RU2794988C1 - Composition for stimulating hair growth and preventing hair loss - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology.

SUBSTANCE: invention relates to peptide hair growth stimulators, and can be used in cosmetology as part of a composition stimulating hair growth.

EFFECT: use of peptide fragments from Wnt protein acetylated at the N-terminus in the composition, either alone or in combination with polydeoxyribonucleotide, provides an increase in the secretion of beta-catenin and the growth of keratinocytes, fibroblasts and dermal papilla cells being the cells that form hair, by activating cells and activating a signal transduction pathway to activate the hair growth stimulation signaling system, thereby stimulating hair growth.

11 cl, 8 dwg, 1 tbl, 6 ex

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННУЮ ЗАЯВКУCROSS-REFERENCE TO RELATED APPLICATION

Данная заявка испрашивает приоритет заявки на патент Кореи No. 10-2019-0039708, поданной в Корейское ведомство интеллектуальной собственности 04.04.2019. полное содержание которой включено сюда посредством ссылки.This application claims the priority of Korean Patent Application No. 10-2019-0039708 filed with the Korean Intellectual Property Office on 04/04/2019. the entire content of which is incorporated here by reference.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯFIELD OF THE INVENTION

1. Область изобретения1. Scope of invention

Настоящее изобретение относится к композиции для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащей новый пептид, полученный из белка Wnt, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.The present invention relates to a composition for preventing hair loss or promoting hair growth, containing a novel peptide derived from Wnt protein, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof as an active ingredient.

2. Уровень техники2. State of the art

Волос - это твердое конусообразное волокно, состоящее из плотно соединенных и кератинизированных эпителиальных клеток, и примерно от 100000 до 150000 волос образуется в волосяных фолликулах черепа, и было известно, что число волосяных фолликулов определено при рождении, и они не образуются дополнительно после рождения. Каждый волос представлен в определенной фазе цикла: анаген, на которой волос растет; катаген, на которой его рост останавливается и волосяная луковица уменьшается; и телоген, на которой дермальная папилла начинает функционировать или формировать новый волос, что таким образом приводит к выпадению старого волоса, и волос растет и выпадает вследствие повторения этого цикла. Этот цикл повторяется с периодичностью от трех до шести лет, варьируя от 3-5 лет у мужчин и 4-6 лет у женщин. Известно, что в норме в сутки выпадает в среднем 50-70 волос, и волосы в фазах анагена, катагена и телогена составляют примерно 88%, 1% и 11% от общего количества волос, соответственно.Hair is a hard, cone-shaped fiber composed of tightly connected and keratinized epithelial cells, and approximately 100,000 to 150,000 hairs are formed in the hair follicles of the skull, and it was known that the number of hair follicles is determined at birth, and they are not formed additionally after birth. Each hair is presented in a certain phase of the cycle: anagen, on which the hair grows; catagen, on which its growth stops and the hair follicle decreases; and telogen, on which the dermal papilla begins to function or form a new hair, thus causing the old hair to fall out, and the hair grows and falls out due to the repetition of this cycle. This cycle repeats at intervals of three to six years, varying from 3-5 years for men and 4-6 years for women. It is known that normally 50-70 hairs fall out per day, and hairs in the anagen, catagen and telogen phases account for approximately 88%, 1% and 11% of the total amount of hair, respectively.

Термин «алопеция» относится к симптому, при котором по меньшей мере 100 волос выпадает в сутки, число волос в фазе анагена уменьшается, и число волос в фазах катагена и телогена увеличивается. По мере прогрессирования выпадения волос доля волос в фазе телогена быстро увеличивается, и доля волос в фазе анагена уменьшается соответственно. Выпадение волос обычно может включать наследственную андрогенную алопецию (облысение), гнездную алопецию, стригущий лишай, связанный с грибковыми инфекциями, телогеновую алопецию, трихотилломанию, нарушение роста волос и им подобное. Чаще всего выпадение волос включает облысение (алопеция по мужскому типу), алопецию по женскому типу, гнездную алопецию и телогеновую алопецию и так далее.The term "alopecia" refers to a symptom in which at least 100 hairs fall out per day, the number of hairs in the anagen phase decreases, and the number of hairs in the catagen and telogen phases increases. As hair loss progresses, the proportion of hair in the telogen phase rapidly increases and the proportion of hair in the anagen phase decreases accordingly. Hair loss can typically include hereditary androgenetic alopecia (baldness), alopecia areata, ringworm associated with fungal infections, telogen effluvium, trichotillomania, hair growth disorder, and the like. Most commonly, hair loss includes baldness (male pattern alopecia), female pattern alopecia, alopecia areata and telogen effluvium and so on.

Причины выпадения волос различны. Генетические факторы и мужские гормоны, андрогены, считают важными факторами облысения, и некоторые алопеции по женскому типу рассматривают как вызванные такой же причиной как и алопеции по мужскому типу, но есть различия в клинической картине. Считают, что гнездная алопеция вызвана аутоиммунными заболеваниями. Телогеновая алопеция представляет собой временную потерю волос, которая происходит после серьезного физического или психологического напряжения, такого как эндокринные заболевания, недостаток питательных веществ, прием лекарственных препаратов, роды, лихорадка и хирургическое вмешательство, и происходит путем выпадения волос вследствие перехода в фазу телогена части волос, которые не прошли стадию роста.The causes of hair loss are different. Genetic factors and male hormones, androgens, are considered important factors in baldness, and some female pattern alopecias are considered to have the same cause as male pattern alopecias, but there are differences in the clinical presentation. It is believed that alopecia areata is caused by autoimmune diseases. Telogen effluvium is a temporary hair loss that occurs after severe physical or psychological stress, such as endocrine diseases, nutritional deficiencies, medications, childbirth, fever, and surgery, and occurs by hair loss due to the transition of a part of the hair to the telogen phase, who have not gone through the growth stage.

В настоящее время есть только два одобренных FDA продукта для лечения выпадения волос: Финастерид и Миноксидил. Финастерид, который представляет собой средство от алопеции по мужскому типу, ингибирует выпадение волос путем использования механизма ингибирования 5α-редуктазы, фермента, который превращает мужские гормоны в дигидротестостерон (DHT), фактор, индуцирующий выпадение волос, в качестве агента для лечения выпадения волос у мужчин. Миноксидил ингибирует выпадение волос путем увеличения кровотока в области черепа. Однако постоянно сообщают о некоторых побочных эффектах, связанных с этими лекарственными средствами, и также о том, что их лечебное действие является временным и ограниченным. Выпадение волос вызывает комбинация факторов, не только одна причина, и устранение нескольких причин не может полностью вылечить ее.There are currently only two FDA-approved hair loss products: Finasteride and Minoxidil. Finasteride, which is a male pattern alopecia remedy, inhibits hair loss by using the mechanism of inhibition of 5α-reductase, an enzyme that converts male hormones into dihydrotestosterone (DHT), a hair loss inducing factor, as an agent for the treatment of male hair loss . Minoxidil inhibits hair loss by increasing blood flow to the scalp. However, some side effects associated with these drugs are constantly reported, and also that their therapeutic effect is temporary and limited. Hair loss is caused by a combination of factors, not just one cause, and addressing multiple causes cannot completely cure it.

