RU2747147C1 - Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxicity towards human colon carcinoma cells - Google Patents
Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxicity towards human colon carcinoma cells Download PDFInfo
- Publication number
- RU2747147C1 RU2747147C1 RU2020121242A RU2020121242A RU2747147C1 RU 2747147 C1 RU2747147 C1 RU 2747147C1 RU 2020121242 A RU2020121242 A RU 2020121242A RU 2020121242 A RU2020121242 A RU 2020121242A RU 2747147 C1 RU2747147 C1 RU 2747147C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- ginsenoside
- beta
- pinene
- pharmaceutical composition
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/05—Phenols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/09—Lichens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/11—Pteridophyta or Filicophyta (ferns)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/13—Coniferophyta (gymnosperms)
- A61K36/14—Cupressaceae (Cypress family), e.g. juniper or cypress
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/13—Coniferophyta (gymnosperms)
- A61K36/15—Pinaceae (Pine family), e.g. pine or cedar
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/61—Myrtaceae (Myrtle family), e.g. teatree or eucalyptus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к фармакологической промышленности и медицине, в частности онкологии, касается создания фармацевтической композиции на основе действующих веществ, выделенных из растений, которая может быть использована у больных колоректальным раком с перитонеальным карциноматозом.The invention relates to the pharmaceutical industry and medicine, in particular oncology, concerns the creation of a pharmaceutical composition based on active substances isolated from plants, which can be used in patients with colorectal cancer with peritoneal carcinomatosis.
Колоректальный рак занимает одно из ведущих мест в России и в мире. Ежегодно в мире диагностируются более 1 млн. новых случаев. Из них примерно 50% больных погибают ежегодно от этого заболевания. Более 25% больных на момент постановки диагноза имеют IV стадию заболевания (Злокачественные новообразования в России в 2015 году. Заболеваемость и смертность / под редакцией А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИРЦ» Минздрава России, 2017).Colorectal cancer occupies one of the leading places in Russia and in the world. More than 1 million new cases are diagnosed worldwide every year. Of these, approximately 50% of patients die annually from this disease. More than 25% of patients at the time of diagnosis have stage IV disease (Malignant neoplasms in Russia in 2015. Morbidity and mortality / edited by A.D. Kaprin, V.V. Starinskiy, G.V. Petrova. P. A. Herzen - branch of the Federal State Budgetary Institution "NMIRTS" of the Ministry of Health of Russia, 2017).
Растения - ценный источник биологически активных соединений с разнообразным терапевтическим потенциалом (Fridlender, М.; Kapulnik, Y.; Koltai, Н. Plant derived substances with anti-cancer activity: From folklore to practice. Front. Plant Sci. 2015, 6,799.).Plants are a valuable source of biologically active compounds with diverse therapeutic potential (Fridlender, M .; Kapulnik, Y .; Koltai, H. Plant derived substances with anti-cancer activity: From folklore to practice. Front. Plant Sci. 2015, 6,799.) ...
По оценкам исследователей, более 60% лекарств с противоопухолевой активностью являются либо растительными экстрактами, либо веществами, полученными из растений (Fridlender М, Kapulnik Y, Koltai Н. Plant derived substances with anti-cancer activity: From folklore to practice. Front Plant Sci. 2015;6:799; Ijaz, S.; Akhtar, N.; Khan, M.S.; Hameed, A.; Irfan, M.; Arshad, M.A.; Ali, S.; Asrar, M. Plant derived anticancer agents: A green approach towards skin cancers, Biomed. Pharmacother., 2018, 103, 1643-1651.).According to researchers, more than 60% of drugs with anti-cancer activity are either plant extracts or substances obtained from plants (Fridlender M, Kapulnik Y, Koltai H. Plant derived substances with anti-cancer activity: From folklore to practice. Front Plant Sci. 2015; 6: 799; Ijaz, S .; Akhtar, N .; Khan, MS; Hameed, A .; Irfan, M .; Arshad, MA; Ali, S .; Asrar, M. Plant derived anticancer agents: A green approach towards skin cancers, Biomed. Pharmacother., 2018, 103, 1643-1651.).
В состав большинства видов лекарственных растений, представляющих интерес для применения в онкологии, входят такие группы веществ вторичного метаболизма, как фенольные соединения (простые фенолы, флавоноиды, фенольные кислоты, дубильные вещества и др.), терпеноиды (моно-, дитерпеноиды, тритерпеновые сапонины и др.), азот/серосодержащие соединения (алкалоиды и др.) (Shin S.A., Moon S.Y., Kim W.Y., Paek S.M., Park H.H., Lee C.S. Structure-based classification and anti-cancer effects of plant metabolites. // Int J Mol Sci 2018;19(9): 2651-2685.). Они обладают выраженными противоопухолевыми, антиоксидантными, иммуномодулирующими, противовоспалительными, антибактериальными свойствами (Gali-Muhtasib, Н.; Hmadi, R.; Kareh, M.; Tohme, R.; Darwiche, N. Cell death mechanisms of plant-derived anticancer drugs: Beyond apoptosis. 2015,20,1531-1562.).Most of the species of medicinal plants of interest for use in oncology include such groups of substances of secondary metabolism as phenolic compounds (simple phenols, flavonoids, phenolic acids, tannins, etc.), terpenoids (mono-, diterpenoids, triterpene saponins, etc.) etc.), nitrogen / sulfur-containing compounds (alkaloids, etc.) (Shin SA, Moon SY, Kim WY, Paek SM, Park HH, Lee CS Structure-based classification and anti-cancer effects of plant metabolites. // Int J Mol Sci 2018; 19 (9): 2651-2685.). They have pronounced antitumor, antioxidant, immunomodulatory, anti-inflammatory, antibacterial properties (Gali-Muhtasib, N .; Hmadi, R .; Kareh, M .; Tohme, R .; Darwiche, N. Cell death mechanisms of plant-derived anticancer drugs: Beyond apoptosis. 2015,20,1531-1562.).
Более выраженный эффект проявляют комбинированные средства растительного происхождения.Combined herbal products have a more pronounced effect.
Например, из уровня техники известен патент RU 2693378 С1, опубл. 02.07.2019, который раскрывает фармацевтическую композицию, проявляющую цитотоксическое действие в отношении клеток рака мочевого пузыря человека, которая представляет собой масляный фитоэкстракт плодов можжевельника обыкновенного, травы зверобоя продырявленного, цветков пижмы обыкновенной, плодов шиповника, корневищ лапчатки прямостоячей, корневищ и корней родиолы розовой, корней женьшеня настоящего, корней солодки голой, листьев мяты перечной, корневищ и корней валерианы лекарственной, травы душицы обыкновенной, листьев эвкалипта прутовидного, почек сосны обыкновенной, почек березы, взятых в определенных соотношениях.For example, from the prior art patent RU 2693378 C1, publ. 07/02/2019, which discloses a pharmaceutical composition exhibiting a cytotoxic effect on human urinary bladder cancer cells, which is an oily phyto extract of the fruits of common juniper, St. John's wort, flowers of tansy, rose hips, rhizomes of Potentilla erectus, rhizomes and roots of Rhodiola rosea, ginseng roots, licorice roots, peppermint leaves, rhizomes and roots of Valerian officinalis, oregano herb, eucalyptus leaves, pine buds, birch buds, taken in certain proportions.
