RU2789495C2 - Improved substances binding to serum albumin - Google Patents
Improved substances binding to serum albumin Download PDFInfo
- Publication number
- RU2789495C2 RU2789495C2 RU2019125831A RU2019125831A RU2789495C2 RU 2789495 C2 RU2789495 C2 RU 2789495C2 RU 2019125831 A RU2019125831 A RU 2019125831A RU 2019125831 A RU2019125831 A RU 2019125831A RU 2789495 C2 RU2789495 C2 RU 2789495C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ser
- ala
- leu
- gly
- glu
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Настоящее изобретение имеет отношение к аминокислотным последовательностям, которые могут связываться с сывороточным альбумином. The present invention relates to amino acid sequences that can bind to serum albumin.
В частности, настоящее изобретение имеет отношение к одиночным вариабельным доменам иммуноглобулина, и в частности одиночным вариабельным доменам тяжелой цепи иммуноглобулина, которые могут связываться с сывороточным альбумином. In particular, the present invention relates to immunoglobulin single variable domains, and in particular immunoglobulin heavy chain single variable domains, which can bind to serum albumin.
Согласно настоящему описанию, одиночные вариабельные домены иммуноглобулина, предоставленные изобретением, предпочтительно являются такими, которые могут (по меньшей мере) связываться (и в частности, специфически связываться) с человеческим сывороточным альбумином. Более предпочтительно, как далее описано в этом документе, эти одиночные вариабельные домены иммуноглобулина предпочтительно также являются перекрестно-реагирующими (согласно настоящему описанию) между человеческим сывороточным альбумином и сывороточным альбумином, по меньшей мере, одного другого вида млекопитающих.As used herein, the immunoglobulin single variable domains provided by the invention are preferably those that can (at least) bind (and in particular bind specifically) to human serum albumin. More preferably, as further described herein, these immunoglobulin single variable domains are preferably also cross-reactive (as described herein) between human serum albumin and serum albumin from at least one other mammalian species.
Изобретение также имеет отношение к белкам, полипептидам и другим конструкциям, соединениям, молекулам или химическим соединениям, содержащим, по меньшей мере, один из одиночных вариабельных доменов иммуноглобулина, связывающихся с сывороточным альбумином, которые описываются в этом документе. The invention also relates to proteins, polypeptides and other constructs, compounds, molecules or chemical compounds containing at least one of the single immunoglobulin variable domains that bind to serum albumin, which are described in this document.
Одиночные вариабельные домены иммуноглобулина также будут называться в данном описании при помощи аббревиатур “ISV’s” или “ISVD’s” (которые будут использоваться в описании взаимозаменяемым образом). Single variable domains of an immunoglobulin will also be referred to herein with the abbreviations "ISV's" or "ISVD's" (which will be used interchangeably throughout the specification).
Одиночные вариабельные домены иммуноглобулина, связывающиеся с сывороточным альбумином, которые описываются в этом документе, также будут называться в описании “аминокислотные последовательности изобретения” или “вещества изобретения, связывающие сывороточный альбумин”. Как описывается далее в изобретении, вещества изобретения, связывающие альбумин, в частности, могут быть нанотелами (как описано далее). The serum albumin-binding immunoglobulin single variable domains described herein will also be referred to herein as “amino acid sequences of the invention” or “serum albumin-binding substances of the invention”. As described further in the invention, albumin-binding substances of the invention, in particular, can be nanobodies (as described below).
Белки, полипептиды и другие конструкции, соединения, молекулы или химические соединения, которые содержат, по меньшей мере, одно из веществ изобретения, связывающих сывороточный альбумин, также будут называться в описании “соединениями изобретения” или “полипептидами изобретения”. Предпочтительно, соединения изобретения представляют собой белки или полипептиды и, в частности, могут быть слитыми белками.Proteins, polypeptides and other constructs, compounds, molecules or chemical compounds that contain at least one of the substances of the invention that bind serum albumin, will also be referred to in the description of "compounds of the invention" or "polypeptides of the invention". Preferably, the compounds of the invention are proteins or polypeptides, and in particular may be fusion proteins.
Другие аспекты, варианты осуществления, характерные особенности, области применения и преимущества изобретения станут понятны специалистам на основании данного раскрытия. Other aspects, embodiments, features, applications, and advantages of the invention will become apparent to those skilled in the art based on this disclosure.
В настоящей заявке аминокислотные остатки/положения в вариабельном домене тяжелой цепи иммуноглобулина будут обозначаться с использованием нумерации согласно Kabat. Для удобства на фиг. 1 представлена таблица, содержащая список некоторых аминокислотных положений, которые будут упоминаться в описании, и их нумерация в соответствии с некоторыми альтернативными системами нумерации (такими как Aho и IMGT. Примечание: если однозначно не указано иное, для настоящего раскрытия и пунктов формулы изобретения нумерация Kabat имеет решающее значение; другие системы нумерации приводятся только в качестве примера).In this application, the amino acid residues/positions in the variable domain of the immunoglobulin heavy chain will be designated using Kabat numbering. For convenience, in Fig. 1 is a table listing some of the amino acid positions that will be referred to in the specification and their numbering according to some alternative numbering systems (such as Aho and IMGT. Note: unless expressly stated otherwise, for the present disclosure and claims, Kabat numbering is critical; other numbering systems are given by way of example only).
В отношении CDR’s, как хорошо известно в данной области техники, существует некоторое количество общепринятых способов для определения и описания CDR VH или VHH фрагмента, такие как определение по системе Kabat (которое основывается на вариабельности последовательности и является наиболее часто используемым) и по системе нумерации Chothia (которая основывается на расположении участков структурных петель). Например, можно сослаться на вебсайт http://www.bioinf.org.uk/abs/. Применительно к целям настоящего подробного описания и формулы изобретения, даже в том случае, когда CDR согласно Kabat также могут упоминаться, CDR наиболее предпочтительно определяются, исходя из определения Abm (которое основано на оксфордской программе молекулярного моделирования AbM антител), поскольку оно считается оптимальным компромиссом между определением по Kabat и Chothia. Снова можно сослаться на вебсайт http://www.bioinf.org.uk/abs/. With respect to CDR's, as is well known in the art, there are a number of conventional methods for defining and describing the CDR of a VH or VHH fragment, such as the Kabat system (which is based on sequence variability and is the most commonly used) and the Chothia numbering system. (which is based on the location of sections of structural loops). For example, the website http://www.bioinf.org.uk/abs/ can be referred to. For the purposes of this detailed description and claims, even though Kabat's CDRs may also be mentioned, CDRs are most preferably determined from the definition of Abm (which is based on the Oxford AbM Antibody Molecular Modeling Program) as it is considered to be an optimal compromise between definition according to Kabat and Chothia. Again the website http://www.bioinf.org.uk/abs/ can be referred to.
Соответственно, в настоящей заявке и формуле изобретения все CDR определяются в соответствии с методом Abm, если в данном описании точно не указано иное.Accordingly, in the present application and claims, all CDRs are determined in accordance with the Abm method, unless otherwise specifically stated in this specification.
ISVD (и, в частности, нанотела), которые могут связываться с сывороточным альбумином и варианты их использования хорошо известны в данной области техники, например, из WO 2004/041865, WO 2006/122787, WO 2012/175400, WO 2015/173325 и PCT/EP2016/077973, которые описывают связывающиеся с сывороточным альбумином ISVD и их использование для увеличения времени полужизни в сыворотке крови (как определено в этих заявках) терапевтических соединений, молекул и структур. Например, WO 2006/122787 раскрывает в виде SEQ ID NO: 62 гуманизированное нанотело, связывающееся с сывороточным альбумином, называемое Alb-8 (смотри SEQ ID NO:1 в этом описании). WO 2012/175400 раскрывает в виде SEQ ID NO: 6 гуманизированное нанотело, связывающееся с сывороточным альбумином, называемое Alb-23D (смотри SEQ ID NO:2 в этом описании). Аминокислотные последовательности Alb-8 и Alb-23D и их CDR (которые являются одинаковыми для Alb-8 и Alb-23D) предоставляются в таблице A ниже в виде SEQ ID NO: 1, 2 и 3 - 8, соответственно. ISVDs (and in particular nanobodies) that can bind to serum albumin and their uses are well known in the art, e.g. PCT/EP2016/077973 which describe serum albumin-binding ISVDs and their use to increase the serum half-life (as defined in these applications) of therapeutic compounds, molecules and structures. For example, WO 2006/122787 discloses in SEQ ID NO: 62 a humanized serum albumin-binding nanobody called Alb-8 (see SEQ ID NO: 1 in this specification). WO 2012/175400 discloses as SEQ ID NO: 6 a humanized serum albumin-binding nanobody called Alb-23D (see SEQ ID NO: 2 in this specification). The amino acid sequences of Alb-8 and Alb-23D and their CDRs (which are the same for Alb-8 and Alb-23D) are provided in Table A below as SEQ ID NOs: 1, 2 and 3-8, respectively.
Некоторые другие ссылки, раскрывающие ISVD против сывороточного альбумина, включают WO 2003/035694, WO 2004/003019, EP 2 139 918, WO 2011/006915 и WO 2014/111550.Some other references disclosing ISVD against serum albumin include WO 2003/035694, WO 2004/003019,
Фиг. 3A и 3B показывают выравнивание Alb-8 (эталон), Alb-23D (эталон), SEQ ID NO: 18 (изобретение) и SEQ ID NO: 19 (изобретение). Fig. 3A and 3B show an alignment of Alb-8 (reference), Alb-23D (reference), SEQ ID NO: 18 (invention) and SEQ ID NO: 19 (invention).
Цель настоящего изобретения – предоставить улучшенные вещества, связывающие сывороточный альбумин, и в частности, связывающие сывороточный альбумин вещества, обладающие улучшенными свойствами по сравнению с известными в данной области техники веществами, связывающими сывороточный альбумин. В частности, целью изобретения является предоставление веществ, связывающих сывороточный альбумин, способных связываться с собачьим сывороточным альбумином и/или имеющих улучшенную перекрестную реактивность между человеческим сывороточным альбумином и собачьим сывороточным альбумином (т.е. по сравнению с веществами, связывающими сывороточный альбумин, предшествующего уровня техники, такими как Alb-8 и/или Alb-23D).It is an object of the present invention to provide improved serum albumin binders, and in particular serum albumin binders, having improved properties compared to serum albumin binders known in the art. In particular, it is an object of the invention to provide serum albumin binders capable of binding to canine serum albumin and/or having improved cross-reactivity between human serum albumin and canine serum albumin (i.e. compared to prior art serum albumin binders). techniques such as Alb-8 and/or Alb-23D).
Таблица A. Alb-8, Alb-23D и их CDR Table A. Alb-8, Alb-23D and their CDRs
(WO 2006/122787; SEQ ID NO: 62)Alb-8
(WO 2006/122787; SEQ ID NO: 62)
(WO 2012/175400; SEQ ID NO: 6)Alb-23D
(WO 2012/175400; SEQ ID NO: 6)
- SEQ ID NO: 1 и 2 имеют одинаковые CDR согласно Kabat. Однако, если CDR определяются согласно методу Abm, SEQ ID NO: 1 имеет CDR1, отличный от SEQ ID NO: 2 по сравнению с SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 1 имеет S в положении 30 вместо R.
- SEQ ID NO:5 и SEQ ID NO:8 являются идентичными.
Все CDR определяются согласно методу Abm, если не указано иначе.Note:
- SEQ ID NO: 1 and 2 have the same CDR according to Kabat. However, if the CDRs are determined according to the Abm method, SEQ ID NO: 1 has a different CDR1 from SEQ ID NO: 2 compared to SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 1 has an S at
- SEQ ID NO:5 and SEQ ID NO:8 are identical.
All CDRs are determined according to the Abm method unless otherwise noted.
Таблица B. SEQ ID NO: 18 и 19 и их CDR Table B. SEQ ID NOs: 18 and 19 and their CDRs
(дикий тип)T0235002C06
(wild type)
Все CDR определяются согласно методу Abm, если не указано иначе.Note:
All CDRs are determined according to the Abm method unless otherwise noted.
В общем, связывающиеся с сывороточным альбумином ISVD, предоставленные настоящим изобретением, являются вариантами последовательностей SEQ ID NO:18 и 19, в том смысле, что: In general, the serum albumin-binding ISVDs provided by the present invention are variants of the sequences of SEQ ID NOS: 18 and 19, in the sense that:
- они имеют одинаковые CDR (или в основном одинаковые CDR) как последовательность SEQ ID NO:18 и/или 19 (при условии, что, если CDRs определяются согласно Kabat, CDR2 может быть AISQNSIHTYYANSVKG (SEQ ID NO:10) или AISQNSIHTYYADSVKG (SEQ ID NO:11)); и - they have the same CDR (or basically the same CDR) as the sequence of SEQ ID NO:18 and/or 19 (provided that if CDRs are defined according to Kabat, CDR2 may be AISQNSIHTYYANSVKG (SEQ ID NO:10) or AISQNSIHTYYADSVKG (SEQ ID NO:11)); And
- они имеют в какой-то мере идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO:18 и/или 19 (при этом степень идентичности последовательности представляет собой как описано в документе далее). - they have some degree of sequence identity with the sequence of SEQ ID NO:18 and/or 19 (the degree of sequence identity is as described in the document below).
В частности, связывающиеся с сывороточным альбумином ISVD, предоставленные настоящим изобретением, в большинстве случаев будут иметь (ограниченное) число “аминокислотных различий” (как описано в этом документе) по сравнению с последовательностью SEQ ID NO:18 и/или 19. Эти аминокислотные различия могут присутствовать в CDR (при условии, что полученные в результате аминокислотные последовательности в таком виде сохраняют дополнительные свойства аминокислотных последовательностей изобретения, которые изложены в этом документе) и/или присутствуют в каркасных участках и, в частности, могут присутствовать в каркасных участках (как определено согласно Kabat и/или согласно Abm). Например и без ограничения, эти аминокислотные различия могут, например, быть гуманизирующими заменами, заменами, улучшающими экспрессию в желательной клетке-хозяине или организме-хозяине, заменами, улучшающими стабильность и/или устойчивость к деградации и/или протеазам, мутациями, которые уменьшают связывание предсуществующими антителами, и/или другими мутациями, которые имеют целью оптимизацию последовательности аминокислотных последовательностей изобретения; или любой подходящей комбинацией таких аминокислотных различий. См. раскрытие далее в этом документе. In particular, the serum albumin-binding ISVDs provided by the present invention will in most cases have a (limited) number of “amino acid differences” (as described herein) compared to the sequence of SEQ ID NO:18 and/or 19. These amino acid differences may be present in CDRs (provided that the resulting amino acid sequences as such retain additional properties of the amino acid sequences of the invention as set forth herein) and/or present in framework regions and, in particular, may be present in framework regions (as defined according to Kabat and/or according to Abm). For example and without limitation, these amino acid differences may, for example, be humanizing substitutions, substitutions that improve expression in the desired host cell or host organism, substitutions that improve stability and/or resistance to degradation and/or proteases, mutations that reduce binding preexisting antibodies, and/or other mutations that aim to optimize the sequence of the amino acid sequences of the invention; or any suitable combination of such amino acid differences. See disclosure later in this document.
В первом аспекте изобретение имеет отношение к ISVD, который может связываться (и в частности, специфически связываться) с человеческим сывороточным альбумином, и который имеет: In a first aspect, the invention relates to an ISVD which can bind (and in particular bind specifically) to human serum albumin and which has:
- CDR1 (согласно Kabat), который представляет собой аминокислотную последовательность TYVMG (SEQ ID NO: 9) или аминокислотную последовательность, имеющую 2 или 1 аминокислотное различие(я) (как определено в описании) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 9; и- CDR1 (according to Kabat), which is the amino acid sequence of TYVMG (SEQ ID NO: 9) or an amino acid sequence having 2 or 1 amino acid difference(s) (as defined in the description) with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9; And
- CDR2 (согласно Kabat), который представляет собой аминокислотную последовательность AISQNSIHTYYANSVKG (SEQ ID NO:10) или AISQNSIHTYYADSVKG (SEQ ID NO:11) или аминокислотную последовательность, имеющую 3, 2 или 1 аминокислотное различие(я) (как определено в описании) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 10 и/или SEQ ID NO:11; и- CDR2 (according to Kabat), which is the amino acid sequence AISQNSIHTYYANSVKG (SEQ ID NO:10) or AISQNSIHTYYADSVKG (SEQ ID NO:11) or an amino acid sequence having 3, 2 or 1 amino acid difference(s) (as defined in the description) with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and/or SEQ ID NO:11; And
- CDR3 (согласно Kabat), который представляет собой аминокислотную последовательность SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14) или аминокислотную последовательность, имеющую 3, 2 или 1 аминокислотное различие(я) (как определено в описании) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 14.- CDR3 (according to Kabat), which is the amino acid sequence SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14) or an amino acid sequence having 3, 2 or 1 amino acid difference(s) (as defined in the description) with the amino acid sequence SEQ ID NO: 14.
В частности, связывающее сывороточный альбумин вещество согласно этому аспекту изобретения может быть (и предпочтительно является) как описано в этом документе далее.In particular, the serum albumin binding agent according to this aspect of the invention can be (and preferably is) as described hereinafter.
В более конкретном аспекте изобретение имеет отношение к ISVD, который может связываться (и в частности, специфически связываться) с человеческим сывороточным альбумином, и который имеет: In a more specific aspect, the invention relates to an ISVD that can bind (and in particular bind specifically) to human serum albumin, and which has:
- CDR1 (согласно Kabat), который представляет собой аминокислотную последовательность TYVMG (SEQ ID NO: 9); и- CDR1 (according to Kabat), which is the amino acid sequence of TYVMG (SEQ ID NO: 9); And
- CDR2 (согласно Kabat), который представляет собой аминокислотную последовательность AISQNSIHTYYANSVKG (SEQ ID NO:10) или AISQNSIHTYYADSVKG (SEQ ID NO:11); и - CDR2 (according to Kabat), which is the amino acid sequence AISQNSIHTYYANSVKG (SEQ ID NO:10) or AISQNSIHTYYADSVKG (SEQ ID NO:11); And
- CDR3 (согласно Kabat), который представляет собой аминокислотную последовательность SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14).- CDR3 (according to Kabat), which is the amino acid sequence SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14).
И в этом случае связывающее сывороточный альбумин вещество согласно этому аспекту изобретения может быть (и предпочтительно является) как описано в этом документе далее.Again, the serum albumin binding agent according to this aspect of the invention can be (and preferably is) as described hereinafter.
В другом аспекте изобретение имеет отношение к ISVD, который может связываться (и в частности, специфически связываться) с человеческим сывороточным альбумином, и который имеет: In another aspect, the invention relates to an ISVD that can bind (and in particular bind specifically) to human serum albumin, and which has:
- CDR1 (согласно Abm), который представляет собой аминокислотную последовательность GGTFSTYVMG (SEQ ID NO: 12) или аминокислотную последовательность, имеющую 2 или 1 аминокислотное различие(я) (как определено в описании) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 12; и- CDR1 (according to Abm), which is the amino acid sequence GGTFSTYVMG (SEQ ID NO: 12) or an amino acid sequence having 2 or 1 amino acid difference(s) (as defined in the description) with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12; And
- CDR2 (согласно Abm), который представляет собой аминокислотную последовательность AISQNSIHTY (SEQ ID NO: 13) или аминокислотную последовательность, имеющую 3, 2 или 1 аминокислотное различие(я) (как определено в описании) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 13; и- CDR2 (according to Abm), which is the amino acid sequence AISQNSIHTY (SEQ ID NO: 13) or an amino acid sequence having 3, 2 or 1 amino acid difference(s) (as defined in the description) with the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; And
- CDR3 (согласно Abm), который представляет собой аминокислотную последовательность SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14) или аминокислотную последовательность, имеющую 3, 2 или 1 аминокислотное различие(я) (как определено в описании) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 14.- CDR3 (according to Abm), which is the amino acid sequence SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14) or an amino acid sequence having 3, 2 or 1 amino acid difference(s) (as defined in the description) with the amino acid sequence SEQ ID NO: 14.
В частности, связывающее сывороточный альбумин вещество согласно этому аспекту изобретения может быть (и предпочтительно является) как описано в этом документе далее.In particular, the serum albumin binding agent according to this aspect of the invention can be (and preferably is) as described hereinafter.
В более конкретном аспекте изобретение имеет отношение к ISVD, который может связываться (и в частности, специфически связываться) с человеческим сывороточным альбумином, и который имеет: In a more specific aspect, the invention relates to an ISVD that can bind (and in particular bind specifically) to human serum albumin, and which has:
- CDR1 (согласно Abm), который представляет собой аминокислотную последовательность GGTFSTYVMG (SEQ ID NO: 12); и- CDR1 (according to Abm), which is the amino acid sequence GGTFSTYVMG (SEQ ID NO: 12); And
- CDR2 (согласно Abm), который представляет собой аминокислотную последовательность AISQNSIHTY (SEQ ID NO: 13); и - CDR2 (according to Abm), which is the amino acid sequence AISQNSIHTY (SEQ ID NO: 13); And
- CDR3 (согласно Abm), который представляет собой аминокислотную последовательность SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14).- CDR3 (according to Abm), which is the amino acid sequence SRFTSWYTADYEYDY (SEQ ID NO: 14).
И в этом случае, связывающее сывороточный альбумин вещество согласно этому аспекту изобретения может быть (и предпочтительно является) как описано в этом документе далее.Again, the serum albumin binding agent according to this aspect of the invention can be (and preferably is) as described hereinafter.
В общем, связывающие сывороточный альбумин вещества согласно разным аспектам изобретения предпочтительно являются такими, которые имеют:In general, serum albumin binding agents according to various aspects of the invention are preferably those which have:
- степень идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 18 и/или 19 (при этом CDR и любое C-концевое удлинение, которое может присутствовать, не принимаются во внимание при определении степени идентичности последовательности) по меньшей мере, 85%, предпочтительно, по меньшей мере, 90%, более предпочтительно, по меньшей мере, 95%;- a degree of sequence identity with the sequence of SEQ ID NO: 18 and/or 19 (while the CDR and any C-terminal extension that may be present are not taken into account in determining the degree of sequence identity) of at least 85%, preferably at least 90%, more preferably at least 95%;
и/или такими, которые имеют: and/or those that have:
и/или имеют не более чем 7, предпочтительно не более чем 5, например, только 3, 2 или 1, “аминокислотных различий” (как определено в описании, и не принимая во внимание CDR и любое C-концевое удлинение, которое может присутствовать) с последовательностью SEQ ID NO: 18 и/или 19.and/or have no more than 7, preferably no more than 5, e.g. only 3, 2, or 1, “amino acid differences” (as defined herein, and without regard to CDR and any C-terminal extension that may be present ) with the sequence SEQ ID NO: 18 and/or 19.
Связывающие сывороточный альбумин вещества согласно различным аспектам изобретения в целом предпочтительно являются такими веществами, которые могут связываться с человеческим сывороточным альбумином с константой диссоциации (KD) от 10-5 до 10-12 моль/литр или менее, и предпочтительно от 10-7 до 10-12 моль/литр или менее и более предпочтительно от 10-8 до 10-12 моль/литр, и/или с аффинностью связывания, по меньшей мере, 107 M-1, предпочтительно, по меньшей мере, 108 M-1, более предпочтительно по меньшей мере, 109 M-1, например, по меньшей мере, 1012 M-1, как определено при использовании ProteOn (см. Пример 1). Предпочтительно, связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения будет связываться с желательным антигеном с аффинностью менее чем 500 нМ, предпочтительно менее чем 200 нМ, более предпочтительно менее чем 10 нМ, например, менее чем 500 pM, и в этом случае, как определено при использовании (снова можно сослаться на Пример 1).The serum albumin binding agents according to various aspects of the invention are generally preferably those that can bind to human serum albumin with a dissociation constant (KD) of 10 -5 to 10 -12 mol/liter or less, and preferably 10 -7 to 10 -12 mol/liter or less and more preferably 10 -8 to 10 -12 mol/liter, and/or with a binding affinity of at least 10 7 M -1 , preferably at least 10 8 M -1 , more preferably at least 10 9 M -1 , for example at least 10 12 M -1 as determined using ProteOn (see Example 1). Preferably, the serum albumin-binding substance of the invention will bind to the desired antigen with an affinity of less than 500 nM, preferably less than 200 nM, more preferably less than 10 nM, such as less than 500 pM, and in this case, as determined by use (again you can refer to Example 1).
Связывающие сывороточный альбумин вещества согласно различным аспектам изобретения также предпочтительно являются такими веществами, которые конкурируют с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:18 за связывание с (человеческим) сывороточным альбумином и/или которые “перекрестно блокируют” (как определено в описании) связывание аминокислотной SEQ ID NO:18 с (человеческим) сывороточным альбумином.The serum albumin binding agents according to various aspects of the invention are also preferably those which compete with the amino acid sequence of SEQ ID NO:18 for binding to (human) serum albumin and/or which "cross-block" (as defined herein) the binding of the amino acid sequence of SEQ ID NO:18 with (human) serum albumin.
Таким образом, предпочтительно, связывающие альбумин вещества изобретения являются такими веществами, которые в основном связываются с теми же самыми аминокислотными остатками и/или эпитопом на человеческом сывороточном альбумине как SEQ ID NO:18, и даже более предпочтительно такими веществами, которые участвуют в одних и тех же взаимодействиях как SEQ ID NO:18. С этой целью, согласно конкретному, но не ограничивающему аспекту, связывающие альбумин вещества изобретения предпочтительно или имеют одинаковые CDR как последовательность SEQ ID NO:18, или по сравнению с последовательностью SEQ ID NO:18 предпочтительно содержат в пределах их CDR только такие мутации (такие как консервативные аминокислотные замены), которые по-прежнему позволяют им подвергаться тем же самым или в основном тем же самым взаимодействиям с человеческим сывороточным альбумином как SEQ ID NO:18.Thus, preferably, the albumin-binding substances of the invention are those that generally bind to the same amino acid residues and/or epitope on human serum albumin as SEQ ID NO:18, and even more preferably those that are involved in the same and the same interactions as SEQ ID NO:18. To this end, according to a specific but non-limiting aspect, the albumin-binding substances of the invention preferably either have the same CDRs as the sequence of SEQ ID NO:18, or, compared to the sequence of SEQ ID NO:18, preferably contain only such mutations within their CDRs (such as conservative amino acid substitutions) that still allow them to undergo the same or substantially the same interactions with human serum albumin as SEQ ID NO:18.