Соответственно, в западной и восточной медицине были проведены различные научные исследования, посвященные проблеме выпадения волос, и были испробованы различные способы лечения. Были проведены исследования натуральных продуктов, стероидов, аутоиммунной супрессии и так далее, и были выполнены исследования с использованием лазерной терапии, применения аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмы, дермароллера или стволовых клеток и так далее. Однако эти способы лечения также не позволили приблизиться комплексно к устранению причин выпадения волос различной природы, а не протестированные научными методами медицинские процедуры имеют недостаток, связанный с их недостаточной эффективностью с учетом их стоимости. Следовательно, есть насущная необходимость в разработке нового лекарственного средства против выпадения волос, эффективность которого доказана научным путем, и более экономично с точки зрения цены.Accordingly, various scientific studies on the problem of hair loss have been carried out in Western and Eastern medicine, and various treatments have been tried. Research has been done on natural products, steroids, autoimmune suppression and so on, and research has been done using laser therapy, autologous platelet-rich plasma, dermaroller or stem cells and so on. However, these methods of treatment also did not allow for a comprehensive approach to eliminating the causes of hair loss of various nature, and medical procedures that have not been tested by scientific methods have the disadvantage of their insufficient effectiveness, taking into account their cost. Therefore, there is an urgent need to develop a new anti-hair loss drug that is scientifically proven to be effective and more economical in terms of price.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

Задача настоящего изобретения заключается в предоставлении пептида для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос.The object of the present invention is to provide a peptide for preventing hair loss or promoting hair growth.

Другая задача настоящего изобретения заключается в предоставлении косметической композиции для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for preventing hair loss or promoting hair growth.

Третья задача настоящего изобретения заключается в предоставлении фармацевтической композиции для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос.The third object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing hair loss or promoting hair growth.

Четвертая задача настоящего изобретения заключается в предоставлении оздоровительной пищевой композиции для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос.A fourth object of the present invention is to provide a health food composition for preventing hair loss or promoting hair growth.

Для достижения вышеописанной цели в настоящем изобретении предложен пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.To achieve the above object, the present invention provides a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2.

Также в настоящем изобретении предложена косметическая композиция для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащая пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.The present invention also provides a cosmetic composition for preventing hair loss or stimulating hair growth, comprising a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof in as an active ingredient.

Дополнительно в настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащая пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.Additionally, the present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing hair loss or promoting hair growth, comprising a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof. as an active ingredient.

Дополнительно в настоящем изобретении предложена оздоровительная пищевая композиция для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащая пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.Additionally, the present invention provides a health food composition for preventing hair loss or stimulating hair growth, comprising a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof. as an active ingredient.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВBRIEF DESCRIPTION OF GRAPHICS

На Фиг. 1 показаны результаты анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии нового пептида-1 (Wnt-1, SEQ ID NO: 1) и пептида-2 (Wnt-2, SEQ ID NO: 2), которые получены из белка Wnt.On FIG. 1 shows the results of HPLC analysis of novel peptide-1 (Wnt-1, SEQ ID NO: 1) and peptide-2 (Wnt-2, SEQ ID NO: 2) which are derived from Wnt protein.

На Фиг. 2 показан эффект стимуляции роста клеток полидезоксирибонуклеотидом (PDRN) с использованием клеток дермальной папиллы и представлены их микроскопические изображения.On FIG. 2 shows the effect of polydeoxyribonucleotide (PDRN) cell growth stimulation using dermal papilla cells and presents their microscopic images.

На Фиг. 3 показан эффект стимуляции роста клеток Wnt-1 или Wnt-2 с использованием: (А) кератиноцитов, (Б) фибробластов и (В) клеток дермальной папиллы и представлены их микроскопические изображения.On FIG. 3 shows the growth promotion effect of Wnt-1 or Wnt-2 cells using (A) keratinocytes, (B) fibroblasts, and (C) dermal papilla cells and presents their microscopic images.

На Фиг. 4 показан эффект стимуляции роста клеток (A) Wnt-1+PDRN или (Б) Wnt-2+PDRN с использованием кератиноцитов и представлены их микроскопические изображения.On FIG. 4 shows the cell growth promotion effect of (A) Wnt-1+PDRN or (B) Wnt-2+PDRN using keratinocytes and presents their microscopic images.

На Фиг. 5 показан эффект стимуляции роста клеток Wnt-1+Wnt-2+PDRN с использованием клеток дермальной папиллы и представлены их микроскопические изображения.On FIG. 5 shows the growth promotion effect of Wnt-1+Wnt-2+PDRN cells using dermal papilla cells and presents their microscopic images.

На Фиг. 6 показан эффект увеличения активности р-катенина под действием: (А) PDRN, (Б) Wnt-1, Wnt-2, Wnt-1 и Wnt-2, (В) Wnt-1 и Wnt-2 с использованием клеток дермальной папиллы.On FIG. 6 shows the effect of increasing p-catenin activity by: (A) PDRN, (B) Wnt-1, Wnt-2, Wnt-1 and Wnt-2, (C) Wnt-1 and Wnt-2 using dermal papilla cells .

На Фиг. 7 показан эффект увеличения активности с-тус под действием: (A) PDRN, (Б) Wnt-1, Wnt-2, Wnt-1+Wnt-2, Wnt-1+PDRN, Wnt-2+PDRN, Wnt-1+Wnt-2+PDRN с использованием клеток дермальной папиллы.On FIG. 7 shows the effect of increasing c-myc activity under the action of: (A) PDRN, (B) Wnt-1, Wnt-2, Wnt-1+Wnt-2, Wnt-1+PDRN, Wnt-2+PDRN, Wnt-1 +Wnt-2+PDRN using dermal papilla cells.

На Фиг. 8 показан эффект роста волос под действием Wnt-1+Wnt-2+PDNR с использованием лишенных волос мышей С57 ВГ/6.On FIG. 8 shows the hair growth effect of Wnt-1+Wnt-2+PDNR in dehaired C57 Br/6 mice.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВОПЛОЩЕНИЙ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF EMBODIMENTS OF THE INVENTION

Авторы настоящего изобретения подтвердили, что новые пептиды, полученные из белков Wnt (Wnt-1 или/и Wnt-2), полидезоксирибонуклеотиды или их смеси, активируют сигнальную систему Wnt для увеличения секреции и активности β-катенина и для стимуляции роста кератиноцитов, фибробластов и клеток дермальной папиллы, которые важны для формирования корня волоса, и для индукции дифференцировки волос в фазе анагена, и выполнили настоящее изобретение.The present inventors confirmed that novel peptides derived from Wnt proteins (Wnt-1 or/and Wnt-2), polydeoxyribonucleotides, or mixtures thereof, activate the Wnt signaling system to increase β-catenin secretion and activity and to stimulate the growth of keratinocytes, fibroblasts, and dermal papilla cells, which are important for hair root formation, and for inducing hair differentiation in the anagen phase, and accomplished the present invention.

