RU2749477C1 - Method for modelling male hypogonadotropic hypogonadism - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention relates to medicine, namely to endocrinology and experimental biology, and can be used to model male hypogonadotropic hypogonadism. Unilateral gonadectomy is performed in newborn male rats by means of removing the testicle from the intra-abdominal cavity, ligating, cutting the testicular cord, followed by removing the gonad. Unilateral gonadectomy is performed no later than on the 4thday of postnatal life.EFFECT: method provides a possibility of obtaining a model of male hypogonadism of hypogonadotropic form by performing unilateral gonadectomy in the early postnatal period of life, which, as opposed to a hypergonadotropic form of hypogonadism in analogs, allows modeling the hypogonadotropic form of hypogonadism in male rats.1 cl, 4 dwg, 3 tbl

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и экспериментальной биологии и предназначено для моделирования мужского гипогонадотропного гипогонадизма.The invention relates to medicine, namely to endocrinology and experimental biology, and is intended for modeling male hypogonadotropic hypogonadism.

Известны способы моделирования первичного мужского гипогонадизма, например, «Способ моделирования мужского гипогонадизма» (авт. свид. СССР №1720079, опубл. 15.03.1992 г.), в котором животному с третьего дня постнатальной жизни в течение 3 дней ежедневно вводят пиридоксин гидрохлорид в дозе 10 мг/кг, а в.половозрелом возрасте осуществляют гонадэктомию.Known methods for modeling primary male hypogonadism, for example, "Method for modeling male hypogonadism" (ed. USSR certificate No. 1720079, publ. 03/15/1992), in which the animal is daily administered pyridoxine hydrochloride for 3 days from the third day of postnatal life. a dose of 10 mg / kg, and gonadectomy is performed at puberty.

Однако такой способ позволяет моделировать только тестостеронрезистентные формы гипогонадизма.However, this method allows modeling only testosterone-resistant forms of hypogonadism.

Известен «Способ моделирования гипогонадизма, вызванного метаболическими нарушениями» (пат. РФ №2611936, опубл. 01.03.2017 г.) в котором мышам-самцам линии C57Bl/6 через сутки после рождения вводят стрептозотоцин однократно, подкожно в дозе 200 мг/кг. Затем с 28-х суток после рождения переводят животных на рацион, обогащенный насыщенными жирами. Поддерживают этот рацион до достижения гипергликемии, гиперинсулинемии, нарушений глюкозотолерантности, а также угнетения сперматогенеза и нарушения фертильности. Известный способ обеспечивает создание модели гипогонадизма, вызванного метаболическими нарушениями.The known "Method for modeling hypogonadism caused by metabolic disorders" (US Pat. RF No. 2611936, publ. 03/01/2017) in which male mice of the C57Bl / 6 line one day after birth are injected with streptozotocin once, subcutaneously at a dose of 200 mg / kg. Then, from the 28th day after birth, the animals are transferred to a diet enriched with saturated fats. This diet is maintained until hyperglycemia, hyperinsulinemia, impaired glucose tolerance, as well as inhibition of spermatogenesis and impaired fertility are achieved. The known method provides the creation of a model of hypogonadism caused by metabolic disorders.

Известен также «Способ моделирования первичного мужского гипогонадизма» (пат. РФ №2618196, опубл. 02.05.2017 г.), в котором осуществляют ишемическое воздействие на тестикулы путем временного наложения лигатуры сроком на 3 суток. Лигатуру накладывают с силой деформирующего воздействия 3-4 Н в одностороннем порядке путем открытой селективной перевязки семенной вены и артерии в проксимальной части семенного канатика с сохранением коллатерального кровотока. Одновременно с наложением лигатуры удаляют контралатеральный тестикул. Известный способ позволяет избежать развития таких побочных эффектов, как некроз тестикула или развитие экскреторного бесплодия, за счет контролируемого деформирующего воздействия и сохранения коллатерального кровотока.There is also known "Method for modeling primary male hypogonadism" (US Pat. RF No. 2618196, publ. 05/02/2017), in which ischemic action on the testicles is carried out by temporarily applying a ligature for a period of 3 days. The ligature is applied with a deforming force of 3-4 N unilaterally by open selective ligation of the spermatic vein and artery in the proximal part of the spermatic cord while maintaining collateral blood flow. Simultaneously with the imposition of the ligature, the contralateral testicle is removed. The known method makes it possible to avoid the development of such side effects as testicle necrosis or the development of excretory infertility, due to the controlled deforming effect and the preservation of collateral blood flow.

