RU2704452C1 - Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной - Google Patents

Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной Download PDF

Info

Publication number
RU2704452C1
RU2704452C1 RU2019112197A RU2019112197A RU2704452C1 RU 2704452 C1 RU2704452 C1 RU 2704452C1 RU 2019112197 A RU2019112197 A RU 2019112197A RU 2019112197 A RU2019112197 A RU 2019112197A RU 2704452 C1 RU2704452 C1 RU 2704452C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
prf
solution
culture
gkpm
obolensk
Prior art date
Application number
RU2019112197A
Other languages
English (en)
Inventor
Виктор Павлович Трухин
Анатолий Эдуардович Евтушенко
Игорь Викторович Красильников
Елена Леонидовна Салимова
Станислав Валентинович Уйба
Юрий Михайлович Васильев
Анастасия Дмитриевна Конон
Original Assignee
Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства filed Critical Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства
Priority to RU2019112197A priority Critical patent/RU2704452C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2704452C1 publication Critical patent/RU2704452C1/ru
Priority to EA202190638A priority patent/EA202190638A1/ru
Priority to PCT/RU2020/050077 priority patent/WO2020218949A1/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/21—Haemophilus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для изготовления вакцинных препаратов. Предложен способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной. Способ включает культивирование штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 на жидкой питательной среде с добавлением рибозы, инактивацию культуры нагреванием до 55±5°С и выдерживанием 15±3 мин, отделение биомассы центрифугированием и выделение полирибозилрибитолфосфата (ПРФ) путем осаждения 10%-ным раствором цетилтриметиламмония бромида (ЦТАБ). Затем выполняют концентрирование, очистку, осветление, активацию ПРФ и смешивание его со столбнячным анатоксином. Затем полученную субстанцию очищают, стерилизуют, добавляют фармацевтически приемлемые носители, разливают и лиофильно высушивают. Способ обеспечивает повышение выхода целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Description

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Область техники.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения конъюгированной вакцины для профилактики гемофильной инфекции из штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884.
Уровень техники.
Описан способ получения капсулярного полисахарида Haemophilus influenzae типа b (Hib), заключающийся в культивировании штамма в культуральной среде, сборе и обработке супернатанта культуры для экстрагирования капсулярного полисахарида с последующим его конъюгированием с белком-носителем (патент RU 2644246). Недостатком данного способа является использование для культивирования продуцента питательной среды сложного состава, состоящей из 33 компонентов, многие из которых требуют отдельной предварительной подготовки. Кроме того, инактивацию биомассы проводят раствором формалина в конечной концентрации 0,35-0,37% (об./об.), отсутствие остатков которого необходимо подтверждать в готовой вакцине.
В патенте (RU 2542393) раскрывается способ получения конъюгата капсульного полисахарида Haemophilus influenzae тип b с антигенами, который включает получение смеси столбнячного и дифтерийного анатоксинов, адсорбированных на геле гидроокиси или фосфата алюминия, ее очистку, связывание карбодиимидным способом через дигидразид адипиновой кислоты с капсульным полисахаридом Hib и отмывку центрифугированием. Недостатком данного способа является использование анатоксинов адсорбированных на геле гидроокиси или фосфата алюминия. Присутствие гидроокиси или фосфата алюминия в составе вакцины потенциально увеличивает ее реактогенность и поствакцинальные осложнения, а также может приводить к формированию иммунного ответа в том числе и на анатоксины.
Наиболее близким аналогом заявляемого изобретения является способ получения антигенного вакцинного препарата Haemophilus influenzae типа В путем выращивания бактерий на жидких питательных средах с последующим отделением биомассы методом ультрафильтрации на молекулярных волоконных фильтрах для извлечения экзогенного полисахарида. Далее концентрат клеток обрабатывают 2,5%-ным раствором натрия хлорида с натриевой солью ЭДТА и из полученного экстракта ультрафильтрацией на молекулярных волоконных фильтрах выделяют капсульный полисахарид Hib в комплексе с белком, который соединяют с экзогенным полисахаридом Hib в соотношении 1:1 (патент RU 2185191).
Недостатком данного способа является долгая подготовка посевного материала (10 ч) с использованием твердой питательной среды, что приводит к необходимости смыва клеток с поверхности физиологическим раствором, сопровождающийся высоким риском контаминации и дополнительными трудозатратами по подготовке матрацев со стерильной средой. Инактивацию биомассы проводят раствором формалина, что приводит к необходимости последующего подтверждения его отсутствия в готовой вакцине и, следовательно, проведения дополнительного контроля. Использование ультрафильтрации для отделения биомассы из культуральной жидкости приводит к потерям по капсульному полисахариду ввиду использования молекулярных волокон с малым размером пор (20 кДа), на которых в процессе фильтрации скапливается слой бактериальных клеток, задерживающих целевой продукт - полисахарид ПРФ. Экзогенный полисахарид Hib после отделения биомассы концентрируется только на молекулярных волокнах без дальнейшей очистки, а капсульный полисахарид в комплексе с белком Hib также подвергается дополнительно только диализу, что может усиливать реактогенность готовой вакцины. Раскрытие сущности изобретения.