Соответственно в настоящем изобретении предложен пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.Accordingly, the present invention provides a peptide comprising at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2.

Пептид может быть ацетилирован по N-концу аминокислотной последовательности.The peptide may be acetylated at the N-terminus of the amino acid sequence.

Пептид может представлять собой пептид, полученный из белка Wnt. Пептид, полученный из белка Wnt, представляет собой пептид, выполняющий функцию, сходную с таковой природного белка Wnt, и связывается с рецептором для выполнения функции, такой как функция фактора роста.The peptide may be a peptide derived from a Wnt protein. A peptide derived from a Wnt protein is a peptide having a function similar to that of a natural Wnt protein and binds to a receptor to perform a function such as that of a growth factor.

Этот пептид может предупреждать выпадение волос и стимулировать рост волос.This peptide can prevent hair loss and stimulate hair growth.

Также в настоящем изобретении предложена косметическая композиция для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащая пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.The present invention also provides a cosmetic composition for preventing hair loss or stimulating hair growth, comprising a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof in as an active ingredient.

Пептид может быть ацетилирован по N-концу аминокислотной последовательности.The peptide may be acetylated at the N-terminus of the amino acid sequence.

Пептид может представлять собой пептид, полученный из белка Wnt. Пептид, полученный из белка Wnt, представляет собой пептид, который выполняет функцию, сходную с таковой природного белка Wnt, и связывается с рецептором для выполнения функции, такой как функция фактора роста.The peptide may be a peptide derived from a Wnt protein. A peptide derived from a Wnt protein is a peptide that performs a function similar to that of a natural Wnt protein and binds to a receptor to perform a function such as that of a growth factor.

Полидезоксирибонуклеотид выделяют из семенников рыбы, и рыба может быть выбрана из группы, состоящей из лосося, форели, сельди, сайды и трески, но не ограничиваясь ими.The polydeoxyribonucleotide is isolated from the testes of fish, and the fish may be selected from the group consisting of, but not limited to, salmon, trout, herring, saithe, and cod.

Полидезоксирибонуклеотид может иметь среднюю молекулярную массу 350-2000 кДа.The polydeoxyribonucleotide may have an average molecular weight of 350-2000 kDa.

Дополнительно композиция увеличивает секрецию β-катенина для стимуляции роста кератиноцитов, фибробластов и клеток дермальной папиллы и увеличивает экспрессию с-myc, тем самым предупреждая выпадение волос и стимулируя рост волос.Additionally, the composition increases the secretion of β-catenin to stimulate the growth of keratinocytes, fibroblasts and dermal papilla cells and increases the expression of c-myc, thereby preventing hair loss and stimulating hair growth.

Композиция может быть изготовлена в виде композиции, выбранной из группы, состоящей из тоника для волос, кондиционера для волос, эссенции для волос, лосьона для волос, питательного лосьона для волос, шампуня для волос, ополаскивателя для волос, средства для лечебного ухода за волосами, крема для волос, питательного крема для волос, увлажняющего крема для волос, крема для массажа волосистой части головы, воска для волос, аэрозоля для волос, маски для волос (hair pack), питательной маски для волос (hair nutrition pack), мыла для волос, очищающей пены для волос, масла для волос, агента для высушивания волос, защитного средства для волос, краски для волос, агента для завивки волос, осветлителя для волос, геля для волос, средства для блеска волос (hair glaze), средства для укладки волос, лака для волос, увлажнителя для волос, мусса для волос и спрея для волос, но не ограничиваясь ими.The composition may be in the form of a composition selected from the group consisting of a hair tonic, a hair conditioner, a hair essence, a hair lotion, a nourishing hair lotion, a hair shampoo, a hair rinse, a hair treatment product, hair cream, nourishing hair cream, moisturizing hair cream, scalp massage cream, hair wax, hair spray, hair pack, hair nutrition pack, hair soap , hair cleansing foam, hair oil, hair dryer, hair protectant, hair dye, curling agent, hair lightener, hair gel, hair glaze, hair styling products , hair spray, hair moisturizer, hair mousse and hair spray, but not limited to.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой косметическую композицию, косметическая композиция может включать, дополнительно к активному ингредиенту, традиционные вспомогательные вещества, такие как стабилизаторы, растворители, витамины, пигменты и ароматизаторы, и носители. Кроме того, косметическая композиция может дополнительно включать усилитель всасывания через кожу для усиления эффекта.When the composition of the present invention is a cosmetic composition, the cosmetic composition may include, in addition to the active ingredient, conventional excipients such as stabilizers, solvents, vitamins, pigments and fragrances, and carriers. In addition, the cosmetic composition may further include a skin absorption enhancer to enhance the effect.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой косметическую композицию, препарат косметической композиции может быть получен в форме любой композиции, обычно получаемой в данной области техники, например косметическая композиция может представлять собой лосьон для лица, эмульсию, лосьон для кожи, тоник, лосьон, эссенцию, солнцезащитное средство, крем, основу для макияжа, базу, порошок, пакет, гель, мазь, пластырь, патч, шампунь, увлажнитель, спрей, средство для снятия макияжа и очиститель и так далее, но не ограничиваясь ими.When the composition of the present invention is a cosmetic composition, the preparation of the cosmetic composition may be in the form of any composition conventionally prepared in the art, for example, the cosmetic composition may be a facial lotion, emulsion, skin lotion, tonic, lotion, essence, sunscreen, cream, foundation, base, powder, packet, gel, ointment, patch, patch, shampoo, moisturizer, spray, makeup remover and cleaner and so on, but not limited to.

Когда композиция представляет собой пасту, крем или гель, в ней можно использовать животный жир, растительное масло, воск, парафин, крахмал, трагакант, производное целлюлозы, полиэтиленгликоль, силикон, бентонит, диоксид кремния, тальк или оксид цинка и им подобное, в качестве компонента-носителя.When the composition is a paste, cream or gel, animal fat, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silicon dioxide, talc or zinc oxide and the like can be used as carrier component.

Когда композиция представляет собой порошок или спрей, в ней можно использовать порошок лактозы, талька, диоксида кремния, гидроксида алюминия, силиката кальция или полиамида, в качестве компонента-носителя, и в частности спрей может дополнительно включать пропеллент, такой как хлорфторуглеводород, пропан/бутан или диметиловый эфир.When the composition is a powder or spray, the powder of lactose, talc, silicon dioxide, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide can be used as a carrier component, and in particular the spray can further include a propellant such as chlorofluorocarbon, propane/butane or dimethyl ether.