Однако общим недостатком указанных известных способов, является то, что выполнение гонадэктомии происходит в более поздние сроки роста и развития животных или взрослых особей. Это объясняется тем, что в последнем триместре беременности за неделю до рождения в организме крыс наблюдается большой пик выброса тестостерона, который продолжается до 5-7 дней после родов. Этот последний период отвечает за дифференциацию, маскулинизацию и дефеминизацию развивающегося мозга. Процесс половой дифференциации происходит от генетического пола, который определяет гонадный пол. Последний, в свою очередь, через половые стероиды воздействует на эмбрион, новорожденный плод, подростковый и взрослый организм крыс, и определяет фенотип самцов. Половая дифференциация головного мозга является следствием прямого гормонального воздействия, когда наличие или отсутствие тестостерона во время внутриутробного и неонатального периода будет определять степень развития дифференциации мозга и выраженности фенотипа. Превращение тестостерона в эстрадиол, который происходит в мозге и особенно активен в гипоталамусе, является ключевым событием, ведущим к дифференциации и дефеминизации. Снижение организующего действия андрогенов на головной мозг ведет к нарушению формирования центров регуляции гонадной оси Группа клеток в гипроталамусе центральной нервной системы (ЦНС) программируется так, чтобы воспринимать текущий уровень андрогенов за норму, и не реагировать на низкий уровень тестостерона в пубертатном периоде по фидбэк механизму. Следовательно, воздействие на секреторную функцию тестикулы в раннем постнатальном возрасте оказывает постоянное влияние на ЦНС, такие эффекты являются организационными, необратимыми и определяющими, а не временными или обратимыми, такими как эффекты активации, вызываемые низким уровнем тестостероном у взрослых крыс.However, a common disadvantage of these known methods is that the gonadectomy is performed at a later stage in the growth and development of animals or adults. This is due to the fact that in the last trimester of pregnancy, a week before birth, a large peak in testosterone release is observed in the body of rats, which lasts up to 5-7 days after birth. This latter period is responsible for the differentiation, masculinization, and defeminization of the developing brain. The process of sexual differentiation comes from the genetic sex, which determines the gonadal sex. The latter, in turn, through sex steroids affects the embryo, newborn fetus, adolescent and adult rats, and determines the phenotype of males. Sexual differentiation of the brain is a consequence of direct hormonal effects, when the presence or absence of testosterone during the prenatal and neonatal period will determine the degree of development of brain differentiation and the severity of the phenotype. The conversion of testosterone to estradiol, which occurs in the brain and is especially active in the hypothalamus, is a key event leading to differentiation and defeminization. A decrease in the organizing effect of androgens on the brain leads to a disruption in the formation of centers of regulation of the gonadal axis A group of cells in the hyprothalamus of the central nervous system (CNS) is programmed to perceive the current level of androgens as normal and not to respond to low testosterone levels in puberty by the feedback mechanism. Therefore, the impact on the secretory function of the testicle in early postnatal age has a permanent effect on the central nervous system, such effects are organizational, irreversible and determinative, and not temporary or reversible, such as the activation effects caused by low testosterone levels in adult rats.

Таким образом,. гонадостат или гормональный статус развивающегося плода после гонадэктомии характеризуется отсутствием гипофизарного ответа на низкий уровень тетстостерона увеличением синтеза и выброса гонадотропинов в кровь в нос шатал ном периоде жизни животных, что приводит к развитию гипогонадотропного варианта гипогонадизма в противоположность гипергонадотропому гипогонадизму в обычных условиях у взрослых самцов крыс. (1-11)In this way,. The gonadostat or hormonal status of the developing fetus after gonadectomy is characterized by the absence of the pituitary response to a low level of tetstosterone by an increase in the synthesis and release of gonadotropins into the blood in the nasal period of animals' life, which leads to the development of a hypogonadotropic variant of hypogonadism, as opposed to hypergonadotropic hypogonadism in adult male rats under normal conditions. (1-11)

Целью изобретения является моделирование мужского гипогонадотропного гипогонадизма.The aim of the invention is to model male hypogonadotropic hypogonadism.

