RU2763933C1 - Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек - Google Patents

Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек Download PDF

Info

Publication number
RU2763933C1
RU2763933C1 RU2020143074A RU2020143074A RU2763933C1 RU 2763933 C1 RU2763933 C1 RU 2763933C1 RU 2020143074 A RU2020143074 A RU 2020143074A RU 2020143074 A RU2020143074 A RU 2020143074A RU 2763933 C1 RU2763933 C1 RU 2763933C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
gene
btpkd
kidney disease
test system
polycystic kidney
Prior art date
Application number
RU2020143074A
Other languages
English (en)
Inventor
Юлия Викторовна Мукий
Денис Игоревич Богомаз
Ольга Андреевна Павлова
Иван Артемьевич Владимиров
Original Assignee
Юлия Викторовна Мукий
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Юлия Викторовна Мукий filed Critical Юлия Викторовна Мукий
Priority to RU2020143074A priority Critical patent/RU2763933C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2763933C1 publication Critical patent/RU2763933C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6853—Nucleic acid amplification reactions using modified primers or templates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана тест-система для выявления мутации мутации (SNP: 6:38856816; NC_006588.3:g.38856816G>A) в гене BTPKD, вызывающей поликистоз почек у собак. Тест-система включает в себя смесь для проведения полимеразной цепной реакции, с использованием разработанных праймеров, Taqman зондов диагностируемой аллели и олигонуклеотидов-«заглушек» для другой аллели, представленных ниже:
Праймер F - CCTCAAGCCTGTCCATCTGT
Праймер R - GGAGAGCCAGATGTGCTTGT
Зонд mut - FAM-TCCTCGTGGCCAAGCTGCAG-BHQ1
Заглушка wt - CCTCGTGGCCGAGCTGCAG-NH2
Зонд wt - FAM - CCTCGTGGCCGAGCTGCAG-BHQ1
Заглушка mut - TCCTCGTGGCCAAGCTGCAG-NH2.
Изобретение расширяет арсенал средств для выявлений мутаций, вызывающих поликистоз почек у собак. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Description

