RU2796586C2 - Antibodies to cd6 for the treatment of severe asthma - Google Patents
Antibodies to cd6 for the treatment of severe asthma Download PDFInfo
- Publication number
- RU2796586C2 RU2796586C2 RU2020130563A RU2020130563A RU2796586C2 RU 2796586 C2 RU2796586 C2 RU 2796586C2 RU 2020130563 A RU2020130563 A RU 2020130563A RU 2020130563 A RU2020130563 A RU 2020130563A RU 2796586 C2 RU2796586 C2 RU 2796586C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- asthma
- antibody
- cell
- severe
- antigen
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКАCROSS REFERENCE
[00901 Данная заявка заявляет приоритет согласно предварительной заявке на патент США №62/636092, поданной 27 февраля 2018 года, при этом указанная заявка включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.[00901 This application claims priority under U.S. Provisional Application No. 62/636,092, filed Feb. 27, 2018, which application is incorporated herein by reference in its entirety.
ЗАЯВЛЕНИЕ ОТНОСИТЕЛЬНО ПЕРЕЧНЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSTATEMENT REGARDING THE SEQUENCE LISTING
[0002] Перечень последовательностей, относящийся к настоящей заявке, предоставляется в текстовом формате вместо бумажной копии и тем самым включен в данное описание посредством ссылки. Текстовый файл, содержащий перечень последовательностей, называется EQIL_006_01WO_ST25.txt. Размер текстового файла составляет 5 КБ, он создан 27 февраля 2019 года и подается в электронном виде посредством EFS-Web.[0002] The sequence listing related to this application is provided in text format instead of a hard copy and is hereby incorporated by reference into this specification. The text file containing the sequence listing is called EQIL_006_01WO_ST25.txt. The size of the text file is 5 KB, it was created on February 27, 2019 and is submitted electronically via EFS-Web.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION
Область техникиTechnical field
[0003] Настоящее изобретение относится к композициям и способам для лечения тяжелой астмы. Астма представляет собой заболевание, при котором возникают (i) бронхоконстрикция, (ii) избыточное продуцирование слизи и (iii) воспаление и отечность дыхательных путей, вызывая широко распространенную, но изменчивую обструкцию дыхательных путей, таким образом затрудняя дыхание больного астмой. Астма представляет собой хроническое нарушение, в первую очередь характеризующееся стойким воспалением дыхательных путей. Однако астма дополнительно характеризуется острыми эпизодами дополнительного сужения дыхательных путей за счет сокращения гиперчувствительных гладких мышц дыхательных путей.[0003] The present invention relates to compositions and methods for the treatment of severe asthma. Asthma is a disease in which (i) bronchoconstriction, (ii) excessive mucus production, and (iii) inflammation and swelling of the airways occur, causing widespread but variable airway obstruction, thus making it difficult for an asthmatic patient to breathe. Asthma is a chronic disorder primarily characterized by persistent inflammation of the airways. However, asthma is additionally characterized by acute episodes of additional airway constriction due to contraction of hypersensitive airway smooth muscle.
[0004] При астме хронические воспалительные процессы в дыхательных путях играют центральную роль в увеличении сопротивления воздушному потоку в легких.[0004] In asthma, chronic inflammation in the airways plays a central role in increasing airflow resistance in the lungs.
[0005] Хронический характер астмы также может приводить к ремоделированию стенки дыхательных путей (т.е. к структурным изменениям, таким как утолщение или отек), что может в дальнейшем оказывать эффект в отношении функции стенки дыхательных путей и влиять на гиперчувствительность дыхательных путей. Другие физиологические изменения, связанные с астмой, включают избыточное продуцирование слизи, и, если астма тяжелая, закупорку слизью, а также непрерывную денудацию и восстановление эпителия. Вследствие денудации эпителия нижележащие ткани подвергаются воздействию веществ, которые обычно не контактируют с ними, еще больше усиливая цикл клеточного повреждения и воспалительного ответа.[0005] The chronic nature of asthma can also lead to airway wall remodeling (i.e., structural changes such as thickening or swelling), which can further affect airway wall function and affect airway hyperresponsiveness. Other physiological changes associated with asthma include excessive mucus production and, if asthma is severe, mucus blockage, as well as continuous denudation and repair of the epithelium. Due to denudation of the epithelium, underlying tissues are exposed to substances not normally in contact with them, further intensifying the cycle of cellular damage and inflammatory response.
[0006] У восприимчивых людей симптомы астмы включают повторяющиеся эпизоды одышки (диспноэ), хрипения, стеснения в груди и кашля. В настоящее время борьбу с астмой осуществляют с помощью сочетания избегания раздражителя и применения фармакологических средств, в зависимости, в первую очередь, от подтипа астмы, который присутствует у пациента.[0006] In susceptible individuals, asthma symptoms include recurring episodes of shortness of breath (dyspnea), wheezing, chest tightness, and coughing. Asthma is currently controlled by a combination of irritant avoidance and pharmacological agents, depending primarily on the subtype of asthma present in the patient.
[0007] Астма - это гетерогенное заболевание, классифицируемое согласно Национальной образовательной и превентивной программе по бронхиальной астме (NAEPP) на четыре основные клинические категории в зависимости от тяжести астмы, в том числе: (1) интермиттирующая астма, (2) легкая персистирующая астма, (3) умеренная персистирующая астма (4) и тяжелая персистирующая астма. С другой стороны, Глобальная инициатива по борьбе с астмой (GINA) в 2016 г. подразделяет тяжесть астмы на легкую, умеренную или тяжелую, причем тяжесть оценивается на основе уровня лечения, необходимого для контроля симптомов и обострений.[0007] Asthma is a heterogeneous disease classified by the National Asthma Education and Prevention Program (NAEPP) into four main clinical categories based on the severity of asthma, including: (1) intermittent asthma, (2) mild persistent asthma, (3) moderate persistent asthma (4) and severe persistent asthma. On the other hand, the Global Asthma Initiative (GINA) in 2016 categorizes asthma severity into mild, moderate or severe, with severity assessed based on the level of treatment needed to control symptoms and flare-ups.
[0008] Например, в NAEPP приняты следующие клинические характеристики.[0008] For example, NAEPP adopted the following clinical characteristics.
[0009] Интермиттирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания менее двух раз в неделю; наличием обострений, которые являются непродолжительными, но интенсивность которых может варьировать; проявлением симптомов в ночное время реже двух раз в месяц; отсутствием симптомов между обострениями; значениями при тесте функции легких FEV 1, составляющими 80% или больше от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей менее 20%, при сравнении утро-утро, утро-вечер, между отдельными днями (веб-страница всемирной сети: //emedicine.medscape.com/article/296301-guidelines#g2).[0009] Intermittent asthma is characterized by symptoms of coughing, wheezing, chest tightness, or difficulty breathing less than twice a week; the presence of exacerbations that are short-lived, but the intensity of which may vary; symptoms at night less than twice a month; no symptoms between exacerbations;
[0010] Легкая персистирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания 3-6 раз в неделю; наличием обострений, которые могут повлиять на уровень активности; проявлением симптомов в ночное время 3-4 раза в месяц; значениями при тесте функции легких FEV 1, составляющими 80% и больше от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей менее 20-30% (там же).[0010] Mild persistent asthma is characterized by symptoms of coughing, wheezing, chest tightness, or difficulty breathing 3-6 times a week; the presence of exacerbations that can affect the level of activity; manifestation of symptoms at night 3-4 times a month;
[0011] Умеренная персистирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания каждый день; наличием обострений, которые могут повлиять на уровень активности; проявлением симптомов в ночное время 5 или более раз в месяц; значениями при тесте функции легких FEV 1, составляющими более 60%, но менее 80% от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей более 30% (там же).[0011] Moderate persistent asthma is characterized by the presence of symptoms of coughing, wheezing, chest tightness or difficulty breathing every day; the presence of exacerbations that can affect the level of activity; symptoms at
[0012] Тяжелая персистирующая астма характеризуется наличием симптомов кашля, хрипения, стеснения в груди или затрудненного дыхания, которые являются продолжительными; частым проявлением симптомов в ночное время; результатами теста функции легких FEV 1, составляющими 60% или меньше от нормальных значений; изменчивостью результатов пикфлоуметрии, составляющей более 30% (там же).[0012] Severe persistent asthma is characterized by the presence of symptoms of coughing, wheezing, chest tightness or difficulty breathing that are prolonged; frequent onset of symptoms at night;
[0013] Кроме того, исходя из типов воспалительных клеток или их отсутствия в дыхательных путях при астме существует четыре различных фенотипа воспаления дыхательных путей: эозинофильное воспаление, нейтрофильное воспаление, смешанное воспаление и малогранулоцитарное воспаление. Как обсуждается ниже, нейтрофильное воспаление, смешанное воспаление и малогранулоцитарное воспаление являются неэозинофильными формами астмы.[0013] In addition, based on the types of inflammatory cells or their absence in the airways in asthma, there are four different phenotypes of airway inflammation: eosinophilic inflammation, neutrophilic inflammation, mixed inflammation, and small granulocytic inflammation. As discussed below, neutrophilic inflammation, mixed inflammation, and small granulocytic inflammation are non-eosinophilic forms of asthma.
[0014] Эозинофильное воспаление, часто называемое эозинофильной или аллергической астмой, считается результатом опосредованного Th2 воспалительного ответа (часто обозначается как "с высоким содержанием типа 2"), сопровождающегося продуцированием IL-4, IL-5 и IL-13, что приводит к увеличению количества эозинофилов легких. Эозинофилы выделяют дополнительные цитокины, которые усиливают основное воспаление и ухудшают симптомы астмы. Клинически дифференциация эозинофильной астмы от неэозинофильных форм основана в первую очередь на уровне циркулирующих эозинофилов, обнаруженных в образце крови, который используется в качестве косвенного показателя для получения представления об уровнях эозинофилов, которые, вероятно, будут присутствовать в легких. Обычно считается, что у пациентов «низкий» уровень эозинофилов в крови, если количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300 клеток/мкл. У таких пациентов неэозинофильная астма. И наоборот, считается, что у пациентов с количеством эозинофилов в крови, составляющим > 300 клеток/мкл, - эозинофильная.[0014] Eosinophilic inflammation, often referred to as eosinophilic or allergic asthma, is thought to result from a Th2-mediated inflammatory response (often referred to as "
[0015] Нейтрофильное воспаление, часто называемое нейтрофильной или неаллергической астмой, считается результатом опосредованного Th1/Th17 воспалительного ответа (часто обозначается как "с низким содержанием типа 2"), сопровождающегося продуцированием IFN-γ, IL-6, IL- 17 и IL-8, что приводит к увеличению количества нейтрофилов в легких. Нейтрофилы выделяют дополнительные цитокины, которые усиливают основное воспаление и ухудшают симптомы астмы. Как правило, у пациентов с нейтрофильной астмой показывают количество нейтрофилов в крови, составляющее > 4600 клеток/мкл, например (Vedel-Krogh, S. et al., Clin Chem. 2017 Apr;63(4):823-832; Schleich, F. et al., BMC Pulm Med. 2013; 13: 11).[0015] Neutrophilic inflammation, often referred to as neutrophilic or non-allergic asthma, is thought to result from a Th1/Th17 mediated inflammatory response (often referred to as "
[0016] Смешанное воспаление - это фенотип, при котором у пациентов могут наблюдаться как эозинофильное, так и/или нейтрофильное воспаление, хотя уровни любого из этих типов гранулоцитов могут быть низкими.[0016] Mixed inflammation is a phenotype in which patients may experience both eosinophilic and/or neutrophilic inflammation, although levels of either of these granulocyte types may be low.
[0017] Малогранулоцитарное воспаление - это фенотип, при котором у пациентов наблюдается воспаление легких, несмотря на нормальные уровни эозинофилов и нейтрофилов. Также это форма неаллергической астмы, которая, как полагают, является результатом опосредованного Th1/Th17 воспалительного ответа (часто обозначается как "с низким содержанием типа 2"), сопровождающегося продуцированием IFN-γ, IL-6 и IL-17. Примечательно, что у пациентов с малогранулоцитарной астмой, как правило, отсутствуют обнаруживаемые количества эозинофилов в крови.[0017] Small granulocytic inflammation is a phenotype in which patients experience lung inflammation despite normal levels of eosinophils and neutrophils. It is also a form of non-allergic asthma that is believed to result from a Th1/Th17 mediated inflammatory response (often referred to as "
[0018] Гетерогенность астмы проиллюстрирована на фиг. 7, на которой показана взаимосвязь между типом воспаления (например, с высоким или низким содержанием Th2) и текущим представлением о различных фенотипах астмы. Хотя фенотипы перекрываются, опосредованные Th2 ответы показаны на фигуре слева, и они коррелируют с аллергическими эозинофильными ответами, которые являются чувствительными к лечению кортикостероидами. Напротив, неаллергические, неэозинофильные ответы на фигуре справа демонстрируют ответы с низким содержанием Th2, характеризуются ответами с высоким содержанием Th1 и/или Th1/Th17, являются нейтрофильными или малогранулоцитарными и не проявляют чувствительности к лечению кортикостероидами.[0018] The heterogeneity of asthma is illustrated in FIG. 7, which shows the relationship between type of inflammation (eg, high or low Th2) and current understanding of various asthma phenotypes. Although the phenotypes overlap, Th2-mediated responses are shown in the figure on the left, and they correlate with allergic eosinophilic responses, which are sensitive to corticosteroid treatment. In contrast, non-allergic, non-eosinophilic responses in the figure on the right exhibit low Th2 responses, are characterized by high Th1 and/or Th1/Th17 responses, are neutrophilic or low granulocytic, and are not responsive to corticosteroid treatment.
[0019] Существующие в настоящее время возможности лечения астмы / борьбы с астмой варьируют от избегания раздражителя до фармакологических или даже хирургических вмешательств.[0019] Current asthma treatment/control options range from irritant avoidance to pharmacological or even surgical interventions.
[0020] Избегание раздражителя достигается за счет систематической идентификации и минимизации контакта с каждым типом раздражителей. Однако избегание всех потенциальных раздражителей может оказаться непрактичным и не всегда целесообразным.[0020] Stimulus avoidance is achieved by systematically identifying and minimizing contact with each type of stimulus. However, avoiding all potential irritants may be impractical and not always appropriate.
[0021] Борьбу с астмой посредством фармакологических средств осуществляют путем (1) долгосрочного контроля посредством применения противовоспалительных средств и бронходилататоров длительного действия и (2) краткосрочной борьбы с острыми обострениями посредством применения бронходилататоров краткосрочного действия (например, бета-агонистов). Оба этих подхода требуют многократного и регулярного применения назначенных лекарственных средств.[0021] Asthma is controlled by pharmacological means by (1) long-term control through the use of anti-inflammatory drugs and long-acting bronchodilators and (2) short-term control of acute exacerbations through the use of short-term bronchodilators (for example, beta-agonists). Both of these approaches require repeated and regular use of prescribed drugs.
[0022] В условиях клиники пациенты с астмой чаще всего проходят тестирование на аллергическую или другие формы астмы путем анализа количества эозинофилов в их крови для определения наилучшего плана действий в отношении борьбы с заболеванием. Как обсуждается далее в данном документе, лечение стероидами противопоказано пациентам с низким содержанием или отсутствием эозинофилов в их крови. Несмотря на то, что в данной области техники существуют разные мнения относительно того, где именно находится граница для разграничения низкого и нормального или высокого содержания эозинофилов в крови, как используется в данном документе, «низкое» количество эозинофилов в крови означает, что у субъекта количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300клеток/мкл. Такие пациенты с низким содержанием (или отсутствием) обнаруживаемых количеств эозинофилов в крови представляют собой пациентов с тяжелой астмой, относящихся к популяции высокого риска, для которых эффективное лечебное средство является крайне необходимым.[0022] In the clinical setting, asthma patients are most commonly tested for allergic or other forms of asthma by analyzing their blood eosinophil count to determine the best course of action to control the disease. As discussed later in this document, steroid treatment is contraindicated in patients with low or no eosinophils in their blood. Although there are differing opinions in the art as to exactly where the line is to distinguish between low and normal or high blood eosinophils, as used herein, a "low" blood eosinophil count means that a subject has eosinophils in the blood is ≤ 300 cells / μl. Such patients with low (or no) detectable levels of eosinophils in the blood represent severe asthma patients in a high-risk population for whom an effective therapeutic agent is essential.
[0023] Современные виды лечения астмы включают бета-агонисты длительного действия (LABA), бета-агонисты краткосрочного действия (SABA), такие как альбутерол (ProAir HFA, Proventil HFA, Ventolin HFA), метапротеренол, левальбутерол (Xopenex HFA) и пирбутерол (Maxair), которые вводят с помощью быстродействующего ингалятора (скорой помощи) или с помощью небулайзеров, которые превращают лекарственный препарат в туман, который пациент может вдыхать глубоко в легкие. Для лечения астмы также применяют. Эти лекарственные препараты, которые часто принимают путем ингаляции или в форме таблеток, помогают уменьшить воспаление легких и контролировать симптомы астмы. Кортикостероиды также можно вводить внутривенно, как правило, пациентам с рвотой или дыхательной недостаточностью. Также иногда в качестве бронходилататора для лечения тяжелых приступов астмы применяют ипратропий (атровент), особенно если альбутерол не вполне эффективен. В таблице 1 представлен список различных фармакологических средств, которые либо в настоящее время одобрены FDA для лечения тяжелой астмы, либо разрабатываются в настоящее время или были разработаны ранее для лечения астмы.[0023] Current asthma treatments include long acting beta agonists (LABA), short acting beta agonists (SABA) such as albuterol (ProAir HFA, Proventil HFA, Ventolin HFA), metaproterenol, levalbuterol (Xopenex HFA), and pirbuterol ( Maxair), which are administered with a rapid-acting inhaler (ambulance) or with nebulizers, which turn the drug into a mist that the patient can inhale deeply into the lungs. Also used to treat asthma. These drugs, often taken by inhalation or in tablet form, help reduce inflammation in the lungs and control asthma symptoms. Corticosteroids can also be given intravenously, usually in patients with vomiting or respiratory failure. Ipratropium (Atrovent) is also sometimes used as a bronchodilator to treat severe asthma attacks, especially if albuterol is not fully effective. Table 1 provides a list of various pharmacological agents that are either currently approved by the FDA for the treatment of severe asthma or are currently or have been developed for the treatment of asthma.
Таблица 1. Одобренные или разработанные средства для лечения тяжелой астмыTable 1. Approved or developed agents for the treatment of severe asthma
(По состоянию на январь 2018 года)(As of January 2018)
[0024] Наконец, если приступ астмы представляет угрозу для жизни, для облегчения дыхания пациента может понадобиться интубация, искусственная вентиляция легких и кислород, в то время как для того, чтобы взять астму под контроль пробуют другие лекарственные препараты.[0024] Finally, if the asthma attack is life-threatening, intubation, mechanical ventilation, and oxygen may be needed to help the patient breathe, while other drugs are tried to control asthma.
[0025] Однако все доступные в настоящее время виды лечения имеют недостатки.[0025] However, all currently available treatments have disadvantages.
[0036] Сложность, связанная с соблюдением пациентом требований в отношении борьбы посредством фармакологических средств, и сложность избегания раздражителя, индуцирующего астму, являются распространенными препятствиями на пути к успешному исходу борьбы с астмой. Более того, многие из этих видов лечения сфокусированы на уменьшении выраженности симптомов астмы, но не устраняют первопричины заболевания. Таким образом, современные методики борьбы не являются ни полностью успешными, ни лишенными побочных эффектов.[0036] Difficulty in patient compliance with pharmacological control requirements and difficulty in avoiding an asthma-inducing stimulus are common barriers to successful asthma control outcomes. Moreover, many of these treatments focus on reducing the severity of asthma symptoms, but do not address the underlying causes of the disease. Thus, current methods of control are neither completely successful nor without side effects.
[0027] Высокие дозы кортикостероидных противовоспалительных лекарственных средств могут иметь серьезные побочные эффекты, требующие тщательного контроля. Кроме того, некоторые пациенты являются резистентными или рефрактерными к видам лечения стероидами. Эти пациенты составляют дополнительную категорию пациентов с астмой, называемых пациентами с тяжелой астмой (СА), которые представляют собой огромную клиническую проблему вследствие тяжести их заболевания и отсутствия у них ответа на традиционные виды лечения астмы. Действительно, хотя резистентное или рефрактерное к стероидам заболевание имеется только у 5-10% астматиков, на медицинскую помощь этим пациентам приходится 50-80% всех связанных с астмой затрат на здравоохранение в США, Европе и Австралии из-за частых случаев их госпитализации и потребности в неотложной помощи (Hansbro et al., Immunological Reviews. 2017;278:41-62.[0027] High doses of corticosteroid anti-inflammatory drugs can have serious side effects that require careful monitoring. In addition, some patients are resistant or refractory to steroid treatments. These patients constitute an additional category of asthma patients called severe asthma (SA) patients, who represent a huge clinical problem due to the severity of their disease and their lack of response to conventional asthma treatments. Indeed, although only 5-10% of asthmatics have steroid-resistant or refractory disease, these patients account for 50-80% of all asthma-related health care costs in the US, Europe, and Australia due to their frequent hospitalizations and need in emergency care (Hansbro et al., Immunological Reviews. 2017;278:41-62.
[0028] Тяжелая астма чаще всего связана с неаллергическими фенотипами Th1/Th17, такими как нейтрофильная или малогранулоцитарная астма, или смешанным фенотипом Th1/Th17-нейтрофильной/ Th2-эозинофильной астмы, при которой клетки Th17 и нейтрофилы отвечают слабо, а иногда вообще не отвечают на кортикостероиды (фиг. 7).[0028] Severe asthma is most often associated with non-allergic Th1/Th17 phenotypes, such as neutrophilic or small granulocytic asthma, or a mixed Th1/Th17-neutrophilic/Th2-eosinophilic asthma phenotype, in which Th17 cells and neutrophils respond poorly, and sometimes not at all. for corticosteroids (Fig. 7).