Нами разработан способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной, получаемой путем культивирования оригинального штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 (штамм защищен патентом RU 2624014) в жидкой питательной среде простого состава с последующим выделением, концентрированием и очисткой субстанции полирибозилрибитолфосфата (ПРФ), которую активируют, конъюгируют с модифицированным белком-носителем и подвергают дополнительной постадийной очистке. Полученный конъюгат стерилизуют фильтрацией, добавляют необходимые растворители в рассчитанном количестве, разливают по флаконам и лиофильно высушивают.
Техническими результатами, достигаемыми при осуществлении изобретения, являются следующие.
По сравнению с используемыми способами получения конъюгированных вакцин для профилактики гемофильной инфекции субстанцию ПРФ получают из высокопродуктивного штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884, культивируемого в жидкой питательной среде простого состава, в которую в одном из вариантов дополнительно внесен раствор рибозы. При этом концентрация полисахарида в культуральной жидкости выше, описанной в патенте RU 2644246 (до 300 мкг/мл), и составляет 528-594 мкг/мл в случае с добавлением рибозы и 400-450 мкг/мл без добавления рибозы.
В предлагаемой технологии исключена стадия подготовки посевного материала путем культивирования продуцента на твердой питательной среде, что сокращает время и затраты на получение вакцины. Инактивация культуральной жидкости проводится путем нагревания, а не добавлением формалина, что исключает необходимость контроля его содержания в готовой вакцине. Инактивированная культуральная жидкость подвергается очистке через каскад глубинных фильтров с диаметром пор от 3,0-0,8 до 0,3-0,1 мкм, что позволяет отделить бактериальную массу и при этом минимизировать потери по полисахариду. При очистке и выделении субстанции нативный раствор ПРФ предварительно подвергается концентрированию (в одном из вариантов), что значительно снижает объемы продукта, а значит позволяет уменьшить затраты на реагенты и упрощает процесс. В качестве белка-носителя используется столбнячный анатоксин не сорбированный на геле гидроокиси или фосфата алюминия, что делает полученную вакцину не реактогенной и при этом высоко иммуногенной. Очистка полисахарида ПРФ и конъюгата с белком-носителем проводится с использованием ультрафильтрационных кассет из современных материалов - полиэфирсульфон, гель-хроматографии, в одном из вариантов осветлением путем фильтрации через угольные картонные фильтры с диаметром пор 0,5-1,0 мкм, что позволяет снизить содержание эндотоксинов, нуклеиновых кислот, белка, удалить остаточные реагенты, используемые для конъюгации.
Таким образом, изобретение представляет собой способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной, включающий следующие этапы: культивирование штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 на жидкой питательной среде следующего состава (г/л): глюкоза - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,0; пептон - 15,0; NH4Cl - 0,7; Na2HPO4 - 2,5; КСl - 0,5; NaCl - 3,3; L-глутаминовая кислота - 1,2; L-цистеин - 0,015; НАД - 0,02; гемин - 0,04, инактивацию культуры при помощи нагревания до 55°С±5 и выдерживания 15±3 мин, центрифугирование для отделения биомассы с последующей фильтрацией через каскад глубинных фильтров с диаметром пор от 3,0-0,8 до 0,3-0,1 мкм, выделение полирибозилрибитолфосфата (ПРФ) путем осаждения 10%-ным раствором цетилтриметиламмония бромида (ЦТАБ), концентрирование и очистку, активацию полученной субстанции растворами 1-циано-4-диметил-аминопиридиния тетрафторобората (ЦДАФ) и триэтиламина и смешивание со столбнячным анатоксином, модифицированным раствором этилдиметиламинопролинкарбодиимида (ЭДАК), не сорбированным на геле гидроокиси или фосфата алюминия, очистку, стерилизацию, добавление фармацевтически приемлемых носителей, розлив и лиофильную сушку. Осуществление изобретения.
Пример получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной из оригинального штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884.