Когда композиция представляет собой раствор или эмульсию, растворитель, солюбилизатор или эмульгирующий агент используют в качестве компонента-носителя, например воду, этанол, изопропанол, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутил гликоле вое масло, алифатический сложный эфир глицерина, полиэтиленгликоль или сложные эфиры жирных кислот и сорбитана.When the composition is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifying agent is used as the carrier component, e.g. water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, aliphatic complex ester of glycerol, polyethylene glycol or esters of fatty acids and sorbitan.

Когда композиция представляет собой суспензию, в ней можно использовать жидкие растворители, такие как вода, этанол или пропиленгликоль, суспендирующие средства, такие как этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтиленовые сложные эфиры сорбитола и полиоксиэтиленовые сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар или трагакант, в качестве компонента-носителя.When the composition is a suspension, liquid solvents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol esters and polyoxyethylene sorbitan esters, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tragacanth, as a carrier component.

Также в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащая пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing hair loss or stimulating hair growth, comprising a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof in as an active ingredient.

Пептид может быть ацетилирован по N-концу аминокислотной последовательности.The peptide may be acetylated at the N-terminus of the amino acid sequence.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой фармацевтическую композицию, для введения она может включать фармацевтически приемлемый носитель, эксципиент или растворитель дополнительно к активному ингредиенту, описанному выше. Носитель, эксципиент и растворитель могут включать лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, полив инилпирролид он, воду, метилгидробензоат, пропилгидробензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло.When the composition of the present invention is a pharmaceutical composition, for administration it may include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent in addition to the active ingredient described above. The carrier, excipient and solvent may include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum arabic, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, watering inylpyrrolide, water, methylhydrobenzoate, propylhydrobenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть изготовлены в форме композиций для перорального введения, таких как порошки, гранулы, таблетки, капсулы, суспензии, эмульсии, сиропы или аэрозоли, препараты для наружного применения, суппозитории или стерильные растворы для инъекций, согласно соответствующим традиционным способам. Более подробно, при изготовлении, композиция может быть получена путем использования растворителей или эксципиентов, таких как уплотнители (fillers), наполнители (bulking agents), связывающие вещества, смачивающие агенты, средства для улучшения распадаемости и поверхностно-активные вещества, которые обычно используют. Твердые препараты для перорального введения включают таблетки, пилюли, порошки, гранулы, капсулы и им подобное, но не ограничиваясь ими. Такие твердые препараты могут быть получены путем смешивания по меньшей мере одного эксципиента, такого как крахмал, карбонат кальция, сахароза, лактоза, желатин и так далее, дополнительно к активному ингредиенту. Дополнительно к простым эксципиентам можно использовать смазывающие вещества, такие как стеарат магния, тальк. Они могут быть получены путем добавления различных эксципиентов, таких как увлажнители, подсластители, отдушки, консерванты и им подобные дополнительно к жидкостям или жидкому парафину для перорального использования. Композиции для парентерального введения включают стерильные водные растворы, неводные растворители, суспензии, эмульсии, агенты для лиофильной сушки. В качестве неводных растворителей и суспензий можно использовать пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, инъецируемые сложные эфиры, такие как этилолеат и им подобные. В качестве основания для суппозитория можно использовать витепсол (witepsol), макрогол (macrogol), твин 61, масло какао, лаурин (laurinum), глицеринизированный желатин и им подобное.The pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated for oral administration, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups or aerosols, topical preparations, suppositories or sterile injectable solutions, according to appropriate conventional methods. In more detail, in the manufacture, the composition can be obtained by using solvents or excipients, such as sealants (fillers), fillers (bulking agents), binders, wetting agents, agents to improve disintegration and surfactants, which are commonly used. Solid preparations for oral administration include, but are not limited to, tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like. Such solid preparations can be obtained by mixing at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc., in addition to the active ingredient. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc can be used. They can be obtained by adding various excipients such as humectants, sweeteners, flavoring agents, preservatives and the like in addition to liquids or liquid paraffin for oral use. Compositions for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-drying agents. As non-aqueous solvents and suspensions, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used. As the base for the suppository, you can use witepsol (witepsol), macrogol (macrogol), tween 61, cocoa butter, laurin (laurinum), glycerinated gelatin and the like.

Подходящие дозировки фармацевтических композиций по настоящему изобретению варьируют в зависимости от состояния и массы пациента, тяжести заболевания, формы лекарственного средства и времени, но могут быть подходящим образом выбраны специалистом в данной области техники, и следовательно суточная доза композиции составляет предпочтительно от 0,001 мг/кг до 50 мг/кг, и ее можно вводить за один раз или делить на несколько приемов по необходимости.Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the present invention vary depending on the condition and weight of the patient, the severity of the disease, the form of the drug and the time, but can be appropriately selected by a person skilled in the art, and therefore the daily dose of the composition is preferably from 0.001 mg/kg to 50 mg/kg, and it can be administered at one time or divided into several doses as needed.

В настоящем изобретении предложена оздоровительная пищевая композиция для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос, содержащая пептид, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, полидезоксирибонуклеотид или их смесь в качестве активного ингредиента.The present invention provides a health food composition for preventing hair loss or stimulating hair growth, comprising a peptide containing at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, a polydeoxyribonucleotide, or a mixture thereof in as an active ingredient.

Пептид может быть ацетилирован по N-концу аминокислотной последовательности.The peptide may be acetylated at the N-terminus of the amino acid sequence.

Когда композиция по настоящему изобретению представляет собой оздоровительную пищевую композицию, она может включать различные питательные вещества, витамины, минералы (электролиты), ароматизаторы, такие как синтетические ароматизаторы и натуральные ароматизаторы и так далее, красители и наполнители (сыр, шоколад и так далее), пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, защитные коллоидные уплотнители, агенты для подведения рН, стабилизаторы, консерванты, глицерин, спирты, карбонизаторы, используемые в газированных напитках, и им подобное. Кроме того, она может содержать мякоть для получения натуральных фруктовых соков, искусственных фруктовых соков и овощных напитков. Эти компоненты можно использовать независимо или в комбинации. Дополнительно оздоровительная функциональная пищевая композиция может быть в форме любого одного из мяса, колбасы, хлеба, шоколада, конфеты, легкой закуски, кондитерского изделия, пиццы, лапши, жевательной резинки, мороженого, супа, напитка, чая, функциональной воды, напитка, спирта и витаминного комплекса.When the composition of the present invention is a health food composition, it may include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors and so on, colors and fillers (cheese, chocolate and so on), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal sealants, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerol, alcohols, carbonates used in carbonated beverages, and the like. In addition, it may contain pulp for making natural fruit juices, artificial fruit juices and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination. Additionally, the health functional food composition may be in the form of any one of meat, sausage, bread, chocolate, candy, snack food, confectionery, pizza, noodles, chewing gum, ice cream, soup, beverage, tea, functional water, beverage, alcohol, and vitamin complex.