Изобретение относится к области ветеринарной генетики и биотехнологии.
Известна мутация в гене BTPKD (SNP: 6:38856816; NC_006588.3:g.38856816G>A) собаки домашней (Canis lupus familiaris), вызывающая поликистоз почек.
Однако для детекции этой мутации необходимо создание тест-ситемы на определение собак-носителей данной мутации или собак, больных поликистозом.
Техническим результатом является обеспечение достоверной диагностики поликистоза почек у собак, вызванной мутацией в гене BTPKD.
Технический результат достигается тем, что в тест-системе для выявления мутации в гене BTPKD, вызывающей поликистоз почек у собак включающую амплификационную смесь для проведения полимеразной цепной реакции, состоящую из 1х буфера с сульфатом аммония, Taq-полимеразы, смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ), магния хлорида используют разработанные праймеры, Taqman зонды диагностируемой аллели, а также олигонуклеотид-«заглушку» для другой аллели, имеющими следующие последовательности:
Праймер F - CCTCAAGCCTGTCCATCTGT
Праймер R - GGAGAGCCAGATGTGCTTGT
Зонд mut - FAM-TCCTCGTGGCCAAGCTGCAG-BHQ1
Заглушка wt - CCTCGTGGCCGAGCTGCAG-NH2
Зонд wt - FAM - CCTCGTGGCCGAGCTGCAG-BHQ1
Заглушка mut - TCCTCGTGGCCAAGCTGCAG-NH2,
а также контрольные образцы на дикотипный и мутантный вариант фрагмента гена BTPKD.
В качестве контролей созданы две генетические конструкции - плазмиды, содержащие дикотипный и мутантный вариант фрагмента гена BTPKD. Положительный контроль для дикотипных диагностических систем получили путем амплификации фрагмента гена, полученный из ДНК здоровой собаки и его клонирования в вектор pJet1.2, мутантный вариант изготовили путем синтеза синтетической последовательности ДНК с последующим клонированием ее в вектор pJet1.2. ДНК гетерозиготы по мутации имитирована путем эквимолярного смешивания плазмид обоих типов после измерения их концентрации на электрофорезе в агарозном геле.
В качестве матрицы использовали 1 мкл разбавленного раствора контрольной плазмиды (исходная плазмида 50 гн/мкл разбавлялась 1:10000) с фрагментом гена дикого типа, с фрагментом мутантной аллели гена или их смеси, имитирующей гетерозиготу. «Преимущества клонирования ПЦР-продукта в вектор» заключается в устойчивом долговременном хранении контрольных матриц в виде плазмиды внутри бактериального штамма, с неограниченной возможностью копирования и наработки.
Реакционная смесь для ПЦР-РВ в варианте с «заглушками» разделена на два объема, каждый из которых содержит: Праймер прямой (F), Праймер обратный (R), Зонд, комплементарный одной из аллелей (wt - дикий тип, mut - мутантная аллель), Олигонуклеотид - заглушку, комплементарный другой аллели. В качестве контроля используют 2 вида матриц: для дикой аллели, для мутантной аллели. Детекция продуктов амплификации осуществляется с использованием принципа выщепления флуоресцентной метки на 5' конце олигонуклеотидного зонда. Применение «заглушек» и раздельная детекция аллелей в двух независимых реакционных объемах дает возможность достижения наилучшего баланса между специфичностью и эффективностью системы и точной подстройки специфичности с помощью изменения соотношения концентраций зонда и «заглушки». Такая постановка ПЦР-РВ позволяет быстро установить в изучаемых образцах ДНК наличие трех вариантов генотипов, и, следовательно, выявить наличие или отсутствие мутантной аллели и определить наличие, отсутствие патологии или носительство.
Использование разных видов контроля в виде матриц, специфических праймеров, зондов и «звглушек» к разным вариантам генома (на мутантную и дикую аллели) позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирке.
При конструировании праймеров, зондов и заглушек выполнены требования: высокая степень гомологии с исследуемыми вариантами мутации гена, отсутствие участков отжигающихся «сами на себя», отсутствие «шпилек», что подтверждено результататами програмной проверки специфичности связывания праймеров и гибридизационных зондов, программной проверки олигонуклеотидов на возможность образования шпилек и димеров.
Конструирование специфических праймеров, зондов и «заглушек» осуществляли с помощью компьютерных программ на основании анализа нуклеотидных последовательностей, опубликованный на ресурсе GeneBank и подбора условий для проведения РВ-ПЦР с применением разработанных праймеров, зондов, несущих флуорохром и гаситель флуоресценции и «заглушек» комплементарных части амплифицируемого фрагмента.
Признаки, отличающие заявляемое техническое решение направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательный уровень».
Сущность изобретения поясняется фиг. 1 «Результаты ПЦР-РВ для детекции мутантной аллели BTPKD (3:1)» и фиг. 2 «Результаты ПЦР-РВ для детекции дикотипной аллели BTPKD (3:1)», где представлен скриншот результатов ПЦР-РВ в виде графиков, отражающих варианты детекции дикотипной, мутантной аллели и варианта гетерозиготного генотипа.
Пример конкретного использования тест-системы для выявления мутации в гене BTPKD у собак.
Исследование состоит из трех этапов:
1. Выделение ДНК из биоматериала (соскобов энетеробуккального эпителия).
2. Проведение ПЦР-РВ.
3. Интерпретация полученных результатов.
1. Для исследования у собак берут пробу энтеробуккального эпителия. Выделение тотальной ДНК собаки домашней производилось методом, с применением бромида цетилтриметиламмония (ЦТАБ).
Состав буфера: 1,4 М NaCl, 0,02 М ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота), 0,1М Трис - HCl с рН=8,0 (гидроксиметиламинометана гидрохлорид), дистиллированная вода.
Материал (соскоб буккального эпителия) переносили в пробирку типа Eppendorf объемом 1,5 мл, с добавлением 1 мл экстрагирующего буфера. После чего образец инкубировали на +56°C в течение 40 минут, с периодическим перемешиванием содержимого. После инкубации в пробирку добавляли 0,5 мл хлороформа, выдерживали 40 минут при комнатной температуре, содержимое пробирки постоянно перемешивали. Центрифугировали в течение 5 минут при 10000 об/мин. Верхнюю фазу переносили в чистую пробирку типа Eppendorf объемом 1,5 мл, добавляли 2/3 объема изопропилового спирта, перемешивали. Далее выдерживали при комнатной температуре 30 минут для преципитации ДНК. Центрифугировали 10 минут при 10000 об/мин. Супернатант сливали и промывали осадок 80% этанолом. Повторно центрифугировали 10 минут при 10000 об/мин. После удаления супернатанта, осадок нуклеиновой кислоты высушивали при комнатной температуре, затем растворяли его в 60 мкл стерильной деионизированной воды, хранили полученный образец ДНК при -20°C.
2. Апробацию диагностической системы производили в ПЦР-РВ анализаторе нуклеиновых кислот АНК-16 (Сертификат соответствия № РОСС RU.ME01. Н00423, Институт аналитического приборостроения РАН, Россия). Реакцию проводили в объеме 20 мкл. Амплификационная смесь содержит: 2 мкл 10 х буфер с сульфатом аммония для Taq-полимеразы, 0,125 мМ смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ), 0,25 мкМ праймер прямой, 0,25 мкМ праймер обратный, 0,125е.а/мкл Taq-полимераза, 2,5 мМ магния хлорид, 0,125 мкМ Taqman зонда диагностируемой аллели, а также олигонуклеотид-«заглушку» для другой аллели в объеме 0,250 мкМ. Все используемые реактивы производства ООО «Бигль», Россия. В качестве матрицы в смесь добавляли 1 мкл разбавленного раствора контрольной плазмиды (с фрагментом гена дикого типа, с фрагментом мутантной аллели гена или их смеси, имитирующей гетерозиготу. После первоначальной денатурации при 94°C в течение 200 с 40 циклов амплификации проводили в следующем температурно-временном режиме: денатурация - 94°C, 18 с, отжиг праймеров - 60°C, 40 с, элонгация - 72°C, 40 с.
Тест-система позволяет специфически амплифицировать фрагмент гена BTPKD, для установления генотипа собаки в мультиплексной полимеразной цепной реакции.
Система состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ПЦР и комплекта контрольных образов.
Отбирают необходимое количество одноразовых пробирок пробирку типа Eppendorf объемом 1,5 мл, включая пробирки с матрицами и отрицательным контролем. Во все пробирки вносят реакционную смесь и добавляют исследуемые образцы ДНК в количестве 1 мкл, в отдельные пробироки вносят 1 мкл матрицы - разбавленного раствора контрольной плазмиды с фрагментом гена дикого типа, с фрагментом мутантной аллели гена. В пробирку для отрицательного контроля вносят 1 мл дистиллированной воды.
3. Интерпретация результатов анализа.
Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала - анализируются с помощью программного обеспечения используемого генетического анализатора для проведения ПЦР-РВ АНК-16, согласно прилагаемой инструкции производителя.
В таблице 1 представлены данные, по которым можно установить существенную разницу в эффективности специфической и неспецифической реакции. Эффективность рассчитана ПО прибора АНК-16.
Figure 00000001
Таким образом, для выявления собак-носителей (генотип GA) мутации в гене BTPKD(SNP: 6:38856816; NC_006588.3:g.38856816G>A), а также животных, больных поликистозом (гнотип АА) можно использовать разработанную тест систему. При наличии генотипа дикого типа (GG), т.е. животное здоровое на графике фиг. 2 результат будет отображаться в виде графика wt/wt. Если собака является носителем мутантной аллели (генотип GA), то результат детекции будет соответствовать графику mut/wt, представленном на фиг. 1 и фиг. 2. При наличии мутации в гомозиготном состоянии (поликистоз, генотип АА), график будет соответствовать, представленному на фиг. 1 и фиг. 2 как mut/ mut.
Заявляемую тест-систему рекомендовано использовать в ветеринарной генетике, а именно к средствам выявления носительства или диагностики заболевания поликистоз почек, вызванный мутацией в гене BTPKD у собак породы английский бультерьер, керн-терьер, вест-хайленд-вайт терьер или малинуа, что соответствует уровню «промышленная применимость».