Технический результат изобретения заключается в получении модели мужского гипогонадизма гипогонадотропной формы.The technical result of the invention is to obtain a model of male hypogonadism of the hypogonadotropic form.

Технический результат достигается тем, что у новорожденных самцов крыс на 1-3 день постнатальной жизни под общей ингаляционной анестезией изофлураном в асептических условиях проводят лапаротомию с односторонней гонадэктомией путем извлечения тестикула из внутрибрюшной полости перевязки и отсечения семенного канатика с последующим удалением гонады.The technical result is achieved by the fact that in newborn male rats on days 1-3 of postnatal life under general inhalation anesthesia with isoflurane in aseptic conditions, laparotomy with unilateral gonadectomy is performed by removing the testicle from the intra-abdominal cavity, ligating and cutting off the spermatic cord followed by removal of the gonad.

Применение заявленного способа путем проведения односторонней гонадэктомии в ранний постнатаольный период жизни позволяет, в отличие от аналогов моделировать гипогонадотропную форму гипогонадизма у самцов крыс.The use of the claimed method by carrying out unilateral gonadectomy in the early postnatal period of life allows, in contrast to analogs, to simulate the hypogonadotropic form of hypogonadism in male rats.

Валидацию способа моделирования мужского гипогонадотропного гипогонадизма проводили измерением в сыворотке крови гормонов Тс, ЛГ и ФСГ в 2- и 4-месячном возрасте методом ИФА анализа наборами Cloud-Clone Corp. (Китай). На этапах исследования производили забор андрогензависимых тканей на разных сроках полового развития. Уровень гонадотропинов у всех крыс из опытной группы в эксперименте были в пределах референсных значений, характерных для интактных самцов аналогичного возраста из контрольной группы или же ниже этих значений. При этом уровень тестостерона у неонатально кастрированных самцов 2-х месячного возраста был значимо ниже по сравнению с интактными самцами крыс контрольной группы аналогичного возраста.The method for modeling male hypogonadotropic hypogonadism was validated by measuring the hormones Tc, LH and FSH in the blood serum at 2 and 4 months of age by ELISA analysis using Cloud-Clone Corp. kits. (China). At the stages of the study, androgen-dependent tissues were taken at different stages of sexual development. The level of gonadotropins in all rats from the experimental group in the experiment were within the reference values characteristic of intact males of the same age from the control group or below these values. At the same time, the level of testosterone in neonatally castrated males of 2 months of age was significantly lower than in intact male rats of the same age group.

Планирование и проведение всей экспериментальной работы осуществлялось в строгом соответствии с требованиями Минздрава РФ и международными стандартами в области доклинического изучения свойства и безопасности новых фармакологических средств (ГОСТ 33044-2014 «Принципы надлежащей лабораторной практики» (стандарта GLP - Good Laboratory Practic; Guide for the care and use of laboratory animals 8^th edition. Copyright 2011 by the National Academy of Sciences. - Washington, D.C. 2010). Это позволило всесторонне исследовать функциональные системы и органы подопытных животных.The planning and implementation of all experimental work was carried out in strict accordance with the requirements of the Ministry of Health of the Russian Federation and international standards in the field of preclinical study of the properties and safety of new pharmacological agents (GOST 33044-2014 "Principles of Good Laboratory Practice" (GLP standard - Good Laboratory Practic; Guide for the care and use of laboratory animals 8 ^th edition. Copyright 2011 by the National Academy of Sciences. - Washington, DC 2010). This allowed a comprehensive study of the functional systems and organs of experimental animals.

Исследование выполнено на базе института экспериментальной медицины ФГБУ «Национального Медицинского Исследовательского Центра им. В.А. Алмазова» Минздрава РФ (Санкт-Петербург) и ФГБНУ «Института экспериментальной медицины» РАН (Санкт-Петербург).The study was carried out on the basis of the Institute of Experimental Medicine of the Federal State Budgetary Institution "National Medical Research Center. V.A. Almazov "of the Ministry of Health of the Russian Federation (St. Petersburg) and the Institute of Experimental Medicine of the Russian Academy of Sciences (St. Petersburg).