Дополнительно оздоровительная функциональная пищевая композиция может дополнительно включать пищевую добавку, и ее пригодность в качестве пищевой добавки определяется стандартами для приемлемого компонента в соответствии с Общими Положениями и Общими способами тестирования Корейского Кодекса Пищевых добавок (General Regulations and General Test Methods of Korean Food Additives Codex), одобренным Министерством по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств (Ministry of Food and Drug Safety), если не указано иное.Additionally, the health functional food composition may further include a food additive, and its suitability as a food additive is determined by the standards for an acceptable component in accordance with the General Regulations and General Test Methods of the Korean Food Additives Codex, approved by the Ministry of Food and Drug Safety unless otherwise noted.

Примеры компонентов, опубликованные в вышеупомянутом Корейском Кодексе Пищевых добавок, включают химические синтетические вещества, такие как кетоны, глицин, цитрат калия, никотиновую кислоту и коричную кислоту и им подобное, натуральные добавки, такие как экстракт хурмы, экстракт солодки, кристаллическая целлюлоза, краситель сорго красный и гуаровая камедь и им подобное, смешанные препараты, такие как препарат L-глутамата натрия, щелочные агенты для лапши, композиция консервантов и композиция красителей на основе каменноугольной смолы (tar color formulation) и им подобное.Examples of ingredients published in the aforementioned Korean Food Additives Code include chemical synthetics such as ketones, glycine, potassium citrate, nicotinic acid and cinnamic acid and the like, natural additives such as persimmon extract, licorice extract, crystalline cellulose, sorghum color red and guar gum and the like, mixed preparations such as monosodium L-glutamate preparation, noodle alkaline agents, preservative composition and coal tar color formulation (tar color formulation) and the like.

В настоящее время содержание композиции по настоящему изобретению, добавленной в пищу во время изготовления композиции функционального здорового питания, может быть увеличено или уменьшено по необходимости.At present, the content of the composition of the present invention added to the food during the manufacture of the functional health food composition can be increased or decreased as needed.

Здесь и далее будут детально описаны примеры для облегчения понимания настоящего изобретения. Однако следующие примеры предназначены исключительно для иллюстративных целей и не ограничивают объем настоящего изобретения. Воплощения настоящего изобретения предложены для более полного объяснения настоящего изобретения специалистам в данной области техники.Hereinafter, examples will be described in detail to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are for illustrative purposes only and do not limit the scope of the present invention. Embodiments of the present invention are provided to more fully explain the present invention to those skilled in the art.

Пример 1: Получение новых пептидов, полученных из белка WntExample 1 Preparation of new peptides derived from Wnt protein

Для получения нового пептида, полученного из белка Wnt, по настоящему изобретению, было исследовано семейство белков Wnt, и функция каждой части белка Wnt была предсказана с использованием программы BlastP. Среди них исследовали потенциальное связывание с рецепторными белками, и аминокислотная последовательность предсказанного сайта была оптимизирована для выбора и конструирования пептида по настоящему изобретению.To obtain a new peptide derived from the Wnt protein of the present invention, the Wnt protein family was investigated, and the function of each part of the Wnt protein was predicted using the BlastP program. Among them, potential binding to receptor proteins was investigated, and the amino acid sequence of the predicted site was optimized for selection and construction of the peptide of the present invention.

Пептид был синтезирован компанией Peptron. Желаемый пептид синтезировали твердофазным способом Fmoc в автоматическом синтезаторе пептидов (PeptrEX-R48), и синтезированный пептид отделяли от смолы. Пептид выделяли без примесей и анализировали обращено-фазовой HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография) (Prominence LC-20AB, Shimadzu, Japan) с использованием аналитической обращенно-фазовой колонки "Shiseido capcell рак С18". Пептид представлен аминокислотной последовательностью из Таблицы 1 ниже, и N-конец аминоксилотной последовательности ацетилирован (Фиг. 1).The peptide was synthesized by Peptron. The desired peptide was synthesized by the Fmoc solid phase method in an automated peptide synthesizer (PeptrEX-R48) and the synthesized peptide was separated from the resin. The peptide was isolated without impurities and analyzed by reverse phase HPLC (high performance liquid chromatography) (Prominence LC-20AB, Shimadzu, Japan) using a "Shiseido capcell cancer C18" analytical reverse phase column. The peptide is represented by the amino acid sequence from Table 1 below, and the N-terminus of the amino acid sequence is acetylated (FIG. 1).

Пример 2: Анализ роста клеток с помощью полидезоксирибонуклеотидовExample 2 Cell Growth Assay with Polydeoxyribonucleotides

Клетки дермальной папиллы (Promocells) культивировали в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂ с использованием среды DMEM (Среда Игла, модифицированная по Дульбекко), содержащей 10% телячьей сыворотки крови (FBS) и 1% пенициллина/стрептомицина.Dermal papilla cells (Promocells) were cultured in an incubator at 37° C., 5% CO ₂ using DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) containing 10% calf serum (FBS) and 1% penicillin/streptomycin.

Клетки получали путем обработки культивированных клеток трипсином/ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) и затем измеряли число клеток с использованием гемоцитометра. Клетки высевали в 96-луночные планшеты в количестве 3×10³ клеток/200 мкл/лунка и затем стабилизировали в течение по меньшей мере 4 часов. После этого среду удаляли, разводили в среде DEME, так чтобы концентрация полидезоксирибонуклеотида (PDRN) составила 50, 100, 200 мкг/мл, и затем обрабатывали клетки и культивировали в течение 72 часов в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂.Cells were obtained by treating the cultured cells with trypsin/EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), and then the number of cells was measured using a hemocytometer. Cells were seeded in 96-well plates at 3×10 ³ cells/200 μl/well and then stabilized for at least 4 hours. After that, the medium was removed, diluted in DEME medium so that the concentration of polydeoxyribonucleotide (PDRN) was 50, 100, 200 μg/ml, and then the cells were treated and cultured for 72 hours in an incubator at 37°C, 5% CO ₂ .

Затем клетки извлекали, обрабатывая их трипсином/ЭДТА, и затем измеряли число клеток с помощью гемоцитометра. Скорость роста клеток анализировали, рассчитывая процентные соотношения относительно контрольной группы без обработки PDRN.The cells were then recovered by treating them with trypsin/EDTA, and then the number of cells was measured with a hemocytometer. The cell growth rate was analyzed by calculating the percentage relative to the control group without PDRN treatment.