[0029] В то время как аллергическая, опосредованная Th2, эозинофильная астма, как правило, является чувствительной к лечению кортикостероидами (фиг. 7).[0029] While allergic, Th2 mediated, eosinophilic asthma is generally responsive to corticosteroid treatment (FIG. 7).
[0030] Соответственно, существует потребность в новых видах лечения астмы, которые бы являлись избирательными в отношении лечения патологии, лежащей в основе заболевания. Также существует потребность в новых видах лечения астмы, которые эффективны при лечении форм астмы, резистентных или рефрактерных к стероидам (т.е. SA). Настоящее изобретение предусматривает композиции и способы для лечения, предотвращения и ослабления тяжелой астмы, и в конкретных вариантах осуществления - тяжелой астмы, характеризующейся низким содержанием эозинофилов в крови или их отсутствием.[0030] Accordingly, there is a need for new treatments for asthma that are selective in treating the pathology underlying the disease. There is also a need for new asthma treatments that are effective in treating steroid-resistant or refractory forms of asthma (ie, SA). The present invention provides compositions and methods for treating, preventing and alleviating severe asthma, and in specific embodiments, severe asthma characterized by low or no blood eosinophils.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯSUMMARY OF IMPLEMENTATION OPTIONS
[0031] Настоящее изобретение среди прочего относится к лечению, предотвращению или смягчению астмы, включающим введение субъекту антитела к CD6. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой EQ001. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой неаллергическую астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой неэозинофильную астму.[0031] The present invention relates, inter alia, to the treatment, prevention, or mitigation of asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody to a subject. In specific embodiments, the anti-CD6 antibody is EQ001. In some embodiments, the asthma is severe asthma. In some embodiments, asthma is characterized by low or no eosinophils. In some embodiments, the asthma is neutrophilic asthma. In some embodiments, the asthma is small granulocytic asthma. In some embodiments, the asthma is mixed inflammation asthma. In some embodiments, the asthma is non-allergic asthma. In some embodiments, the asthma is non-eosinophilic asthma.
[0032] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2.[0032] In some embodiments, the present invention provides a method for suppressing T cell-mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising administering to the subject an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof contains variable regions of severe and light chains containing the amino acid sequences shown under SEQ ID NOs: 1 and 2.
[0033] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.[0033] In some embodiments, the present invention provides a method of suppressing T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof to the subject.
[0034] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения или ослабления миграции Т-клеток в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.[0034] In some embodiments, the present invention provides a method of preventing or attenuating T cell migration into and through lung tissue in response to an asthma-inducing antigen, comprising administering an anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, to a subject.
[0035] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.[0035] In some embodiments, the present invention provides a method for modulating or ameliorating the symptom or severity of asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, to a subject.
[0036] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий приведение T-клеток в контакт с антителом к CD6 или его антигенсвязывающим фрагментом.[0036] In some embodiments, the present invention provides a method for modulating or ameliorating a symptom or severity of asthma, comprising contacting T cells with an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof.
[0037] В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови. В некоторых вариантах осуществления астма является рефрактерной к лечению стероидами. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма является малогранулоцитарной.[0037] In some embodiments, the asthma is severe asthma. In some embodiments, asthma is characterized by low or no blood eosinophils. In some embodiments, asthma is refractory to steroid treatment. In some embodiments, the asthma is neutrophilic asthma. In some embodiments, the asthma is mixed inflammation asthma. In some embodiments, the asthma is small granulocytic.
[0038] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с белком CD6 на поверхности Т-клетки. В некоторых вариантах осуществления T-клетка представляет собой T-клетку Th1, Th17 или Th1 и Th17.[0038] In some embodiments, an anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, binds to the CD6 protein on the surface of a T cell. In some embodiments, the T cell is a Th1, Th17, or Th1 and Th17 T cell.
[0039] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой EQ001 или антигенсвязывающий фрагмент EQ001. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 1 или 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления связывание антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента с белком CD6 на поверхности T-клетки модулирует активность и/или миграцию T-клетки. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой гуманизированное антитело. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из mAb UMCD6, итолизумаба (EQ001), антитела к CD6, описанного в таблице 2, и антитела к CD6, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело к CD6 представляет собой антитело, продуцируемое секретирующей гибридомой IOR-T1A, депонированной в ECACC под № депонирования ECACC 96112640; антитело, имеющее ту же последовательность, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой; или антитело, имеющее те же последовательности CDR, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой.[0039] In some embodiments, the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof is EQ001 or an antigen-binding fragment of EQ001. In some embodiments, an anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, binds to
[0040] В некоторых конкретных вариантах осуществления любой из способов, раскрытых в данном документе, включает введение EQ001. В некоторых конкретных вариантах осуществления любой из способов, раскрытых в данном документе, включает введение антигенсвязывающего фрагмента EQ001. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из Fv, Fab, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельной области, тяжелой(-ых) цепи(-ей) и легкой(-их) цепи(-ей).[0040] In some specific embodiments, any of the methods disclosed herein includes the introduction of EQ001. In some specific embodiments, any of the methods disclosed herein includes the introduction of an antigen-binding fragment of EQ001. In some embodiments, the antigen-binding fragment is selected from Fv, Fab, CDR1, CDR2, CDR3, combination of CDR, variable region, heavy chain(s), and light chain(s).
[0041] В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат одну или более последовательностей CDR, выбранных из SEQ ID NO: 5-10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2. В некоторых вариантах осуществления SEQ ID NO: 1 и 2 кодируются SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1, и последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2.[0041] In some embodiments, the anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, comprises one or more CDR sequences selected from SEQ ID NOs: 5-10. In some embodiments, the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises heavy and light chain variable regions comprising the amino acid sequences shown under SEQ ID NOs: 1 and 2. In some embodiments, SEQ ID NOs: 1 and 2 are encoded by SEQ ID NOs: 3 and 4 respectively. In some embodiments, the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises a VH sequence that is at least 80% identical to the amino acid sequence shown under SEQ ID NO: 1. In some embodiments, the anti-CD6 antibody or antigen-negative fragment thereof comprises a VK sequence that is at least 80% identical to the amino acid sequence shown under SEQ ID NO: 2. In some embodiments, the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof contains a VH sequence that is at least 80% identical to the amino acid sequence shown under SEQ ID NO: 1 and a VK sequence that is at least 80% identical to the amino acid sequence shown under SEQ ID NO: 2.
[0042] В некоторых вариантах осуществления любой из способов по настоящему изобретению дополнительно включает введение одного или более дополнительных средств, с помощью которых можно осуществлять лечение, предупреждение или ослабление одного или более симптомов, связанных с астмой. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, с помощью которого можно осуществлять модулирование иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, которое представляет собой иммунодепрессант. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает бета-агонист длительного действия, бета-агонист краткосрочного действия или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает альбутерол. В некоторых вариантах осуществления альбутерол вводят в лекарственной форме, выбранной из порошка для применения в виде аэрозоля, раствора, капсулы и суспензии, полученной из порошка. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает кортикостероид. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят в виде состава для ингаляции. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят в лекарственной форме, выбранной из таблетки, капсулы с отсроченным высвобождением, таблетки с пролонгированным высвобождением, капсулы с пролонгированным высвобождением, сиропа, раствора, настойки, суспензии, таблетки с отсроченным высвобождением, жидкости и таблетки для рассасывания. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает ипратропий. В некоторых вариантах осуществления ипратропий вводят в лекарственной форме, представляющей собой спрей.[0042] In some embodiments, any of the methods of the present invention further comprises administering one or more additional agents that can treat, prevent, or alleviate one or more symptoms associated with asthma. In some embodiments, the implementation of the additional tool provides a means by which you can modulate the immune system. In some embodiments, the additional agent provides an agent that is an immunosuppressant. In some embodiments, the additional agent comprises a long acting beta agonist, a short acting beta agonist, or a combination thereof. In some embodiments, the implementation of the additional tool provides albuterol. In some embodiments, albuterol is administered in a dosage form selected from a powder for use as an aerosol, solution, capsule, and suspension prepared from the powder. In some embodiments, the additional agent comprises a corticosteroid. In some embodiments, the corticosteroid is administered as an inhalation formulation. In some embodiments, the corticosteroid is administered in a dosage form selected from a tablet, a delayed release capsule, an extended release tablet, an extended release capsule, a syrup, a solution, a tincture, a suspension, a delayed release tablet, a liquid, and a lozenge. In some embodiments, the additional agent provides for ipratropium. In some embodiments, ipratropium is administered in a spray dosage form.
[0043] В некоторых вариантах осуществления любой из способов по настоящему изобретению дополнительно включает применение интубации, искусственной вентиляции легких и/или кислородной терапии.[0043] In some embodiments, any of the methods of the present invention further includes the use of intubation, mechanical ventilation, and/or oxygen therapy.
[0044] В некоторых вариантах осуществления в любом из способов по настоящему изобретению антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в виде фармацевтической композиции, содержащей одно или более из фармацевтически приемлемых солей, вспомогательных веществ или сред-носителей. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ, разбавителей, антиоксидантов, консервантов, красителей, вкусоароматических добавок и понизителей вязкости, эмульгирующих средств, суспендирующих средств, растворителей, наполнителей, объемообразующих средств, буферов, средств доставки, регуляторов тоничности, сорастворителей, смачивающих средств, комплексообразующих средств, буферных веществ, противомикробных средств и/или поверхностно-активных веществ.[0044] In some embodiments, in any of the methods of the present invention, the anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, is administered as a pharmaceutical composition containing one or more pharmaceutically acceptable salts, excipients, or carrier vehicles. In some embodiments, the composition contains one or more agents selected from the group consisting of carriers, excipients, diluents, antioxidants, preservatives, coloring agents, flavoring agents and viscosity reducers, emulsifying agents, suspending agents, solvents, fillers, bulking agents, buffers , delivery vehicles, tonicity regulators, co-solvents, wetting agents, complexing agents, buffering agents, antimicrobial agents and/or surfactants.
[0045] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, где антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2, и при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови. В некоторых вариантах осуществления астма является резистентной или рефрактерной к лечению стероидами. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма является малогранулоцитарной. В некоторых вариантах осуществления Т-клетка выбрана из (i) Т-клетки Th1, (ii) Т-клетки Th17 или (iii) Т-клетки Th1 и Th17. В некоторых вариантах осуществления изобретения у субъекта количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300 клеток/мкл. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется неаллергическая астма. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой EQ001.[0045] In some embodiments, the present invention provides a method for suppressing T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising administering to the subject an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof comprise the variable regions of severe and light chains containing the amino acid sequences shown under SEQ ID NOs: 1 and 2, and asthma is characterized by low or no eosinophils in the blood. In some embodiments, the asthma is resistant or refractory to steroid treatment. In some embodiments, the asthma is neutrophilic asthma. In some embodiments, the asthma is mixed inflammation asthma. In some embodiments, the asthma is small granulocytic. In some embodiments, the T cell is selected from (i) a Th1 T cell, (ii) a Th17 T cell, or (iii) a Th1 and Th17 T cell. In some embodiments, the subject has a blood eosinophil count of ≤ 300 cells/µl. In some embodiments, the subject has non-allergic asthma. In some embodiments, the anti-CD6 antibody is EQ001.
[0046] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ подавления опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови.[0046] In some embodiments, the present invention provides a method of suppressing T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof to the subject, wherein the asthma is characterized by low or no blood eosinophils.
[0047] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения или ослабления миграции Т-клеток в легочную ткань и через нее в ответ на антиген, индуцирующий астму, где астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента.[0047] In some embodiments, the present invention provides a method of preventing or attenuating T cell migration into and through lung tissue in response to an asthma-inducing antigen, wherein asthma is characterized by low or no eosinophils in the blood, comprising administering an anti-CD6 antibody to a subject, or its antigen-binding fragment.
[0048] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий введение субъекту антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови.[0048] In some embodiments, the present invention provides a method for modulating or ameliorating the symptom or severity of asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, to a subject, wherein the asthma is characterized by low or no blood eosinophils.
[0049] В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предусматривает способ модулирования или ослабления симптома или тяжести астмы, включающий приведение Т-клетки в контакт с антителом к CD6 или его антигенсвязывающим фрагментом, при этом астма характеризуется низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови.[0049] In some embodiments, the present invention provides a method for modulating or ameliorating a symptom or severity of asthma, comprising contacting a T cell with an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof, wherein asthma is characterized by low or no blood eosinophils.
[0050] В некоторых вариантах осуществления астма является резистентной или рефрактерной к лечению стероидами. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой астму со смешанным воспалением. В некоторых вариантах осуществления астма является малогранулоцитарной. В некоторых вариантах осуществления T-клетка выбрана из (i) Т-клетки Th1, (ii) Т-клетки Th17 или (iii) Т-клетки Th1 и Th17. В некоторых вариантах осуществления у субъекта количество эозинофилов в крови составляет ≤ 300 клеток/мкл. В некоторых вариантах осуществления у субъекта имеется неаллергическая астма. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой EQ001 или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой EQ001. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 1 или 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с доменом 3 на CD6. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из mAb UMCD6, итолизумаба (EQ001), антитела к CD6, описанного в таблице 2, и антитела к CD6, раскрытого в данном документе. В некоторых вариантах осуществления моноклональное антитело к CD6 представляет собой антитело, продуцируемое секретирующей гибридомой IOR-T1A, депонированной в ECACC под № депонирования ECACC 96112640; антитело, имеющее ту же последовательность, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой; или антитело, имеющее те же последовательности CDR, что и указанное антитело, продуцируемое указанной секретирующей гибридомой. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат одну или более последовательностей CDR, выбранных из SEQ ID NO: 5-10. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и 2. В некоторых вариантах осуществления SEQ ID NO: 1 и 2 кодируются SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент содержат последовательность VH, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1, и последовательность VK, которая на по меньшей мере 80% идентична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из Fv, Fab, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельной области, тяжелой(-ых) цепи(-ей) и легкой(-их) цепи(-ей). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с белком CD6 на поверхности T-клетки. В некоторых вариантах осуществления связывание антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента с белком CD6 на поверхности T-клетки модулирует активность и/или миграцию T-клетки. [0050] In some embodiments, asthma is resistant or refractory to steroid treatment. In some embodiments, the asthma is neutrophilic asthma. In some embodiments, the asthma is mixed inflammation asthma. In some embodiments, the asthma is small granulocytic. In some embodiments, the T cell is selected from (i) a Th1 T cell, (ii) a Th17 T cell, or (iii) a Th1 and Th17 T cell. In some embodiments, the subject has a blood eosinophil count of ≤ 300 cells/µl. In some embodiments, the subject has non-allergic asthma. In some embodiments, the asthma is severe asthma. In some embodiments, the asthma is severe asthma. In some embodiments, the anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof is EQ001 or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the anti-CD6 antibody is EQ001. In some embodiments, an anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, binds to
[0051] В некоторых вариантах осуществления такие способы дополнительно включают введение одного или более дополнительных средств, с помощью которых можно осуществлять лечение, предупреждение или ослабление одного или более симптомов, связанных с астмой. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, с помощью которого можно осуществлять модулирование иммунной системы. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает средство, которое представляет собой иммунодепрессант. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает бета-агонист длительного действия, бета-агонист краткосрочного действия или их комбинацию. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает альбутерол. В некоторых вариантах осуществления альбутерол вводят в лекарственной форме, выбранной из порошка для применения в виде аэрозоля, раствора, капсулы и суспензии, полученной из порошка. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает кортикостероид. В некоторых вариантах осуществления кортикостероид вводят в виде состава для ингаляции. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство предусматривает ипратропий. В некоторых вариантах осуществления ипратропий вводят в лекарственной форме, представляющей собой спрей. В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает применение интубации, искусственной вентиляции легких и/или кислородной терапии. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в виде фармацевтической композиции, содержащей одно или более из фармацевтически приемлемых солей, вспомогательных веществ или сред-носителей. В некоторых вариантах осуществления композиция содержит одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ, разбавителей, антиоксидантов, консервантов, красителей, вкусоароматических добавок и понизителей вязкости, эмульгирующих средств, суспендирующих средств, растворителей, наполнителей, объемообразующих средств, буферов, средств доставки, регуляторов тоничности, сорастворителей, смачивающих средств, комплексообразующих средств, буферных веществ, противомикробных средств и/или поверхностно-активных веществ.[0051] In some embodiments, such methods further include administering one or more additional agents that can treat, prevent, or alleviate one or more symptoms associated with asthma. In some embodiments, the implementation of the additional tool provides a means by which you can modulate the immune system. In some embodiments, the additional agent provides an agent that is an immunosuppressant. In some embodiments, the additional agent comprises a long acting beta agonist, a short acting beta agonist, or a combination thereof. In some embodiments, the implementation of the additional tool provides albuterol. In some embodiments, albuterol is administered in a dosage form selected from a powder for use as an aerosol, solution, capsule, and suspension prepared from the powder. In some embodiments, the additional agent comprises a corticosteroid. In some embodiments, the corticosteroid is administered as an inhalation formulation. In some embodiments, the additional agent provides for ipratropium. In some embodiments, ipratropium is administered in a spray dosage form. In some embodiments, the implementation of the method further includes the use of intubation, mechanical ventilation and/or oxygen therapy. In some embodiments, the anti-CD6 antibody, or antigen-binding fragment thereof, is administered as a pharmaceutical composition containing one or more pharmaceutically acceptable salts, excipients, or carrier vehicles. In some embodiments, the composition contains one or more agents selected from the group consisting of carriers, excipients, diluents, antioxidants, preservatives, coloring agents, flavoring agents and viscosity reducers, emulsifying agents, suspending agents, solvents, fillers, bulking agents, buffers , delivery vehicles, tonicity regulators, co-solvents, wetting agents, complexing agents, buffering agents, antimicrobial agents and/or surfactants.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙBRIEF DESCRIPTION OF SEQUENCES
[0052] SEQ ID NO: 1: Аминокислотная последовательность последовательности VH EQ001.[0052] SEQ ID NO: 1: Amino acid sequence of VH EQ001 sequence.
[0053] SEQ ID NO: 2: Аминокислотная последовательность последовательности VK EQ001.[0053] SEQ ID NO: 2: Amino acid sequence of VK EQ001 sequence.
[0054] SEQ ID NO: 3: Нуклеотидная (ДНК) последовательность последовательности VH EQ001.[0054] SEQ ID NO: 3: Nucleotide (DNA) sequence of VH EQ001 sequence.
[0055] SEQ ID NO: 4: Нуклеотидная (ДНК) последовательность последовательности VK EQ001.[0055] SEQ ID NO: 4: Nucleotide (DNA) sequence of the VK EQ001 sequence.
[0056] SEQ ID NO: 5: Аминокислотная последовательность CDR1 VH EQ001[0056] SEQ ID NO: 5: Amino acid sequence of CDR1 VH EQ001
[0057] SEQ ID NO: 6: Аминокислотная последовательность CDR2 VH EQ001[0057] SEQ ID NO: 6: Amino acid sequence of CDR2 VH EQ001
[0058] SEQ ID NO: 7: Аминокислотная последовательность CDR3 VH EQ001[0058] SEQ ID NO: 7: Amino acid sequence of CDR3 VH EQ001
[0059] SEQ ID NO: 8: Аминокислотная последовательность CDR1 VK EQ001[0059] SEQ ID NO: 8: Amino acid sequence of CDR1 VK EQ001
[0060] SEQ ID NO: 9: Аминокислотная последовательность CDR2 VK EQ001[0060] SEQ ID NO: 9: Amino acid sequence of CDR2 VK EQ001
[0061] SEQ ID NO: 10: Аминокислотная последовательность CDR3 VK EQ001[0061] SEQ ID NO: 10: Amino acid sequence of CDR3 VK EQ001
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВBRIEF DESCRIPTION OF GRAPHICS
[0062] Фигура 1. Последовательности антитела к CD6 EQ001. Фиг. 1A: нуклеотидные последовательности вариабельной области тяжелой (VH) и легкой (VK) цепей EQ001, полученные из плазмидной и геномной ДНК. Фиг. 1B: аминокислотные последовательности VH и VK EQ001.[0062] Figure 1. Anti-CD6 EQ001 antibody sequences. Fig. 1A: EQ001 heavy (VH) and light (VK) variable region nucleotide sequences obtained from plasmid and genomic DNA. Fig. 1B: VH and VK amino acid sequences of EQ001.
[0063] Фигура 2. Клетки CD6+ присутствуют на высоких уровнях в легком у пациента с тяжелой астмой. Левая колонка: ALCAM экспрессируется в собственном слое легких при фатальной астме (слева в нижней части), но не в собственном слое легких в нормальном состоянии (слева в верхней части). Центральная колонка: количество клеток CD6+ увеличивается в легких при фатальной астме (в центре в нижней части), по сравнению с нормальными легкими (в центре в верхней части). Правая колонка: клетки CD6+ колокализируются с экспрессирующим ALCAM собственным слоем легких при астме (справа в нижней части).[0063] Figure 2. CD6 + cells are present at high levels in the lung of a patient with severe asthma. Left column: ALCAM is expressed in the lung's own layer in fatal asthma (lower left), but not in the normal lung's own layer (upper left). Center column: CD6 + cells are increased in fatal asthma lungs (lower center) compared to normal lungs (upper center). Right column: CD6 + cells colocalize with the ALCAM-expressing own lung layer in asthma (lower right).
