKER AVANCE III 400 (400 МГц, BRUKER BioSpin) NMR=NMR (Nuclear Magnetic Resonance): BRUKER AVANCE III 400 (400 MHz, BRUKER BioSpin)

[0094] [0094]

(1) Синтез производного BPA (Cy5-PVA-BPA), в котором Cy5 связан с PVA-BPA (1) Synthesis of a BPA derivative (Cy5-PVA-BPA) in which Cy5 is linked to PVA-BPA

125 мг (1,67 × 10^-2) PVA взвешивают в ампуле объемом 6 мл и растворяют в 2,5 мл DMSO. Далее, 1,23 мл (2,00 × 10^-2 ммоль) Cy5-NHS (1,2 эквивалента) добавляют в раствор PVA, и эту смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 часов. Реакционный раствор помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют 3 раза против 2 л чистой воды. Для полного удаления свободного Cy5 в диализном растворе, продукт очищают с использованием колонки PD-10 и затем лиофилизируют с получением продукта реакции PVA и Cy5-NHS (Cy5-PVA) в виде твердого вещества голубого цвета (выход 122 мг). Cy5-PVA-BPA получают смешением Cy5-PVA и BPA в 10 мМ PBS (140 мМ NaCl, рН 9,5), из условия, чтобы концентрация диола в PVA составляла 0,34 мМ, и концентрация BPA составляла 0,11 мМ. В полученном растворе, вычислено, на основе константы равновесия (рН 7,4), что (свободный BPA):(BPA, связанный с PVA) = приблизительно 60:40 (молярное соотношение) 125 mg (1.67×10 ^-2 ) PVA is weighed into a 6 ml ampoule and dissolved in 2.5 ml DMSO. Next, 1.23 ml (2.00 x 10 ^-2 mmol) Cy5-NHS (1.2 equivalents) was added to the PVA solution and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction solution is placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 KD) and dialyzed 3 times against 2 L of pure water. To completely remove free Cy5 in the dialysis solution, the product was purified using a PD-10 column and then lyophilized to give the reaction product of PVA and Cy5-NHS (Cy5-PVA) as a blue solid (yield 122 mg). Cy5-PVA-BPA is prepared by mixing Cy5-PVA and BPA in 10 mM PBS (140 mM NaCl, pH 9.5) such that the diol concentration in PVA is 0.34 mM and the BPA concentration is 0.11 mM. In the resulting solution, it is calculated, based on the equilibrium constant (pH 7.4), that (free BPA):(BPA bound to PVA) = approximately 60:40 (molar ratio)

[0095] [0095]

(2) Оценивание клеточного захвата Cy5-PVA-BPA с использованием конфокальной микроскопии (2) Evaluation of Cy5-PVA-BPA cellular uptake using confocal microscopy

Клетки B×PC3 инокулируют в чашке со стеклянным дном (AGC Technoglass) в количестве 5 × 10⁴ клеток/ чашку и подвергают предварительному выращиванию культуры в течение 24 часов. Раствор Cy5-PVA-BPA или раствор Fru-BPA (концентрация фруктозы=0,28 мМ, концентрация BPA=0,11 мМ), получение которого описано в вышеупомянутом пункте (1), приготавливают в смешанном растворе культуральной среды D-PBS/RPMI (содержащей 10% FBS, 1% Пенициллин-Стрептомицина) (PBS:RPMI=1:4), и 1 мл каждого из этих образцов добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 30 минут. После удаления культуральной среды, раствор ‘2 мМ DAHMI (соединения для флуоресцентного детектирования BPA)/10 мкл DMSO’ и раствор ‘50 нМ Lyso Tracker® красный DND-99/990 мкл PBS’ добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 30 минут. Клетки промывают три раза посредством 1 мл PBS, затем к тому добавляют 1 мл PBS, и затем клетки изучают с помощью CLSM. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 2. Подтверждено, что в том случае, когда Fru-BPA подвергается внутриклеточному захвату, BPA распределяется по всей цитоплазме. С другой стороны, ФИГ. 2 показывает, что Cy5-PVA и BPA колокализируются с лизосомами, что позволяет предположить, что Cy5-PVA-BPA включается в результате эндоцитоза. B×PC3 cells are inoculated into a glass bottom dish (AGC Technoglass) at 5 x 10 ⁴ cells/dish and pre-cultured for 24 hours. A Cy5-PVA-BPA solution or a Fru-BPA solution (fructose concentration=0.28 mM, BPA concentration=0.11 mM), the preparation of which is described in the above (1), is prepared in a mixed D-PBS/RPMI culture medium solution. (containing 10% FBS, 1% Penicillin-Streptomycin) (PBS:RPMI=1:4) and 1 ml of each of these samples is added to each well and incubated for 30 minutes. After removing the culture medium, a solution of '2 mM DAHMI (compounds for fluorescent detection of BPA)/10 µl DMSO' and a solution of '50 nM Lyso Tracker® red DND-99/990 µl PBS' are added to each well and incubated for 30 minutes. The cells are washed three times with 1 ml of PBS, then 1 ml of PBS is added thereto, and then the cells are examined with CLSM. The results are illustrated in FIG. 2. Confirmed that when Fru-BPA is subjected to intracellular uptake, BPA is distributed throughout the cytoplasm. On the other hand, FIG. 2 shows that Cy5-PVA and BPA colocalize with lysosomes, suggesting that Cy5-PVA-BPA is turned on by endocytosis.

[0096] [0096]

ПРИМЕР 4 EXAMPLE 4

Оценивание внутриклеточного захвата PVA-BPA и его опосредование посредством аминокислотного транспортера (LAT1) Evaluation of intracellular PVA-BPA uptake and its mediation by amino acid transporter (LAT1)

Клетки B×PC3 инокулируют в чашке Петри в количестве 5 × 10⁶ клеток/ лунку и подвергают предварительному выращиванию культуры в течении 24 часов. Далее, раствор культуральной среды D-PBS/ RPMI (10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицина) (D-PBS: RPMI=1:4) используют в получении следующих образцов. BxPC3 cells are inoculated into a Petri dish at 5 x 10 ⁶ cells/well and pre-cultured for 24 hours. Further, a solution of culture medium D-PBS/RPMI (10% FBS, 1% penicillin-streptomycin) (D-PBS: RPMI=1:4) was used in the preparation of the following samples.

Раствор PVA-BPA (концентрация диола=3,03 мМ, концентрация BPA=3,03 мМ) PVA-BPA solution (diol concentration=3.03 mM, BPA concentration=3.03 mM)

Раствор Fru-BPA (концентрация фруктозы=7,82 мМ, концентрация BPA=3,03 мМ) Fru-BPA solution (fructose concentration=7.82 mM, BPA concentration=3.03 mM)

Вышеупомянутый раствор PVA-BPA+BCH (ингибитор LAT1)(20 мМ) The above solution PVA-BPA+BCH (LAT1 inhibitor) (20 mM)

Вышеупомянутый раствор Fru-BPA+BCH (20 мМ) The above Fru-BPA+BCH solution (20 mM)

[0097] [0097]

В упомянутом растворе PVA-BPA, вычислено, на основе константы равновесия (pH 7,4), что (свободный BPA):(BPA, связанный с PVA) = приблизительно 30:70 (молярное соотношение). In said PVA-BPA solution, it is calculated, based on the equilibrium constant (pH 7.4), that (free BPA):(BPA bound to PVA) = approximately 30:70 (molar ratio).

[0098] [0098]

10 мл этих образцов добавляют в каждую чашку петри и инкубируют в течение 3 часов. Каждую лунку промывают посредством 10 мл D-PBS, затем к тому добавляют 1,0 мл трипсин-EDTA и затем проводят инкубирование в течение 10 минут. Следует отметить, что в отношении PVA-BPA и Fru-BPA, также приготавливают образцы, где, после промывания посредством D-PBS, добавляют свежую культуральную жидкость и проводят инкубирование в течение дополнительных 30 минут. После этого, проводят промывание посредством D-PBS, затем добавляют 1,0 мл раствора трипсин-EDTA и выполняют инкубирование в течение 10 минут. После подтверждения того, что клетки отсоединились (разъединились), с помощью оптического микроскопа, добавляют 9,0 мл культуральной среды RPMI, содержащей 10% FBS, и приготавливают клеточную суспензию. Проводят центрифугирование при 1500 rpm (оборотах в минуту) в течение 5 минут при 24°С и удаляют супернатант. Подсчитывают число клеток, затем раствор образца вливают в пробирку фирмы Falcon объемом 15 мл и добавляют 1 мл 70%-ной азотной кислоты. После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и 90°С в течение 1 часа. Образцы разбавляют до 10 мл чистой водой, фильтруют через гидрофобный фильтр, затем оценивают с использованием ICP-MS. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 3-1 и 3-2. 10 ml of these samples are added to each petri dish and incubated for 3 hours. Each well was washed with 10 ml of D-PBS, then 1.0 ml of trypsin-EDTA was added thereto, and then incubation was carried out for 10 minutes. It should be noted that for PVA-BPA and Fru-BPA, samples are also prepared where, after washing with D-PBS, fresh culture fluid is added and incubated for an additional 30 minutes. After that, wash with D-PBS, then add 1.0 ml of trypsin-EDTA solution and incubate for 10 minutes. After confirming that the cells have detached (separated) using an optical microscope, 9.0 ml of RPMI culture medium containing 10% FBS is added and a cell suspension is prepared. Spend centrifugation at 1500 rpm (revolutions per minute) for 5 minutes at 24°and remove the supernatant. The number of cells is counted, then the sample solution is poured into a 15 ml Falcon tube and 1 ml of 70% nitric acid is added. Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and 90°C for 1 hour. Samples are diluted to 10 ml with pure water, filtered through a hydrophobic filter, then evaluated using ICP-MS. The results are illustrated in FIG. 3-1 and 3-2.

[0099] [0099]

Как видно на ФИГ. 3-1, по сравнению с Fru-BPA, PVA-BPA демонстрирует приблизительно трехкратную концентрацию внутриклеточного бора. С другой стороны, в том случае, когда используют ингибитор LAT1 BCH(2-аминобицикло[2.2.1]гептан-2-карбоновую кислоту), внутриклеточный захват как Fru-BPA, так и PVA-BPA значительно снижается. Эти результаты позволяют предположить, что внутриклеточный захват PVA-BPA происходит через LAT1-опосредованный эндоцитоз. Кроме того, ФИГ. 3-2 показывает, что в результате проведения дополнительных 30 минут инкубирования, Fru-BPA значительно снижает концентрацию внутриклеточного бора. В противоположность тому, PVA-BPA демонстрирует чрезвычайно высокие концентрации бора даже после проведения дополнительного инкубирования. As seen in FIG. 3-1, compared to Fru-BPA, PVA-BPA shows approximately three times the concentration of intracellular boron. On the other hand, when the LAT1 inhibitor BCH(2-aminobicyclo[2.2.1]heptane-2-carboxylic acid) is used, the intracellular uptake of both Fru-BPA and PVA-BPA is significantly reduced. These results suggest that intracellular uptake of PVA-BPA occurs through LAT1-mediated endocytosis. In addition, FIG. 3-2 shows that as a result of an additional 30 minutes of incubation, Fru-BPA significantly reduces the concentration of intracellular boron. In contrast, PVA-BPA shows extremely high concentrations of boron even after additional incubation.

[0100] [0100]

ПРИМЕР 5 EXAMPLE 5

Влияние BPA на внутриклеточный захват PVA Effect of BPA on intracellular PVA uptake

Клетки B×PC3 инокулируют на 12-луночный планшет в количестве 1 × 10⁵ клеток/лунку и подвергают предварительному выращиванию культуры в течение 24 часов (n=3). Далее, используют раствор культуральной среды D-PBS/ RPMI (10 FBS, 1% пенициллин-стрептомицина) (D-PBS:RPMI=1:4) в приготовлении следующих образцов. BxPC3 cells were inoculated into a 12-well plate at 1 x 10 ⁵ cells/well and pre-cultured for 24 hours (n=3). Next, use a solution of culture medium D-PBS/RPMI (10 FBS, 1% penicillin-streptomycin) (D-PBS:RPMI=1:4) in the preparation of the following samples.

Раствор Cy5-PVA-BPA (концентрация диола в PVA=0,34 мМ, концентрация BPA=0,11 мМ) Cy5-PVA-BPA solution (diol concentration in PVA=0.34 mM, BPA concentration=0.11 mM)

Вышеупомянутый раствор Cy5-PVA-BPA+BCH (20,0 мМ) The above Cy5-PVA-BPA+BCH solution (20.0 mM)

[0101] [0101]

В упомянутом растворе Cy5-PVA-BPA, вычислено, на основе константы равновесия (pH 7,4), что (свободный BPA):(BPA, связанный с PVA) = приблизительно 60:40 (молярное соотношение). In said Cy5-PVA-BPA solution, it is calculated, based on the equilibrium constant (pH 7.4), that (free BPA):(BPA bound to PVA) = approximately 60:40 (molar ratio).

[0102] [0102]

1 мл этих образцов добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 30 минут, 3 часов и 6 часов. Каждую лунку промывают посредством 1 мл PBS, затем к тому добавляют 0,5 мл раствора трипсин-EDTA и затем проводят инкубирование в течение 10 минут. После подтверждения с помощью оптического микроскопа того, что клетки отсоединились, добавляют 0,5 мл культуральной среды RPMI, содержащей 10% FBS, и приготавливают клеточную суспензию. Полученную клеточную суспензию фильтруют через клеточное сито, затем проводят количественную оценку интенсивности флуоресценции Cy5 клеток с использованием проточного цитометра. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 4-1 и 4-2. 1 ml of these samples are added to each well and incubated for 30 minutes, 3 hours and 6 hours. Each well was washed with 1 ml of PBS, then 0.5 ml of trypsin-EDTA solution was added thereto, and then incubation was carried out for 10 minutes. After confirming with an optical microscope that the cells have detached, 0.5 ml of RPMI culture medium containing 10% FBS is added and a cell suspension is prepared. The resulting cell suspension is filtered through a cell sieve, then the fluorescence intensity of Cy5 cells is quantified using a flow cytometer. The results are illustrated in FIG. 4-1 and 4-2.

[0103] [0103]

Cy5-PVA-BPA проявляет значительно более высокий внутриклеточный захват, чем Cy5-PVA (ФИГ. 4-1). В противоположность тому, такое различие в захвате исчезает в том случае, когда LAT1 ингибируют посредством BCH (ФИГ. 4-2). Сходно с ПРИМЕРОМ 4, эти результаты позволяют предположить, что внутриклеточный захват PVA-BPA происходит через LAT1-опосредованный эндоцитоз. Cy5-PVA-BPA exhibits significantly higher intracellular uptake than Cy5-PVA (FIG. 4-1). In contrast, this difference in uptake disappears when LAT1 is inhibited by BCH (FIG. 4-2). Similar to EXAMPLE 4, these results suggest that intracellular uptake of PVA-BPA occurs via LAT1-mediated endocytosis.

[0104] [0104]

ПРИМЕР 6 EXAMPLE 6

Влияние на модель подкожной опухоли Impact on subcutaneous tumor model

<Реагенты, клетки и животные> <Reagents, cells and animals>

PVA произведен тем же способом, что и в ПРИМЕРЕ 1 (Mn=6500-9500) PVA produced in the same manner as in EXAMPLE 1 (Mn=6500-9500)

Соляная кислота 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Hydrochloric acid 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидроксид натрия 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

4-Бороно-L-фенилаланин (BPA): Katchem 4-Borono-L-Phenylalanine (BPA): Katchem

Гидрофосфат динатрия: Nacalai Tesque Disodium hydrogen phosphate: Nacalai Tesque

Lemosol: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Lemosol: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Drysol: Kanto Chemical Co., Inc. Drysol: Kanto Chemical Co., Inc.

Криостат: Leica CM 3050S, Leica Microsystems, Nussloch GmbH, Германия Cryostat: Leica CM 3050S, Leica Microsystems, Nussloch GmbH, Germany

Реактив O.C.T: Sakura Finetek Japan, Inc. Reagent O.C.T: Sakura Finetek Japan, Inc.