В результате, как показано на Фиг. 2, было подтверждено, что скорость роста клеток дермальной папиллы увеличивается по мере увеличения концентрации PDRN для обработки.As a result, as shown in FIG. 2, it was confirmed that the growth rate of dermal papilla cells increases as the treatment concentration of PDRN increases.

Пример 3: Анализ роста клеток под действием пептидов, полученных из WntExample 3 Cell Growth Assay with Wnt Derived Peptides

Для подтверждения изменения формы и скорости пролиферации клеток кератиноциты Т0020001 (AddexBio), фибробласты (АТСС) и клетки дермальной папиллы культивировали в среде DMEM, содержащей 10% телячьей сыворотки крови и 1% пенициллина/стрептомицина.To confirm the change in the shape and rate of cell proliferation, T0020001 keratinocytes (AddexBio), fibroblasts (ATCC), and dermal papilla cells were cultured in DMEM containing 10% calf serum and 1% penicillin/streptomycin.

Затем клетки извлекали путем обработки культивируемых клеток трипсином/ЭДТА, и число клеток измеряли с помощью гемоцитометра. Клетки высевали в 96-луночные планшеты в количестве 3×10 клеток/200 мкл/лунка и стабилизировали в течение по меньшей мере 4 часов.The cells were then recovered by treating the cultured cells with trypsin/EDTA, and the number of cells was measured with a hemocytometer. Cells were seeded in 96-well plates at 3×10 cells/200 μl/well and stabilized for at least 4 hours.

После этого среду удаляли, разводили средой DEME, так чтобы концентрация пептидов Wnt (Wnt-1, Wnt-2) составляла 10, 100, 1000 и 10000 нг/мл и затем обрабатывали ею клетки и культивировали в течение 72 часов в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂. Затем клетки изучали под микроскопом для анализа морфологии и скорости роста клеток.After that, the medium was removed, diluted with DEME medium so that the concentration of Wnt peptides (Wnt-1, Wnt-2) was 10, 100, 1000 and 10000 ng/ml, and then the cells were treated with it and cultured for 72 hours in an incubator at 37°C. C, 5% CO ₂ . The cells were then examined under a microscope to analyze the morphology and growth rate of the cells.

В результате, как показано на Фиг. 3, для кератиноцитов по мере увеличения концентрации пептида Wnt-1 скорость роста клеток увеличивалась, и концентрация пептида Wnt-2 100 нг/мл демонстрировала самую высокую скорость роста клеток (Фиг. 3А). Дополнительно действие на рост фибробластов проявлялось при концентрации пептида Wnt-1 10 нг/мл и похожие скорости роста клеток наблюдались при более высоких концентрациях, в то время как никакого изменения не наблюдалось для пептида Wnt-2 по сравнению с контрольной группой (Фиг. 3Б). Наконец, как пептид Wnt-1, так и пептид Wnt-2 вызывали самую высокую скорость роста клеток дермальной папиллы при 100 нг/мл (Фиг. 3В).As a result, as shown in FIG. 3, for keratinocytes, as the concentration of Wnt-1 peptide increased, the cell growth rate increased, and the concentration of Wnt-2 peptide of 100 ng/ml showed the highest cell growth rate (FIG. 3A). Additionally, an effect on fibroblast growth was seen at a concentration of Wnt-1 peptide of 10 ng/mL and similar cell growth rates were observed at higher concentrations, while no change was observed for Wnt-2 peptide compared to the control group (Fig. 3B) . Finally, both the Wnt-1 peptide and the Wnt-2 peptide caused the highest growth rate of dermal papilla cells at 100 ng/ml (FIG. 3B).

Пример 4: Анализ роста клеток при обработке пептидом Wnt в сочетании с PDRNExample 4 Cell Growth Assay Treatment with Wnt Peptide in Combination with PDRN

Как в Примере 1 клетки дермальной папиллы высевали в 96-луночные планшеты в количестве 3×10³ клеток/200 мкл/лунка и стаблизировали в течение по меньшей мере 4 часов. После этого среду удаляли, разводили средой DEME, так чтобы концентрация полидезоксирибонуклеотида (PDRN, BR Pharm Co. Ltd.) составила 25, 50, 100 мкг/мл и пептида Wnt-1+пептид Wnt-2 - 0,1 мкг/мл (каждый по 0,05 мкг/мл), и затем обрабатывали ею клетки и культивировали в течение 72 часов в инкубаторе при 37°С, 5% СО₂.As in Example 1, dermal papilla cells were seeded in 96-well plates at 3×10 ³ cells/200 μl/well and stabilized for at least 4 hours. After that, the medium was removed, diluted with DEME medium, so that the concentration of polydeoxyribonucleotide (PDRN, BR Pharm Co. Ltd.) was 25, 50, 100 μg/ml and Wnt-1 peptide + Wnt-2 peptide - 0.1 μg/ml ( each at 0.05 μg/ml), and then treated with cells and cultured for 72 hours in an incubator at 37°C, 5% CO ₂ .

После этого клетки извлекали, обрабатывая их трипсином/ЭДТА, и затем подсчитывали число клеток с помощью гемоцитометра. Скорость роста клеток анализировали путем расчета процентных соотношений относительно контрольной группы без обработки PDRN.After that, the cells were removed by treating them with trypsin/EDTA, and then the number of cells was counted using a hemocytometer. The cell growth rate was analyzed by calculating percentages relative to the control group without PDRN treatment.

В результате, как показано на Фиг. 5, когда обработку выполняли в сочетании с PDRN, скорость роста клеток увеличивалась, и также при увеличении концентрации PDRN для обработки скорость роста клеток дермальной папиллы увеличивалась, по сравнению с обработкой только Wnt-1+Wnt-2.As a result, as shown in FIG. 5, when the treatment was performed in combination with PDRN, the cell growth rate was increased, and also when the concentration of PDRN was increased for the treatment, the growth rate of dermal papilla cells was increased compared to the treatment with Wnt-1+Wnt-2 alone.

Пример 5: Анализ экспрессии β-катенина и с-mycExample 5: Analysis of the expression of β-catenin and c-myc

Как в Примере 1 клетки дермальной папиллы стабилизировали в течение по меньшей мере 4 часов после посева в 6-луночные планшеты в количестве 4×10⁴ клеток/лунка. После этого среду удаляли и клетки обрабатывали PDRN, пептидом Wnt-1 и пептидом Wnt-2 в различных концентрациях по отдельности или в комбинации и инкубировали в течение 72 часов в инкубаторе при 37°С, 5% CO₂.As in Example 1, dermal papilla cells were stabilized for at least 4 hours after seeding into 6-well plates at 4×10 ⁴ cells/well. After that, the medium was removed and the cells were treated with PDRN, Wnt-1 peptide and Wnt-2 peptide at various concentrations alone or in combination and incubated for 72 hours in an incubator at 37°C, 5% CO ₂ .