Исследование проводилось на лабораторных крысах линии Wistar мужского пола 1-3 дня рождения, 2- и 4-месячного возраста. Создание модели гипогонадных самцов крыс предусматривало закупку беременных самок в последней декаде гестации. Новорожденных потомств обоих полов от этих самок крыс группировали по половому признаку и по дате рождения. Новорожденные детеныши-самцы были включены в дальнейшее исследование. Всего было включено 96 особей крыс в возрасте 1-3 дней.The study was conducted on male Wistar laboratory rats of 1-3 birthdays, 2 and 4 months of age. The creation of a model of hypogonadal male rats provided for the purchase of pregnant females in the last decade of gestation. Newborn offspring of both sexes from these female rats were grouped by sex and by date of birth. Newborn male pups were included in the further study. A total of 96 rats aged 1-3 days were included.

Животные содержались в условиях 12/12-часового свето-темнового режима и получали стандартный корм и питьевую воду ad libitum. Животные были разделены случайным образом на 4 группы. Деление экспериментальных животных на группы проводилось на основании проводимого исследования и стадии полового развития (возраст 2 месяца соответствовал пубертатному периоду, возраст 4 месяца - половозрелым особям). Данные представлены в таблице 1.The animals were kept in a 12/12 hour light-dark regime and received standard food and drinking water ad libitum. The animals were randomly divided into 4 groups. The division of experimental animals into groups was carried out on the basis of the study and the stage of sexual development (age 2 months corresponded to puberty, age 4 months - to sexually mature individuals). The data are presented in Table 1.

Проводимые исследования подтверждаются иллюстрациями, где:The research carried out is confirmed by illustrations, where:

на фиг. 1 - представлены этапы проведения односторонней гонадэктомии: поз. 1 - фиксация липкой лентой к термостатируемому столу; поз. 2 - разрез брюшины, выделение тестикулы; поз. 3 - перевязка семенного канатика и удаление гонады; поз. 4 - наложение шва и медицинского клея;in fig. 1 - the stages of unilateral gonadectomy are presented: pos. 1 - fixing with adhesive tape to a thermostatically controlled table; pos. 2 - incision of the peritoneum, isolation of the testicle; pos. 3 - ligation of the spermatic cord and removal of the gonad; pos. 4 - suture and medical glue;

на фиг. 2 - представлен график регрессионного анализа абсолютных значений концентраций тестостерона в плазме крови самцов крыс различных групп (нг/мл);in fig. 2 is a graph of regression analysis of the absolute values of testosterone concentrations in the blood plasma of male rats of different groups (ng / ml);

на фиг. 3 - сравнительный анализ концентрации KISS 1R в гонадах и мышечной ткани различных возрастных групп (2 и 4 месяца) здоровых самцов крыс (I) и при гипогонадотропном гипогонадизме в возрасте 4 месяца (II). Концентрация KISS1R в нг/мгбелка; * - р<0,01 достоверность между группами сравнения;in fig. 3 - comparative analysis of the concentration of KISS 1R in the gonads and muscle tissue of different age groups (2 and 4 months) of healthy male rats (I) and in hypogonadotropic hypogonadism at the age of 4 months (II). Concentration of KISS1R in ng / mg protein; * - p <0.01 reliability between the comparison groups;

на фиг. 4 - структурное моделирование статистически значимых ассоциаций между исследуемыми показателями (факт операции, уровень тестостерона, уровень гонадотропных гормонов) с точки зрения как прямого, так и опосредованного (медиаторного) эффекта.in fig. 4 - structural modeling of statistically significant associations between the studied parameters (operation fact, testosterone level, gonadotropic hormone level) in terms of both direct and indirect (mediator) effect.

Выполнение хирургического метода кастрацииPerforming a surgical castration method

Новорожденные самцы крыс были подвергнуты односторонней гонадэктомии на первый-третий дни постнатальной жизни (фиг. 1). Все животные подвергались общей анестезии путем вдыхания изофлурана. Ингаляционную анестезию проводили в следующем режиме: вначале эксперимента подача кислородно-воздушной смеси с 5% содержанием изофлурана, далее в течение эксперимента подача наркоза в поддерживающем режиме. Подтверждение анестезии устанавливали по отсутствию рефлекса на раздражители.Newborn male rats underwent unilateral gonadectomy on the first to third days of postnatal life (Fig. 1). All animals were subjected to general anesthesia by inhalation of isoflurane. Inhalation anesthesia was carried out in the following mode: at the beginning of the experiment, the supply of an oxygen-air mixture with 5% isoflurane content, then during the experiment, the supply of anesthesia in a maintenance mode. Confirmation of anesthesia was established by the absence of a reflex to stimuli.