Вещества, связывающие сывороточный альбумин, согласно различным аспектам изобретения, как правило, предпочтительно являются перекрестно-реагирующими между человеческим сывороточным альбумином и сывороточным альбумином, по меньшей мере, одного, предпочтительно, по меньшей мере, двух, более предпочтительно, по меньшей мере, трех и практически для всех следующих видов млекопитающих: собака, крыса, мышь, кролик, морская свинка, свинья, овца, корова и яванский макак. В частности, вещества, связывающие сывороточный альбумин, согласно различным аспектам изобретения могут быть такими, которые являются (по меньшей мере) перекрестно-реагирующими между человеческим сывороточным альбумином и собачьим сывороточным альбумином, и предпочтительно также между человеческим сывороточным альбумином и/или собачьим сывороточным альбумином с одной стороны, и, по меньшей мере, одним, предпочтительно, по меньшей мере двумя, более предпочтительно со всеми тремя из крысиного сывороточного альбумина, мышиного сывороточного альбумина и сывороточного альбумина яванского макака с другой стороны. В этом отношении, вещества изобретения, связывающие сывороточный альбумин, могут обладать улучшенной перекрестной реакционной способностью (в частности, между человеческим сывороточным альбумином с одной стороны и собачьим сывороточным альбумином с другой стороны) по сравнению с связывающими сывороточный альбумин веществами, которые имеют (в основном) те же самые CDR как Alb-11 и/или Alb-23D. Можно сослаться на результаты в экспериментальной части ниже. Serum albumin binding agents according to various aspects of the invention are generally preferably cross-reactive between human serum albumin and serum albumin of at least one, preferably at least two, more preferably at least three and for virtually all of the following mammals: dog, rat, mouse, rabbit, guinea pig, pig, sheep, cow, and cynomolgus monkey. In particular, serum albumin binding agents according to various aspects of the invention may be those which are (at least) cross-reactive between human serum albumin and canine serum albumin, and preferably also between human serum albumin and/or canine serum albumin with on the one hand, and at least one, preferably at least two, more preferably all three of rat serum albumin, mouse serum albumin and cynomolgus serum albumin on the other hand. In this regard, serum albumin binding substances of the invention may have improved cross-reactivity (in particular between human serum albumin on the one hand and canine serum albumin on the other hand) compared to serum albumin binding substances that have (mostly) the same CDRs as Alb-11 and/or Alb-23D. You can refer to the results in the experimental part below.
Для справки, фиг. 5 предоставляет выравнивание сывороточного альбумина от разных видов млекопитающих (источник: http://macromoleculeinsights.com/albumin.php, нумерация аминокислот на фиг. 5 – это нумерация, использованная на указанной веб-странице). Для удобства, в последовательности человеческого сывороточного альбумина, участки аминокислот, которые предположительно являются частью предполагаемого эпитопа аминокислотных последовательностей изобретения, выделены. Не ограничиваясь каким-либо конкретным механизмом или гипотезой, предполагается, что аминокислотные последовательности изобретения являются (в основном) способными к связыванию (с одним или более аминокислотными остатками в этих пределах) с соответствующими участками аминокислотных остатков, которые присутствуют в аминокислотной последовательности тех сывороточных альбуминов млекопитающих, с которыми аминокислотные последовательности изобретения перекрестно-реагируют.For reference, Fig. 5 provides an alignment of serum albumin from different mammalian species (source: http://macromoleculeinsights.com/albumin.php, the amino acid numbering in FIG. 5 is the numbering used on said web page). For convenience, in the human serum albumin sequence, amino acid regions that are suspected to be part of the putative epitope of the amino acid sequences of the invention are highlighted. Without being limited to any particular mechanism or hypothesis, it is believed that the amino acid sequences of the invention are (generally) capable of binding (with one or more amino acid residues within this range) to the corresponding regions of the amino acid residues that are present in the amino acid sequence of those mammalian serum albumins. with which the amino acid sequences of the invention cross-react.
В общем, связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения может считаться перекрестно-реагирующим между человеческим сывороточным альбумином и сывороточным альбумином одного из этих видов, в том случае, когда оно может связываться с человеческим сывороточным альбумином с аффинностью менее, чем 500 нM, предпочтительно менее чем 200 нM, более предпочтительно менее чем 10 нM; и также с сывороточным альбумином от указанных видов с аффинностью менее чем 500 нM, предпочтительно менее чем 200 нM, более предпочтительно менее чем 10 нM, и в этом случае и то и другое устанавливается при использовании ProteOn (см. Пример 1).In general, a serum albumin-binding substance of the invention can be considered cross-reactive between human serum albumin and serum albumin of one of these species, in the case that it can bind to human serum albumin with an affinity of less than 500 nM, preferably less than 200 nM , more preferably less than 10 nM; and also with serum albumin from said species with an affinity of less than 500 nM, preferably less than 200 nM, more preferably less than 10 nM, in which case both are set using ProteOn (see Example 1).
Связывающие сывороточный альбумин вещества согласно различным аспектам изобретения также предпочтительно являются такими, что:The serum albumin binding agents according to various aspects of the invention are also preferably such that:
они имеют время полужизни в сыворотке у человека (выраженное в виде t1/2 бета), которое составляет более 6 часов, предпочтительно более 12 часов, более предпочтительно более чем 24 часа, даже более предпочтительно более чем 72 часа; например, около одной недели, двух недель и вплоть до времени полужизни сывороточного альбумина у человека (которое по оценкам составляет около 19 дней);they have a human serum half-life (expressed as t1/2 beta) that is greater than 6 hours, preferably greater than 12 hours, more preferably greater than 24 hours, even more preferably greater than 72 hours; for example, about one week, two weeks, and up to the half-life of human serum albumin (estimated to be about 19 days);
и/или такими что:and/or such that:
когда оно соединяется с лекарственным веществом или структурой, оно обеспечивает полученному в результате полипептиду изобретения время полужизни в сыворотке у человека (выраженное в виде t1/2 бета), которое составляет более 6 часов, предпочтительно более чем 12 часов, более предпочтительно более чем 24 часа, еще более предпочтительно более чем 72 часа; например, около одной недели, двух недель и вплоть до времени полужизни сывороточного альбумина у человека (которое по оценкам составляет около 19 дней).when coupled to a drug substance or structure, it provides the resulting polypeptide of the invention with a human serum half-life (expressed as t1/2 beta) that is greater than 6 hours, preferably greater than 12 hours, more preferably greater than 24 hours , even more preferably more than 72 hours; for example, about one week, two weeks, and up to the half-life of human serum albumin (estimated to be about 19 days).
Время полужизни у видов млекопитающих, отличных от человека, наряду с другими факторами, будет главным образом зависеть от свойств связывания (таких как аффинность) связывающего альбумин вещества изобретения в отношении сывороточного альбумина от указанных видов млекопитающих, а также от времени полужизни интактного сывороточного альбумина у указанных видов. Согласно предпочтительному варианту осуществления изобретения, когда связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения является перекрестно-реагирующим (как определено в описании) между человеческим сывороточным альбумином и сывороточным альбумином от других видов млекопитающих, тогда время полужизни связывающего сывороточный альбумин вещества изобретения (и/или соединения изобретения, содержащего связывающее сывороточный альбумин вещество), определенное у указанных видов, составляет предпочтительно, по меньшей мере, 5%, например, по меньшей мере, 10%, более предпочтительно, по меньшей мере, 25%, например, около 50% и по возможности до 100% от периода полужизни нативного сывороточного альбумина у указанных видов.The half-life in non-human mammalian species, among other factors, will mainly depend on the binding properties (such as affinity) of the albumin-binding substance of the invention for serum albumin from said mammalian species, as well as the half-life of intact serum albumin in said types. According to a preferred embodiment of the invention, when the serum albumin-binding substance of the invention is cross-reactive (as defined herein) between human serum albumin and serum albumin from other mammalian species, then the half-life of the serum albumin-binding substance of the invention (and/or a compound of the invention containing serum albumin binding substance) determined in said species is preferably at least 5%, for example at least 10%, more preferably at least 25%, for example about 50% and possibly up to 100 % of the half-life of native serum albumin in the indicated species.
По сравнению с последовательностью SEQ ID NO:18 связывающие сывороточный альбумин вещества изобретения предпочтительно также содержат (по меньшей мере):Compared to the sequence of SEQ ID NO:18, the serum albumin binding substances of the invention preferably also contain (at least):
- одну или более гуманизирующих замен;- one or more humanizing substitutions;
и/или and/or
одну или более мутаций (т.е. аминокислотных замен, делеций или вставок, и в частности, замен), которые уменьшают связывание предсуществующими антителами;one or more mutations (ie, amino acid substitutions, deletions or insertions, and in particular substitutions) that reduce binding by preexisting antibodies;
и могут необязательно содержать одну или более дополнительных мутаций, как описано в этом документе.and may optionally contain one or more additional mutations as described in this document.
Что касается подходящих гуманизирующих замен (и подходящих их комбинаций), можно сделать ссылку на WO 09/138519 (или в известном уровне техники по данным WO 09/138519) и WO 08/020079 (или в известном уровне техники по данным WO 08/020079), а также таблицы с A-3 по A-8 из WO 08/020079 (которые представляют собой списки возможных гуманизирующих замен). Некоторыми предпочтительными, но не ограничивающими примерами таких гуманизирующих замен являются Q108L и A14P или подходящие их комбинации. Такие гуманизирующие замены также могут быть подходящим образом скомбинированы с одной или более другими мутациями, как описано в этом документе (например, одной или более мутациями, уменьшающими связывание с предсуществующими антителами).With regard to suitable humanizing substitutions (and suitable combinations thereof), reference may be made to WO 09/138519 (or the prior art according to WO 09/138519) and WO 08/020079 (or the prior art according to WO 08/020079 ), as well as tables A-3 to A-8 of WO 08/020079 (which are lists of possible humanizing substitutions). Some preferred, but non-limiting examples of such humanizing substitutions are Q108L and A14P, or suitable combinations thereof. Such humanizing substitutions may also be appropriately combined with one or more other mutations as described herein (eg, one or more mutations that reduce binding to preexisting antibodies).
Что касается подходящих мутаций, которые могут уменьшать связывание предсуществующими антителами (и подходящих комбинаций таких мутаций), можно сослаться, например, на WO 2012/175741 и WO 2015/173325, а также, например, на WO 2013/024059 и WO 2016/118733. Как описано в этом документе, такие мутации могут содержать (подходящую комбинацию) одну или более аминокислотных замен, делеций или вставок (и, в частности, замен), при этом мутации часто будут находиться в так называемом C-концевом участке ISV. Например, такие мутации могут содержать мутации (и в частности замены) в одном или более из положений 11, 13, 14, 15, 40, 41, 42, 82, 82a, 82b, 83, 84, 85, 87, 88, 89, 103, 108 и/или мутации в одном или более положений в C-концевой VTVSS последовательности (т.е. положениях 109, 110, 111, 112 и 113), причем одна или более мутаций в положениях 11, 89, 110 и/или 112 являются особенно предпочтительными. Некоторыми предпочтительными неограничивающими примерами таких мутаций являются соответствующие замены (где это требуется), так что после замены в указанном положении присутствует один из следующих аминокислотных остатков: 11L, 11K, 11V, 14A, 14P, 41A, 41L, 41P, 41S, 41T, 42E, 42G, 87A, 87T, 89A, 89L, 89T, 108L, 110K, 110Q, 112K и/или 112Q (при этом 11L, 89A, 89L, 89T, 110K, 110Q, 112K и 112Q являются особенно предпочтительными); или любая подходящая комбинация таких замен, такая как, например и без ограничения: 11V в комбинации с 89L или 89T; 11V в комбинации с 110K или 110Q; или 11V в комбинации с 89L и 110K или 110Q. Такие мутации, которые уменьшают связывание предсуществующими антителами, также могут быть соответствующим образом скомбинированы с одной или более другими мутациями, как описано в этом документе (например, с одной или более гуманизирующими заменами).With regard to suitable mutations that can reduce binding by preexisting antibodies (and suitable combinations of such mutations), reference may be made to, for example, WO 2012/175741 and WO 2015/173325, and also to, for example, WO 2013/024059 and WO 2016/118733 . As described in this document, such mutations may contain (suitable combination) one or more amino acid substitutions, deletions or insertions (and, in particular, substitutions), and the mutations will often be in the so-called C-terminal region of the ISV. For example, such mutations may contain mutations (and in particular substitutions) at one or more of
При необходимости (как описывается далее и, в частности, когда вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, присутствует на и/или образует C-концевую область соединения изобретения, в которой оно присутствует), для уменьшения связывания предсуществующими антителами, вещества изобретения, связывающие сывороточный альбумин (и, как описывается далее, также соединения изобретения) также могут содержать C-концевое удлинение (например, C-концевой остаток аланина). Как описано в WO 2012/175741, такое C-концевое удлинение уменьшает связывание предсуществующими антителами. Подходящее C-концевое удлинение в общем порядке может быть дополнительно описано в этом документе и может, в частности, иметь формулу -(X)n, в которой X может быть любой существующей в природе аминокислотой (но предпочтительно не цистеином), и n может быть 1, 2, 3, 4 или 5. Вновь можно сослаться на WO 2012/175741, а также, например, на WO 2015/173325, WO 2013/024059 и WO 2016/118733. Присутствие такого C-концевого удлинения также может быть подходящим образом скомбинировано с одной или более из числа других мутаций, описанных в этом документе (например, одной или более гуманизирующих замен и/или одной или более мутаций, уменьшающих связывание предсуществующими антителами).Optionally (as described below and in particular when the serum albumin binding substance of the invention is present on and/or forms the C-terminal region of the compound of the invention in which it is present) to reduce binding by preexisting antibodies, the serum albumin binding substances of the invention (and, as described below, also the compounds of the invention) may also contain a C-terminal extension (eg, a C-terminal alanine residue). As described in WO 2012/175741, this C-terminal extension reduces binding by pre-existing antibodies. A suitable C-terminal extension in general terms may be further described herein and may in particular be of the formula -(X) n in which X may be any naturally occurring amino acid (but preferably not cysteine) and n may be 1, 2, 3, 4 or 5. Again, reference may be made to WO 2012/175741 and also, for example, WO 2015/173325, WO 2013/024059 and WO 2016/118733. The presence of such a C-terminal extension may also be appropriately combined with one or more of the other mutations described herein (eg, one or more humanizing substitutions and/or one or more mutations that reduce binding to preexisting antibodies).
Другие мутации, которые могут присутствовать в веществах изобретения, связывающих сывороточный альбумин, например и без ограничения, включают одну или более мутаций (в частности, замен), которые улучшают экспрессию в желательной клетке-хозяине или организме-хозяине, одну или более мутаций (и в частности, замен), которые улучшают стабильность и/или устойчивость к деградации и/или протеазам, и/или одну или более других мутаций, которые предназначаются для оптимизации аминокислотной последовательности изобретения (например, и без ограничения, одну или более мутаций, которые (дополнительно) уменьшают какую-либо тенденцию веществ, связывающих сывороточный альбумин, образовывать димеры); или любые подходящие комбинации таких мутаций.Other mutations that may be present in serum albumin-binding substances of the invention include, for example and without limitation, one or more mutations (particularly substitutions) that enhance expression in the desired host cell or host organism, one or more mutations (and in particular, substitutions) that improve stability and/or resistance to degradation and/or proteases, and/or one or more other mutations that are intended to optimize the amino acid sequence of the invention (for example, and without limitation, one or more mutations that ( additionally) reduce any tendency of serum albumin-binding substances to form dimers); or any suitable combination of such mutations.
Некоторыми неограничивающими примерами таких мутаций являются подходящие замены (в случае необходимости), такие, что после мутации в указанном положении присутствует один из следующих аминокислотных остатков: 16G, 49A, 61D, 74S, 75K, 76N, 82M и 83R; или любая подходящая комбинация таких замен (например, для того, чтобы сформировать SKN мотив в положениях 74-76). Также, при необходимости (как описано далее в этом документе), вещества изобретения, связывающие сывороточный альбумин, могут иметь D в положении 1 (т.е. E1D мутацию по сравнению с последовательностью SEQ ID NO:18 и/или 19), в частности, когда вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, присутствует на и/или образует N-концевую область соединения изобретения, в котором которой оно присутствует. Такие мутации снова могут быть соответствующим образом скомбинированы с одной или более другими мутациями, описанными в документе (например, с одной или более гуманизирующими заменами и/или одной или более мутациями, уменьшающими связывание с предсуществующими антителами).Some non-limiting examples of such mutations are suitable substitutions (if necessary), such that after the mutation at the indicated position, one of the following amino acid residues is present: 16G, 49A, 61D, 74S, 75K, 76N, 82M and 83R; or any suitable combination of such substitutions (eg, to form the SKN motif at positions 74-76). Also, if desired (as described later in this document), the serum albumin binding substances of the invention may have a D at position 1 (i.e. an E1D mutation compared to the sequence of SEQ ID NO:18 and/or 19), in particular when the serum albumin-binding substance of the invention is present at and/or forms the N-terminal region of the compound of the invention in which it is present. Such mutations can again be appropriately combined with one or more other mutations described herein (eg, one or more humanizing substitutions and/or one or more mutations that reduce binding to preexisting antibodies).
Другие мутации, которые могут присутствовать в аминокислотных последовательностях изобретения, станут очевидны специалистам, исходя из данного раскрытия.Other mutations that may be present in the amino acid sequences of the invention will become apparent to those skilled in the art from this disclosure.
Также возможно, что отдельная мутация (или подходящая комбинация мутаций) обеспечивает некоторые функциональные возможности или преимущества. Например, и без ограничения, гуманизирующая Q108L замена также может уменьшать связывание предсуществующими антителами.It is also possible that a single mutation (or a suitable combination of mutations) provides some functionality or advantage. For example, and without limitation, a humanizing Q108L substitution can also reduce binding by preexisting antibodies.
Некоторые предпочтительные, но не ограничивающие примеры аминокислотных остатков (т.е. мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:18), которые могут присутствовать в аминокислотных последовательностях изобретения (т.е. сами по себе или в подходящей комбинации) включают: 11V (т.е. L11V), 14P (т.е. A14P), 16G (т.е. D16G), 49A (т.е. S49A), 61D (т.е. N61D), 74S (т.е. D74S), 82M (т.е. L82M), 83R (т.е. K83R), 89L (т.е.V89L), 89T (т.е.V89T), 110K (например, T110K) или 110Q (например, T110Q); а также, где это необходимо (как далее описано в этом документе), 1D (например E1D) и/или C-концевое удлинение (X)n, как определено в этом документе (такое как 114A). Можно сделать ссылку на последовательности и мутации, показанные на фиг. 4A и 4B. Например, некоторые предпочтительные, но не ограничивающие примеры подходящих комбинаций таких аминокислотных остатков (т.е. мутаций по сравнению с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:18) включают: Some preferred, but non-limiting examples of amino acid residues (i.e., mutations compared to the amino acid sequence of SEQ ID NO:18) that may be present in the amino acid sequences of the invention (i.e., alone or in a suitable combination) include: 11V (i.e. L11V), 14P (i.e. A14P), 16G (i.e. D16G), 49A (i.e. S49A), 61D (i.e. N61D), 74S (i.e. D74S), 82M (i.e. L82M), 83R (i.e. K83R), 89L (i.e. V89L), 89T (i.e. V89T), 110K (i.e. T110K) or 110Q (i.e., T110Q); and also, where appropriate (as further described in this document), 1D (eg E1D) and/or C-terminal extension (X) n as defined in this document (such as 114A). Reference may be made to the sequences and mutations shown in FIG. 4A and 4B. For example, some preferred, but non-limiting examples of suitable combinations of such amino acid residues (i.e., mutations compared to the amino acid sequence of SEQ ID NO:18) include:
- L11V,T14P,D16G,N61D,D74S,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,N61D,D74S,K83R,V89L
- L11V,T14P,D16G,D74S,L82M,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,D74S,L82M,K83R,V89L
- L11V,T14P,D16G,N61D,D74S,L82M,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,N61D,D74S,L82M,K83R,V89L
- L11V,T14P,D16G,S49A,D74S,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,S49A,D74S,K83R,V89L
- L11V,T14P,D16G,S49A,N61D,D74S,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,S49A,N61D,D74S,K83R,V89L
- L11V,T14P,D16G,S49A,D74S,L82M,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,S49A,D74S,L82M,K83R,V89L
- L11V,T14P,D16G,S49A,N61D,D74S,L82M,K83R,V89L- L11V,T14P,D16G,S49A,N61D,D74S,L82M,K83R,V89L
- L11V,T14P,D74S,K83R,V89L- L11V,T14P,D74S,K83R,V89L
и другие подходящие комбинации станут понятны специалистам, исходя из данного раскрытия.and other suitable combinations will become apparent to those skilled in the art from this disclosure.
Некоторыми предпочтительными, но не ограничивающими аминокислотными последовательностями изобретения являются такие, в которых (i) положение 11 представляет собой V, и положение 89 представляет собой L; (ii) положение 89 представляет собой T; (iii) положения 74-76 формируют SKN мотив; (iv) положение 11 представляет собой V, положение 89 представляет собой L, и положения 74-76 формируют SKN мотив; и (iv) положение 89 представляет собой T и положения 74-76 формируют SKN мотив; при этом аминокислотные последовательности изобретения являются такими, как описано далее в этом документе (и соответственно могут также содержать одну или более дополнительных аминокислотных мутаций, как описано в этом документе).Some preferred, but non-limiting, amino acid sequences of the invention are those in which (i)
Некоторые предпочтительные, но не ограничивающие примеры аминокислотных последовательностей изобретения представлены на фиг. 2 как:Some preferred, but non-limiting, examples of the amino acid sequences of the invention are shown in FIG. 2 as:
- SEQ ID NO: 18 - 26, которые являются примерами аминокислотных последовательностей изобретения без C-концевого удлинения аланином; - SEQ ID NO: 18 - 26, which are examples of the amino acid sequences of the invention without alanine C-terminal extension;
- SEQ ID NO: 27 - 35, которые являются примерами аминокислотных последовательностей изобретения с C-концевым удлинением (в каждом случае, примером может послужить C-концевое удлинение аланином, которое, в общем, является предпочтительным C-концевым удлинением); и - SEQ ID NO: 27 - 35, which are examples of the amino acid sequences of the invention with a C-terminal extension (in each case, an example would be the C-terminal extension of alanine, which, in general, is the preferred C-terminal extension); And
- SEQ ID NO: 36 - 44, которые являются примерами аминокислотных последовательностей изобретения без N-концевой E1D мутации).- SEQ ID NO: 36 - 44, which are examples of the amino acid sequences of the invention without the N-terminal E1D mutation).
Исходя из раскрытия, предоставленного в этом документе, специалисту будет понятно, что на практике:Based on the disclosure provided in this document, the person skilled in the art will understand that in practice:
- связывающие альбумин вещества изобретения с C-концевым удлинением (например, такие как SEQ ID NO: 27 - 35) часто будут использоваться как/присутствовать на C-концевом участке полипептидов изобретения (как определено в описании), в которых они имеются;albumin-binding substances of the invention with a C-terminal extension (eg, such as SEQ ID NO: 27-35) will often be used as/present at the C-terminus of the polypeptides of the invention (as defined herein) in which they are present;
- связывающие альбумин вещества изобретения с E1D мутацией (такой как, в том числе SEQ ID NO: 36 - 44) часто будут использоваться как/присутствовать на C-концевом участке полипептидов изобретения, в которых они имеются;albumin-binding substances of the invention with an E1D mutation (such as, including SEQ ID NOs: 36-44) will often be used as/present at the C-terminus of the polypeptides of the invention in which they are present;
- связывающие альбумин вещества изобретения без C-концевого удлинения и без E1D мутации (такой как, в том числе SEQ ID NO: 18 - 26) часто будут присутствовать где-нибудь в “середине” полипептида изобретения.albumin-binding substances of the invention without a C-terminal extension and without an E1D mutation (such as including SEQ ID NOs: 18-26) will often be present somewhere in the "middle" of the polypeptide of the invention.
Каждая из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 18 - 44, а также протеины, полипептиды и другие соединения и конструкции, содержащие таковые (как описано также в этом документе далее), формируют дополнительные аспекты настоящего изобретения.Each of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 18-44, as well as proteins, polypeptides and other compounds and constructs containing the same (as also described hereinafter), form additional aspects of the present invention.
В следующем аспекте изобретение имеет отношение к аминокислотной последовательности, которая представляет собой одну из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, и/или SEQ ID NO:44; и каждая из этих аминокислотных последовательностей изобретения (а также полипептиды изобретения – как определено в описании – которые содержат такие аминокислотные последовательности изобретения) формируют дополнительный аспект настоящего изобретения.In a further aspect, the invention relates to an amino acid sequence which is one of the amino acid sequences of SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO :23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:31 , SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, and/or SEQ ID NO:44; and each of these amino acid sequences of the invention (as well as the polypeptides of the invention - as defined herein - which comprise such amino acid sequences of the invention) form a further aspect of the present invention.
Как также описано в этом документе, аминокислотные последовательности, предоставленные изобретением, являются протеинами, которые могут связываться и, в частности, специфически (как описано в этом документе) связываться с человеческим сывороточным альбумином. Таким образом, они могут использоваться как связывающие единицы или связывающие домены для связывания с (человеческим) сывороточным альбумином, например, чтобы обеспечить увеличение времени полужизни (как определено в этом документе) терапевтическим соединениям, молекулам или структурам. В отношении использования доменов, связывающих сывороточный альбумин, с целью увеличения времени полужизни терапевтических соединений, молекул или структур, можно сделать ссылку на WO 2004/041865, WO 2006/122787, EP 2 139 918, WO 2011/006915, WO 2012/175400 и/или WO 2014/111550. Вещества изобретения, связывающие сывороточный альбумин, могут в большинстве случаев использоваться в том же порядке и для тех же целей, как вещества, связывающие сывороточный альбумин, описанные в этих ссылках. As also described in this document, the amino acid sequences provided by the invention are proteins that can bind and, in particular, specifically (as described in this document) bind to human serum albumin. Thus, they can be used as binding units or binding domains for binding to (human) serum albumin, for example, to provide an increase in the half-life (as defined in this document) of therapeutic compounds, molecules or structures. With regard to the use of serum albumin binding domains to increase the half-life of therapeutic compounds, molecules or structures, reference may be made to WO 2004/041865, WO 2006/122787,
В некоторых дополнительных неограничивающих аспектах изобретение также имеет отношение к:In some additional non-limiting aspects, the invention also relates to:
- белкам, полипептидам и другим конструкциям, молекулам или химическим соединениям, содержащим или состоящим в основном по меньшей мере из одного связывающего сывороточный альбумин вещества изобретения, как описано в этом документе (и в этом случае также называемым “соединения изобретения” или “полипептиды изобретения”); - proteins, polypeptides and other constructs, molecules or chemical compounds containing or consisting essentially of at least one serum albumin-binding substance of the invention as described in this document (and in this case also referred to as "compounds of the invention" or "polypeptides of the invention" );
- способам экспрессии/продуцирования связывающего сывороточный альбумин вещества изобретения и/или соединения изобретения;- methods for expressing/producing a serum albumin-binding substance of the invention and/or a compound of the invention;
- клетке-хозяину, организму-хозяину или другой системе экспрессии, которая может экспрессировать или продуцировать связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения и/или соединение изобретения;a host cell, host organism, or other expression system that can express or produce a serum albumin-binding substance of the invention and/or a compound of the invention;
- композициям и продуктам (таким как фармацевтические композиции и продукты), содержащим вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и/или соединение изобретения;- compositions and products (such as pharmaceutical compositions and products) containing a serum albumin-binding substance of the invention and/or a compound of the invention;
- нуклеотидным последовательностям и нуклеиновым кислотам, таким как векторы (экспрессирующие), которые кодируют вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и/или соединения изобретения;- nucleotide sequences and nucleic acids, such as vectors (expressing) that encode a serum albumin-binding substance of the invention and/or compounds of the invention;
- использованию соединений изобретения и/или соединений изобретения, такому как использование соединения изобретения с целью увеличения времени полужизни (в сыворотке) терапевтических соединений, молекул или структур и терапевтическое и/или профилактическое использование соединения изобретения.- the use of the compounds of the invention and/or compounds of the invention, such as the use of a compound of the invention to increase the half-life (serum) of therapeutic compounds, molecules or structures and the therapeutic and/or prophylactic use of a compound of the invention.
Эти и дополнительные аспекты, варианты осуществления, преимущества, сферы применения и варианты использования изобретения станут понятны из дальнейшего описания.These and additional aspects, embodiments, advantages, applications and uses of the invention will become apparent from the following description.
В настоящем подробном описании:In this detailed description:
- термин “одиночный вариабельный домен иммуноглобулина” (также называется “ISV” или “ISVD”) обычно используется для упоминания вариабельных доменов иммуноглобулина (которые могут быть доменами тяжелой цепи или легкой цепи, включая VH, VHH или VL домены), которые могут образовывать функциональные участки связывания антигена без взаимодействия с другим вариабельным доменом (например, без VH/VL взаимодействия, как требуется между VH и VL доменами обычного 4-цепочечного моноклонального антитела). Примеры ISVD будут понятны специалистам и, например, включают нанотела (включая VHH, гуманизированный VHH и/или VHs, такие как камелизованные человеческие VHs), IgNAR, домены, (однодоменные) антитела (такие как dAbs™), которые являются VH доменами или которые происходят от VH домена и (однодоменные) антитела (такие как dAbs™), которые являются VL доменами или которые происходят от VL домена. Если в данном описании точно не упомянуто иное, ISVD, которые были основаны на и/или получены из вариабельных доменов тяжелой цепи (таких как VH или VHH домены), в большинстве случаев являются предпочтительными. Если в описании точно не указано иначе, наиболее предпочтительно ISVD является нанотелом;- the term “immunoglobulin single variable domain” (also called “ISV” or “ISVD”) is commonly used to refer to immunoglobulin variable domains (which can be heavy chain or light chain domains, including VH, VHH or VL domains) that can form functional antigen binding sites without interaction with another variable domain (eg, without VH/VL interaction, as required between the VH and VL domains of a conventional 4-chain monoclonal antibody). Examples of ISVDs will be understood by those skilled in the art and, for example, include nanobodies (including VHH, humanized VHH and/or VHs such as camelized human VHs), IgNARs, domains, (single domain) antibodies (such as dAbs™) that are VH domains or that are derived from the VH domain and (single domain) antibodies (such as dAbs™) that are VL domains or that are derived from the VL domain. Unless specifically mentioned otherwise in this specification, ISVDs that have been based on and/or derived from heavy chain variable domains (such as VH or VHH domains) are generally preferred. Unless the description expressly states otherwise, most preferably the ISVD is a nanobody;
- термин “нанотело” представляет собой, как описано в WO 2008/020079 или WO 2009/138519, и, таким образом, в конкретном аспекте в большинстве случаев обозначает VHH, гуманизированный VHH или камелизованный VH (такой как камелизованный человеческий VH) или в большинство случаев последовательность, оптимизированную VHH (такую как например, оптимизированную для химической устойчивости и/или растворимости, максимального перекрывания с известными человеческими каркасными участками и максимальной экспрессии). Следует отметить, что термины нанотело или нанотела являются зарегистрированными товарными знаками Ablynx N.V. и таким образом также могут называться Нанотело® и/или Нанотела®);- the term "nanobody" is as described in WO 2008/020079 or WO 2009/138519, and thus, in a specific aspect, in most cases means VHH, humanized VHH or camelized VH (such as camelized human VH) or in most cases cases, a sequence optimized by VHH (such as, for example, optimized for chemical stability and/or solubility, maximum overlap with known human frameworks, and maximum expression). It should be noted that the terms nanobody or nanobodies are registered trademarks of Ablynx N.V. and thus may also be referred to as Nanobody® and/or Nanobody®);
- как правило, если в описании точно не указано иначе, ISVD, нанотела, полипептиды, протеины и другие соединения и конструкции, упомянутые в описании, предназначаются для использования в профилактике или при лечении болезней или нарушений у человека (и/или необязательно также теплокровных животных и, в частности, млекопитающих). Таким образом, в большинстве случаев ISVD, нанотела, полипептиды, протеины и другие соединения и конструкции, описанные в этом документе, предпочтительно являются такими, что они могут использоваться в качестве, и/или могут быть частью (биологического) лекарственного средства или другого фармацевтически или терапевтически активного соединения и/или фармацевтического продукта или композиции. Такое лекарственное средство, соединение или продукт предпочтительно является таким, что оно пригодно для введения человеку, например, для профилактики или лечения нуждающегося в такой профилактике или лечении субъекта или, например, как часть клинических испытаний. Как описывается в этом документе далее, для этой цели подобное лекарственное средство или соединение может содержать другие молекулы, фрагменты или участки связывания помимо ISVD, предоставленных изобретением (которые, как также описано в этом документе, могут быть, например, одним или более другими дополнительными лекарственными веществами и/или одним или более другими веществами, которые оказывают влияние на фармакокинетические и фармакодинамические свойства биологического препарата на основе ISVD или нанотел, такого как их время полужизни). Подходящие примеры таких дополнительных терапевтических или других молекул будут понятны специалисту, и, например, обычно могут включать любой терапевтически активный белок, полипептид или другой домен связывания или единицу связывания, а также, например, модификации, такие как описанные на страницах 149 - 152 WO 2009/138159. Биологический препарат на основе ISVD или нанотела предпочтительно является терапевтическим или предназначается для использования в качестве терапевтического (что включает профилактику и диагностику) и для этой цели предпочтительно содержит, по меньшей мере, один ISVD против терапевтически значимой мишени (такой как, например, RANK-L, vWF, IgE, RSV, CXCR4, IL-23 или другие интерлейкины и т.д.). Что касается некоторых конкретных, но неограничивающих примеров таких биологических препаратов на основе ISVD или нанотел, можно сослаться на Примеры 8 - 18 и также, например, на различные заявки Ablynx N.V. (такие как, например и без ограничения, WO 2004/062551, WO 2006/122825, WO 2008/020079 и WO 2009/068627), а также, например, (и без ограничения) на такие заявки как WO 2006/038027, WO 2006/059108, WO 2007/063308, WO 2007/063311, WO 2007/066016 и WO 2007/085814. Также, как описано в этом документе, дополнительная молекула может быть ISVD или нанотелом, как описано в этом документе, направленным против (человеческого) сывороточного белка, такого как (человеческий) сывороточный альбумин, и такой ISVD или нанотело также могут найти терапевтическое применение, в частности, в и/или для увеличения времени полужизни TNF-связывающих веществ, описанных в этом документе. Для справки можно сделать ссылку, например, на WO 2004/041865, WO 2006/122787 и WO 2012/175400, которые в общем описывают использование нанотел, связывающих сывороточный альбумин, для увеличения времени полужизни. Кроме того, в настоящем подробном описании, если в описании явным образом не указано иначе, все термины, упоминаемые в описании, имеют значение, данное в WO 2009/138519 (или в предшествующем уровне техники, цитированном в WO 2009/138519) или WO 2008/020079 (или в предшествующем уровне техники, цитированном в WO 2008/020079). Также, в том случае, если метод или технический прием точно не описан в этом документе, он может быть осуществлен, как описано в WO 2009/138519 (или в предшествующем уровне техники, цитированном в WO 2009/138519) или WO 2008/020079 (или в предшествующем уровне техники, цитированном в WO 2008/020079). Также, как описано в этом документе, любой фармацевтический продукт или композиция, содержащая любой ISVD или соединение изобретения, может также содержать один или более дополнительных компонентов, широко известных для использования в фармацевтических продуктах или композициях (т.е. в зависимости от предполагаемой фармацевтической формы) и/или, например, один или более других соединений или активных веществ, предназначенных для терапевтического использования (т.е. чтобы обеспечить комбинированный продукт). - as a rule, unless the description expressly states otherwise, ISVDs, nanobodies, polypeptides, proteins and other compounds and constructs mentioned in the description are intended for use in the prevention or treatment of diseases or disorders in humans (and / or optionally also warm-blooded animals and, in particular, mammals). Thus, in most cases, ISVDs, nanobodies, polypeptides, proteins and other compounds and constructs described in this document are preferably such that they can be used as, and/or can be part of a (biological) drug or other pharmaceutical or therapeutically active compound and/or pharmaceutical product or composition. Such drug, compound, or product is preferably such that it is suitable for administration to a human, for example, for the prophylaxis or treatment of a subject in need of such prophylaxis or treatment, or, for example, as part of a clinical trial. As described hereinafter, for this purpose, such a drug or compound may contain other molecules, fragments or binding sites in addition to the ISVDs provided by the invention (which, as also described in this document, may be, for example, one or more other additional drugs substances and/or one or more other substances that affect the pharmacokinetic and pharmacodynamic properties of the ISVD or nanobodies biological product, such as their half-life). Suitable examples of such additional therapeutic or other molecules will be understood by those skilled in the art, and, for example, may typically include any therapeutically active protein, polypeptide, or other binding domain or binding unit, as well as, for example, modifications such as those described on pages 149-152 of WO 2009 /138159. The ISVD or nanobody biological is preferably therapeutic or intended for use as a therapeutic (which includes prophylaxis and diagnosis) and for this purpose preferably contains at least one ISVD against a therapeutically relevant target (such as, for example, RANK-L , vWF, IgE, RSV, CXCR4, IL-23 or other interleukins, etc.). For some specific but non-limiting examples of such ISVD or nanobody based biologicals, reference may be made to Examples 8 to 18 and also, for example, to the various applications of Ablynx N.V. (such as, for example and without limitation, WO 2004/062551, WO 2006/122825, WO 2008/020079 and WO 2009/068627) and also, for example (and without limitation) such applications as WO 2006/038027, WO 2006/059108, WO 2007/063308, WO 2007/063311, WO 2007/066016 and WO 2007/085814. Also, as described herein, the additional molecule may be an ISVD or nanobody as described herein directed against a (human) serum protein such as (human) serum albumin, and such an ISVD or nanobody may also find therapeutic applications, in in particular, in and/or to increase the half-life of TNF binders described in this document. Reference may be made, for example, to WO 2004/041865, WO 2006/122787 and WO 2012/175400 which generally describe the use of serum albumin-binding nanobodies to increase half-life. In addition, in this detailed description, unless expressly stated otherwise in the description, all terms mentioned in the description have the meaning given in WO 2009/138519 (or in the prior art cited in WO 2009/138519) or WO 2008 /020079 (or in the prior art cited in WO 2008/020079). Also, in the event that a method or technique is not explicitly described in this document, it may be carried out as described in WO 2009/138519 (or the prior art cited in WO 2009/138519) or WO 2008/020079 ( or in the prior art cited in WO 2008/020079). Also, as described herein, any pharmaceutical product or composition containing any ISVD or compound of the invention may also contain one or more additional ingredients commonly known for use in pharmaceutical products or compositions (i.e., depending on the intended pharmaceutical form ) and/or, for example, one or more other compounds or active substances intended for therapeutic use (ie, to provide a combination product).
Кроме того, при использовании в настоящем подробном описании или пунктах формулы изобретения следующие термины имеют свое изначальное значение и/или в соответствующих случаях могут быть определены в порядке, описанном на страницах 62-75 WO 2009/138519: “агонист”, “антагонист”, “обратный агонист”, “неполярный, незаряженный аминокислотный остаток”, “полярный, незаряженный аминокислотный остаток”, “полярный, заряженный аминокислотный остаток”, “идентичность последовательности”, “точно такой же” и “аминокислотное различие” (когда речь идет о сравнении последовательности двух аминокислотных последовательностей), “(в) практически изолированной (форме)”, “домен”, “домен связывания”, “антигенная детерминанта (эпитоп)”, “эпитоп”, “против” или “направленные против” (антигена), “специфичность” и “время полужизни”. В дополнение к этому термины “модулирование” и “модулировать”, “сайт взаимодействия”, “специфический в отношении”, “перекрестно-блокировать”, “перекрестно-блокированный” и “перекрестное блокирование” и “практически независимый от pH” определены (и/или могут быть определены, как описано) на страницах 74-79 WO 2010/130832 Ablynx N.V. Кроме того, при ссылке на конструкцию, соединение, протеин или полипептид изобретения, термины подобные “моновалентный”, “бивалентный” (или “мультивалентный”), “биспецифический” (или “мультиспецифический”) и “бипаратопный” (или “мультипаратопный”) могут иметь значение, данное в WO 2009/138519, WO 2010/130832 или WO 2008/020079.In addition, as used in this Detailed Description or Claims, the following terms have their original meaning and/or may be defined, as appropriate, in the order described on pages 62-75 of WO 2009/138519: “agonist”, “antagonist”, “inverse agonist”, “non-polar, uncharged amino acid residue”, “polar, uncharged amino acid residue”, “polar, charged amino acid residue”, “sequence identity”, “exactly the same” and “amino acid difference” (when referring to comparison sequences of two amino acid sequences), “(in) substantially isolated (form)”, “domain”, “binding domain”, “antigenic determinant (epitope)”, “epitope”, “against” or “against” (antigen), “specificity” and “half-life”. In addition, the terms "modulate" and "modulate", "interaction site", "specific for", "cross-block", "cross-block" and "cross-block" and "practically independent of pH" are defined (and /or may be defined as described) on pages 74-79 of WO 2010/130832 Ablynx N.V. In addition, when referring to a construct, compound, protein, or polypeptide of the invention, terms like “monovalent”, “bivalent” (or “multivalent”), “bispecific” (or “multispecific”), and “biparatopic” (or “multiparatopic”) may have the meaning given in WO 2009/138519, WO 2010/130832 or WO 2008/020079.
Термин “время полужизни” при использовании в описании в отношении ISVD, нанотела, биологического препарата на основе ISVD, биологического препарата на основе нанотела или любой другой аминокислотной последовательности, соединения или полипептида, упоминаемого в этом описании, может быть определен, как указано в параграфе o) на странице 57 WO 2008/020079 и, как упоминается там, относится к времени, за которое концентрация аминокислотной последовательности, соединения или полипептида в сыворотке уменьшается на 50% in vivo, например, вследствие деградации последовательности или соединения и/или выведения или секвестрации последовательности или соединения при помощи естественных механизмов. Период времени полужизни in vivo аминокислотной последовательности, соединения или полипептида изобретения может быть определен любым хорошо известным образом, например, с помощью фармакокинетического анализа. Подходящие методики известны специалисту в данной области техники, и могут, например, быть такими, как описано в параграфе o) на странице 57 WO 2008/020079. Как также упоминается в параграфе o) на странице 57 WO 2008/020079, время полужизни может выражаться при помощи таких параметров, как t1/2-альфа, t1/2-бета и площадь под кривой (AUC). В этом отношении следует отметить, что термин “время полужизни” при использовании в описании, в частности, относится к t1/2-бета или конечному периоду полувыведения (при этом t1/2-альфа и/или AUC или оба могут не рассматриваться). Можно сослаться, например, на экспериментальную часть ниже, а также справочные пособия, такие как Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists и Peters et al, Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996). Можно сделать ссылку на "Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, опубликованную Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982). Аналогичным образом, термины “увеличение времени полужизни” или “повышенное время полужизни” также являются такими, как определено в параграфе o) на странице 57 WO 2008/020079 и, в частности, относятся к увеличению t1/2-бета, с или без увеличения t1/2-альфа и/или AUC или того и другого.The term “half-life” when used herein in relation to an ISVD, nanobody, ISVD biological, nanobody biological or any other amino acid sequence, compound or polypeptide referred to in this specification may be defined as indicated in paragraph o ) on page 57 of WO 2008/020079 and as mentioned there refers to the time at which the serum concentration of an amino acid sequence, compound or polypeptide is reduced by 50% in vivo, e.g. due to degradation of the sequence or compound and/or clearance or sequestration of the sequence or connections through natural mechanisms. The in vivo half-life of an amino acid sequence, compound, or polypeptide of the invention can be determined in any well-known manner, for example, by pharmacokinetic analysis. Suitable techniques are known to the person skilled in the art and may, for example, be as described in paragraph o) on page 57 of WO 2008/020079. As also mentioned in paragraph o) on page 57 of WO 2008/020079, half-life can be expressed using parameters such as t1/2-alpha, t1/2-beta and area under the curve (AUC). In this regard, it should be noted that the term "half-life" when used in the description, in particular, refers to t1/2-beta or terminal half-life (while t1/2-alpha and/or AUC, or both may not be considered). Reference may be made, for example, to the experimental section below, as well as reference manuals such as Kenneth, A et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists and Peters et al, Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996). Reference may be made to "Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982). Similarly, the terms "increased half-life" or "increased half-life" are also as defined in paragraph o) on page 57 of WO 2008/020079 and specifically refer to an increase in t1/2-beta, with or without an increase t1/2-alpha and/or AUC or both.
Когда термин в описании не определен точно, он имеет свое общепринятое в данной области техники значение, понятное специалисту. Для справки можно сделать ссылку, например, на стандартные руководства, такие как Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd.Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing и Wiley Interscience, New York (1987); Lewin, “Genes II”, John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985); Old et al., “Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering”, 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA (1981); Roitt et al., “Immunology” (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001); Roitt et al., Roitt’s Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK (2001); и Janeway et al., “Immunobiology” (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005), а также на общий уровень техники, упомянутый в описании.When a term in the description is not precisely defined, it has its generally accepted meaning in the art, understandable to a person skilled in the art. For reference, reference may be made to, for example, standard manuals such as Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd. Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987); Lewin, "Genes II", John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985); Old et al., “Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering”, 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA (1981); Roitt et al., “Immunology” (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001); Roitt et al., Roitt's Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK (2001); and Janeway et al., "Immunobiology" (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005), as well as the general art mentioned in the description.
Также, как уже отмечалось в описании, аминокислотные остатки нанотела пронумерованы согласно общей нумерации VH, предоставленной Kabat et al. (“Sequence of proteins of immunological interest”, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91), применительно к VHH доменам от Верблюдовых в статье Riechmann и Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun 23; 240 (1-2): 185-195. Согласно этой нумерации FR1 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 1-30, CDR1 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 31-35, FR2 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 36-49, CDR2 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 50-65, FR3 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 66-94, CDR3 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 95-102, и FR4 нанотела содержит аминокислотные остатки в положениях 103-113. [В этом отношении следует отметить, что – как хорошо известно в данной области техники для VH доменов и для VHH доменов – общее число аминокислотных остатков в каждом из CDR может варьировать и может не соответствовать общему числу аминокислотных остатков, указанных нумерацией Kabat (то есть, одно или более положений согласно нумерации Kabat может и не быть занято в действительной последовательности, или действительная последовательность может содержать больше аминокислотных остатков чем число, допускаемое Kabat нумерацией). Это означает, что в целом нумерация согласно Kabat может или может не соответствовать действительной нумерации аминокислотных остатков в действительной последовательности. В общем, однако, можно сказать что согласно нумерации Kabat и независимо от числа аминокислотных остатков в CDR, положение 1 согласно нумерации Kabat соответствует началу FR1 и наоборот, положение 36 согласно нумерации Kabat соответствует началу FR2 и наоборот, положение 66 согласно нумерации Kabat соответствует началу FR3 и наоборот, и положение 103 согласно нумерации Kabat соответствует началу FR4 и наоборот.].Also, as already noted in the description, the amino acid residues of the nanobody are numbered according to the general VH numbering provided by Kabat et al. (“Sequence of proteins of immunological interest”, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91), applied to Camelid VHH domains in an article by Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000
Альтернативные методы нумерации аминокислотных остатков VH доменов, которые также могут применяться аналогичным образом к VHH доменам верблюдовых и к нанотелам, описаны Chothia et al. (Nature 342, 877-883 (1989)), так называемое “AbM определение” и так называемое “контактное определение”. Однако, настоящее описание, аспекты и фигуры будут сопровождаться нумерацией согласно Kabat применительно к VHH доменам по Riechmann и Muyldermans, если не указано иначе. Alternative methods for numbering amino acid residues of VH domains, which can also be applied similarly to camelid VHH domains and to nanobodies, are described by Chothia et al. (Nature 342, 877-883 (1989)), the so-called "AbM definition" and the so-called "contact definition". However, the present description, aspects and figures will be followed by Kabat numbering for VHH domains by Riechmann and Muyldermans, unless otherwise indicated.
Следует отметить также, что фигуры, любой перечень последовательностей и экспериментальная часть/примеры даны не только для того, чтобы дополнительно проиллюстрировать изобретение и не должны интерпретироваться или истолковываться как ограничивающие рамки изобретения и/или прилагаемых пунктов формулы изобретения каким-либо образом, если в этом документе точно не указано иначе.It should also be noted that the figures, any sequence listing, and experimental portion/examples are not merely intended to further illustrate the invention and should not be interpreted or construed as limiting the scope of the invention and/or the appended claims in any way, to the extent that document is not explicitly stated otherwise.
Как описано далее в этом документе, вещества изобретения, связывающие сывороточный альбумин, могут с преимуществом использоваться в качестве фрагмента, связывающей единицы или партнера для слияния для того, чтобы увеличить время полужизни терапевтических соединений, молекул или структур, таких как полипептиды, протеины, соединения (включая, без ограничения, малые молекулы) или другие терапевтические препараты.As described later in this document, serum albumin binding substances of the invention can be advantageously used as a moiety, binding unit or fusion partner in order to increase the half-life of therapeutic compounds, molecules or structures such as polypeptides, proteins, compounds ( including, without limitation, small molecules) or other therapeutic drugs.
Таким образом, в другом аспекте изобретение предоставляет полипептиды, протеины, конструкции, соединения или другие химические соединения, которые содержат или в основном состоят из вещества изобретения, связывающего сывороточный альбумин, и одной или более других аминокислотных последовательностей, (связывающих) доменов, единиц связывания или других фрагментов или химических структурных элементов.Thus, in another aspect, the invention provides polypeptides, proteins, constructs, compounds, or other chemical entities that contain or essentially consist of a serum albumin binding substance of the invention and one or more other amino acid sequences, (binding) domains, binding units, or other fragments or chemical building blocks.
В частности, изобретение предоставляет полипептиды, протеины, конструкции, соединения или другие химические соединения, которые содержат вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и один или более (например, один или два) терапевтических препаратов (которые могут быть одинаковыми или разными и могут, например, быть направлены против одной и той же мишени или разных мишеней, и в том случае, когда они направлены на одну и ту же мишень, они могут быть направлены на одни и те же или разные эпитопы, части, домены или субъединицы указанных мишеней), соответственно связанных друг с другом или напрямую или посредством одного или более подходящих линкеров или спейсеров. Такие полипептиды, протеины или конструкции могут, например, и без ограничения, быть слитым белком, как далее описывается в этом документе. In particular, the invention provides polypeptides, proteins, constructs, compounds or other chemical entities that contain a serum albumin binding substance of the invention and one or more (e.g. one or two) therapeutic agents (which may be the same or different and may, for example , be directed against the same target or different targets, and when they are directed to the same target, they may be directed to the same or different epitopes, parts, domains or subunits of these targets), respectively associated with each other either directly or through one or more suitable linkers or spacers. Such polypeptides, proteins, or constructs may, for example, and without limitation, be a fusion protein, as further described in this document.
Изобретение, кроме того, имеет отношение к терапевтическому использованию таких полипептидов, протеинов, конструкций или соединений и к фармацевтическим композициям, содержащим такие полипептиды, протеины, конструкции или соединения.The invention further relates to the therapeutic use of such polypeptides, proteins, constructs or compounds and to pharmaceutical compositions containing such polypeptides, proteins, constructs or compounds.
В одном аспекте, по меньшей мере, одно лекарственное вещество содержит или в основном состоит из терапевтического протеина, полипептида, соединения, фактора или другой структуры. В предпочтительном варианте осуществления лекарственное вещество, направленное против желаемого антигена или мишени, способно связываться с желаемым антигеном (и, в частности, способно специфически связываться с желаемым антигеном), и/или способно взаимодействовать с желательной мишенью. В другом варианте осуществления, по меньшей мере, одно лекарственное вещество содержит или в основном состоит из терапевтического протеина или полипептида. В следующем варианте осуществления, по меньшей мере, одно лекарственное вещество содержит или в основном состоит из домена связывания или единицы связывания, такой как иммуноглобулин или последовательность иммуноглобулина (включая, но не ограничиваясь этим, фрагмент иммуноглобулина), например, антитело или фрагмент антитела (включая, но не ограничиваясь этим ScFv фрагмент), или другого подходящего белкового каркаса, такого как домены протеина A (такие как Affibodies™), тендамистат, фибронектин, липокалин, CTLA-4, T-клеточные рецепторы, сконструированные анкириновые повторы, авимеры и PDZ домены (Binz et al., Nat. Biotech 2005, Vol 23:1257), и молекулы связывания на основе ДНК или РНК, включая но не ограничиваясь этим ДНК или РНК аптамеры (Ulrich et al., Comb Chem High Throughput Screen 2006 9(8):619-32). In one aspect, at least one drug substance contains or mainly consists of a therapeutic protein, polypeptide, compound, factor, or other structure. In a preferred embodiment, the drug directed against the desired antigen or target is capable of binding to the desired antigen (and in particular is capable of specifically binding to the desired antigen) and/or is capable of interacting with the desired target. In another embodiment, at least one drug substance contains or mainly consists of a therapeutic protein or polypeptide. In a further embodiment, at least one drug substance comprises or essentially consists of a binding domain or binding unit such as an immunoglobulin or an immunoglobulin sequence (including, but not limited to, an immunoglobulin fragment), e.g., an antibody or an antibody fragment (including , but not limited to ScFv fragment), or other suitable protein scaffold such as protein A domains (such as Affibodies™), tendamistat, fibronectin, lipocalin, CTLA-4, T-cell receptors, engineered ankyrin repeats, avimers, and PDZ domains (Binz et al., Nat. Biotech 2005, Vol 23:1257), and DNA or RNA based binding molecules, including but not limited to DNA or RNA aptamers (Ulrich et al., Comb Chem High Throughput Screen 2006 9(8 ):619-32).
В еще одном аспекте, по меньшей мере, одно лекарственное вещество содержит или в основном состоит из вариабельного домена антитела, такого как тяжелая цепь вариабельного домена или легкая цепь вариабельного домена. In yet another aspect, at least one drug substance comprises or essentially consists of an antibody variable domain, such as a variable domain heavy chain or a variable domain light chain.
В предпочтительном аспекте, по меньшей мере, одно лекарственное вещество содержит или в основном состоит по меньшей мере из одного вариабельного домена иммуноглобулина, такого как доменное антитело, однодоменное антитело, “dAb” или нанотело (такое как VHH, гуманизированный VHH или камелизированный VH) или IgNAR домен. In a preferred aspect, at least one drug substance contains or essentially consists of at least one immunoglobulin variable domain, such as a domain antibody, single domain antibody, “dAb”, or nanobody (such as VHH, humanized VHH, or camelized VH), or IgNAR domain.
В конкретном варианте осуществления по меньшей мере одно лекарственное вещество содержит или в основном состоит по меньшей мере из одного моновалентного нанотела или бивалентной, мультивалентной, биспецифической или мультиспецифической конструкции нанотела. In a particular embodiment, at least one drug substance comprises or essentially consists of at least one monovalent nanobody or a bivalent, multivalent, bispecific, or multispecific nanobody construct.
Полипептиды, (слитые) белки, конструкции или соединения, которые содержат вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и один или более терапевтических препаратов могут быть в большинстве случаев (приготовлены и использованы) как описано в предшествующем уровне техники, процитированном выше (например, WO 04/041865, WO 06/122787, WO 2012/175400 и WO 2015/173325; можно сослаться, например, на WO 2004/003019, EP 2 139 918, WO 2011/006915 и WO 2014/111550) со связывающим сывороточный альбумин веществом изобретения вместо увеличивающих время полужизни структур, описанных в указанных (ссылках). Polypeptides, (fusion) proteins, constructs or compounds that contain a serum albumin binding substance of the invention and one or more therapeutic drugs can be in most cases (prepared and used) as described in the prior art cited above (for example, WO 04 /041865, WO 06/122787, WO 2012/175400 and WO 2015/173325; you can refer, for example, to WO 2004/003019,
Полипептиды, (слитые) белки, конструкции или соединения, которые содержат вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и один или более терапевтических препаратов, в большинстве случаев и предпочтительно будут иметь повышенное время полужизни (как описано в этом документе, и предпочтительно выраженное в виде t1/2-бета) по сравнению с лекарственным веществом или компонентами per se. Polypeptides, (fusion) proteins, constructs or compounds that contain a serum albumin binding substance of the invention and one or more therapeutic drugs will, in most cases and preferably, have an increased half-life (as described herein, and preferably expressed as t1 /2-beta) compared with drug substance or components per se.
В общем, соединения, полипептиды, конструкции или слитые белки, описанные в этом документе, предпочтительно имеют время полужизни (и в этом случае, как описано в этом документе, предпочтительно выраженное в виде t1/2-бета), то есть по меньшей мере в 1,5 раза, предпочтительно по меньшей мере в 2 раза, например, по меньшей мере в 5 раз, например, по меньшей мере в 10 раз или более чем в 20 раз больше, чем время полужизни соответствующего лекарственного вещества самого по себе (измеренного или у человека или подходящего животного, такого как мышь или яванский макак). In general, the compounds, polypeptides, constructs, or fusion proteins described herein preferably have a half-life (and in this case, as described herein, preferably expressed as t1/2-beta), i.e., at least 1.5 times, preferably at least 2 times, such as at least 5 times, such as at least 10 times, or more than 20 times, the half-life of the respective drug substance itself (measured or in a human or a suitable animal such as a mouse or cynomolgus macaque).
Также, предпочтительно, любое подобное соединение, полипептид, слитый белок или конструкция имеет время полужизни (и в этом случае, как описано в этом документе, предпочтительно выраженное в виде t1/2-бета) у человека, повышенное более чем на 1 час, предпочтительно более чем на 2 часа, более предпочтительно более чем на 6 часов, например, более чем на 12 часов, по сравнению с временем полужизни соответствующего лекарственного вещества самого по себе.Also preferably, any such compound, polypeptide, fusion protein, or construct has a half-life (and in this case, as described herein, preferably expressed as t1/2-beta) in humans increased by more than 1 hour, preferably more than 2 hours, more preferably more than 6 hours, eg more than 12 hours, compared to the half-life of the respective drug substance itself.
Также, предпочтительно, соединение или полипептид изобретения имеет время полужизни (и в этом случае, как описано в этом документе, предпочтительно выраженное в виде t1/2-бета) у человека, которое составляет более чем 1 час, предпочтительно более чем 2 часа, более предпочтительно более чем 6 часов, например, более чем 12 часов, и например, около одного дня, двух дней, одной недели, двух недель и вплоть до времени полужизни сывороточного альбумина у человека (которое по оценкам составляет около 19 дней). Also preferably, the compound or polypeptide of the invention has a half-life (and in this case, as described herein, preferably expressed as t1/2-beta) in humans that is greater than 1 hour, preferably greater than 2 hours, greater than preferably more than 6 hours, eg more than 12 hours, and eg about one day, two days, one week, two weeks, and up to the human serum albumin half-life (estimated to be about 19 days).
Как уже упоминалось, в одном аспекте вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, используется для увеличения времени полужизни (одного или более) одиночных вариабельных доменов иммуноглобулина, таких как доменные антитела, однодоменные антитела, “dAb’s”, VHH или Нанотела (такие как VHH, гуманизированные VHH или камелизованные VH, такие как камелизованные человеческие VH). As already mentioned, in one aspect, the serum albumin binding substance of the invention is used to increase the half-life of (one or more) single variable domains of an immunoglobulin, such as domain antibodies, single domain antibodies, “dAb's”, VHH or Nanobodies (such as VHH, humanized VHH or camelized VHs such as camelized human VHs).
Таким образом, один вариант осуществления изобретения имеет отношение к полипептиду, конструкции или слитому белку, который содержит вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и одну или более (например, одну или две) последовательностей одиночного вариабельного домена иммуноглобулина, которые соответствующим образом связаны друг с другом, или напрямую или необязательно через один или более подходящих линкеров или спейсеров. Как уже говорилось в описании, каждый такой одиночный вариабельный домен иммуноглобулина, присутствующий в подобном полипептиде, конструкции или слитом белке, может независимо быть доменным антителом, однодоменным антителом, “dAb’” или Нанотелом (таким как VHH, гуманизированный VHH или камелизованный VH, например, камелизованный человеческий VH); и согласно одному конкретному, но неограничивающему аспекту, по меньшей мере, один (и вплоть до всех) из этих одиночных вариабельных доменов иммуноглобулина содержит два или три дисульфидных мостика. Предпочтительно, все ISVDs, присутствующие в таком соединении изобретения, являются нанотелами.Thus, one embodiment of the invention relates to a polypeptide, construct, or fusion protein that comprises a serum albumin binding substance of the invention and one or more (e.g., one or two) immunoglobulin single variable domain sequences that are appropriately linked to each other. , or directly or optionally through one or more suitable linkers or spacers. As discussed herein, each such single immunoglobulin variable domain present in such a polypeptide, construct, or fusion protein may independently be a domain antibody, a single domain antibody, a “dAb'”, or a Nanobody (such as VHH, humanized VHH, or camelized VH, e.g. , camelized human VH); and in one specific but non-limiting aspect, at least one (and up to all) of these immunoglobulin single variable domains contains two or three disulfide bridges. Preferably, all ISVDs present in such a compound of the invention are nanobodies.
Когда соединение изобретения имеет ISVD в его C-концевой области (такой как вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, или ISVD, который направлен против терапевтической мишени), тогда указанный C-концевой ISVD (и таким образом, путем удлинения, всё соединение изобретения) предпочтительно имеет C-концевое удлинение в своей C-концевой области. Это C-концевое удлинение будет непосредственно связываться с последним C-концевым аминокислотным остатком ISVD, который обычно будет являться аминокислотным остатком в положении 113 согласно Kabat (только в том случае, если ISVD содержит одну или более аминокислотных делеций, так что последовательность ISVD кончается до положения 113). Таким образом, как правило, C-концевое удлинение будет непосредственно связано с C-концевой VTVSS последовательностью VTVSS (SEQ ID NO:15) C-концевого ISV (и таким образом, путем удлинения, с C-концевой TVTSS последовательностью соединения изобретения) или C-концевой последовательностью C-концевого ISVD, который соответствует C-концевой ISVD последовательности (например, в случаях, когда указанная C-концевая последовательность C-концевого ISVD содержит одну или более замен или делеций по сравнению с обычной VTVSS последовательностью, такой как T110K, T110Q, S112K или S112K).When a compound of the invention has an ISVD in its C-terminal region (such as a serum albumin-binding substance of the invention or an ISVD that is directed against a therapeutic target), then said C-terminal ISVD (and thus, by extension, the entire compound of the invention) is preferred has a C-terminal extension in its C-terminal region. This C-terminal extension will directly bind to the last C-terminal amino acid residue of the ISVD, which will normally be the amino acid residue at position 113 according to Kabat (only if the ISVD contains one or more amino acid deletions such that the ISVD sequence ends before position 113). Thus, in general, the C-terminal extension will be directly linked to the C-terminal VTVSS sequence VTVSS (SEQ ID NO:15) of the C-terminal ISV (and thus, by extension, to the C-terminal TVTSS sequence of the compound of the invention) or C -terminal sequence of a C-terminal ISVD that corresponds to a C-terminal ISVD sequence (e.g., in cases where said C-terminal sequence of a C-terminal ISVD contains one or more substitutions or deletions compared to a normal VTVSS sequence such as T110K, T110Q , S112K or S112K).
Специалисту понятно, что в том случае, когда соединение изобретения имеет связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения на своем C-конце, тогда указанное связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения будет содержать в себе указанное C-концевое удлинение.The skilled artisan will appreciate that where a compound of the invention has a serum albumin-binding substance of the invention at its C-terminus, then said serum albumin-binding substance of the invention will contain said C-terminal extension.
В основном, любое C-концевое удлинение, которое используется в описании (т.е. на C-конце соединения изобретения и/или на C-конце связывающего сывороточный альбумин вещества изобретения), может быть таким, как описано в WO 2012/174741 или WO 2015/173325 (можно сослаться, например, на WO 2103/024059 и WO2016/118733). В частности, C-концевое удлинение может иметь формулу (X)n, в которой n является 1 - 10, предпочтительно 1 - 5, например, 1, 2, 3, 4 или 5 (и предпочтительно 1 или 2, например, 1); и каждый X является (предпочтительно природного происхождения) аминокислотным остатком, который независимо выбирают из аминокислотных остатков природного происхождения (хотя согласно одному предпочтительному аспекту, оно не содержит остатков цистеина), и предпочтительно независимо выбирают из группы, состоящей из аланина (A), глицина (G), валина (V), лейцина (L) или изолейцина (I). In general, any C-terminal extension that is used in the description (i.e. at the C-terminus of the compound of the invention and/or at the C-terminus of the serum albumin-binding substance of the invention) can be as described in WO 2012/174741 or WO 2015/173325 (refer to, for example, WO 2103/024059 and WO2016/118733). In particular, the C-terminal extension may have the formula (X) n in which n is 1-10, preferably 1-5, such as 1, 2, 3, 4 or 5 (and preferably 1 or 2, such as 1) ; and each X is a (preferably naturally occurring) amino acid residue independently selected from naturally occurring amino acid residues (although in one preferred aspect it does not contain cysteine residues), and preferably independently selected from the group consisting of alanine (A), glycine ( G), valine (V), leucine (L) or isoleucine (I).
Согласно некоторым предпочтительным, но неограничивающим аспектам таких C-концевых удлинений X(n), X и n могут выглядеть следующим образом:According to some preferred but non-limiting aspects of such C-terminal extensions X (n) , X and n may look like this:
(a) n = 1 и X = Ala;(a) n = 1 and X = Ala;
(b) n = 2 и каждый X = Ala;(b) n = 2 and each X = Ala;
(c) n = 3 и каждый X = Ala;(c) n = 3 and each X = Ala;
(d) n = 2 и по меньшей мере один X = Ala (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile); (d) n=2 and at least one X=Ala (with the remaining amino acid residue(s) X being independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile);
(e) n = 3 и по меньшей мере один X = Ala (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из аминокислотных остатков природного происхождения, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile);(e) n=3 and at least one X=Ala (wherein the remaining amino acid residue(s) X is independently selected from naturally occurring amino acid residues, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile);
(f) n = 3 и по меньшей мере, два X = Ala (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile);(f) n=3 and at least two X=Ala (with the remaining amino acid residue(s) X being independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile);
(g) n = 1 и X = Gly;(g) n = 1 and X = Gly;
(h) n = 2 и каждый X = Gly;(h) n = 2 and each X = Gly;
(i) n = 3 и каждый X = Gly;(i) n = 3 and each X = Gly;
(j) n = 2 и по меньшей мере один X = Gly (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile);(j) n=2 and at least one X=Gly (with the remaining amino acid residue(s) X being independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile);
(k) n = 3 и, по меньшей мере, one X = Gly (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile);(k) n=3 and at least one X=Gly (with the remaining amino acid residue(s) X being independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile);
(l) n = 3 и, по меньшей мере, два X = Gly (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile);(l) n=3 and at least two X=Gly (with the remaining amino acid residue(s) X being independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile);
(m) n = 2 и каждый X = Ala или Gly;(m) n = 2 and each X = Ala or Gly;
(n) n = 3 и каждый X = Ala или Gly;(n) n = 3 and each X = Ala or Gly;
(o) n = 3 и, по меньшей мере, один X = Ala или Gly (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile); или(o) n = 3 and at least one X = Ala or Gly (with the remaining amino acid residue(s) X independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile) ; or
(p) n = 3 и, по меньшей мере, два X = Ala или Gly (при этом оставшийся аминокислотный остаток(и) X независимо выбирают из любых существующих в природе аминокислот, но предпочтительно независимо выбирают из Val, Leu и/или Ile);(p) n = 3 and at least two X = Ala or Gly (with the remaining amino acid residue(s) X independently selected from any naturally occurring amino acids, but preferably independently selected from Val, Leu and/or Ile) ;
при этом аспекты (a), (b), (c), (g), (h), (i), (m) и (n) являются особенно предпочтительными, причем аспекты, в которых n =1 или 2 являются предпочтительными, а аспекты, в которых n = 1 являются особенно предпочтительными.while aspects (a), (b), (c), (g), (h), (i), (m) and (n) are particularly preferred, with aspects in which n = 1 or 2 are preferred , and aspects in which n = 1 are particularly preferred.
Следует отметить, что предпочтительно, любое C-концевое удлинение, присутствующее в веществе изобретения, связывающем сывороточный альбумин, не содержит (свободного) остатка цистеина (за исключением случаев, когда указанный остаток цистеина используется или предназначается для дополнительной функционализации, например, для пегилирования).It should be noted that preferably, any C-terminal extension present in the serum albumin binding substance of the invention does not contain a (free) cysteine residue (unless said cysteine residue is used or intended for additional functionalization, for example, for PEGylation).
Некоторыми отдельными, но неограничивающими примерами подходящих C-концевых удлинений являются следующие аминокислотные последовательности: A, AA, AAA, G, GG, GGG, AG, GA, AAG, AGG, AGA, GGA, GAA or GAG.Some specific but non-limiting examples of suitable C-terminal extensions are the following amino acid sequences: A, AA, AAA, G, GG, GGG, AG, GA, AAG, AGG, AGA, GGA, GAA or GAG.
Предпочтительно также, когда соединение изобретения имеет ISVD на своем C-конце (например, вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, или ISVD, который направлен против терапевтической мишени), тогда (по меньшей мере,) указанный C-концевой ISVD будет предпочтительно содержать, даже более предпочтительно в дополнение к C-концевому удлинению, как описано в этом документе, одну или более мутаций, которые уменьшают связывание предсуществующими антителами (т.е. как описано в документе в отношении вещества изобретения, связывающего сывороточный альбумин, и как в более широком смысле описано в WO 2012/175741 и WO 2015/173325 и также, например, в WO 2013/024059 и WO 2016/118733). В этом отношении специалисту будет понятно, что в случае, когда соединение изобретения имеет вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, на его C-конце, тогда (по меньшей мере) указанное вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, предпочтительно будет содержать такие мутации (т.е. предпочтительно в дополнение к C-концевому удлинению).Preferably also, when a compound of the invention has an ISVD at its C-terminus (e.g., a serum albumin-binding substance of the invention, or an ISVD that is directed against a therapeutic target), then (at least) said C-terminal ISVD will preferably contain, even more preferably, in addition to the C-terminal extension as described herein, one or more mutations that reduce binding by preexisting antibodies (i.e., as described in the document for a serum albumin binding substance of the invention, and as more broadly described in WO 2012/175741 and WO 2015/173325 and also, for example, in WO 2013/024059 and WO 2016/118733). In this regard, one skilled in the art will appreciate that in the case where a compound of the invention has a serum albumin-binding substance of the invention at its C-terminus, then (at least) said serum albumin-binding substance of the invention will preferably contain such mutations (i.e., e. preferably in addition to the C-terminal extension).
Конкретнее, согласно отдельному аспекту изобретения в том случае, когда соединение изобретения содержит два или более ISVD (например, вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, и один или более ISVD против терапевтической мишени), тогда предпочтительно все эти ISVD содержат мутации, которые уменьшают связывание с предсуществующими антителами (и в этом случае, предпочтительно в дополнение к C-концевому удлинению, которое связывается с C-концевым ISVD, если соединение изобретения имеет ISVD на его C-конце).More specifically, according to a particular aspect of the invention, when a compound of the invention contains two or more ISVDs (e.g., a serum albumin-binding substance of the invention and one or more ISVDs against a therapeutic target), then preferably all of these ISVDs contain mutations that reduce binding to preexisting antibodies (and in this case, preferably in addition to the C-terminal extension that binds to the C-terminal ISVD if the compound of the invention has an ISVD at its C-terminus).
Когда соединение изобретения имеет ISVD на его N-конце (например, вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, или ISVD, который направлен против терапевтической мишени), тогда указанный N-концевой ISVD (и таким образом, через удлинение, все соединение изобретения) предпочтительно содержит D в положении 1. В этом отношении, специалисту понятно, что в случае, когда соединение изобретения имеет вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, на его N-конце, тогда указанное вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, будет предпочтительно иметь D в положении 1 (например, E1D мутацию по сравнению, например, с последовательностью SEQ ID NO:18 и/или 19, такой как, в аминокислотных последовательностях изобретения SEQ ID NO: 36 – 44). When a compound of the invention has an ISVD at its N-terminus (e.g., a serum albumin-binding substance of the invention, or an ISVD that is directed against a therapeutic target), then said N-terminal ISVD (and thus, by extension, the entire compound of the invention) preferably contains D at
В некоторых дополнительных аспектах изобретение имеет отношение к белку, полипептиду или другому соединению или конструкции, которая содержит или в основном состоит по меньшей мере, из одного (и предпочтительно одного единственного) вещества изобретения, связывающего сывороточный альбумин, и по меньшей мере, одного (например, одного, двух или трех) лекарственного вещества или структуры (в котором указанное вещество, связывающее сывороточный альбумин, и один или более терапевтических препаратов или структур связаны соответствующим образом, необязательно через один или более подходящих линкеров), при этом протеин, полипептид, соединение, конструкция является таким, что:In some additional aspects, the invention relates to a protein, polypeptide or other compound or construct that contains or essentially consists of at least one (and preferably one single) serum albumin binding substance of the invention and at least one (for example , one, two, or three) drug substance or structure (in which said serum albumin binding substance and one or more therapeutic drugs or structures are linked in an appropriate manner, optionally via one or more suitable linkers), wherein the protein, polypeptide, compound, the construction is such that:
- когда он имеет ISVD на его C-конце, тогда (C-концевой ISVD указанного протеина) указанный протеин, полипептид, соединение, конструкция имеет C-концевое удлинение (X)n (как описано далее в этом документе) в его C-концевой области; и/или- when it has an ISVD at its C-terminus, then the (C-terminal ISVD of said protein) said protein, polypeptide, compound, construct has a C-terminal extension (X) n (as described later in this document) at its C-terminal areas; and/or
- когда он имеет ISVD на его C-конце, тогда, по меньшей мере, указанный C-концевой ISVD содержит одну или более мутаций, которые уменьшают связывание предсуществующих антител (как описано далее в этом документе);- when it has an ISVD at its C-terminus, then at least said C-terminal ISVD contains one or more mutations that reduce the binding of preexisting antibodies (as described later in this document);
- когда он имеет ISVD на его N-конце, тогда (N-концевой ISVD указанного протеина) указанный протеин, полипептид, соединение, конструкция предпочтительно содержит D в положении 1; и/или- when it has an ISVD at its N-terminus, then the (N-terminal ISVD of said protein) said protein, polypeptide, compound, construct preferably contains a D at
- в котором указанные ISVD в протеине, полипептиде или другом соединении также могут иметь ISVD в своей N-концевой области, в этом случае указанный N-концевой ISVD конец предпочтительно имеет D или E1D в положении 1;- wherein said ISVDs in the protein, polypeptide or other compound may also have an ISVD in their N-terminal region, in which case said N-terminal ISVD preferably has a D or E1D at
- предпочтительно, практически все из ISVD, присутствующих в указанном протеине, полипептиде, соединении, конструкции содержат одну или более мутаций, которые уменьшают связывание предсуществующих антител (как описано далее в этом документе).preferably, substantially all of the ISVDs present in said protein, polypeptide, compound, construct contain one or more mutations that reduce the binding of preexisting antibodies (as described later in this document).
Согласно одному конкретному аспекту изобретения, все терапевтические молекулы, присутствующие в соединении изобретения, представляют собой ISVD (т.е. ISVDs против терапевтической мишени), и в частности ISVD, состоящие из тяжелой цепи, и, конкретнее, нанотела (т.е. нанотела против терапевтической мишени). According to one specific aspect of the invention, all therapeutic molecules present in the compound of the invention are ISVDs (i.e., ISVDs against a therapeutic target), and in particular heavy chain ISVDs, and more specifically, nanobodies (i.e., nanobodies against a therapeutic target).
Например, и без ограничения, такие соединения изобретения могут включать:For example, and without limitation, such compounds of the invention may include:
- одну копию вещества изобретения, связывающего сывороточный альбумин, и один ISVD (и предпочтительно нанотело) против терапевтической мишени; илиone copy of the serum albumin binding substance of the invention and one ISVD (and preferably nanobody) against the therapeutic target; or
- одну копию вещества изобретения, связывающего сывороточный альбумин, и два ISVD (и предпочтительно два нанотела) против терапевтической мишени (при этом ISVD может быть тем же самым или другим, и когда он является другим, он может быть направлен против той же самой мишени, против различных эпитопов на той же самой мишени или против различных терапевтических мишеней); или- one copy of the serum albumin-binding substance of the invention and two ISVDs (and preferably two nanobodies) against the therapeutic target (the ISVD may be the same or different, and when it is different, it may be directed against the same target, against different epitopes on the same target or against different therapeutic targets); or
- одну копию вещества изобретения, связывающего сывороточный альбумин, и три ISVD (и предпочтительно три нанотела) против терапевтической мишени (при этом ISVD может быть тем же самым или другим, и когда он является другим, он может быть направлен против той же самой мишени, против различных эпитопов на той же самой мишени или против различных терапевтических мишеней).- one copy of the serum albumin-binding substance of the invention and three ISVDs (and preferably three nanobodies) against the therapeutic target (the ISVD may be the same or different, and when it is different, it may be directed against the same target, against different epitopes on the same target or against different therapeutic targets).
Некоторые неограничивающие примеры конструкций, слитых белков или полипептидов изобретения могут быть схематично представлены, как описано далее, в которых “[Alb]” представляет вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, “[лекарственное вещество 1]” и “[лекарственное вещество 2]” представляют терапевтические молекулы (которая как упоминалось, каждая может независимо быть одиночным вариабельным доменом иммуноглобулина), “ - “ представляет подходящий линкер (который является необязательным; подходящими примерами являются 9GS и 35GS линкеры), и N-конец находится в левой части, а C-конец находится в правой части: Some non-limiting examples of constructs, fusion proteins, or polypeptides of the invention may be schematically represented as described below, wherein "[Alb]" represents the serum albumin binding substance of the invention, "[Drug 1]" and "[Drug 2]" represent therapeutic molecules (which, as mentioned, can each independently be a single immunoglobulin variable domain), “-” represents an appropriate linker (which is optional; suitable examples are 9GS and 35GS linkers), and the N-terminus is on the left side and the C-terminus located on the right side:
[Alb] - [лекарственное вещество 1][Alb] - [drug 1]
[лекарственное вещество 1] - [Alb]-X(n) [drug 1]-[Alb]-X (n)
[Alb] - [лекарственное вещество 1] - [лекарственное вещество 1][Alb] - [drug 1] - [drug 1]
[лекарственное вещество 1] - [лекарственное вещество 1] - [Alb]-X(n) [drug 1] - [drug 1] - [Alb]-X (n)
[лекарственное вещество 1] - [Alb] - [лекарственное вещество 1][drug 1] - [Alb] - [drug 1]
[Alb] - [лекарственное вещество 1] - [лекарственное вещество 2][Alb] - [drug 1] - [drug 2]
[лекарственное вещество 1] - [лекарственное вещество 2] - [Alb]-X(n) [drug 1] - [drug 2] - [Alb]-X (n)
[лекарственное вещество 1] - [Alb] - [лекарственное вещество 2][drug 1] - [Alb] - [drug 2]
В том случае, когда терапевтические молекулы представляют собой ISVD (и предпочтительно нанотела) против терапевтической мишени, предпочтительные, но не ограничивающие конструкции, слитые белки или полипептиды изобретения могут быть схематично представлены, как указано далее, где “[Alb]” представляет вещество изобретения, связывающее сывороточный альбумин, “[ терапевтический ISVD 1]” и “[ терапевтический ISVD 2]” представляют ISVD против терапевтической мишени (при этом ISVD может быть тем же самым или другим, и если он другой, он может быть направлен против той же самой мишени, против различных эпитопов на той же самой мишени или против различных терапевтических мишеней), “ - “ представляет подходящий линкер (который является необязательным), X(n) представляет C-концевое удлинение, как описано в этом документе, и N-конец находится в левой части, а C-конец находится в правой части:Where the therapeutic molecules are ISVDs (and preferably nanobodies) against a therapeutic target, preferred, but not limiting, fusion proteins or polypeptides of the invention may be schematically represented as follows, where “[Alb]” represents the substance of the invention, binding serum albumin, “[therapeutic ISVD 1]” and “[therapeutic ISVD 2]” represent the ISVD against the therapeutic target (the ISVD may be the same or different, and if it is different, it may be directed against the same target , against different epitopes on the same target or against different therapeutic targets), “-” represents an appropriate linker (which is optional), X(n) represents a C-terminal extension as described in this document, and the N-terminus is in on the left side, and the C-terminus is on the right side:
[Alb] - [терапевтический ISVD 1] -X(n) [Alb]-[therapeutic ISVD 1]-X (n)
[терапевтический ISVD 1] - [Alb]-X(n) [therapeutic ISVD 1] - [Alb]-X (n)
[Alb] - [терапевтический ISVD 1] - [терапевтический ISVD 1] -X(n) [Alb] - [therapeutic ISVD 1] - [therapeutic ISVD 1] -X (n)
[терапевтический ISVD 1] - [терапевтический ISVD 1] - [Alb]-X(n) [therapeutic ISVD 1] - [therapeutic ISVD 1] - [Alb]-X (n)
[терапевтический ISVD 1] - [Alb] - [терапевтический ISVD 1] -X(n) [therapeutic ISVD 1] - [Alb] - [therapeutic ISVD 1] -X (n)
[Alb] - [терапевтический ISVD 1] - [терапевтический ISVD 2] -X(n) [Alb] - [therapeutic ISVD 1] - [therapeutic ISVD 2] -X (n)
[терапевтический ISVD 1] - [терапевтический ISVD 2] - [Alb]-X(n) [therapeutic ISVD 1] - [therapeutic ISVD 2] - [Alb]-X (n)
[терапевтический ISVD 1] - [Alb] - [терапевтический ISVD 2] -X(n) [therapeutic ISVD 1] - [Alb] - [therapeutic ISVD 2] -X (n)
Таким образом, в другом аспекте изобретение имеет отношение к мультиспецифической (и, в частности, биспецифической) конструкции нанотела, которая содержит связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения и по меньшей мере одно другое нанотело (например, одно или два других нанотела, которые могут быть одинаковыми или разными), при этом указанное, по меньшей мере, одно другое нанотело предпочтительно направлено против желательной мишени (которая предпочтительно является терапевтической мишенью) и/или другое нанотело, которое является пригодным или подходящим для терапевтических, профилактических и/или диагностических целей. И в этом случае, связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения и другие нанотела могут быть соответствующим образом связаны друг с другом или непосредственно или необязательно посредством одного или более подходящих линкеров или спейсеров. Thus, in another aspect, the invention relates to a multispecific (and in particular bispecific) nanobody construct that comprises a serum albumin binding substance of the invention and at least one other nanobody (e.g., one or two other nanobodies, which may be the same or different), wherein said at least one other nanobody is preferably directed against the desired target (which is preferably a therapeutic target) and/or another nanobody that is or is suitable for therapeutic, prophylactic and/or diagnostic purposes. Again, the serum albumin-binding substance of the invention and the other nanobodies can be suitably linked to each other either directly or optionally via one or more suitable linkers or spacers.
Общее описание мультивалентных и мультиспецифических полипептидов, содержащих одно или более нанотел, и их препараты, также можно найти в Conrath et al., J. Biol. Chem., Vol. 276, 10. 7346-7350, 2001; Muyldermans, Reviews in Molecular Biotechnology 74 (2001), 277-302; а также, например, в WO 96/34103, WO 99/23221, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627.A general description of multivalent and multispecific polypeptides containing one or more nanobodies and preparations thereof can also be found in Conrath et al., J. Biol. Chem., Vol. 276, 10.7346-7350, 2001; Muyldermans, Reviews in Molecular Biotechnology 74 (2001), 277-302; and also, for example, in WO 96/34103, WO 99/23221, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/068627.
В виде иллюстрации, некоторые примеры соединений изобретения даны в SEQ ID NO:46 - 52, использующие анти-HER2-Нанотело SEQ ID NO: 45 в качестве характерного примера Нанотела анти-мишень, и при этом составляющие Нанотела находятся в разных положениях в соединении изобретения. Соединения SEQ ID NO: 46 - 49 являются примерами, иллюстрирующими двухвалентные биспецифические соединения изобретения, и соединения SEQ ID NO: 50 - 52 являются примерами, иллюстрирующими трехвалентные биспецифические соединения изобретения. В каждом случае, соединения содержат E1D мутацию и C-концевой остаток аланина, и содержат характерные, но неограничивающие примеры использования подходящих линкеров (т.е. 15GS линкер в SEQ ID NO:47 и 48 и или 5GS линкеры в SEQ ID NO:s 46 и 49 - 52).By way of illustration, some examples of compounds of the invention are given in SEQ ID NO: 46 - 52, using the anti-HER2 Nanobody of SEQ ID NO: 45 as a representative example of an anti-target Nanobody, and the constituents of the Nanobody are at different positions in the compound of the invention . The compounds of SEQ ID NO: 46-49 are examples illustrating the divalent bispecific compounds of the invention, and the compounds of SEQ ID NO: 50-52 are examples illustrating the trivalent bispecific compounds of the invention. In each case, the compounds contain an E1D mutation and a C-terminal alanine residue, and contain specific but non-limiting examples of the use of suitable linkers (i.e., the 15GS linker in SEQ ID NO:47 and 48 and or the 5GS linker in SEQ ID NO:s 46 and 49-52).
Некоторые другие примеры некоторых отдельных мультиспецифических и/или мультивалентных полипептидов изобретения можно найти в заявках Ablynx N.V., упомянутых в описании. В частности, в отношении общего описания мультивалентных и мультиспецифических конструкций, содержащих по меньшей мере одно нанотело против сывороточного белка для увеличения времени полужизни, нуклеиновых кислот, кодирующих указанные конструкции, композиций, содержащих указанные конструкции, получение вышеупомянутых конструкций и вариантов применения вышеупомянутых конструкций, можно сослаться на международные заявки WO 04/041865 и WO 06/122787, упомянутые выше (связывающие сывороточный альбумин вещества изобретения, описанные в этом документе, могут в большинстве случаев использоваться аналогично для увеличения времени полужизни нанотел, описанных в этом документе, таких как Alb-8), а также общее описание и конкретные примеры таких конструкций даны, например, в WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627. Some other examples of some individual multispecific and/or multivalent polypeptides of the invention can be found in the applications of Ablynx N.V., mentioned in the description. In particular, with respect to a general description of multivalent and multispecific constructs containing at least one anti-whey protein nanobody to increase half-life, nucleic acids encoding said constructs, compositions containing said constructs, the production of the aforementioned constructs, and applications of the aforementioned constructs, reference may be made to to international applications WO 04/041865 and WO 06/122787 mentioned above (the serum albumin-binding substances of the invention described in this document can in most cases be used similarly to increase the half-life of the nanobodies described in this document, such as Alb-8) , as well as a general description and specific examples of such structures are given, for example, in WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/068627.
Изобретение также имеет отношение к нуклеотидным последовательностям или нуклеиновым кислотам, которые кодируют вещества, связывающие альбумин, соединения или полипептиды изобретения. Изобретение дополнительно включает генетические конструкции, которые включают вышеупомянутые нуклеотидные последовательности или нуклеиновые кислоты и один или более элементов для генетических конструкций как таковых. Генетическая конструкция может иметь форму плазмиды или вектора. И в этом случае, такие конструкции могут представлять собой, как описано в опубликованных патентных заявках Ablynx N.V., таких как, например, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627.The invention also relates to nucleotide sequences or nucleic acids which encode albumin binding agents, compounds or polypeptides of the invention. The invention further includes genetic constructs that include the aforementioned nucleotide sequences or nucleic acids and one or more elements for the genetic constructs as such. The genetic construct may be in the form of a plasmid or a vector. Again, such constructs may be as described in Ablynx N.V. published patent applications such as, for example, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/068627.
Изобретение, кроме того, имеет отношение к хозяевам или клеткам-хозяевам, которые содержат такие нуклеотидные последовательности или нуклеиновые кислоты, и/или которые экспрессируют (или являются способными экспрессировать), связывающие альбумин вещества, соединения или полипептиды изобретения. И в этом случае, такие клетки-хозяева могут быть в основном описаны в опубликованных патентных заявках Ablynx N.V., таких как, например WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627.The invention further pertains to hosts or host cells which contain such nucleotide sequences or nucleic acids and/or which express (or are capable of expressing) the albumin-binding substances, compounds or polypeptides of the invention. Again, such host cells can be generally described in the published patent applications of Ablynx N.V. such as, for example, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/068627.
Изобретение также имеет отношение к способу получения связывающего альбумин вещества, соединения или полипептида изобретения, при этом способ включает культивирование или поддержание клетки-хозяина, как описано в этом документе, при таких условиях, что указанная клетка-хозяин продуцирует или экспрессирует связывающее альбумин вещество, соединение или полипептид изобретения, и необязательно дополнительно включает выделение связывающего альбумин вещества, соединения или полипептида изобретения, продуцированного таким способом. Опять же, такие способы могут быть осуществлены так, как в общем описано в опубликованных патентных заявках Ablynx N.V., таких как, например WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627.The invention also relates to a method for producing an albumin-binding substance, compound or polypeptide of the invention, the method comprising culturing or maintaining a host cell as described herein under such conditions that said host cell produces or expresses an albumin-binding substance, compound or a polypeptide of the invention, and optionally further comprising isolating an albumin-binding substance, compound, or polypeptide of the invention produced in this way. Again, such methods can be carried out as generally described in Ablynx N.V. published patent applications such as, for example, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/068627.
Изобретение также имеет отношение к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение или полипептид изобретения, и необязательно по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент. Такие препараты, носители, эксципиенты и разбавители могут быть в основном такими, как описано в опубликованных патентных заявках Ablynx N.V., таких как, например WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627.The invention also relates to a pharmaceutical composition containing at least one compound or polypeptide of the invention, and optionally at least one pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient. Such preparations, carriers, excipients and diluents may be generally as described in the published patent applications of Ablynx N.V., such as, for example, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/ 068627.
Однако, поскольку соединения или полипептиды изобретения имеют увеличенное время полужизни, их предпочтительно вводят в кровоток. Собственно, они могут вводиться любым подходящим способом, обеспечивающим поступление соединения или полипептида изобретения в кровоток, например, внутривенно, путем инъекции или инфузии, или любым подходящим способом (включая пероральное введение, подкожное введение, внутримышечное введение, чрескожное введение, внутриназальное введение, введение через легкие и т.д.). Подходящие способы и пути введения понятны специалистам, например, также из опубликованных патентных заявок Ablynx N.V., таких как, например WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 или WO 2009/068627.However, since the compounds or polypeptides of the invention have an extended half-life, they are preferably administered into the bloodstream. As such, they may be administered by any suitable route that brings the compound or polypeptide of the invention into the circulation, such as intravenously, by injection or infusion, or by any suitable route (including oral, subcutaneous, intramuscular, transdermal, intranasal, transdermal, lungs, etc.). Suitable methods and routes of administration will be apparent to those skilled in the art, for example also from Ablynx N.V. published patent applications such as, for example, WO 04/041862, WO 2006/122786, WO 2008/020079, WO 2008/142164 or WO 2009/068627.
Таким образом, в другом аспекте изобретение имеет отношение к способу предотвращения и/или лечения по меньшей мере одного заболевания или нарушения, которое может быть предотвращено или которое можно лечить, используя соединение или полипептид изобретения, при этом данный способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту фармацевтически активного количества соединения или полипептида изобретения и/или фармацевтической содержащей их композиции. Болезни или нарушения, которые можно предотвратить или лечить путем использования соединения или полипептида изобретения, как описано в этом документе, в большинстве случаев будут представлять собой такие же болезни или нарушения, которые можно предотвратить или лечить путем использования лекарственных веществ или молекул, которые представляют собой/присутствуют в соединении или полипептиде изобретения.Thus, in another aspect, the invention relates to a method for preventing and/or treating at least one disease or disorder that can be prevented or treated using a compound or polypeptide of the invention, the method comprising administering to a subject in need thereof a pharmaceutical an active amount of a compound or polypeptide of the invention and/or a pharmaceutical composition containing them. Diseases or disorders that can be prevented or treated by using a compound or polypeptide of the invention as described herein will in most cases be the same diseases or disorders that can be prevented or treated by using drugs or molecules that are/ present in a compound or polypeptide of the invention.
В контексте настоящего изобретения термин “профилактику и/или лечение” не только включает профилактику и/или лечение заболевания, но также в большинстве случаев включает профилактику начала заболевания, замедление или устранение прогрессирования заболевания, профилактику или замедление начала одного или более симптомов, связанных с заболеванием, уменьшение и/или облегчение одного или более симптомов, связанных с заболеванием, уменьшение тяжести и/или продолжительности заболевания и/или любых симптомов, связанных с ним и/или профилактику дальнейшего увеличения тяжести болезни и/или любых симптомов, связанных с ней, профилактику, уменьшение или устранение (изменение на противоположное направление развития) любого физиологического нарушения, вызванного болезнью и, в общем, любое фармакологическое воздействие, которое является полезным для пациента, подлежащего лечению.In the context of the present invention, the term “prevention and/or treatment” not only includes the prevention and/or treatment of a disease, but also generally includes preventing the onset of a disease, slowing or eliminating the progression of a disease, preventing or slowing the onset of one or more symptoms associated with the disease. , reducing and/or alleviating one or more symptoms associated with the disease, reducing the severity and/or duration of the disease and/or any symptoms associated with it and/or preventing a further increase in the severity of the disease and/or any symptoms associated with it, prevention , reduction or elimination (reversal of development) of any physiological disturbance caused by the disease and, in general, any pharmacological effect that is beneficial to the patient being treated.
Подлежащий лечению субъект может быть любым теплокровным животным, однако, в частности, является млекопитающим и, более конкретно, человеком. Как понятно специалисту, субъектом, нуждающимся в лечении, будет являться, в частности, индивидуум, страдающий от или имеющий риск развития болезней или нарушений, упомянутых в этом документе.The subject to be treated may be any warm-blooded animal, however, in particular, is a mammal and, more specifically, a human. As one of skill in the art will appreciate, a subject in need of treatment will in particular be an individual suffering from or at risk of developing the diseases or disorders referred to herein.
В другом варианте осуществления изобретение имеет отношение к методу иммунотерапии и, в частности, к пассивной иммунотерапии, при этом данный метод включает введение субъекту, страдающему от или имеющему риск развития болезней или нарушений, упомянутых в этом документе, фармацевтически активного количества соединения или полипептида изобретения и/или содержащей их фармацевтической композиции.In another embodiment, the invention relates to an immunotherapy method, and in particular passive immunotherapy, which method comprises administering to a subject suffering from or at risk of developing the diseases or disorders mentioned herein, a pharmaceutically active amount of a compound or polypeptide of the invention, and /or a pharmaceutical composition containing them.
Соединение или полипептид изобретения и/или содержащие их композиции вводят в соответствии с режимом лечения, подходящим для предотвращения и/или лечения болезни или нарушения, которое необходимо предотвратить или лечить. Практикующий врач, как правило, способен определить подходящий режим лечения, зависящий от таких факторов как болезнь или нарушение, которое подлежит профилактике или лечению, тяжесть болезни, которую необходимо лечить, и/или тяжесть симптомов болезни, конкретный полипептид изобретения, который должен использоваться, определенный путь введения и фармацевтическая композиция, которая должна использоваться, возраст, пол, вес, диета, общее состояние пациента и подобные факторы, хорошо известные лечащему врачу.A compound or polypeptide of the invention and/or compositions containing them are administered in accordance with a treatment regimen suitable for preventing and/or treating the disease or disorder to be prevented or treated. The practitioner will generally be able to determine an appropriate treatment regimen depending on such factors as the disease or disorder to be prevented or treated, the severity of the disease to be treated and/or the severity of the symptoms of the disease, the particular polypeptide of the invention to be used is determined the route of administration and the pharmaceutical composition to be used, the age, sex, weight, diet, general condition of the patient and the like are well known to the attending physician.
Как правило, режим лечения будет включать введение одного или более соединений или полипептидов изобретения или одной или более содержащих их композиций в одном или более фармацевтически эффективных количествах или дозах. Специфическое(ие) количество(а) или дозы, которые следует вводить, могут быть определены лечащим врачом на основе приведенных выше факторов. Typically, the treatment regimen will include the administration of one or more compounds or polypeptides of the invention, or one or more compositions containing them, in one or more pharmaceutically effective amounts or doses. The specific amount(s) or dose(s) to be administered may be determined by the attending physician based on the above factors.
Как правило, для предотвращения и/или лечения болезней или нарушений, упомянутых в этом документе и в зависимости от конкретной болезни или нарушения, которое нужно лечить, эффективности и/или времени полужизни соединений или полипептидов изобретения, которые необходимо использовать, конкретного пути введения и определенной фармацевтической композиции или используемой композиции, соединения или полипептиды изобретения в большинстве случаев будут вводить в количестве в пределах от 1 грамма до 0,01 микрограмма на кг веса тела в день, предпочтительно в пределах от 0,1 грамма до 0, 1 микрограмма на кг веса тела в день, например, около 1, 10, 100 или 1000 микрограмм на кг веса тела в день, или в течение длительного времени (например, путем инфузии), в виде однократной ежедневной дозы или в виде нескольких дробных доз в течение дня. Как правило, лечащий врач способен определить подходящую ежедневную дозу, зависящую от упомянутых факторов. Также следует понимать, что в конкретных случаях лечащий врач может решить отклониться от этих количеств, например, исходя из факторов, процитированных выше, и его экспертной оценки. В общем, некоторое руководство относительно количества, которое следует вводить, может быть получено из количеств, обычно используемых при введении сравнимых общепринятых антител или фрагментов антител против той же самой мишени, вводимых тем же самым путем, однако, принимая во внимание различия в аффинности/авидности, эффективности, биорапределении, времени полужизни и сходных факторов хорошо известных специалисту.In general, for the prevention and/or treatment of the diseases or disorders mentioned herein, and depending on the particular disease or disorder to be treated, the potency and/or half-life of the compounds or polypeptides of the invention to be used, the particular route of administration, and the specific pharmaceutical composition or composition used, the compounds or polypeptides of the invention will generally be administered in an amount in the range of 1 gram to 0.01 microgram per kg of body weight per day, preferably in the range of 0.1 gram to 0.1 microgram per kg of body weight body per day, for example, about 1, 10, 100 or 1000 micrograms per kg of body weight per day, or over a long period of time (for example, by infusion), in a single daily dose or in several divided doses throughout the day. As a rule, the attending physician will be able to determine the appropriate daily dose, depending on the factors mentioned. It should also be understood that in particular cases the attending physician may decide to deviate from these amounts, for example, based on the factors cited above and his expert judgement. In general, some guidance on the amount to be administered can be obtained from the amounts normally used when administering comparable conventional antibodies or antibody fragments against the same target administered by the same route, however, taking into account differences in affinity/avidity , efficacy, biodistribution, half-life and similar factors are well known to the skilled person.
Также поскольку соединения изобретения содержат связывающее сывороточный альбумин вещество изобретения с увеличенным временем полужизни, они не нуждаются в непрерывном введении (например, путем инфузии), но они могут быть введены с подходящими интервалами (которые должен определить специалист). Например, они могут вводиться (в подходящей дозе) один раз в два дня, один раз каждые четыре дня, один раз в неделю, один раз каждые две недели и в некоторых случаях один раз каждые четыре недели или даже менее часто, например, путем инъекции или инфузии.Also, since the compounds of the invention contain an extended half-life serum albumin-binding substance of the invention, they do not need to be administered continuously (eg by infusion), but they can be administered at suitable intervals (to be determined by the skilled person). For example, they can be administered (at a suitable dose) once every two days, once every four days, once a week, once every two weeks, and in some cases once every four weeks or even less often, for example, by injection. or infusion.
Один аспект изобретения имеет отношение к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение или полипептид изобретения, при этом указанная композиция предназначена для введения в промежутке от одного раза в неделю до одного раза в течение 4 недель и, в частности, в промежутке от одного раза через каждые 7 дней до одного раза через каждые 21 день, например, один раз каждые 7 или 14 дней. One aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition comprising at least one compound or polypeptide of the invention, wherein said composition is intended to be administered from once a week to once for 4 weeks, and in particular from once every 7 days up to once every 21 days, for example once every 7 or 14 days.
В большинстве случаев в упомянутом выше способе будет использоваться одиночный полипептид изобретения. Однако в рамки изобретения входит использование двух или более полипептидов изобретения в комбинации.In most cases, the method mentioned above will use a single polypeptide of the invention. However, it is within the scope of the invention to use two or more polypeptides of the invention in combination.
Полипептиды изобретения также могут использоваться в комбинации с одним или более дополнительными фармацевтически активными соединениями или структурами, т.е., в виде комбинированного режима лечения, что может приводить или не приводить к синергетическому эффекту. Опять же, лечащий врач будет способен выбрать такие дополнительные соединения или структуры, а также подходящие комбинированные режимы лечения, исходя из факторов перечисленных выше и его экспертной оценки. The polypeptides of the invention may also be used in combination with one or more additional pharmaceutically active compounds or structures, ie, as a combination treatment regimen, which may or may not result in a synergistic effect. Again, the attending physician will be able to select such additional compounds or structures, as well as suitable combination treatment regimens, based on the factors listed above and his or her expert judgement.
В частности, полипептиды изобретения могут использоваться в комбинации с другими фармацевтически активными соединениями или структурами, которые используются или могут использоваться для предотвращения и/или лечения болезней и нарушений, которые можно предотвратить или лечить с помощью слитых белков или конструкций изобретения, и в результате чего синергетический эффект может быть получен или нет. In particular, the polypeptides of the invention can be used in combination with other pharmaceutically active compounds or structures that are used or can be used to prevent and/or treat diseases and disorders that can be prevented or treated using the fusion proteins or constructs of the invention, and as a result of synergistic effect may or may not be obtained.
Как понятно лечащему врачу, эффективность режима лечения, использованного согласно изобретению, в отношении болезни или нарушения может быть определена и/или прослежена любым широко известным способом. Лечащий врач также будет способен, где это необходимо и/или в каждом конкретном случае, изменить или модифицировать конкретный режим лечения, для того, чтобы достичь желательного терапевтического эффекта, избежать, ограничить или уменьшить нежелательные побочные эффекты, и/или добиться подходящего баланса между достижением желательного терапевтического эффекта с одной стороны и избеганием, ограничением или уменьшением нежелательных побочных эффектов с другой стороны. As understood by the attending physician, the effectiveness of the treatment regimen used according to the invention in relation to the disease or disorder can be determined and/or tracked by any widely known method. The attending physician will also be able, where necessary and/or on a case-by-case basis, to change or modify a particular treatment regimen in order to achieve the desired therapeutic effect, to avoid, limit or reduce unwanted side effects, and/or strike an appropriate balance between achieving desired therapeutic effect on the one hand and avoidance, limitation or reduction of unwanted side effects on the other hand.
В общем случае, режим лечения будет применяться до достижения желательного терапевтического эффекта и/или в течение всего времени, пока желательный терапевтический эффект следует поддерживать. И в этом случае, это может быть определено лечащим врачом.In general, the treatment regimen will be applied until the desired therapeutic effect is achieved and/or for as long as the desired therapeutic effect is to be maintained. And in this case, it can be determined by the attending physician.
Другие аспекты, варианты осуществления, преимущества и практические применения изобретения станут понятны из дальнейшего описания.Other aspects, embodiments, advantages and practical applications of the invention will become apparent from the following description.
Далее изобретение будет описываться с помощью следующих неограничивающих предпочтительных аспектов, примеров и фигур, при этом:Further, the invention will be described using the following non-limiting preferred aspects, examples and figures, while:
фиг. 1 – это таблица, содержащая список некоторых аминокислотных положений, которые будут упоминаться в описании, и их нумерация согласно некоторым альтернативным системам нумерации (таким как Aho и IMGT);fig. 1 is a table listing some of the amino acid positions that will be referred to in the description and numbering them according to some alternative numbering systems (such as Aho and IMGT);
фиг. 2 перечисляет аминокислотные последовательности, упоминаемые в описании;fig. 2 lists the amino acid sequences mentioned in the description;
фиг. 3A и 3B показывают выравнивание последовательности SEQ ID NO:18 и 19 (изобретение) с последовательностями предшествующего уровня SEQ ID NO: 1 и 2;fig. 3A and 3B show the sequence alignment of SEQ ID NOs: 18 and 19 (invention) with the prior level sequences of SEQ ID NOs: 1 and 2;
фиг. 4 показывает выравнивание SEQ ID NO: 18 - 44;fig. 4 shows the alignment of SEQ ID NOs: 18-44;
фиг. 5 показывает выравнивание сывороточного альбумина от разных видов млекопитающих;fig. 5 shows the alignment of serum albumin from different mammalian species;
фиг. 6 - график, показывающий связывание SEQ ID NO:1 (эталон)-cMycHis6 с нанесенным HSA в присутствии связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение). 1,5 нМ SEQ ID NO:1-cMycHis6 и серия концентраций His6Flag3-SEQ ID NO:1 (эталон), Flag3His6-SEQ ID NO:19 (изобретение) или cAblys3-Flag3His6 (эталон) были проинкубированы на нанесенном HSA. Связанный SEQ ID NO:1-cMycHis6 обнаруживали с помощью козьих анти-cMyc и HRP-меченых кроличьих анти-козьих антител;fig. 6 is a graph showing the binding of SEQ ID NO:1 (reference)-cMycHis6 to coated HSA in the presence of a serum albumin binding agent of SEQ ID NO:19 (invention). 1.5 nM SEQ ID NO:1-cMycHis6 and a concentration series of His6Flag3-SEQ ID NO:1 (reference), Flag3His6-SEQ ID NO:19 (invention) or cAblys3-Flag3His6 (reference) were incubated on coated HSA. Linked SEQ ID NO: 1-cMycHis6 was detected with goat anti-cMyc and HRP-labeled rabbit anti-goat antibodies;
фиг. 7 - график, показывающий связывание HSA с FcRn в присутствии связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение). Гетеродимер человеческий FcRn-человеческий β2 микроглобулин был иммобилизирован на CM5 чипе. Связывание 1 мкM HSA в отсутствие или в присутствии 2 мкM нанотела в 50 мM NaPO4 + 150 мM NaCl + 0,05% Твин-20 pH 6.0 контролировали на приборе Biacore T100.fig. 7 is a graph showing the binding of HSA to FcRn in the presence of a serum albumin binding agent SEQ ID NO:19 (invention). The heterodimer human FcRn-human β2 microglobulin was immobilized on a CM5 chip. Binding of 1 μM HSA in the absence or presence of 2 μM nanobody in 50 mM NaPO4 + 150 mM NaCl + 0.05% Tween-20 pH 6.0 was monitored on a Biacore T100 instrument.
Полное содержание всех ссылок (включая библиографию, выданные патенты, опубликованные патентные заявки и совместные заявки на патент, находящиеся в рассмотрении), цитированных на всем протяжении этой заявки явным образом включены в данный документ посредством ссылки.The entire contents of all references (including bibliography, issued patents, published patent applications, and joint patent applications pending) cited throughout this application are expressly incorporated herein by reference.
Экспериментальная частьexperimental part
Пример 1. Аффинность в отношении сывороточного альбуминаExample 1 Serum Albumin Affinity
Аффинность связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение) в отношении человеческого (Sigma-Aldrich A3782), яванского макака (полученного своими силами), мышиного (Albumin Bioscience 2601), крысиного (Sigma-Aldrich A4538), кроличьего (Sigma-Aldrich A0764), морской свинки (Gentaur GPSA62), свиньи (Sigma-Aldrich A4414), овцы (Sigma-Aldrich A3264) и коровы (Sigma-Aldrich A3059) сывороточного альбумина (SA) измеряли посредством поверхностного плазмонного резонанса (SPR) на приборе ProteOn XPR36 (BioRad). Сывороточный альбумин был иммобилизирован посредством иммобилизации через амино-группу на GLC ProteOn чипе с использованием набора ProteOn Amine Coupling Kit (BioRad). Разные концентрации (300 нM, 100 нM, 33.3 нM, 11.1 нM, 3.7 нM и 1.23 нM) связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение) инжектировали в HBS-P+ pH 7,4 буфере (GE Healthcare) при 45 мкл/мин в течение 120 сек с последующей диссоциацией в течение 900 сек. Не наблюдалось или наблюдалось очень низкое связывание связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение) с SA кролика, свиньи, овцы и коровы. Аффинность вещества, связывающего сывороточный альбумин, SEQ ID NO:19 (изобретение) в отношении SA человека, яванского макака, крысы, мыши и морской свинки была выше по сравнению с соответствующими аффинностями связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:1. Результаты показаны в таблице 1 ниже, и показано, что связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение) является перекрестно-реактивным с SA собаки и свиньи.Affinity of the serum albumin binding substance SEQ ID NO:19 (invention) for human (Sigma-Aldrich A3782), cynomolgus monkey (self-produced), mouse (Albumin Bioscience 2601), rat (Sigma-Aldrich A4538), rabbit (Sigma- Aldrich A0764), guinea pig (Gentaur GPSA62), pig (Sigma-Aldrich A4414), sheep (Sigma-Aldrich A3264), and bovine (Sigma-Aldrich A3059) serum albumin (SA) was measured by surface plasmon resonance (SPR) on a ProteOn instrument. XPR36 (BioRad). Serum albumin was immobilized via amino group immobilization on a GLC ProteOn chip using the ProteOn Amine Coupling Kit (BioRad). Different concentrations (300 nM, 100 nM, 33.3 nM, 11.1 nM, 3.7 nM and 1.23 nM) of the serum albumin binding substance SEQ ID NO:19 (invention) were injected into HBS-P+ pH 7.4 buffer (GE Healthcare) at 45 μl /min for 120 sec followed by dissociation for 900 sec. No or very low binding of serum albumin binding substance SEQ ID NO:19 (invention) to rabbit, porcine, ovine and bovine SA was observed. The affinity of the serum albumin binding agent SEQ ID NO:19 (invention) for human, cynomolgus monkey, rat, mouse and guinea pig SA was higher compared to the corresponding affinities of the serum albumin binding agent SEQ ID NO:1. The results are shown in Table 1 below, and the serum albumin binding agent of SEQ ID NO:19 (invention) is shown to be cross-reactive with dog and porcine SA.
Таблица 1. Кинетические параметры связывания вещества, связывающего сывороточный альбумин, SEQ ID NO:19 (изобретение) с SA от разных видов. Table 1. Kinetic parameters for the binding of a serum albumin binding agent, SEQ ID NO:19 (invention) to SA from different species.
(изобретение)SEQ ID NO:19
(invention)
(эталон)SEQID NO:1
(reference)
(s-1M-1)ka
(s-1M-1)
(s-1)kd
(s-1)
(M)KD
(M)
(s-1M-1)ka
(s-1M-1)
(s-1)kd
(s-1)
(M)KD
(M)
Длительное время полужизни альбумина в крови объясняется в основном двумя свойствами: (i) большой размер (65 кДа) альбумина ограничивает его клубочковую фильтрацию, и (ii) альбумин связывается с FcRn при низком значении pH (pH 6), которое защищает альбумин от деградации в лизосомах после пассивного эндоцитоза в эндотелиальные и эпителиальные клетки путем рециклинга (возвращения) из ранней эндосомы назад во внеклеточную окружающую среду. Для того, чтобы связывающие альбумин нанотела обеспечить длительным временем полужизни посредством связывания альбумина и последующего рециклинга, они должны оставаться связанными с альбумином в пределах значений pH от 5,0 до 7,4. Скорость диссоциации связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение) от HSA при pH 5, pH 6 и pH 7,4 была измерена на приборе ProteOn, как описано выше, включая связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:1 в качестве эталона. Связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение) и SEQ ID NO:1 (эталон) вводили при 500 нM и 300 нM соответственно в HBS-P+ pH 7.4 буфере. Буферы для диссоциации были следующие: 50 мM NaOAc/HOAc + 150 мM NaCl + 0.05 % Твин-20 pH 5,0, 50 мM NaOAc/HOAc + 150 мM NaCl + 0.05% Твин-20 pH 6.0 и HBS-P+ pH 7.4, соответственно. Диссоциацию анализировали в течение 2700 секунд. Скорость диссоциации для связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение) значительно не изменялась в пределах значений pH от 5,0 до 7,4. Результаты показаны в таблице 2.The long half-life of albumin in the blood is due mainly to two properties: (i) the large size (65 kDa) of albumin limits its glomerular filtration, and (ii) albumin binds to FcRn at a low pH (pH 6), which protects albumin from degradation into lysosomes after passive endocytosis into endothelial and epithelial cells by recycling (return) from the early endosome back to the extracellular environment. In order for albumin-binding nanobodies to provide a long half-life through albumin binding and subsequent recycling, they must remain bound to albumin within a pH range of 5.0 to 7.4. The dissociation rate of SEQ ID NO:19 (invention) serum albumin binding agent from HSA at
Таблица 2. Скорость диссоциации связывающего сывороточный альбумин вещества SEQ ID NO:19 (изобретение) от HSA при разных значениях pH. Table 2. Dissociation rate of serum albumin binding substance SEQ ID NO:19 (invention) from HSA at different pH values.
Пример 2. ЭпитопExample 2 Epitope
Связывание эпитопа анализировали в конкурентном анализе ELISA. Человеческий сывороточный альбумин наносили при 125 нг/мл в PBS при 4°C на ночь. После блокирования с помощью PBS + 1% казеин добавляли 1,5 нM связывающее сывороточный альбумин вещество [SEQ ID NO:1-cMycHis6] и серию концентраций конкурентов (His6Flag3-связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение), His6Flag3-SEQ ID NO:1 (эталон) в качестве положительного контроля или связывающее лизоцим куриного яйца однодоменное антитело cAblys3-Flag3His6 в качестве отрицательного контроля). Связанный SEQ ID NO:1 (эталон)-cMycHis6 обнаруживали с помощью козьих анти-cMyc (Abcam ab19234) и HRP-меченых кроличьих анти-козьих (Genway 18-511-244226) антител. Связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение) и SEQ ID NO:1 (эталон) не связываются с идентичными эпитопами на HSA (фиг. 6).Epitope binding was analyzed in a competitive ELISA. Human serum albumin was applied at 125 ng/ml in PBS at 4° C. overnight. After blocking with PBS + 1% casein, 1.5 nM serum albumin binding agent [SEQ ID NO:1-cMycHis6] and a series of competitor concentrations (His6Flag3-serum albumin binding agent SEQ ID NO:19 (invention), His6Flag3-SEQ ID NO:1 (reference) as a positive control or chick egg lysozyme-binding single-domain antibody cAblys3-Flag3His6 as a negative control). Linked SEQ ID NO:1 (reference)-cMycHis6 was detected with goat anti-cMyc (Abcam ab19234) and HRP-labeled rabbit anti-goat (Genway 18-511-244226) antibodies. The serum albumin binding substance SEQ ID NO:19 (invention) and SEQ ID NO:1 (reference) do not bind to identical epitopes on HSA (FIG. 6).
Пример 3. Вмешательство во взаимодействие между SA и FcRnExample 3 Interfering with the interaction between SA and FcRn
Для того, чтобы связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение) обеспечить длительным временем полужизни посредством связывания альбумина и последующего рециклинга, оно не должно вмешиваться в связывание альбумина с FcRn. Это было проанализировано в SPR на приборе T100 (GE Healthcare). Гетеродимер человеческий FcRn-человеческий β2 микроглобулин (Sino Biological CT009-H08H) был иммобилизирован на CM5 чипе посредством стандартной иммобилизации на аминогруппе (набор для иммобилизации на аминогруппе Biacore). Смесь 1 мкM HSA и 2 мкM Нанотела (His6Flag3-связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение), His6Flag3-SEQ ID NO:1 (эталон) или cAblys3-Flag3His6) в 50 мM NaPO4 + 150 мM NaCl + 0,05% Tвин-20 при pH 6, инжектировали со скоростью 10 мкл/мин в течение 120 сек, с последующей диссоциацией в течение 600 сек. Кривые связывания качественно сравнивали с кривой связывания 1 мкM HSA при отсутствии нанотела. Связывающее сывороточный альбумин вещество SEQ ID NO:19 (изобретение) не вмешивается в связывание HSA с FcRn (фиг. 7).In order for a serum albumin binding agent of SEQ ID NO:19 (invention) to provide a long half-life through albumin binding and subsequent recycling, it must not interfere with albumin binding to FcRn. This was analyzed in SPR on the T100 instrument (GE Healthcare). The human FcRn-human β2 microglobulin heterodimer (Sino Biological CT009-H08H) was immobilized on the CM5 chip by standard amino immobilization (Biacore amino immobilization kit). Mixture of 1 μM HSA and 2 μM Nanotel (His6Flag3-binding serum albumin SEQ ID NO:19 (invention), His6Flag3-SEQ ID NO:1 (reference) or cAblys3-Flag3His6) in 50 mM NaPO4 + 150 mM NaCl + 0, 05% Tween-20 at
Пример 4. PK профиль у собаки Example 4. PK profile in a dog
Исследовали фармакокинетику трехвалентной конструкции нанотела (SEQ ID NO:53) после однократного внутривенного введения собаке. Трехвалентная конструкция была получена в Pichia pastoris и включала два нанотела против респираторного синцитиального вируса (RSV) с альбумин-связывающим нанотелом SEQ ID NO:21 в C-концевой области (в котором три нанотела соединены друг с другом при помощи (Gly4Ser)7 линкеров).The pharmacokinetics of a trivalent nanobody construct (SEQ ID NO:53) was studied after a single intravenous administration to a dog. A trivalent construct was generated in Pichia pastoris and included two anti-respiratory syncytial virus (RSV) nanobodies with an albumin-binding nanobody of SEQ ID NO:21 in the C-terminal region (in which the three nanobodies are connected to each other by (Gly4Ser)7 linkers) .
Фармакокинетический профиль конструкции оценивался в фармакокинетическом исследовании (неперекрестное, с однократной дозой) на двенадцати здоровых кобелях породы бигль натощак (состояние здоровья было оценено в ходе медицинского осмотра до проведения исследования). Конструкцию вводили внутривенно. The pharmacokinetic profile of the construct was evaluated in a pharmacokinetic study (non-crossover, single dose) in twelve healthy fasting male Beagle dogs (health status assessed during pre-study physical examination). The construct was administered intravenously.
Животные голодали (с непрерывным доступом к воде) в течение ночи перед введением дозы, а также перед сбором образцов крови перед введением дозировки и через 24, 168 и 336 часов после введения дозировки (общее время голодания составляло не более 24 часов). Пищу давали через 4 часа после введения дозировки или сразу после сбора крови через 24, 168 и 336 часов. Также регистрировали вес тела и прослеживали его в течение всего исследования.Animals were fasted (with continuous access to water) overnight prior to dosing, as well as before blood sampling before dosing and 24, 168 and 336 hours after dosing (total fasting time was no more than 24 hours). Food was given 4 hours after dosing or immediately after blood collection at 24, 168 and 336 hours. Body weight was also recorded and tracked throughout the study.
1 мл цельной крови (или 2-3 мл до дозирования и через 24, 168 и 336 часов) для получения плазмы собирали из периферического кровеносного сосуда перед введением дозировки и через 5, 15, 30 минут и 1, 4, 8, 12, 24, 72, 168, 240, 336, 504 и 672 часов после первоначальной дозировки. Собранные для получения сыворотки образцы держали при комнатной температуре и давали свернуться. Кровь центрифугировали при 10000 об/мин в течение 2 минут на центрифуге с охлаждением (температура поддерживалась 4°C). Образцы замораживали в течение 30 минут после сбора до времени проведения анализа (включая измерение концентрации релевантной конструкции нанотела).1 ml of whole blood (or 2-3 ml before dosing and after 24, 168 and 336 hours) for plasma was collected from a peripheral blood vessel before dosing and after 5, 15, 30 minutes and 1, 4, 8, 12, 24 , 72, 168, 240, 336, 504, and 672 hours after initial dosing. Collected to obtain serum samples were kept at room temperature and allowed to clot. Blood was centrifuged at 10,000 rpm for 2 minutes in a refrigerated centrifuge (temperature maintained at 4°C). Samples were frozen within 30 minutes of collection until the time of analysis (including measurement of the concentration of the relevant nanobody construct).
--->--->
SEQUENCE LISTING SEQUENCE LISTING
<110> Ablynx NV<110> Ablynx NV
<120> Improved serum albumin binders<120> Improved serum albumin binders
<130> 202810<130> 202810
<150> US62/446,988<150> US62/446,988
<151> 2017-01-17<151> 2017-01-17
<160> 63 <160> 63
<170> PatentIn version 3.5<170>PatentIn version 3.5
<210> 1<210> 1
<211> 115<211> 115
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> Reference<223> Reference
<400> 1<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Asn
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Thr Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110 100 105 110
Val Ser Ser Val Ser Ser
115 115
<210> 2<210> 2
<211> 115<211> 115
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> Reference<223> Reference
<400> 2<400> 2
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe
20 25 30 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr Thr Ile Gly Gly Ser Leu Ser Arg Ser Ser Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110 100 105 110
Val Ser Ser Val Ser Ser
115 115
<210> 3<210> 3
<211> 5<211> 5
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR1 (Kabat)<223> CDR1 (Kabat)
<400> 3<400> 3
Ser Phe Gly Met Ser Ser Phe Gly Met Ser
1 5 15
<210> 4<210> 4
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR2 (Kabat)<223> CDR2 (Kabat)
<400> 4<400> 4
Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 5<210> 5
<211> 6<211> 6
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR3 (Kabat/Abm)<223> CDR3 (Kabat/Abm)
<400> 5<400> 5
Gly Gly Ser Leu Ser Arg Gly Gly Ser Leu Ser Arg
1 5 15
<210> 6<210> 6
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR1 (Abm)<223> CDR1 (Abm)
<400> 6<400> 6
Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Gly Met Ser
1 5 10 1 5 10
<210> 7<210> 7
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR2 (Abm)<223> CDR2 (Abm)
<400> 7<400> 7
Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asp Thr Leu
1 5 10 1 5 10
<210> 8<210> 8
<211> 6<211> 6
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR3 (Kabat/Abm)<223> CDR3 (Kabat/Abm)
<400> 8<400> 8
Gly Gly Ser Leu Ser Arg Gly Gly Ser Leu Ser Arg
1 5 15
<210> 9<210> 9
<211> 5<211> 5
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR1 (Kabat)<223> CDR1 (Kabat)
<400> 9<400> 9
Thr Tyr Val Met Gly Thr Tyr Val Met Gly
1 5 15
<210> 10<210> 10
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR2 (Kabat)<223> CDR2 (Kabat)
<400> 10<400> 10
Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 11<210> 11
<211> 17<211> 17
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR2 (Kabat)<223> CDR2 (Kabat)
<400> 11<400> 11
Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly gly
<210> 12<210> 12
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR1 (Abm)<223> CDR1 (Abm)
<400> 12<400> 12
Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly
1 5 10 1 5 10
<210> 13<210> 13
<211> 10<211> 10
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR2 (Abm)<223> CDR2 (Abm)
<400> 13<400> 13
Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr
1 5 10 1 5 10
<210> 14<210> 14
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> CDR3 (Kabat/Abm)<223> CDR3 (Kabat/Abm)
<400> 14<400> 14
Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr
1 5 10 15 1 5 10 15
<210> 15<210> 15
<211> 5<211> 5
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> C-terminal sequence<223> C-terminal sequence
<400> 15<400> 15
Val Thr Val Ser Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 15
<210> 16<210> 16
<211> 15<211> 15
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> 15 GS linker<223> 15 GS linker
<400> 16<400> 16
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15 1 5 10 15
<210> 17<210> 17
<211> 35<211> 35
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> 35 GS linker<223> 35 GS linker
<400> 17<400> 17
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30 20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Ser
35 35
<210> 18<210> 18
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 18<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Asp Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 19<210> 19
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 19<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 20<210> 20
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 20<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 21<210> 21
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 21<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 22<210> 22
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 22<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 23<210> 23
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 23<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 24<210> 24
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 24<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 25<210> 25
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 25<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 26<210> 26
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 26<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 27<210> 27
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 27<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Asp Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 28<210> 28
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 28<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 29<210> 29
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 29<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 30<210> 30
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 30<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 31<210> 31
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 31<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 32<210> 32
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 32<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 33<210> 33
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 33<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 34<210> 34
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 34<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 35<210> 35
<211> 125<211> 125
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 35<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125 115 120 125
<210> 36<210> 36
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 36<400> 36
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Asp Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Asp Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 37<210> 37
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 37<400> 37
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 38<210> 38
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 38<400> 38
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 39<210> 39
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 39<400> 39
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 40<210> 40
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 40<400> 40
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 41<210> 41
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 41<400> 41
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 42<210> 42
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 42<400> 42
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 43<210> 43
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 43<400> 43
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 44<210> 44
<211> 124<211> 124
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> ISVD<223> ISVD
<400> 44<400> 44
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 115 120
<210> 45<210> 45
<211> 118<211> 118
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> anti-HER2-Nanobody<223> anti-HER2-Nanobody
<400> 45<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn
20 25 30 20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45 35 40 45
Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60 50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95 85 90 95
Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Leu Val Thr Val Ser Ser
115 115
<210> 46<210> 46
<211> 278<211> 278
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> bivalent bispecific compound<223> bivalent bispecific compound
<400> 46<400> 46
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn
20 25 30 20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45 35 40 45
Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60 50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95 85 90 95
Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125 115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140 130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
165 170 175 165 170 175
Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln
180 185 190 180 185 190
Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser
195 200 205 195 200 205
Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
210 215 220 210 215 220
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg
225 230 235 240 225 230 235 240
Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser
245 250 255 245 250 255
Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
260 265 270 260 265 270
Val Thr Val Ser Ser Ala Val Thr Val Ser Ser Ala
275 275
<210> 47<210> 47
<211> 258<211> 258
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> bivalent bispecific compound<223> bivalent bispecific compound
<400> 47<400> 47
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn
20 25 30 20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45 35 40 45
Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60 50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95 85 90 95
Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125 115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val
130 135 140 130 135 140
Val Gln Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Val Gln Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
145 150 155 160 145 150 155 160
Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
165 170 175 165 170 175
Glu Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Glu Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr
180 185 190 180 185 190
Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
195 200 205 195 200 205
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr
210 215 220 210 215 220
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
245 250 255 245 250 255
Ser Ala Ser Ala
<210> 48<210> 48
<211> 258<211> 258
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> bivalent bispecific compound<223> bivalent bispecific compound
<400> 48<400> 48
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Tyr Trp Gly Glyn Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val
130 135 140 130 135 140
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr
165 170 175 165 170 175
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser
180 185 190 180 185 190
Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
195 200 205 195 200 205
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
210 215 220 210 215 220
Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
245 250 255 245 250 255
Ser Ala Ser Ala
<210> 49<210> 49
<211> 278<211> 278
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> bivalent bispecific compound<223> bivalent bispecific compound
<400> 49<400> 49
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Tyr Trp Gly Glyn Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140 130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
145 150 155 160 145 150 155 160
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser
165 170 175 165 170 175
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr
180 185 190 180 185 190
Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
195 200 205 195 200 205
Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
210 215 220 210 215 220
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
225 230 235 240 225 230 235 240
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg
245 250 255 245 250 255
Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
260 265 270 260 265 270
Val Thr Val Ser Ser Ala Val Thr Val Ser Ser Ala
275 275
<210> 50<210> 50
<211> 431<211> 431
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> trivalent bispecific compound<223> trivalent bispecific compound
<400> 50<400> 50
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn
20 25 30 20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45 35 40 45
Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60 50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95 85 90 95
Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125 115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140 130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
165 170 175 165 170 175
Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln
180 185 190 180 185 190
Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly
195 200 205 195 200 205
Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
210 215 220 210 215 220
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro
225 230 235 240 225 230 235 240
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln
245 250 255 245 250 255
Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270 260 265 270
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285 275 280 285
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
290 295 300 290 295 300
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro
305 310 315 320 305 310 315 320
Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser
325 330 335 325 330 335
Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
340 345 350 340 345 350
Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn
355 360 365 355 360 365
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
370 375 380 370 375 380
Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
385 390 395 400 385 390 395 400
Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu
405 410 415 405 410 415
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
420 425 430 420 425 430
<210> 51<210> 51
<211> 431<211> 431
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> trivalent bispecific compound<223> trivalent bispecific compound
<400> 51<400> 51
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn
20 25 30 20 25 30
Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45 35 40 45
Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60 50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80 65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95 85 90 95
Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125 115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140 130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
165 170 175 165 170 175
Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln
180 185 190 180 185 190
Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser
195 200 205 195 200 205
Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
210 215 220 210 215 220
Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg
225 230 235 240 225 230 235 240
Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser
245 250 255 245 250 255
Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
260 265 270 260 265 270
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285 275 280 285
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300 290 295 300
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
305 310 315 320 305 310 315 320
Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
325 330 335 325 330 335
Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala
340 345 350 340 345 350
Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp
355 360 365 355 360 365
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
370 375 380 370 375 380
Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly
405 410 415 405 410 415
Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
420 425 430 420 425 430
<210> 52<210> 52
<211> 431<211> 431
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> trivalent bispecific compound<223> trivalent bispecific compound
<400> 52<400> 52
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Asp
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30 20 25 30
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Tyr Glu Tyr Asp
100 105 110 100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Tyr Trp Gly Glyn Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125 115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140 130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
145 150 155 160 145 150 155 160
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser
165 170 175 165 170 175
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr
180 185 190 180 185 190
Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala
195 200 205 195 200 205
Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
210 215 220 210 215 220
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
225 230 235 240 225 230 235 240
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg
245 250 255 245 250 255
Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
260 265 270 260 265 270
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285 275 280 285
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
290 295 300 290 295 300
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
305 310 315 320 305 310 315 320
Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
325 330 335 325 330 335
Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Ile Asn Thr Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala
340 345 350 340 345 350
Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val Ala Leu Ile Ser Ser Ile Gly Asp
355 360 365 355 360 365
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
370 375 380 370 375 380
Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Arg Phe Arg Thr Ala Ala Gln Gly
405 410 415 405 410 415
Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
420 425 430 420 425 430
<210> 53<210> 53
<211> 448<211> 448
<212> PRT<212> PRT
<213> Artificial Sequence<213> Artificial Sequence
<220><220>
<223> trivalent construct <223> trivalent construct
<400> 53<400> 53
Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30 20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45 35 40 45
Ala Ala Ile Ser Trp Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60 50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95 85 90 95
Ala Ala Asp Leu Thr Ser Thr Asn Pro Gly Ser Tyr Ile Tyr Ile Trp Ala Ala Asp Leu Thr Ser Thr Asn Pro Gly Ser Tyr Ile Tyr Ile Trp
100 105 110 100 105 110
Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125 115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140 130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160 145 150 155 160
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro
165 170 175 165 170 175
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser
180 185 190 180 185 190
Ser Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Tyr Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
195 200 205 195 200 205
Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Phe Val Ala Ala Ile Ser Trp Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp
210 215 220 210 215 220
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
225 230 235 240 225 230 235 240
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
245 250 255 245 250 255
Tyr Cys Ala Ala Asp Leu Thr Ser Thr Asn Pro Gly Ser Tyr Ile Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Leu Thr Ser Thr Asn Pro Gly Ser Tyr Ile Tyr
260 265 270 260 265 270
Ile Trp Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ile Trp Ala Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
275 280 285 275 280 285
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
290 295 300 290 295 300
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
305 310 315 320 305 310 315 320
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
325 330 335 325 330 335
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr
340 345 350 340 345 350
Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Phe Ser Thr Tyr Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
355 360 365 355 360 365
Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr Arg Glu Phe Val Ser Ala Ile Ser Gln Asn Ser Ile His Thr Tyr Tyr
370 375 380 370 375 380
Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
385 390 395 400 385 390 395 400
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala
405 410 415 405 410 415
Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Ser Trp Tyr Thr Ala Asp
420 425 430 420 425 430
Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Tyr Glu Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
435 440 445 435 440 445
<210> 54<210> 54
<211> 609<211> 609
<212> PRT<212> PRT
<213> Homo sapiens<213> Homo sapiens
<400> 54<400> 54
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
130 135 140 130 135 140
Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys
145 150 155 160 145 150 155 160
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175 165 170 175
Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys
180 185 190 180 185 190
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu
195 200 205 195 200 205
Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys
210 215 220 210 215 220
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
225 230 235 240 225 230 235 240
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
245 250 255 245 250 255
Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly
260 265 270 260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
275 280 285 275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
290 295 300 290 295 300
Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp
305 310 315 320 305 310 315 320
Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser
325 330 335 325 330 335
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350 340 345 350
Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys
370 375 380 370 375 380
Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys
405 410 415 405 410 415
Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430 420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445 435 440 445
Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
450 455 460 450 455 460
Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480 465 470 475 480
Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg
485 490 495 485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510 500 505 510
Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
515 520 525 515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu
530 535 540 530 535 540
Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
545 550 555 560 545 550 555 560
Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala
565 570 575 565 570 575
Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe
580 585 590 580 585 590
Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly
595 600 605 595 600 605
Leu Leu
<210> 55<210> 55
<211> 607<211> 607
<212> PRT<212> PRT
<213> Mus musculus<213> Mus musculus
<400> 55<400> 55
Met Lys Trp Val Thr Phe Leu Leu Leu Leu Phe Val Ser Gly Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Leu Leu Leu Leu Phe Val Ser Gly Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Phe Ser Arg Gly Phe Arg Arg Glu Ala His Lys Ser Glu Ile Ala His Phe Ser Arg Gly Phe Arg Arg Glu Ala His Lys Ser Glu Ile Ala His
20 25 30 20 25 30
Arg Tyr Asn Asp Leu Gly Glu Gln His Phe Lys Gly Leu Val Leu Ile Arg Tyr Asn Asp Leu Gly Glu Gln His Phe Lys Gly Leu Val Leu Ile
35 40 45 35 40 45
Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Cys Ser Tyr Asp Glu His Ala Lys Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Cys Ser Tyr Asp Glu His Ala Lys
50 55 60 50 55 60
Leu Val Gln Glu Val Thr Asp Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Leu Val Gln Glu Val Thr Asp Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu
65 70 75 80 65 70 75 80
Ser Ala Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Ser Ala Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys
85 90 95 85 90 95
Leu Cys Ala Ile Pro Asn Leu Arg Glu Asn Tyr Gly Glu Leu Ala Asp Leu Cys Ala Ile Pro Asn Leu Arg Glu Asn Tyr Gly Glu Leu Ala Asp
100 105 110 100 105 110
Cys Cys Thr Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Cys Cys Thr Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His
115 120 125 115 120 125
Lys Asp Asp Asn Pro Ser Leu Pro Pro Phe Glu Arg Pro Glu Ala Glu Lys Asp Asp Asn Pro Ser Leu Pro Pro Phe Glu Arg Pro Glu Ala Glu
130 135 140 130 135 140
Ala Met Cys Thr Ser Phe Lys Glu Asn Pro Thr Thr Phe Met Gly His Ala Met Cys Thr Ser Phe Lys Glu Asn Pro Thr Thr Phe Met Gly His
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Leu His Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Tyr Leu His Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu
165 170 175 165 170 175
Leu Leu Tyr Tyr Ala Glu Gln Tyr Asn Glu Ile Leu Thr Gln Cys Cys Leu Leu Tyr Tyr Ala Glu Gln Tyr Asn Glu Ile Leu Thr Gln Cys Cys
180 185 190 180 185 190
Ala Glu Ala Asp Lys Glu Ser Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Gly Val Ala Glu Ala Asp Lys Glu Ser Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Gly Val
195 200 205 195 200 205
Lys Glu Lys Ala Leu Val Ser Ser Val Arg Gln Arg Met Lys Cys Ser Lys Glu Lys Ala Leu Val Ser Ser Val Arg Gln Arg Met Lys Cys Ser
210 215 220 210 215 220
Ser Met Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Ser Met Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Arg Leu Ser Gln Thr Phe Pro Asn Ala Asp Phe Ala Glu Ile Thr Lys Arg Leu Ser Gln Thr Phe Pro Asn Ala Asp Phe Ala Glu Ile Thr Lys
245 250 255 245 250 255
Leu Ala Thr Asp Leu Thr Lys Val Asn Lys Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Ala Thr Asp Leu Thr Lys Val Asn Lys Glu Cys Cys His Gly Asp
260 265 270 260 265 270
Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Glu Leu Ala Lys Tyr Met Cys Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Glu Leu Ala Lys Tyr Met Cys
275 280 285 275 280 285
Glu Asn Gln Ala Thr Ile Ser Ser Lys Leu Gln Thr Cys Cys Asp Lys Glu Asn Gln Ala Thr Ile Ser Ser Lys Leu Gln Thr Cys Cys Asp Lys
290 295 300 290 295 300
Pro Leu Leu Lys Lys Ala His Cys Leu Ser Glu Val Glu His Asp Thr Pro Leu Leu Lys Lys Ala His Cys Leu Ser Glu Val Glu His Asp Thr
305 310 315 320 305 310 315 320
Met Pro Ala Asp Leu Pro Ala Ile Ala Ala Asp Phe Val Glu Asp Gln Met Pro Ala Asp Leu Pro Ala Ile Ala Ala Asp Phe Val Glu Asp Gln
325 330 335 325 330 335
Glu Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Thr Glu Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Thr
340 345 350 340 345 350
Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Arg Leu Ala Lys Lys Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Cys Leu Leu Arg Leu Ala Lys Lys Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Cys
370 375 380 370 375 380
Ala Glu Ala Asn Pro Pro Ala Cys Tyr Gly Thr Val Leu Ala Glu Phe Ala Glu Ala Asn Pro Pro Ala Cys Tyr Gly Thr Val Leu Ala Glu Phe
385 390 395 400 385 390 395 400
Gln Pro Leu Val Glu Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys Asp Gln Pro Leu Val Glu Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys Asp
405 410 415 405 410 415
Leu Tyr Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Ile Leu Val Leu Tyr Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Ile Leu Val
420 425 430 420 425 430
Arg Tyr Thr Gln Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Arg Tyr Thr Gln Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu
435 440 445 435 440 445
Ala Ala Arg Asn Leu Gly Arg Val Gly Thr Lys Cys Cys Thr Leu Pro Ala Ala Arg Asn Leu Gly Arg Val Gly Thr Lys Cys Cys Thr Leu Pro
450 455 460 450 455 460
Glu Asp Gln Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Ala Ile Leu Glu Asp Gln Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Ala Ile Leu
465 470 475 480 465 470 475 480
Asn Arg Val Cys Leu Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu His Val Asn Arg Val Cys Leu Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu His Val
485 490 495 485 490 495
Thr Lys Cys Cys Ser Gly Ser Leu Val Glu Arg Arg Pro Cys Phe Ser Thr Lys Cys Cys Ser Gly Ser Leu Val Glu Arg Arg Pro Cys Phe Ser
500 505 510 500 505 510
Ala Leu Thr Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Lys Ala Glu Ala Leu Thr Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Lys Ala Glu
515 520 525 515 520 525
Thr Phe Thr Phe His Ser Asp Ile Cys Thr Leu Pro Glu Lys Glu Lys Thr Phe Thr Phe His Ser Asp Ile Cys Thr Leu Pro Glu Lys Glu Lys
530 535 540 530 535 540
Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Ala Glu Leu Val Lys His Lys Pro Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Ala Glu Leu Val Lys His Lys Pro
545 550 555 560 545 550 555 560
Lys Ala Thr Ala Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Asp Asp Phe Ala Gln Lys Ala Thr Ala Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Asp Asp Phe Ala Gln
565 570 575 565 570 575
Phe Leu Asp Thr Cys Cys Lys Ala Ala Asp Lys Asp Thr Cys Phe Ser Phe Leu Asp Thr Cys Cys Lys Ala Ala Asp Lys Asp Thr Cys Phe Ser
580 585 590 580 585 590
Thr Glu Gly Pro Asn Leu Val Thr Arg Cys Lys Asp Ala Leu Ala Thr Glu Gly Pro Asn Leu Val Thr Arg Cys Lys Asp Ala Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 56<210> 56
<211> 608<211> 608
<212> PRT<212> PRT
<213> Rattus norvegicus<213> Rattus norvegicus
<400> 56<400> 56
Met Lys Trp Val Thr Phe Leu Leu Leu Leu Phe Ile Ser Gly Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Leu Leu Leu Leu Phe Ile Ser Gly Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Phe Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Glu Ala His Lys Ser Glu Ile Ala Phe Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Glu Ala His Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Gln His Phe Lys Gly Leu Val Leu His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Gln His Phe Lys Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Cys Pro Tyr Glu Glu His Ile Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Cys Pro Tyr Glu Glu His Ile
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Gln Glu Val Thr Asp Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Gln Glu Val Thr Asp Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Asn Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Ile His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Asn Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Ile His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Leu Cys Ala Ile Pro Lys Leu Arg Asp Asn Tyr Gly Glu Leu Ala Lys Leu Cys Ala Ile Pro Lys Leu Arg Asp Asn Tyr Gly Glu Leu Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Pro Phe Gln Arg Pro Glu Ala His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Pro Phe Gln Arg Pro Glu Ala
130 135 140 130 135 140
Glu Ala Met Cys Thr Ser Phe Gln Glu Asn Pro Thr Ser Phe Leu Gly Glu Ala Met Cys Thr Ser Phe Gln Glu Asn Pro Thr Ser Phe Leu Gly
145 150 155 160 145 150 155 160
His Tyr Leu His Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro His Tyr Leu His Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175 165 170 175
Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Glu Lys Tyr Asn Glu Val Leu Thr Gln Cys Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Glu Lys Tyr Asn Glu Val Leu Thr Gln Cys
180 185 190 180 185 190
Cys Thr Glu Ser Asp Lys Ala Ala Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Ala Cys Thr Glu Ser Asp Lys Ala Ala Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Ala
195 200 205 195 200 205
Val Lys Glu Lys Ala Leu Val Ala Ala Val Arg Gln Arg Met Lys Cys Val Lys Glu Lys Ala Leu Val Ala Ala Val Arg Gln Arg Met Lys Cys
210 215 220 210 215 220
Ser Ser Met Gln Arg Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ser Ser Met Gln Arg Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
225 230 235 240 225 230 235 240
Ala Arg Met Ser Gln Arg Phe Pro Asn Ala Glu Phe Ala Glu Ile Thr Ala Arg Met Ser Gln Arg Phe Pro Asn Ala Glu Phe Ala Glu Ile Thr
245 250 255 245 250 255
Lys Leu Ala Thr Asp Leu Thr Lys Ile Asn Lys Glu Cys Cys His Gly Lys Leu Ala Thr Asp Leu Thr Lys Ile Asn Lys Glu Cys Cys His Gly
260 265 270 260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Glu Leu Ala Lys Tyr Met Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Glu Leu Ala Lys Tyr Met
275 280 285 275 280 285
Cys Glu Asn Gln Ala Thr Ile Ser Ser Lys Leu Gln Ala Cys Cys Asp Cys Glu Asn Gln Ala Thr Ile Ser Ser Lys Leu Gln Ala Cys Cys Asp
290 295 300 290 295 300
Lys Pro Val Leu Gln Lys Ser Gln Cys Leu Ala Glu Ile Glu His Asp Lys Pro Val Leu Gln Lys Ser Gln Cys Leu Ala Glu Ile Glu His Asp
305 310 315 320 305 310 315 320
Asn Ile Pro Ala Asp Leu Pro Ser Ile Ala Ala Asp Phe Val Glu Asp Asn Ile Pro Ala Asp Leu Pro Ser Ile Ala Ala Asp Phe Val Glu Asp
325 330 335 325 330 335
Lys Glu Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Lys Glu Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350 340 345 350
Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Lys Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Lys Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Glu Lys Cys
370 375 380 370 375 380
Cys Ala Glu Gly Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Gly Thr Val Leu Ala Glu Cys Ala Glu Gly Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Gly Thr Val Leu Ala Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Phe Gln Pro Leu Val Glu Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys Phe Gln Pro Leu Val Glu Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys
405 410 415 405 410 415
Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Ile Leu Glu Leu Tyr Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Ile Leu
420 425 430 420 425 430
Val Arg Tyr Thr Gln Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Val Arg Tyr Thr Gln Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445 435 440 445
Glu Ala Ala Arg Asn Leu Gly Arg Val Gly Thr Lys Cys Cys Thr Leu Glu Ala Ala Arg Asn Leu Gly Arg Val Gly Thr Lys Cys Cys Thr Leu
450 455 460 450 455 460
Pro Glu Ala Gln Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Ala Ile Pro Glu Ala Gln Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Ala Ile
465 470 475 480 465 470 475 480
Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys
485 490 495 485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Ser Gly Ser Leu Val Glu Arg Arg Pro Cys Phe Val Thr Lys Cys Cys Ser Gly Ser Leu Val Glu Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510 500 505 510
Ser Ala Leu Thr Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Lys Ala Ser Ala Leu Thr Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Lys Ala
515 520 525 515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ser Asp Ile Cys Thr Leu Pro Asp Lys Glu Glu Thr Phe Thr Phe His Ser Asp Ile Cys Thr Leu Pro Asp Lys Glu
530 535 540 530 535 540
Lys Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Ala Glu Leu Val Lys His Lys Lys Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Ala Glu Leu Val Lys His Lys
545 550 555 560 545 550 555 560
Pro Lys Ala Thr Glu Asp Gln Leu Lys Thr Val Met Gly Asp Phe Ala Pro Lys Ala Thr Glu Asp Gln Leu Lys Thr Val Met Gly Asp Phe Ala
565 570 575 565 570 575
Gln Phe Val Asp Lys Cys Cys Lys Ala Ala Asp Lys Asp Asn Cys Phe Gln Phe Val Asp Lys Cys Cys Lys Ala Ala Asp Lys Asp Asn Cys Phe
580 585 590 580 585 590
Ala Thr Glu Gly Pro Asn Leu Val Ala Arg Ser Lys Glu Ala Leu Ala Ala Thr Glu Gly Pro Asn Leu Val Ala Arg Ser Lys Glu Ala Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 57<210> 57
<211> 607<211> 607
<212> PRT<212> PRT
<213> Bos taurus<213> Bos taurus
<400> 57<400> 57
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Thr His Lys Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Thr His Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu His Phe Lys Gly Leu Val Leu His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu His Phe Lys Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Asp Glu His Val Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Asp Glu His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Leu Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Asn Glu Leu Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser His Ala Gly Cys Glu Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Ser His Ala Gly Cys Glu Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Glu Leu Cys Lys Val Ala Ser Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Asp Met Ala Glu Leu Cys Lys Val Ala Ser Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Asp Met Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Ser Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Ser
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Ser Pro Asp Leu Pro Lys Leu Lys Pro Asp Pro Asn His Lys Asp Asp Ser Pro Asp Leu Pro Lys Leu Lys Pro Asp Pro Asn
130 135 140 130 135 140
Thr Leu Cys Asp Glu Phe Lys Ala Asp Glu Lys Lys Phe Trp Gly Lys Thr Leu Cys Asp Glu Phe Lys Ala Asp Glu Lys Lys Phe Trp Gly Lys
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu
165 170 175 165 170 175
Leu Leu Tyr Tyr Ala Asn Lys Tyr Asn Gly Val Phe Gln Glu Cys Cys Leu Leu Tyr Tyr Ala Asn Lys Tyr Asn Gly Val Phe Gln Glu Cys Cys
180 185 190 180 185 190
Gln Ala Glu Asp Lys Gly Ala Cys Leu Leu Pro Lys Ile Glu Thr Met Gln Ala Glu Asp Lys Gly Ala Cys Leu Leu Pro Lys Ile Glu Thr Met
195 200 205 195 200 205
Arg Glu Lys Val Leu Thr Ser Ser Ala Arg Gln Arg Leu Arg Cys Ala Arg Glu Lys Val Leu Thr Ser Ser Ala Arg Gln Arg Leu Arg Cys Ala
210 215 220 210 215 220
Ser Ile Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Leu Lys Ala Trp Ser Val Ala Ser Ile Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Leu Lys Ala Trp Ser Val Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Glu Phe Val Glu Val Thr Lys Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Glu Phe Val Glu Val Thr Lys
245 250 255 245 250 255
Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp
260 265 270 260 265 270
Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys
275 280 285 275 280 285
Asp Asn Gln Asp Thr Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Lys Asp Asn Gln Asp Thr Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Lys
290 295 300 290 295 300
Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Lys Asp Ala Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Lys Asp Ala
305 310 315 320 305 310 315 320
Ile Pro Glu Asn Leu Pro Pro Leu Thr Ala Asp Phe Ala Glu Asp Lys Ile Pro Glu Asn Leu Pro Pro Leu Thr Ala Asp Phe Ala Glu Asp Lys
325 330 335 325 330 335
Asp Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Ala Phe Leu Gly Ser Asp Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Ala Phe Leu Gly Ser
340 345 350 340 345 350
Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Glu Tyr Ala Val Ser Val Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Glu Tyr Ala Val Ser Val
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Glu Cys Cys Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Glu Cys Cys
370 375 380 370 375 380
Ala Lys Asp Asp Pro His Ala Cys Tyr Ser Thr Val Phe Asp Lys Leu Ala Lys Asp Asp Pro His Ala Cys Tyr Ser Thr Val Phe Asp Lys Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Lys His Leu Val Asp Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Asp Lys His Leu Val Asp Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Asp
405 410 415 405 410 415
Gln Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val Gln Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val
420 425 430 420 425 430
Arg Tyr Thr Arg Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Arg Tyr Thr Arg Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu
435 440 445 435 440 445
Val Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Thr Arg Cys Cys Thr Lys Pro Val Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Thr Arg Cys Cys Thr Lys Pro
450 455 460 450 455 460
Glu Ser Glu Arg Met Pro Cys Thr Glu Asp Tyr Leu Ser Leu Ile Leu Glu Ser Glu Arg Met Pro Cys Thr Glu Asp Tyr Leu Ser Leu Ile Leu
465 470 475 480 465 470 475 480
Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Val Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Val
485 490 495 485 490 495
Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser
500 505 510 500 505 510
Ala Leu Thr Pro Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Ala Phe Asp Glu Lys Ala Leu Thr Pro Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Ala Phe Asp Glu Lys
515 520 525 515 520 525
Leu Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Asp Thr Glu Lys Leu Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Asp Thr Glu Lys
530 535 540 530 535 540
Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Pro Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Pro
545 550 555 560 545 550 555 560
Lys Ala Thr Glu Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Glu Asn Phe Val Ala Lys Ala Thr Glu Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Glu Asn Phe Val Ala
565 570 575 565 570 575
Phe Val Asp Lys Cys Cys Ala Ala Asp Asp Lys Glu Ala Cys Phe Ala Phe Val Asp Lys Cys Cys Ala Ala Asp Asp Lys Glu Ala Cys Phe Ala
580 585 590 580 585 590
Val Glu Gly Pro Lys Leu Val Val Ser Thr Gln Thr Ala Leu Ala Val Glu Gly Pro Lys Leu Val Val Ser Thr Gln Thr Ala Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 58<210> 58
<211> 607<211> 607
<212> PRT<212> PRT
<213> Sus scrofa<213> Sus scrofa
<400> 58<400> 58
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Thr Tyr Lys Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Thr Tyr Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Gln Tyr Phe Lys Gly Leu Val Leu His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Gln Tyr Phe Lys Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Ile Ala Phe Ser Gln His Leu Gln Gln Cys Pro Tyr Glu Glu His Val Ile Ala Phe Ser Gln His Leu Gln Gln Cys Pro Tyr Glu Glu His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Arg Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Arg Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Ile His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Ile His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Leu Cys Ala Ile Pro Ser Leu Arg Glu His Tyr Gly Asp Leu Ala Lys Leu Cys Ala Ile Pro Ser Leu Arg Glu His Tyr Gly Asp Leu Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Glu Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln Asp Cys Cys Glu Lys Glu Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125 115 120 125
His Lys Asn Asp Asn Pro Asp Ile Pro Lys Leu Lys Pro Asp Pro Val His Lys Asn Asp Asn Pro Asp Ile Pro Lys Leu Lys Pro Asp Pro Val
130 135 140 130 135 140
Ala Leu Cys Ala Asp Phe Gln Glu Asp Glu Gln Lys Phe Trp Gly Lys Ala Leu Cys Ala Asp Phe Gln Glu Asp Glu Gln Lys Phe Trp Gly Lys
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu
165 170 175 165 170 175
Leu Leu Tyr Tyr Ala Ile Ile Tyr Lys Asp Val Phe Ser Glu Cys Cys Leu Leu Tyr Tyr Ala Ile Ile Tyr Lys Asp Val Phe Ser Glu Cys Cys
180 185 190 180 185 190
Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Ile Glu His Leu Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Ile Glu His Leu
195 200 205 195 200 205
Arg Glu Lys Val Leu Thr Ser Ala Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Arg Glu Lys Val Leu Thr Ser Ala Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala
210 215 220 210 215 220
Ser Ile Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ser Leu Ala Ser Ile Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ser Leu Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Asp Phe Thr Glu Ile Ser Lys Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Asp Phe Thr Glu Ile Ser Lys
245 250 255 245 250 255
Ile Val Thr Asp Leu Ala Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp Ile Val Thr Asp Leu Ala Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp
260 265 270 260 265 270
Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys
275 280 285 275 280 285
Glu Asn Gln Asp Thr Ile Ser Thr Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Lys Glu Asn Gln Asp Thr Ile Ser Thr Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Lys
290 295 300 290 295 300
Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Ala Lys Arg Asp Glu Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Ala Lys Arg Asp Glu
305 310 315 320 305 310 315 320
Leu Pro Ala Asp Leu Asn Pro Leu Glu His Asp Phe Val Glu Asp Lys Leu Pro Ala Asp Leu Asn Pro Leu Glu His Asp Phe Val Glu Asp Lys
325 330 335 325 330 335
Glu Val Cys Lys Asn Tyr Lys Glu Ala Lys His Val Phe Leu Gly Thr Glu Val Cys Lys Asn Tyr Lys Glu Ala Lys His Val Phe Leu Gly Thr
340 345 350 340 345 350
Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Arg Ile Ala Lys Ile Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Asp Cys Cys Leu Leu Arg Ile Ala Lys Ile Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Asp Cys Cys
370 375 380 370 375 380
Ala Lys Glu Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Ala Thr Val Phe Asp Lys Phe Ala Lys Glu Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Ala Thr Val Phe Asp Lys Phe
385 390 395 400 385 390 395 400
Gln Pro Leu Val Asp Glu Pro Lys Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Gln Pro Leu Val Asp Glu Pro Lys Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu
405 410 415 405 410 415
Leu Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val Leu Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val
420 425 430 420 425 430
Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu
435 440 445 435 440 445
Val Ala Arg Lys Leu Gly Leu Val Gly Ser Arg Cys Cys Lys Arg Pro Val Ala Arg Lys Leu Gly Leu Val Gly Ser Arg Cys Cys Lys Arg Pro
450 455 460 450 455 460
Glu Glu Glu Arg Leu Ser Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Leu Val Leu Glu Glu Glu Arg Leu Ser Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Leu Val Leu
465 470 475 480 465 470 475 480
Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Val Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Val
485 490 495 485 490 495
Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser
500 505 510 500 505 510
Ala Leu Thr Pro Asp Glu Thr Tyr Lys Pro Lys Glu Phe Val Glu Gly Ala Leu Thr Pro Asp Glu Thr Tyr Lys Pro Lys Glu Phe Val Glu Gly
515 520 525 515 520 525
Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Leu Cys Thr Leu Pro Glu Asp Glu Lys Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Leu Cys Thr Leu Pro Glu Asp Glu Lys
530 535 540 530 535 540
Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Pro Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Pro
545 550 555 560 545 550 555 560
His Ala Thr Glu Glu Gln Leu Arg Thr Val Leu Gly Asn Phe Ala Ala His Ala Thr Glu Glu Gln Leu Arg Thr Val Leu Gly Asn Phe Ala Ala
565 570 575 565 570 575
Phe Val Gln Lys Cys Cys Ala Ala Pro Asp His Glu Ala Cys Phe Ala Phe Val Gln Lys Cys Cys Ala Ala Pro Asp His Glu Ala Cys Phe Ala
580 585 590 580 585 590
Val Glu Gly Pro Lys Phe Val Ile Glu Ile Arg Gly Ile Leu Ala Val Glu Gly Pro Lys Phe Val Ile Glu Ile Arg Gly Ile Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 59<210> 59
<211> 608<211> 608
<212> PRT<212> PRT
<213> Canis lupus<213> Canis lupus
<400> 59<400> 59
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Phe Phe Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Phe Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Leu Val Arg Arg Glu Ala Tyr Lys Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Leu Val Arg Arg Glu Ala Tyr Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Tyr Asn Asp Leu Gly Glu Glu His Phe Arg Gly Leu Val Leu His Arg Tyr Asn Asp Leu Gly Glu Glu His Phe Arg Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Val Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Val Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Ala Lys Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Ala Cys Ala Ala Glu Lys Leu Ala Lys Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Ala Cys Ala Ala Glu
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser Gly Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Ser Gly Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Ser Leu Arg Asp Lys Tyr Gly Asp Met Ala Lys Leu Cys Thr Val Ala Ser Leu Arg Asp Lys Tyr Gly Asp Met Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Asp Arg Asn Glu Cys Phe Leu Ala Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Asp Arg Asn Glu Cys Phe Leu Ala
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Gly Phe Pro Pro Leu Val Ala Pro Glu Pro His Lys Asp Asp Asn Pro Gly Phe Pro Pro Leu Val Ala Pro Glu Pro
130 135 140 130 135 140
Asp Ala Leu Cys Ala Ala Phe Gln Asp Asn Glu Gln Leu Phe Leu Gly Asp Ala Leu Cys Ala Ala Phe Gln Asp Asn Glu Gln Leu Phe Leu Gly
145 150 155 160 145 150 155 160
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175 165 170 175
Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Gln Gln Tyr Lys Gly Val Phe Ala Glu Cys Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Gln Gln Tyr Lys Gly Val Phe Ala Glu Cys
180 185 190 180 185 190
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Gly Pro Lys Ile Glu Ala Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Gly Pro Lys Ile Glu Ala
195 200 205 195 200 205
Leu Arg Glu Lys Val Leu Leu Ser Ser Ala Lys Glu Arg Phe Lys Cys Leu Arg Glu Lys Val Leu Leu Ser Ser Ala Lys Glu Arg Phe Lys Cys
210 215 220 210 215 220
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Asp Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ser Val Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Asp Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ser Val
225 230 235 240 225 230 235 240
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Asp Phe Ala Glu Ile Ser Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Asp Phe Ala Glu Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Lys Val Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Lys Val Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly
260 265 270 260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Met Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Met
275 280 285 275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Thr Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Thr Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp
290 295 300 290 295 300
Lys Pro Val Leu Glu Lys Ser Gln Cys Leu Ala Glu Val Glu Arg Asp Lys Pro Val Leu Glu Lys Ser Gln Cys Leu Ala Glu Val Glu Arg Asp
305 310 315 320 305 310 315 320
Glu Leu Pro Gly Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Asp Glu Leu Pro Gly Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Asp
325 330 335 325 330 335
Lys Glu Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Lys Glu Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350 340 345 350
Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Glu Tyr Ser Val Ser Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Glu Tyr Ser Val Ser
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys
370 375 380 370 375 380
Cys Ala Thr Asp Asp Pro Pro Thr Cys Tyr Ala Lys Val Leu Asp Glu Cys Ala Thr Asp Asp Pro Pro Thr Cys Tyr Ala Lys Val Leu Asp Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Phe Lys Pro Leu Val Asp Glu Pro Gln Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys Phe Lys Pro Leu Val Asp Glu Pro Gln Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys
405 410 415 405 410 415
Glu Leu Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Leu Glu Leu Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430 420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Val Arg Tyr Thr Lys Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445 435 440 445
Glu Val Ser Arg Lys Leu Gly Lys Val Gly Thr Lys Cys Cys Lys Lys Glu Val Ser Arg Lys Leu Gly Lys Val Gly Thr Lys Cys Cys Lys Lys
450 455 460 450 455 460
Pro Glu Ser Glu Arg Met Ser Cys Ala Glu Asp Phe Leu Ser Val Val Pro Glu Ser Glu Arg Met Ser Cys Ala Glu Asp Phe Leu Ser Val Val
465 470 475 480 465 470 475 480
Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Arg Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Arg
485 490 495 485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Ser Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Val Thr Lys Cys Cys Ser Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510 500 505 510
Ser Gly Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Ser Gly Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
515 520 525 515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Leu Cys Thr Leu Pro Glu Ala Glu Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Leu Cys Thr Leu Pro Glu Ala Glu
530 535 540 530 535 540
Lys Gln Val Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Lys Gln Val Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys
545 550 555 560 545 550 555 560
Pro Lys Ala Thr Asp Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Gly Asp Phe Gly Pro Lys Ala Thr Asp Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Gly Asp Phe Gly
565 570 575 565 570 575
Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Ala Ala Glu Asn Lys Glu Gly Cys Phe Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Ala Ala Glu Asn Lys Glu Gly Cys Phe
580 585 590 580 585 590
Ser Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Leu Val Ser Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Leu Val
595 600 605 595 600 605
<210> 60<210> 60
<211> 608<211> 608
<212> PRT<212> PRT
<213> Felis catus<213> Felis catus
<400> 60<400> 60
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Thr Arg Arg Glu Ala His Gln Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Val Thr Arg Arg Glu Ala His Gln Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Asn Asp Leu Gly Glu Glu His Phe Arg Gly Leu Val Leu His Arg Phe Asn Asp Leu Gly Glu Glu His Phe Arg Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Val Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Val Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Gly Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Gly Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Gln Ser Ala Ala Asn Cys Glu Lys Ser Leu His Glu Leu Leu Gly Asp Gln Ser Ala Ala Asn Cys Glu Lys Ser Leu His Glu Leu Leu Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Ser Leu Arg Asp Lys Tyr Gly Glu Met Ala Lys Leu Cys Thr Val Ala Ser Leu Arg Asp Lys Tyr Gly Glu Met Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Lys Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln Asp Cys Cys Glu Lys Lys Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Gly Phe Gly Gln Leu Val Thr Pro Glu Ala His Lys Asp Asp Asn Pro Gly Phe Gly Gln Leu Val Thr Pro Glu Ala
130 135 140 130 135 140
Asp Ala Met Cys Thr Ala Phe His Glu Asn Glu Gln Arg Phe Leu Gly Asp Ala Met Cys Thr Ala Phe His Glu Asn Glu Gln Arg Phe Leu Gly
145 150 155 160 145 150 155 160
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175 165 170 175
Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Glu Glu Tyr Lys Gly Val Phe Thr Glu Cys Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Glu Glu Tyr Lys Gly Val Phe Thr Glu Cys
180 185 190 180 185 190
Cys Glu Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Thr Pro Lys Val Asp Ala Cys Glu Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Thr Pro Lys Val Asp Ala
195 200 205 195 200 205
Leu Arg Glu Lys Val Leu Ala Ser Ser Ala Lys Glu Arg Leu Lys Cys Leu Arg Glu Lys Val Leu Ala Ser Ser Ala Lys Glu Arg Leu Lys Cys
210 215 220 210 215 220
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ser Val Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ser Val
225 230 235 240 225 230 235 240
Ala Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Ile Ser Ala Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Lys Leu Val Thr Asp Leu Ala Lys Ile His Lys Glu Cys Cys His Gly Lys Leu Val Thr Asp Leu Ala Lys Ile His Lys Glu Cys Cys His Gly
260 265 270 260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
275 280 285 275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Thr Lys Leu Lys Glu Cys Cys Gly Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Thr Lys Leu Lys Glu Cys Cys Gly
290 295 300 290 295 300
Lys Pro Val Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ser Glu Val Glu Arg Asp Lys Pro Val Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ser Glu Val Glu Arg Asp
305 310 315 320 305 310 315 320
Glu Leu Pro Ala Asp Leu Pro Pro Leu Ala Val Asp Phe Val Glu Asp Glu Leu Pro Ala Asp Leu Pro Pro Leu Ala Val Asp Phe Val Glu Asp
325 330 335 325 330 335
Lys Glu Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Lys Glu Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350 340 345 350
Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Glu Tyr Ser Val Ser Thr Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Glu Tyr Ser Val Ser
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys
370 375 380 370 375 380
Cys Ala Thr Asp Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Ala His Val Phe Asp Glu Cys Ala Thr Asp Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Ala His Val Phe Asp Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro His Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro His Asn Leu Val Lys Thr Asn Cys
405 410 415 405 410 415
Glu Leu Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Leu Glu Leu Phe Glu Lys Leu Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430 420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445 435 440 445
Glu Val Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Thr His Glu Val Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Thr His
450 455 460 450 455 460
Pro Glu Ala Glu Arg Leu Ser Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Pro Glu Ala Glu Arg Leu Ser Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480 465 470 475 480
Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Arg Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Arg
485 490 495 485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510 500 505 510
Ser Ala Leu Gln Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Ser Ala Ser Ala Leu Gln Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Ser Ala
515 520 525 515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Leu Cys Thr Leu Pro Glu Ala Glu Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Leu Cys Thr Leu Pro Glu Ala Glu
530 535 540 530 535 540
Lys Gln Ile Lys Lys Gln Ser Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Lys Gln Ile Lys Lys Gln Ser Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys
545 550 555 560 545 550 555 560
Pro Lys Ala Thr Glu Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Gly Asp Phe Gly Pro Lys Ala Thr Glu Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Gly Asp Phe Gly
565 570 575 565 570 575
Ser Phe Val Asp Lys Cys Cys Ala Ala Glu Asp Lys Glu Ala Cys Phe Ser Phe Val Asp Lys Cys Cys Ala Ala Glu Asp Lys Glu Ala Cys Phe
580 585 590 580 585 590
Ala Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Leu Ala Ala Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ala Ala Gln Ala Ala Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 61<210> 61
<211> 607<211> 607
<212> PRT<212> PRT
<213> Ovis aries<213> Ovis aries
<400> 61<400> 61
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Leu Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Thr His Lys Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Thr His Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Asn Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Gln Gly Leu Val Leu His Arg Phe Asn Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Gln Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Asp Glu His Val Ile Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Asp Glu His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Lys Glu Leu Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Lys Glu Leu Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser His Ala Gly Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Ser His Ala Gly Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Glu Leu Cys Lys Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Asp Met Ala Glu Leu Cys Lys Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Asp Met Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Asn Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Asn
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Ser Pro Asp Leu Pro Lys Leu Lys Pro Glu Pro Asp His Lys Asp Asp Ser Pro Asp Leu Pro Lys Leu Lys Pro Glu Pro Asp
130 135 140 130 135 140
Thr Leu Cys Ala Glu Phe Lys Ala Asp Glu Lys Lys Phe Trp Gly Lys Thr Leu Cys Ala Glu Phe Lys Ala Asp Glu Lys Lys Phe Trp Gly Lys
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Leu Tyr Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Tyr Leu Tyr Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu
165 170 175 165 170 175
Leu Leu Tyr Tyr Ala Asn Lys Tyr Asn Gly Val Phe Gln Glu Cys Cys Leu Leu Tyr Tyr Ala Asn Lys Tyr Asn Gly Val Phe Gln Glu Cys Cys
180 185 190 180 185 190
Gln Ala Glu Asp Lys Gly Ala Cys Leu Leu Pro Lys Ile Asp Ala Met Gln Ala Glu Asp Lys Gly Ala Cys Leu Leu Pro Lys Ile Asp Ala Met
195 200 205 195 200 205
Arg Glu Lys Val Leu Ala Ser Ser Ala Arg Gln Arg Leu Arg Cys Ala Arg Glu Lys Val Leu Ala Ser Ser Ala Arg Gln Arg Leu Arg Cys Ala
210 215 220 210 215 220
Ser Ile Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Leu Lys Ala Trp Ser Val Ala Ser Ile Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Leu Lys Ala Trp Ser Val Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Asp Phe Thr Asp Val Thr Lys Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Asp Phe Thr Asp Val Thr Lys
245 250 255 245 250 255
Ile Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp Ile Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp
260 265 270 260 265 270
Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys
275 280 285 275 280 285
Asp His Gln Asp Ala Leu Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Lys Asp His Gln Asp Ala Leu Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Asp Lys
290 295 300 290 295 300
Pro Val Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Asp Lys Asp Ala Pro Val Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Asp Lys Asp Ala
305 310 315 320 305 310 315 320
Val Pro Glu Asn Leu Pro Pro Leu Thr Ala Asp Phe Ala Glu Asp Lys Val Pro Glu Asn Leu Pro Pro Leu Thr Ala Asp Phe Ala Glu Asp Lys
325 330 335 325 330 335
Glu Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Ser Glu Val Cys Lys Asn Tyr Gln Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Ser
340 345 350 340 345 350
Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Glu Tyr Ala Val Ser Val Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Glu Tyr Ala Val Ser Val
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Asp Cys Cys Leu Leu Arg Leu Ala Lys Glu Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Asp Cys Cys
370 375 380 370 375 380
Ala Lys Glu Asp Pro His Ala Cys Tyr Ala Thr Val Phe Asp Lys Leu Ala Lys Glu Asp Pro His Ala Cys Tyr Ala Thr Val Phe Asp Lys Leu
385 390 395 400 385 390 395 400
Lys His Leu Val Asp Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Lys Asn Cys Glu Lys His Leu Val Asp Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Lys Asn Cys Glu
405 410 415 405 410 415
Leu Phe Glu Lys His Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val Leu Phe Glu Lys His Gly Glu Tyr Gly Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val
420 425 430 420 425 430
Arg Tyr Thr Arg Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Arg Tyr Thr Arg Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu
435 440 445 435 440 445
Ile Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Thr Lys Cys Cys Ala Lys Pro Ile Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Thr Lys Cys Cys Ala Lys Pro
450 455 460 450 455 460
Glu Ser Glu Arg Met Pro Cys Thr Glu Asp Tyr Leu Ser Leu Ile Leu Glu Ser Glu Arg Met Pro Cys Thr Glu Asp Tyr Leu Ser Leu Ile Leu
465 470 475 480 465 470 475 480
Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Val Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Val
485 490 495 485 490 495
Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser
500 505 510 500 505 510
Asp Leu Thr Leu Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Pro Phe Asp Glu Lys Asp Leu Thr Leu Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Pro Phe Asp Glu Lys
515 520 525 515 520 525
Phe Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Asp Thr Glu Lys Phe Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Asp Thr Glu Lys
530 535 540 530 535 540
Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Pro Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Leu Lys His Lys Pro
545 550 555 560 545 550 555 560
Lys Ala Thr Asp Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Glu Asn Phe Val Ala Lys Ala Thr Asp Glu Gln Leu Lys Thr Val Met Glu Asn Phe Val Ala
565 570 575 565 570 575
Phe Val Asp Lys Cys Cys Ala Ala Asp Asp Lys Glu Gly Cys Phe Val Phe Val Asp Lys Cys Cys Ala Ala Asp Asp Lys Glu Gly Cys Phe Val
580 585 590 580 585 590
Leu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ser Thr Gln Ala Ala Leu Ala Leu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ser Thr Gln Ala Ala Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 62<210> 62
<211> 607<211> 607
<212> PRT<212> PRT
<213> Equus caballus<213> Equus caballus
<400> 62<400> 62
Met Lys Trp Val Thr Phe Val Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Val Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Leu Arg Arg Asp Thr His Lys Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Val Leu Arg Arg Asp Thr His Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Asn Asp Leu Gly Glu Lys His Phe Lys Gly Leu Val Leu His Arg Phe Asn Asp Leu Gly Glu Lys His Phe Lys Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Val Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Val Ala Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Lys Cys Ala Ala Asp Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Lys Cys Ala Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Ala Thr Tyr Gly Glu Leu Ala Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Ala Thr Tyr Gly Glu Leu Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Thr Asp Cys Cys Glu Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Thr
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp His Pro Asn Leu Pro Lys Leu Lys Pro Glu Pro Asp His Lys Asp Asp His Pro Asn Leu Pro Lys Leu Lys Pro Glu Pro Asp
130 135 140 130 135 140
Ala Gln Cys Ala Ala Phe Gln Glu Asp Pro Asp Lys Phe Leu Gly Lys Ala Gln Cys Ala Ala Phe Gln Glu Asp Pro Asp Lys Phe Leu Gly Lys
145 150 155 160 145 150 155 160
Tyr Leu Tyr Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Gly Pro Glu Tyr Leu Tyr Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Gly Pro Glu
165 170 175 165 170 175
Leu Leu Phe His Ala Glu Glu Tyr Lys Ala Asp Phe Thr Glu Cys Cys Leu Leu Phe His Ala Glu Glu Tyr Lys Ala Asp Phe Thr Glu Cys Cys
180 185 190 180 185 190
Pro Ala Asp Asp Lys Leu Ala Cys Leu Ile Pro Lys Leu Asp Ala Leu Pro Ala Asp Asp Lys Leu Ala Cys Leu Ile Pro Lys Leu Asp Ala Leu
195 200 205 195 200 205
Lys Glu Arg Ile Leu Leu Ser Ser Ala Lys Glu Arg Leu Lys Cys Ser Lys Glu Arg Ile Leu Leu Ser Ser Ala Lys Glu Arg Leu Lys Cys Ser
210 215 220 210 215 220
Ser Phe Gln Asn Phe Gly Glu Arg Ala Val Lys Ala Trp Ser Val Ala Ser Phe Gln Asn Phe Gly Glu Arg Ala Val Lys Ala Trp Ser Val Ala
225 230 235 240 225 230 235 240
Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Asp Phe Ala Glu Val Ser Lys Arg Leu Ser Gln Lys Phe Pro Lys Ala Asp Phe Ala Glu Val Ser Lys
245 250 255 245 250 255
Ile Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp Ile Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Asp
260 265 270 260 265 270
Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys
275 280 285 275 280 285
Glu His Gln Asp Ser Ile Ser Gly Lys Leu Lys Ala Cys Cys Asp Lys Glu His Gln Asp Ser Ile Ser Gly Lys Leu Lys Ala Cys Cys Asp Lys
290 295 300 290 295 300
Pro Leu Leu Gln Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Lys Glu Asp Asp Pro Leu Leu Gln Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Lys Glu Asp Asp
305 310 315 320 305 310 315 320
Leu Pro Ser Asp Leu Pro Ala Leu Ala Ala Asp Phe Ala Glu Asp Lys Leu Pro Ser Asp Leu Pro Ala Leu Ala Ala Asp Phe Ala Glu Asp Lys
325 330 335 325 330 335
Glu Ile Cys Lys His Tyr Lys Asp Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Thr Glu Ile Cys Lys His Tyr Lys Asp Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Thr
340 345 350 340 345 350
Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Ser Leu
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Arg Ile Ala Lys Thr Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Cys Leu Leu Arg Ile Ala Lys Thr Tyr Glu Ala Thr Leu Glu Lys Cys Cys
370 375 380 370 375 380
Ala Glu Ala Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Arg Thr Val Phe Asp Gln Phe Ala Glu Ala Asp Pro Pro Ala Cys Tyr Arg Thr Val Phe Asp Gln Phe
385 390 395 400 385 390 395 400
Thr Pro Leu Val Glu Glu Pro Lys Ser Leu Val Lys Lys Asn Cys Asp Thr Pro Leu Val Glu Glu Pro Lys Ser Leu Val Lys Lys Asn Cys Asp
405 410 415 405 410 415
Leu Phe Glu Glu Val Gly Glu Tyr Asp Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val Leu Phe Glu Glu Val Gly Glu Tyr Asp Phe Gln Asn Ala Leu Ile Val
420 425 430 420 425 430
Arg Tyr Thr Lys Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Arg Tyr Thr Lys Lys Ala Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu
435 440 445 435 440 445
Ile Gly Arg Thr Leu Gly Lys Val Gly Ser Arg Cys Cys Lys Leu Pro Ile Gly Arg Thr Leu Gly Lys Val Gly Ser Arg Cys Cys Lys Leu Pro
450 455 460 450 455 460
Glu Ser Glu Arg Leu Pro Cys Ser Glu Asn His Leu Ala Leu Ala Leu Glu Ser Glu Arg Leu Pro Cys Ser Glu Asn His Leu Ala Leu Ala Leu
465 470 475 480 465 470 475 480
Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Ile Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Ile
485 490 495 485 490 495
Thr Lys Cys Cys Thr Asp Ser Leu Ala Glu Arg Arg Pro Cys Phe Ser Thr Lys Cys Cys Thr Asp Ser Leu Ala Glu Arg Arg Pro Cys Phe Ser
500 505 510 500 505 510
Ala Leu Glu Leu Asp Glu Gly Tyr Val Pro Lys Glu Phe Lys Ala Glu Ala Leu Glu Leu Asp Glu Gly Tyr Val Pro Lys Glu Phe Lys Ala Glu
515 520 525 515 520 525
Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Glu Asp Glu Lys Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Glu Asp Glu Lys
530 535 540 530 535 540
Gln Ile Lys Lys Gln Ser Ala Leu Ala Glu Leu Val Lys His Lys Pro Gln Ile Lys Lys Gln Ser Ala Leu Ala Glu Leu Val Lys His Lys Pro
545 550 555 560 545 550 555 560
Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Thr Val Leu Gly Asn Phe Ser Ala Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Thr Val Leu Gly Asn Phe Ser Ala
565 570 575 565 570 575
Phe Val Ala Lys Cys Cys Gly Arg Glu Asp Lys Glu Ala Cys Phe Ala Phe Val Ala Lys Cys Cys Gly Arg Glu Asp Lys Glu Ala Cys Phe Ala
580 585 590 580 585 590
Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ser Ser Gln Leu Ala Leu Ala Glu Glu Gly Pro Lys Leu Val Ala Ser Ser Gln Leu Ala Leu Ala
595 600 605 595 600 605
<210> 63<210> 63
<211> 608<211> 608
<212> PRT<212> PRT
<213> Oryctolagus cuniculus<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 63<400> 63
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15 1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Glu Ala His Lys Ser Glu Ile Ala Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Glu Ala His Lys Ser Glu Ile Ala
20 25 30 20 25 30
His Arg Phe Asn Asp Val Gly Glu Glu His Phe Ile Gly Leu Val Leu His Arg Phe Asn Asp Val Gly Glu Glu His Phe Ile Gly Leu Val Leu
35 40 45 35 40 45
Ile Thr Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Cys Pro Tyr Glu Glu His Ala Ile Thr Phe Ser Gln Tyr Leu Gln Lys Cys Pro Tyr Glu Glu His Ala
50 55 60 50 55 60
Lys Leu Val Lys Glu Val Thr Asp Leu Ala Lys Ala Cys Val Ala Asp Lys Leu Val Lys Glu Val Thr Asp Leu Ala Lys Ala Cys Val Ala Asp
65 70 75 80 65 70 75 80
Glu Ser Ala Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Asp Ile Phe Gly Asp Glu Ser Ala Ala Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Asp Ile Phe Gly Asp
85 90 95 85 90 95
Lys Ile Cys Ala Leu Pro Ser Leu Arg Asp Thr Tyr Gly Asp Val Ala Lys Ile Cys Ala Leu Pro Ser Leu Arg Asp Thr Tyr Gly Asp Val Ala
100 105 110 100 105 110
Asp Cys Cys Glu Lys Lys Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu His Asp Cys Cys Glu Lys Lys Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu His
115 120 125 115 120 125
His Lys Asp Asp Lys Pro Asp Leu Pro Pro Phe Ala Arg Pro Glu Ala His Lys Asp Asp Lys Pro Asp Leu Pro Pro Phe Ala Arg Pro Glu Ala
130 135 140 130 135 140
Asp Val Leu Cys Lys Ala Phe His Asp Asp Glu Lys Ala Phe Phe Gly Asp Val Leu Cys Lys Ala Phe His Asp Asp Glu Lys Ala Phe Phe Gly
145 150 155 160 145 150 155 160
His Tyr Leu Tyr Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro His Tyr Leu Tyr Glu Val Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175 165 170 175
Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Gln Lys Tyr Lys Ala Ile Leu Thr Glu Cys Glu Leu Leu Tyr Tyr Ala Gln Lys Tyr Lys Ala Ile Leu Thr Glu Cys
180 185 190 180 185 190
Cys Glu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Ala Cys Glu Ala Ala Asp Lys Gly Ala Cys Leu Thr Pro Lys Leu Asp Ala
195 200 205 195 200 205
Leu Glu Gly Lys Ser Leu Ile Ser Ala Ala Gln Glu Arg Leu Arg Cys Leu Glu Gly Lys Ser Leu Ile Ser Ala Ala Gln Glu Arg Leu Arg Cys
210 215 220 210 215 220
Ala Ser Ile Gln Lys Phe Gly Asp Arg Ala Tyr Lys Ala Trp Ala Leu Ala Ser Ile Gln Lys Phe Gly Asp Arg Ala Tyr Lys Ala Trp Ala Leu
225 230 235 240 225 230 235 240
Val Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Asp Phe Thr Asp Ile Ser Val Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Asp Phe Thr Asp Ile Ser
245 250 255 245 250 255
Lys Ile Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly Lys Ile Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Lys Glu Cys Cys His Gly
260 265 270 260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Met Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Met
275 280 285 275 280 285
Cys Glu His Gln Glu Thr Ile Ser Ser His Leu Lys Glu Cys Cys Asp Cys Glu His Gln Glu Thr Ile Ser Ser His Leu Lys Glu Cys Cys Asp
290 295 300 290 295 300
Lys Pro Ile Leu Glu Lys Ala His Cys Ile Tyr Gly Leu His Asn Asp Lys Pro Ile Leu Glu Lys Ala His Cys Ile Tyr Gly Leu His Asn Asp
305 310 315 320 305 310 315 320
Glu Thr Pro Ala Gly Leu Pro Ala Val Ala Glu Glu Phe Val Glu Asp Glu Thr Pro Ala Gly Leu Pro Ala Val Ala Glu Glu Phe Val Glu Asp
325 330 335 325 330 335
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Glu Glu Ala Lys Asp Leu Phe Leu Gly Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Glu Glu Ala Lys Asp Leu Phe Leu Gly
340 345 350 340 345 350
Lys Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Lys Phe Leu Tyr Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val
355 360 365 355 360 365
Leu Leu Leu Arg Leu Gly Lys Ala Tyr Glu Ala Thr Leu Lys Lys Cys Leu Leu Leu Arg Leu Gly Lys Ala Tyr Glu Ala Thr Leu Lys Lys Cys
370 375 380 370 375 380
Cys Ala Thr Asp Asp Pro His Ala Cys Tyr Ala Lys Val Leu Asp Glu Cys Ala Thr Asp Asp Pro His Ala Cys Tyr Ala Lys Val Leu Asp Glu
385 390 395 400 385 390 395 400
Phe Gln Pro Leu Val Asp Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Gln Asn Cys Phe Gln Pro Leu Val Asp Glu Pro Lys Asn Leu Val Lys Gln Asn Cys
405 410 415 405 410 415
Glu Leu Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Tyr Asn Phe Gln Asn Ala Leu Leu Glu Leu Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Tyr Asn Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430 420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445 435 440 445
Glu Ile Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Glu Ile Ser Arg Ser Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
450 455 460 450 455 460
Pro Glu Ala Glu Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Pro Glu Ala Glu Arg Leu Pro Cys Val Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480 465 470 475 480
Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys Leu Asn Arg Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Glu Lys
485 490 495 485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Ser Glu Ser Leu Val Asp Arg Arg Pro Cys Phe Val Thr Lys Cys Cys Ser Glu Ser Leu Val Asp Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510 500 505 510
Ser Ala Leu Gly Pro Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Ser Ala Leu Gly Pro Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
515 520 525 515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Glu Thr Glu Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Pro Glu Thr Glu
530 535 540 530 535 540
Arg Lys Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Arg Lys Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys
545 550 555 560 545 550 555 560
Pro His Ala Thr Asn Asp Gln Leu Lys Thr Val Val Gly Glu Phe Thr Pro His Ala Thr Asn Asp Gln Leu Lys Thr Val Val Gly Glu Phe Thr
565 570 575 565 570 575
Ala Leu Leu Asp Lys Cys Cys Ser Ala Glu Asp Lys Glu Ala Cys Phe Ala Leu Leu Asp Lys Cys Cys Ser Ala Glu Asp Lys Glu Ala Cys Phe
580 585 590 580 585 590
Ala Val Glu Gly Pro Lys Leu Val Glu Ser Ser Lys Ala Thr Leu Gly Ala Val Glu Gly Pro Lys Leu Val Glu Ser Ser Lys Ala Thr Leu Gly
595 600 605 595 600 605
<---<---
Claims (47)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762446988P | 2017-01-17 | 2017-01-17 | |
| US62/446,988 | 2017-01-17 | ||
| PCT/EP2018/051083 WO2018134235A1 (en) | 2017-01-17 | 2018-01-17 | Improved serum albumin binders |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2023102139A Division RU2023102139A (en) | 2017-01-17 | 2018-01-17 | ADVANCED SERUM ALBUMIN BINDING SUBSTANCES |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019125831A RU2019125831A (en) | 2021-02-19 |
| RU2019125831A3 RU2019125831A3 (en) | 2021-03-09 |
| RU2789495C2 true RU2789495C2 (en) | 2023-02-03 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008028977A2 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
| EA200900955A1 (en) * | 2007-02-08 | 2010-04-30 | Домантис Лимитед | SEPARATE VARIABLE DOMAINS OF ANTIBODIES AGAINST SERUM ALBUMIN |
| WO2012175400A1 (en) * | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Ablynx Nv | Serum albumin binding proteins |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008028977A2 (en) * | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Ablynx N.V. | Serum albumin binding proteins with long half-lives |
| EA200900955A1 (en) * | 2007-02-08 | 2010-04-30 | Домантис Лимитед | SEPARATE VARIABLE DOMAINS OF ANTIBODIES AGAINST SERUM ALBUMIN |
| WO2012175400A1 (en) * | 2011-06-23 | 2012-12-27 | Ablynx Nv | Serum albumin binding proteins |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2765384C2 (en) | Improved single variable immunoglobulin domains binding to serum albumin | |
| KR102662499B1 (en) | Improved serum albumin binder | |
| KR102653724B1 (en) | Improved serum albumin binder | |
| RU2789495C2 (en) | Improved substances binding to serum albumin | |
| RU2797270C2 (en) | Advanced serum albumin binding agents |