Затем клетки лизировали путем добавления лизирующего буфера (1 М Трис-HCl, 0,5 М ЭДТА, 1% Тритон Х-100, 100 мМ PMSF) в каждую лунку, и количество белка оценивали с использованием набора ВСА (бицинхониновая кислота). 20 мкг белка вносили в лунки 10% SDS-полиакриламидного геля и проводили электрофорез при 125В. Белки, разделенные электрофорезом, переносили на мембрану PVDF (поливинилиденфторид) (Immonobilon-P transfermembrane) путем электрофореза при 50 мА в течение 120 минут с использованием буфера для переноса (20% метанол, 25 мМ Трис-HCl, 192 мМ глицин).The cells were then lysed by adding lysis buffer (1 M Tris-HCl, 0.5 M EDTA, 1% Triton X-100, 100 mM PMSF) to each well, and the amount of protein was estimated using the BCA (bicinchoninic acid) kit. 20 μg of the protein was added to the wells of 10% SDS-polyacrylamide gel and electrophoresis was performed at 125V. Proteins separated by electrophoresis were transferred to a PVDF membrane (polyvinylidene fluoride) (Immonobilon-P transfermembrane) by electrophoresis at 50 mA for 120 minutes using transfer buffer (20% methanol, 25 mm Tris-HCl, 192 mm glycine).

Для предупреждения неспецифического связывания мембраны блокировали 5% нежирным снятым молоком и затем проводили реакцию при 4°С в течение 12 часов с первичными антителами (β-катенин, c-myc, Santa Cruz Biotechnology, Inc), разведенными 1:1000 в растворе TTBS (137 мМ Трис-Cl, рН 7,4; 20 мМ NaCl; 0,05% Tween-20). После этого мембрану промывали три раза TTBS и проводили реакцию со вторичными антителами (IgG против антител кролика, конъюгированными с HRP (пероксидаза хрена)), разведенными 1: 2000 при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем мембрану промывали три раза TTBS и затем экспрессию белка подтверждали на рентгеновской пленке с использованием набора для диагностики ECL.To prevent non-specific binding, membranes were blocked with 5% non-fat skimmed milk and then reacted at 4°C for 12 hours with primary antibodies (β-catenin, c-myc, Santa Cruz Biotechnology, Inc) diluted 1:1000 in TTBS ( 137 mM Tris-Cl, pH 7.4, 20 mM NaCl, 0.05% Tween-20). After that, the membrane was washed three times with TTBS and reacted with secondary antibodies (anti-rabbit IgG conjugated with HRP (horseradish peroxidase)) diluted 1:2000 at room temperature for 2 hours. The membrane was then washed three times with TTBS, and then protein expression was confirmed on x-ray film using an ECL diagnostic kit.

В результате, как показано на Фиг. 6, когда обработку выполняли комбинацией Wnt-1+Wnt-2, экспрессия р-катенина увеличивалась по сравнению с обработкой только Wnt-1 или Wnt-2, и когда дополнительно обрабатывали PDRN, было подтверждено, что экспрессия β-катенина увеличивалась зависимым от концентрации образом.As a result, as shown in FIG. 6, when treatment was performed with the combination of Wnt-1+Wnt-2, p-catenin expression was increased compared to treatment with Wnt-1 or Wnt-2 alone, and when PDRN was additionally treated, it was confirmed that β-catenin expression was increased in a concentration-dependent manner. way.

Дополнительно, как показано на Фиг. 7, экспрессия c-myc увеличивалась с увеличением концентрации PDRN, взятой для обработки, и при обработке Wnt в сочетании с PDRN, было подтверждено, что экспрессия c-myc увеличивалась.Additionally, as shown in FIG. 7, c-myc expression increased with increasing treatment concentration of PDRN, and when Wnt was treated in combination with PDRN, it was confirmed that c-myc expression increased.

Пример 6: Анализ эффекта стимуляции роста волос при обработке пептидом Wnt в сочетании с PDRN у мышей C57BL/6Example 6 Analysis of Hair Growth Promotion Effect of Treatment with Wnt Peptide in Combination with PDRN in C57BL/6 Mice

Для анализа эффекта стимуляции роста волос при обработке пептидом Wnt (Wnt-1+Wnt-2) в сочетании с PDRN проводили эксперименты по росту волос in vivo с использованием мышей C57BL/6, которых наиболее часто используют для тестирования роста волос.To analyze the hair growth promotion effect of treatment with Wnt peptide (Wnt-1+Wnt-2) in combination with PDRN, in vivo hair growth experiments were performed using C57BL/6 mice, which are the most commonly used for hair growth testing.

Самок мышей C57BL/6 возрастом семь недель (Orient Bio Co., Ltd.) с похожей относительно друг друга массой подвергали экспериментам в возрасте 8 недель после акклиматизации в течение 1 недели при 25°С и 50% влажности. Мышь помещали в эксикатор, содержащий эфир, подвергали анестезии в течение 1 минуты и удаляли волосы со спины мыши кремом для удаления волос. Пептид Wnt (Wnt-1+Wnt-2, 5 мкг/мл или 15 мкг/мл) и PDRN (2,5 мг/мл или 7,5 мг/мл) применяли трансдермально в области спины, начиная с суток удаления волос, и 200 мкл образца наносили один раз в сутки. После применения в течение 15 суток делали фотографии для подтверждения степени роста волос путем проверки изменения цвета на месте нанесения. 3% Миноксидил использовали в качестве положительного контроля и фосфатный буфер использовали в качестве отрицательного контроля.Seven-week-old female C57BL/6 mice (Orient Bio Co., Ltd.) with a similar weight relative to each other were subjected to experiments at the age of 8 weeks after acclimatization for 1 week at 25°C and 50% humidity. The mouse was placed in a desiccator containing ether, anesthetized for 1 minute, and hair was removed from the back of the mouse with a depilatory cream. Wnt peptide (Wnt-1+Wnt-2, 5 µg/mL or 15 µg/mL) and PDRN (2.5 mg/mL or 7.5 mg/mL) were applied transdermally in the back area starting from the day of hair removal, and 200 μl of sample was applied once a day. After application for 15 days, photographs were taken to confirm the degree of hair growth by checking the color change at the site of application. 3% Minoxidil was used as a positive control and phosphate buffer was used as a negative control.

В результате, как показано на Фиг. 8, в группе, получавшей обработку пептидом Wnt (Wnt-1+Wnt-2) в сочетании с PDRN, сильно увеличивался рост волос по сравнению с группой отрицательного контроля и проявлялся эффект роста волос близкий к уровню положительного контроля.As a result, as shown in FIG. 8, in the group treated with Wnt peptide (Wnt-1+Wnt-2) in combination with PDRN, hair growth was greatly increased compared to the negative control group, and a hair growth effect close to that of the positive control was exhibited.