Этапы операцииOperation stages

С помощью полоски лейкопластыря новорожденных крыс иммобилизировали в положении лежа на спине на термостатируемом столе под увеличительным стеклом с увеличением в 2-2,5 раза (поз. 1 фиг. 1). Местная антисептика проводилась с раствором хлоргексидина. На операционном поле, на брюшине малого таза с левой стороны делали разрез приблизительно 0,3 см. После разреза мышц и брюшины тестикула была идентифицирована, выделена и лигирована с нитью кетгута 3,0 и разрезана (поз. 2-3 фиг. 1). Разрез брюшины ушивали кетгутом с наложением одного шва, после которой на шов накладывали каплю медицинского клея (поз. 4 фиг. 1). Крыс держали в руке (в тепле) до полного отхода от анестезии, крыс возвращали в клетки к матери. Затем их содержали там до 21 дня жизни, после которого они были отделены от своей матери и помещены в клетки с пятью животными.Using a strip of adhesive plaster, newborn rats were immobilized in the supine position on a thermostatted table under a magnifying glass with a magnification of 2-2.5 times (item 1 of Fig. 1). Local antiseptics were performed with chlorhexidine solution. On the operating field, an approximately 0.3 cm incision was made on the left side of the pelvic peritoneum. After incision of the muscles and peritoneum, the testicle was identified, isolated and ligated with a 3.0 catgut thread and cut (pos. 2-3, Fig. 1). The incision of the peritoneum was sutured with catgut with the imposition of one suture, after which a drop of medical glue was applied to the suture (pos. 4, Fig. 1). The rats were held in the hand (warm) until complete withdrawal from anesthesia; the rats were returned to their mother's cages. They were then kept there until 21 days old, after which they were separated from their mother and placed in cages with five animals.

На следующем этапе согласно дизайну исследования, самцов крыс выращивали до достижения пубертатного (2 месяца) и половозрелого возраста (4 месяца). Из этих крыс сформировывали опытные группы (таблица 1). Кроме оперированных крыс выращивали также интактных самцов крыс для контроля. Все крысы были одного помета.In the next step, according to the study design, male rats were raised until puberty (2 months) and sexual maturity (4 months). Experimental groups were formed from these rats (table 1). In addition to the operated rats, intact male rats were also raised for control. All rats were of the same litter.

В запланированные в соответствии с дизайном исследования сроки были взяты материалы андрогензависимых тканей (гонады, мышечная ткань, головной мозг) и кровь на разных сроках полового развития (2 и 4 месяца). Данные представлены в таблице 2.Materials of androgen-dependent tissues (gonads, muscle tissue, brain) and blood at different stages of sexual development (2 and 4 months) were taken at the time planned in accordance with the study design. The data are presented in Table 2.

На взятых материалах были выполнены следующие методы исследования: The following research methods were performed on the materials taken:

1. Биохимия крови для оценки уровня тестостерона, ЛГ, ФСГ иммуноферментным методом; 1. Blood biochemistry to assess the level of testosterone, LH, FSH by enzyme immunoassay;

2. Морфологический анализ нейронов гипоталамических ядер, участвующих регуляции гонадной оси; 2. Morphological analysis of the neurons of the hypothalamic nuclei involved in the regulation of the gonadal axis;

3. Иммуногистохимический анализ динамики изменения рецепции кисспептина и андрогенов в гипоталамических ядрах, а также рецепции андрогенов в гонадах.3. Immunohistochemical analysis of the dynamics of changes in the reception of kisspeptin and androgens in the hypothalamic nuclei, as well as the reception of androgens in the gonads.

Результаты исследованияResearch results

Концентрацию лютеинизирующего гормона, фолликулостимулирующего гормона и тестостерона в плазме крови определяли у интактных и оперированных крыс в различные возрастные периоды полового созревания, Полученные данные были проанализированы, сделаны заключения. Абсолютные значения концентрации ЛГ, ФСГ в плазме крови самцов крыс различных групп представлены в таблице 3.The concentration of luteinizing hormone, follicle-stimulating hormone and testosterone in blood plasma was determined in intact and operated rats at different age periods of puberty. The obtained data were analyzed and conclusions were drawn. The absolute values of the concentration of LH, FSH in the blood plasma of male rats of various groups are presented in Table 3.