[0064] Фигура 3. Анализ на основе биоинформатики de novo, сравнивающий экспрессию CD4, CD6 и различных маркеров Th17 у пациентов из контрольной группы, пациентов с умеренной астмой и пациентов с тяжелой астмой с помощью общедоступного набора данных RNASeq, сгенерированных с использованием клеток, собранных с помощью лаважа бронхов. Фиг. 3A: значительные отличия в уровнях экспрессии CD4, при этом у пациентов с тяжелой астмой экспрессия CD4 осуществляется на значительно более высоких уровнях. Фиг. 3B: значительные отличия в уровнях экспрессии CD6, при этом у пациентов с тяжелой астмой экспрессия CD6 осуществляется на значительно более высоких уровнях. Фиг. 3C - 3G: значительные отличия в уровнях экспрессии маркера Th17, при этом у пациентов с тяжелой астмой экспрессия CD6 осуществляется на значительно более высоких уровнях. Фиг. 3C: экспрессия CCR6; фиг. 3D: экспрессия CCR4; фиг. 3E: экспрессия KLRB1; фиг. 3F: экспрессия IL-17A; фиг. 3G: экспрессия IL-17F.[0064] Figure 3. De novo bioinformatics analysis comparing expression of CD4, CD6, and various Th17 markers in control, moderate asthma, and severe asthma patients using a public RNASeq dataset generated using cells harvested with bronchial lavage. Fig. 3A: Significant differences in CD4 expression levels, with patients with severe asthma expressing CD4 at significantly higher levels. Fig. 3B: Significant differences in CD6 expression levels, with patients with severe asthma expressing CD6 at significantly higher levels. Fig. 3C - 3G: Significant differences in Th17 marker expression levels, with patients with severe asthma expressing CD6 at significantly higher levels. Fig. 3C: CCR6 expression; fig. 3D: CCR4 expression; fig. 3E: KLRB1 expression; fig. 3F: IL-17A expression; fig. 3G: IL-17F expression.
[0065] Фигура 4. Уровень CD6 является наиболее высоким в кластере пациентов с тяжелой астмой. Фиг. 4A: независимый кластерный анализ, основанный на экспрессии > 1000 генов (независимо от тяжести астмы), показывает группу пациентов с астмой в виде 4 основных кластеров. Фиг. 4B: для каждого кластера продемонстрирована различная средняя экспрессия CD6, причем наиболее высокая экспрессия наблюдается в кластере 3, который состоит только из пациентов с тяжелой астмой, что позволяет предположить наличие подгруппы пациентов с тяжелой астмой с высокой экспрессией целевой молекулы.[0065] Figure 4. The level of CD6 is highest in the cluster of patients with severe asthma. Fig. 4A: An independent cluster analysis based on the expression of >1000 genes (regardless of asthma severity) shows a group of patients with asthma in the form of 4 main clusters. Fig. 4B: Different average CD6 expression was shown for each cluster, with the highest expression observed in
[0066] Фигура 5. Блокада CD6 в мышиной модели аллергической астмы снижает уровни цитокинов Th2 в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов. Фиг. 5A: в таблице показаны группы лечения и распределение доз по группам. Фиг. 5B: иллюстрация распределения доз по группам. Фиг. 5C: блокада CD6 с помощью антитела к CD6 mCD6D1 во время стимуляции антигеном привела к снижению уровней Th2-продуцируемых цитокинов IL-4, IL-5 и IL-13, в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF), и умеренному снижению этих цитокинов в клетках легкого (данные не показаны).[0066] Figure 5. Blockade of CD6 in a mouse model of allergic asthma reduces levels of Th2 cytokines in bronchial lavage fluid. Fig. 5A: The table shows the treatment groups and the distribution of doses by groups. Fig. 5B: illustration of dose grouping. Fig. 5C: Blockade of CD6 by the anti-CD6 antibody mCD6D1 during antigen challenge resulted in a decrease in levels of the Th2-produced cytokines IL-4, IL-5, and IL-13 in bronchial lavage fluid (BALF) and a moderate decrease in these levels. cytokines in lung cells (data not shown).
[0067] Фигура 6. Блокада CD6 в классической Th2-модели вакцинации с помощью OVA обеспечивает подавление обусловленного Th2 продуцирования IgE. Фиг. 6A: в таблице показаны группы лечения и распределение доз по группам. Фиг. 6B: иллюстрация распределения доз по группам. Фиг. 6C: профилактическая блокада CD6 с помощью антитела к CD6, mCD6D1, обеспечивала подавление продуцирования OVA-специфического IgE, что демонстрирует влияние пути CD6 на ответы Th2.[0067] Figure 6. Blockade of CD6 in the classic Th2 vaccination model with OVA provides suppression of Th2-mediated IgE production. Fig. 6A: The table shows the treatment groups and the distribution of doses by groups. Fig. 6B: illustration of dose grouping. Fig. 6C: Prophylactic blockade of CD6 with an anti-CD6 antibody, mCD6D1, suppressed OVA-specific IgE production, demonstrating the effect of the CD6 pathway on Th2 responses.
[0068] Фигура 7. В примере показаны фенотипы астмы в зависимости от типа воспаления, с которым они связаны (с высоким или низким содержанием Th2), и других переменных. CS = кортикостероиды; GM-CSF = гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор.[0068] Figure 7. An example shows asthma phenotypes depending on the type of inflammation they are associated with (high versus low Th2) and other variables. CS = corticosteroids; GM-CSF = granulocyte-macrophage colony-stimulating factor.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕDETAILED DESCRIPTION
[0099] При осуществлении настоящего изобретения на практике будут использовать, если конкретно не указано иное, общепринятые способы молекулярной биологии и методики рекомбинантной ДНК в пределах компетентности в данной области, многие из которых описаны ниже с целью иллюстрации. Такие методики полностью раскрыты в литературе. См., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3-е издание, 2000 г.); DNA Cloning: A Practical Approach, том I и II (под ред. D. Glover); Oligonucleotide Synthesis (под ред. N. Gait, 1984 г.); Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications (под ред. P. Herdewijn, 2004 г.); Nucleic Acid Hybridization (под ред. B. Hames и S. Higgins, 1985 г.); Nucleic Acid Hybridization: Modern Applications (под ред. Buzdin и Lukyanov, 2009 г.); Transcription and Translation (под ред. B. Hames и S. Higgins, 1984 г.); Animal Cell Culture (под ред. R. Freshney, 1986 г.); Freshney, R.I. (2005) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, 5-е изд. Hoboken NJ, John Wiley & Sons; B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (3-е издание, 2010 г.); Farrell, R., RNA Methodologies: A Laboratory Guide for Isolation and Characterization (3-е издание, 2005 г.). Poly(ethylene glycol), Chemistry and Biological Applications, ACS, Вашингтон, 1997г.; под ред. Veronese, F., и J.M. Harris, Peptide and protein PEGylation, Advanced Drug Delivery Reviews, 54(4) 453-609 (2002 г.); Zalipsky, S. et al., «Use of functionalized Poly(Ethylene Glycols) for modification of polypeptides» в Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications. Обсуждаемые выше публикации предназначены исключительно для их раскрытия до даты подачи настоящей заявки. Ничто из изложенного в данном документе не должно толковаться как признание того, что данное изобретение не имеет права противопоставлять такое описание на основании более раннего изобретения.[0099] In the practice of the present invention, unless specifically indicated otherwise, conventional molecular biology techniques and recombinant DNA techniques within the skill in the art will be used, many of which are described below for purposes of illustration. Such techniques are fully disclosed in the literature. See, for example, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd edition, 2000); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II (ed. D. Glover); Oligonucleotide Synthesis (ed. N. Gait, 1984); Oligonucleotide Synthesis: Methods and Applications (ed. P. Herdewijn, 2004); Nucleic Acid Hybridization (ed. B. Hames and S. Higgins, 1985); Nucleic Acid Hybridization: Modern Applications (ed. Buzdin and Lukyanov, 2009); Transcription and Translation (ed. B. Hames and S. Higgins, 1984); Animal Cell Culture (ed. R. Freshney, 1986); Freshney, R.I. (2005) Culture of Animal Cells, a Manual of Basic Technique, 5th ed. Hoboken NJ, John Wiley &Sons; B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (3rd edition, 2010); Farrell, R., RNA Methodologies: A Laboratory Guide for Isolation and Characterization (3rd edition, 2005). Poly(ethylene glycol), Chemistry and Biological Applications, ACS, Washington, 1997; ed. Veronese, F., and J.M. Harris, Peptide and protein PEGylation, Advanced Drug Delivery Reviews, 54(4) 453-609 (2002); Zalipsky, S. et al., "Use of functionalized Poly(Ethylene Glycols) for modification of polypeptides" in Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications. The publications discussed above are solely for their disclosure prior to the filing date of this application. Nothing herein is to be construed as an admission that the present invention has no right to oppose such description on the basis of an earlier invention.
ОпределенияDefinitions
[0070] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистами в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Хотя любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные таковым, описанным в данном документе, можно применять при осуществлении на практике или при испытании настоящего изобретения, описаны предпочтительные способы и материалы. Для целей настоящего изобретения следующие термины определены ниже.[0070] Unless otherwise indicated, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as generally understood by those skilled in the art to which the present invention belongs. While any methods and materials similar or equivalent to those described herein may be used in the practice or testing of the present invention, preferred methods and materials are described. For the purposes of the present invention, the following terms are defined below.
[0071] Термины в единственном числе используются в данном документе для обозначения одного или более одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта. В качестве примера, «элемент» означает один элемент или более одного элемента.[0071] Singular terms are used herein to refer to one or more than one (ie, at least one) grammatical entity. By way of example, "element" means one element or more than one element.
[0072] Термин «и/или» используется в настоящем изобретении для обозначения «и» или «или», если не указано иное.[0072] The term "and/or" is used in the present invention to mean "and" or "or" unless otherwise indicated.
[0073] Термин «например» используется в данном документе в значении «к примеру» и будет пониматься как подразумевающий включение указанной стадии, или элемента, или группы стадий, или элементов, но не исключение любой другой стадии, или элемента, или группы стадий, или элементов.[0073] The term "for example" is used herein in the sense of "for example" and will be understood as implying the inclusion of the specified stage, or element, or group of stages, or elements, but not the exclusion of any other stage, or element, or group of stages, or elements.
[0074] Под «приблизительно» подразумевается количественное значение, уровень, значение, число, частота, процент, величина, размер, количество, вес или длина, которые изменяются на значение, составляющее 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1% от эталонного количества, уровня, значения, числа, частоты, процента, величины, размера, количества, веса или длины.[0074] By "approximately" is meant a quantity, level, value, number, frequency, percentage, magnitude, size, amount, weight, or length that is changed by a value of 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8 , 7, 6, 5, 4, 3, 2, or 1% of the reference amount, level, value, number, frequency, percentage, magnitude, size, amount, weight, or length.
[0075] Термин «введение», используемый в данном документе, относится к любому пути переноса, доставки, предоставления или транспортировки вещества, такого как соединение, например фармацевтическое соединение, или другого средства, такого как антиген, субъекту. Пути введения включают пероральное введение, местный контакт, внутривенное, внутрибрюшинное, внутримышечное, интраназальное или подкожное введение. Введение «в сочетании с» дополнительным веществом, таким как одно или более терапевтических средств, включает совместное (одновременное) и последовательное введение в любом порядке.[0075] The term "administration" as used herein refers to any route of transferring, delivering, providing, or transporting a substance, such as a compound, such as a pharmaceutical compound, or another agent, such as an antigen, to a subject. Routes of administration include oral administration, topical contact, intravenous, intraperitoneal, intramuscular, intranasal or subcutaneous administration. The introduction "in combination with" an additional substance, such as one or more therapeutic agents, includes joint (simultaneous) and sequential administration in any order.
[0076] Используемый в данном документе термин «партнер по связыванию» относится к веществу, такому как молекула, в частности полимерная молекула, который может связывать молекулу нуклеиновой кислоты, такую как молекулу ДНК или РНК, включая молекулу мРНК, а также пептид, белок, сахарид, полисахарид или липид, посредством взаимодействия, достаточного для того, чтобы позволить средству образовать комплекс с молекулой нуклеиновой кислоты, пептидом, белком или сахаридом, полисахаридом или липидом, как правило посредством нековалентного связывания. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию представляет собой иммуноглобулин или белковую связывающую молекулу с иммуноглобулин-подобными функциями, как определено ниже. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию представляет собой аптамер. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию является специфичным к конкретной мишени. В некоторых вариантах осуществления партнер по связыванию содержит несколько сайтов связывания, при этом каждый сайт связывания является специфичным к конкретной мишени. В качестве иллюстративного примера партнер по связыванию может представлять собой белковое средство с иммуноглобулин-подобными функциями с двумя сайтами связывания. Им может являться, например, антигенсвязывающий фрагмент антитела. Им может являться, например, биспецифическое диатело, такое как биспецифическое одноцепочечное диатело.[0076] As used herein, the term "binding partner" refers to a substance, such as a molecule, in particular a polymeric molecule, that can bind a nucleic acid molecule, such as a DNA or RNA molecule, including an mRNA molecule, as well as a peptide, protein, saccharide, polysaccharide, or lipid, through an interaction sufficient to allow the agent to complex with a nucleic acid molecule, peptide, protein, or saccharide, polysaccharide, or lipid, typically through non-covalent binding. In some embodiments, the binding partner is an immunoglobulin or a protein binding molecule with immunoglobulin-like functions, as defined below. In some embodiments, the binding partner is an aptamer. In some embodiments, the binding partner is specific for a particular target. In some embodiments, the binding partner contains multiple binding sites, with each binding site being specific to a particular target. As an illustrative example, a binding partner may be a proteinaceous agent with immunoglobulin-like functions with two binding sites. It may be, for example, an antigen-binding fragment of an antibody. It may be, for example, a bispecific diabody, such as a bispecific single chain diabody.
[0077] Термин «носитель», используемый в настоящем раскрытии, охватывает носители, вспомогательные вещества и разбавители и означает материал, композицию или среду-носитель, такую как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, вспомогательное вещество, растворитель или материал для инкапсулирования, участвующие в переносе или транспортировке фармацевтического средства из одного органа или части тела в другой орган или часть тела субъекта.[0077] The term "carrier" as used in this disclosure encompasses carriers, excipients, and diluents, and means a carrier material, composition, or medium such as a liquid or solid excipient, diluent, adjuvant, solvent, or encapsulation material involved in the transfer or transport of a pharmaceutical agent from one organ or body part to another organ or body part of the subject.
[0078] Используемый в данном документе термин «химерное антитело» относится к полипептиду иммуноглобулина или доменному антителу, которые содержат последовательности от более чем одного вида. В химерном антителе тяжелая цепь или легкая цепь может содержать последовательность вариабельной области от одного вида, например человека, и последовательность константной области от другого вида, например мыши. В качестве примера «химерное антитело» может представлять собой иммуноглобулин, который содержит вариабельные области, полученные из антитела животного, такого как антитело крысы или мыши, слитые с другой молекулой, например с константными доменами, полученными из антитела человека. Термин «химерное антитело» предназначен для охвата антител, в которых (i) тяжелая цепь является химерной, а легкая цепь содержит области V и C только от одного вида; (ii) легкая цепь является химерной, а тяжелая цепь содержит области V и C только от одного вида; и (iii) как тяжелая цепь, так и легкая цепь являются химерными.[0078] As used herein, the term "chimeric antibody" refers to an immunoglobulin polypeptide or domain antibody that contains sequences from more than one species. In a chimeric antibody, the heavy chain or light chain may comprise a variable region sequence from one species, such as a human, and a constant region sequence from another species, such as a mouse. By way of example, a "chimeric antibody" may be an immunoglobulin that contains variable regions derived from an animal antibody, such as a rat or mouse antibody, fused to another molecule, such as constant domains derived from a human antibody. The term "chimeric antibody" is intended to cover antibodies in which (i) the heavy chain is chimeric and the light chain contains the V and C regions from only one species; (ii) the light chain is chimeric and the heavy chain contains the V and C regions from only one species; and (iii) both the heavy chain and the light chain are chimeric.
[0079] «Эффективное количество» при использовании по отношению к определенному соединению представляет собой количество соединения, такого как антитело к CD6 (например, EQ001), необходимое для того, чтобы вызвать необходимый ответ. В некоторых вариантах осуществления необходимый ответ представляет собой биологический ответ, например, у субъекта. В некоторых вариантах осуществления соединение (например, антитело к CD6) можно вводить субъекту в количестве, эффективном для того, чтобы оказать влияние на биологический ответ у субъекта. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество представляет собой «терапевтически эффективное количество».[0079] An "effective amount" when used with respect to a specific compound is the amount of a compound, such as an anti-CD6 antibody (eg, EQ001), required to elicit the desired response. In some embodiments, the desired response is a biological response, eg, in the subject. In some embodiments, a compound (eg, an anti-CD6 antibody) may be administered to a subject in an amount effective to influence the subject's biological response. In some embodiments, the effective amount is a "therapeutically effective amount".
[0080] Термины «терапевтически эффективное количество» и «терапевтическая доза» используются взаимозаменяемо в данном документе для обозначения количества соединения, такого как антитело к CD6 (например, EQ001), которое после введения субъекту является эффективным в отношении лечения заболевания или нарушения у субъекта, описанного в данном документе.[0080] The terms "therapeutically effective amount" and "therapeutic dose" are used interchangeably herein to refer to the amount of a compound, such as an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001), that, when administered to a subject, is effective in treating a disease or disorder in the subject, described in this document.
[0081] Термин «профилактически эффективное количество» используют в данном документе для обозначения количества соединения, такого как антитело к CD6 (например, EQ001), которое после введения субъекту является эффективным в отношении предотвращения или отсрочки начала заболевания или нарушения у субъекта, описанного в данном документе.[0081] The term "prophylactically effective amount" is used herein to refer to the amount of a compound, such as an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001), which, when administered to a subject, is effective in preventing or delaying the onset of the disease or disorder in the subject described herein. document.
[0082] В этом отношении «гуманизированное антитело», как описано в данном документе, представляет собой полипептид иммуноглобулина или доменное антитело, содержащие структурные элементы антитела человека и антигенсвязывающий сайт антитела, отличного от человеческого. «Гуманизированные антитела» содержат минимальное количество остатков антитела, отличного от человеческого, из которого они получены. Например, они могут содержать только области CDR антитела, отличного от человеческого, или только те остатки, которые составляют гипервариабельные области антитела, отличного от человеческого. Они также могут содержать определенные остатки из участков вне вариабельных областей полипептида, отличного от человеческого, такие как остатки, которые являются необходимыми для имитации структуры антитела, отличного от человеческого, или для минимизации стерического влияния. Как правило, гуманизированное антитело содержит каркасные области человека, по меньшей мере одну CDR из антитела, отличного от человеческого, причем любая присутствующая константная область является по сути идентичной константной области иммуноглобулина человека, т.е. идентичной на по меньшей мере приблизительно 85-90%, т.е. по меньшей мере 95 %. Следовательно, в некоторых случаях все части гуманизированного иммуноглобулина, за исключением, возможно, CDR, являются по сути идентичными соответствующим частям одной или более нативных последовательностей иммуноглобулина человека. Кроме того, гуманизированные антитела могут содержать остатки, которые не соответствуют ни антителам человека, ни антителам, отличным от человеческих.[0082] In this regard, a "humanized antibody" as described herein is an immunoglobulin polypeptide or domain antibody comprising the building blocks of a human antibody and the antigen-binding site of a non-human antibody. "Humanized antibodies" contain a minimum amount of non-human antibody residues from which they are derived. For example, they may contain only CDR regions of a non-human antibody, or only those residues that constitute the hypervariable regions of a non-human antibody. They may also contain certain residues from regions outside the variable regions of the non-human polypeptide, such as residues that are necessary to mimic the structure of a non-human antibody or to minimize steric influence. Typically, a humanized antibody contains human framework regions, at least one CDR from a non-human antibody, any constant region present being substantially identical to a human immunoglobulin constant region, i.e. at least about 85-90% identical, i. e. at least 95%. Therefore, in some instances, all parts of a humanized immunoglobulin, with the possible exception of the CDR, are substantially identical to corresponding parts of one or more native human immunoglobulin sequences. In addition, humanized antibodies may contain residues that correspond to neither human nor non-human antibodies.
[0083] Используемый в данном документе термин «фрагмент антитела» относится к любой форме антитела, отличной от полноразмерной формы. Фрагменты антител в данном документе включают антитела, которые представляют собой более мелкие компоненты, которые существуют в пределах полноразмерных антител, и антитела, которые были сконструированы. Фрагменты антител включают без ограничения Fv, Fc, Fab и (Fab')2, одноцепочечный Fv (scFv), диатела, триатела, тетратела, бифункциональные гибридные антитела, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельные области, каркасные области, константные области, тяжелые цепи, легкие цепи, альтернативные каркасные молекулы, не являющиеся антителами, и биспецифические антитела. Если специально не указано иное, утверждения и пункты формулы изобретения, в которых используется термин «антитело» или «антитела», могут конкретно включать «фрагмент антитела» и «фрагменты антител».[0083] As used herein, the term "antibody fragment" refers to any form of an antibody other than the full length form. Antibody fragments herein include antibodies, which are smaller components that exist within full length antibodies, and antibodies that have been engineered. Antibody fragments include, but are not limited to, Fv, Fc, Fab and (Fab')2, single chain Fv (scFv), diabodies, tribodies, tetrabodies, bifunctional fusion antibodies, CDR1, CDR2, CDR3, combinations of CDRs, variable regions, framework regions, constant regions , heavy chains, light chains, non-antibody alternative scaffolds, and bispecific antibodies. Unless specifically stated otherwise, statements and claims that use the term "antibody" or "antibodies" may specifically include "antibody fragment" and "antibody fragments".
[0084] Термин «астма» имеет свое обычное научное значение и включает интермиттирующую астму, легкую персистирующую астму, умеренную персистирующую астму и тяжелую персистирующую астму.[0084] The term "asthma" has its usual scientific meaning and includes intermittent asthma, mild persistent asthma, moderate persistent asthma, and severe persistent asthma.
[0085] Термин «тяжелая астма» используют в данном документе для описания отдельной категории астмы, при которой симптомы заболевания плохо поддаются контролю с помощью стероидов. Тяжелая астма включает астму, которая является резистентной к стероидам и/или рефрактерной к кортикостероидам (CS). В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма (SA) обусловлена в первую очередь нейтрофильным ответом, опосредованным Т-клетками Th1/Th17. В некоторых вариантах осуществления SA обусловлена в первую очередь малогранулоцитарным ответом, опосредованным Т-клетками Th1/Th17. В некоторых вариантах осуществления SA также устойчива к одному или более другим терапевтическим средствам от астмы. Например, в некоторых вариантах осуществления SA также устойчива к одному или более из SABA и/или LABA. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма может характеризоваться наличием нейтрофильного ответа, опосредованного Т-клетками Th1/Th17, малогранулоцитарного ответа, опосредованного Т-клетками Th1/Th17, или комбинированного нейтрофильного и эозинофильного ответа, опосредованного Т-клетками Th1/Th17 и Т-клетками Th2. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма может включать нейтрофильный Т-клеточный ответ, но не эозинофильный Т-клеточный ответ. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма может включать малогранулоцитарный Т-клеточный ответ, но не эозинофильный Т-клеточный ответ.[0085] The term "severe asthma" is used herein to describe a distinct category of asthma in which the symptoms of the disease are difficult to control with steroids. Severe asthma includes asthma that is steroid-resistant and/or corticosteroid-refractory (CS). In some embodiments, severe asthma (SA) is primarily due to a neutrophil response mediated by Th1/Th17 T cells. In some embodiments, SA is primarily due to a small granulocytic response mediated by Th1/Th17 T cells. In some embodiments, SA is also resistant to one or more other asthma therapeutics. For example, in some embodiments, SA is also resistant to one or more of SABAs and/or LABAs. In some embodiments, severe asthma may be characterized by the presence of a neutrophilic response mediated by Th1/Th17 T cells, a small granulocytic response mediated by Th1/Th17 T cells, or a combined neutrophilic and eosinophilic response mediated by Th1/Th17 T cells and Th2 T cells . In some embodiments, severe asthma may include a neutrophilic T cell response but not an eosinophilic T cell response. In some embodiments, severe asthma may include a small granulocytic T cell response but not an eosinophilic T cell response.
[0086] Термин «астма, резистентная к стероидам» используется в данном документе для описания астмы, при которой лечение стероидами (например, кортикостероидами) характеризуется ограниченной эффективностью. Таким образом, лечение астмы, резистентной к стероидам, с помощью стероида (например, кортикостероида) позволяет получить весьма незначительный терапевтический эффект. В некоторых случаях такое лечение по сути не позволяет получить терапевтического эффекта.[0086] The term "steroid-resistant asthma" is used herein to describe asthma in which steroid (eg, corticosteroid) treatment has limited efficacy. Thus, treatment of steroid-resistant asthma with a steroid (eg, a corticosteroid) provides very little therapeutic benefit. In some cases, such treatment in fact does not allow to obtain a therapeutic effect.
[0087] Термин «стероид-рефрактерная астма» используется в данном документе для описания астмы, при которой лечение стероидами (например, кортикостероидами) характеризуется отсутствием эффективности. Таким образом, лечение стероид-рефрактерной астмы с помощью стероида (например, кортикостероида) не позволяет получить заметного терапевтического эффекта.[0087] The term "steroid-refractory asthma" is used herein to describe asthma in which steroid (eg, corticosteroid) treatment fails. Thus, the treatment of steroid-refractory asthma with a steroid (eg, corticosteroid) does not provide a significant therapeutic effect.
[0088] Термин «LABA» означает бета-агонист длительного действия. LABA известны в данной области техники и включают без ограничения формотерола фумарат; сальметерол ксинафоат.[0088] The term "LABA" means a long-acting beta agonist. LABAs are known in the art and include, without limitation, formoterol fumarate; salmeterol xinafoate.
[0089] Термин «SABA» означает бета-агонист краткосрочного действия. SABA известны в данной области техники и включают без ограничения альбутерол (например, сульфат альбутерола, сульфат альбутерола HFA, сульфат альбутерола в виде раствора для ингаляции, сульфат альбутерола в виде раствора для небулайзера и гидрохлорид левальбутерола), метапротеренол, пирбутерол (например, ацетат пирбутерола); изоэтарина гидрохлорид; изопротеренола гидрохлорид; и тербуталина сульфат.[0089] The term "SABA" means a short-term beta agonist. SABAs are known in the art and include, without limitation, albuterol (e.g., albuterol sulfate, albuterol sulfate HFA, albuterol sulfate inhalation solution, albuterol sulfate nebulizer solution, and levalbuterol hydrochloride), metaproterenol, pirbuterol (e.g., pirbuterol acetate) ; isoetarine hydrochloride; isoproterenol hydrochloride; and terbutaline sulfate.
[0090] Термин «VH» используют в данном документе для обозначения вариабельной области тяжелой цепи антитела.[0090] The term "VH" is used herein to refer to the variable region of an antibody heavy chain.
[0091] Термин «VK» используют в данном документе для обозначения вариабельной области легкой цепи антитела.[0091] The term "VK" is used herein to refer to the variable region of an antibody light chain.
[0092] Термин «антигенсвязывающий фрагмент» применительно к антителу относится к любому фрагменту антитела, который сохраняет аффинность связывания с антигеном, с которым связывается исходное полноразмерное антитело, и антигенсвязывающие фрагменты включают без ограничения Fv, Fab, (Fab') 2, scFv, диатела, триатела, тетратела, бифункциональные гибридные антитела, CDR1, CDR2, CDR3, комбинации CDR, вариабельные области, тяжелые цепи, легкие цепи и биспецифические антитела.[0092] The term "antigen-binding fragment" in relation to an antibody refers to any antibody fragment that retains binding affinity for the antigen to which the original full-length antibody binds, and antigen-binding fragments include, but are not limited to Fv, Fab, (Fab') 2, scFv, diabodies , tribodies, tetrabodies, bifunctional hybrid antibodies, CDR1, CDR2, CDR3, combinations of CDRs, variable regions, heavy chains, light chains and bispecific antibodies.
[0093] Во всем данном описании, если контекст не требует иного, слова «содержать», «содержит» и «содержащий» будут пониматься как подразумевающие включение указанной стадии, или элемента, или группы стадий или элементов, но не исключение любых других стадии, или элемента, или группы стадий или элементов. Под «состоящим из» подразумевается включение того, что следует за фразой «состоящий из», и ограничение этим. Таким образом, фраза «состоящий из» указывает, что перечисленные элементы являются необходимыми или обязательными, и что никакие другие элементы не могут присутствовать. Под «состоящим по существу из» подразумевается включение любых элементов, перечисленных после фразы и ограниченных другими элементами, которые не мешают или не способствуют деятельности или действию, указанным в раскрытии для перечисленных элементов. Таким образом, фраза «состоящий по существу из» указывает на то, что перечисленные элементы являются необходимыми или обязательными, но что другие элементы являются возможными и могут присутствовать или не присутствовать в зависимости от того, оказывают ли они существенное влияние на активность или действие перечисленных элементов.[0093] Throughout this description, unless the context otherwise requires, the words "comprise", "comprises" and "comprising" will be understood to mean the inclusion of a specified step, or element, or group of steps or elements, but not the exclusion of any other steps, or an element, or a group of stages or elements. By "consisting of" is meant to include what follows the phrase "consisting of" and limit it thereto. Thus, the phrase "consisting of" indicates that the listed elements are required or required, and that no other elements may be present. By "consisting essentially of" is meant the inclusion of any of the elements listed after the phrase and limited to other elements that do not interfere with or contribute to the activity or action specified in the disclosure for the listed elements. Thus, the phrase "consisting essentially of" indicates that the listed elements are necessary or mandatory, but that other elements are optional and may or may not be present depending on whether they significantly affect the activity or operation of the listed elements. .
[0094] Термин «модулирование» включает «увеличение», «усиление» или «стимулирование,» а также «снижение» или «уменьшение», как правило, в отношении статистически значимого или физиологически значимого количества по сравнению с контролем. «Увеличенное», «стимулированное» или «повышенное» количество, как правило, является «статистически значимым» количеством и может включать увеличение в 1,1, 1,2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30 или больше раз (например, 500, 1000 раз) (включая все целые числа и числа с десятичной запятой между ними и более 1, например 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, и т.д.) количества, получаемого при отсутствии композиции (например, в отсутствие любых антител к CD6 по настоящему изобретению) или при присутствии контрольной композиции, образца или испытуемого субъекта. «Сниженное» или «уменьшенное» количество, как правило, является «статистически значимым» количеством и может включать 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% снижение количества, получаемого при отсутствии композиции (отсутствии средства или соединения) или при присутствии контрольной композиции, включая все целые числа между ними.[0094] The term "modulation" includes "increase", "increase" or "stimulation," as well as "decrease" or "decrease", usually in relation to a statistically significant or physiologically significant amount compared to a control. An "increased", "stimulated" or "increased" amount is generally a "statistically significant" amount and may include an increase of 1.1, 1.2, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 , 10, 15, 20, 30 or more times (e.g. 500, 1000 times) (including all integers and numbers with a decimal point between them and more than 1, e.g. 1.5, 1.6, 1.7, 1, 8, etc.) the amount obtained in the absence of the composition (eg, in the absence of any anti-CD6 antibodies of the present invention) or in the presence of a control composition, sample, or test subject. A "reduced" or "reduced" amount is generally a "statistically significant" amount and may include 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10% , 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55 %, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100% reduction in the amount obtained in the absence of the composition (no agent or compound) or in the presence of the control composition, including all integers numbers in between.
[0095] Термины «полипептид» и «белок» применяют взаимозаменяемо для обозначения полимера из аминокислотных остатков и его вариантов и синтетических аналогов. Таким образом, эти термины применяют в отношении аминокислотных полимеров, в которых один или более аминокислотных остатков являются синтетическими не встречающимися в природе аминокислотами, такими как химический аналог соответствующей встречающейся в природе аминокислоты, а также в отношении встречающихся в природе аминокислотных полимеров.[0095] The terms "polypeptide" and "protein" are used interchangeably to refer to a polymer of amino acid residues and its variants and synthetic analogs. Thus, these terms apply to amino acid polymers in which one or more amino acid residues are synthetic non-naturally occurring amino acids, such as a chemical analogue of the corresponding naturally occurring amino acid, as well as to naturally occurring amino acid polymers.
[0096] Термины «субъект» или «пациент», используемые в данном документе, включают любое животное, у которого проявляется симптом, или которое находится в группе риска проявления симптома, которое можно лечить или диагностировать с помощью антитела к CD6 или его антигенсвязывающего фрагмента. Подходящие субъекты (пациенты) включают, предпочтительно, пациентов-людей. Подходящие субъекты также включают лабораторных животных (таких как мышь, крыса, кролик или морская свинка), сельскохозяйственных животных (таких как свинья, лошадь, корова) и домашних животных или питомцев (таких как кошка или собака). Также включены приматы, отличные от человека (такие как обезьяна, шимпанзе, бабуин или макак-резус).[0096] The terms "subject" or "patient" as used herein include any animal that exhibits a symptom, or is at risk of exhibiting a symptom, that can be treated or diagnosed with an anti-CD6 antibody or antigen-binding fragment thereof. Suitable subjects (patients) preferably include human patients. Suitable subjects also include laboratory animals (such as a mouse, rat, rabbit, or guinea pig), farm animals (such as a pig, horse, cow), and pets or pets (such as a cat or dog). Also included are non-human primates (such as monkey, chimpanzee, baboon, or rhesus monkey).
[0097] «По сути» или «по существу» означает почти полностью или весь, например 95% или больше от некоторого заданного количественного значения.[0097] "Essentially" or "essentially" means almost all or all, such as 95% or more of some predetermined quantitative value.
[0098] Термины «лечение» или «осуществление лечения», используемые в данном документе, включают любой необходимый эффект в отношении симптомов или патологии заболевания или состояния и могут включать даже минимальные изменения или улучшения в одном или более поддающихся измерению маркерах заболевания или состояния, в отношении которых осуществляют лечение. «Лечение» или «осуществление лечения» не обязательно означают полную ликвидацию или излечение заболевания или состояния или связанных с ними симптомов. Субъект, получающий такое лечение, является любым субъектом, который в нем нуждается. Иллюстративные маркеры клинического улучшения будут очевидны специалистам в данной области техники.[0098] The terms "treating" or "administering treatment" as used herein includes any desired effect on the symptoms or pathology of a disease or condition, and may include even minimal changes or improvements in one or more measurable markers of the disease or condition, in for which treatment is being carried out. "Treatment" or "treatment" does not necessarily mean the complete elimination or cure of a disease or condition or associated symptoms. A subject receiving such treatment is any subject that is in need of it. Illustrative markers of clinical improvement will be apparent to those skilled in the art.
[0099] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понимают специалисты обычной квалификации в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Хотя любые способы, композиции, реагенты, клетки, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, можно использовать при осуществлении на практике или при тестировании настоящего изобретения, в данном документе описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации и ссылки, включая без ограничения патенты и патентные заявки, цитируемые в этом описании, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте, как если бы каждая отдельная публикация или ссылка были специально и индивидуально указаны для включения в данный документ посредством ссылки как полностью изложенные. Любая патентная заявка, приоритет которой испрашивается в данной заявке, также включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки, как описано выше для публикаций и ссылок.[0099] Unless otherwise indicated, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as generally understood by those of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. While any methods, compositions, reagents, cells similar or equivalent to those described herein can be used in the practice or testing of the present invention, preferred methods and materials are described herein. All publications and references, including without limitation patents and patent applications cited in this specification, are incorporated herein by reference in their entirety, as if each individual publication or reference were specifically and individually indicated for inclusion in this document by reference as fully stated. Any patent application whose priority is claimed in this application is also incorporated herein in its entirety by reference, as described above for publications and references.
ОбзорReview
[00100] Настоящее изобретение относится к способу лечения, предупреждения или смягчения тяжелой астмы, включающему введение субъекту антитела к CD6.[00100] The present invention relates to a method for treating, preventing, or alleviating severe asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody to a subject.
[00101] CD6 представляет собой важный белок клеточной поверхности, который преимущественно экспрессируется человеческими Т-клетками и субпопуляцией В-клеток, а также В-клетками при некоторых хронических лимфоцитарных лейкозах и нейронами [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949; Kantoun et al., J. Immunol. 1981, 127:987; Mayer et al., J. Neuroimmunol. 1990. 29:193]. CD6 является представителем большого семейства белков, характеризующихся наличием по меньшей мере одного домена, гомологичного богатому цистеином домену фагоцитарного рецептора (SRCR) макрофагов типа I [Matsumoto et al., J. Exp. Med. 1991, 173:55, и Resnick et al., Trends Biochem. Sci. 1994, 19:5]. Другие представители данного семейства включают CD5 [Jones et al., Nature. 1986, 323:346]; циклофилин C [Friedman et al. 1993, PNAS 90:6815]; фактор I комплемента, который связывает активированные белки комплемента C3b и C4b [Goldberger et al., J. Biol. Chem. 1987, 262:10065]; бычий WC-1, экспрессируемый тау/дельта- T-клетками [Wijingaard et al., J. Immunol. 1992, 149:3273], и M130 [Law et al., Eur J. Immunol. 1993, 23:2320], маркер активации макрофагов.[00101] CD6 is an important cell surface protein that is predominantly expressed by human T cells and a subpopulation of B cells, as well as B cells in some chronic lymphocytic leukemias and neurons [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949; Kantoun et al., J. Immunol. 1981, 127:987; Mayer et al., J. Neuroimmunol. 1990. 29:193]. CD6 is a member of a large family of proteins characterized by having at least one domain homologous to the cysteine-rich domain of the phagocytic receptor (SRCR) of type I macrophages [Matsumoto et al., J. Exp. Med. 1991, 173:55, and Resnick et al., Trends Biochem. sci. 1994, 19:5]. Other members of this family include CD5 [Jones et al., Nature. 1986, 323:346]; cyclophilin C [Friedman et al. 1993, PNAS 90:6815]; complement factor I, which binds activated complement proteins C3b and C4b [Goldberger et al., J. Biol. Chem. 1987, 262:10065]; bovine WC-1 expressed by tau/delta T cells [Wijingaard et al., J. Immunol. 1992, 149:3273], and M130 [Law et al., Eur J. Immunol. 1993, 23:2320], macrophage activation marker.
[00102] Внеклеточный домен зрелого белка CD6 состоит из трех доменов SRCR (в дальнейшем обозначенных как D1, D2 и D3). D3, соответствующий мембрано-проксимальному домену SRCR, за которым следует короткая стволовая область, состоящая из 33 аминокислот. Эти внеклеточные домены прикреплены к клеточной мембране посредством короткого трансмембранного домена, за которым следует цитоплазматический домен переменной длины [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949].[00102] The extracellular domain of the mature CD6 protein consists of three SRCR domains (hereinafter referred to as D1, D2 and D3). D3, corresponding to the membrane-proximal domain of the SRCR, followed by a short stem region of 33 amino acids. These extracellular domains are attached to the cell membrane by a short transmembrane domain followed by a variable length cytoplasmic domain [Aruffo et al., J. Exp. Med. 1991, 174:949].
[00103] Исследования с использованием слитых белков на основе иммуноглобулина CD6, содержащих выбранные внеклеточные домены CD6, слитые с константными доменами IgG1 человека (CD6-Rgs), привели к идентификации и клонированию лиганда CD6, названного «молекулой клеточной адгезии активированных лейкоцитов» (ALCAM), известного также как CD166 [Patel et al., J. Exp. Med. 1995. 181:1563-1568; Bowen et al., J. Exp. Med 1995, 181:2213-2220].[00103] Studies using CD6 immunoglobulin-based fusion proteins containing selected extracellular domains of CD6 fused to human IgG1 constant domains (CD6-Rgs) have led to the identification and cloning of a CD6 ligand termed "activated leukocyte cell adhesion molecule" (ALCAM) , also known as CD166 [Patel et al., J. Exp. Med. 1995.181:1563-1568; Bowen et al., J. Exp. Med 1995, 181:2213-2220].
[00104] ALCAM представляет собой трансмембранный гликопротеин типа I размером 100-105 кДа, который является представителем суперсемейства иммуноглобулинов и содержит пять внеклеточных доменов иммуноглобулина (2 NH2-концевых, мембрано-дистальную вариабельного типа (V) (V1, V2 или D1, D2) и 3 мембрано-проксимальных константного типа (C2) структур Ig), [C1, C2, C3], трансмембранную область и короткий цитоплазматический хвост. N-концевой домен (D1) участвует исключительно в связывании лиганда, тогда как мембрано-проксимальные домены (C2, C3 или D4, D5) необходимы для гомофильных взаимодействий.[00104] ALCAM is a 100-105 kDa type I transmembrane glycoprotein that is a member of the immunoglobulin superfamily and contains five extracellular immunoglobulin domains (2 NH2-terminal, membrane-distal variable type (V) (V1, V2 or D1, D2) and 3 membrane-proximal constant-type (C2) Ig structures), [C1, C2, C3], a transmembrane region, and a short cytoplasmic tail. The N-terminal domain (D1) is exclusively involved in ligand binding, while the membrane-proximal domains (C2, C3 or D4, D5) are required for homophilic interactions.
[00105] ALCAM связывается с доменом 3 CD6, соответствующим мембрано-проксимальному домену SRCR [Whitney et al., J. Biol. Chem 1995, 270: 18187-18190].[00105] ALCAM binds to
[00106] CD6 экспрессируется на поверхности Т-клеток, включая Т-клетки CD4+, и может играть роль в активации, дифференцировке, выживании и миграции Т-клеток. Однако о роли T-клеток CD6+ в патогенезе тяжелой неаллергической астмы ранее не сообщали.[00106] CD6 is expressed on the surface of T cells, including CD4 + T cells, and may play a role in T cell activation, differentiation, survival, and migration. However, the role of CD6 + T cells in the pathogenesis of severe nonallergic asthma has not been previously reported.
[00107] Авторы настоящего изобретения сообщают в данном документе о неожиданном открытии того, что у пациентов с фатальной тяжелой астмой, которые являются стероид-рефрактерными, уровень экспрессии белка CD6 и его лиганда, ALCAM, в ткани легких значительно выше, чем у пациентов без астмы (фиг. 2). Дополнительно основанный на биоинформатике анализ de novo общедоступных наборов данных RNASeq подтверждает этот результат, демонстрируя, что у пациентов с тяжелой астмой мРНК CD6 экспрессируется на значительно более высоких уровнях по сравнению с пациентами с умеренной астмой и не страдающих астмой в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF) (фиг. 3B). Более того, основанный на биоинформатике анализ de novo этих наборов данных также продемонстрировал, что маркеры Th17 и цитокины CCR6, CCR4, KLRB1, IL-17A и IL-17F все экспрессируются на значительно более высоких уровнях у пациентов с тяжелой астмой по сравнению с пациентами с умеренной астмой и не страдающих астмой в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF) (фиг. 3C-3G). Учитывая стероид-рефрактерную природу заболевания у этих пациентов с тяжелой астмой (что свидетельствует об отличном от Th2-заболевании, поскольку опосредованная Th2 астма, как правило, хорошо поддается лечению стероидами, см. фиг. 7) и высокие уровни экспрессии данных маркеров Th17 и цитокинов, авторы настоящего изобретения заключают, что такая повышенная экспрессия CD6 обусловлена преимущественно инфильтрацией ткани легких Т-клетками Th17.[00107] The present inventors report herein the surprising discovery that patients with fatal severe asthma who are steroid refractory have significantly higher levels of expression of the CD6 protein and its ligand, ALCAM, in lung tissue than in patients without asthma. (Fig. 2). Additionally, a bioinformatics-based analysis of de novo publicly available RNASeq datasets confirms this result, demonstrating that patients with severe asthma express CD6 mRNA at significantly higher levels compared to patients with moderate asthma and non-asthma in bronchial lavage fluid. (BALF) (Fig. 3B). Moreover, a bioinformatics-based de novo analysis of these datasets also demonstrated that the Th17 markers and the cytokines CCR6, CCR4, KLRB1, IL-17A, and IL-17F are all expressed at significantly higher levels in patients with severe asthma compared to patients with moderate asthma and non-asthma in bronchial lavage fluid (BALF) (Fig. 3C-3G). Considering the steroid-refractory nature of the disease in these patients with severe asthma (indicative of non-Th2 disease since Th2-mediated asthma generally responds well to steroid treatment, see Figure 7) and the high levels of expression of these Th17 markers and cytokines , the authors of the present invention conclude that this increased expression of CD6 is due mainly to the infiltration of lung tissue with Th17 T cells.