Hoechst® 33342: Thermo Fischer Scientific Hoechst® 33342: Thermo Fischer Scientific

Конъюгат: Лектин томатов, DyLight 488: Funakoshi Conjugate: Tomato lectin, DyLight 488: Funakoshi

Клетки BxPC3 (клеточная линия рака поджелудочной железы человека): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) BxPC3 cells (human pancreatic cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

Клетки CT26 (клеточная линия рака толстой кишки мышей): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) CT26 cells (mouse colon cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

Мышь BALB/c: Charles River Japan Mouse BALB/c: Charles River Japan

‘Голая’ (бестимусная) мышь BALB/c: Charles River Japan ‘Nude’ (nude) mouse BALB/c: Charles River Japan

<Оборудование> <Equipment>

Прибор для ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd. Instrument for ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd.

Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп (CLSM): LSM710 (Carl Zeiss) Confocal Laser Scanning Microscope (CLSM): LSM710 (Carl Zeiss)

Fuji Drychem NX500: Fujifilm Corporation Fuji Drychem NX500: Fujifilm Corporation

Установка нейтронного облучения с использованием тяжелой воды: KUR Neutron irradiation plant using heavy water: KUR

флуоресцентный микроскоп 'все-в-одном' (BZ-X710): KEYENCE all-in-one fluorescence microscope (BZ-X710): KEYENCE

[0105] [0105]

Модели подкожной опухоли получают подкожной инъекцией клеток CT26 мышам BALB/c в количестве 2,0 × 10⁵ клеток/мышь и подкожной инъекцией клеток BxPC3 'голым' мышам BALB/c в количестве 5,0 × 10⁶ клеток/мышь. Как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, 200 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену (8 мг BPA/мышь). Subcutaneous tumor models are prepared by subcutaneous injection of CT26 cells into BALB/c mice at 2.0 x 10 ⁵ cells/mouse and by subcutaneous injection of BxPC3 cells into nude BALB/c mice at 5.0 x 10 ⁶ cells/mouse. Once the tumor size reaches approximately 200 mm ³ , 200 μl of the following samples are slowly injected via the tail vein (8 mg BPA/mouse).

PVA-BPA (концентрация BPA=191 мМ, концентрация диола в PVA=574 мМ) в PBS (pH 9,5) PVA-BPA (BPA concentration=191 mM, diol concentration in PVA=574 mM) in PBS (pH 9.5)

Fru-BPA (концентрация BPA=191 мМ, концентрация фруктозы=574 мМ) в PBS (pH 9,5) Fru-BPA (BPA concentration=191 mM, fructose concentration=574 mM) in PBS (pH 9.5)

[0106] [0106]

По истечении заданного времени после введения образца, мышей препарируют, кровь собирают, и опухоли удаляют. Кровь и различные органы помещают в пробирку фирмы Falcon объемом 10 мл, и добавляют 1 мл 70%-ной азотной кислоты. После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и 90°С в течение 1 часа. Образцы разбавляют до 10 мл чистой водой, фильтруют через гидрофобный фильтр, затем оценивают с использованием ICP-MS. Результаты фармакокинетического анализа мышей с трансплантированными клетками CT-26 проиллюстрированы на ФИГ. 5-1 и 5-2, и результаты фармакокинетического анализа мышей с трансплантированными клетками BxPC3 проиллюстрированы на ФИГ. 6-1 и 6-2. PVA-BPA показывает превосходное накопление в опухоли для всех типов опухолей и может поддерживать высокую концентрацию внутриопухолевого бора в течение длительного времени. Также, соотношение опухоль/кровь является сравнимым с соотношением для обычно применяемого Fru-BPA. After a predetermined time after sample administration, mice are dissected, blood is collected, and tumors are removed. The blood and various organs are placed in a 10 ml Falcon tube and 1 ml of 70% nitric acid is added. Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and 90°C for 1 hour. Samples are diluted to 10 ml with pure water, filtered through a hydrophobic filter, then evaluated using ICP-MS. The results of pharmacokinetic analysis of mice transplanted with CT-26 cells are illustrated in FIG. 5-1 and 5-2, and the results of the pharmacokinetic analysis of mice transplanted with BxPC3 cells are illustrated in FIG. 6-1 and 6-2. PVA-BPA shows excellent tumor uptake for all types of tumors and can maintain a high concentration of intratumoral boron for a long time. Also, the tumor/blood ratio is comparable to that of the commonly used Fru-BPA.

[0107] [0107]

ПРИМЕР 7 EXAMPLE 7

Испытание по проникновению в опухоль Cy5-PVA-BPA Cy5-PVA-BPA Tumor Penetration Test

Таким же способом, как в ПРИМЕРЕ 6, получают раствор Cy5-PVA-BPA и модель подкожной опухоли CT26, и, как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, 200 мкл образца медленно вводят через хвостовую вену (8 мг BPA/мышь). По истечении 5,5 часов после введения, внутривенно вводят раствор конъюгата лектин томатов-DyLight488 (50 мкг) и Hoechst 33342 (50 мкг). Опухоль удаляют через 6 часов после введения образца, опухоль срезают посередине, и срезанный сегмент помещают на стеклянную чашку и изучают методом CLSM. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 7. Общее распределение C5-PVA позволяет предположить, что BPA может быть доставлено по всей опухоли. In the same manner as in EXAMPLE 6, a Cy5-PVA-BPA solution and a CT26 subcutaneous tumor model were prepared, and once the tumor size reached approximately 200 mm ³ , 200 μl of the sample was slowly injected via the tail vein (8 mg BPA/mouse). After 5.5 hours after administration, a solution of the conjugate of tomato lectin-DyLight488 (50 μg) and Hoechst 33342 (50 μg) is administered intravenously. The tumor is removed 6 hours after sample injection, the tumor is cut down the middle, and the cut segment is placed on a glass dish and examined by CLSM. The results are illustrated in FIG. 7. The overall distribution of C5-PVA suggests that BPA can be delivered throughout the tumor.

[0108] [0108]

ПРИМЕР 8 EXAMPLE 8

Противоопухолевое действие Antitumor activity

Клетки СT-26 подкожно имплантируют (2,0 × 10⁵ клеток/ мышь) около правого бедра мышей BALB/ c, и 250 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену мышей, имеющих размер опухоли приблизительно 50-100 мм³, (10 мг BPA/мышь). CT-26 cells are implanted subcutaneously (2.0 x 10 ⁵ cells/mouse) near the right thigh of BALB/c mice, and 250 μl of the following samples are slowly injected via the tail vein of mice having a tumor size of approximately 50-100 mm ³ (10 mg BPA/mouse).

PVA-BPA (концентрация BPA=191 мМ, концентрация диола в PVA=574 мМ) в PBS (pH 9,5) PVA-BPA (BPA concentration=191 mM, diol concentration in PVA=574 mM) in PBS (pH 9.5)

Fru-BPA (концентрация BPA=191 мМ, концентрация фруктозы=574 мМ) в PBS (pH 9,5) Fru-BPA (BPA concentration=191 mM, fructose concentration=574 mM) in PBS (pH 9.5)

[0109] [0109]

В упомянутом растворе PVA-¹¹В-BPA, вычислено, на основе константы равновесия (pH 7,4), что (свободный BPA):(BPA, связанный с PVA) = 10:90-0:100 (молярное соотношение). Следует отметить, что, поскольку рН раствора PVA-BPA имеет значение 9,5, и чем выше рН, тем больше константа равновесия, то установлено, что почти 100% BPA является связанным с PVA в растворе. In said PVA- ¹¹ B-BPA solution, it is calculated, based on the equilibrium constant (pH 7.4), that (free BPA):(BPA bound to PVA) = 10:90-0:100 (molar ratio). It should be noted that since the pH of the PVA-BPA solution is 9.5, and the higher the pH, the greater the equilibrium constant, it is found that almost 100% of BPA is bound to PVA in solution.

[0110] [0110]

В группе нейтронного облучения, нейтронное облучение проводят в течение 50 минут только вокруг правого бедра мыши через 3 часа и 6 часов после введения образца. С учетом дня облучения, установленного в качестве первого дня, диаметр опухоли измеряют каждые 2-3 дня с помощью электронных циркулей, и массу тела измеряют с помощью электронных весов в течение всех 25 дней. Измеренный диаметр опухоли используют в формуле эллиптической аппроксимации объема (ab² × 1/2, где a представляет собой длинную сторону, и b означает короткую сторону), что дает объем опухоли. Оцененные группы сведены вместе ниже. In the neutron irradiation group, neutron irradiation was performed for 50 minutes only around the right thigh of the mouse at 3 hours and 6 hours after sample injection. With the irradiation day set as the first day, the tumor diameter is measured every 2 to 3 days with electronic calipers, and body weight is measured with electronic balance for all 25 days. The measured tumor diameter is used in the elliptical volume approximation formula (ab ² x 1/2 where a is the long side and b is the short side) to give the tumor volume. The evaluated groups are summarized below.

[0111] [0111]

Контрольная группа (ХОЛОДНАЯ) (n=8): необработанная группа. Control group (COLD) (n=8): untreated group.

Fru-BPA (ХОЛОДНАЯ) (n=8): сделана инъекция только Fru-BPA. Fru-BPA (COLD) (n=8): Fru-BPA alone was injected.

PVA-BPA (ХОЛОДНАЯ) (n=8): сделана инъекция только PVA-BPA. PVA-BPA (COLD) (n=8): PVA-BPA alone was injected.

Контрольная группа (ГОРЯЧАЯ) (n=8): выполнено только облучение нейтронами. Control group (HOT) (n=8): only neutron irradiation was performed.

Fru-BPA (ГОРЯЧАЯ) 3 часа (n=8): сделана инъекция посредством Fru-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 3 часа после этого. Fru-BPA (HOT) 3 hours (n=8): injected with Fru-BPA followed by neutron irradiation 3 hours after that.

PVA-BPA (ГОРЯЧАЯ) 3 часа (n=4): сделана инъекция посредством PVA-BPA, затем через 3 часа после этого выполнено облучение нейтронами. PVA-BPA (HOT) 3 hours (n=4): injected with PVA-BPA followed by neutron irradiation 3 hours later.

PVA-BPA (ГОРЯЧАЯ) 6 часов (n=8): сделана инъекция посредством PVA-BPA, затем через 6 часов после этого выполнено облучение нейтронами. PVA-BPA (HOT) 6 hours (n=8): injected with PVA-BPA followed by neutron irradiation 6 hours later.

[0112] [0112]

Изменение размера опухоли с течением времени и кривые Каплана-Мейера показаны на ФИГУРАХ 8-1 и 8-2. PVA-BPA показывает значительное ингибирующее действие на рост опухоли в нейтронозахватной терапии по сравнению с Fru-BPA. Change in tumor size over time and Kaplan-Meier curves are shown in FIGURES 8-1 and 8-2. PVA-BPA shows a significant inhibitory effect on tumor growth in neutron capture therapy compared to Fru-BPA.

[0113] [0113]

Через двадцать пять дней после облучения тепловыми нейтронами, опухоль удаляют и погружают в раствор формалина на 4 дня. Опухоль вынимают из раствора формалина и разрезают тонкими слоями посередине опухолевой ткани. Удаленные органы обрабатывают заливочной средой (реактивом O.C.T) для изготовления замороженных срезов, и затем тканевый срез толщиной 4 мкм изготавливают с использованием криостата и подвергают окрашиванию гематоксилин-эозином. Результаты проиллюстрированы на ФИГУРАХ 9-1-9-4. PVA-BPA (ГОРЯЧАЯ ГРУППА) 3 часа (ФИГ. 9-4) позволяет предположить, что во всей опухоли индуцируется апоптоз, что согласуется с эффектами эксперимента по противоопухолевому действию. Twenty-five days after thermal neutron irradiation, the tumor is removed and immersed in a formalin solution for 4 days. The tumor is removed from the formalin solution and cut into thin layers in the middle of the tumor tissue. The removed organs are treated with embedding medium (O.C.T reagent) to make frozen sections, and then a 4 µm thick tissue section is made using a cryostat and subjected to hematoxylin-eosin staining. The results are illustrated in FIGURES 9-1-9-4. PVA-BPA (HOT GROUP) 3 hours (FIGS. 9-4) suggests that apoptosis is induced in the entire tumor, consistent with the effects of the anti-tumor experiment.

[0114] [0114]

ПРИМЕР 9 EXAMPLE 9

Сигнал ядерного магнитного резонанса ¹⁹F и накопление в опухоли PVA-¹⁹F-BPA ¹⁹ F nuclear magnetic resonance signal and accumulation of PVA- ¹⁹ F-BPA in the tumor

<Реагенты, клетки и животные> <Reagents, cells and animals>

PVA произведен тем же способом, что и в ПРИМЕРЕ 1 (Mn=6500-9500) PVA produced in the same manner as in EXAMPLE 1 (Mn=6500-9500)

Соляная кислота 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Hydrochloric acid 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидроксид натрия 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

70%-ная азотная кислота (1,42): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 70% nitric acid (1.42): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидрофосфат динатрия: Nacalai Tesque Disodium hydrogen phosphate: Nacalai Tesque

2-Амино-3-(4-бороно-2-фторфенил)пропановая кислота (¹⁹F-BPA) (рацемический): Fluorotech LLC 2-Amino-3-(4-boron-2-fluorophenyl)propanoic acid ( ¹⁹ F-BPA) (racemic): Fluorotech LLC

Клетки CT26 (клеточная линия рака толстой кишки мыши): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) CT26 cells (mouse colon cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

Мышь BALB/c: Charles River Japan Mouse BALB/c: Charles River Japan

<Оборудование> <Equipment>

Прибор для NMR (Ядерный Магнитный Резонанс=ЯМР): BRUKER AVANCE III 400 (400 МГц, BRUKER BioSpin) Instrument for NMR (Nuclear Magnetic Resonance=NMR): BRUKER AVANCE III 400 (400 MHz, BRUKER BioSpin)

Прибор для ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd. Instrument for ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd.

[0115][0115]

Следующие образцы приготавливают в следующих концентрациях с использованием 10 мМ PBS (140 мМ NaCl, рН 9,5). The following samples were prepared at the following concentrations using 10 mM PBS (140 mM NaCl, pH 9.5).

¹⁹F-BPA (концентрация ¹⁹F-BPA=176 мМ) ¹⁹ F-BPA (concentration of ¹⁹ F-BPA=176 mM)

Fru-¹⁹F-BPA (концентрация ¹⁹F-BPA=176 мМ, концентрация фруктозы=573,9 мМ) Fru- ¹⁹ F-BPA ( ¹⁹ F-BPA concentration=176 mM, fructose concentration=573.9 mM)

PVA-¹⁹F-BPA (концентрация ¹⁹F-BPA=176 мМ, концентрация диола в PVA=573,9 мМ) PVA- ¹⁹ F-BPA (concentration of ¹⁹ F-BPA=176 mM, diol concentration in PVA=573.9 mM)

[0116] [0116]

450 мкл каждого образца и 50 мкл D₂O смешивают, и измеряют ¹⁹F-NMR. Результаты проиллюстрированы на ФИГУРАХ 10-1-10-3. NMR-сигнал для PVA-¹⁹F-BPA можно легко обнаружить (ФИГ. 10-3). Полагают, что PVA-¹⁹F-BPA применим в ¹⁹F-MRI в последующих диагностических методах. 450 μl of each sample and 50 μl of D ₂ O are mixed and ¹⁹ F-NMR is measured. The results are illustrated in FIGURES 10-1-10-3. The NMR signal for PVA- ¹⁹ F-BPA can be easily detected (FIG. 10-3). PVA- ¹⁹ F-BPA is believed to be useful in ¹⁹ F-MRI in subsequent diagnostic methods.

[0117] [0117]

ПРИМЕР 10 EXAMPLE 10

Фармакокинетика PVA-¹⁹F-BPA и Fru-¹⁹F-BPA Pharmacokinetics of PVA- ¹⁹ F-BPA and Fru- ¹⁹ F-BPA

Модели подкожной опухоли получают подкожной инъекцией клеток CT26 мышам BALB/c в количестве 2,0 × 10⁵ клеток/мышь. Как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, 200 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену мышей (8 мг ¹⁹F-BPA/мышь). Subcutaneous tumor models are prepared by subcutaneous injection of CT26 cells into BALB/c mice at 2.0×10 ⁵ cells/mouse. Once the tumor size reaches approximately 200 mm ³ , 200 μl of the following samples are slowly injected via the tail vein of mice (8 mg ¹⁹ F-BPA/mouse).