Согласно настоящему изобретению полученные из белка Wnt пептиды, полидезоксирибонуклеотиды или их смеси увеличивают секрецию β-катенина и усиливают рост кератиноцитов, фибробластов и клеток дермальной папиллы, представляющих собой клетки, образующие волос, путем активации клеток и активации пути передачи сигнала для стимуляции сигнальной системы роста волос и предупреждения выпадения волос и стимуляции роста волос, и следовательно полученные из белка Wnt пептиды, полидезоксирибонуклеотиды или их смеси, оказывающие вышеуказанное действие, можно использовать в качестве косметической композиции, фармацевтической композиции или оздоровительной пищевой композиции для предупреждения выпадения волос или стимуляции роста волос.According to the present invention, Wnt protein-derived peptides, polydeoxyribonucleotides, or mixtures thereof increase β-catenin secretion and enhance the growth of keratinocytes, fibroblasts, and dermal papilla cells, which are hair-forming cells, by activating the cells and activating a signal transduction pathway to stimulate the hair growth signaling system. and preventing hair loss and promoting hair growth, and therefore Wnt protein-derived peptides, polydeoxyribonucleotides or mixtures thereof having the above effect can be used as a cosmetic composition, pharmaceutical composition or health food composition for preventing hair loss or promoting hair growth.

Как подробно описано выше в определенных разделах настоящего изобретения специалистам в данной области техники очевидно, что эти конкретные описания представляют собой только предпочтительные воплощения, и объем настоящего изобретения не ограничен ими. Соответственно, по существу объем настоящего изобретения будет определяться прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.As detailed above in certain sections of the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that these specific descriptions are only preferred embodiments and the scope of the present invention is not limited thereto. Accordingly, essentially the scope of the present invention will be determined by the appended claims and their equivalents.

Объем настоящего изобретения представлен приложенной формулой изобретения, и следует понимать, что все изменения или модификации, следующие из значения и объема данной формулы изобретения, и их эквиваленты включены в объем настоящего изобретения.The scope of the present invention is represented by the appended claims, and it is to be understood that all changes or modifications arising from the meaning and scope of these claims and their equivalents are included within the scope of the present invention.

--->--->

<110> BR PHARM Co.,Ltd.<110> BR PHARM Co.,Ltd.

<120> Composition for preventing hair loss or promoting hair growth<120> Composition for preventing hair loss or promoting hair growth

<130> OP-2019-0048<130> OP-2019-0048

<160> 2<160> 2

<170> KoPatentIn 3.0<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1<210> 1

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212> PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Wnt-1<223> Wnt-1

<400> 1<400> 1

Met Cys Cys Gly Arg Gly Tyr Asp Gln PheMet Cys Cys Gly Arg Gly Tyr Asp Gln Phe

1 5 10 1 5 10

<210> 2<210> 2

<211> 10<211> 10

<212> PRT<212> PRT

<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence

<220><220>

<223> Wnt-2<223> Wnt-2

<400> 2<400> 2

Met Cys Cys Gly Arg Gly Tyr Asn Tyr HisMet Cys Cys Gly Arg Gly Tyr Asn Tyr His

1 5 10 1 5 10

<---<---

Claims (11)

1. Пептид, стимулирующий рост волос, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, где пептид ацетилирован по N-концу аминокислотной последовательности.1. A hair growth stimulating peptide having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, wherein the peptide is acetylated at the N-terminus of the amino acid sequence. 2. Пептид по п.1, представляющий собой пептид, полученный из белка Wnt.2. The peptide according to claim 1, which is a peptide derived from Wnt protein. 3. Косметическая композиция для стимуляции роста волос, содержащая пептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, где пептид ацетилирован по N-концу аминокислотной последовательности.3. Cosmetic composition for stimulating hair growth, containing a peptide having an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2, where the peptide is acetylated at the N-terminus of the amino acid sequence. 4. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 3, дополнительно содержащая полидезоксирибонуклеотид. 4. Cosmetic composition for stimulating hair growth according to claim 3, additionally containing a polydeoxyribonucleotide. 5. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 3, где пептид представляет собой пептид, полученный из белка Wnt. 5. The hair growth stimulating cosmetic composition according to claim 3, wherein the peptide is a peptide derived from a Wnt protein. 6. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 4, где полидезоксирибонуклеотид выделен из семенников рыбы. 6. Cosmetic composition for stimulating hair growth according to claim 4, wherein the polydeoxyribonucleotide is isolated from fish testis. 7. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 6, где рыба выбрана из группы, состоящей из лосося, форели, сельди, сайды и трески. 7. The hair growth stimulating cosmetic composition according to claim 6, wherein the fish is selected from the group consisting of salmon, trout, herring, saithe and cod. 8. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 4, где полидезоксирибонуклеотид имеет среднюю молекулярную массу 350-2000 кДа. 8. Cosmetic composition for stimulating hair growth according to claim 4, wherein the polydeoxyribonucleotide has an average molecular weight of 350-2000 kDa. 9. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 3, где композиция стимулирует рост кератиноцитов, фибробластов и клеток дермальной папиллы путем увеличения секреции β-катенина. 9. The hair growth stimulating cosmetic composition according to claim 3, wherein the composition stimulates the growth of keratinocytes, fibroblasts, and dermal papilla cells by increasing secretion of β-catenin. 10. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 3, где композиция увеличивает экспрессию c-myc. 10. The hair growth stimulating cosmetic composition of claim 3, wherein the composition increases c-myc expression. 11. Косметическая композиция для стимуляции роста волос по п. 3, где композиция изготовлена в форме препарата, выбранного из группы, состоящей из тоника для волос, кондиционера для волос, эссенции для волос, лосьона для волос, питательного лосьона для волос, шампуня для волос, ополаскивателя для волос, средства для лечебного ухода за волосами, крема для волос, питательного крема для волос, увлажняющего крема для волос, крема для массажа волосистой части головы, воска для волос, аэрозоля для волос, маски для волос, питательной маски для волос, мыла для волос, очищающей пены для волос, масла для волос, агента для высушивания волос, защитного средства для волос, краски для волос, агента для завивки волос, осветлителя для волос, геля для волос, средства для блеска волос, средства для укладки волос, лака для волос, увлажнителя для волос, мусса для волос и спрея для волос. 11. Cosmetic composition for stimulating hair growth according to claim 3, where the composition is in the form of a preparation selected from the group consisting of hair tonic, hair conditioner, hair essence, hair lotion, nourishing hair lotion, hair shampoo , hair rinse, hair treatment products, hair cream, nourishing hair cream, moisturizing hair cream, scalp massage cream, hair wax, hair spray, hair mask, nourishing hair mask, hair soap, hair cleansing foam, hair oil, hair drying agent, hair protectant, hair dye, hair curling agent, hair bleach, hair gel, hair shine product, hair styling product, hairspray, hair moisturizer, hair mousse and hair spray.

Images