Динамика концентраций гонадотропинов в сыворотке крови эмбриона существенно отличается у гондэктомированных крыс по сравнению с интактными животными (таблица 3). Так, уровень ЛГ в сыворотке крови у гонадэктомированных 2-месячных крыс достоверно ниже по сравнению интактными крысам аналогичного возраста. Существенная разница в уровне ЛГ сохраняется также у 4-месячных крыс. Уровень ФСГ в крови 2-месячных гонадэктомированных крыс не отличается от таковых по сравнению с интактными самцами, но у половозрелых гонадэктомированных самцов 4-месячного возраста отмечается достоверное и значительное снижение уровня фолликулостимулирующего гормона по сравнению интактными крысами аналогичного возраста. Таким образом, в результате ранней постнатальной гонадэктомии у самцов крыс в течение пубертатного и половозрелого возрастов отмечается низкий уровень гонадотропинов - лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов по сравнению с интактными крысами аналогичного возраста.The dynamics of the concentration of gonadotropins in the blood serum of the embryo differs significantly in gondectomized rats compared to intact animals (Table 3). Thus, the level of LH in the blood serum in gonadectomized 2-month-old rats is significantly lower than in intact rats of the same age. A significant difference in LH levels also persists in 4-month-old rats. The level of FSH in the blood of 2-month-old gonadectomized rats does not differ from those in comparison with intact males, but in sexually mature gonadectomized males of 4 months of age there is a significant and significant decrease in the level of follicle-stimulating hormone compared to intact rats of the same age. Thus, as a result of early postnatal gonadectomy in male rats during puberty and puberty, there is a low level of gonadotropins, luteinizing and follicle-stimulating hormones, compared with intact rats of the same age.

Низкие значения концентраций ЛГ и ФСГ у оперированных плодов мужского пола коррелирует с низкой концентрацией тестостерона у этих же самцов крыс, как результат гонадэктомии (фиг. 2). В отличие от данной модели, у взрослых самцов односторонняя гонадэктомия по принципу обратной связи приводит к выработке гонадотропинов в гипофизе и росту их значений в периферической крови. То есть, низкое значение концентрации тестостерона у оперированных самцов коррелирует с высоким уровнем ЛГ и ФСГ в сыворотке крови. Данная гормональная ситуация характеризуется как состояние гипергонадотропного гипогонадизма.Low values of LH and FSH concentrations in operated male fetuses correlate with low testosterone concentrations in the same male rats, as a result of gonadectomy (Fig. 2). In contrast to this model, in adult males, unilateral gonadectomy based on the feedback principle leads to the production of gonadotropins in the pituitary gland and an increase in their values in the peripheral blood. That is, a low value of testosterone concentration in operated males correlates with a high level of LH and FSH in the blood serum. This hormonal situation is characterized as a state of hypergonadotropic hypogonadism.

Список литературыBibliography

1. Мыслицкий В.Ф. Половая дифференциация некоторых структур лимбической системы головного мозга крыс в онтогенезе, Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук, Москва, 1990.1. Myslitsky V.F. Sexual differentiation of some structures of the limbic system of the rat brain in ontogenesis, Abstract of the dissertation for the degree of Doctor of Biological Sciences, Moscow, 1990.

2. Никитина И.Л., Байрамов А.А. Формирование пола и репродуктивной системы человека - прошлое, настоящее, будущее, лечение и профилактика, 2014, №2 (10), с. 76-85.2. Nikitina I.L., Bayramov A.A. Formation of sex and human reproductive system - past, present, future, treatment and prevention, 2014, No. 2 (10), p. 76-85.

3. Резников А.Г. Функциональная тератология нейроэндокринной системы: этиология, патогенез, профилактика // Здоров'я

- 2007. - №22/1. - С. 19-21.3. Reznikov A.G. Functional teratology of the neuroendocrine system: etiology, pathogenesis, prevention // Health

- 2007. - No. 22/1. - S. 19-21.

4. Шишкина И.В. Рецепторы к половым гормонам в гипоталамусе и их роль в половой дифференцировке мозга у крыс. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидат биологических наук. Москва, 1984.4. Shishkina I.V. Receptors to sex hormones in the hypothalamus and their role in sexual differentiation of the brain in rats. Abstract of the dissertation for the degree of candidate of biological sciences. Moscow, 1984.