PVA-¹⁹F-BPA (концентрация BPA=176 мМ, концентрация диола в PVA=574 мМ) в PBS (pH 9,5) PVA- ¹⁹ F-BPA (BPA concentration=176 mM, diol concentration in PVA=574 mM) in PBS (pH 9.5)

Fru-¹⁹F-BPA (концентрация BPA=176 мМ, концентрация фруктозы=574 мМ) в PBS (pH 9,5) Fru- ¹⁹ F-BPA (BPA concentration=176 mM, fructose concentration=574 mM) in PBS (pH 9.5)

[0118] [0118]

По истечении заданного времени после введения образца, мышей препарируют, и опухоли удаляют. Опухоли помещают в пробирку фирмы Falcon объемом 10 мл, и добавляют к тому 1 мл 70%-ной азотной кислоты. После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и 90°С в течение 1 часа. Образцы разбавляют до 10 мл чистой водой, фильтруют через гидрофобный фильтр, затем оценивают количество бора с использованием ICP-MS. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 11. Поскольку PVA-¹⁹F-BPA удерживается в опухоли в высокой концентрации в течение длительного времени, ожидают улучшение отношения 'сигнал/шум’ в ¹⁹F-MRI (магнитно-резонансной визуализации). After a predetermined time after sample administration, the mice are dissected and the tumors are removed. Tumors are placed in a 10 ml Falcon tube and 1 ml of 70% nitric acid is added. Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and 90°C for 1 hour. Samples are diluted to 10 ml with pure water, filtered through a hydrophobic filter, then the amount of boron is estimated using ICP-MS. The results are illustrated in FIG. 11. Since PVA- ¹⁹ F-BPA is retained in the tumor at a high concentration for a long time, an improvement in the signal-to-noise ratio in ¹⁹ F-MRI (magnetic resonance imaging) is expected.

[0119] [0119]

ПРИМЕР 11 EXAMPLE 11

Синтез PEG-P[Lys(Fru)Lys] Synthesis of PEG-P[Lys(Fru)Lys]

<Реагенты> <Reagents>

Диметилсульфоксид (DMSO) (дегидратированный гидридом кальция, затем очищенный перегонкой): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Dimethyl sulfoxide (DMSO) (dehydrated with calcium hydride, then purified by distillation): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Lys(TFA)-NCA (лизин(трифторацетил)-N-карбоксиангидрид): Chuo Kasei Co., Ltd. Lys(TFA)-NCA (lysine(trifluoroacetyl)-N-carboxyanhydride): Chuo Kasei Co., Ltd.

MeO-PEG-NH2 (молекулярная масса PEG (ПЭГ): 10 КДа): NOF corporation MeO-PEG-NH2 (molecular weight PEG (PEG): 10 kDa): NOF corporation

Метанол: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Methanol: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

NaOH: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. NaOH: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

HCl: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. HCl: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Бензол: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Benzene: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Диэтиловый простой эфир: Kanto Chemical Co. Diethyl ether: Kanto Chemical Co.

2,3,4,5-ди-O-изопропилиден-бета-D-фруктопираноза (DiOFru): Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. 2,3,4,5-di-O-isopropylidene-beta-D-fructopyranose (DiOFru): Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.

1,1'-Карбонилдиимидазол (CDI): Sigma-Aldrich 1,1'-Carbonyldiimidazole (CDI): Sigma-Aldrich

Трифторуксусная кислота (TFA): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Trifluoroacetic acid (TFA): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

4-Броно-L-фенилаланин (BPA) (B): KatChem 4-Brono-L-Phenylalanine (BPA) (B): KatChem

<Оборудование> <Equipment>

NMR (Ядерный Магнитный Резонанс=ЯМР): BRUKER AVANCE III 400 (400 МГц, BRUKER BioSpin) NMR (Nuclear Magnetic Resonance=NMR): BRUKER AVANCE III 400 (400 MHz, BRUKER BioSpin)

GPC (Гельпроникающая хроматография): JASCO Corporation GPC (Gel Permeation Chromatography): JASCO Corporation

Колонка для измерения PEG-PLys (TFA): колонка TSK-gel superAW3000, superAW4000, и superAWL-guard (Tosoh Corporation) PEG-PLys (TFA) measurement column: TSK-gel superAW3000, superAW4000, and superAWL-guard column (Tosoh Corporation)

Колонка для измерения PEG-PLys: Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare) PEG-PLys column: Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare)

Детектор: RI-2031 Detector: RI-2031

[0120] [0120]

(1) Синтез MeO-PEG-PLys (TFA) (1) Synthesis of MeO-PEG-PLys (TFA)

[Хим. стр. 67] [Chem. page 67]

1,00 г MeO-PEG-NH₂ растворяют в бензоле и лиофилизируют в течение ночи, затем это растворяют в 10 мл перегнанного DMSO, который добавляют туда в атмосфере аргона. Тем временем, 1,60 г Lys(TFA)-NCA растворяют в 15 мл перегнанного DMSO в атмосфере аргона. Эти растворы смешивают в атмосфере аргона и перемешивают в течение 24 часов при комнатной температуре. После этого, реакционный раствор добавляют к избыточному количеству диэтилового эфира с получением осадка, который собирают вакуумной фильтрацией и сушат при пониженном давлении в течении ночи с получением PEG-PLys(TFA). Молекулярно-массовое распределение для полученного PEG-PLys(TFA) подтверждается методом GPC, и Mw/Mn=1,12. Кроме того, степень полимеризации для PLys(TFA) на основе результатов ¹Н-NMR составляет 57. 1.00 g of MeO-PEG-NH ₂ was dissolved in benzene and lyophilized overnight, then this was dissolved in 10 ml of distilled DMSO, which was added there under argon. Meanwhile, 1.60 g of Lys(TFA)-NCA is dissolved in 15 ml of distilled DMSO under argon. These solutions are mixed under an argon atmosphere and stirred for 24 hours at room temperature. Thereafter, the reaction solution was added to an excess of diethyl ether to give a precipitate, which was collected by vacuum filtration and dried under reduced pressure overnight to give PEG-PLys(TFA). The molecular weight distribution for the resulting PEG-PLys(TFA) was confirmed by the GPC method and Mw/Mn=1.12. Also, the degree of polymerization for PLys(TFA) based on ¹ H-NMR results is 57.

[Хим. стр. 68] [Chem. page 68]

¹Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 9,48-9,10 (шир., -NH-C=O-CF₃), 8,61-7,60 (шир., C-NН-С=O-), 4,10-3,72 (шир., СH-NН-), 3,70-3,45 (шир., -СН₂-СН₂-O-), 3,25-3,00 (шир., -СH₂-NH-C=O-), 2,22-1,00 (шир., -СН₂-СН₂-СН₂-) ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 9.48-9.10 (br. -NH-C=O-CF ₃ ), 8.61-7.60 (br. C- NH-C=O-), 4.10-3.72 (br., CH-NH-), 3.70-3.45 (b., -CH ₂ -CH ₂ -O-), 3.25 -3.00 (br., -CH ₂ -NH-C=O-), 2.22-1.00 (br., -CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -)

[0121] [0121]

(2) Синтез PEG-PLys (2) Synthesis of PEG-PLys

[Хим. стр. 69] [Chem. page 69]

1,2 г PEG-PLys(TFA) растворяют в смеси ‘водный раствор NaOH (5М)/вода/метанол' (10 мл/5 мл/ 35 мл) и перемешивают в течение 20 часов при 35°С. Затем это диализируют дважды против 0,01N-ной HCl и три раза против чистой воды (MWCO для диализной мембраны: 6-8 кДа). Затем это лиофилизируют и получают 600 мг PEG-PLys. 1.2 g of PEG-PLys(TFA) is dissolved in a mixture of 'NaOH aqueous solution (5M)/water/methanol' (10 ml/5 ml/35 ml) and stirred for 20 hours at 35°C. This is then dialyzed twice against 0.01N HCl and three times against pure water (MWCO for dialysis membrane: 6-8 kDa). This is then lyophilized and 600 mg of PEG-PLys are obtained.

[Хим. стр. 70] [Chem. page 70]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 4,43-4,24 (шир., CH-NH-), 3,85-3,61 (шир., -CH₂-CH₂-O-), 2,07-1,28 (шир., -CH₂-CH₂-CH₂-), 3,14-2,94 (шир., -CH₂-NH-C=O-) ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 4.43-4.24 (br, CH-NH-), 3.85-3.61 (br, -CH ₂ -CH ₂ -O -), 2.07-1.28 (broad, -CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -), 3.14-2.94 (broad, -CH ₂ -NH-C=O-)

[0122] [0122]

(3) Синтез PEG-P[Lys(Fru-ISP)/Lys] (3) Synthesis of PEG-P[Lys(Fru-ISP)/Lys]

[Хим. стр. 71] [Chem. page 71]

1,21 г CDI и 3,88 г DiOfru растворяют в 15 мл перегнанного DMSO в атмосфере аргона и перемешивают в течение 20 часов при 45°С. Далее, 300 мг MeO-PEG-PLys растворяют в 5 мл перегнанного DMSO, к тому добавляют раствор, полученный реакционным взаимодействием CDI и DiOfru, и это оставляют реагировать в течение 20 часов при комнатной температуре. По завершении реакции, затем в отношении этого проводят диализ дважды против метанола и дважды против чистой воды (MWCO диализной мембраны: 6-8 кДа). Наконец, это лиофилизируют и получают 360 мг PEG-P[Lys(Fru-ISP)/Lys]. Молекулярно-массовое распределение для него измеряют методом GPC, и MW/Mn=1,17. Степень введения DiOFru в полимер составляет 58%, что вычислено методом ¹Н-ЯМР. На основе результатов ¹Н-ЯМР, (p+q) имеет значение 33, и r имеет значение 24 в вышеупомянутой химической формуле. 1.21 g of CDI and 3.88 g of DiOfru are dissolved in 15 ml of distilled DMSO under argon and stirred for 20 hours at 45°C. Next, 300 mg of MeO-PEG-PLys was dissolved in 5 ml of distilled DMSO, to which was added the solution obtained by the reaction of CDI and DiOfru, and this was left to react for 20 hours at room temperature. After completion of the reaction, it is then dialyzed twice against methanol and twice against pure water (MWCO dialysis membrane: 6-8 kDa). Finally, this is lyophilized and 360 mg PEG-P[Lys(Fru-ISP)/Lys] is obtained. The molecular weight distribution for it is measured by the GPC method, and MW/Mn=1.17. The degree of DiOFru incorporation into the polymer is 58% as calculated by ¹ H-NMR. Based on the ¹ H-NMR results, (p+q) has a value of 33 and r has a value of 24 in the above chemical formula.

[Хим. стр. 72] [Chem. page 72]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 3,85-3,61 (шир., -CH₂-CH₂-O-), 3,32-3,02 (шир., -СН₂-NH-R¹⁰), 3,02-2,81 (шир., -CH₂-NH₂), 2,25-1,20 (шир., -CH₂-CH₂-CH₂-, CH₃-С-CН₃) ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 3.85-3.61 (br, -CH ₂ -CH ₂ -O-), 3.32-3.02 (br, -CH ₂ -NH-R ¹⁰ ), 3.02-2.81 (br., -CH ₂ -NH ₂ ), 2.25-1.20 (br., -CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -, CH ₃ -С-CH ₃ )

[0123] [0123]

(4) Синтез PEG-P[Lys(Fru)/Lys] (4) Synthesis of PEG-P[Lys(Fru)/Lys]

[Хим. стр. 73] [Chem. page 73]

PEG-P[Lys(Fru-ISP)/Lys] растворяют в TFA/H₂O (95/5 объем./объем) в концентрации 20 мг/мл и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Затем реакционный раствор диализируют однократно против чистой воды, дважды против 0,01N-ной HCl, и дополнительно дважды против чистой воды (MWCO для диализной мембраны: 6-8 кДа). После диализа, это лиофилизируют и получают PEG-P[Lys(Fru)/Lys]. Mn=24100. PEG-P[Lys(Fru-ISP)/Lys] is dissolved in TFA/H ₂ O (95/5 v/v) at a concentration of 20 mg/ml and stirred overnight at room temperature. Then, the reaction solution was dialyzed once against pure water, twice against 0.01N HCl, and additionally twice against pure water (MWCO for dialysis membrane: 6-8 kDa). After dialysis, this is lyophilized and PEG-P[Lys(Fru)/Lys] is obtained. Mn=24100.

[Хим. стр. 74] [Chem. page 74]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 4,35-4,20 (шир., CH-NH-), 3,75-3,55 (шир., -CH₂-CH₂-O-), 3,32-3,02 (шир., -СН₂-NH-R¹¹), 3,02-2,81 (шир., -CH₂-NH₂), 1,98-1,15 (шир., -CH₂-CH₂-CH₂-) ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 4.35-4.20 (br, CH-NH-), 3.75-3.55 (br, -CH ₂ -CH ₂ -O -), 3.32-3.02 (br., -CH ₂ -NH-R ¹¹ ), 3.02-2.81 (br., -CH ₂ -NH ₂ ), 1.98-1.15 (broad, -CH ₂ -CH ₂ -CH ₂ -)

[0124] [0124]

ПРИМЕР 12 EXAMPLE 12

Оценивание накопления в опухоли и противоопухолевое действие производного BPA (PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA), где BPA связан с PEG-P[Lys(Fru)/Lys] Evaluation of tumor accumulation and antitumor activity of a BPA derivative (PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA), where BPA is linked to PEG-P[Lys(Fru)/Lys]

<Реагенты, клетки, и животные> <Reagents, cells, and animals>

PEG-P[Lys(Fru)/Lys] произведен тем же способом, что и в ПРИМЕРЕ 11 (Mn=24100) PEG-P[Lys(Fru)/Lys] produced in the same manner as in EXAMPLE 11 (Mn=24100)

Соляная кислота 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Hydrochloric acid 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Гидроксид натрия 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

4-Бороно-L-фенилаланин (BPA): Katchem 4-Borono-L-Phenylalanine (BPA): Katchem

Гидрофосфат динатрия: Nacalai Tesque Disodium hydrogen phosphate: Nacalai Tesque

Клетки BxPC3 (клеточная линия рака поджелудочной железы человека): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) BxPC3 cells (human pancreatic cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

Клетки CT26 (клеточная линия рака толстой кишки мышей): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) CT26 cells (mouse colon cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

Мышь BALB/c: Charles River Japan Mouse BALB/c: Charles River Japan

‘Голая’ (бестимусная) мышь BALB/c: Charles River Japan ‘Nude’ (nude) mouse BALB/c: Charles River Japan

<Оборудование> <Equipment>

Прибор для ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd. Instrument for ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd.

Установка нейтронного облучения с использованием тяжелой воды: KUR Neutron irradiation plant using heavy water: KUR

[0125] [0125]

Клетки BxPC3 подкожно вводят инъекцией ‘голым’ мышам BALB/c в количестве 1 × 10⁷ клеток/мышь. Как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, следующий образец внутривенно вводят инъекцией. BxPC3 cells are injected subcutaneously into BALB/c nude mice at 1 x 10 ⁷ cells/mouse. Once the tumor size reaches about 200 mm ³ , the next sample is injected intravenously.

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA в PBS (33 мг PEG-P[Lys(Fru)/Lys]/ мышь, 8 мг BPA/ мышь) PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA in PBS (33 mg PEG-P[Lys(Fru)/Lys]/mouse, 8 mg BPA/mouse)

[0126] [0126]

По истечении заданного времени после введения образца, мышей препарируют, кровь собирают, и опухоли удаляют. Опухоли помещают в пробирку фирмы Falcon объемом 10 мл, и добавляют 1 мл 70%-ной азотной кислоты. После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и 90°С в течение 1 часа. Образцы разбавляют до 10 мл чистой водой, фильтруют через гидрофобный фильтр, затем оценивают количество бора с использованием ICP-MS. Результаты проиллюстрированы на ФИГУРАХ 12-1 и 12-2. After a predetermined time after sample administration, mice are dissected, blood is collected, and tumors are removed. The tumors are placed in a 10 ml Falcon tube and 1 ml of 70% nitric acid is added. Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and 90°C for 1 hour. Samples are diluted to 10 ml with pure water, filtered through a hydrophobic filter, then the amount of boron is estimated using ICP-MS. The results are illustrated in FIGURES 12-1 and 12-2.