Лекарственные средства, представляющие собой фитоэкстракты, в том числе, раскрытые в приведенном источнике, обычно хорошо переносятся, имеют менее тяжелые побочные эффекты. Однако входящие в их состав комплексы биологически активных веществ, особенно многокомпонентные, трудно стандартизуются, и могут существенно отличаться по количественному составу и биологически активным свойствам, наличию балластных веществ, в силу как особенностей растительного сырья (географическое происхождение, условия выращивания), так и технологии экстракции.Medicines that are phytoextracts, including those disclosed in the cited source, are usually well tolerated and have less severe side effects. However, the complexes of biologically active substances included in their composition, especially multicomponent ones, are difficult to standardize, and can differ significantly in the quantitative composition and biologically active properties, the presence of ballast substances, due to both the peculiarities of plant materials (geographical origin, growing conditions) and extraction technology ...
Использование чистых выделенных биоактивных фитокомпонентов позволяет обеспечить более высокий уровень терапевтической эффективности, более легкое усваивание организмом и хранение препаратов в течение длительного периода. Поэтому выявление и изучение природных комплексов биологически активных веществ в соответствии с их структурой, нетоксичных для нормальных клеток и здорового организма, но способных ингибировать развитие опухолевых процессов, снижать побочные эффекты противоопухолевых лекарств, представляется весьма актуальным для исследователей.The use of pure, isolated bioactive phytocomponents allows for a higher level of therapeutic efficacy, easier assimilation by the body and storage of drugs for a long period. Therefore, the identification and study of natural complexes of biologically active substances in accordance with their structure, non-toxic for normal cells and a healthy organism, but capable of inhibiting the development of tumor processes, reducing the side effects of anticancer drugs, seems to be very relevant for researchers.
В настоящее время в качестве средств противораковой терапии известен ряд комбинаций на основе таких активных компонентов.Currently, a number of combinations based on such active ingredients are known as anticancer therapy agents.
В частности, известна композиция, содержащая апигенин, арбутин, гиперозид, глицирризиновую кислоту, кверцетин, лютеолин, нарингенин, аланин, аспарагиновую кислоту, аргинин, глютаминовую кислоту, пролин, тирозин, гинзенозид Rb1, гинзенозид Rb2, гинзенозид Rc, гинзенозид Rd, гинзенозид Re, гинзенозид Rq1, аралозид А, аралозид В, аралозид С, элеутерозид А, элеутерозид В, элеутерозид С, элеутерозид Е, салидрозид, розавин, розиридин, родионин, схизандрин, схизантерин при определенных соотношениях (патент RU 2477142 С2, опубл. 10.03.2013). Данная композиция направлена на предотвращение канцерогенеза и может быть использована в клинической практике для профилактики и лечения онкологических больных.In particular, there is a known composition containing apigenin, arbutin, hyperoside, glycyrrhizic acid, quercetin, luteolin, naringenin, alanine, aspartic acid, arginine, glutamic acid, proline, tyrosine, ginsenoside Rb1, ginsenoside Rb2, ginsenoside Rb2, ginsenoside Rb2 , ginsenoside Rq1, aralozide A, aralozide B, aralozide C, eleutheroside A, eleutheroside B, eleutheroside C, eleutheroside E, salidroside, rosavin, rosiridin, rhodionin, schizandrin, schizanterin, 2477ubl. ). This composition is aimed at preventing carcinogenesis and can be used in clinical practice for the prevention and treatment of cancer patients.
Известны композиции для лечения раковых заболеваний, таких как рак толстой кишки, представляющие собой лекарственные средства, обогащенные, по меньшей мере, двумя фитохимическими чистыми веществами, выбранными из группы, состоящей из изофлавонов, лигнанов, сапонинов, катехинов и фенольных кислот (патент US 6395279 В1, опубл. 2002-05-28). Согласно источнику при создании композиций выбираются конкретные изофлавоны и фотохимические вещества, адаптированные к потребностям конкретных заболеваний.Known compositions for the treatment of cancers, such as colon cancer, which are drugs enriched with at least two pure phytochemicals selected from the group consisting of isoflavones, lignans, saponins, catechins and phenolic acids (US patent 6395279 B1 , publ. 2002-05-28). According to the source, when creating the compositions, specific isoflavones and photochemicals are selected, adapted to the needs of specific diseases.
Известна фармацевтическая композиция для лечения рака толстой кишки, которая включает гинсенозид Rh4 и иринотекан (CN 109045052 А, опубл. 2018.12.21). Композиция проявляет побочные эффекты в отношении системы кроветворения и может вызывать тошноту и рвоту.Known pharmaceutical composition for the treatment of colon cancer, which includes ginsenoside Rh4 and irinotecan (CN 109045052 A, publ. 2018.12.21). The composition exhibits side effects on the hematopoietic system and may cause nausea and vomiting.
Перечисленные известные из уровня техники композиции не являются достаточно эффективными в отношении метастазирования рака толстой кишки.The listed compositions known from the prior art are not sufficiently effective in the metastasis of colon cancer.
При этом из уровня техники известно, что метастазирование в брюшину является фатальным вариантом прогрессирования колоректального рака. Метахронный перитонеальный карциноматоз возникает у 4,2% радикально оперированных больных. Рецидив карциноматоза брюшины после проведения полной циторедуктивной операции наблюдается более чем у 50% пациентов (Segelman J., Акте О., Gustafsson U.O., Bottai М., Martling A. External validation of models predicting the individual risk of metachronous peritoneal carcinomatosis from colon and rectal cancer. // Colorectal Dis. - 2016. - Vol. 18(4):378-385).Moreover, it is known from the prior art that metastasis to the peritoneum is a fatal variant of the progression of colorectal cancer. Metachronous peritoneal carcinomatosis occurs in 4.2% of radically operated patients. Recurrence of peritoneal carcinomatosis after complete cytoreductive surgery is observed in more than 50% of patients (Segelman J., Akte O., Gustafsson UO, Bottai M., Martling A. External validation of models predicting the individual risk of metachronous peritoneal carcinomatosis from colon and rectal cancer. // Colorectal Dis. - 2016. - Vol. 18 (4): 378-385).