Claims (7)

  1. Тест-система для выявления мутации (SNP: 6:38856816; NC_006588.3:g.38856816G>A) в гене BTPKD (Bull Terriers Polycystic Kidney Disease), вызывающей поликистоз почек у собак, включающая амплификационную смесь для проведения полимеразной цепной реакции, состоящую из десятикратного (10х) буфера с сульфатом аммония, Taq-полимеразы, смеси дезоксинуклеотидтрифосфатов (дНТФ), магния хлорида, а также разработанных праймеров, разработанных Taqman зондов диагностируемой аллели и разработанных олигонуклеотидов-«заглушек» для другой аллели, представленных ниже:
  2. Праймер F - CCTCAAGCCTGTCCATCTGT
  3. Праймер R - GGAGAGCCAGATGTGCTTGT
  4. Зонд mut - FAM-TCCTCGTGGCCAAGCTGCAG-BHQ1
  5. Заглушка wt - CCTCGTGGCCGAGCTGCAG-NH2
  6. Зонд wt - FAM - CCTCGTGGCCGAGCTGCAG-BHQ1
  7. Заглушка mut - TCCTCGTGGCCAAGCTGCAG-NH2.
RU2020143074A 2020-12-24 2020-12-24 Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек RU2763933C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020143074A RU2763933C1 (ru) 2020-12-24 2020-12-24 Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020143074A RU2763933C1 (ru) 2020-12-24 2020-12-24 Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2763933C1 true RU2763933C1 (ru) 2022-01-11