[0127] [0127]

ПРИМЕР 13 EXAMPLE 13

Противоопухолевое действие PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA на модель подкожной опухоли CT26 Antitumor effect of PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA on the CT26 subcutaneous tumor model

Клетки СT-26 подкожно имплантируют (2,0 × 10⁵ клеток/ мышь) около правого бедра мышей BALB/c, и 250 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену мышей, имеющих размер опухоли приблизительно 15-150 мм³, (10 мг BPA/мышь). CT-26 cells are implanted subcutaneously (2.0 x 10 ⁵ cells/mouse) near the right thigh of BALB/c mice, and 250 μl of the following samples are slowly injected through the tail vein of mice having a tumor size of approximately 15-150 mm ³ (10 mg BPA/mouse).

Fru-BPA (концентрация BPA=192 мМ, концентрация фруктозы:концентрация BPA=3:1) в PBS (pH 8,5) Fru-BPA (BPA concentration=192 mM, fructose concentration: BPA concentration=3:1) in PBS (pH 8.5)

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (концентрация BPA=192 мМ, концентрация фруктозы боковой цепи полимера:концентрация BPA=1,2:1) в PBS (pH 8,5) PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (BPA concentration=192 mM, polymer side chain fructose concentration: BPA concentration=1.2:1) in PBS (pH 8.5)

[0128] [0128]

В группе нейтронного облучения, нейтронное облучение проводят в течение 50 минут только вокруг правого бедра мыши через 3 часа и 6 часов после введения образца. С учетом дня облучения, установленного в качестве первого дня, диаметр опухоли измеряют каждые 2-3 дня с помощью электронных циркулей, и массу тела измеряют с помощью электронных весов в течение всех 25 дней. Измеренный диаметр опухоли используют в формуле эллиптической аппроксимации объема (ab² × 1/2, где a представляет собой длинную сторону, и b означает короткую сторону), что дает объем опухоли. Оцененные группы сведены вместе ниже. In the neutron irradiation group, neutron irradiation was performed for 50 minutes only around the right thigh of the mouse at 3 hours and 6 hours after sample injection. With the irradiation day set as the first day, the tumor diameter is measured every 2 to 3 days with electronic calipers, and body weight is measured with electronic balance for all 25 days. The measured tumor diameter is used in the elliptical volume approximation formula (ab ² x 1/2 where a is the long side and b is the short side) to give the tumor volume. The evaluated groups are summarized below.

[0129] [0129]

Контрольная группа (ХОЛОДНАЯЙ) (n=7): необработанная группа. Control group (COLD) (n=7): untreated group.

Fru-BPA (ХОЛОДНАЯ) (n=7): сделана инъекция только Fru-BPA. Fru-BPA (COLD) (n=7): Fru-BPA alone was injected.

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (ХОЛОДНАЯ) (n=4): сделана инъекция только PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA. PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (COLD) (n=4): PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA alone was injected.

Контрольная группа (ГОРЯЧАЯ) (n=6): выполнено только облучение нейтронами. Control group (HOT) (n=6): only neutron irradiation was performed.

Fru-BPA (ГОРЯЧАЯ) 3 часа (n=7): сделана инъекция посредством Fru-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 3 часа после этого. Fru-BPA (HOT) 3 hours (n=7): injected with Fru-BPA followed by neutron irradiation 3 hours later.

Fru-BPA (ГОРЯЧАЯ) 6 часов (n=7): сделана инъекция посредством Fru-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 6 часов после этого.Fru-BPA (HOT) 6 hours (n=7): Injected with Fru-BPA followed by neutron irradiation 6 hours later.

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (ГОРЯЧАЯ) 3 часа (n=6): сделана инъекция посредством PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA, затем через 3 часа после этого выполнено облучение нейтронами. PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (HOT) 3 hours (n=6): injected with PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA followed by neutron irradiation 3 hours later .

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (ГОРЯЧАЯ) 6 часов (n=5): сделана инъекция посредством PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA, затем через 6 часов после этого выполнено облучение нейтронами. PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (HOT) 6 hours (n=5): injected with PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA followed by neutron irradiation 6 hours later .

[0130] [0130]

Изменение размера опухоли с течением времени показано на ФИГУРАХ 13-1 и 13-2. PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA показывает значительное ингибирующее действие на рост опухоли в нейтронозахватной терапии по сравнению с Fru-BPA. The change in tumor size over time is shown in FIGURES 13-1 and 13-2. PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA shows a significant inhibitory effect on tumor growth in neutron capture therapy compared to Fru-BPA.

[0131] [0131]

ПРИМЕР 14 EXAMPLE 14

Синтез P[Asp(глюкамин)/Asp] Synthesis of P[Asp(glucamine)/Asp]

<Реагенты> <Reagents>

Диметилсульфоксид (DMSO) (дегидратированный гидридом кальция и очищенный перегонкой): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Dimethyl sulfoxide (DMSO) (dehydrated with calcium hydride and purified by distillation): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

BLA-NCA: NanoCarrier Co., Ltd. BLA-NCA: NanoCarrier Co., Ltd.

4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолиния хлорид (DMTMM): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. 4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methylmorpholinium chloride (DMTMM): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Триэтиламин (TEA): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Triethylamine (TEA): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Диэтиловый эфир: Kanto Chemical Co. Diethyl ether: Kanto Chemical Co.

Метанол: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Methanol: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

NaOH: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. NaOH: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

HCl: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. HCl: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

N, N-диметилформамид (DMF): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (используемый после дегидратации и перегонки) N,N-dimethylformamide (DMF): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (used after dehydration and distillation)

Дихлорметан (DCM): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (используемый после дегидратации и перегонки) Dichloromethane (DCM): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (used after dehydration and distillation)

4-Бороно-L-фенилаланин (BPA) (B): KatChem 4-Borono-L-phenylalanine (BPA) (B): KatChem

D-глюкамин: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. D-glucamine: Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.

<Оборудование> <Equipment>

Прибор для NMR (Ядерный Магнитный Резонанс=ЯМР): BRUKER AVANCE III 400 (400 МГц, BRUKER BioSpin) Instrument for NMR (Nuclear Magnetic Resonance=NMR): BRUKER AVANCE III 400 (400 MHz, BRUKER BioSpin)

GPC (Гельпроникающая хроматография): JASCO Corporation GPC (Gel Permeation Chromatography): JASCO Corporation

Колонка для измерения PBLA: колонка TSK-gel super AW3000, super AW4000, и super AWL-guard (Tosoh Corporation) PBLA measurement column: TSK-gel super AW3000, super AW4000, and super AWL-guard column (Tosoh Corporation)

Колонка для измерения PAsp: Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare) PAsp column: Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare)

Детектор: UV-2070 (канал 1), RI-2031 (канал 2) Detector: UV-2070 (channel 1), RI-2031 (channel 2)

[0132] [0132]

(1) Получение поли(β-бензил-L-аспартат) (PBLA) (1) Preparation of poly(β-benzyl-L-aspartate) (PBLA)

[Хим. стр. 75] [Chem. page 75]

1,44 г BLA-NCA растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 3 мл DMF и 27 мл DCM, в атмосфере аргона, к этому добавляют 3,9 мкл пропиламина и проводят перемешивание в течение 48 часов. После перемешивания, реакционный раствор добавляют по каплям к диэтиловому эфиру с получением осадка, который отфильтровывают через нутч-фильтр и сушат при пониженном давлении с получением PBLA. Молекулярно-массовое распределение, как определено методом GPC, составляет Mw/Mn=1,11, и степень полимеризации составляет 73 на основе результата ¹Н-NMR. 1.44 g of BLA-NCA was dissolved in a mixed solvent of 3 ml of DMF and 27 ml of DCM under argon atmosphere, 3.9 μl of propylamine was added thereto, and stirring was carried out for 48 hours. After stirring, the reaction solution was added dropwise to diethyl ether to obtain a precipitate, which was filtered through a suction filter and dried under reduced pressure to obtain PBLA. The molecular weight distribution as determined by the GPC method is Mw/Mn=1.11 and the degree of polymerization is 73 based on the result of ¹ H-NMR.

[Хим. стр. 76] [Chem. page 76]

¹Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 8,35-8,00 (шир., C-NH-C=O-), 7,40-7,19 (шир., -C₆Н₅), 5,15-4,92 (шир., -О-СH₂-С₆Н₅), 4,70-4,51 (шир., СН-NН-), 2,90-2,49 (шир., CH-СH₂-C=O-O-), 0,78-0,71 (шир., -СН₃) ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 8.35-8.00 (br. C-NH-C=O-), 7.40-7.19 (br. -C ₆ H ₅ ), 5.15-4.92 (br., -O-CH ₂ -C ₆ H ₅ ), 4.70-4.51 (br., CH-NH-), 2.90-2, 49 (broad, CH-CH ₂ -C=OO-), 0.78-0.71 (broad, -CH ₃ )

[0133] [0133]

(2) Получение полиаспартовой кислоты (PAsp) (2) Preparation of polyaspartic acid (PAsp)

[Хим. стр. 77] [Chem. page 77]

1 г PBLA добавляют к 0,5М-ному водному раствору NaOH и перемешивают в течение 20 часов при 35°С. Реакционный раствор диализируют против чистой воды четыре раза (MWCO для диализной мембраны: 3,5 кДа) и лиофилизируют с получением 0,2 г PAsp. 1 g of PBLA was added to a 0.5M NaOH aqueous solution and stirred for 20 hours at 35°C. The reaction solution was dialyzed against pure water four times (MWCO for dialysis membrane: 3.5 kDa) and lyophilized to obtain 0.2 g of PAsp.

[Хим. стр. 78] [Chem. page 78]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 2,91-2,48 (шир., СН-СН₂-COOH), 0,94-0,82 (шир., -СН₃) ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 2.91-2.48 (br. CH-CH ₂ -COOH), 0.94-0.82 (br. -CH ₃ )

[0134] [0134]

(3) Получение P[Asp(глюкамин)/Asp] (3) Preparation of P[Asp(glucamine)/Asp]

[Хим. стр. 79] [Chem. page 79]

0,2 г PAsp, 3 г DMTMM, и 2,6 г D-глюкамина растворяют в чистой воде, добавляют несколько капель TEA, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. После перемешивания, реакционный раствор диализируют против чистой воды четыре раза (MWCO диализной мембраны: 3,5 кДа) и лиофилизируют с получением P[Asp(глюкамин)/Asp]. Физические свойства оценивают методом GPC и ¹H-NMR, и данные ¹H-NMR показывают, что степень введения глюкамина составляет 30%. На основе результатов ¹H-NMR, в вышеупомянутой химической формуле (s+t) имеет значение 17, и u имеет значение 56. 0.2 g of PAsp, 3 g of DMTMM, and 2.6 g of D-glucamine are dissolved in pure water, a few drops of TEA are added, and the mixture is stirred at room temperature for 24 hours. After stirring, the reaction solution was dialyzed against pure water four times (MWCO dialysis membrane: 3.5 kDa) and lyophilized to give P[Asp(glucamine)/Asp]. Physical properties were evaluated by GPC and ¹ H-NMR, and ¹ H-NMR data showed that the degree of incorporation of glucamine was 30%. Based on the results of ¹ H-NMR, in the above chemical formula, (s+t) has a value of 17 and u has a value of 56.

[Хим. стр. 80] [Chem. page 80]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 4,18-3,00 (шир., -R¹³), 2,91-2,48 (шир., СН-СН₂-COOH), 0,94-0,82 (шир., -СН₃) ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 4.18-3.00 (br. -R ¹³ ), 2.91-2.48 (br., CH-CH ₂ -COOH), 0 .94-0.82 (broad, -CH ₃ )

[0135] [0135]

ПРИМЕР 15 EXAMPLE 15

Накопление в опухоли производного BPA (P[Asp(глюкамин)/Asp]-BPA), где BPA является связанным с P[Asp(глюкамин)/Asp] Accumulation in the tumor of a BPA derivative (P[Asp(glucamine)/Asp]-BPA), where BPA is associated with P[Asp(glucamine)/Asp]

Модели подкожной опухоли получают подкожной инъекцией клеток CT26 мышам BALB/c в количестве 2,0 × 10⁵ клеток/мышь. Как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, 200 мкл следующего образца медленно вводят через хвостовую вену мышей (8 мг BPA/мышь). Subcutaneous tumor models are prepared by subcutaneous injection of CT26 cells into BALB/c mice at 2.0×10 ⁵ cells/mouse. Once the tumor size reaches approximately 200 mm ³ , 200 μl of the next sample is slowly injected via the tail vein of mice (8 mg BPA/mouse).

P[Asp(глюкамин)/Asp]-BPA (концентрация BPA=192 мМ, концентрация BPA:концентрация глюкамина=1:1,2) в PBS (pH 9) P[Asp(glucamine)/Asp]-BPA (BPA concentration=192 mM, BPA concentration:glucamine concentration=1:1.2) in PBS (pH 9)

[0136] [0136]

По истечении заданного времени после введения образца, кровь собирают, мышей препарируют, и опухоли удаляют. Опухоли помещают в пробирку фирмы Falcon объемом 10 мл, и добавляют 1 мл 70%-ной азотной кислоты. После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и 90°С в течение 1 часа. Образцы разбавляют до 10 мл чистой водой, фильтруют через гидрофобный фильтр, затем количество бора оценивают с использованием ICP-MS. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 14-1 и 14-2, позволяют предположить, что использование P[Asp(глюкамин)/Asp]-BPA может улучшить свойства накопления в опухоли и соотношение накопления в опухоли/крови. After a predetermined time after sample administration, blood is collected, mice are dissected, and tumors are removed. The tumors are placed in a 10 ml Falcon tube and 1 ml of 70% nitric acid is added. Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and 90°C for 1 hour. Samples are diluted to 10 ml with pure water, filtered through a hydrophobic filter, then the amount of boron is estimated using ICP-MS. The results are illustrated in FIG. 14-1 and 14-2 suggest that the use of P[Asp(glucamine)/Asp]-BPA can improve tumor storage properties and tumor/blood accumulation ratio.

[0137] [0137]

ПРИМЕР 16 EXAMPLE 16

Противоопухолевое действие PVA-BPA на модель подкожной опухоли BxPC3 Antitumor effect of PVA-BPA on the BxPC3 subcutaneous tumor model

Клетки BxPC3 подкожно вводят инъекцией (5 × 10⁶ клеток/мышь) около правого бедра мышей BALB/c, и 250 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену мышей, имеющих размер опухоли примерно 500 мм³ (10 мг BPA/ мышь). BxPC3 cells are injected subcutaneously (5 x 10 ⁶ cells/mouse) near the right thigh of BALB/c mice, and 250 μl of the following samples are slowly injected via the tail vein of mice having a tumor size of approximately 500 mm ³ (10 mg BPA/mouse).

PVA-BPA (концентрация BPA=191 мМ, концентрация диола в PVA=574 мМ) в воде (рН 9,2) PVA-BPA (BPA concentration=191 mM, diol concentration in PVA=574 mM) in water (pH 9.2)

Fru-BPA (концентрация BPA=191 мМ, концентрация фруктозы=574 мМ) в воде (рН 9,2) Fru-BPA (BPA concentration=191 mM, fructose concentration=574 mM) in water (pH 9.2)

(рН корректируют с использованием водного раствора HCl и водного раствора NaOH) (pH adjusted using aqueous HCl and aqueous NaOH)

[0138] [0138]

Нейтронное облучение проводят в течение 50 минут только вокруг правого бедра мыши через 3 часа после введения образца. С учетом дня облучения, установленного в качестве первого дня, диаметр опухоли измеряют с течением времени с помощью электронных циркулей, и массу тела измеряют с помощью электронных весов в течение всех 55 дней. Измеренный диаметр опухоли используют в формуле эллиптической аппроксимации объема (ab² × 1/2, где a представляет собой длинную сторону, и b означает короткую сторону) с получением объема опухоли. Оцененные группы сведены вместе ниже. Neutron irradiation is carried out for 50 minutes only around the right thigh of the mouse 3 hours after the injection of the sample. With the exposure day set as the first day, tumor diameter is measured over time with electronic calipers, and body weight is measured with electronic balance for all 55 days. The measured tumor diameter is used in an elliptical fit formula (ab ² x 1/2 where a is the long side and b is the short side) to give the tumor volume. The evaluated groups are summarized below.