[00108] Интересно, что в последнем отчете было высказано предположение, что эозинофильная обусловленная Th2 аллергическая астма может быть частично опосредована ALCAM, поскольку мыши с нокаутом ALCAM и мыши, обработанные антителами к ALCAM, демонстрируют сниженные уровни цитокинов Th2 в ответ на воздействие аллергеном. Kim et al., Am J Respir Crit Care Med. 2018 Apr 15;197(8):994-1008. Однако эти данные были ограничены аллергическими эозинофильными ответами, опосредованными Th2 (сосредоточенными на цитокинах Th2, в том числе IL-4, IL-5, IL-13 и IgE), на моделях аллергической астмы; тогда как, напротив, вышеупомянутые результаты авторов настоящего изобретения сосредоточены на случаях тяжелой неаллергической астмы, при которой наблюдается низкое содержание или отсутствие эозинофилов. Дополнительно данные авторов настоящего изобретения свидетельствуют о том, что высокие уровни Т-клеток Th1 и Th17, экспрессирующих маркеры Th17 (CCR6, CCR4, KLRB1, IL-17A и IL-17F) на значительно повышенных уровнях, могут обуславливать патологию при тяжелой стероид-рефрактерной астме. Интересно, что данные авторов настоящего изобретения также отличаются от результатов, сообщенных Kim et al., тем, что указанные авторы обнаружили низкий уровень резидентного белка ALCAM в легких вследствие шеддинга ALCAM (посредством активности металлопротеиназы семейства ADAM); тогда как, напротив, авторы настоящего изобретения наблюдали высокие уровни белка ALCAM в легких пациентов с неаллергической тяжелой астмой (фиг. 2). Таким образом, данные авторов настоящего изобретения в свете отчета Kim et al. дополнительно иллюстрируют сложные различия между эозинофильным и неэозинофильным типами астмы, которые, вероятно, обуславливают обычно чувствительную к стероидам природу первого и обычно стероид-рефрактерную или резистентную природу последнего.[00108] Interestingly, a recent report suggested that eosinophilic Th2-associated allergic asthma may be partly mediated by ALCAM, as ALCAM knockout mice and mice treated with anti-ALCAM antibodies exhibit reduced levels of Th2 cytokines in response to allergen exposure. Kim et al., Am J Respir Crit Care Med. 2018
[00109] Примечательно, что авторы настоящего изобретения также сообщают в данном документе, что на мышиной модели аллергической астмы, опосредованной Th2 (та же модель, которую использовали Kim et al. выше), ингибирование CD6 эффективно снижает содержание цитокинов Th2 в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (фиг. 5C) и подавляет обусловленное Th2 продуцирование IgE (фиг. 6), показывая, что эозинофильную Th2-астму также можно лечить с помощью антитела к CD6. Таким образом, в отличие от раздвоенного ответа на лечение стероидами, который практически является отличительной чертой между эозинофильным и неэозинофильным типами астмы, данные авторов настоящего изобретения свидетельствуют о том, что ингибирование CD6 может обеспечить универсальный механизм для одновременного подавления астмы, опосредованной Th2 и Th1/Th17. Насколько известно авторам настоящего изобретения, это первое сообщение, в котором предлагается осуществлять лечение тяжелой астмы, характеризующейся низким содержанием или отсутствием эозинофильного компонента (т.е. астмы, опосредованной Th1/Th17, а не аллергической астмы, опосредованной Th2), с помощью антитела к CD6.[00109] Notably, the present inventors also report herein that in a mouse model of Th2-mediated allergic asthma (same model used by Kim et al. above), CD6 inhibition is effective in reducing Th2 cytokines in fluid derived from bronchial lavage (FIG. 5C) and suppresses Th2-mediated IgE production (FIG. 6), showing that eosinophilic Th2 asthma can also be treated with anti-CD6 antibody. Thus, in contrast to the bifurcated response to steroid treatment, which is practically the hallmark between eosinophilic and non-eosinophilic types of asthma, our data suggest that CD6 inhibition may provide a universal mechanism for simultaneously suppressing Th2 and Th1/Th17 mediated asthma. . To the present inventors' knowledge, this is the first report suggesting that severe asthma characterized by low or no eosinophilic component (i.e., Th1/Th17 mediated rather than Th2 mediated allergic asthma) be treated with an antibody to CD6.
[00110] Соответственно, в определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, предусматривающие ингибирование или блокирование передачи сигнала с помощью CD6. В конкретных вариантах осуществления способы и композиции направлены на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, характеризующаяся низким содержанием или отсутствием эозинофилов в крови. Способы определения количества эозинофилов в крови хорошо известны в данной области техники и их можно применять в соответствии с настоящим изобретением (см., например, Kostikas et al., Curr Drug Targets. 2018 Dec; 19(16): 1882-1896, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).[00110] Accordingly, in certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for suppressing T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising inhibiting or blocking signaling by CD6. In specific embodiments, the methods and compositions are directed to the suppression of T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma characterized by low or no eosinophils in the blood. Methods for determining the number of eosinophils in the blood are well known in the art and can be used in accordance with the present invention (see, for example, Kostikas et al., Curr Drug Targets. 2018 Dec; 19(16): 1882-1896, included in this document by reference in its entirety).
[00111] Специалисту средней квалификации в данной области техники будет ясно, что присутствие эозинофилов на высоком или низком уровнях является общепринятым золотым стандартом для дифференциации аллергической астмы от других форм неаллергической астмы. Эозинофилы обычно составляют менее 5% лейкоцитов периферической крови, но в ответ на воспаление, опосредованное Т-клетками-хелперами типа 2 (Th2) (например, при аллергической астме), их продуцирование значительно увеличивается, и во многих клинических исследованиях использовали измерение количества эозинофилов в крови в качестве косвенного показателя уровней эозинофилов в легких. См., например, Kostikas et al., Curr Drug Targets. 2018 Dec; 19(16): 1882-1896, включенный в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Как используется в данном документе, ссылка на пациента с астмой с «низким содержанием» эозинофилов означает, что у пациента количество эозинофилов в крови составляет ≤300 клеток/мкл. Ссылка на пациента с астмой, у которого эозинофилы «отсутствуют», означает, что у субъекта в крови нет обнаруживаемых количеств эозинофильных клеток/мкл. [00111] One of ordinary skill in the art will appreciate that the presence of high or low levels of eosinophils is the accepted gold standard for differentiating allergic asthma from other forms of non-allergic asthma. Eosinophils typically make up less than 5% of peripheral blood leukocytes, but in response to T-helper cell type 2 (Th2)-mediated inflammation (such as in allergic asthma), their production is greatly increased, and many clinical studies have used the measurement of eosinophils in blood as a proxy for lung eosinophil levels. See, for example, Kostikas et al., Curr Drug Targets. Dec 2018; 19(16): 1882-1896, incorporated herein by reference in its entirety. As used herein, reference to an asthma patient with "low" eosinophil count means that the patient has a blood eosinophil count of ≤300 cells/µl. Referring to an asthma patient in whom eosinophils are "absent" means that the subject has no detectable amounts of eosinophil cells/µl in the blood.
[00112] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, предусматривающие введение субъекту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00112] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for suppressing T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising administering to the subject an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00113] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на лечение, предотвращение или ослабление миграции T-клеток в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, предусматривающие введение субъекту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00113] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for treating, preventing, or attenuating the migration of T cells into and through lung tissue in response to an asthma-inducing antigen, comprising administering an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) or its antigen binding fragment. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00114] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие введение субъекту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающего фрагмента. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00114] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for modulating or ameliorating the symptom or severity of asthma, comprising administering an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding fragment thereof to a subject. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00115] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие приведение T-клетки в контакт с антителом к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающим фрагментом. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00115] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for modulating or ameliorating the symptom or severity of asthma, comprising contacting a T cell with an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00116] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на подавление опосредованного Т-клетками воспаления легких у субъекта, у которого имеется астма, предусматривающие введение субъекту партнера по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00116] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for suppressing T-cell mediated lung inflammation in a subject who has asthma, comprising administering to the subject a binding partner that specifically binds to CD6 on a T cell and prevents or inhibits signaling activation by CD6. The binding partner may be an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00117] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на лечение, предотвращение, или ослабление миграции T-клетки в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, предусматривающие введение субъекту партнера по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00117] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for treating, preventing, or attenuating T cell migration into and through lung tissue in response to an asthma-inducing antigen, comprising administering to the subject a binding partner that specifically binds to CD6 on the T cell and prevents or inhibits signaling activation by CD6. The binding partner may be an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00118] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие введение субъекту партнера по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00118] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for modulating or reducing the symptom or severity of asthma, comprising administering to the subject a binding partner that specifically binds to CD6 on a T cell and prevents or inhibits the activation of signaling by CD6. The binding partner may be an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00119] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести тяжелой астмы, предусматривающие приведение T-клетки в контакт с партнером по связыванию, который специфически связывается с CD6 на T-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6. Партнер по связыванию может представлять собой антитело к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающий фрагмент. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00119] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for modulating or ameliorating a symptom or severity of severe asthma, comprising bringing a T cell into contact with a binding partner that specifically binds to CD6 on a T cell and prevents or inhibits activation signal transmission using CD6. The binding partner may be an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00120] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на лечение, предотвращение, или ослабление миграции T-клетки в легочную ткань и через нее в ответ на индуцирующий астму антиген, предусматривающие ингибирование или блокирование пути CD6. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00120] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for treating, preventing, or attenuating T cell migration into and through lung tissue in response to an asthma-inducing antigen, comprising inhibiting or blocking the CD6 pathway. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00121] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие ингибирование или блокирование пути CD6. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00121] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for modulating or ameliorating the symptom or severity of asthma, comprising inhibiting or blocking the CD6 pathway. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00122] В определенных аспектах настоящего изобретения предусмотрены способы и композиции, направленные на модулирование или ослабление симптома или тяжести астмы, предусматривающие ингибирование или блокирование пути CD6. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00122] In certain aspects of the present invention, methods and compositions are provided for modulating or ameliorating the symptom or severity of asthma, comprising inhibiting or blocking the CD6 pathway. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00123] В некоторых вариантах осуществления способ лечения тяжелой астмы включает модулирование активации, пролиферации, дифференцировки, выживания и/или миграции одной или более клеток, экспрессирующих CD6, путем приведения клетки в контакт с антителом к CD6 (например, EQ001). Например, клетка, экспрессирующая CD6, которую приводят в контакт с антителом к CD6 (например, EQ001), может представлять собой T-клетку, которая экспрессирует CD6. Соответственно, такие свойства такой Т-клетки можно модулировать у субъекта, у которого имеется тяжелая астма, путем введения антитела к CD6. В некоторых вариантах осуществления T-клетка, которую модулируют таким образом, представляет собой T-клетку CD4+. В некоторых вариантах осуществления T-клетка, которую модулируют таким образом, представляет собой T-клетку, являющуюся T-хелпером 1 (Th1). В некоторых вариантах осуществления T-клетка, которую модулируют таким образом, представляет собой T-лимфоцит (T-клетку), являющуюся T-хелпером 17 (Th17). В некоторых вариантах осуществления антитело к CD6 (например, EQ001) модулирует активацию, дифференцировку, выживание и/или миграцию T-клетки Th1 и/или T-клетки Th17, а также другой клетки, экспрессирующей CD6. Например, антитело к CD6 (например, EQ001) может модулировать активацию, дифференцировку, выживание и/или миграцию комбинации клеток, выбранных из (i) T-клетки Th17 и T-клетки Th2; (ii) T-клетки Th17 и T-клетки Th1; (iii) T-клетки Th1 и T-клетки Th2; и (iv) T-клетки Th17, T-клетки Th1 и T-клетки Th2. В некоторых вариантах осуществления астма может представлять собой тяжелую астму. В конкретных вариантах осуществления астма может характеризоваться низким содержанием или отсутствием эозинофилов. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой нейтрофильную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой малогранулоцитарную астму. В конкретных вариантах осуществления астма может представлять собой астму со смешанным воспалением.[00123] In some embodiments, a method for treating severe asthma includes modulating the activation, proliferation, differentiation, survival, and/or migration of one or more CD6-expressing cells by contacting the cell with an anti-CD6 antibody (eg, EQ001). For example, a CD6-expressing cell that is contacted with an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) may be a T cell that expresses CD6. Accordingly, such properties of such a T cell can be modulated in a subject who has severe asthma by administering an anti-CD6 antibody. In some embodiments, the T cell that is modulated in this manner is a CD4+ T cell. In some embodiments, the T cell that is modulated in this manner is a T cell that is T helper 1 (Th1). In some embodiments, the T cell that is modulated in this manner is a T-lymphocyte (T cell) that is a T helper 17 (Th17). In some embodiments, an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) modulates the activation, differentiation, survival, and/or migration of a Th1 T cell and/or a Th17 T cell, as well as another CD6 expressing cell. For example, an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) can modulate the activation, differentiation, survival, and/or migration of a combination of cells selected from (i) a Th17 T cell and a Th2 T cell; (ii) Th17 T cells and Th1 T cells; (iii) Th1 T cells and Th2 T cells; and (iv) Th17 T cells, Th1 T cells, and Th2 T cells. In some embodiments, the asthma may be severe asthma. In specific embodiments, asthma may be characterized by low or no eosinophils. In specific embodiments, the asthma may be neutrophilic asthma. In specific embodiments, the asthma may be small granulocytic asthma. In specific embodiments, the asthma may be asthma with mixed inflammation.
[00124] В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму, которая предусматривает нейтрофильный или смешанный фенотип, который является как эозинофильным, так и нейтрофильным. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой тяжелую астму, которая предусматривает нейтрофильный, малогранулоцитарный или смешанный фенотип, который являются как эозинофильным, так и нейтрофильным. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th17. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th1. В определенных конкретных вариантах осуществления астма представляет собой нейтрофильную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки Th1 CD6+ и T-клетки Th17 CD6+. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th17. В некоторых вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+ T-клетка, которая представляет собой T-клетку Th1. В определенных конкретных вариантах осуществления астма представляет собой малогранулоцитарную тяжелую астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки Th1 CD6+ и T-клетки Th17 CD6+. В некоторых вариантах осуществления тяжелая астма представляет собой смешанную нейтрофильную и эозинофильную астму, характеризующуюся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th1, T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th17, и T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th2.[00124] In some embodiments, the asthma is severe asthma that has a neutrophilic or mixed phenotype that is both eosinophilic and neutrophilic. In some embodiments, the asthma is severe asthma that has a neutrophilic, small granulocytic, or mixed phenotype that is both eosinophilic and neutrophilic. In some embodiments, the asthma is neutrophilic severe asthma characterized by inflammation of the airways involving a CD6 + T cell, which is a Th17 T cell. In some embodiments, asthma is neutrophilic severe asthma characterized by inflammation of the airways involving a CD6 + T cell, which is a Th1 T cell. In certain specific embodiments, the asthma is neutrophilic severe asthma characterized by airway inflammation involving Th1 CD6 + T cells and Th17 CD6 + T cells. In some embodiments, the asthma is small granulocytic severe asthma characterized by inflammation of the airways involving a CD6 + T cell, which is a Th17 T cell. In some embodiments, asthma is small granulocytic severe asthma characterized by inflammation of the airways involving a CD6 T cell + a T cell that is a Th1 T cell. In certain specific embodiments, the asthma is small granulocytic severe asthma characterized by airway inflammation involving CD6 + Th1 T cells and CD6 + Th17 T cells. In some embodiments, severe asthma is mixed neutrophilic and eosinophilic asthma characterized by inflammation of the airways involving a CD6 + T cell, which is a Th1 T cell, CD6 + T cells, which is a Th17 T cell, and T -cells CD6 + which is a T-cell Th2.
[00125] В конкретных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ, включающий введение антитела к CD6 (например, EQ001) пациенту, у которого имеется нейтрофильная тяжелая астма, характеризующаяся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th17.[00125] In specific embodiments, the present invention provides a method comprising administering an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) to a patient who has neutrophilic severe asthma characterized by airway inflammation involving the CD6 + T cell, which is a T cell Th17.
[00126] В конкретных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ, включающий введение антитела к CD6 (например, EQ001) пациенту, у которого имеется нейтрофильная тяжелая астма, характеризующаяся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th1. [00126] In specific embodiments, the present invention provides a method comprising administering an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) to a patient who has neutrophilic severe asthma characterized by airway inflammation involving the CD6 + T cell, which is a T cell Th1.
[00127] В конкретных вариантах осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ, включающий введение антитела к CD6 (например, EQ001) пациенту, пациенту, у которого имеется нейтрофильная тяжелая астма, характеризующаяся воспалением дыхательных путей с участием T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th17, и T-клетки CD6+, которая представляет собой T-клетку Th1.[00127] In specific embodiments, the present invention provides a method comprising administering an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) to a patient, a patient who has neutrophilic severe asthma characterized by airway inflammation involving a CD6 + T cell, which is a T a Th17 cell; and a CD6 + T cell, which is a Th1 T cell.
[00128] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает низкий уровень эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая не предусматривает наличия эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001).[00128] In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma, which involves a low level of eosinophilic T-cell response, using the anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001). In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma that does not involve an eosinophilic T cell response with an anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001).
[00129] В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает нейтрофильный Т-клеточный ответ, но не эозинофильный Т-клеточный ответ, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает нейтрофильный Т-клеточный ответ, но по сути не предусматривает наличия эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает нейтрофильный Т-клеточный ответ и низкий уровень эозинофильного Т-клеточного ответа, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает Т-клеточный ответ, который по сути опосредован эффекторной клеткой Th17 CD4+, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению тяжелой астмы, которая предусматривает Т-клеточный ответ, который по сути опосредован эффекторными клетками Th1 и Th17 CD4+, с помощью антитела к CD6, раскрытого в данном документе (например, EQ001). В определенных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к лечению астмы (например, тяжелой астмы), которая предусматривает Т-клеточный ответ, опосредованный эффекторными клетками Th1 и/или Th17 CD4+, количество которых является по меньшей мере в 2 раза (2x) большим, чем количество эффекторных клеток Th2 CD4+, или эффекторными клетками Th1 и/или Th17 CD4+, количество которых является в 3x, 4x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x, 40x, 50x, 100x, 1000x, 10000x раз больше, чем количество эффекторных клеток Th2 CD4+.[00129] In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma that elicits a neutrophilic T cell response but not an eosinophilic T cell response with an anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001). In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma that elicits a neutrophilic T cell response, but essentially does not elicit an eosinophilic T cell response, with an anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001). In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma that involves a neutrophilic T cell response and a low level of eosinophilic T cell response with an anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001). In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma, which involves a T-cell response, which is essentially mediated by the CD4 + Th17 effector cell, using an anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001). In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of severe asthma that elicits a T cell response that is essentially mediated by CD4 + Th1 and Th17 effector cells with an anti-CD6 antibody disclosed herein (eg, EQ001). In certain embodiments, the present invention relates to the treatment of asthma (e.g., severe asthma) that involves a T cell response mediated by Th1 and/or Th17 CD4 + effector cells that is at least 2 times (2x) greater than the number of Th2 CD4 + effector cells, or Th1 and/or Th17 CD4 + effector cells, the number of which is 3x, 4x, 5x, 10x, 15x, 20x, 30x, 40x, 50x, 100x, 1000x, 10000x times more than the number effector cells Th2 CD4 + .
[00130] Партнер по связыванию, который специфически связывается с CD6 на Т-клетке и предотвращает или ингибирует активацию передачи сигнала с помощью CD6, может представлять собой антитело к CD6 или его антигенсвязывающую часть.[00130] A binding partner that specifically binds to CD6 on a T cell and prevents or inhibits signaling activation by CD6 can be an anti-CD6 antibody or an antigen-binding portion thereof.
[00131] Антитело к CD6 может представлять собой любое антитело, которое связывается с CD6 и блокирует опосредованную CD6 нисходящую передачу сигнала в T-клетке. Например, исследования блокирования с применением моноклональных антител к CD6 (mAb) свидетельствуют о том, что CD6 играет важную роль в развитии Т-клеток, путем регулирования адгезивных взаимодействий Т-клеток с эпителиальными клетками тимуса (ТЕ) (Patel et al., J. Exp. Med. (1995) 181:1563-1568). Дополнительные исследования показали, что CD6 может функционировать как важная вспомогательная молекула при активации Т-клеток. Например, некоторые mAb к CD6 являются непосредственно митогенными для Т-клеток (Gangemi et al., J. Immunol. (1989) 143:2439; Bott et al., Int. Immunol. (1993) 7: 783), в то время как другие способны совместно стимулировать пролиферацию Т-клеток в сочетании с антителом к CD3, антителом к CD2 или PMA (Gangemi et al., J. Immunol. (1989) 143:2439; Morimoto et al., J. Immunol. (1988) 140:2165-2170; Osorio et al., Cell. Immunol. (1994) 154:23). Еще дополнительные доказательства роли CD6 в активации Т-клеток получены из исследований, показывающих, что CD6 становится гиперфосфорилированным по остаткам Ser и Thr (Swack et al., Mol. Immunol. (1989) 26:1037-1049; Swack et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:7137; Cardenas et al., J. Immunol., 145:1450-1455 (1990)) и фосфорилированным по остаткам Tyr (Wee et al., J. Exp. Med. (1993) 177:219-223) после активации Т-клеток. Эти и другие исследования указывают на то, что CD6 является важным модулятором функции как незрелых, так и зрелых Т-клеток in vivo, воздействуя как на активацию Т-клеток, так и на передачу сигнала (De Wit, J. et al., Blood (2011) 118: 6107-6114), и любое антитело, которое способно предотвратить данные эффекты, подходит для применения в настоящем изобретении.[00131] An anti-CD6 antibody can be any antibody that binds to CD6 and blocks CD6-mediated downstream signaling in a T cell. For example, blocking studies using anti-CD6 monoclonal antibodies (mAbs) suggest that CD6 plays an important role in T cell development by regulating T cell adhesion interactions with thymic epithelial (TE) cells (Patel et al., J. Exp Med (1995) 181:1563-1568). Additional research has shown that CD6 may function as an important accessory molecule in T cell activation. For example, some anti-CD6 mAbs are directly mitogenic for T cells (Gangemi et al., J. Immunol. (1989) 143:2439; Bott et al., Int. Immunol. (1993) 7:783), while how others are able to co-stimulate T cell proliferation when combined with an anti-CD3 antibody, an anti-CD2 antibody, or PMA (Gangemi et al., J. Immunol. (1989) 143:2439; Morimoto et al., J. Immunol. (1988) 140:2165-2170; Osorio et al., Cell Immunol (1994) 154:23). Further evidence for the role of CD6 in T cell activation comes from studies showing that CD6 becomes hyperphosphorylated at Ser and Thr residues (Swack et al., Mol. Immunol. (1989) 26:1037-1049; Swack et al., J Biol Chem (1991) 266:7137 Cardenas et al., J. Immunol., 145:1450-1455 (1990)) and phosphorylated at Tyr residues (Wee et al., J. Exp. Med. (1993 ) 177:219-223) after T cell activation. These and other studies indicate that CD6 is an important modulator of both immature and mature T cell function in vivo, affecting both T cell activation and signaling (De Wit, J. et al., Blood (2011) 118: 6107-6114), and any antibody that is able to prevent these effects is suitable for use in the present invention.