5. Chowen JA, Argente J, Gonzalez-Parra S, Garcia-Segura LM. Differential effects of the neonatal and adult sex steroid environments on the organization and activation of hypothalamic growth hormone - releasing hormone and somatostatin neurons. Endocrinology. 1993; 133(6): 2792-802.5. Chowen JA, Argente J, Gonzalez-Parra S, Garcia-Segura LM. Differential effects of the neonatal and adult sex steroid environments on the organization and activation of hypothalamic growth hormone - releasing hormone and somatostatin neurons. Endocrinology. 1993; 133 (6): 2792-802.

6. Corbier P, Roffi J, Rhoda J. Female sexual behavior in male rats: effect of hour of castration at birth. Physiol Behav. 1983; 30(4): 613-6.6. Corbier P, Roffi J, Rhoda J. Female sexual behavior in male rats: effect of hour of castration at birth. Physiol Behav. 1983; 30 (4): 613-6.

7. Dorner G, Staudt J. Structural changes in the preoptic anterior hypothalamic area of the male rat, following neonatal castration and androgen substitution. Neuroendocrinology. 1968; 3(3): 136-407. Dorner G, Staudt J. Structural changes in the preoptic anterior hypothalamic area of the male rat, following neonatal castration and androgen substitution. Neuroendocrinology. 1968; 3 (3): 136-40

8. Handa R.J., Corbier P., Shryne J.E., Schoonmaker J.N., Gorski R.A. Differential effects of the perinatal steroid environment on three sexually dimorphic parameters of the rat brain. Biol. Repord. 1985; 32(4): 855-64.8. Handa R.J., Corbier P., Shryne J.E., Schoonmaker J.N., Gorski R.A. Differential effects of the perinatal steroid environment on three sexually dimorphic parameters of the rat brain. Biol. Repord. 1985; 32 (4): 855-64.

9. Madeira MD, Lieberman AR. Sexual dimorphism in the mammalian limbic system. Prog Neurobiol. 1995; 45(4): 275-3339. Madeira MD, Lieberman AR. Sexual dimorphism in the mammalian limbic system. Prog Neurobiol. 1995; 45 (4): 275-333

10. McEwen BS. Protective and damaging effects of stress mediators: central role of the brain. Prog Brain Res. 2000; 122: 25-34.10. McEwen BS. Protective and damaging effects of stress mediators: central role of the brain. Prog Brain Res. 2000; 122: 25-34.

11. Patchev VK, Hayashi S, Orikasa C, Almeida OF. Implications of estrogen-dependent brain organization for gender differences in hypothalamo-pituitary-adrenal regulation. Faseb J. 1995; 9(5): 419-23.11. Patchev VK, Hayashi S, Orikasa C, Almeida OF. Implications of estrogen-dependent brain organization for gender differences in hypothalamo-pituitary-adrenal regulation. Faseb J. 1995; 9 (5): 419-23.

Стандарты GLP:GLP standards:

1. Межгосударственный стандарт ГОСТ 33044-2014 «Принципы надлежащей лабораторной практики» (GLP).1. Interstate standard GOST 33044-2014 "Principles of Good Laboratory Practice" (GLP).

2 Директива 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского Союза по охране животных, используемых в научных целях. СПб., 2012, 48 с.2 Directive 2010/63 / EU of the European Parliament and of the Council of the European Union on the protection of animals used for scientific purposes. SPb., 2012, 48 p.

4. Guide for the care and use of laboratory animals 8th edition. Copyright 2011 by the National Academy of Sciences. - Washington, D.C. 2010.4. Guide for the care and use of laboratory animals 8th edition. Copyright 2011 by the National Academy of Sciences. - Washington, D.C. 2010.

Claims (1)

Способ моделирования мужского гипогонадотропного гипогонадизма, включающий выполнение односторонней гонадэктомии у новорожденных самцов крыс путем извлечения тестикулы из внутрибрюшной полости, перевязки, отсечения семенного канатика с последующим удалением гонады, отличающийся тем, что одностороннюю гонадэктомию выполняют не позднее 4-го дня постнатальной жизни.A method for modeling male hypogonadotropic hypogonadism, including performing unilateral gonadectomy in newborn male rats by removing the testicle from the intra-abdominal cavity, ligating, cutting off the spermatic cord with subsequent removal of the gonad, characterized in that unilateral gonadectomy is performed no later than the 4th day of postnatal life.

Images