Классический подход, включающий циторедуктивную операцию с последующей гипертермической внутрибрюшной химиотерапией позволил у контингента больных с ограниченным перитонеальным карциноматозом (PCL<5) улучшить выживаемость. При этом медиана безрецидивной выживаемости составила 13,3 месяца (Сушков О.И., Шелыгин Ю.А., Ачкасов С.И., Пономаренко А.А. и др. Факторы прогноза выживаемости больных, оперированных по поводу перитонеального карциноматоза при раке толстой кишки // Хирургия. Журнал имени Н.И. Пирогова 2019, №8, выпуск 2, с. 16-23).The classical approach, including cytoreductive surgery followed by hyperthermic intra-abdominal chemotherapy, made it possible to improve survival in the contingent of patients with limited peritoneal carcinomatosis (PCL <5). At the same time, the median relapse-free survival was 13.3 months (Sushkov O.I., Shelygin Yu.A., Achkasov S.I., Ponomarenko A.A., etc. Factors for predicting the survival of patients operated on for peritoneal carcinomatosis in colorectal cancer intestines // Surgery. Journal named after N.I. Pirogov 2019, No. 8, issue 2, pp. 16-23).
Лишь полная циторедукция может позволить пациентам пережить пятилетний рубеж (Gelli М., Huguenin J., de Baere Т. at al. Peritoneal and extraperitoneal relapse after previous curative treatment of peritoneal metastases from colorectal cancer: What survival can we expect? // Eur J Cancer. 2018 Sep; 100:94-103; Elias D., Mariani A., Cloutier A.S., Blot F. et al. Modified selection criteria for complete cytoreductive surgery plus HIPEC based on peritoneal cancer index and small bowel involvement for peritoneal carcinomatosis of colorectal origin. // Eur J Surg Oncol. 2014 Nov; 40(11): 1467-73).Only complete cytoreduction can allow patients to survive the five-year milestone (Gelli M., Huguenin J., de Baere T. at al. Peritoneal and extraperitoneal relapse after previous curative treatment of peritoneal metastases from colorectal cancer: What survival can we expect? // Eur J Cancer. 2018 Sep; 100: 94-103; Elias D., Mariani A., Cloutier AS, Blot F. et al. Modified selection criteria for complete cytoreductive surgery plus HIPEC based on peritoneal cancer index and small bowel involvement for peritoneal carcinomatosis of colorectal origin. // Eur J Surg Oncol. 2014 Nov; 40 (11): 1467-73).
Следовательно, на сегодняшний день актуальной является проблема повышения эффективности лечения больных колоректальным раком с перитониальным карциноматозом. Использование препаратов, обладающих не только цитостатитическим, но иммуномодулирующим и антиоксидантным действием при самостоятельном их применении после циторедуктивных операций, а также в сочетании с циторедуктивными операциями с последующей внутрибрюшной гипертермической химиотерапией могло бы повысить эффект элиминации остаточных опухолевых клеток в брюшной полости.Consequently, today the problem of increasing the effectiveness of treatment of patients with colorectal cancer with peritoneal carcinomatosis is urgent. The use of drugs that have not only cytostatic, but immunomodulatory and antioxidant effects when used independently after cytoreductive surgeries, as well as in combination with cytoreductive surgeries followed by intra-abdominal hyperthermic chemotherapy, could increase the effect of eliminating residual tumor cells in the abdominal cavity.
Из уровня техники известна фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевым действием, способностью индуцировать систему апоптоза в клетках, оказывать антирецидивное и антиметастатическое действие, проявляющая иммуномодулирующее, антибактериальное, ранозаживляющее, противовоспалительное, обезболивающее воздействия, содержащая капсульный экстракт хвойных деревьев, дополнительно выделенную из него фракцию монотерпеноидов, включающую сесквитерпеноиды, нейтральные дитерпеноиды, дитерпеновые кислоты, тритерпеновые кислоты, ненасыщенные и насыщенные жирные кислоты, фенольные соединения и монотерпеноиды, а также растительное масло (патент ЕА 017659 В1. опубл. 2013.02.28). Данное решение может быть указано в качестве ближайшего аналога-прототипа.From the prior art, a pharmaceutical composition is known that has an antitumor effect, the ability to induce a system of apoptosis in cells, to exert an anti-relapse and antimetastatic effect, exhibiting immunomodulatory, antibacterial, wound healing, anti-inflammatory, analgesic effects, containing a capsule extract of coniferous trees, additionally containing sesquiterpenoids, neutral diterpenoids, diterpenic acids, triterpenic acids, unsaturated and saturated fatty acids, phenolic compounds and monoterpenoids, as well as vegetable oil (patent EA 017659 B1. publ. 2013.02.28). This solution can be indicated as the closest analogue of the prototype.
Задачей изобретения является создание эффективной фармацевтической композиции, проявляющей цитотоксическое действие в отношении клеток карциномы толстой кишки человека.The object of the invention is to provide an effective pharmaceutical composition exhibiting a cytotoxic effect on human colon carcinoma cells.
Поставленная задача решается тем, что предложена фармацевтическая композиция с иммуномодулирующими и антиоксидантными компонентами (далее ФК), проявляющая цитотоксичность в отношении клеток карциномы толстой кишки человека, характеризующаяся тем, что она представляет собой масляный раствор, содержащий альфа-пинен, бета-пинен, бета-мирцен 1,8-цинеол, сабинен, абиетиновую кислоту, гинзенозиды Re, Rb1, Rg2, флороглюцин, усниновую кислоту при следующем содержании компонентов, мг/л:The problem is solved by the fact that the proposed pharmaceutical composition with immunomodulatory and antioxidant components (hereinafter FC), exhibiting cytotoxicity against human colon carcinoma cells, characterized in that it is an oil solution containing alpha-pinene, beta-pinene, beta myrcene 1,8-cineole, sabinene, abietic acid, ginsenosides Re, Rb1, Rg2, phloroglucinol, usnic acid with the following content of components, mg / l:
растительное масло остальноеvegetable oil the rest
Техническим результатом изобретения является повышение эффективности элиминации остаточных опухолевых клеток в брюшной полости у больных колоректальным раком с перитониальным карциноматозом.The technical result of the invention is to increase the efficiency of elimination of residual tumor cells in the abdominal cavity in patients with colorectal cancer with peritoneal carcinomatosis.
Действующие вещества, входящие в состав фармацевтической композиции, могут быть выделены известными физико-химическими методами из растительного сырья.The active substances that make up the pharmaceutical composition can be isolated from plant raw materials by known physicochemical methods.
В качестве растительного сырья могут быть использованы различные части представителей семейства Pinaceae (сосна, пихта), плоды можжевельника обыкновенного (Juniperus communis), кориандра посевного (Coriandrum sativum), листья эвкалипта прутовидного {Eucalyptus viminalis), трава тимьяна обыкновенного (Thymus vulgaris), почки березы повислой (Betulapendula), корневище папоротника (щитовника) мужского (Dryopteris filix-mas), лишайники семейства Cladoniaceae, корень женьшеня настоящего (Panax ginseng) и другие растения, содержащие активные соединения, входящие в формулу изобретения.Various parts of representatives of the Pinaceae family (pine, fir), fruits of common juniper (Juniperus communis), coriander (Coriandrum sativum), leaves of eucalyptus (Eucalyptus viminalis), common thyme grass (Thymus vulgaris), buds silver birch (Betulapendula), male fern rhizome (Dryopteris filix-mas), lichens of the Cladoniaceae family, real ginseng root (Panax ginseng) and other plants containing active compounds included in the claims.
В таблице 1 представлен перечень и характеристика химических веществ, входящих в состав фармкомпозиции.Table 1 shows the list and characteristics of the chemical substances that make up the pharmaceutical composition.
В качестве растительного масла может быть использовано любое подходящее в качестве фармацевтически приемлемого растворителя масло, такое как соевое масло, масло авокадо, льняное масло, кунжутное масло, оливковое масло, рапсовое масло, кукурузное масло, подсолнечное масло. Наиболее предпочтительным является использование льняного, кукурузного и рапсового масла.The vegetable oil can be any oil suitable as a pharmaceutically acceptable solvent, such as soybean oil, avocado oil, linseed oil, sesame oil, olive oil, rapeseed oil, corn oil, sunflower oil. The most preferred is the use of linseed, corn and rapeseed oil.
Биологически активные соединения, входящие в состав заявляемой фармацевтической композиции, обладают разносторонним фармакологическим действием.Biologically active compounds that are part of the claimed pharmaceutical composition have versatile pharmacological action.
Например, альфа/бета-пинены, бета-мирцен, 1,8-цинеол, сабинен, абиетиновая кислота, гинзенозиды Re, Rb1, Rg2 блокируют сигнальные пути активации ядерного фактора транскрипции NF-kB (Jain Н., Dhingra N., Narsinghani Т., Sharma R. Insights into the mechanism of natural terpenoids as NF-κВ inhibitors: an overview on their anticancer potential. // Exp. Oncol. 2016; 38(3): 158-68; Lee C.W., Song K.H., Kim Y.S., Kim H.P. Ginsenosides from Korean Red Ginseng ameliorate lung inflammatory responses: inhibition of the MAPKs/NF-κB/c-Fos pathways. // J Ginseng Res. 2018;42(4):476-484).For example, alpha / beta-pinenes, beta-myrcene, 1,8-cineole, sabinene, abietic acid, ginsenosides Re, Rb1, Rg2 block the signaling pathways for the activation of the nuclear transcription factor NF-kB (Jain N., Dhingra N., Narsinghani T ., Sharma R. Insights into the mechanism of natural terpenoids as NF-κВ inhibitors: an overview on their anticancer potential. // Exp. Oncol. 2016; 38 (3): 158-68; Lee CW, Song KH, Kim YS , Kim HP Ginsenosides from Korean Red Ginseng ameliorate lung inflammatory responses: inhibition of the MAPKs / NF-κB / c-Fos pathways. // J Ginseng Res. 2018; 42 (4): 476-484).
Альфа-пинен, 1,8-цинеол, гинзенозиды Re, Rb1, Rg2 обладают цитостатическим и проапоптотическим действием наряду с увеличением активности эффекторной каспазы-3 (Hou J., Zhang Y., Zhu Y., Zhou В. et al. α-Pinene Induces Apoptotic Cell Death via Caspase Activation in Human Ovarian Cancer Cells. // Med Sci Monit. 2019; 25:6631-6638; Abdalla A.N., Shaheen U., Abdallah Q., Flamini G. et al. Proapoptotic Activity of Achillea membranacea Essential Oil and Its Major Constituent 1,8-Cineole against A2780 Ovarian Cancer Cells. // Molecules. 2020 Mar 30; 25(7): 1582-1594; Xiao H., Xue Q., Zhang Q. et al. How Ginsenosides Trigger Apoptosis in Human Lung Adenocarcinoma Cells. // Am J Chin Med. 2019; 47(8):1737-1754)Alpha-pinene, 1,8-cineole, ginsenosides Re, Rb1, Rg2 have cytostatic and proapoptotic effects along with an increase in the activity of effector caspase-3 (Hou J., Zhang Y., Zhu Y., Zhou B. et al. Α- Pinene Induces Apoptotic Cell Death via Caspase Activation in Human Ovarian Cancer Cells. // Med Sci Monit. 2019; 25: 6631-6638; Abdalla AN, Shaheen U., Abdallah Q., Flamini G. et al. Proapoptotic Activity of Achillea membranacea Essential Oil and Its Major Constituent 1,8-Cineole against A2780 Ovarian Cancer Cells. // Molecules. 2020 Mar 30; 25 (7): 1582-1594; Xiao H., Xue Q., Zhang Q. et al. How Ginsenosides Trigger Apoptosis in Human Lung Adenocarcinoma Cells. // Am J Chin Med. 2019; 47 (8): 1737-1754)
Флороглюцин проявляет противовоспалительные свойства (Ashour R., Okba M.M., Menze E.T., El Gedaily R.A. Eucalyptus Sideroxylon Bark Anti-inflammatory Potential, Its UPLC-PDA-ESI-qTOF-MS Profiling, and Isolation of a New Phloroglucinol. // J Chromatogr Sci. 2019 Jul 1; 57(6):565-574).Phloroglucinol has anti-inflammatory properties (Ashour R., Okba MM, Menze ET, El Gedaily RA Eucalyptus Sideroxylon Bark Anti-inflammatory Potential, Its UPLC-PDA-ESI-qTOF-MS Profiling, and Isolation of a New Phloroglucinol. // J Chromatogr Sci . 2019 Jul 1; 57 (6): 565-574).
Абиетиновая кислота, альфа/бета-пинены, бета-мирцен, гинзенозиды Re, Rb1, Rg2 обладают высокой антибактериальной активностью (Ghaffari Т., Kafil H.S., Asnaashari S. et al. Chemical Composition and Antimicrobial Activity of Essential Oils from the Aerial Parts of Pinus eldarica Grown in Northwestern Iran. // Molecules. 2019;24(17): 3203-3213; Wang L., Huang Y., Yin G., Wang J. et al. Antimicrobial activities of Asian ginseng, American ginseng, and notoginseng Phytother Res. 2019 Dec 29. doi: 10.1002/ptr.6605).Abietic acid, alpha / beta-pinenes, beta-myrcene, ginsenosides Re, Rb1, Rg2 have high antibacterial activity (Ghaffari T., Kafil HS, Asnaashari S. et al. Chemical Composition and Antimicrobial Activity of Essential Oils from the Aerial Parts of Pinus eldarica Grown in Northwestern Iran. // Molecules. 2019; 24 (17): 3203-3213; Wang L., Huang Y., Yin G., Wang J. et al. Antimicrobial activities of Asian ginseng, American ginseng, and notoginseng Phytother Res. 2019 Dec 29.doi: 10.1002 / ptr.6605).
Усниновая кислота - молекула с разноплановыми биологическими свойствами, включающими антибактериальную, противовирусную, противоопухолевую, антиоксидантную активности (Патент RU №2536873; Лузина О.А., Салахутдинов Н.Ф. Биологическая активность усниновой кислоты и ее производных. Часть 2 Действие усниновой кислоты и ее производных на высшие организмы, молекулярные и физико-химические аспекты биологической активности. // Биоорганическая химия 2016; том 42, №3, с. 276-300).Usnic acid is a molecule with diverse biological properties, including antibacterial, antiviral, antitumor, antioxidant activity (Patent RU No. 2536873; Luzina O.A., Salakhutdinov N.F. Biological activity of usnic acid and its derivatives. Part 2 The action of usnic acid and its derivatives on higher organisms, molecular and physicochemical aspects of biological activity. // Bioorganic chemistry 2016; volume 42, No. 3, pp. 276-300).
Вещества, входящие в формулу изобретения, такие как мирцен, цинеол, гинзенозиды Rb1 и Rg2, проявляют антиоксидантную активность, подавляя накопление малонового диальдегида и повышая уровни глутатиона, каталазы и глутатионпероксидазы (Ciftci О., Ozdemir I., Tanyildizi S., Yildiz S., Oguzturk H. Antioxidative effects of curcumin, β-myrcene and 1,8-cineole against 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced oxidative stress in rats liver. Toxicol Ind Health 2011; 27(5):447-53; Shaukat A., Yang С, Yang Y., Guo Y.F. et al. Ginsenoside Rb 1: A novel therapeutic agent in Staphylococcusaureus-induced Acute Lung Injury with special reference to Oxidative stress and Apoptosis. // Microb Pathog. 2020 12; 143:104109; Chen C.F., Chiou W.F., Zhang J.T. Comparison of the pharmacological effects of Panax ginseng and Panax quinquefolium. // Acta Pharmacol. Sin. 2008 Sep; 29(9): 1103-8).Substances included in the claims, such as myrcene, cineole, ginsenosides Rb1 and Rg2, exhibit antioxidant activity, suppressing the accumulation of malondialdehyde and increasing the levels of glutathione, catalase and glutathione peroxidase (Ciftci O., Ozdemir I., Tanyildizi S., Yildizi , Oguzturk H. Antioxidative effects of curcumin, β-myrcene and 1,8-cineole against 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced oxidative stress in rats liver Toxicol Ind Health 2011; 27 (5): 447-53; Shaukat A., Yang C, Yang Y., Guo YF et al. Ginsenoside Rb 1: A novel therapeutic agent in Staphylococcusaureus-induced Acute Lung Injury with special reference to Oxidative stress and Apoptosis. // Microb Pathog. 2020 12; 143: 104109; Chen CF, Chiou WF, Zhang JT Comparison of the pharmacological effects of Panax ginseng and Panax quinquefolium. // Acta Pharmacol. Sin. 2008 Sep; 29 (9): 1103-8).
Подобранное согласно изобретению сочетание компонентов с иммуномодулирующими, антиоксидантными и цитотоксическими свойствами неожиданно позволило получить уникальный комплекс биологически активных компонентов, обеспечивающих вышеуказанный технический результат.The combination of components with immunomodulatory, antioxidant and cytotoxic properties selected according to the invention unexpectedly made it possible to obtain a unique complex of biologically active components providing the above technical result.
Далее для подтверждения возможности осуществления изобретения представлены примеры составов заявленной фармацевтической композиции, проявляющей цитотоксическое действие в отношении клеток карциномы толстой кишки человека.Further, to confirm the possibility of carrying out the invention, examples of the compositions of the claimed pharmaceutical composition exhibiting a cytotoxic effect on human colon carcinoma cells are presented.
Пример 1.Example 1.
ФК1 - масляный раствор, содержащий бета-мирцен, альфа-пинен, бета-пинен, 1,8-цинеол, сабинен, флороглюцин, гинзенозид Re, гинзенозид Rb1, гинзенозид Rg2, абиетиновую кислоту, усниновую кислоту при следующем содержании компонентов (мг/л):FC1 - oil solution containing beta-myrcene, alpha-pinene, beta-pinene, 1,8-cineole, sabinene, phloroglucinol, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg2, abietic acid, usnic acid at the following content of components (mg / l ):
растительное масло остальноеvegetable oil the rest
Входящие в состав ФК1 вещества в обозначенном выше количестве растворяют в 1 л растительного масла. В качестве растворителя можно применять льняное, кукурузное, рапсовое масло.The substances included in the composition of FC1 in the above amount are dissolved in 1 liter of vegetable oil. Linseed, corn, rapeseed oil can be used as a solvent.
Пример 2.Example 2.
ФК2 - масляный раствор, содержащий бета-мирцен, альфа-пинен, бета-пинен, 1,8-цинеол, сабинен, флороглюцин, гинзенозид Re, гинзенозид Rb1, гинзенозид Rg2, абиетиновую кислоту, усниновую кислоту при следующем содержании компонентов (мг/л):FC2 - oil solution containing beta-myrcene, alpha-pinene, beta-pinene, 1,8-cineole, sabinene, phloroglucinol, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg2, abietic acid, usnic acid at the following content of components (mg / l ):
Входящие в состав ФК2 вещества в обозначенном выше количестве растворяют в 1 л растительного масла. В качестве растворителя можно применять льняное, кукурузное, рапсовое масло.The substances included in the composition of FC2 in the amount indicated above are dissolved in 1 liter of vegetable oil. Linseed, corn, rapeseed oil can be used as a solvent.
Пример 3.Example 3.
ФК3 - масляный раствор, содержащий бета-мирцен, альфа-пинен, бета-пинен, 1,8-цинеол, сабинен, флороглюцин, гинзенозид Re, гинзенозид Rb1, гинзенозид Rg2, абиетиновую кислоту, усниновую кислоту при следующем содержании компонентов (мг/л):FC3 - oil solution containing beta-myrcene, alpha-pinene, beta-pinene, 1,8-cineole, sabinene, phloroglucinol, ginsenoside Re, ginsenoside Rb1, ginsenoside Rg2, abietic acid, usnic acid at the following content of components (mg / l ):
Входящие в состав ФК3 вещества в обозначенном выше количестве растворяют в 1 л растительного масла. В качестве растворителя можно применять льняное, кукурузное, рапсовое масло.The substances included in the composition of FC3 in the above amount are dissolved in 1 liter of vegetable oil. Linseed, corn, rapeseed oil can be used as a solvent.
Пример 4 Изучение фармакологической активности.Example 4 Study of pharmacological activity.
Определение цитотоксической активности фармацевтической активности (ФК1-ФК3) проводили на клеточной линии НСТ 116 карциномы толстой кишки человека колориметрическим методом с использованием МТТ-теста (Mosmann Т. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. // J. Immunol. Methods. 1983. - Vol.65 (1-2): 55-63).The determination of the cytotoxic activity of pharmaceutical activity (FC1-FC3) was carried out on the HCT 116 cell line of human colon carcinoma by the colorimetric method using the MTT test (Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. // J Immunol Methods 1983 Vol. 65 (1-2): 55-63).
Клетки культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, 2 мМ L-глутамин (ПанЭко, Россия) и пенициллин-стрептомицин (ПанЭко, Россия), при 37°С в атмосфере 5% СО2.Cells were cultured in RPMI-1640 medium containing 10% fetal bovine serum, 2 mM L-glutamine (PanEco, Russia) and penicillin-streptomycin (PanEco, Russia) at 37 ° C under 5% CO 2.
Опухолевые клетки засевали в 96-луночные плоскодонные планшеты (Costar, USA). Концентрация клеток в каждой лунке - 1,7×104 кл/мл полной питательной среды RPMI-1640. Через сутки в лунки с клетками добавляли (по 20 мкл/лунку) льняное масло, исходные масляные растворы ФК1-ФК3, а также их разведения с шагом в 2 раза (1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:32). Каждую концентрацию исследовали в триплетах. В контрольные лунки с клетками вносили по 20 мкл среды, которую использовали для приготовления разведений растворов. Планшеты с клетками, обработанными ФК1-ФК3 в разных разведениях, инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 24 часов, после чего добавляли в лунки 20 мкл раствора МТТ[3-(4,5-диметилтиазолин-2)-2,5 дифенилтетразолий бромид] в концентрации 1 мг/мл и инкубировали 4 ч при 37°С в 5% СО2. После образования формазана надосадочную жидкость удаляли, осадок растворяли в 150 мкл диметисульфоксида (ДМСО). Далее планшеты помещали на 10 минут в термостат при температуре 37°С, затем 10 минут встряхивали на шейкере, после чего интенсивность окрашивания среды измеряли на фотометрическом анализаторе иммуноферментных реакций «Multiskan EX (Thermo Labsystems) при λ=540 нм. Величина поглощения прямо пропорциональна количеству выживших клеток.Tumor cells were seeded in 96-well flat-bottomed plates (Costar, USA). The concentration of cells in each well is 1.7 × 10 4 cells / ml of complete culture medium RPMI-1640. A day later, flaxseed oil, stock FC1-FC3 oil solutions, as well as their dilutions with a 2-fold step (1: 2; 1: 4; 1: 8; 1:16; 1:32). Each concentration was examined in triplets. Control wells with cells were filled with 20 μl of medium, which was used to prepare dilutions of solutions. Plates with cells treated FK1-FK3 in various dilutions, incubated at 37 ° C under 5% CO 2 for 24 hours and then added to wells of 20 .mu.l of MTT solution [3- (4,5-dimetiltiazolin-2) - 2.5 diphenyltetrazolium bromide] at a concentration of 1 mg / ml and incubated for 4 h at 37 ° C in 5% CO 2 . After the formation of formazan, the supernatant was removed, the precipitate was dissolved in 150 μl of dimethisulfoxide (DMSO). Then the plates were placed in a thermostat at 37 ° C for 10 minutes, then shaken on a shaker for 10 minutes, after which the color intensity of the medium was measured on a Multiskan EX photometric enzyme immunoassay analyzer (Thermo Labsystems) at λ = 540 nm. The absorption rate is directly proportional to the number of surviving cells.
Цитотоксичность, Ц (в %) определяли по формуле:Cytotoxicity, C (in%) was determined by the formula:
Ц=(1-(Оо/Ок))*100%,Ts = (1- (Oo / Ok)) * 100%,
где Ок - оптическая плотность в контрольных лунках, Оо - оптическая плотность в опытных лунках.where OK is the optical density in the control wells, Oo is the optical density in the experimental wells.
Опухолевые клетки считали чувствительными к исследуемым составам фармацевтической композиции, если количество погибших клеток в культуре составляло не менее 50%.Tumor cells were considered sensitive to the studied compositions of the pharmaceutical composition if the number of dead cells in the culture was at least 50%.
Результаты представлены в таблицах 2-4.The results are shown in Tables 2-4.
В таблице 2 отражены результаты МТТ-теста по определению цитотоксического действия варианта фармкомпозиции ФК1 на клетки линии НСТ-116. В качестве растворителя использовали льняное масло.Table 2 shows the results of the MTT test to determine the cytotoxic effect of the FC1 pharmaceutical composition on HCT-116 cells. Linseed oil was used as a solvent.
В таблице 3 показаны результаты МТТ-теста по определению цитотоксического действия фармкомпозиции ФК2 на клетки линии НСТ-116. В качестве растворителя использовали льняное масло.Table 3 shows the results of the MTT test to determine the cytotoxic effect of the FC2 pharmaceutical composition on HCT-116 cells. Linseed oil was used as a solvent.
В таблице 4 представлены результаты МТТ-теста по определению цитотоксического действия фармкомпозиции ФК3 на клетки линии НСТ-116. В качестве растворителя использовали льняное масло.Table 4 shows the results of the MTT test to determine the cytotoxic effect of the FC3 pharmaceutical composition on HCT-116 cells. Linseed oil was used as a solvent.
Как следует из результатов, клетки линии НСТ 116 оказались чувствительными к цитотоксическому воздействию предлагаемых примеров ФК. ФК1-ФК3 как в исходном виде, так и в разведениях от 1:2 до 1:16 проявили высокое цитотоксическое действие в отношении клеток линии НСТ 116. Их гибель составила от 71 до 84,3%. Наибольшую цитотоксичность ФК1-ФК3 оказали в разведении 1:16 (80,9±3,4; 81,9±4,0; 84,3±7,5% соответственно). При большем разведении цитотоксическая активность фармкомпозиций снижалась (20,6±7,7; 21,2±5,2; 24,8±3,2% соответственно). У льняного масла цитотоксичность не была обнаружена.As follows from the results, HCT 116 cells appeared to be sensitive to the cytotoxic effects of the proposed examples of PK. FC1-FC3 both in the original form and in dilutions from 1: 2 to 1:16 showed a high cytotoxic effect against HCT 116 cells. Their death ranged from 71 to 84.3%. The highest cytotoxicity of FC1-FC3 was found at a dilution of 1:16 (80.9 ± 3.4; 81.9 ± 4.0; 84.3 ± 7.5%, respectively). At higher dilutions, the cytotoxic activity of the pharmaceutical compositions decreased (20.6 ± 7.7; 21.2 ± 5.2; 24.8 ± 3.2%, respectively). No cytotoxicity was found in flaxseed oil.
Таким образом, предлагаемые варианты ФК как в исходном виде, так и в разведениях от 1:2 до 1:16 проявили высокую цитотоксичность по отношению клеток линии НСТ 116.Thus, the proposed FC variants both in their original form and in dilutions from 1: 2 to 1:16 showed high cytotoxicity towards HCT 116 cells.
Определение механизма клеточной гибели, индуцируемой ФК, проводили на примере ФК3 в разведении 1:16, где показана наибольшая цитотоксичность в отношении опухолевых клеток.The determination of the mechanism of cell death induced by PK was carried out using the example of PK3 at a dilution of 1:16, which showed the greatest cytotoxicity against tumor cells.
Вид клеточной гибели (апоптоз/некроз), т.е. выявление апоптических или некротических клеток, а также количество живых/погибших клеток (в %) определяли методом двойного окрашивания Аннексином V-FITC (AnnV-FITC) и пропидием йодида (PI).The type of cell death (apoptosis / necrosis), i.e. detection of apoptotic or necrotic cells, as well as the number of living / dead cells (in%) was determined by the method of double staining with Annexin V-FITC (AnnV-FITC) and propidium iodide (PI).
Клетки линии НСТ 116 вносили в 6-луночные планшеты в количестве 200 тысяч/лунка в 4 мл полной среды RPMI-1640 с 10% фетальной бычьей сыворотки. Через сутки в лунки с клетками добавляли ФК3 в цитотоксичной концентрации, ранее определенной в МТТ- тесте (разведение 1:16). В контрольных лунках клетки инкубировали без препаратов. Через 24 ч инкубации клетки отмывали в 500 мкл раствора Версена. Для оценки клеточной гибели использовали FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I (BD, 556547). Клетки помещали в пробирки для проточной цитометрии в 100 мкл аннексин-связывающего буфера, добавляли по 5 мкл AnnV-FITC и 5 мкл PL Образцы инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 минут. Далее к пробам добавляли 400 мкл аннексин-связывающего буфера и проводили анализ на проточном цитомфлуориметре FACSCanto II (Becton Dickinson).HCT 116 cells were plated into 6-well plates at 200 thousand / well in 4 ml of complete RPMI-1640 medium with 10% fetal bovine serum. One day later, FC3 was added to the wells with cells at the cytotoxic concentration previously determined in the MTT test (1:16 dilution). In control wells, cells were incubated without preparations. After 24 h of incubation, the cells were washed in 500 μl of Versene's solution. FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I (BD, 556547) was used to assess cell death. Cells were placed in flow cytometry tubes in 100 μl of annexin-binding buffer, 5 μl of AnnV-FITC and 5 μl of PL were added. Samples were incubated in the dark at room temperature for 15 minutes. Next, 400 μL of annexin-binding buffer was added to the samples and analyzed on a FACSCanto II flow cytomofluorometer (Becton Dickinson).
Окрашенные по AnnV-FITC и PI клетки оценивали по следующим критериям: живые клетки, отрицательные по AnnV-FITC и PI (AnnV-FITC-/PI-), ранние апоптические клетки, положительные по AnnV-FITC и отрицательные по PI (AnnV-FITC+/PI-), поздние апоптические клетки, положительные по AnnV-FITC и PI (AnnV-FITC+/PI+) и некротические клетки, отрицательные по AnnV-FITC и положительные по PI (AnnV-FITC-/PI+).AnnV-FITC and PI stained cells were evaluated according to the following criteria: live cells negative for AnnV-FITC and PI (AnnV-FITC - / PI - ), early apoptotic cells positive for AnnV-FITC and negative for PI (AnnV-FITC + / PI - ), late apoptotic cells positive for AnnV-FITC and PI (AnnV-FITC + / PI + ) and necrotic cells negative for AnnV-FITC and positive for PI (AnnV-FITC - / PI + ).
Результаты двойного окрашивания клеток линии НСТ 116 AnnV-FITC, и PI представлены на фигуре 1 и в таблице 5. На фигуре 1 показаны результаты двойного окрашивание клеток карциномы толстой кишки человека линии НСТ 116 с применением AnnV-FITC, и PI (А - контроль (интактные клетки); Б - клетки, обработанные ФК3 в разведении 1:16).The results of double staining of HCT 116 cells with AnnV-FITC, and PI are presented in Figure 1 and Table 5. Figure 1 shows the results of double staining of HCT 116 cells of human colon carcinoma line using AnnV-FITC, and PI (A - control ( intact cells); B - cells treated with FC3 at a 1:16 dilution).
В таблице 5 представлены результаты влияния ФК3 на гибель клеток карциномы толстой кишки человека линии НСТ 116. Из таблицы 5 видно, что при воздействии ФК3 в разведении 1:16 выявлено 27% живых опухолевых клеток, что согласуется с результатами МТТ-теста: ФК3 в разведении 1:16 вызывал гибель более 80% клеток линии НСТ 116. Вместе с тем, определено 47,6% клеток на стадии раннего апоптоза и 24,3% клеток на стадии позднего апоптоза. Иными словами, около 72% опухолевых клеток обнаружено на стадии апоптоза. Некротический механизм гибели наблюдали у 1,1% опухолевых клеток.Table 5 shows the results of the effect of FC3 on the death of human colon carcinoma cells of the HCT 116 line. Table 5 shows that when exposed to FC3 at a dilution of 1:16, 27% of living tumor cells were detected, which is consistent with the results of the MTT test: FC3 at a dilution 1:16 caused the death of more than 80% of HCT 116 cells. At the same time, 47.6% of cells at the stage of early apoptosis and 24.3% of cells at the stage of late apoptosis were identified. In other words, about 72% of tumor cells are found at the stage of apoptosis. The necrotic mechanism of death was observed in 1.1% of tumor cells.
Для определения активации каспазы-3, эффекторного фермента, участвующего в апоптотической трансформации клетки, использовали FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit (BD Pharmingen).The FITC Active Caspase-3 Apoptosis Kit (BD Pharmingen) was used to determine the activation of caspase-3, an effector enzyme involved in apoptotic cell transformation.
Клетки линии НСТ 116 вносили в 6-луночные планшеты в количестве 200 тысяч/лунку в 4 мл полной среды RPMI-1640 с 10% фетальной бычьей сыворотки. Через сутки в лунки с клетками добавляли ФК3 в разведении 1:16. В контрольных лунках клетки инкубировали без препаратов. Через 24 ч инкубации клетки отмывали в 500 мкл раствора Версена. Затем клетки дважды отмывали холодным PBS, ресуспенидровали в холодном Cytofix/Cytoperm буфере в концентрации 1*106 клеток/0,5 мл буфера. В течение 20 минут проводили инкубацию на льду. Затем отмывали от Cytofix/Cytoperm дважды в Perm/wash буфере (0,5 мл буфера на 1*106 клеток) при комнатной температуре. Разводили антитела к активной каспазе-3 в Perm/wash буфере (на одну пробирку 20 мкл антител в 100 мкл буфера). Клетки ресуспендировали в полученном растворе с антителами и инкубировали 30 минут при комнатной температуре в темноте. Далее отмывали каждый образец в 1 мл Perm/wash буфера, ресуспендировали в 0,5 мл Perm/wash буфере и анализировали на проточном питометре FACS Canto II (Becton Dickinson).HCT 116 cells were plated into 6-well plates at 200 thousand / well in 4 ml of complete RPMI-1640 medium with 10% fetal bovine serum. One day later, FC3 was added to the wells with cells at a 1:16 dilution. In control wells, cells were incubated without preparations. After 24 h of incubation, the cells were washed in 500 μl of Versene's solution. Then the cells were washed twice with cold PBS, resuspended in cold Cytofix / Cytoperm buffer at a concentration of 1 * 10 6 cells / 0.5 ml of buffer. Incubation was carried out on ice for 20 minutes. Then they were washed from Cytofix / Cytoperm twice in Perm / wash buffer (0.5 ml of buffer for 1 * 10 6 cells) at room temperature. Antibodies to active caspase-3 were diluted in Perm / wash buffer (for one tube 20 μl of antibodies in 100 μl of buffer). The cells were resuspended in the resulting solution with antibodies and incubated for 30 minutes at room temperature in the dark. Then each sample was washed in 1 ml Perm / wash buffer, resuspended in 0.5 ml Perm / wash buffer and analyzed on a FACS Canto II flow-through pyrometer (Becton Dickinson).