[00132] В патенте США № 6372215 раскрыты антитела и другие связывающие средства, которые специфически связываются с доменами 3 SRCR (D3) CD6 человека (hCD6) или стволовым доменом CD6 человека (CD6S) и ингибируют связывание молекулы клеточной адгезии активированных лейкоцитов (ALCAM) с CD6.[00132] U.S. Pat. No. 6,372,215 discloses antibodies and other binding agents that specifically bind to human CD6 (hCD6) SRCR domain 3 (D3) or human CD6 stem domain (CD6S) and inhibit activated leukocyte cell adhesion molecule (ALCAM) binding to CD6.
[00133] В более ранних публикациях и патентах раскрыты последовательности моноклонального антитела к CD6 (IOR-T1) мыши и модификации аминокислот, которые были выполнены для гуманизации IOR-T1 до -T1h (гуманизированного IOR-T1). В патенте США №5712120 и его эквиваленте ЕР 0699755 раскрыты конкретные способы гуманизации моноклональных антител мыши и последовательности IOR-T1 и -T1h. В патенте США №6572857 и его эквиваленте ЕР 0807125 раскрыта последовательность IOR-T1 и -T1h (гуманизированного IOR-T1). В PCT/IN2008/00562 и родственном патенте США №8524233 под названием «Моноклональное антитело и способ его получения» раскрыто продуцирование в клетках NS0 антитела к CD6, которое имеет последовательности тяжелой и легкой цепей, представленные в данном документе под SEQ ID NO: 1 и 2. Это антитело также упоминалось в упомянутом патенте как T1h, хотя его последовательность отличалась от исходного T1h. INN-название данного антитела - итолизумаб. Итолизумаб продуцируется в линии клеток NS0, полученных от мыши, и в клетках яичника китайского хомячка (СНО), и упоминается в данном документе под коммерческим названием EQ001, если продуцируется в клетках СНО, и под коммерческим названием ALZUMAb, если продуцируется в клетках NS0. EQ001 (т.е. итолизумаб, продуцируемый в клетках CHO) также известен в данной области техники как «Bmab-600». В различных вариантах осуществления в данном документе авторы настоящего изобретения называют само антитело независимо от способа его получения по его INN-названию - итолизумаб. Таким образом, используемый в данном документе термин «итолизумаб» охватывает ALZUMAb и EQ001, каждый из которых имеет ту же последовательность, что и итолизумаб. Аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VK) итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены в данном документе под SEQ ID NO: 1 и 2 соответственно. Нуклеотидные (ДНК) последовательности VH и VK итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены в данном документе под SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR 1-3 VH итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены под SEQ ID NO: 5-7 соответственно. Аминокислотные последовательности CDR 1-3 VK итолизумаба (и EQ001 / ALZUMAb) представлены под SEQ ID NO: 8-10 соответственно.[00133] Earlier publications and patents disclosed mouse anti-CD6 monoclonal antibody (IOR-T1) sequences and amino acid modifications that were made to humanize IOR-T1 to -T1h (humanized IOR-T1). US Pat. No. 5,712,120 and its
[00134] Соответственно, антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, представленные под SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.[00134] Accordingly, an anti-CD6 antibody may be an anti-CD6 monoclonal antibody that contains heavy chain and light chain variable regions comprising the amino acid sequences shown under SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2.
[00135] Антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, предусматривающие (а) нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 3, или комплементарную ей последовательность; и (b) молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, представленную под SEQ ID NO: 4, или комплементарную ей последовательность.[00135] An anti-CD6 antibody may be an anti-CD6 monoclonal antibody that comprises heavy chain and light chain variable regions comprising (a) the nucleotide sequence shown under SEQ ID NO: 3 or a sequence complementary thereto; and (b) a nucleic acid molecule containing the nucleotide sequence shown under SEQ ID NO: 4, or its complementary sequence.
[00136] Антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, содержащие аминокислотную последовательность, которая на по меньшей мере 80% гомологична аминокислотной последовательности, представленной под SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.[00136] An anti-CD6 antibody may be an anti-CD6 monoclonal antibody that contains heavy chain and light chain variable regions containing an amino acid sequence that is at least 80% homologous to the amino acid sequence shown under SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO. : 2.
[00137] Антитело к CD6 может представлять собой моноклональное антитело к CD6, которое специфически связывает CD6 и предусматривает в этой части по меньшей мере приблизительно 65% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 70% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 75% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 80% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 80% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 85% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 90% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 95% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, по меньшей мере приблизительно 98% аминокислотная последовательность идентичность или по меньшей мере приблизительно 99% идентичность или гомологию аминокислотной последовательности, относительно аминокислотных остатков, представленных под SEQ ID NO 1 и 2.[00137] An anti-CD6 antibody can be an anti-CD6 monoclonal antibody that specifically binds CD6 and provides in this portion at least about 65% amino acid sequence identity or homology, at least about 70% amino acid sequence identity or homology, at least about 75% amino acid sequence identity or homology, at least about 80% amino acid sequence identity or homology, at least about 80% amino acid sequence identity or homology, at least about 85% amino acid sequence identity or homology, at least about 90 % amino acid sequence identity or homology, at least about 95% amino acid sequence identity or homology, at least about 98% amino acid sequence identity, or at least about 99% amino acid sequence identity or homology, relative to the amino acid residues shown under
[00138] Антитело к CD6 может содержать одну или более CDR, выбранных из CDR1 тяжелой цепи EQ001: GFKFSRYAMS (SEQ ID NO: 5); CDR2 тяжелой цепи EQ001: TISSGGSYIYYPDSVKG (SEQ ID NO: 6); CDR3 тяжелой цепи EQ001: RDYDLDYFDS (SEQ ID NO: 7); CDR1 легкой цепи EQ001: KASRDIRSYLT (SEQ ID NO: 8); CDR2 легкой цепи EQ001: YATSLAD (SEQ ID NO: 9); CDR3 легкой цепи EQ001: LQHGESP (SEQ ID NO: 10); и их комбинации.[00138] An anti-CD6 antibody may comprise one or more CDRs selected from EQ001 heavy chain CDR1: GFKFSRYAMS (SEQ ID NO: 5); EQ001 heavy chain CDR2: TISSGGSYIYYPDSVKG (SEQ ID NO: 6); EQ001 heavy chain CDR3: RDYDLDYFDS (SEQ ID NO: 7); EQ001 light chain CDR1: KASRDIRSYLT (SEQ ID NO: 8); EQ001 light chain CDR2: YATSLAD (SEQ ID NO: 9); EQ001 light chain CDR3: LQHGESP (SEQ ID NO: 10); and their combinations.
[00139] В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело, которое содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело IgG, которое содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело IgG1, которое содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 представляет собой гуманизированное антитело, продуцируемое в клетке CHO, где гуманизированное антитело содержит каждую из CDR EQ001, представленных под SEQ ID NO: 5-10.[00139] In specific embodiments, the anti-CD6 antibody comprises each of the EQ001 CDRs shown under SEQ ID NOs: 5-10. In specific embodiments, the anti-CD6 antibody is a humanized antibody that contains each of the EQ001 CDRs shown under SEQ ID NOs: 5-10. In specific embodiments, the anti-CD6 antibody is a humanized IgG antibody that contains each of the EQ001 CDRs shown under SEQ ID NOs: 5-10. In specific embodiments, the anti-CD6 antibody is a humanized IgG1 antibody that contains each of the EQ001 CDRs shown under SEQ ID NOs: 5-10. In specific embodiments, the anti-CD6 antibody is a humanized antibody produced in a CHO cell, wherein the humanized antibody comprises each of the EQ001 CDRs shown under SEQ ID NOs: 5-10.
[00140] Антитело к CD6 может быть выбрано из mAb UMCD6 (Li et al., PNAS March 7, 2017, vol. 114, no. 10, 2687-2692, источник полностью включен в данный документ посредством ссылки) и любого из антител, перечисленных в таблице 2.[00140] The anti-CD6 antibody can be selected from the UMCD6 mAb (Li et al., PNAS March 7, 2017, vol. 114, no. 10, 2687-2692, herein incorporated by reference in its entirety) and any of the antibodies listed in table 2.
Таблица 2. Антитела к CD6Table 2 Antibodies to CD6
[00141] Антитело к CD6 может представлять собой T1h, раскрытое в патенте США №8524233, включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.[00141] The anti-CD6 antibody may be T1h as disclosed in US Pat. No. 8,524,233, incorporated herein by reference in its entirety.
[00142] Антитело к CD6 может представлять собой итолизумаб. Антитело к CD6 может представлять собой ALZUMAb. Антитело к CD6 может представлять собой EQ001.[00142] The anti-CD6 antibody may be itolizumab. The anti-CD6 antibody may be ALZUMAb. The anti-CD6 antibody may be EQ001.
[00143] Антитело к CD6 может представлять собой антитело, продуцируемое секретирующей гибридомой IOR-T1A, депонированной в ECACC под № депонирования ECACC 96112640.[00143] The anti-CD6 antibody may be an antibody produced by secreting hybridoma IOR-T1A deposited with the ECACC under ECACC Deposit No. 96112640.
[00144] Антитело к CD6 может связываться с CD6 на поверхности Т-клетки. Антитело к CD6 может связываться с доменом 1, доменом 2 или доменом 3 CD6 на поверхности Т-клетки. В определенных аспектах антитело к CD6 связывается с доменом 1 или доменом 3 на CD6. В конкретных вариантах осуществления антитело к CD6 связывается с доменом 3 на CD6. Связывание антитела к CD6 с CD6 на поверхности T-клетки может модулировать активность T-клетки. В определенных аспектах связывание антитела к CD6 c CD6 на поверхности T-клетки модулирует активность и/или миграцию T-клетки. В конкретных аспектах связывание антитела к CD6 с CD6 на поверхности T-клетки модулирует миграцию T-клетки в ткань легких и через нее.[00144] An anti-CD6 antibody can bind to CD6 on the surface of a T cell. An anti-CD6 antibody can bind to
[00145] Антитело к CD6 (например, EQ001) можно доставлять субъекту в виде фармацевтической композиции на основе антитела к CD6.[00145] An anti-CD6 antibody (eg, EQ001) can be delivered to a subject as a pharmaceutical composition based on an anti-CD6 antibody.
[00146] Фармацевтические композиции, подходящие для доставки антитела к CD6, и способы их получения будут очевидны для специалистов в данной области техники. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в 19-м издании Remington’s Pharmaceutical Sciences, (Mack Publishing Company, 1995г.), включенном в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Фармацевтические композиции, содержащие антитела к CD6, также известны в данной области техники. Например, антитело к CD6 может представлять собой фармацевтическую композицию, раскрытую в патентной заявке США №12/525449 (US20100047242), включенной в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.[00146] Pharmaceutical compositions suitable for delivery of an anti-CD6 antibody and methods for their preparation will be apparent to those skilled in the art. Such compositions and methods for their preparation can be found, for example, in the 19th edition of Remington's Pharmaceutical Sciences, (Mack Publishing Company, 1995), incorporated herein by reference in its entirety. Pharmaceutical compositions containing anti-CD6 antibodies are also known in the art. For example, an anti-CD6 antibody may be the pharmaceutical composition disclosed in US Patent Application No. 12/525449 (US20100047242), incorporated herein by reference in its entirety.
[00147] Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут содержать активное фармацевтическое средство (например, антитело к CD6, такое как EQ001) и одно или более из фармацевтически приемлемых носителя, вспомогательных веществ, разбавителя, поверхностно-активного вещества и/или сред-носителей.[00147] Pharmaceutical compositions of the present invention may contain an active pharmaceutical agent (e.g., an anti-CD6 antibody such as EQ001) and one or more of a pharmaceutically acceptable carrier, excipients, diluent, surfactant, and/or carrier media.
[00148] Фармацевтическая композиция может содержать антитело к CD6 (или его антигенсвязывающий фрагмент) и одно или более средств, выбранных из группы, состоящей из носителей, вспомогательных веществ, разбавителей, антиоксидантов, консервантов, красителей, вкусоароматических добавок и понизителей вязкости, эмульгирующих средств, суспендирующих средств, растворителей, наполнителей, объемообразующих средств, буферов, средств доставки, регуляторов тоничности, сорастворителей, смачивающих средств, комплексообразующих средств, буферных веществ, противомикробных средств и/или поверхностно-активных веществ. Такие средства известны в данной области техники (см., например, 18-е издание Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Истон, Пенсильвания (1990 г.), включенное в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте).[00148] The pharmaceutical composition may contain an anti-CD6 antibody (or antigen-binding fragment thereof) and one or more agents selected from the group consisting of carriers, excipients, diluents, antioxidants, preservatives, colorants, flavors and viscosity reducers, emulsifying agents, suspending agents, solvents, fillers, bulking agents, buffers, delivery vehicles, tonicity regulators, co-solvents, wetting agents, complexing agents, buffering agents, antimicrobial agents and/or surfactants. Such agents are known in the art (see, for example, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1990), incorporated herein by reference in its entirety).
[00149] Настоящее изобретение также включает виды комбинированной терапии, предусматривающие введение пациенту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающей части в комбинации со вторым активным средством, или устройством, или процедурой, с помощью которых можно обеспечивать лечение, предупреждение или ослабление одного или более симптомов, связанных с астмой. В данном контексте «вводится в комбинации» означает: (1) часть одной и той же единичной лекарственной формы; (2) введение по отдельности, но в качестве части одной и той же терапевтической лечебной программы или схемы, как правило, но не обязательно в один и тот же день.[00149] The present invention also includes combination therapies comprising administering an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) or an antigen-binding portion thereof to a patient in combination with a second active agent, or device, or procedure that can treat, prevent, or attenuate one or more symptoms associated with asthma. In this context, "introduced in combination" means: (1) part of the same unit dosage form; (2) administration separately, but as part of the same therapeutic treatment program or regimen, usually but not necessarily on the same day.
[00150] Как отмечалось ранее, EQ001 (или другое антитело к CD6) в некоторых аспектах можно вводить отдельно в качестве монотерапии или в некоторых аспектах в качестве комбинированной терапии. В некоторых аспектах любое из EQ001 (или других антител к CD6), описанных в данном документе (например, EQ001), предназначено для введения пациенту в соответствии со способами, раскрытыми в данном документе, может вводить в сочетании с одним или более другими терапевтическими средствами в качестве комбинированной терапии. Например, EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить пациенту в качестве комбинированной терапии с другим средством для лечения воспалительного или аутоиммунного заболевания. Комбинированная терапия может включать введение с EQ001 (или другим антителом к CD6) средства, выбранного, например, без ограничения из стероида или иммунодепрессанта. Стероид может представлять собой кортикостероид. Кортикостероид может представлять собой преднизон.[00150] As previously noted, EQ001 (or other anti-CD6 antibody) can in some aspects be administered alone as a monotherapy or in some aspects as a combination therapy. In some aspects, any of the EQ001 (or other anti-CD6 antibodies) described herein (e.g., EQ001) is for administration to a patient in accordance with the methods disclosed herein, may be administered in combination with one or more other therapeutic agents in as a combination therapy. For example, EQ001 (or another anti-CD6 antibody) may be administered to a patient as a combination therapy with another agent for the treatment of an inflammatory or autoimmune disease. Combination therapy may include administering with EQ001 (or other anti-CD6 antibody) an agent selected, for example, without limitation, from a steroid or an immunosuppressant. The steroid may be a corticosteroid. The corticosteroid may be prednisone.
[00151] EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить до, после или одновременно с одним или более из таких противовоспалительных средств или средств против аутоиммунных заболеваний. В некоторых вариантах осуществления такие комбинации могут обеспечивать значительные преимущества, включая аддитивную или синергетическую активность в терапии.[00151] EQ001 (or other anti-CD6 antibody) may be administered before, after, or simultaneously with one or more of such anti-inflammatory or autoimmune disease agents. In some embodiments, such combinations may provide significant benefits, including additive or synergistic activity in therapy.
[00152] В различных вариантах осуществления композиции и способы, раскрытые в данном документе, например способы для лечения астмы, включают введение субъекту эффективного количества EQ001 (или другого антитела к CD6) или композиции (например, фармацевтической композиции), содержащей EQ001 (или другое антитело к CD6).[00152] In various embodiments, the compositions and methods disclosed herein, e.g., methods for treating asthma, comprise administering to a subject an effective amount of EQ001 (or other anti-CD6 antibody) or a composition (e.g., pharmaceutical composition) containing EQ001 (or other antibody to CD6).
[00153] EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить в виде фармацевтической композиции. Ингибитор пути CD6-ALCAM можно вводить до, после и/или одновременно с одним или более другими терапевтическими средствами. При одновременном введении с одним или более другими терапевтическими средствами такое введение может осуществляться совместно (например, в одной композиции) или может осуществляться посредством двух или более отдельных композиций, необязательно посредством одного и того же или разных путей введения (например, местного, системного, перорального, внутривенного и др.).[00153] EQ001 (or other anti-CD6 antibody) can be administered as a pharmaceutical composition. The CD6-ALCAM pathway inhibitor may be administered before, after and/or simultaneously with one or more other therapeutic agents. When administered concurrently with one or more other therapeutic agents, such administration may be concurrently (e.g., in the same composition) or may be via two or more separate compositions, optionally via the same or different routes of administration (e.g., topical, systemic, oral , intravenous, etc.).
[00154] Введение EQ001 (или другого антитела к CD6) и/или других терапевтических средств можно осуществлять посредством любого пути введения терапевтических средств. Эти пути включают системное или местное введение, такое как пероральный, назальный, парентеральный, трансдермальный, подкожный, вагинальный, буккальный, ректальный или местный пути введения.[00154] Administration of EQ001 (or other anti-CD6 antibody) and/or other therapeutic agents may be via any route of administration of the therapeutic agents. These routes include systemic or topical administration such as oral, nasal, parenteral, transdermal, subcutaneous, vaginal, buccal, rectal or topical routes.
[00155] Для введения согласно способам применения, описанным в данном документе, EQ001 (или другое антитело к CD6) можно смешивать перед введением с нетоксичным фармацевтически приемлемым веществом-носителем (например, физиологическим раствором или натрий-фосфатным буфером) и вводить с помощью любой подходящей с медицинской точки зрения процедуры, например парентерального введения (например, инъекции), такого как внутривенная или внутриартериальная инъекция.[00155] For administration according to the methods of use described herein, EQ001 (or other anti-CD6 antibody) may be mixed prior to administration with a non-toxic pharmaceutically acceptable carrier material (e.g., saline or sodium phosphate buffer) and administered with any suitable from a medical point of view, a procedure, such as parenteral administration (eg, injection), such as intravenous or intra-arterial injection.
[00156] Составы на основе EQ001 (или другого антитела к CD6), применяемые в соответствии с настоящим изобретением, можно получить путем смешивания антитела, характеризующегося желаемой степенью чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами в форме либо лиофилизированных составов, либо водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфатный, цитратный и на основе других органических кислот; антиоксиданты, в том числе аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты, такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол и м-крезол; полипептиды с низкой молекулярной массой (менее приблизительно 10 остатков); белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, в том числе глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие средства, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалозу или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионогенные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™ PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).[00156] EQ001 (or other anti-CD6 antibody) formulations useful in accordance with the present invention can be prepared by mixing an antibody of the desired purity with optional pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or stabilizers in the form of either lyophilized formulations or aqueous solutions. Acceptable carriers, excipients or stabilizers are non-toxic to recipients at the dosages and concentrations employed and include buffers such as phosphate, citrate and other organic acids; antioxidants, including ascorbic acid and methionine; preservatives such as octadecyldimethylbenzylammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethonium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol; cyclohexanol; 3-pentanol and m-cresol; low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues); proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; monosaccharides, disaccharides and other carbohydrates, including glucose, mannose or dextrins; chelating agents such as EDTA; sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; salt-forming counterions such as sodium; metal complexes (eg Zn-protein complexes); and/or non-ionic surfactants such as TWEEN™ PLURONICS™ or polyethylene glycol (PEG).
[00157] EQ001 (или другое антитело к CD6) также может заключаться в микрокапсулы, полученные, например, методами коацервации или полимеризации на границе раздела фаз, например, микрокапсулы из гидроксиметилцеллюлозы или желатина и микрокапсулы из поли-(метилметакрилата) соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, липосомы, микросферы альбумина, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии. Такие методики широко известны в данной области техники.[00157] EQ001 (or other anti-CD6 antibody) can also be encapsulated in microcapsules, for example, by coacervation or interfacial polymerization methods, e.g. drug delivery (eg, liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or macroemulsions. Such techniques are widely known in the art.