Family

ID=80040328

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020143074A RU2763933C1 (ru) 2020-12-24 2020-12-24 Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2763933C1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006320355A1 (en) * 2005-12-01 2007-06-07 Bioarts & Research Corp. Online marketplace for animal genetics
RU2458131C1 (ru) * 2010-12-07 2012-08-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им.В.А.Энгельгардта Тест-система для определения мутаций в генах фумарилацетоацетат гидролазы и альфа-1-антитрипсина человека
WO2020186154A1 (en) * 2019-03-14 2020-09-17 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for supporting renal health

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2006320355A1 (en) * 2005-12-01 2007-06-07 Bioarts & Research Corp. Online marketplace for animal genetics
RU2458131C1 (ru) * 2010-12-07 2012-08-10 Федеральное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им.В.А.Энгельгардта Тест-система для определения мутаций в генах фумарилацетоацетат гидролазы и альфа-1-антитрипсина человека
WO2020186154A1 (en) * 2019-03-14 2020-09-17 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for supporting renal health
US11013705B2 (en) * 2019-03-14 2021-05-25 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for supporting renal health

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PUYA GHARAHKHANI et al. A Non-Synonymous Mutation in the Canine Pkd1 Gene Is Associated with Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease in Bull Terriers. PLoS ONE, 6(7), e22455. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Collins et al. Developmental validation of a single-tube amplification of the 13 CODIS STR loci, D2S1338, D19S433, and amelogenin: the AmpFℓSTR® Identifiler® PCR amplification kit
Mohamad et al. Comparison of gene nature used in real-time PCR for porcine identification and quantification: A review
EP2660331B1 (en) Method for single cell genome analysis and kit therefor
KR102018122B1 (ko) 한우육의 동일성 확인용 바이오 마커 및 이의 용도
JP6234463B2 (ja) 核酸の多重分析の方法
RU2700480C1 (ru) Тест-система для определения видовой принадлежности тканей кур и свиней в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах
AU2003258012A1 (en) Methods and compositions for genotyping
England et al. Sexing chickens (Gallus gallus domesticus) with high-resolution melting analysis using feather crude DNA
Zhang et al. A new multiplex assay of 17 autosomal STRs and Amelogenin for forensic application
US20200216903A1 (en) Mitochondrial Disease Genetic Diagnostics
US8012691B2 (en) Multiplex compositions and methods for quantification of human nuclear DNA and human male DNA and detection of PCR inhibitors
RU2763933C1 (ru) Тест-система для выявления мутации в гене btpkd собаки домашней (canis lupus familiaris), вызывающей поликистоз почек
Mattarucchi et al. Different real time PCR approaches for the fine quantification of SNP's alleles in DNA pools: assays development, characterization and pre-validation
Ji et al. A method for determining zygosity of transgenic zebrafish by TaqMan real-time PCR
Kipen et al. Analysis of HEPH gene polymorphism on the x chromosome for identification of wild boar and domestic pig
Soejima et al. Selective quantification of human DNA by real-time PCR of FOXP2
RU2725539C1 (ru) Тест-система для идентификации ДНК тканей крыс и мышей в сухих кормах и мясных полуфабрикатах
Naaum et al. An introduction to DNA-based tools for seafood identification
Sukumolanan et al. Development of a loop-mediated isothermal amplification assay coupled with a lateral flow dipstick test for detection of myosin binding protein C3 A31P mutation in maine coon cats
Losi et al. An alternative method to isoenzyme profile for cell line identification and interspecies cross-contaminations: cytochrome b PCR-RLFP analysis
KR101520502B1 (ko) 돼지의 단일뉴클레오타이드다형성 마커 및 이를 이용한 국내산 돈육의 원산지 판별방법
Bhattacharya Application of genomics tools in meat quality evaluation
RU2809553C1 (ru) Способ определения аллелей гена fgfr3 методом пцр в «реальном времени»
RU2725216C1 (ru) Тест-система для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах
RU2728382C1 (ru) Тест-система для идентификации ДНК ткани собаки домашней (Canis lupus familiaris) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах