RU2731071C1 - Method for disaggregation of bifidus bacteria culture fluid - Google Patents
Method for disaggregation of bifidus bacteria culture fluid Download PDFInfo
- Publication number
- RU2731071C1 RU2731071C1 RU2019133522A RU2019133522A RU2731071C1 RU 2731071 C1 RU2731071 C1 RU 2731071C1 RU 2019133522 A RU2019133522 A RU 2019133522A RU 2019133522 A RU2019133522 A RU 2019133522A RU 2731071 C1 RU2731071 C1 RU 2731071C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- disaggregation
- bifidobacteria
- culture fluid
- diameter
- cells
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/42—Apparatus for the treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и фармацевтической промышленности и касается способа дезагрегации культуральной жидкости бифидобактерий после выращивания перед приготовлением готовой формы препарата.The invention relates to biotechnology and the pharmaceutical industry and relates to a method for disaggregating the culture liquid of bifidobacteria after growing before preparing the finished form of the drug.
Известен (1) способ обработки 18-часовых культур штаммов бифидобактерий B.bifidum 791 и B.longum 379 после последовательного трехкратного пассирования на гидролизатно-молочной среде с целью снижения вязкости в микробных культурах бифидобактерий за счет разрушения межклеточного матрикса в клеточных ассоциациях путем ферментативного гидролиза ферментами мацеробациллином Г20х или целловиридином, обладающими полисахаридгидролизующим действием. Авторами установлено, что целловиридин не оказывал действия ни на гетерополисахарид капсул, ни на декапсулированные клетки, ни на их количество в ростовой среде. В то же время обработка мацеробациллином сопровождалась снижением вязкости культуральной жидкости и увеличением числа жизнеспособных бактерий на порядок.Known (1) a method of processing 18-hour cultures of strains of bifidobacteria B. bifidum 791 and B. longum 379 after successive three-fold passaging on a hydrolyzed milk medium in order to reduce the viscosity in microbial cultures of bifidobacteria due to the destruction of the extracellular matrix in cell associations by enzymatic hydrolysis macerobacillin G20x or celloviridin, which have a polysaccharide hydrolyzing effect. The authors found that celloviridine had no effect on either the heteropolysaccharide of the capsules, or on the decapsulated cells, or on their number in the growth medium. At the same time, treatment with macerobacillin was accompanied by a decrease in the viscosity of the culture liquid and an increase in the number of viable bacteria by an order of magnitude.
Основным недостатком данного способа является присутствие остаточного количества не прореагировавших ферментов в культуральной жидкости, что крайне нежелательно при приготовлении лекарственных форм биопрепаратов.The main disadvantage of this method is the presence of a residual amount of unreacted enzymes in the culture liquid, which is extremely undesirable in the preparation of dosage forms of biological products.
Из этого же источника (1) известен способ обработки с той же целью культур штаммов бифидобактерий B.bifidum 791 и B.longum 379 после последовательного трехкратного пассирования на гидролизатно-молочной среде ультразвуком с частотой 10 Вт/см в течение 20 мин при температуре 37°С. Такое воздействие приводило к снижению вязкости культуральной жидкости (КЖ) на 28% и увеличению числа колониеобразующих единиц (КОЕ) почти на один порядок, не оказывая на декапсулированные клетки бифидобактерий видимого эффекта.From the same source (1), there is a known method of processing for the same purpose of cultures of strains of bifidobacteria B. bifidum 791 and B. longum 379 after successive three passages in a hydrolyzed milk medium with ultrasound at a frequency of 10 W / cm for 20 min at a temperature of 37 ° FROM. This effect led to a decrease in the viscosity of the culture fluid (CL) by 28% and an increase in the number of colony-forming units (CFU) by almost one order of magnitude, without having a visible effect on the decapsulated cells of bifidobacteria.
Данный способ сложно реализовать в промышленных условиях. Кроме того, авторами не приведены данные по выживаемости бифидобактерий после ультразвукового воздействия при кратковременном хранении культуральной жидкости перед дальнейшей переработкой.This method is difficult to implement in an industrial environment. In addition, the authors did not provide data on the survival of bifidobacteria after ultrasound exposure during short-term storage of the culture fluid before further processing.
В работе (2), в которой авторы исследовали возможность получения устойчивых суспензий Bacillus thuringiensis sp.kurstaki шт. Z-52 в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором посредством воздействия на культуральную жидкость ферромагнитных тел (ФМТ) цилиндрической формы, было показано, что при диспергировании модельной культуры В. subtilis ФМТ диаметром 5 мм и длиной 10 мм выживаемость клеток остается на уровне контроля, но устойчивой суспензии не образуется. При диспергировании той же КЖ, но с добавками минерального масла, ФМТ диаметром 0,15 мм и длиной 5 мм происходит инактивация микроорганизмов, а в результате диспергирования ФМТ диаметром 0,5 мм и длиной 10 мм в течение 5 мин образование устойчивой суспензии сопровождается повышением выживаемости бацилл в 1,05-1,31 раза, что возможно только за счет дезагрегации клеток.In work (2), in which the authors investigated the possibility of obtaining stable suspensions of Bacillus thuringiensis sp.kurstaki pcs. Z-52 in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor by exposing the culture fluid to cylindrical ferromagnetic bodies (FMT), it was shown that when a model culture of B. subtilis FMT with a diameter of 5 mm and a length of 10 mm is dispersed, the cell survival remains at the control level, but no stable suspension is formed. When the same QL is dispersed, but with the addition of mineral oil, FMT with a diameter of 0.15 mm and a length of 5 mm, inactivation of microorganisms occurs, and as a result of dispersion of FMT with a diameter of 0.5 mm and a length of 10 mm for 5 min, the formation of a stable suspension is accompanied by an increase in survival bacilli by 1.05-1.31 times, which is possible only due to cell disaggregation.
Этот способ обработки является наиболее близким по технической сущности к заявляемому. К сожалению, он обеспечивает недостаточную степень повышения концентрации микроорганизмов в ростовой среде. К тому же авторы не приводят данных по выживаемости микроорганизмов при краткосрочном промежуточном хранении.This processing method is the closest in technical essence to the claimed one. Unfortunately, it provides an insufficient increase in the concentration of microorganisms in the growth medium. In addition, the authors do not provide data on the survival of microorganisms during short-term intermediate storage.
Общим признаком заявляемого изобретения и прототипа является дезагрегация культуральной жидкости микроорганизмов в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором посредством воздействия ферромагнитных тел.A common feature of the claimed invention and the prototype is the disaggregation of the culture fluid of microorganisms in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor through the action of ferromagnetic bodies.
Технической проблемой, решаемой при создании изобретения, является разработка способа дезагрегации культуральной жидкости бифидобактерий после культивирования, позволяющего увеличить концентрацию микробных клеток в ростовой среде, а также повысить выживаемость бактерий в процессе краткосрочного промежуточного хранения культуральной жидкости перед приготовлением готовой формы препарата.The technical problem to be solved during the creation of the invention is the development of a method for disaggregating the culture liquid of bifidobacteria after cultivation, which makes it possible to increase the concentration of microbial cells in the growth medium, as well as to increase the survival rate of bacteria during short-term intermediate storage of the culture liquid before preparing the finished form of the drug.
Техническим результатом настоящего изобретения является тот факт, что заявленный способ дезагрегации культуральной жидкости бифидобактерий после культивирования позволяет повысить выживаемость бактериальных клеток в ростовой среде в конце краткосрочного промежуточного хранения втрое по сравнению с прототипом, а культуральная жидкость, полученная при реализации заявленного способа, обладает в 3 раза большей концентрацией бактериальных клеток по сравнению с препаратами, приготовленными в соответствии с прототипом.The technical result of the present invention is the fact that the claimed method for disaggregation of the culture fluid of bifidobacteria after cultivation makes it possible to increase the survival of bacterial cells in the growth medium at the end of short-term intermediate storage three times compared to the prototype, and the culture fluid obtained by implementing the claimed method has 3 times a higher concentration of bacterial cells in comparison with preparations prepared in accordance with the prototype.
Сущность изобретения заключается в том, что дезагрегацию культуральной жидкости бифидобактерий осуществляют в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором посредством воздействия ферромагнитных тел диаметром 0,15 мм в течение 3-5 мин.The essence of the invention lies in the fact that the disaggregation of the culture fluid of bifidobacteria is carried out in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor by the action of ferromagnetic bodies with a diameter of 0.15 mm for 3-5 minutes.
Из данных литературы (3) известно, что некоторые штаммы бифидобактерий в поздней экспоненциальной и стационарной фазах роста обладают способностью к почкованию и дихотомическому 2-4-6-8-латеральному ветвлению. Происходит мультисептация ветвящихся филаментов, блокирование отделения образовавшихся клеток, в результате чего формируются конгломераты, которые могут включать десятки микробных тел. Мицелиальные конгломераты образуются при помощи межклеточных связей преимущественно за счет слияния клеточных стенок, посредством капсулярных структур, в том числе синтезируемого клеткой органического макромолекулярного матрикса. Образование клеточных ассоциаций в культуральной жидкости сопровождается истощением питательных веществ, накоплением метаболических «ядов», увеличением активной кислотности и т.д.It is known from the literature (3) that some strains of bifidobacteria in the late exponential and stationary phases of growth have the ability to bud and dichotomous 2-4-6-8 lateral branching. There is a multiseptation of branching filaments, blocking the separation of the formed cells, as a result of which conglomerates are formed, which can include dozens of microbial bodies. Mycelial conglomerates are formed using intercellular connections mainly due to the fusion of cell walls, through capsular structures, including the organic macromolecular matrix synthesized by the cell. The formation of cell associations in the culture fluid is accompanied by depletion of nutrients, accumulation of metabolic "poisons", an increase in active acidity, etc.
Нашими собственными исследованиями установлено, что наибольшая концентрация бифидобактерий в среде культивирования в процессе дезагрегации ее в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором достигается в течение 3-5 мин ферромагнитными телами цилиндрической формы диаметром 0,15 мм.Our own research has established that the highest concentration of bifidobacteria in the cultivation medium during its disaggregation in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor is achieved within 3-5 minutes by cylindrical ferromagnetic bodies with a diameter of 0.15 mm.
Результаты проведенных исследований показывают, что дезагрегация в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором суспензий бифидобактерий после культивирования обеспечивает два преимущества. Первое - за счет лучшей выживаемости клеток бифидобактерий в процессе краткосрочного хранения при низкой положительной температуре повышается гибкость всей технологии приготовления сухих препаратов за счет исключения необходимости немедленного сублимационного высушивания выращенных микроорганизмов. Второе - вследствие существенного увеличения (до 20 раз) содержания в культуральной жидкости жизнеспособных клеток повышается экономическая эффективность производства бифидосодержащих пробиотических и пребиотических сухих препаратов, т.к. пропорционально увеличивается количество доз препарата, которое может быть получено из единицы веса (г, кг) высушенной биомассы требуемого штамма бифидобактерий.The results of the conducted studies show that disaggregation in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor of bifidobacterial suspensions after cultivation provides two advantages. First, due to the better survival of bifidobacterial cells during short-term storage at a low positive temperature, the flexibility of the entire technology for preparing dry preparations increases by eliminating the need for immediate freeze drying of grown microorganisms. Second, due to a significant increase (up to 20 times) in the content of viable cells in the culture liquid, the economic efficiency of the production of bifid-containing probiotic and prebiotic dry preparations increases, since proportionally increases the number of doses of the drug, which can be obtained from the unit of weight (g, kg) of the dried biomass of the required strain of bifidobacteria.
Согласно изобретению, увеличение концентрации микробных клеток в ростовой среде, а также повышение выживаемости бактерий в процессе краткосрочного промежуточного хранения культуральной жидкости обеспечивается тем, что дезагрегацию осуществляют в течение 3-5 мин ферромагнитными телами диаметром 0,15 мм.According to the invention, an increase in the concentration of microbial cells in the growth medium, as well as an increase in the survival of bacteria in the process of short-term intermediate storage of the culture liquid is ensured by the fact that the disaggregation is carried out for 3-5 minutes by ferromagnetic bodies with a diameter of 0.15 mm.
В серии экспериментов по дезагрегации межклеточного матрикса КЖ бифидобактерий использовали лабораторный электромагнитный аппарат с плоским двухсторонним индуктором, аналогичный описанному в (2). Объем рабочей камеры аппарата составлял 220 мл, а обрабатываемой суспензии - 100 мл. Загрузка ФМТ в рабочую камеру не превышала 10 г. Обработку осуществляли ФМТ цилиндрической формы диаметром 0,15 мм и длиной 4,5 мм. В первом случае обрабатывали КЖ 3-й генерации В. bifidum 791, выращенной на тиогликолевой (ТГ) среде (таблица 1), а во втором - КЖ В. adolescentis МС-42, выращенной на казеиново-дрожжевой (КД-5) среде (таблица 2).In a series of experiments on the disaggregation of the intercellular matrix of the QOL of bifidobacteria, we used a laboratory electromagnetic apparatus with a flat two-sided inductor, similar to that described in (2). The volume of the working chamber of the apparatus was 220 ml, and the volume of the processed suspension was 100 ml. The loading of the FMT into the working chamber did not exceed 10 g. The processing was carried out by the FMT of a cylindrical shape, 0.15 mm in diameter and 4.5 mm in length. In the first case, the CL of the third generation of B. bifidum 791 grown on thioglycolic (TG) medium (Table 1) was treated, and in the second, the CL of B. adolescentis MS-42 grown on casein-yeast (KD-5) medium ( table 2).
В прототипе максимальная продолжительность воздействия на КЖ микроорганизмов составляла 5 мин, что было вызвано спецификой постановки эксперимента. Мы же не были связаны подобными ограничениями, поэтому была исследована продолжительность процесса до 10 мин (таблица 2). Было показано, что максимальная концентрация бифидобактерий в КЖ достигается к 5 минуте процесса (таблица 1). При этом содержание бифидобактерий, по сравнению с КЖ до дезагрегации, увеличивается в 20 раз.In the prototype, the maximum duration of exposure to QOL of microorganisms was 5 minutes, which was caused by the specifics of the experiment. We were not bound by such restrictions, therefore, the duration of the process was investigated up to 10 minutes (table 2). It was shown that the maximum concentration of bifidobacteria in the CL is reached by the 5th minute of the process (Table 1). At the same time, the content of bifidobacteria, in comparison with QOL before disaggregation, increases 20 times.
Данные таблицы 2 свидетельствуют о том, что дезагрегация в электромагнитном аппарате КЖ более 5 мин не приводит к увеличению концентрации бифидобактерий. Следовательно, более продолжительная обработка КЖ не целесообразна.The data in Table 2 indicate that disaggregation in the electromagnetic apparatus of QOL for more than 5 minutes does not lead to an increase in the concentration of bifidobacteria. Therefore, a longer QOL treatment is not advisable.
Другие устройства, предназначенные для обработки жидких сред, также позволяют осуществлять разрушение агрегатов бифидобактерий в КЖ, однако повышение концентрации микробов в ростовой среде происходит в меньшей степени, чем в заявляемом способе. О чем свидетельствуют данные таблицы 3, в которой представлены результаты по дезагрегации КЖ культуры В. adolescentis МС-42, выращенной на КД-5, в лабораторном гомогенизаторе MLW при 1500 об/мин. Объем обрабатываемой суспензии 100 мл.Other devices designed for the processing of liquid media also allow the destruction of aggregates of bifidobacteria in the QL, however, the increase in the concentration of microbes in the growth medium occurs to a lesser extent than in the claimed method. This is evidenced by the data in Table 3, which presents the results on the QOL disaggregation of the culture of B. adolescentis MS-42 grown on KD-5 in a laboratory MLW homogenizer at 1500 rpm. The volume of the processed suspension is 100 ml.
В данном устройстве максимальная концентрация клеток достигается к 1-2 минуте процесса, и к третьей минуте прирост клеток идет на убыль. То есть, дальнейшая обработка на таких оборотах ротора уже не приводит к увеличению количества бифидобактерий в КЖ. Поэтому увеличение времени дезагрегации для достижения желаемого результата не имеет смысла, а повышение оборотов ротора для интенсификации процесса невозможно из-за обильного пенообразования.In this device, the maximum concentration of cells is reached by 1-2 minutes of the process, and by the third minute, the growth of cells decreases. That is, further processing at such rotor speeds no longer leads to an increase in the number of bifidobacteria in the CL. Therefore, an increase in the disaggregation time to achieve the desired result does not make sense, and an increase in rotor speed to intensify the process is impossible due to abundant foaming.
Из работы (4) известно, что при обработке различных материалов в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором на результат процесса помимо его продолжительности существенное влияние оказывает диаметр (d, мм) используемых ФМТ цилиндрической формы, и в меньшей степени их длина (1, мм).It is known from (4) that when processing various materials in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor, the process result, in addition to its duration, is significantly influenced by the diameter (d, mm) of the cylindrical FMT used, and to a lesser extent by their length (1, mm) ...
Авторами были проведены исследования по влиянию диаметра ферромагнитных тел на результат процесса (таблица 4). Обработке в электромагнитном аппарате подвергали КЖ культуры В. adolescentis МС-42 третьей генерации, выращенной на ТГ среде. Объем рабочей камеры аппарата - 220 мл, а обрабатываемой суспензии - 100 мл. Загрузка ФМТ в рабочую камеру - 10 г. Продолжительность обработки - 3 мин.The authors carried out research on the influence of the diameter of ferromagnetic bodies on the result of the process (table 4). The QOL culture of B. adolescentis MC-42 of the third generation, grown on a TG medium, was treated in an electromagnetic apparatus. The volume of the working chamber of the apparatus is 220 ml, and the volume of the processed suspension is 100 ml. Loading FMT into the working chamber - 10 g. Duration of processing - 3 min.
Как следует из анализа данных табл. 4, ФМТ диаметром 0,15; 0,25 и 0,5 мм обеспечивают повышение количества бактерий в результате дезагрегации КЖ. ФМТ d=0,75 мм не вызывают разрушения межклеточного матрикса, поэтому концентрация клеток в ростовой среде остается без изменений (или прирост клеток равен их инактивации), а ФМТ d=1,0 мм вызывают инактивацию бифидобактерий при такой продолжительности процесса дезагрегации. Кроме того, ФМТ диаметром 0,15 обеспечивают лучшую выживаемость дезагрегированных клеток в КЖ на 8 сутки хранения при температуре (6±2)°С. Следовательно, ФМТ диаметром 0,15 мм вызывают меньшее количество сублетальных повреждений клеток при обработке в электромагнитном аппарате при указанной продолжительности процесса.As follows from the analysis of the data table. 4, FMT with a diameter of 0.15; 0.25 and 0.5 mm provide an increase in the number of bacteria as a result of QOL disaggregation. FMT d = 0.75 mm does not cause destruction of the intercellular matrix, therefore, the concentration of cells in the growth medium remains unchanged (or the growth of cells is equal to their inactivation), and FMT d = 1.0 mm cause inactivation of bifidobacteria with such a duration of the disaggregation process. In addition, FMT with a diameter of 0.15 provide the best survival of disaggregated cells in the CL on 8 days of storage at a temperature of (6 ± 2) ° C. Consequently, FMT with a diameter of 0.15 mm cause less sublethal damage to cells when processed in an electromagnetic device for the specified duration of the process.
Таким образом, на основании приведенных здесь результатов исследований по дезагрегации КЖ бифидобактерий в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором установлено:Thus, on the basis of the results of studies presented here on the disaggregation of QOL of bifidobacteria in an electromagnetic apparatus with a flat two-sided inductor, it was established:
1. максимальная концентрация бифидобактерий в результате дезагрегации КЖ достигается при продолжительности процесса 3-5 мин;1.the maximum concentration of bifidobacteria as a result of QOL disaggregation is achieved with a process duration of 3-5 minutes;
2. наибольшее содержание клеток в КЖ обеспечивает, при прочих равных условиях, использование ФМТ диаметром 0,15 - 0,25 мм;2. The highest content of cells in the QL is provided, other things being equal, by the use of FMT with a diameter of 0.15 - 0.25 mm;
3. ФМТ диаметром 0,15 мм способствуют лучшей выживаемости дезагрегированных клеток в процессе краткосрочного хранения при низких положительных температурах.3. PMT with a diameter of 0.15 mm contribute to better survival of disaggregated cells during short-term storage at low positive temperatures.
Следует сразу отметить, что использование ФМТ меньшего диаметра, чем 0,15 мм, в электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором непрерывного действия практически не осуществимо, так как нет эффективного технически реализуемого решения удержания таких ФМТ в зоне переработки рабочей камеры.It should be noted right away that the use of a PMT with a smaller diameter than 0.15 mm in an electromagnetic apparatus with a flat double-sided continuous inductor is practically unfeasible, since there is no effective technically feasible solution to retain such PMT in the processing chamber of the working chamber.
Заявляемый способ дезагрегации культуральной жидкости бифидобактерий является новым и в литературе не описан.The inventive method for disaggregating the culture fluid of bifidobacteria is new and has not been described in the literature.
Концентрацию бифидобактерий определяли методом предельных разведений в жидких питательных средах. Пробу анализируемой суспензии в количестве 1 мл переносили в пробирку с 9 мл ростовой среды и перемешивали путем прокачки. Получали разведение 10'1. Далее по 1 мл каждого предыдущего разведения переносили в 9 мл среды следующего разведения, и так до 10-го. Пробирки инкубировали 3 суток при 37,5°С. Затем подсчитывали число колоний микроорганизмов. Количество жизнеспособных бактерий в пробе препарата рассчитывали, как произведение количества живых особей в последнем разведении на 10 в степени номера предпоследней пробирки, где отмечен рост микробов по формулеThe concentration of bifidobacteria was determined by the method of limiting dilutions in liquid nutrient media. A sample of the analyzed suspension in an amount of 1 ml was transferred into a test tube with 9 ml of the growth medium and mixed by pumping. A dilution of 10 ' 1 was obtained. Then, 1 ml of each previous dilution was transferred into 9 ml of the next dilution medium, and so on until the 10th. The tubes were incubated for 3 days at 37.5 ° C. Then, the number of colonies of microorganisms was counted. The number of viable bacteria in the preparation sample was calculated as the product of the number of live individuals in the last dilution by 10 to the power of the number of the penultimate test tube, where the growth of microbes was noted according to the formula
где БК - биологическая концентрация клеток в материале, КОЕ/мл;where BC is the biological concentration of cells in the material, CFU / ml;
N - среднее арифметическое числа колоний в пробирках;N is the arithmetic mean of the number of colonies in test tubes;
Выживаемость микроорганизмов в процессе хранения КЖ определяли по отношению концентрации живых клеток в хранившихся материалах к таковой в свежеприготовленных.The survival of microorganisms during storage of the QL was determined by the ratio of the concentration of living cells in the stored materials to that in freshly prepared ones.
Осуществление способа изобретения поясняется на следующем примере, подтверждающем увеличение концентрации микробных клеток в ростовой среде, а также повышение выживаемости бактерий в процессе краткосрочного промежуточного хранения культуральной жидкости перед дальнейшей переработкой при реализации способа.The implementation of the method of the invention is illustrated by the following example, which confirms an increase in the concentration of microbial cells in the growth medium, as well as an increase in the survival rate of bacteria in the process of short-term intermediate storage of the culture liquid before further processing during the implementation of the method.
Пример. В электромагнитном аппарате с плоским двухсторонним индуктором обрабатывали КЖ 3-й генерации В. adolescentis МС-42 с содержанием бактерий 1,4×109 КОЕ/мл, выращенных на среде КД-5. Объем рабочей камеры аппарата - 220 мл, а обрабатываемой суспензии - 100 мл. Загрузка ФМТ в рабочую камеру - 10 г. Дезагрегацию осуществляли ФМТ d=0,15 мм и l=4,5 мм в течение 3-х, 4-х и 5 мин. Для сравнения (по прототипу) КЖ дезагрегировали ФМТ d=0,5 мм и l=6,5 мм в течение 5 мин. Результаты представлены в таблице 5.Example. In an electromagnetic apparatus with a flat double-sided inductor, the third-generation CL of B. adolescentis MC-42 with a bacterial content of 1.4 × 10 9 CFU / ml grown on KD-5 medium was treated. The volume of the working chamber of the apparatus is 220 ml, and the volume of the processed suspension is 100 ml. Loading FMT into the working chamber - 10 g. Disaggregation was carried out by FMT d = 0.15 mm and l = 4.5 mm for 3, 4 and 5 minutes. For comparison (according to the prototype) QOL was disaggregated by FMT d = 0.5 mm and l = 6.5 mm for 5 minutes. The results are shown in Table 5.
Как следует из анализа данных, представленных в таблице 5, выживаемость В. adolescentis МС-42 в конце кратковременного хранения при низких положительных температурах КЖ в результате заявленного способа дезагрегации возросла как минимум в 3 раза. Кроме того, КЖ, полученная при реализации заявленного способа, содержит в три раза большее количество бифидобактерий по сравнению с препаратами, приготовленными в соответствии с прототипом. Указанное обеспечивается тем, что дезагрегацию осуществляли в течение 3-5 мин ферромагнитными телами диаметром 0,15 мм.As follows from the analysis of the data presented in Table 5, the survival rate of B. adolescentis MC-42 at the end of short-term storage at low positive temperatures of QOL as a result of the claimed method of disaggregation increased at least 3 times. In addition, the QOL obtained by implementing the claimed method contains three times more bifidobacteria than the preparations prepared in accordance with the prototype. This is ensured by the fact that the disaggregation was carried out for 3-5 minutes by ferromagnetic bodies with a diameter of 0.15 mm.
Источники информацииSources of information
1. Новые подходы к конструированию препаратов-пробиотиков на основе бифидобактерий / Бандоян А.К., Амерханова A.M., Алешкин В.А. и др. // Сб. науч. тр. «Проблемы инфекционных болезней». - М., 2000. - с. 284-286.1. New approaches to the design of probiotic preparations based on bifidobacteria / Bandoyan A.K., Amerkhanova A.M., Aleshkin V.A. and others // Sat. scientific. tr. "Problems of Infectious Diseases". - M., 2000 .-- p. 284-286.
2. Получение устойчивых суспензий Bacillus thuringiensis в электромагнитном аппарате / В.Ю. Давыдкин, В.А. Алешкин, И.Ю. Давыдкин, А.А. Воробьев, А.Г. Гаврин, В.М. Блинов, С.С. Афанасьев // Журнал микробиологии. - 2001. - №4. - С. 7-10.2. Obtaining stable suspensions of Bacillus thuringiensis in an electromagnetic apparatus / V.Yu. Davydkin, V.A. Aleshkin, I. Yu. Davydkin, A.A. Vorobiev, A.G. Gavrin, V.M. Blinov, S.S. Afanasyev // Journal of Microbiology. - 2001. - No. 4. - S. 7-10.
3. Гончарова Г.И., Лянная A.M. Культуральная, морфологическая и биохимическая характеристика Bacterium bifidum // Тр. МНИИЭМ «Кишечные и воздушно-капельные инфекции». - Т. XIII. - М., 1969. - С. 415-426.. 5-6. - С. 51-58.3. Goncharova G.I., Lyannaya A.M. Cultural, morphological and biochemical characteristics of Bacterium bifidum // Tr. MNIIEM "Intestinal and airborne infections". - T. XIII. - M., 1969. - S. 415-426 .. 5-6. - S. 51-58.
4. Идентификация параметров измельчения биопрепаратов в установках на базе плоского двухстороннего индуктора / Гаврин А.Г., Давыдкин И.Ю., Давыдкин В.Ю., Давыдкин Ю.П., Синицын Л.Е. // Медицинская промышленность и биотехнология. Наука-производство-маркетинг. - 1992. - Вып. 12. - С. 15-28.4. Identification of parameters for grinding biological products in installations based on a flat double-sided inductor / Gavrin AG, Davydkin I.Yu., Davydkin V.Yu., Davydkin Yu.P., Sinitsyn L.Ye. // Medical industry and biotechnology. Science-production-marketing. - 1992. - Issue. 12. - S. 15-28.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019133522A RU2731071C1 (en) | 2019-10-22 | 2019-10-22 | Method for disaggregation of bifidus bacteria culture fluid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019133522A RU2731071C1 (en) | 2019-10-22 | 2019-10-22 | Method for disaggregation of bifidus bacteria culture fluid |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2731071C1 true RU2731071C1 (en) | 2020-08-28 |
Family
ID=72421511
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019133522A RU2731071C1 (en) | 2019-10-22 | 2019-10-22 | Method for disaggregation of bifidus bacteria culture fluid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2731071C1 (en) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2026730C1 (en) * | 1991-02-28 | 1995-01-20 | Игорь Юрьевич Давыдкин | Method for treatment of materials |
-
2019
- 2019-10-22 RU RU2019133522A patent/RU2731071C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2026730C1 (en) * | 1991-02-28 | 1995-01-20 | Игорь Юрьевич Давыдкин | Method for treatment of materials |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ВОЛКОВ В.С. "Разработка ресурсо- и энергосберегающего электромагнитного способа механоактивации витаминизированной биологически активной кормовой добавки".// Дисс. канд.технических наук., 2014, Санкт-Петербург, с.31-38, 58, 61, 113. * |
| ВОЛКОВ В.С. "Разработка ресурсо- и энергосберегающего электромагнитного способа механоактивации витаминизированной биологически активной кормовой добавки".// Дисс. канд.технических наук., 2014, Санкт-Петербург, с.31-38, 58, 61, 113. ДАВЫДКИН В.Ю. "Технология и конструирование сухих биопрепаратов на основе микрокапельных порошков".// Автореферат дисс. доктора биологических наук, 27.01.2011, Москва, с.17-22. * |
| ДАВЫДКИН В.Ю. "Технология и конструирование сухих биопрепаратов на основе микрокапельных порошков".// Автореферат дисс. доктора биологических наук, 27.01.2011, Москва, с.17-22. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Maxted | The active agent in nascent phage lysis of streptococci | |
| CN109153696B (en) | Method for purifying antifungal compounds and exopolysaccharides from microbial cell cultures | |
| US11123383B2 (en) | Composition and methods for microbiota therapy | |
| EP2210935A1 (en) | Methods for isolating bacteria | |
| CN109439577A (en) | One plant of broad-spectrum antiseptic bacillus amyloliquefaciens and its application | |
| CN107988115A (en) | Lactobacillus plantarum and its composite probiotics ferment liquid and preparation method | |
| Sizonenko et al. | The New Efficiency of the «SRMP»–Listerias Growth-Promoting Factor During Factory Cultivation | |
| Kumaravel et al. | Immobilization of Bacillus amyloliquefaciens MBL27 cells for enhanced antimicrobial protein production using calcium alginate beads | |
| Lestari et al. | The antibacterial activities of bacteriocin Pediococcus acidilactici of breast milk isolate to against methicillin-resistant Staphylococcus aureus | |
| CN114480214A (en) | Lactobacillus paracasei separated from Tibet Aliyak milk keloid and application thereof | |
| Wang et al. | Evaluation of Rpf protein of Micrococcus luteus for cultivation of soil actinobacteria | |
| RU2731071C1 (en) | Method for disaggregation of bifidus bacteria culture fluid | |
| RU2731063C1 (en) | Method for dispersing culture liquid of bifidobacteria | |
| Zhu et al. | Construction by dielectrophoresis of microbial aggregates for the study of bacterial cell dormancy | |
| Zheng et al. | The use of a simple flow cytometry method for rapid detection of spores in probiotic Bacillus licheniformis-containing tablets | |
| RU2475535C1 (en) | Method to produce probiotic preparation lacto-amylovorin | |
| CN109897800A (en) | The strong enterococcus A8-1 of one plant of selenium-rich and its application | |
| Toncheva‐Panova et al. | Influence of physiological factors on the lysis effect of Cytophaga on the red microalga Rhodella reticulata | |
| Heidari et al. | Bioencapsulation of biosurfactant-producing Bacillus subtilis (PTCC 1023) in alginate beads | |
| CN110283730B (en) | Process for embedding composite microecological preparation by solution blending method | |
| CN105176887A (en) | Method for culturing escherichia coli | |
| Gupta et al. | Isolation, Identification and Characterisation of Antibiotic Producing Bacteria from Soil at Dr CV Raman University Campus Bilaspur (CG) | |
| RU2668178C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis | |
| Radhamanalan et al. | Preparation of Postbiotics from Bifidobacterium sp. | |
| CN115491327B (en) | Paenibacillus polymyxa for inhibiting malassezia and application thereof |