[0139] [0139]

Контрольная группа (ХОЛОДНАЯ) (n=8): необработанная группа. Control group (COLD) (n=8): untreated group.

Fru-BPA (ГОРЯЧАЯ) (n=6): сделана инъекция Fru-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 3 часа после этого. Fru-BPA (HOT) (n=6): Fru-BPA injection followed by neutron irradiation 3 hours later.

PVA-BPA (ГОРЯЧАЯ) (n=6): сделана инъекция PVA-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 3 часа после этого. PVA-BPA (HOT) (n=6): PVA-BPA injection followed by neutron irradiation 3 hours later.

[0140] [0140]

Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 15. На 55-ый день, наблюдается статистически значимое различие между Fru-BPA и PVA-BPA (p < 0,05 [t-критерия Стьюдента]). The results are illustrated in FIG. 15. At day 55, there was a statistically significant difference between Fru-BPA and PVA-BPA (p < 0.05 [Student's t-test]).

[0141] [0141]

ПРИМЕР 17 EXAMPLE 17

Противоопухолевое действие PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA на модель подкожной опухоли BxPC3 Antitumor effect of PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA on the BxPC3 subcutaneous tumor model

Клетки BxPC3 подкожно вводят инъекцией (5 × 10⁶ клеток/мышь) около правого бедра мышей BALB/c, и 250 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену мышей, имеющих размер опухоли примерно 15-150 мм³ (10 мг BPA/ мышь). BxPC3 cells are injected subcutaneously (5×10 ⁶ cells/mouse) near the right thigh of BALB/c mice, and 250 μl of the following samples are slowly injected via the tail vein of mice having a tumor size of approximately 15-150 mm ³ (10 mg BPA/mouse) .

Fru-BPA (концентрация BPA=192 мМ, концентрация фруктозы:концентрация BPA=3:1) в PBS (рН 8,5) Fru-BPA (BPA concentration=192 mM, fructose concentration: BPA concentration=3:1) in PBS (pH 8.5)

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (концентрация BPA=192 мМ, концентрация фруктозы боковой цепи полимера:концентрация BPA=1,2:1) в PBS (рН 8,5) PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (BPA concentration=192 mM, polymer side chain fructose concentration: BPA concentration=1.2:1) in PBS (pH 8.5)

[0142] [0142]

В группе нейтронного облучения, нейтронное облучение проводят в течение 50 минут только вокруг правого бедра мыши через 3 часа и 6 часов после введения образца. С учетом дня облучения, установленного в качестве первого дня, диаметр опухоли измеряют каждые 2-3 дня с помощью электронных циркулей, и массу тела измеряют с помощью электронных весов в течение всех 25 дней. Измеренный диаметр опухоли используют в формуле эллиптической аппроксимации объема (ab² × 1/2, где a представляет собой длинную сторону, и b означает короткую сторону), что дает объем опухоли. Оцененные группы сведены вместе ниже. In the neutron irradiation group, neutron irradiation was performed for 50 minutes only around the right thigh of the mouse at 3 hours and 6 hours after sample injection. With the irradiation day set as the first day, the tumor diameter is measured every 2 to 3 days with electronic calipers, and body weight is measured with electronic balance for all 25 days. The measured tumor diameter is used in the elliptical volume approximation formula (ab ² x 1/2 where a is the long side and b is the short side) to give the tumor volume. The evaluated groups are summarized below.

[0143] [0143]

Контрольная группа (ГОРЯЧАЯ) (n=8): выполнено только облучение нейтронами. Control group (HOT) (n=8): only neutron irradiation was performed.

Fru-BPA (ГОРЯЧАЯ) (n=8): сделана инъекция Fru-BPA, затем через 3 часа после этого выполнено облучение нейтронами. Fru-BPA (HOT) (n=8): Fru-BPA injection followed 3 hours later by neutron irradiation.

PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (ГОРЯЧАЯ) (n=8): сделана инъекция PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 3 часа после этого. PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA (HOT) (n=8): PEG-P[Lys(Fru)/Lys]-BPA was injected followed by neutron irradiation 3 hours later.

[0144] [0144]

Изменение размера опухоли с течением времени показано на ФИГУРАХ 16. The change in tumor size over time is shown in FIGS. 16.

[0145] [0145]

ПРИМЕР 18 EXAMPLE 18

Синтез N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys] и mPEG10k-P[Lys(Глюконат)/Lys] Synthesis of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys] and mPEG10k-P[Lys(Gluconate)/Lys]

[Хим. стр. 81] [Chem. page 81]

[0146] [0146]

<Реагенты> <Reagents>

11-Азид-3,6,9-триоксаундекан-1-амин: Sigma Aldrich 11-Azide-3,6,9-trioxaundecane-1-amine: Sigma Aldrich

Метокси-PEG_10k-NH₂: NOF Co. Methoxy-PEG _10k -NH ₂ : NOF Co.

NCA-L-Lys(Tfa): Chuo Kasei Co. NCA-L-Lys(Tfa): Chuo Kasei Co.

D-глюконо-1,5-лактон: Tokyo Chemical Industry Co. D-glucono-1,5-lactone: Tokyo Chemical Industry Co.

Триэтиламин (TEA): Nacalai Tesque Triethylamine (TEA): Nacalai Tesque

Диметилсульфоксид (DMSO): DMSO, приобретенный в Wako Pure Chemical Industries, Ltd., очищают перегонкой в атмосфере аргона и используют. Dimethyl Sulfoxide (DMSO): DMSO purchased from Wako Pure Chemical Industries, Ltd. was purified by distillation under argon and used.

Метанол: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Methanol: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Бензол: Nacalai Tesque Benzene: Nacalai Tesque

Диэтиловый эфир: Kanto Chemical Co. Diethyl ether: Kanto Chemical Co.

Водный раствор гидроксида натрия 5 моль/л: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide aqueous solution 5 mol/l: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Соляная кислота 5 моль/л: Nacalai Tesque Hydrochloric acid 5 mol/l: Nacalai Tesque

Тяжелая вода (0,05% по массе 3-(триметилсилил)пропионовой-2,2,3,3-d₄ кислоты, натриевая соль):Sigma Aldrich Heavy water (0.05% by weight 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d ₄ acid, sodium salt): Sigma Aldrich

<Оборудование> <Equipment>

NMR (Ядерный Магнитный Резонанс=ЯМР): BRUKER AVANCE III 400 (400 МГц, BRUKER BioSpin) NMR (Nuclear Magnetic Resonance=NMR): BRUKER AVANCE III 400 (400 MHz, BRUKER BioSpin)

GPC (Гельпроникающая хроматография): JASCO Corporation GPC (Gel Permeation Chromatography): JASCO Corporation

Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare) Superdex 200 Increase 10/300 GL (GE Healthcare)

Детектор: RI-2031 Detector: RI-2031

[0147] [0147]

(1-1) (1-1)

Синтез N₃-Plys_(A) Synthesis N ₃ -Plys_(A)

3,2 г (11,9 ммоль) NCA-Lys(Tfa) взвешивают и добавляют в двугорлую грушевидную колбу объемом 100 мл в атмосфере аргона. К этому добавляют 33 мл очищенного перегонкой DMSO и растворяют NCA. После этого, добавляют 30 мкл (0,151 ммоль) инициатора 11-азид-3,6,9-триоксаундекан-1-амина, и смесь перемешивают на водяной бане при 40°С в течение 3 дней. После этого, реакционный раствор помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют 3 раза против 500 мл метанола в течение 4 часов. Растворитель испаряют из диализированного раствора образца с помощью ротационного испарителя и затем сушат при пониженном давлении в течение ночи. 100 мл метанола, 2 мл 5М-ого водного раствора гидроксида натрия, и 8 мл воды сверхвысокой чистоты добавляют к полученному твердому веществу, которое растворяют. Это перемешивают в течение ночи на водяной бане, установленной на 40°С. После этого, реакционный раствор помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют дважды против 1 л 0,01М-ого водного раствора гидроксида натрия в течение 4 часов и затем диализируют четыре раза против 3 л воды сверхвысокой чистоты в течение 4 часов. Диализированный образец помещают в грушевидную колбу объемом 500 мл, и растворитель удаляют лиофилизированием с получением твердого вещества белого цвета N₃-Plys_(A). На основе данных ¹Н-NMR, степень полимеризации полученного соединения составляет 64,4. 3.2 g (11.9 mmol) of NCA-Lys(Tfa) is weighed and added to a 100 ml two-neck pear-shaped flask under argon. To this was added 33 ml of distilled-purified DMSO and the NCA was dissolved. Thereafter, 30 μl (0.151 mmol) of 11-azide-3,6,9-trioxaundecane-1-amine initiator was added and the mixture was stirred in a water bath at 40° C. for 3 days. Thereafter, the reaction solution was placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 KD) and dialyzed 3 times against 500 ml of methanol for 4 hours. The solvent is evaporated from the dialyzed sample solution using a rotary evaporator and then dried under reduced pressure overnight. 100 ml of methanol, 2 ml of a 5M aqueous sodium hydroxide solution, and 8 ml of ultra-high purity water are added to the resulting solid, which is dissolved. This is stirred overnight in a water bath set at 40°C. Thereafter, the reaction solution was placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 kDa) and dialyzed twice against 1 L of 0.01M aqueous sodium hydroxide solution for 4 hours, and then dialyzed four times against 3 L of ultra-high purity water for 4 hours. The dialyzed sample was placed in a 500 ml pear-shaped flask and the solvent was removed by lyophilization to give a white solid N ₃ -Plys_(A). Based on ¹ H-NMR data, the degree of polymerization of the resulting compound is 64.4.

[Хим. стр. 82] [Chem. page 82]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,35-1,90 (шир., -СН₂-), 3,02 (т, -СН₂-NH₂), 3,70 (шир., -СН₂-О-), 4,32 (т, -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.35-1.90 (br. -CH ₂ -), 3.02 (t, -CH ₂ -NH ₂ ), 3.70 (br. ., -CH ₂ -O-), 4.32 (t, -CH-CONH-).

[0148] [0148]

(1-2) (1-2)

(2) Синтез N₃-Plys_(B) (2) Synthesis N ₃ -Plys_(B)

В результате проведения реакции с применением такого же способа, что и в вышеупомянутом разделе (1-1), за исключением использования 20 мкл (0,101 ммоль) инициатора 11-азид-3,6,9-триоксаундекан-1-амина, получают твердое вещество белого цвета N₃-PLys_(B). На основе данных ¹Н-ЯМР, степень полимеризации полученного соединения составляет 98,4. As a result of the reaction using the same method as in the above section (1-1), except for using 20 μl (0.101 mmol) of the initiator 11-azide-3,6,9-trioxaundecane-1-amine, a solid is obtained white color N ₃ -PLys_(B). Based on ¹ H-NMR data, the degree of polymerization of the resulting compound is 98.4.

[Хим. стр. 83] [Chem. page 83]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,35-1,90 (шир., -СН₂-), 3,02 (т, -СН₂-NH₂), 3,70 (шир., -СН₂-О-), 4,32 (т, -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.35-1.90 (br. -CH ₂ -), 3.02 (t, -CH ₂ -NH ₂ ), 3.70 (br. ., -CH ₂ -O-), 4.32 (t, -CH-CONH-).

[0149] [0149]

(1-3) (1-3)

Синтез N₃-Plys_(C) Synthesis N ₃ -Plys_(C)

В результате проведения реакции с применением такого же способа, что и в вышеупомянутом разделе (1-1), за исключением использования 15 мкл (0,0755 ммоль) инициатора 11-азид-3,6,9-триоксаундекан-1-амина, получают твердое вещество белого цвета N₃-PLys_(С). На основе данных ¹Н-ЯМР, степень полимеризации полученного соединения составляет 130,4. As a result of carrying out the reaction using the same method as in the above section (1-1), except for using 15 μl (0.0755 mmol) of the initiator 11-azide-3,6,9-trioxaundecane-1-amine, white solid N ₃ -PLys_(C). Based on ¹ H-NMR data, the degree of polymerization of the resulting compound is 130.4.

[Хим. стр. 84] [Chem. page 84]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,35-1,90 (шир., -СН₂-), 3,02 (т, -СН₂-NH₂), 3,70 (шир., -СН₂-О-), 4,32 (т, -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.35-1.90 (br. -CH ₂ -), 3.02 (t, -CH ₂ -NH ₂ ), 3.70 (br. ., -CH ₂ -O-), 4.32 (t, -CH-CONH-).

[0150] [0150]

(1-4) (1-4)

Синтез mPEG10k-PLys Synthesis of mPEG10k-PLys

Такую же реакцию полимеризации, что и в вышеупомянутом разделе (1-1), проводят с использованием, в качестве инициатора, полиэтиленгликоля, имеющего группу -ОМе на одном конце и группу -NH₂ на другом конце и имеющего среднечисловую молекулярную массу 10000 (в дальнейшем в данном документе называемого mPEG_10k-NH₂). Взвешивают 1,00 г (0,100 ммоль) mPEG10k-PLys, добавляют в двугорлую грушевидную колбу и растворяют в 2 мл бензола. Далее, растворитель испаряют лиофилизированием. К этому добавляют 10 мл очищенного перегонкой DMSO в атмосфере аргона и растворяют лиофилизированный продукт. Далее, взвешивают 1,61 г NCA-Lys(Tfa) в атмосфере аргона и добавляют в отдельную двугорлую грушевидную колбу. К тому добавляют 16 мл очищенного перегонкой DMSO и NCA-Lys(Tfa) растворяют. Раствор NCA/DMSO добавляют к раствору PEG/DMSO с помощью шприца, и смесь перемешивают на водяной бане при 40°С в течение 2 дней. Реакционный раствор добавляют по каплям к 500 мл диэтилового эфира и очищают методом переосаждения. Осадок собирают фильтрацией через нутч-фильтр и сушат при пониженном давлении в течение ночи с получением твердого вещества белого цвета. Полученный полимер добавляют в грушевидную колбу объемом 100 мл и к тому добавляют 100 мл метанола, 2 мл 5М-ого водного раствора гидроксида натрия и 8 мл воды сверхвысокой чистоты и перемешивают в течение ночи на водяной бане, установленной на 40°С. Раствор образца помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют дважды против 1 л 0,01М-ого водного раствора гидроксида натрия в течение 4 часов и затем диализируют четыре раза против 3 л воды сверхвысокой чистоты в течение 4 часов. Раствор диализированного образца добавляют в грушевидную колбу объемом 500 мл, и растворитель удаляют лиофилизированием с получением 1,3 г твердого вещества белого цвета mPEG10k-Plys. На основе данных ¹Н-NMR, степень полимеризации полученного соединения составляет 52,1. The same polymerization reaction as in the above section (1-1) is carried out using, as an initiator, a polyethylene glycol having a -OMe group at one end and a -NH ₂ group at the other end, and having a number average molecular weight of 10,000 (hereinafter herein referred to as mPEG _10k -NH ₂ ). Weigh 1.00 g (0.100 mmol) of mPEG10k-PLys, add to a two-neck pear-shaped flask and dissolve in 2 ml of benzene. Next, the solvent is evaporated by lyophilization. To this was added 10 ml of distilled-purified DMSO under argon and the lyophilized product was dissolved. Next, 1.61 g of NCA-Lys(Tfa) is weighed under argon and added to a separate two-necked pear-shaped flask. To this, 16 ml of distilled-purified DMSO are added and the NCA-Lys(Tfa) is dissolved. The NCA/DMSO solution is added to the PEG/DMSO solution with a syringe and the mixture is stirred in a water bath at 40° C. for 2 days. The reaction solution was added dropwise to 500 ml of diethyl ether and purified by reprecipitation. The precipitate was collected by suction filtration and dried under reduced pressure overnight to give a white solid. The resulting polymer was added to a 100 ml pear-shaped flask, and thereto were added 100 ml of methanol, 2 ml of a 5M aqueous sodium hydroxide solution, and 8 ml of ultra-high purity water, and stirred overnight in a water bath set at 40°C. The sample solution was placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 kD) and dialyzed twice against 1 L of 0.01M aqueous sodium hydroxide for 4 hours and then dialyzed four times against 3 L of ultra-high purity water for 4 hours. The dialyzed sample solution was added to a 500 ml pear-shaped flask and the solvent was removed by lyophilization to give 1.3 g of mPEG10k-Plys white solid. Based on ¹ H-NMR data, the degree of polymerization of the resulting compound is 52.1.