В таблице 6 приведены результаты воздействия ФК3 на активацию каспазы-3. Фигура 2 иллюстрирует активацию каспазы-3 под действием ФК3 (А - контроль, интактные клетки; Б - клетки, обработанные ФК3 в разведении 1:16). Исследование показало, что фармкомпозиции (на примере а ФК3) активируют проапоптический фермент, эффекторную каспазу-3, что полагает гибель клеток по типу программированной смерти (механизм апоптоза).Table 6 shows the results of the effect of FC3 on the activation of caspase-3. Figure 2 illustrates the activation of caspase-3 by FC3 (A - control, intact cells; B - cells treated with FC3 at a 1:16 dilution). The study showed that pharmaceutical compositions (for example, a FC3) activate a pro-apoptotic enzyme, effector caspase-3, which suggests cell death as a programmed death (apoptosis mechanism).
Таким образом, полученные данные свидетельствует о способности предлагаемых вариантов ФК оказывать высокую цитотоксичность в отношении клеток карциномы толстой кишки человека, вызывая гибель опухолевых клеток по механизму апоптоза.Thus, the data obtained indicate the ability of the proposed FC variants to provide high cytotoxicity against human colon carcinoma cells, causing the death of tumor cells by the apoptosis mechanism.
Claims (2)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020121242A RU2747147C1 (en) | 2020-06-22 | 2020-06-22 | Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxicity towards human colon carcinoma cells |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020121242A RU2747147C1 (en) | 2020-06-22 | 2020-06-22 | Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxicity towards human colon carcinoma cells |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2747147C1 true RU2747147C1 (en) | 2021-04-28 |
Family
ID=75850792
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020121242A RU2747147C1 (en) | 2020-06-22 | 2020-06-22 | Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxicity towards human colon carcinoma cells |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2747147C1 (en) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6395279B1 (en) * | 1996-03-13 | 2002-05-28 | Archer Daniels Midland Company | Method of preparing and using isoflavones for the treatment of cancer |
RU2310460C2 (en) * | 2002-04-10 | 2007-11-20 | Корея Микробиолоджикал Лабораторис, Лтд. | Sodium arsenite-containing pharmaceutical composition for treatment of malignant tumor |
EA017659B1 (en) * | 2008-03-14 | 2013-02-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Инитиум-Фарм" | Antitumoral terpenoid pharmaceutical composition exhibiting angiogenesis-inhibiting action |
RU2477142C1 (en) * | 2012-01-30 | 2013-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Валекс" (ООО "Валекс") | Pharmaceutical composition exhibiting antimutagenic action (versions) |
-
2020
- 2020-06-22 RU RU2020121242A patent/RU2747147C1/en active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6395279B1 (en) * | 1996-03-13 | 2002-05-28 | Archer Daniels Midland Company | Method of preparing and using isoflavones for the treatment of cancer |
RU2310460C2 (en) * | 2002-04-10 | 2007-11-20 | Корея Микробиолоджикал Лабораторис, Лтд. | Sodium arsenite-containing pharmaceutical composition for treatment of malignant tumor |
EA017659B1 (en) * | 2008-03-14 | 2013-02-28 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Инитиум-Фарм" | Antitumoral terpenoid pharmaceutical composition exhibiting angiogenesis-inhibiting action |
RU2477142C1 (en) * | 2012-01-30 | 2013-03-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Валекс" (ООО "Валекс") | Pharmaceutical composition exhibiting antimutagenic action (versions) |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
http://produkt-pitaniya.ru/masla-zhiry-rastitelnoe-maslo, found on the Internet, Wayback Internet Archive Machine, 17.04.2015. * |
http://produkt-pitaniya.ru/masla-zhiry-rastitelnoe-maslo, найдено в интернете, Wayback Internet Archive Machine, 17.04.2015. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Benarba et al. | Colorectal cancer and medicinal plants: Principle findings from recent studies | |
Goyal et al. | Investigating therapeutic potential of Trigonella foenum-graecum L. as our defense mechanism against several human diseases | |
Ochwang’i et al. | Medicinal plants used in treatment and management of cancer in Kakamega County, Kenya | |
Roger et al. | Phytochemical screening and antibacterial activity of medicinal plants used to treat typhoid fever in Bamboutos division, West Cameroon | |
Nurraihana et al. | Phytochemistry, pharmacology and toxicology properties of Strobilanthes crispus | |
US20070248693A1 (en) | Nutraceutical composition and method of use for treatment / prevention of cancer | |
Hussain et al. | The genus Pluchea: Phytochemistry, traditional uses, and biological activities | |
Ganaie | Review of the active principles of medicinal and aromatic plants and their disease fighting properties | |
Mir et al. | Recent advances in metabolites from medicinal plants in cancer prevention and treatment | |
Ibrahim et al. | Pharmacognostic and phytochemical analysis of Commelina benghalensis L. | |
Boggula et al. | Phytochemical analysis and evaluation of in vitro anti oxidant activity of Punica granatum leaves | |
Chaibi et al. | Chemical study and biological activities of various extracts from Lawsonia inermis (Henna) seeds | |
Kimani et al. | In vitro anti-proliferative activity of selected plant extracts against cervical and prostate cancer cell lines | |
RU2747147C1 (en) | Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxicity towards human colon carcinoma cells | |
Goyal et al. | The Role of Phytoconstitutents in Health Care: Biocompounds in Medicinal Plants | |
Radovanovic | Evaluation of potential cytotoxic effects of herbal extracts | |
Bok et al. | Comprehensive Review of Cratoxylum Genus: Ethnomedical Uses, Phytochemistry, and Pharmacological Properties. | |
Safinejad et al. | Comparative study on the toxicity of mentha piperita l. and artemisia dracunculus l. hydroalcoholic extracts on human breast cancer cell lines | |
Ullah et al. | Role of phytochemicals in regulation of cancer cells: A comprehensive literature review | |
Zambari et al. | A comparative study of anti-inflammatory properties and activities of green and red Christia vespertilionis leaves | |
Obafemi et al. | A review of plants with anticancer properties | |
Harikrishnan et al. | Potential of Herbal Extracts and Bioactive Compounds for Human Healthcare | |
Moga | Antioxidant and antiproliferative activities of plant derived extracts against cervical and prostate cancer cell lines | |
Wijaya et al. | A review of phytochemical properties and therapeutic activities of Glebionis coronaria | |
RU2693378C1 (en) | Pharmaceutical composition exhibiting cytotoxic effect on human bladder cancer cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TC4A | Change in inventorship |
Effective date: 20210609 |