[00158] Можно получать препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие EQ001 (или другое антитело к CD6), причем эти матрицы имеют форму формованных изделий, например пленок или микрокапсул. Примеры матриц с замедленным высвобождением включают сложные полиэфиры, гидрогели, сополимеры L-глутаминовой кислоты, неразлагаемый сополимер этилена и винилацетата и разлагаемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты.[00158] Sustained release formulations can be obtained. Suitable examples of sustained release formulations include semi-permeable matrices of solid hydrophobic polymers containing EQ001 (or other anti-CD6 antibody) which matrices are in the form of molded articles such as films or microcapsules. Examples of sustained release matrices include polyesters, hydrogels, L-glutamic acid copolymers, non-degradable ethylene-vinyl acetate copolymer, and degradable lactic acid-glycolic acid copolymers.
[00159] EQ001 (или другое антитело к CD6) можно вводить субъекту в соответствии с известными способами, такими как внутривенное введение в виде болюса или путем непрерывной инфузии в течение определенного периода времени, внутримышечным, внутрибрюшинным, интрацереброспинальным, подкожным, внутрисуставным, интрасиновиальным, интратекальным или пероральным путями. В некоторых случаях предпочтительным является внутривенное или подкожное введение EQ001 (или другого антитела к CD6).[00159] EQ001 (or another anti-CD6 antibody) can be administered to a subject according to known methods, such as intravenous administration as a bolus or by continuous infusion over a period of time, intramuscular, intraperitoneal, intracerebrospinal, subcutaneous, intraarticular, intrasynovial, intrathecal or by oral route. In some cases, intravenous or subcutaneous administration of EQ001 (or other anti-CD6 antibody) is preferred.
[00160] В зависимости от предполагаемого пути введения раскрытые соединения или фармацевтические композиции могут находиться в твердой, полутвердой или жидкой лекарственной форме, такой как, например, инъекционные препараты, таблетки, суппозитории, пилюли, капсулы с замедленным высвобождением, эликсиры, вытяжки, эмульсии, сиропы, порошки, жидкости, суспензии или тому подобное, иногда в однократных дозировках и в соответствии с общепринятой фармацевтической практикой. Точно так же их можно также вводить в форме для внутривенного (в виде болюса, так и инфузия), внутрибрюшинного, подкожного или внутримышечного введения, и все формы применения хорошо известны специалистам в области фармацевтики. Фармацевтические композиции, подходящие для доставки EQ001 (или другого антитела к CD6) (отдельно или, например, в комбинации с другим терапевтическим средством в соответствии с настоящим изобретением), и способы их изготовления будут очевидны для специалистов в данной области техники. Такие композиции и способы их получения можно найти, например, в 19-м издании Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 1995 г.), включенном в данный документ во всей своей полноте.[00160] Depending on the intended route of administration, the disclosed compounds or pharmaceutical compositions may be in solid, semi-solid, or liquid dosage form, such as, for example, injectables, tablets, suppositories, pills, sustained release capsules, elixirs, extracts, emulsions, syrups, powders, liquids, suspensions or the like, sometimes in single dosages and in accordance with accepted pharmaceutical practice. Similarly, they may also be administered in intravenous (both bolus and infusion), intraperitoneal, subcutaneous or intramuscular form, and all forms of administration are well known to those skilled in the pharmaceutical arts. Pharmaceutical compositions suitable for the delivery of EQ001 (or other anti-CD6 antibody) (alone or, for example, in combination with another therapeutic agent in accordance with the present invention), and methods for their manufacture will be obvious to those skilled in the art. Such compositions and methods for their preparation can be found, for example, in the 19th edition of Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 1995), incorporated herein in its entirety.
[00161] Схему дозирования с применением EQ001 (или другого антитела к CD6) выбирают в соответствии с множеством факторов, включая тип, вид, возраст, вес, пол и медицинское состояние пациента; тяжесть состояния, подлежащего лечению; путь введения; функцию почек или печени пациента; и конкретное используемое раскрытое соединение. Врач или ветеринар средней квалификации в данной области техники может легко определить и прописать эффективное количество лекарственного средства, необходимое для предупреждения состояния, противодействия состоянию или остановки прогрессирования состояния.[00161] The dosing regimen using EQ001 (or other anti-CD6 antibody) is selected according to a variety of factors, including the type, species, age, weight, sex, and medical condition of the patient; the severity of the condition being treated; route of administration; the patient's kidney or liver function; and the particular disclosed compound used. A physician or veterinarian of ordinary skill in the art can readily determine and prescribe the effective amount of drug needed to prevent the condition, counteract the condition, or stop the progression of the condition.
[00162] Иллюстративный неограничивающий диапазон терапевтически эффективного количества EQ001 (или другого антитела к CD6), используемый в настоящем изобретении, составляет примерно 0,01-100 мг/кг массы тела субъекта, например приблизительно 0,01-50 мг/кг, например приблизительно 0,01-25 мг/кг. Медицинский работник средней квалификации в данной области техники может легко определить и прописать эффективное количество требуемой фармацевтической композиции. Например, врач может начинать с доз EQ001 (или другого антитела к CD6) на уровнях ниже, чем доза, требуемая для достижения желаемого терапевтического эффекта, и постепенно увеличивать дозировку до тех пор, пока не будет достигнуто необходимого эффекта.[00162] An exemplary, non-limiting range of a therapeutically effective amount of EQ001 (or other anti-CD6 antibody) used in the present invention is about 0.01-100 mg/kg subject body weight, such as about 0.01-50 mg/kg, such as about 0.01-25 mg/kg. A healthcare professional of ordinary skill in the art can easily determine and prescribe the effective amount of the desired pharmaceutical composition. For example, a physician may start with doses of EQ001 (or other anti-CD6 antibody) at levels lower than the dose required to achieve the desired therapeutic effect and gradually increase the dosage until the desired effect is achieved.
[00163] В одном варианте осуществления EQ001 (или другое антитело к CD6) вводят путем инфузии при еженедельной дозировке, составляющей от 1 до 500 мг/кг в расчете массы тела субъекта, например от 20 до 200 мг/кг. Такое введение можно повторять, например от 1 до 8 раз, например от 3 до 5 раз. В качестве альтернативы введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода, составляющего от 2 до 24 часов, например от 2 до 12 часов.[00163] In one embodiment, EQ001 (or another anti-CD6 antibody) is administered by infusion at a weekly dosage of 1 to 500 mg/kg based on the subject's body weight, such as 20 to 200 mg/kg. This introduction can be repeated, for example 1 to 8 times, for example 3 to 5 times. Alternatively, administration may be by continuous infusion over a period of 2 to 24 hours, such as 2 to 12 hours.
[00164] В одном варианте осуществления EQ001 (или другое антитело к CD6) вводят при еженедельной дозировке, составляющей от 0 до 200 мг, до 7 раз, например от 4 до 6 раз. Введение можно осуществлять путем непрерывной инфузии в течение периода, составляющего от 2 до 24 часов, например от 2 до 12 часов. При необходимости такую схему можно повторять один или более раз, например через 6 месяцев или 2 месяца.[00164] In one embodiment, EQ001 (or another anti-CD6 antibody) is administered at a weekly dosage of 0 to 200 mg up to 7 times, eg 4 to 6 times. The introduction can be carried out by continuous infusion over a period of from 2 to 24 hours, for example from 2 to 12 hours. If necessary, such a scheme can be repeated one or more times, for example after 6 months or 2 months.
[00165] В некоторых аспектах этих видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой одно или более средств, с помощью которых можно осуществлять модулирование иммунной системы. В некоторых аспектах этих видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой один или более иммунодепрессантов. В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой один или более бета-агонистов.[00165] In some aspects of these combination therapies, the second active agent is one or more agents that can modulate the immune system. In some aspects of these combination therapies, the second active agent is one or more immunosuppressants. In some aspects of these combination therapies, the second active agent is one or more beta-agonists.
[00166] В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой один или более бета-агонистов кратковременного действия. В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой альбутерол. В некоторых аспектах альбутерол вводят в лекарственной форме, выбранной из порошка для применения в виде аэрозоля, раствора, капсулы и суспензии, полученной из порошка. В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой стероид, например кортикостероид. В некоторых аспектах кортикостероид вводят в лекарственной форме, выбранной из таблетки, капсулы с отсроченным высвобождением, таблетки с пролонгированным высвобождением, капсулы с пролонгированным высвобождением, сиропа, раствора, настойки, суспензии, таблетки с отсроченным высвобождением, жидкости и таблетки для рассасывания.[00166] In some aspects of these combination therapies, the second active agent is one or more short acting beta agonists. In some aspects of these combination therapies, the second active agent is albuterol. In some aspects, albuterol is administered in a dosage form selected from a powder for use as an aerosol, solution, capsule, and suspension prepared from the powder. In some aspects of these combination therapies, the second active agent is a steroid, such as a corticosteroid. In some aspects, the corticosteroid is administered in a dosage form selected from a tablet, a delayed release capsule, an extended release tablet, an extended release capsule, a syrup, a solution, a tincture, a suspension, a delayed release tablet, a liquid, and a lozenge.
[00167] В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство представляет собой ипратропий. В некоторых аспектах ипратропий вводят в лекарственной форме, представляющей собой спрей.[00167] In some aspects of these combination therapies, the second active agent is ipratropium. In some aspects, ipratropium is administered in a spray dosage form.
[00168] В некоторых аспектах таких видов комбинированной терапии второе активное средство предусматривает одно или более средств, выбранных из беклометазона дипропионата; будесонида; флунизолида; флутиказона пропионата; мометазона фуроата; триамцинолона ацетонида; дексаметазона; гидрокортизона; метилпреднизона; преднизолона; преднизона; формотерола фумарата; сальметерола ксинафоата; альбутерола сульфата; изоэтарина гидрохлорида; изопротеренола гидрохлорида; левалбутерола гидрохлорида; пирбутерола ацетата; тербуталина сульфата; ипратропия бромида; монтелукаста натрия; зафирлукаста; зилеутона; окситрифиллина; теофиллина; кромолин-натрия; недокромила натрия; омализумаба; комбинированного лекарственного препарата, содержащего флутиказон и сальметерол; комбинированного лекарственного препарата, содержащего ксинафоат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего будесонид и формотерола фумарат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего флутиказона пропионат и салметерола ксинафоат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего будесонид и формотерола фумарат (ингаляционный стероид плюс бета-2-агонист длительного действия); комбинированного лекарственного препарата, содержащего ипратропия бромид и альбутерола сульфат; или их комбинаций.[00168] In some aspects of such combination therapies, the second active agent comprises one or more agents selected from beclomethasone dipropionate; budesonide; flunisolide; fluticasone propionate; mometasone furoate; triamcinolone acetonide; dexamethasone; hydrocortisone; methylprednisone; prednisolone; prednisone; formoterol fumarate; salmeterol xinafoate; albuterol sulfate; isoetarine hydrochloride; isoproterenol hydrochloride; levalbuterol hydrochloride; pirbuterol acetate; terbutaline sulfate; ipratropium bromide; montelukast sodium; zafirlukasta; zileuton; oxytrifillin; theophylline; cromolyn sodium; nedocromil sodium; omalizumab; a combination drug containing fluticasone and salmeterol; a combination drug containing xinafoate (an inhaled steroid plus a long-acting beta-2 agonist); a combination drug containing budesonide and formoterol fumarate (an inhaled steroid plus a long-acting beta-2 agonist); a combination drug containing fluticasone propionate and salmeterol xinafoate (an inhaled steroid plus a long-acting beta-2 agonist); a combination drug containing budesonide and formoterol fumarate (an inhaled steroid plus a long-acting beta-2 agonist); a combination drug containing ipratropium bromide and albuterol sulfate; or their combinations.
[00169] В некоторых аспектах настоящее изобретение также включает виды комбинированной терапии, предусматривающие введение пациенту антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающей части в комбинации с процедурой, выбранной из интубации, искусственной вентиляции легких, кислородной терапии и их комбинаций. Такие процедуры можно также проводить субъекту в комбинации с любым одним или более из вышеуказанных дополнительных средств, которые являются полезными в видах комбинированной терапии, описанных в данном документе.[00169] In some aspects, the present invention also includes combination therapies comprising administering an anti-CD6 antibody (e.g., EQ001) or an antigen-binding portion thereof to a patient in combination with a procedure selected from intubation, mechanical ventilation, oxygen therapy, and combinations thereof. Such treatments may also be administered to a subject in combination with any one or more of the above additional agents that are useful in the combination therapies described herein.
[00170] В определенных аспектах способы, раскрытые в данном документе, которые могут включать введение антитела к CD6 (например, EQ001) или его антигенсвязывающей части субъекту, могут обеспечивать лечение одного или более симптомов, связанных с астмой.[00170] In certain aspects, the methods disclosed herein, which may include administering an anti-CD6 antibody (eg, EQ001) or an antigen-binding portion thereof to a subject, may provide treatment for one or more symptoms associated with asthma.
[00171] Оптимальные дозировки и схемы дозирования для осуществления введения могут легко быть определены специалистами в данной области техники и будут варьироваться в зависимости от фармакодинамических характеристик конкретного средства, его времени и пути введения, эффективности препарата и развития болезненного состояния (включая природу и выраженность симптомов заболевания). Кроме того, факторы, связанные с конкретным пациентом, подвергающимся лечению, включая пол пациента, возраст, вес, пищевой рацион, физическую активность и сопутствующие заболевания, приведут к необходимости корректировки дозировок и/или схем.[00171] Optimal dosages and dosing schedules for administration can readily be determined by those skilled in the art and will vary depending on the pharmacodynamic characteristics of the particular agent, its timing and route of administration, the efficacy of the drug, and the progression of the disease state (including the nature and severity of disease symptoms). ). In addition, factors associated with the particular patient being treated, including patient sex, age, weight, diet, physical activity, and comorbidities, will result in the need for adjustments in dosages and/or regimens.
[00172] Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, патентные заявки PCT, публикации патентных заявок PCT, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и публикации непатентных документов, упомянутые в данном описании или перечисленные в любом информационном листке заявки, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Из вышеизложенного следует понимать, что, хотя конкретные варианты осуществления изобретения были описаны в данном документе с целью иллюстрации, можно осуществлять различные модификации без отклонения от сущности и границ объема настоящего изобретения.[00172] All U.S. patents, U.S. Patent Application Publications, U.S. Patent Applications, PCT Patent Applications, PCT Patent Application Publications, foreign patents, foreign patent applications, and non-patent document publications mentioned in this specification or listed in any application information sheet are included in this document by reference in its entirety. From the foregoing, it should be understood that although specific embodiments of the invention have been described herein for the purpose of illustration, various modifications can be made without deviating from the spirit and scope of the present invention.
ПРИМЕРЫEXAMPLES
ПРИМЕР 1EXAMPLE 1
Экспрессия CD6 значительно повышена у пациентов-людей с фатальной астмойCD6 expression is significantly elevated in human patients with fatal asthma
[00173] Краткое описание результатов. В ткани легких, взятой у пациентов с фатальной астмой, наблюдали высокий уровень инфильтрации клеток CD6+ в собственном слое, в котором происходит сверхэкспрессиия ALCAM, в этой области по сравнению с контролями.[00173] Brief description of the results. In lung tissue taken from patients with fatal asthma, a high level of infiltration of CD6 + cells was observed in its own layer, in which ALCAM is overexpressed, in this area compared to controls.
[00174] Легкие получали в свежем виде либо от пациентов с фатальной астмой, либо от пациентов, не страдающих астмой. Образцы тканей фиксировали и затем окрашивали для выявления экспрессии CD6, ALCAM с помощью иммунофлуоресценции. Экспрессия ALCAM в собственном слое была повышенной у пациентов с фатальной астмой; в то время как экспрессия ALCAM в собственном слое контрольной группы, не страдающей астмой, отсутствовала. В таких легких область окрашивания ALCAM локализовалась вместе с высокими уровнями инфильтрирующих клеток CD6+ (фиг. 2). Это свидетельствует в пользу того, что тяжелая астма связана с инфильтрацией Т-клетками CD6+, и что экспрессия ALCAM может участвовать в миграции/инфильтрации клеток CD6+ в легкие в ходе тяжелой астмы/фатальной астмы. Напротив, в предыдущих исследованиях на моделях аллергической астмы продемонстрировали, что уровни ALCAM являются сниженными в тканях легких у животных, подвергшихся воздействию аллергенов, вследствие увеличения уровня шеддинга ALCAM, опосредованного металлопротеазой.[00174] Lungs were obtained fresh from either fatal asthma patients or non-asthma patients. Tissue samples were fixed and then stained to detect CD6, ALCAM expression by immunofluorescence. ALCAM expression in its own layer was increased in patients with fatal asthma; while ALCAM expression in its own layer of the non-asthma control group was absent. In such lungs, the area of ALCAM staining was localized along with high levels of infiltrating CD6 + cells (Fig. 2). This suggests that severe asthma is associated with CD6 + T cell infiltration and that ALCAM expression may be involved in CD6 + cell migration/infiltration into the lungs during severe asthma/fatal asthma. In contrast, previous studies in models of allergic asthma have shown that ALCAM levels are reduced in lung tissue in allergen-exposed animals due to an increase in metalloprotease-mediated ALCAM shedding.
ПРИМЕР 2EXAMPLE 2
Экспрессия CD6 в значительной степени повышена у пациентов-людей с фатальной астмойCD6 expression is significantly elevated in human patients with fatal asthma
[00175] Краткое описание результатов. Анализ de novo общедоступных наборов данных RNASeq подтверждает, что у пациентов с тяжелой астмой экспрессируются значительно более высокие уровни CD6 по сравнению с пациентами с умеренной астмой и не страдающих астмой.[00175] Brief description of the results. De novo analysis of publicly available RNASeq datasets confirms that patients with severe asthma express significantly higher levels of CD6 compared with moderate and non-asthma patients.
[00176] Данные по РНК были получены из образцов клеточного осадка, собранных с помощью лаважа бронхов, в рамках двух продолжительных проспективных клинических исследований:[00176] RNA data were obtained from cell pellet samples collected by bronchial lavage in two long-term prospective clinical studies:
•исследования BOBCAT (Arron et al., Eur Respir J. 2014 Feb;43(2):627-9)• BOBCAT studies (Arron et al., Eur Respir J. 2014 Feb;43(2):627-9)
• исследования MAST (Simpson et al., Nat Immunol. 2014 Dec;15(12):1162-70)• MAST studies (Simpson et al., Nat Immunol. 2014 Dec;15(12):1162-70)
[00177] Транскриптом этих образцов определяли с помощью RNASeq, и набор данных, состоящий из количества транскрипционных ридов, которое отображается для всех отдельных генов для каждого образца, предоставили в общедоступной базе данных (Sun et al., Sci Signal. 2015 Dec 1;8(405)).[00177] The transcriptome of these samples was determined using RNASeq, and a data set consisting of the number of transcription reads that is displayed for all individual genes for each sample was made available in a public database (Sun et al., Sci Signal. 2015
[00178] С применением биоинформатики авторы настоящего изобретения собрали литературные данные для создания сравнения экспрессии CD6 в контроле и у пациентов с умеренной и тяжелой астмой, и анализ авторов настоящего изобретения продемонстрировал значительные различия в уровнях экспрессии CD6, при этом пациенты с тяжелой астмой экспрессировали CD6 на значительно более высоких уровнях (фиг. 3B). Аналогичные, хотя и менее выраженные увеличения экспрессии CD4 также наблюдали у пациентов с тяжелой астмой, у которых CD4 экспрессировался на значительно более высоких уровнях, чем у пациентов с умеренной астмой и здоровых пациентов (фиг. 3A). Сопутствующее увеличение указывает на присутствие повышенного количества Т-клеток CD6+ в легких у пациентов с тяжелой астмой. Таким образом, эти данные свидетельствуют о том, что для пациентов с тяжелой астмой характерно повышенное количество Т-клеток CD6+ в легких вследствие повышенной инфильтрации Т-клетками.[00178] Using bioinformatics, the present inventors collected literature data to create a comparison of CD6 expression in controls and patients with moderate and severe asthma, and the present inventors' analysis showed significant differences in CD6 expression levels, with patients with severe asthma expressing CD6 on significantly higher levels (Fig. 3B). Similar, although less pronounced, increases in CD4 expression were also observed in patients with severe asthma, in whom CD4 was expressed at significantly higher levels than in patients with moderate asthma and healthy patients (Fig. 3A). The concomitant increase indicates the presence of elevated CD6 + T cells in the lungs of patients with severe asthma. Thus, these data suggest that patients with severe asthma are characterized by an increased number of CD6 + T cells in the lungs due to increased T cell infiltration.
[00179] Анализ, сравнивающий экспрессию маркеров Th17 и цитокинов в контроле и у пациентов с умеренной и тяжелой астмой, продемонстрировал значительные различия в уровнях экспрессии CCR6 (фиг. 3C), CCR4 (фиг. 3D), KLRB1 (фиг. 3E), IL-17A (фиг. 3F) и IL-17F (фиг. 3G), что указывает на повышенное содержание клеток Th17 у пациентов с тяжелой астмой, а также на связь между клетками CD6 и Th17.[00179] An analysis comparing the expression of Th17 markers and cytokines in controls and patients with moderate to severe asthma demonstrated significant differences in expression levels of CCR6 (Fig. 3C), CCR4 (Fig. 3D), KLRB1 (Fig. 3E), IL -17A (FIG. 3F) and IL-17F (FIG. 3G), indicating increased levels of Th17 cells in patients with severe asthma, as well as a link between CD6 and Th17 cells.
[00180] При использовании того же набора данных объективный кластерный анализ, проведенный по всем пациентам с астмой, независимо от типа астмы, продемонстрировал, что подгруппа пациентов с тяжелой астмой имеет как высокий уровень CD6, так и аналогичный профиль экспрессии генов, что позволяет предположить, что отличающийся профиль пациента может быть связан с высоким уровнем экспрессии CD6 (фиг. 4A и фиг. 4B).[00180] Using the same data set, an objective cluster analysis performed on all patients with asthma, regardless of the type of asthma, demonstrated that a subset of patients with severe asthma had both high CD6 levels and a similar gene expression profile, suggesting that a different patient profile may be associated with high levels of CD6 expression (Fig. 4A and Fig. 4B).