[Хим. стр. 85] [Chem. page 85]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,35-1,90 (шир., -СН₂-), 3,02 (т, -СН₂-NH₂), 3,68 (шир., -СН₂-О-), 4,32 (т, -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.35-1.90 (br. -CH ₂ -), 3.02 (t, -CH ₂ -NH ₂ ), 3.68 (br. ., -CH ₂ -O-), 4.32 (t, -CH-CONH-).

[0151] [0151]

(2-1) (2-1)

Синтез N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys (А) Synthesis of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys (A)

1,3 г (0,066 ммоль) N₃-PLys_(A), получение которого описано в разделе (1-1) выше, 2,73 г (15,3 ммоль) D-глюконо-1,5-лактона, и 2,1 мл TEA (15 ммоль) добавляют в грушевидную колбу объемом 200 мл и растворяют в 100 мл метанола, и смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 24 часов. После этого растворитель испаряют с помощью ротационного испарителя, и полученный осадок растворяют в 30 мл 0,01М-ой соляной кислоты. После этого, раствор помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют однократно против 1 л 0,01М-ой соляной кислоты в течение 4 часов и затем диализируют четыре раза против 3 л воды сверхвысокой чистоты в течение 4 часов. Диализированный раствор фильтруют с помощью фильтра с размером ячеек 0,45 мкм и после этого растворитель испаряют лиофилизированием с получением 2,5 г твердого вещества белого цвета N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(A). На основе данных ¹Н-ЯМР, степень введения глюконовой кислоты в полимер составляет 98,0%. Кроме того, на основании степени полимеризации и степени введения, Mn=19763. К тому же, на основании данных GPC, коэффициент полидисперсности (PDI) имеет значение 1,22. 1.3 g (0.066 mmol) N ₃ -PLys_(A), the preparation of which is described in section (1-1) above, 2.73 g (15.3 mmol) D-glucono-1,5-lactone, and 2 1 ml TEA (15 mmol) was added to a 200 ml pear-shaped flask and dissolved in 100 ml methanol and the mixture was stirred at reflux for 24 hours. After that, the solvent is evaporated using a rotary evaporator, and the resulting precipitate is dissolved in 30 ml of 0.01M hydrochloric acid. Thereafter, the solution was placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 kD) and dialyzed once against 1 L of 0.01M hydrochloric acid for 4 hours, and then dialyzed four times against 3 L of ultra-high purity water for 4 hours. The dialyzed solution was filtered with a 0.45 μm filter, and then the solvent was evaporated by lyophilization to give 2.5 g of a white solid N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(A). Based on ¹ H-NMR data, the degree of incorporation of gluconic acid into the polymer is 98.0%. In addition, based on the degree of polymerization and the degree of introduction, Mn=19763. In addition, based on the GPC data, the polydispersity index (PDI) has a value of 1.22.

[Хим. стр. 86] [Chem. page 86]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,30-2,05 (шир., -СН₂-), 3,01 (шир., -СН₂-NH₂), 3,25 (шир., -СН₂-NHCО-), 3,64-4,33 (шир., -CH-OH), 4,32 (шир., -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.30-2.05 (br. -CH ₂ -), 3.01 (br., -CH ₂ -NH ₂ ), 3.25 ( br., -CH ₂ -NHCO-), 3.64-4.33 (br., -CH-OH), 4.32 (br., -CH-CONH-).

[0152] [0152]

(2-2) (2-2)

Синтез N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys (В) Synthesis of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys (B)

В результате проведения реакции с применением такого же способа, что и в вышеупомянутом разделе (2-1), за исключением использования 1,6 г (0,054 ммоль) N₃-PLys_(B) вместо N₃-PLys_(А) и использования 3,36 г (18,9 ммоль) D-глюконо-1,5-лактона и 2,6 мл (19 ммоль) TEA, получают 3,0 г твердого вещества белого цвета N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys] (B). На основе данных ¹Н-ЯМР, степень введения глюконовой кислоты в полимер составляет 98,4%. Кроме того, на основании степени полимеризации и степени введения, Mn=29712. К тому же, исходя из данных GPC, коэффициент полидисперсности (PDI) имеет значение 1,24. As a result of carrying out the reaction using the same method as in the above section (2-1), except for using 1.6 g (0.054 mmol) of N ₃ -PLys_(B) instead of N ₃ -PLys_(A) and using 3 36 g (18.9 mmol) of D-glucono-1,5-lactone and 2.6 ml (19 mmol) of TEA yield 3.0 g of white solid N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys] (B). Based on ¹ H-NMR data, the degree of incorporation of gluconic acid into the polymer is 98.4%. In addition, based on the degree of polymerization and the degree of introduction, Mn=29712. In addition, based on the GPC data, the polydispersity index (PDI) has a value of 1.24.

[Хим. стр. 87] [Chem. page 87]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,30-2,05 (шир., -СН₂-), 3,01 (шир., -СН₂-NH₂), 3,25 (шир., -СН₂-NHCО-), 3,64-4,33 (шир., -CH-OH), 4,32 (шир., -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.30-2.05 (br. -CH ₂ -), 3.01 (br., -CH ₂ -NH ₂ ), 3.25 ( br., -CH ₂ -NHCO-), 3.64-4.33 (br., -CH-OH), 4.32 (br., -CH-CONH-).

[0153] [0153]

(2-3) (2-3)

Синтез N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys] (C) Synthesis N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys] (C)

В результате проведения реакции с применением такого же способа, что и в вышеупомянутом разделе (2-1), за исключением использования 1,5 г (0,038 ммоль) N₃-PLys_(C) вместо N₃-PLys_(А), и использования 3,15 г (17,7 ммоль) D-глюконо-1,5-лактона и 2,4 мл (17 ммоль) TEA, получают 2,9 г твердого вещества белого цвета N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(С). На основе данных ¹Н-ЯМР, степень введения глюконовой кислоты в полимер составляет 97,8%. Кроме того, на основании степени полимеризации и степени введения, Mn=39636. К тому же, исходя из данных GPC, коэффициент полидисперсности (PDI) имеет значение 1,35. As a result of carrying out the reaction using the same method as in the above section (2-1), except for using 1.5 g (0.038 mmol) of N ₃ -PLys_(C) instead of N ₃ -PLys_(A), and using 3.15 g (17.7 mmol) of D-glucono-1,5-lactone and 2.4 ml (17 mmol) of TEA give 2.9 g of a white solid N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys ]_(WITH). Based on ¹ H-NMR data, the degree of incorporation of gluconic acid into the polymer is 97.8%. In addition, based on the degree of polymerization and the degree of introduction, Mn=39636. In addition, based on the GPC data, the polydispersity index (PDI) has a value of 1.35.

[Хим. стр. 88] [Chem. page 88]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,30-2,05 (шир., -СН₂-), 3,01 (шир., -СН₂-NH₂), 3,25 (шир., -СН₂-NHCО-), 3,64-4,33 (шир., -CH-OH), 4,32 (шир., -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.30-2.05 (br. -CH ₂ -), 3.01 (br., -CH ₂ -NH ₂ ), 3.25 ( br., -CH ₂ -NHCO-), 3.64-4.33 (br., -CH-OH), 4.32 (br., -CH-CONH-).

[0154] [0154]

(2-4) (2-4)

Синтез mPEG10k-P[Lys(Глюконат)/Lys] Synthesis of mPEG10k-P[Lys(Gluconate)/Lys]

1,3 г (0,050 ммоль) mPEG10k-PLys, получение которого описано в разделе (1-4) выше, 1,5 г (8,43 ммоль) D-глюконо-1,5-лактона, и 0,83 мл TEA (8,4 ммоль) добавляют в грушевидную колбу объемом 50 мл и растворяют в 10 мл метанола, который туда добавляют. Смесь перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение 24 часов. После этого, растворитель испаряют с помощью ротационного испарителя, и полученный осадок растворяют в 10 мл 0,01М-ой соляной кислоты. Раствор образца помещают в диализную мембрану (MWCO=3,5 кД) и диализируют однократно против 1 л 0,01М-ой соляной кислоты в течение 4 часов и затем диализируют четыре раза против 3 л воды сверхвысокой чистоты в течение 4 часов. Диализированный раствор фильтруют с помощью фильтра с размером ячеек 0,45 мкм и после этого растворитель испаряют лиофилизированием с получением 1,8 г твердого вещества белого цвета mPEG10k-P[Lys(Глюконат)/Lys]. На основе данных ¹Н-ЯМР, степень введения глюконовой кислоты в полимер составляет 98,9%. Кроме того, К тому же, исходя из данных GPC, коэффициент полидисперсности (PDI) имеет значение 1,16. 1.3 g (0.050 mmol) mPEG10k-PLys, the preparation of which is described in section (1-4) above, 1.5 g (8.43 mmol) D-glucono-1,5-lactone, and 0.83 ml TEA (8.4 mmol) is added to a 50 ml pear-shaped flask and dissolved in 10 ml of methanol, which is added thereto. The mixture is stirred at the boil under reflux for 24 hours. After that, the solvent is evaporated using a rotary evaporator, and the resulting precipitate is dissolved in 10 ml of 0.01M hydrochloric acid. The sample solution was placed in a dialysis membrane (MWCO=3.5 kD) and dialyzed once against 1 L of 0.01 M hydrochloric acid for 4 hours and then dialyzed four times against 3 L of ultra-high purity water for 4 hours. The dialyzed solution was filtered with a 0.45 μm filter, and then the solvent was evaporated by lyophilization to give 1.8 g of a white solid mPEG10k-P[Lys(Gluconate)/Lys]. Based on ¹ H-NMR data, the degree of incorporation of gluconic acid into the polymer is 98.9%. Additionally, based on the GPC data, the polydispersity index (PDI) has a value of 1.16.

[Хим. стр. 89] [Chem. page 89]

¹Н-ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 1,30-2,05 (шир., -СН₂-), 3,01 (шир., -СН₂-NH₂), 3,25 (шир., -СН₂-NHCО-), 3,64-4,33 (шир., -CH-OH), 3,68 (шир., -СН₂-О-), 4,32 (шир., -СН-СОNH-). ¹ H-NMR (400 MHz, D ₂ O): δ 1.30-2.05 (br. -CH ₂ -), 3.01 (br., -CH ₂ -NH ₂ ), 3.25 ( br., -CH ₂ -NHCO-), 3.64-4.33 (br., -CH-OH), 3.68 (br., -CH ₂ -O-), 4.32 (br., -CH-CONH-).

[0155] [0155]

ПРИМЕР 19 EXAMPLE 19

Оценивание связывания N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]-BPA Evaluation of binding N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]-BPA

<Реагенты> <Reagents>

Соляная кислота 5 моль/л: Nacalai Tesque Hydrochloric acid 5 mol/l: Nacalai Tesque

Водный раствор гидроксида натрия 5 моль/л: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide aqueous solution 5 mol/l: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Дигидрофосфат натрия (NaH₂PO₃): Nacalai Tesque Sodium dihydrogen phosphate (NaH ₂ PO ₃ ): Nacalai Tesque

[¹⁰B-обогащенный] 4-бороно-L-фенилаланин (BPA): Katchem [ ¹⁰ B-enriched] 4-boron-L-phenylalanine (BPA): Katchem

Ализариновый красный С (ARS): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Alizarin Red C (ARS): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

D-фруктоза: Wako Pure Chemical Industries, Ltd. D-fructose: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

D-глюкоза: Nacalai Tesque D-glucose: Nacalai Tesque

D-сорбит: Tokyo Chemical Industry Co. D-sorbitol: Tokyo Chemical Industry Co.

<Оборудование> <Equipment>

Флуоресцентный спектрофотометр (FP8300): JASCO Corporation Fluorescence Spectrophotometer (FP8300): JASCO Corporation

[0156] [0156]

Константу равновесия N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys] и BPA вычисляют с использованием способа ARS в соответствии со способом, описанным в публикации Springsteen G., Wang B. H. Tetrahedron 58, 5291-5300 (2002). Первоначально, приготавливают каждый из следующих растворов A, B, C, и D. The equilibrium constant of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys] and BPA is calculated using the ARS method according to the method described in Springsteen G., Wang BH Tetrahedron 58, 5291-5300 (2002). Initially, prepare each of the following solutions A, B, C, and D.

•Раствор A: ARS (9,0 × 10^-6 M) • Solution A: ARS (9.0 × 10 ^-6 M)

•Раствор B: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M ) • Solution B: ARS (9.0 × 10 ^-6 M), BPA (2.0 × 10 ^-3 M )

•Раствор C1: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M), Сорбит (0,05 М) • Solution C1: ARS (9.0 × 10 ^-6 M), BPA (2.0 × 10 ^-3 M), Sorbitol (0.05 M)

•Раствор С2: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M), Глюкоза (1,5 M) • Solution C2: ARS (9.0 × 10 ^-6 M), BPA (2.0 × 10 ^-3 M), Glucose (1.5 M)

•Раствор С3: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M), Фруктоза (0,1 M) • Solution C3: ARS (9.0 × 10 ^-6 M), BPA (2.0 × 10 ^-3 M), Fructose (0.1 M)

•Раствор С4: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(A) (0,01 M: эталон глюконовой кислоты боковой цепи) • Solution C4: ARS (9.0 x 10 ^-6 M), BPA (2.0 x 10 ^-3 M), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(A) (0.01 M: side chain gluconic acid standard)

•Раствор С5: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(В) (0,01 M: эталон глюконовой кислоты боковой цепи) • Solution C5: ARS (9.0 x 10 ^-6 M), BPA (2.0 x 10 ^-3 M), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(B) (0.01 M: side chain gluconic acid standard)

•Раствор С6: ARS (9,0 × 10^-6 M), BPA (2,0 × 10^-3 M), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(С) (0,01 M: эталон глюконовой кислоты боковой цепи) • Solution C6: ARS (9.0 x 10 ^-6 M), BPA (2.0 x 10 ^-3 M), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C) (0.01 M: side chain gluconic acid standard)

[0157] [0157]

Раствор А и Раствор В смешивают в различных соотношениях, и измеряют флуоресценцию с использованием одноразовых ячеек (PS, TGK) (E_x=468 нм, E_m=572 нм). Константу равновесия К₀ для ARS-BPA вычисляют на основе полученной интенсивности флуоресценции. Далее, Раствор В смешивают с Раствором C в различных соотношениях, и измеряют флуоресценцию с использованием одноразовых ячеек (E_x=468 нм, E_m=572 нм). Кажущуюся константу связывания каждого соединения и BPA вычисляют с использованием этих результатов и вышеупомянутого значения К₀. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 17. Solution A and Solution B are mixed in various ratios, and fluorescence is measured using disposable cells (PS, TGK) (E _x =468 nm, _Em =572 nm). The equilibrium constant K ₀ for ARS-BPA is calculated based on the obtained fluorescence intensity. Next, Solution B is mixed with Solution C in various ratios, and fluorescence is measured using disposable cells (E _x =468 nm, _Em =572 nm). The apparent binding constant of each compound and BPA is calculated using these results and the above K ₀ value. The results are illustrated in FIG. 17.

[0158] [0158]

Установлено, что N₃-P[Lys(Глюконат)Lys], синтезированный в ПРИМЕРЕ 18, имеет высокую прочность связывания с BPA. Прочность связывания является примерно в 4 раза выше, чем прочность связывания сорбита, который имеет высокую прочность связывания среди соединений сахаров, и примерно в 500 раз выше, чем прочность связывания глюкозы, которая часто присутствует в крови. На основании этих результатов, предполагают, что N₃-P[Lys(Глюконат)Lys]-BPA будет проявлять высокую стабильность в крови. The N ₃ -P[Lys(Gluconate)Lys] synthesized in EXAMPLE 18 was found to have a high binding strength to BPA. The binding strength is about 4 times higher than the binding strength of sorbitol, which has a high binding strength among sugar compounds, and about 500 times higher than the binding strength of glucose, which is often present in the blood. Based on these results, N ₃ -P[Lys(Gluconate)Lys]-BPA is expected to exhibit high blood stability.