[00181] Авторам настоящего изобретения не известен какой-либо предшествующий анализ, в котором изучали экспрессию CD6 в этом наборе данных, или какие-либо предыдущие сообщения о том, что экспрессия CD6 является увеличенной при тяжелой астме. Эти данные демонстрируют, что у пациентов с тяжелой астмой, которые плохо поддаются лечению стероидами, экспрессия CD6 в легких является высокой. Таким образом, эти данные впервые представляют доказательства в поддержку применения ингибирования CD6 для лечения тяжелой астмы (например, вызванной Т-клетками Th1 / Th17).[00181] The authors of the present invention are not aware of any previous analysis that examined CD6 expression in this data set, or any previous reports that CD6 expression is increased in severe asthma. These data demonstrate that in patients with severe asthma who do not respond well to steroid treatment, CD6 expression in the lungs is high. Thus, these data provide evidence for the first time to support the use of CD6 inhibition for the treatment of severe asthma (eg, caused by Th1/Th17 T cells).
[00182] Примечательно, что аллергическая астма также включает Т-клеточный компонент, хотя при этом характеризуется ответом, опосредованным Th2, который хорошо поддается лечению стероидами. Таким образом, авторы настоящего изобретения стремились определить, может ли CD6 являться целесообразной мишенью в лечении, эффективном в отношении как тяжелой, так и аллергической астмы, поскольку с помощью этого можно было бы осуществить следующее: (1) свести к минимуму проблемы с соблюдением пациентом режима лечения из-за неблагоприятных побочных эффектов длительного применения стероидов; (2) обеспечить удобную монотерапию для всех форм астмы; и (3) обеспечить терапию, которую пациент может продолжать применять даже при изменении у него эндотипа астмы (например, Th2 на Th2 / Th17 или Th1 / Th17).[00182] Notably, allergic asthma also includes a T-cell component, although it is characterized by a Th2-mediated response that responds well to steroid treatment. Thus, the authors of the present invention sought to determine whether CD6 could be a useful target in the treatment, effective in both severe and allergic asthma, since this could do the following: (1) minimize problems with patient compliance treatment due to adverse side effects of long-term steroid use; (2) to provide convenient monotherapy for all forms of asthma; and (3) to provide therapy that the patient can continue to use even if their asthma endotype changes (eg, Th2 to Th2/Th17 or Th1/Th17).
ПРИМЕР 3EXAMPLE 3
Ингибирование CD6 представляет собой эффективное лечение аллергической и тяжелой астмыCD6 inhibition is an effective treatment for allergic and severe asthma
[00183] Краткое описание результатов. На модели аллергической астмы на мышах было продемонстрировано, что блокада CD6 является эффективным иммуномодулятором при заболевании, опосредованном Th2.[00183] Brief description of the results. In a murine model of allergic asthma, CD6 blockade has been shown to be an effective immunomodulator in Th2-mediated disease.
[00184] На фиг. 5А и 5В показаны экспериментальные группы и протокол соответственно, применяемые в этом эксперименте по аллергической астме. Вкратце, аллергическую астму вызывали путем сенсибилизации в отношении овальбумина (OVA) посредством вакцинации с помощью OVA/квасцов в дни 0 и 14, что индуцирует иммунный ответ к OVA, обусловленный Th2. В день 23, 25 и 27 мышей обрабатывали антителом к Sc-домену 1 CD6 мыши (mCD6D1), заменителем EQ001 для мыши, которое связывается с доменом 1 CD6 с характеристиками, аналогичными таковым итолизумаба, антитела к CD6 человека. Впоследствии сенсибилизированных мышей подвергают интраназальной стимуляции с помощью OVA в дни 25-27 с последующим прекращением в день 28 для оценки клеток и цитокинов в легких.[00184] FIG. 5A and 5B show the experimental groups and protocol, respectively, used in this allergic asthma experiment. Briefly, allergic asthma was induced by ovalbumin (OVA) sensitization via OVA/alum vaccination on
[00185] Блокада CD6 во время стимуляции антигеном привела к снижению уровней Th2-продуцируемых цитокинов IL-4, IL-5 и IL-13, в жидкости, полученной с помощью лаважа бронхов (BALF) (фиг. 5C), сопровождающемуся умеренным уменьшением количества клеток легких, что свидетельствует в пользу ингибирующего действия блокады CD6 в отношении Th2-ответов.[00185] Blockade of CD6 during antigen challenge resulted in a decrease in levels of Th2-produced cytokines IL-4, IL-5, and IL-13 in bronchial lavage (BALF) fluid (FIG. 5C), accompanied by a modest decrease in lung cells, which indicates in favor of the inhibitory effect of CD6 blockade on Th2 responses.
[00186] Для дополнительного подтверждения того, что блокада CD6 может влиять на Th2-ответы, авторы настоящего изобретения проверили ее влияние на классической Th2-модели вакцинации с помощью OVA. На фиг. 6A и 6B показаны экспериментальные группы и протокол соответственно, применяемые в этом эксперименте. Вкратце, мышей вакцинировали с помощью OVA / квасцов в дни 0 и 14 и дважды в неделю обрабатывали антителом к CD6, начиная со дня -1 и до дня 16. В день 19 мышей умерщвляли для исследования ответа в виде антител к OVA. Профилактическая блокада CD6 обеспечивала ингибирование продуцирования OVA-специфического IgE, демонстрируя эффект пути CD6 в отношении Th2-ответов (фиг. 6C).[00186] To further confirm that CD6 blockade can influence Th2 responses, the authors of the present invention tested its effect on the classical Th2 vaccination model using OVA. In FIG. 6A and 6B show the experimental groups and protocol, respectively, used in this experiment. Briefly, mice were vaccinated with OVA/alum on
[00187] Таким образом, взятые вместе эти данные демонстрируют, что блокада CD6 представляет собой эффективное лечение, как при остром заболевании, так и с профилактической целью, от аллергической астмы, опосредованной Th2. И, взятые вместе данные, представленные в данном документе, в сочетании с известной способностью антител к CD6, таких как EQ001, ингибировать активацию и миграцию Т-клеток типа Th1/Th17, подтверждают, что с помощью ингибирования CD6 (например, с помощью EQ001) можно обеспечивать лечение как тяжелой, так и аллергической астмы.[00187] Thus, taken together, these data demonstrate that CD6 blockade is an effective treatment, both acutely and prophylactically, for Th2-mediated allergic asthma. And, taken together, the data presented herein, combined with the known ability of anti-CD6 antibodies such as EQ001 to inhibit the activation and migration of Th1/Th17 type T cells, confirms that by inhibiting CD6 (e.g., by EQ001) both severe and allergic asthma can be treated.
ПРИМЕР 4EXAMPLE 4
Эффективность антитела к CD6 в модели тяжелой астмыEfficacy of Anti-CD6 Antibody in a Model of Severe Asthma
[00188] Мышей подвергают сенсибилизации с помощью 25 мкг HDM интраназально в дни 1, 3 и 5. Мышей оставляли в покое на 5 дней и затем подвергали 3 сериям стимуляции антигеном, включающим по 3 последовательных стимуляции с помощью 25 мкг HDM с 4-дневным периодом покоя между сериями стимуляции антигеном. 25 мкг HDM только в следующих 2 процедурах стимуляции антигеном. Положительный контроль лечения, представляющий собой дексаметазон (Dex) с концентрацией, составляющей 4 мг/кг, или испытуемый образец антитела к CD6 вводят внутрибрюшинно, начиная с первого дня проведения стимуляции антигеном, а затем повторяют каждый третий день в случае Dex и через день в случае антитела к CD6.[00188] Mice are sensitized with 25 μg HDM intranasally on
ПРИМЕР 5EXAMPLE 5
Эффективность антитела к CD6 в моделях астмы Efficacy of anti-CD6 antibody in asthma models
[00189] В связи со способностью блокады CD6 оказывать направленное воздействие на несколько подтипов Т-клеток, ожидается, что для ингибирования CD6 также будет показана эффективность в отношении ряда моделей астмы, включая модели астмы, индуцированной HDM, индуцированной HDM +LPS, индуцированной аллергенами тараканов и индуцированной аллергенами Alternaria alternata, а также для моделей астмы, полученных на мышах STAT6 -/-, которые обеспечивают фенотип Th1/Th17. Соответственно, для испытания доз антитела к CD6 в диапазоне от 600 мкг до 10 мкг применяли несколько моделей (таблица 3).[00189] Due to the ability of CD6 blockade to target several T cell subtypes, CD6 inhibition is also expected to be effective in a number of models of asthma, including HDM-induced asthma, HDM+LPS-induced asthma, cockroach allergen-induced asthma and allergen-induced Alternaria alternata, as well as for STAT6 -/- mouse models of asthma that provide a Th1/Th17 phenotype. Accordingly, several models were used to test anti-CD6 antibody doses ranging from 600 μg to 10 μg (Table 3).
Таблица 3. Дополнительные мышиные моделиTable 3. Additional mouse models
[00190] Результаты этих экспериментов продемонстрируют, что ингибирование CD6 является одинаково эффективным в отношении ингибирования Th1 / Th17-; как Th2-, так и T2/Th17-формы астмы. Таким образом, настоящее изобретение способствует разработке антитела к CD6 для лечения тяжелой и аллергической астмы.[00190] The results of these experiments will demonstrate that CD6 inhibition is equally effective in inhibiting Th1/Th17-; both Th2 and T2/Th17 asthma. Thus, the present invention facilitates the development of an anti-CD6 antibody for the treatment of severe and allergic asthma.
ПРИМЕР 6EXAMPLE 6
Анализ образцов тканейAnalysis of tissue samples
[00191] Образцы тканей собирают после выполнения протоколов, представленных в примерах 4 и 5, и анализируют в соответствии со следующими процедурами.[00191] Tissue samples were collected following the protocols shown in Examples 4 and 5 and analyzed according to the following procedures.
[00192] Значения веса тела и клинические показатели всех мышей собирают каждый день в соответствии с утвержденным протоколом Комитета по содержанию и использованию лабораторных животных (IACUC).[00192] The body weights and clinical values of all mice are collected each day in accordance with an approved protocol of the Committee for the Care and Use of Laboratory Animals (IACUC).
[00193] Через 24 часа после последней стимуляции аллергеном мышей анестезируют и проводят бронхоальвеолярный лаваж (BAL). Левый бронх у каждой мыши перевязывают, а правую долю промывают с помощью 0,7 мл стерильного PBS для получения BAL-жидкости. Общее количество клеток, полученных с помощью BAL, определяют с помощью окрашивания трипановым синим и стандартной световой микроскопии, и из 75000 клеток из BAL-жидкости, посредством центрифугирования клеток получают мазок на чистых предметных стеклах для дифференциального подсчета клеток с помощью окрашивания по Гимзе.[00193] 24 hours after the last allergen challenge, mice are anesthetized and bronchoalveolar lavage (BAL) is performed. The left bronchus of each mouse is ligated and the right lobe is lavaged with 0.7 ml sterile PBS to obtain BAL fluid. The total number of BAL-obtained cells is determined by trypan blue staining and standard light microscopy, and 75,000 cells from BAL fluid are smeared on clean glass slides by cell centrifugation for differential cell count by Giemsa stain.
[00194] Жидкость, получаемую с помощью BAL, центрифугируют для отделения клеток от надосадочной жидкости. Надосадочную жидкость анализируют с помощью стандартных анализов на цитокины для идентификации специфических клеточных маркеров и/или цитокинов, в то время как клетки анализируют с помощью стандартных способов проточной цитометрии. Подвергнутые лаважу легкие помещают в фиксирующий раствор на 48 часов, а затем переносят в 70% этанол вплоть до заливки парафином для периодического окрашивания реактивом Шиффа (PAS), окрашивания гематоксилином и эозином и/или иммуногистохимического или иммунофлуоресцентного окрашивания маркеров Т-клеток (таких как CD3, CD4, CD8), CD6, ALCAM и других известных или потенциальных лигандов CD6.[00194] The BAL-derived fluid is centrifuged to separate the cells from the supernatant. The supernatant is analyzed using standard cytokine assays to identify specific cellular markers and/or cytokines, while cells are analyzed using standard flow cytometry methods. Lavaged lungs are placed in fixative solution for 48 hours and then transferred to 70% ethanol up to paraffin embedding for periodic Schiff staining (PAS), hematoxylin and eosin staining, and/or immunohistochemical or immunofluorescent staining for T cell markers (such as CD3 , CD4, CD8), CD6, ALCAM and other known or potential CD6 ligands.
[00195] Различные варианты осуществления, описанные выше, можно объединять с получением дополнительных вариантов осуществления. Все патенты США, публикации патентных заявок США, патентные заявки США, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и не являющиеся патентными публикации, упомянутые в данном описании и/или перечисленные в информационном листке заявки, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Аспекты вариантов осуществления можно модифицировать, если это необходимо для применения концепций различных патентов, заявок и публикаций, с получением дополнительных вариантов осуществления.[00195] The various embodiments described above can be combined to form additional embodiments. All U.S. patents, U.S. patent application publications, U.S. patent applications, foreign patents, foreign patent applications, and non-patent publications mentioned in this specification and/or listed in the application information sheet are incorporated herein by reference in their entirety. Aspects of the embodiments may be modified as needed to apply the concepts of various patents, applications, and publications to provide additional embodiments.
[00196] Эти и другие изменения можно вносить в варианты осуществления в свете приведенного выше подробного описания. В целом, в следующей формуле изобретения используемые термины не должны толковаться как ограничивающие формулу изобретения конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в описании и формуле изобретения, но должны толковаться как включающие все возможные варианты осуществления вместе с полным объемом эквивалентов, на которые предоставляет право данная формула изобретения. Соответственно, настоящая формула изобретения не ограничивается данным раскрытием.[00196] These and other changes can be made to the embodiments in light of the above detailed description. In general, in the following claims, the terms used should not be construed as limiting the claims to the specific embodiments disclosed in the specification and claims, but should be construed as including all possible embodiments together with the full scope of equivalents to which the claims are entitled. Accordingly, the present claims are not limited to this disclosure.
--->--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ SEQUENCE LIST
<110> Экуиллиум, Инк.<110> Equillium, Inc.
Коннелли, Стивен Connelly, Stephen
Нг, Шери Ng, Sheri
<120> КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ТЯЖЕЛОЙ АСТМЫ<120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF SEVERE ASTHMA
<130> EQIL-006/01WO 330372-2026<130> EQIL-006/01WO 330372-2026
<150> US 62/636092<150> US 62/636092
<151> 2018-02-27<151> 2018-02-27
<160> 10 <160> 10
<170> PatentIn версия 3.5<170> PatentIn version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 119<211> 119
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность VH T1h<223> Lab Obtained - Humanized VH T1h Sequence
<400> 1<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr
20 25 30 20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45 35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Ala Arg Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110 100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 2<210> 2
<211> 107<211> 107
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность VL T1h<223> Lab Obtained - Humanized VL T1h Sequence
<400> 2<400> 2
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr
20 25 30 20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45 35 40 45
Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80 65 70 75 80
Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe
85 90 95 85 90 95
Thr Leu Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr Leu Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 100 105
<210> 3<210> 3
<211> 357<211> 357
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность<223> Lab Obtained - Humanized Sequence
нуклеиновой кислоты VH T1h nucleic acid VH T1h
<400> 3<400> 3
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caagtttagt agatatgcca tgtcttgggt tcgccaggct 120tcctgtgcag cctctggatt caagtttagt agatatgcca tgtcttgggt tcgccaggct 120
ccggggaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtagtg gtggtagtta catctactat 180ccggggaaga ggctggagtg ggtcgcaacc attagtagtg gtggtagtta catctactat 180
ccagacagtg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca atgtcaagaa caccctgtat 240ccagacagtg tgaagggtcg attcaccatc tccagagaca atgtcaagaa caccctgtat 240
ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacgagat 300ctgcaaatga gcagtctgag gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagacgagat 300
tacgacctgg actactttga ctcctggggc caaggcaccc ttgtcaccgt ctcctca 357tacgacctgg actactttga ctcctggggc caaggcaccc ttgtcaccgt ctcctca 357
<210> 4<210> 4
<211> 321<211> 321
<212> ДНК<212> DNA
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная последовательность<223> Lab Obtained - Humanized Sequence
нуклеиновой кислоты VL T1h nucleic acid VL T1h
<400> 4<400> 4
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat cggtgggaga cagagtcact 60gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat cggtgggaga cagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtcg ggacattaga agctatttaa cctggtacca gcagaaacca 120atcacttgca aggcgagtcg ggacattaga agctatttaa cctggtacca gcagaaacca 120
gggaaagctc ctaagaccct gatctattat gcaacaagct tggcagatgg ggtcccgtcg 180gggaaagctc ctaagaccct gatctattat gcaacaagct tggcagatgg ggtcccgtcg 180
agattcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggagtct 240agattcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggagtct 240
gacgatacag caacttacta ctgtctacaa catggtgaga gtccattcac gctcggctcg 300gacgatacag caacttacta ctgtctacaa catggtgaga gtccattcac gctcggctcg 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 5<210> 5
<211> 10<211> 10
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная CDR1 VH T1h<223> Lab Obtained - Humanized CDR1 VH T1h
<400> 5<400> 5
Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser Gly Phe Lys Phe Ser Arg Tyr Ala Met Ser
1 5 10 1 5 10
<210> 6<210> 6
<211> 17<211> 17
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная CDR2 VH T1h<223> Lab Obtained - Humanized CDR2 VH T1h
<400> 6<400> 6
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 7<210> 7
<211> 10<211> 10
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная CDR3 VH T1h<223> Lab Obtained - Humanized CDR3 VH T1h
<400> 7<400> 7
Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser Arg Asp Tyr Asp Leu Asp Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 1 5 10
<210> 8<210> 8
<211> 11<211> 11
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная CDR1 VL T1h<223> Lab Obtained - Humanized CDR1 VL T1h
<400> 8<400> 8
Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr Leu Thr Lys Ala Ser Arg Asp Ile Arg Ser Tyr Leu Thr
1 5 10 1 5 10
<210> 9<210> 9
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная CDR2 VL T1h<223> Lab Obtained - Humanized CDR2 VL T1h
<400> 9<400> 9
Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5 15
<210> 10<210> 10
<211> 7<211> 7
<212> БЕЛОК<212> PROTEIN
<213> Искусственная последовательность<213> Artificial sequence
<220><220>
<223> Получена в лаборатории - гуманизированная CDR3 VL T1h<223> Lab Obtained - Humanized CDR3 VL T1h
<400> 10<400> 10
Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Leu Gln His Gly Glu Ser Pro
1 5 15
<---<---
Claims (2)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862636092P | 2018-02-27 | 2018-02-27 | |
| US62/636,092 | 2018-02-27 | ||
| PCT/US2019/019872 WO2019169015A1 (en) | 2018-02-27 | 2019-02-27 | Anti cd6 antibodies for treating severe asthma |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020130563A RU2020130563A (en) | 2022-03-28 |
| RU2020130563A3 RU2020130563A3 (en) | 2022-04-01 |
| RU2796586C2 true RU2796586C2 (en) | 2023-05-25 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2472526C2 (en) * | 2006-12-26 | 2013-01-20 | Сентро Де Инмунология Молекулар | Pharmaceutical composition containing ahtm-cd6 monoclonal antibody, applicable for diagnosing and treating rheumatoid arthritis |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2472526C2 (en) * | 2006-12-26 | 2013-01-20 | Сентро Де Инмунология Молекулар | Pharmaceutical composition containing ahtm-cd6 monoclonal antibody, applicable for diagnosing and treating rheumatoid arthritis |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| L. COSMI et al.: "Th 17 cells: new players in asthma pathogenesis : T lymphocytes and asthma phenotypes", ALLERGY, vol. 66, no. 8, 06.03.2011. * |
| ФЕДОСЕЕВ Г.Б. и др. "В поисках истины: что такое бронхиальная астма?", Пульмонология. 2015; 25 (1). PATRICIA HERNÁNDEZ et al.: "Therapeutic Targeting of CD6 in Autoimmune Diseases: A Review of Cuban Clinical Studies with the Antibodies I0R-T1 and Itolizumab", CURRENT DRUG TARGETS, vol. 17, 01.2016. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102645242B1 (en) | Methods of treating inflammatory diseases | |
| KR102386304B1 (en) | Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist | |
| US10851158B2 (en) | Biomarkers related to interleukin-33 (IL-33)-mediated diseases and uses thereof | |
| US20210380711A1 (en) | Anti cd6 antibodies for treating severe asthma | |
| JP7357120B2 (en) | Anti-CD40 antibodies for use in the treatment of Sjögren's syndrome | |
| JP2021500916A (en) | Anti-TIM-3 antibody and its use | |
| TW201520226A (en) | Pan-ELR<SP>+</SP> CXC chemokine antibodies | |
| JP2020536495A (en) | Anti-LAG-3 antibody and its use | |
| AU2017312049A1 (en) | Methods of treating Crohn's Disease with an anti-NKG2D antibody | |
| CN111971307A (en) | anti-CD 40 antibodies for use in the prevention of transplant rejection | |
| CA2874918A1 (en) | Tlr3 binding agents | |
| RU2796586C2 (en) | Antibodies to cd6 for the treatment of severe asthma | |
| RU2801531C2 (en) | Methods of treatment or prevention of asthma through administration of il-4r antagonist | |
| KR20230123477A (en) | Methods for treating or preventing acute respiratory distress syndrome | |
| TW202302642A (en) | Anti-cd38 antibodies for use in the treatment of antibody-mediated transplant rejection | |
| KR20240049304A (en) | Pharmaceutical compositions containing fusion proteins | |
| TWI739625B (en) | Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist | |
| AU2021358662A1 (en) | CD1a ANTIBODIES AND USES THEREOF | |
| CN112672759A (en) | Anti-tumor use of anti-programmed death ligand-1 (PD-L1) antibodies | |
| NZ794842A (en) | Methods of treating inflammatory conditions | |
| EA040089B1 (en) | BIOMARKERS ASSOCIATED WITH INTERLEUKIN-33 (IL-33) DISEASES AND THEIR USE |