[0159] [0159]

ПРИМЕР 20 EXAMPLE 20

Клеточный захват Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys]-BPA Cellular uptake of Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys]-BPA

(1) Синтез Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(С) (1) Synthesis of Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C)

100 мг (2,5 мкмоль) N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(С), синтезированный в ПРИМЕРЕ 18 (2-3), взвешивают во флаконе объемом 6 мл и растворяют в 1,8 мл DMSO. Далее, к тому добавляют 224 мкл (2,8 мкмоль) раствора Cy5-DBCO/DMSO с концентрацией 12,5 мг/мл, и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционный раствор помещают в ультрафильтрационную мембрану (MWCO=10 кД), к нему добавляют 10 мл воды сверхвысокой чистоты, и проводят ультрафильтрацию. Добавляют 15 мл воды сверхвысокой чистоты, и проводят ультрафильтрацию дополнительные два раза. Для дополнительной очистки очищенного ультрафильтрацией образца, образец очищают с использованием колонки PD-10 (GE Healthcare), раствор собранного образца лиофилизируют с испарением растворителя, и получают 97 мг Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](С) в виде твердого вещества голубого цвета. 100 mg (2.5 µmol) of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C) synthesized in EXAMPLE 18 (2-3) are weighed into a 6 ml vial and dissolved in 1.8 ml of DMSO. Next, 224 μl (2.8 μmol) of a 12.5 mg/ml Cy5-DBCO/DMSO solution was added thereto, and the mixture was stirred overnight at room temperature. The reaction solution was placed in an ultrafiltration membrane (MWCO=10 KD), 10 ml of ultra-high purity water was added thereto, and ultrafiltration was carried out. 15 ml of ultra-high purity water is added and ultrafiltration is carried out an additional two times. For further purification of the ultrafiltrated sample, the sample was purified using a PD-10 column (GE Healthcare), the collected sample solution was lyophilized with solvent evaporation to give 97 mg of Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C) as a solid blue.

[0160] [0160]

(2) Оценивание клеточного захвата Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(С)-BPA (2) Evaluation of Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C)-BPA cellular uptake

Клетки BxPC-3 инокулируют в количестве 5 × 10⁴ клеток/лунку на 8-луночный планшет (Система с камерой Lab-Tek из боросиликатного покровного стекла № 1,0) для исследований под микроскопом и инкубируют в течение ночи при 37°С в атмосфере 5%-ого СО₂ (культуральная среда: RPMI-1640, содержащая 10% FBS и 1% Пенициллин-Стрептомицина). После инкубации, культуральную среду удаляют при помощи аспиратора, и добавляют 500 мкл растворов следующих образцов. BxPC-3 cells were inoculated at 5 x 10 ⁴ cells/well into an 8-well plate (Lab-Tek Borosilicate Coverslip Camera System #1.0) for microscopy and incubated overnight at 37° C. under atmospheric 5% CO ₂ (culture medium: RPMI-1640 containing 10% FBS and 1% Penicillin-Streptomycin). After incubation, the culture medium is removed with an aspirator and 500 µl of the following sample solutions are added.

•Сорбит-BPA: BPA (3,03 мМ), Сорбит (3,64 мМ)/ культуральная среда 10% PBS-90% RPMI • Sorbitol-BPA: BPA (3.03 mM), Sorbitol (3.64 mM) / culture medium 10% PBS-90% RPMI

•Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](C)-BPA: BPA (3,03 мМ), Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](C)·(3,64 мМ: эталон глюконовой кислоты боковой цепи)/культуральная среда 10% PBS-90% RPMI • Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA: BPA (3.03 mM), Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C) (3.64 mM: Gluconic acid reference side chain)/culture medium 10% PBS-90% RPMI

Вышеупомянутые растворы образцов корректируют с доведением до 10-кратной концентрации с помощью фосфатного буферного раствора (10 мМ NaH₂PO₄, 140 мМ NaCl, pH 7,4) и затем разбавляют культуральной средой RPMI перед использованием. К этому добавляют растворы образцов и затем инкубируют в течение 1 часа. После этого, растворы образцов удаляют с помощью аспиратора, и добавляют 20 мкМ DAHMI, раствор ‘50 нМ LysoTracker Зеленый/PBS’ (500 мкл), и проводят инкубирование в течение 30 минут. После этого, растворы удаляют с помощью аспиратора и проводят промывание три раза посредством 500 мкл PBS. После трехкратного промывания, к этому добавляют 500 мкл PBS, и затем изучают флуоресценцию с помощью конфокального микроскопа. Результаты проиллюстрированы на ФИГ. 18. The above sample solutions are adjusted to a 10-fold concentration with phosphate buffer (10 mM NaH ₂ PO ₄ , 140 mM NaCl, pH 7.4) and then diluted with RPMI culture medium prior to use. To this add the sample solutions and then incubate for 1 hour. Thereafter, sample solutions are removed with an aspirator and 20 μM DAHMI, '50 nM LysoTracker Green/PBS' solution (500 μl) are added and incubated for 30 minutes. After that, the solutions are removed with an aspirator and washed three times with 500 μl of PBS. After washing three times, 500 µl of PBS was added thereto, and then the fluorescence was examined with a confocal microscope. The results are illustrated in FIG. 18.

[0161] [0161]

В результате наблюдения под микроскопом, подтверждено, что Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](C) является локализованным в эндосоме, не во всей цитоплазме. Поскольку Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](C) локализуется вместе с BPA, это позволяет предположить, что Cy5-P[Lys(Глюконат)/Lys](C)-BPA внедряется в клетки в результате эндоцитоза. As a result of microscopic observation, Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C) is confirmed to be localized in the endosome, not in the entire cytoplasm. Since Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C) is localized together with BPA, this suggests that Cy5-P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA is introduced into cells by endocytosis.

[0162] [0162]

ПРИМЕР 21 EXAMPLE 21

Фармакокинетика N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]-BPA и сорбит-BPA Pharmacokinetics of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]-BPA and Sorbitol-BPA

<Реагенты, клетки, и животные> <Reagents, cells, and animals>

N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(A), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(B), N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(C) и mPEG10k-P[Lys(Глюконат)/Lys], синтезированные в ПРИМЕРЕ 18 N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(A), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(B), N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C) and mPEG10k-P[Lys(Gluconate)/Lys] synthesized in EXAMPLE 18

D-сорбит: Tokyo Chemical Industry Co. D-sorbitol: Tokyo Chemical Industry Co.

Соляная кислота 5 моль/л: Nacalai Tesque Hydrochloric acid 5 mol/l: Nacalai Tesque

Гидроксид натрия 5 моль/л (для масс-спектрометрии): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Sodium hydroxide 5 mol/l (for mass spectrometry): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

L-4-боронофенил-аланин (BPA): Katchem L-4-boronophenyl-alanine (BPA): Katchem

Азотная кислота (1,42): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Nitric acid (1.42): Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

Клетки CT26 (клеточная линия рака толстой кишки мышей): Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) CT26 cells (mouse colon cancer cell line): American Type Culture Collection (Manassas, VA)

Мышь BALB/c: Charles River Japan Mouse BALB/c: Charles River Japan

<Оборудование> <Equipment>

Прибор для ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd. Instrument for ICP-MS Agilent 7900: Agilent Technology Co., Ltd.

Установка нейтронного облучения с использованием тяжелой воды: KUR Neutron irradiation plant using heavy water: KUR

[0163] [0163]

Модели подкожной опухоли получают подкожной инъекцией клеток CT26 мышам BALB/c в количестве 1,0 × 10⁵ клеток/мышь. Как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, 200 мкл растворов следующих образцов (рН 7,4) вводят через хвостовую вену (10 мг BPA/мышь). Растворы следующих образцов приготавливают путем растворения сахара или полимера и BPA в соответственном количестве воды сверхвысокой чистоты, добавления водного раствора гидроксида натрия и получения щелочного раствора, полного растворения растворяемого вещества и затем добавления соляной кислоты с доведением рН до 7,4, добавления воды сверхвысокой чистоты, разбавления растворов до конечных концентраций, приведенных ниже, и проведения стерилизации фильтрацией с использованием фильтра с размером ячеек 0,22 мкм. Subcutaneous tumor models are prepared by subcutaneous injection of CT26 cells into BALB/c mice at 1.0 x 10 ⁵ cells/mouse. Once the tumor size reaches approximately 200 mm ³ , 200 μl of the following sample solutions (pH 7.4) are injected via the tail vein (10 mg BPA/mouse). Solutions of the following samples are prepared by dissolving the sugar or polymer and BPA in an appropriate amount of UHP water, adding an aqueous solution of sodium hydroxide and making an alkaline solution, completely dissolving the solute and then adding hydrochloric acid to adjust the pH to 7.4, adding UHP water, diluting the solutions to the final concentrations given below and sterilizing by filtration using a filter with a mesh size of 0.22 μm.

•N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(A)-BPA (BPA 240 мМ) •N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(A)-BPA (BPA 240 mM)

•N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(В)-BPA (BPA 240 мМ) •N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(B)-BPA (BPA 240 mM)

•N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]_(С)-BPA (BPA 240 мМ) •N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]_(C)-BPA (BPA 240 mM)

•mPEG10k-P[Lys(Глюконат)/Lys]-BPA (BPA 240 мМ) •mPEG10k-P[Lys(Gluconate)/Lys]-BPA (BPA 240 mM)

•Сорбит-BPA (BPA 240 мМ, Сорбит 288 мМ) • Sorbitol-BPA (BPA 240 mM, Sorbitol 288 mM)

[0164] [0164]

Через три часа после введения образца, мышей препарируют, и опухоли удаляют. Опухоли помещают в пробирку объемом 14 мл (кругло-донная пробирка PP, Falcon), и добавляют 1 мл азотной кислоты (1,42). После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и 90°С в течение 1 часа. Добавляют воду сверхвысокой чистоты вплоть до 10 мл. После фильтрации через гидрофобный фильтр, оценивают количество бора с использованием ICP-MS. Результаты фармакокинетического анализа в отношении мышей с трансплантированными клетками CT-26 проиллюстрированы на ФИГ. 19. Three hours after sample administration, mice are dissected and tumors are removed. The tumors are placed in a 14 ml tube (PP round bottom tube, Falcon) and 1 ml of nitric acid is added (1.42). Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and 90°C for 1 hour. UHP water is added up to 10 ml. After filtration through a hydrophobic filter, the amount of boron is estimated using ICP-MS. The results of pharmacokinetic analysis in mice transplanted with CT-26 cells are illustrated in FIG. 19.

[0165] [0165]

ПРИМЕР 22 EXAMPLE 22

Противоопухолевое действие N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys]-BPA Antitumor activity of N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys]-BPA

Клетки СT-26 подкожно имплантируют (1,0 × 10⁵ клеток/ мышь) около правого бедра мышей BALB/ c, и 200 мкл следующих образцов медленно вводят через хвостовую вену мышей, имеющих размер опухоли приблизительно 50-100 мм³, (10 мг BPA/мышь). CT-26 cells are implanted subcutaneously (1.0 × 10 ⁵ cells/mouse) near the right thigh of BALB/c mice, and 200 μl of the following samples are slowly injected through the tail vein of mice having a tumor size of approximately 50-100 mm ³ (10 mg BPA/mouse).

•N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](В)-BPA (BPA 240 мМ) •N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](B)-BPA (BPA 240 mM)

•N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](С)-BPA (BPA 240 мМ) •N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](С)-BPA (BPA 240 mM)

•Сорбит-BPA (BPA 240 мМ, Сорбит 288 мМ) • Sorbitol-BPA (BPA 240 mM, Sorbitol 288 mM)

[0166] [0166]

В группе нейтронного облучения, нейтронное облучение проводят в течение 50 минут только вокруг правого бедра мыши через 2,5 часа после введения образца. С учетом дня облучения, установленного в качестве первого дня, диаметр опухоли измеряют каждые 2-3 дня с помощью электронных циркулей, и массу тела измеряют с помощью электронных весов в течение всех 30 дней. Измеренный диаметр опухоли используют в формуле эллиптической аппроксимации объема (ab² × 1/2, где a представляет собой длинную сторону, и b означает короткую сторону), что дает объем опухоли. Оцененные группы сведены вместе ниже (n=6). In the neutron irradiation group, neutron irradiation was performed for 50 minutes only around the right thigh of the mouse 2.5 hours after sample injection. With the irradiation day set as the first day, the tumor diameter is measured every 2 to 3 days with electronic calipers, and body weight is measured with electronic balance for the entire 30 days. The measured tumor diameter is used in the elliptical volume approximation formula (ab ² x 1/2 where a is the long side and b is the short side) to give the tumor volume. The evaluated groups are summarized below (n=6).

[0167] [0167]

Контрольная группа (ХОЛОДНАЯ): необработанная группа. Control group (COLD): untreated group.

Контрольная группа (ГОРЯЧАЯ): выполнено только облучение нейтронами. Control group (HOT): only neutron irradiation was performed.

Сорбит-BPA (ГОРЯЧАЯ): сделана инъекция посредством сорбит-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 2,5 часа после этого. Sorbitol-BPA (HOT): injected with sorbitol-BPA followed by neutron irradiation 2.5 hours later.

N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](В)-BPA (ГОРЯЧАЯ): сделана инъекция посредством N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](В)-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 2,5 часа после этого. N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](B)-BPA (HOT): injected with N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](B)-BPA followed by neutron irradiation after 2.5 hours after that.

N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](С)-BPA (ГОРЯЧАЯ): сделана инъекция посредством N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](С)-BPA, затем выполнено облучение нейтронами через 2,5 часа после этого. N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA (HOT): injected with N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA followed by neutron irradiation after 2.5 hours after that.

[0168] [0168]

Изменение размера опухоли с течением времени и кривые Каплана-Мейера в отношении этого показаны на ФИГУРАХ 20 и 21 (кривую выживаемости строят с объемом опухоли 1600 мм³ в качестве конечной точки). Сорбит-BPA, N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](B)-BPA (ГОРЯЧАЯ ГРУППА) и N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](С)-BPA (ГОРЯЧАЯ ГРУППА) показывают более сильное противоопухолевое действие и более высокие показатели выживаемости по сравнению с контрольными группами (Контрольная группа (ХОЛОДНАЯ) и Контрольная группа (ГОРЯЧАЯ)). Кроме того, N₃-P[Lys(Глюконат)/Lys](С)-BPA (ГОРЯЧАЯ) показывает более высокий показатель выживаемости по сравнению с другими группами. The change in tumor size over time and Kaplan-Meier curves in relation to this are shown in FIGURES 20 and 21 (survival curve is built with a tumor volume of 1600 mm ³ as the end point). Sorbitol-BPA, N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](B)-BPA (HOT GROUP) and N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA (HOT GROUP) show stronger antitumor effect and higher survival rates compared to control groups (Control group (COLD) and Control group (HOT)). In addition, N ₃ -P[Lys(Gluconate)/Lys](C)-BPA (HOT) shows a higher survival rate compared to other groups.

[0169] [0169]

ПРИМЕР 23 EXAMPLE 23

Синтез P[VA(RGD)VA] Synthesis of P[VA(RGD)VA]

Циклический пептид RGDfK, имеющий сильное сродство к интегрину α_vβ₃, который, как сообщается, сверхэкспрессируется в связанных с опухолью кровеносных сосудах и в опухолевых клетках, вводят в боковую цепь PVA. The RGDfK cyclic peptide, which has a strong affinity for the α _v β ₃ integrin, which is reported to be overexpressed in tumor-associated blood vessels and tumor cells, is introduced into the side chain of PVA.

[Хим. стр. 90] [Chem. page 90]

[0170] [0170]

<Реагенты> <Reagents>

Если не задано иное, то коммерчески доступные реагенты и растворители используют так, как они есть. Unless otherwise specified, commercially available reagents and solvents are used as they are.

PVA (Mn=9200): синтезированный согласно способу ПРИМЕРА 1 (2). PVA (Mn=9200): synthesized according to the method of EXAMPLE 1 (2).

Циклический пептид RGDfK: приобретенный в Synpeptide Cyclic peptide RGDfK: acquired in Synpeptide

CDI: приобретенный в Sigma Aldrich CDI: acquired from Sigma Aldrich

DMSO: приобретенный в Wako Pure Chemical Industries, Ltd. DMSO: Purchased from Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

DMSO-d₆: приобретенный в Wako Pure Chemical Industries, Ltd.DMSO-d ₆ : purchased from Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

[0171] [0171]

100 мг PVA и 17,7 мг CDI растворяют в 10 мл DMSO, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. После этого, к тому добавляют 19,7 мг циклического пептида RGDfK, и перемешивают в течение 24 часов при комнатной температуре. Продукт диализируют против воды три раза. После диализа, образец лиофилизируют и собирают. Результаты ¹H-NMR-анализа показывают, что один или два циклических пептида RGDfK связан(-ы) с одним полимером. 100 mg of PVA and 17.7 mg of CDI are dissolved in 10 ml of DMSO and the mixture is stirred at room temperature for 2 hours. Thereafter, 19.7 mg of RGDfK cyclic peptide was added thereto, and stirred for 24 hours at room temperature. The product is dialyzed against water three times. After dialysis, the sample is lyophilized and collected. The results of ¹ H-NMR analysis show that one or two RGDfK cyclic peptides are associated with one polymer.

[Хим. стр. 91] [Chem. page 91]

¹Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7,28-7,12 (Ph-H циклического RGDfK), 4,76-4,18 (-ОН), 4,08-3,75 (-СНСН₂- основной цепи полимера), 4,7-3,5 (СНα циклического RGDfK), 1,78-1,08 (-СНСН₂- основной цепи полимера), 1,8-1,4 (-СН₂СН₂СН₂NH-). ¹ H-NMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ): δ 7.28-7.12 (Ph-H cyclic RGDfK), 4.76-4.18 (-OH), 4.08-3.75 ( -CHCH ₂ - polymer backbone), 4.7-3.5 (CHα cyclic RGDfK), 1.78-1.08 (-CHCH ₂ - polymer backbone), 1.8-1.4 (-CH ₂ CH ₂ CH ₂ NH-).

[0172] [0172]

ПРИМЕР 24 EXAMPLE 24

Оценивание накопления в опухоли P[VA(RGD)/VA]-BPA Assessment of P[VA(RGD)/VA]-BPA tumor accumulation

<Реагенты, клетки, и животные> <Reagents, cells, and animals>

P[VA(RGD)/VA]: полученный в ПРИМЕРЕ 23 P[VA(RGD)/VA]: obtained in EXAMPLE 23

BPA: KatChem BPA: KatChem

Клетки BxPC3: Американская коллекция типовых культур (Manassas, VA) BxPC3 Cells: American Type Culture Collection (Manassas, VA)

‘Голая’ (бестимусная) мышь BALB/c: Charles River Japan ‘Nude’ (nude) mouse BALB/c: Charles River Japan

[0173] [0173]

Клетки BxPC3 подкожно вводят инъекцией ‘голым’ мышам BALB/c в количестве 5 × 10⁶ клеток/мышь. Как только размер опухоли достигает примерно 200 мм³, следующий образец внутривенно вводят инъекцией (8 мг BPA/мышь). BxPC3 cells are injected subcutaneously into BALB/c nude mice at 5 x 10 ⁶ cells/mouse. Once the tumor size reaches approximately 200 mm ³ , the next sample is injected intravenously (8 mg BPA/mouse).

P[VA(RGD)/VA]-BPA (концентрация BPA: 191 мМ, концентрация диола P[VA(RGD)/VA]: 91 мМ) в PBS (рН 10) P[VA(RGD)/VA]-BPA (BPA concentration: 191 mM, P[VA(RGD)/VA] diol concentration: 91 mM) in PBS (pH 10)

[0174] [0174]

По истечении шести часов после внутривенной инъекции, мышей подвергают эвтаназии с применением цервикальной дислокации, и затем препарируют с удалением опухолей. Опухоли помещают в пробирку фирмы Falcon объемом 10 мл, и добавляют 1 мл 70%-ой азотной кислоты. После этого, каждый образец инкубируют при 50°С в течение 15 минут, 70°С в течение 15 минут, и при 90°С в течение 1 часа. Образцы разбавляют до 10 мл чистой водой, фильтруют через гидрофобный фильтр, затем оценивают количество бора с использованием ICP-MS. В результате, P[VA(RGD)/VA]-BPA показывает высокое накопление, составляющее 6,2 ± 2,4% дозы/г опухоли, в опухоли даже через 6 часов после введения. Six hours after intravenous injection, mice are euthanized using cervical dislocation, and then dissected with removal of tumors. The tumors are placed in a 10 ml Falcon tube and 1 ml of 70% nitric acid is added. Thereafter, each sample is incubated at 50°C for 15 minutes, 70°C for 15 minutes, and at 90°C for 1 hour. Samples are diluted to 10 ml with pure water, filtered through a hydrophobic filter, then the amount of boron is estimated using ICP-MS. As a result, P[VA(RGD)/VA]-BPA shows a high accumulation of 6.2 ± 2.4% dose/g tumor in the tumor even 6 hours after administration.

ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬINDUSTRIAL APPLICABILITY

[0175] [0175]

Согласно настоящему изобретению, можно доставлять большое количество бора селективным в отношении опухоли образом в BNCT. Кроме того, это может быть применено к модифицированному фтором BPA в качестве диагностического агента и также может быть использовано в качестве диагностического агента на основе бора. According to the present invention, it is possible to deliver a large amount of boron in a tumor-selective manner to the BNCT. In addition, it can be applied to fluorine-modified BPA as a diagnostic agent, and can also be used as a boron-based diagnostic agent.

Claims (107)

1. Производное пара-борфенилаланина, включающее: 1. A para-borophenylalanine derivative comprising: полимер, связанный, либо непосредственно, либо через линкер, с группой, представленной формулой (I) ниже:a polymer linked, either directly or via a linker, to a group represented by formula (I) below: [Хим. стр. 1] [Chem. page 1]

где стрелки показывают связь со смежным атомом и where the arrows show the bond to the adjacent atom and X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F,X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, где полимер выбирают из группы, состоящей из поливинилового спирта, простого полиэфира и полипептида, и где его среднечисловая молекулярная масса производного пара-борфенилаланина составляет 1000 Да или более. wherein the polymer is selected from the group consisting of polyvinyl alcohol, polyether and polypeptide, and wherein its para-borophenylalanine derivative has a number average molecular weight of 1000 Da or more. 2. Производное пара-борфенилаланина по п. 1, где две или более групп, представленных формулой (I), связаны напрямую или через линкер с полимером и 2. A para-borophenylalanine derivative according to claim 1, wherein two or more groups represented by formula (I) are linked directly or via a linker to a polymer and где группы, представленные формулой (I), могут быть одинаковыми или различными. where the groups represented by formula (I) may be the same or different. 3. Производное пара-борфенилаланина по п.1 или 2, где полимер представляет собой поливиниловый спирт. 3. A para-borophenylalanine derivative according to claim 1 or 2, wherein the polymer is polyvinyl alcohol. 4. Производное пара-борфенилаланина по п. 3, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (II), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью:4. The para-borophenylalanine derivative according to claim 3, wherein the para-borophenylalanine derivative is a compound of formula (II) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof: [Хим. стр. 2] [Chem. page 2]

где X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, where X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, L¹ и L² представляют собой, каждый независимо, линкер или отсутствуют, L ¹ and L ² are each independently a linker or absent, R¹ и R² представляют собой, каждый независимо, водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA¹)₂ или детектируемую метку, R ¹ and R ² are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ or a detectable label, А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group, m имеет значение от 1 до 3998, m has a value from 1 to 3998, n имеет значение от 1 до 2000, n has a value from 1 to 2000, m+2n = от 10 до 4000, и m+2n = 10 to 4000, and порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary. 5. Производное пара-борфенилаланина по п.1 или 2, где полимер представляет собой полипептид. 5. A para-borophenylalanine derivative according to claim 1 or 2, wherein the polymer is a polypeptide. 6. Производное пара-борфенилаланина по п. 5, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (III), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью: 6. The para-borophenylalanine derivative according to claim 5, wherein the para-borophenylalanine derivative is a compound of formula (III) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof: [Хим. стр. 3] [Chem. page 3]

где L³ и L⁴ представляют собой, каждый независимо, линкер или отсутствуют, where L ³ and L ⁴ are each independently a linker or absent, R³ и R⁴ представляют собой, каждый независимо, водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA¹)₂ или детектируемую метку, R ³ and R ⁴ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ or a detectable label, А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group, R^5a представляют собой, каждый независимо, группу, представленную ниже формулой (IV-a) или (IV-b): R ^5a are each independently a group represented by formula (IV-a) or (IV-b) below: [Хим. стр. 4] [Chem. page 4]

где стрелки показывают связь с NH, where the arrows show the connection with NH, R^5b представляют собой, каждый независимо, группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных следующими формулами (IV-с) - (IV-g): R ^5b are each independently a group selected from the group consisting of the groups represented by the following formulas (IV-c) to (IV-g): [Хим. стр. 5] [Chem. page 5]

где стрелки показывают связь с NH, where the arrows show the connection with NH, X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, Y⁺ представляет собой H⁺, ион щелочного металла или ион тетра-С_1-6-алкил-аммония, Y ⁺ represents H ⁺ , an alkali metal ion or a tetra-C _1-6 -alkyl-ammonium ion, p = от 0 до 299, p = 0 to 299, q = от 1 до 300, q = 1 to 300, r = от 0 до 299, r = 0 to 299, p+q+r = от 10 до 300, и p+q+r = 10 to 300, and порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary. 7. Производное пара-борфенилаланина по п. 5, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (V), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью: 7. The para-borophenylalanine derivative of claim 5, wherein the para-borophenylalanine derivative is a compound of formula (V) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof: [Хим. стр. 6] [Chem. page 6]

где L⁵ и L⁶ представляют собой, каждый независимо, линкер или отсутствуют, where L ⁵ and L ⁶ are each independently a linker or absent, R⁶ и R⁷, каждый независимо, представляют собой водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA¹)₂ или детектируемую метку, R ⁶ and R ⁷ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ or a detectable label, А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group, R^8a означает группу, представленную ниже формулой (VI-a) R ^8a means the group represented by the formula (VI-a) below [Хим. стр. 7] [Chem. page 7]

где стрелка показывает связь с карбонильным углеродом, where the arrow shows the bond to the carbonyl carbon, R^8b представляют собой, каждый независимо, группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных ниже формулами (VI-b) - (VI-h): R ^8b are each independently a group selected from the group consisting of the groups represented by formulas (VI-b) to (VI-h) below: [Хим. стр. 8] [Chem. page 8]

где стрелки показывают связь с карбонильным углеродом, where the arrows show the bond to the carbonyl carbon, X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, s = от 0 до 299, s = 0 to 299, t = от 1 до 300, t = 1 to 300, u = от 0 до 299, u = 0 to 299, s+t+u = от 2 до 300, и s+t+u = 2 to 300, and порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary. 8. Производное пара-борфенилаланина по п. 5, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (XX), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью: 8. The para-borophenylalanine derivative of claim 5, wherein the para-borophenylalanine derivative is a compound of formula (XX) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof: [Хим. стр. 9] [Chem. page 9]

где L¹¹ и L¹² представляют собой, каждый независимо, линкер или отсутствуют, where L ¹¹ and L ¹² are each independently a linker or absent, R¹⁵ и R¹⁶ представляют собой, каждый независимо, водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA¹)₂ или детектируемую метку, R ¹⁵ and R ¹⁶ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ or a detectable label, А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group, R^17a означает группу, представленную ниже формулой (XXI-a) R ^17a means the group represented by the formula below (XXI-a) [Хим. стр. 10] [Chem. page 10]

где стрелка показывает связь с NH, where the arrow shows the connection with NH, R^17b представляют собой, каждый независимо, группу, выбранную из группы, состоящей из групп, представленных ниже формулами (XXI-b) - (XXI-h): R ^17b are each independently a group selected from the group consisting of the groups represented by formulas (XXI-b) to (XXI-h) below: [Хим. стр. 11] [Chem. page 11]

где стрелки показывают связь с NH, where the arrows show the connection with NH, X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, x = от 0 до 299, x = 0 to 299, y = от 1 до 300, y = 1 to 300, z = от 0 до 299, z = 0 to 299, x+y+z = от 10 до 300, и x+y+z = 10 to 300, and порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary. 9. Производное пара-борфенилаланина по п. 3, где производное пара-борфенилаланина представлено соединением формулы (XXII), приведенной ниже, или его фармацевтически приемлемой солью: 9. The para-borophenylalanine derivative according to claim 3, wherein the para-borophenylalanine derivative is represented by a compound of formula (XXII) below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof: [Хим. стр. 12] [Chem. page 12]

где X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, where X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, L¹³ и L¹⁴ представляют собой, каждый независимо, линкер или отсутствуют, L ¹³ and L ¹⁴ are each independently linker or absent, R¹⁸ и R¹⁹ представляют собой, каждый независимо, водород, гидроксильную группу, карбоксильную группу, аминогруппу, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, С_1-10-алкоксигруппу, которая может быть замещена галогеном, тиольную группу, цианогруппу, азидогруппу, -CH(OA¹)₂ или детектируемую метку, R ¹⁸ and R ¹⁹ are each independently hydrogen, a hydroxyl group, a carboxyl group, an amino group, a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a C _1-10 alkoxy group which may be substituted with halogen, a thiol group , a cyano group, an azido group, -CH(OA ¹ ) ₂ or a detectable label, А¹ представляет собой С_1-6-алкильную группу, A ¹ is a C _1-6 alkyl group, R²⁰ представляют собой, каждый независимо, С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, -NR²¹R²²-группу, или следующую группу: R ²⁰ are each independently a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, a -NR ²¹ R ²² group, or the following group: [Хим. стр. 13] [Chem. page 13]

где стрелка показывает связь с карбонильным углеродом, where the arrow shows the bond to the carbonyl carbon, R²¹ и R²² представляют собой, каждый независимо, водород или С_1-10-алкильную группу, которая может быть замещена галогеном, R ²¹ and R ²² are each independently hydrogen or a C _1-10 alkyl group which may be substituted with halogen, а = от 1 до 3998, a = from 1 to 3998, b = от 1 до 3997, b = 1 to 3997, с = от 1 до 2000, c = 1 to 2000, a+b+2c = от 10 до 4000, и a+b+2c = 10 to 4000, and порядок следования повторяющихся звеньев является произвольным. the order of repeating links is arbitrary. 10. Фармацевтическая композиция для лечения опухолей, содержащая производное пара-борфенилаланина по любому из пп. 1-9. 10. Pharmaceutical composition for the treatment of tumors, containing a para-borophenylalanine derivative according to any one of paragraphs. 1-9. 11. Фармацевтическая композиция для диагностирования и обнаружения опухолей, содержащая производное пара-борфенилаланина по любому из пп. 1-9. 11. Pharmaceutical composition for the diagnosis and detection of tumors, containing a derivative of para-borophenylalanine according to any one of paragraphs. 1-9. 12. Набор для получения композиции по п. 10 или 11 или для получения производного пара-борфенилаланина по любому из пп. 1-9, включающий в себя соединение, представленное формулой (VII) 12. A set for obtaining a composition according to claim 10 or 11 or for obtaining a para-borophenylalanine derivative according to any one of paragraphs. 1-9, including the compound represented by formula (VII) [Хим. стр. 14] [Chem. page 14]

где X¹-X⁴ представляют собой, каждый независимо, Н, ¹⁸F или ¹⁹F, и where X ¹ -X ⁴ are each independently H, ¹⁸ F or ¹⁹ F, and полимер, который может вступать в реакцию с соединением, представленным формулой (VII), с образованием производного пара-борфенилаланина по любому из пп. 1-9. a polymer that can react with a compound represented by formula (VII) to form a para-borophenylalanine derivative according to any one of paragraphs. 1-9.

Images