Пример 1. Первый технологический этап получения субстанции ПРФ заключается в создании Главного банка культуры (ГБК) и Рабочего банка культуры (РБК). Для этого оригинальный штамм Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 культивируют в жидкой питательной среде в колбах на протяжении 4-6 часов, при температуре (35±2)°С и (150±10) об/мин до достижения середины экспоненциальной фазы роста. К культуральной жидкости Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 добавляют стерильный 80% раствор глицерина в объеме, соответствующем 25% объема культуральной жидкости (или соотношение 1:4). Розлив культуральной жидкости с криопротектором осуществляют в криопробирки вместимостью 5,0 мл по 1,0 мл. Каждую криопробирку маркируют.Полученные пробирки ГБК хранят в низкотемпературном холодильнике при температуре минус (80±3)°С на протяжении не более 10 лет. Пробирки ГБК используют для получения РБК по описанной выше схеме.
В таблице 1 представлены результаты контроля Рабочего банка культуры Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 о соответствии по всем показателям нормативным значениям.
Таблица 1 - Результаты контроля Рабочего банка культуры Haemophilus
influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884.
Figure 00000001
Figure 00000002
РБК используют для получения рабочего посевного материла (РПМ). Для этого в асептических условиях восстановленную культуру из РБК переносят в жидкую питательную среду, разлитую в конические колбы. Культуру выращивают на протяжении 4-6 часов, при температуре (35±2)°С и (150±10) об/мин до достижения середины экспоненциальной фазы роста. Полученную культуральную жидкость объединяют в колбе и контролируют по показателям «Чистота культуры», «Окраска по Граму». Рабочий посевной материал получают в количестве 10% от количества питательной среды, используемой в ферментере.
Далее проводят культивирование в ферментере Biostat® А МО UniVessel® Glass 2L 230V (Sartorius). Состав питательной среды для получения максимального количества ПРФ Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 (г/л): глюкоза - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,0; пептон - 15,0; NH4Cl - 0,7; Na2HPO4 - 2,5; КСl - 0,5; NaCl - 3,3; L-глутаминовая кислота - 1,2; L-цистеин - 0,015; НАД - 0,02; гемин - 0,04. Дополнительно добавляют питательные вещества к культуре, после достижения ею оптической плотности 1,0, в виде 20% раствора глюкозы и 10% дрожжевого экстракта (соотношение 1:1).
Рабочий посевной материал при помощи перистальтического насоса (через сифон) перекачивают в ферментер. Проводят культивирование при следующих условиях:
Количество оборотов мешалки: 100-300 об/мин; температура: (35±2)°С;
количество растворенного кислорода: 30% (регулируется карскадом); рН: (7,2±0,2);
Полученную производственную культуру контролируют по показателям «Окраска по Граму», «Чистота культуры». Количество синтезированного полисахарида ПРФ составляет 400-450 мкг/мл.
По завершению процесса культивирования проводят инактивацию культуры при помощи нагревания до (55+5)°С и выдерживания (15+3) мин без перемешивания. Инактивацию культуры подтверждают путем высева культуральной жидкости на шоколадный агар (отсутствие роста культуры).
Полученную инактивированную культуру центрифугируют (центрифуга Beckman coulter AvantiJ-E) для отделения биомассы с последующей фильтрацией через каскад глубинных фильтров с диаметром пор 0,3-0,6 мкм и 0,1-0,3 мкм.
Полисахарид из фильтрата выделяют путем осаждения 10% раствором цетилтриметиламмония бромида (ЦТАБ). Смесь оставляют при температуре (5±3)°С до выпадения осадка. Полученный осадок ПРФ центрифугируют и гомогенизируют при помощи гомогенизатора RW 16 basic (производитель «1КА») при скорости вращения (6000±500) об/мин до полного его растворения. Экстракцию ПРФ проводят спиртом этиловым в количестве 40% по объему. После окончания экстракции приступают к отделению осадка центрифугированием. К полученному супернатанту добавляют 1,0% (по объему) 4,0 М раствора натрия хлорида, содержимое бутыли встряхивают вручную и оставляют при температуре (5±3)°С на (13±1) ч в холодной комнате. Осадок отделяют центрифугированием, собирают и высушивают при уровне вакуума от 0,04 мБар в течении (24±4) ч. Полученную субстанцию ПРФ контролируют по показателям «Описание», «Вода», «Подлинность», «Распределение молекул ПРФ по размеру», «Рибоза», «ПРФ», «Фосфор», «Белок», «Нуклеиновые кислоты», «Бактериальные эндотоксины».
При помощи реакции латекс-агглютинации подтверждают подлинность полученного продукта (Рис. 1). Образование хлопьевидного осадка свидетельствует о наличии ПРФ в субстанции.
В таблице 2 представлены результаты контроля полученной субстанции ПРФ о соответствии по всем показателям нормативным значениям.
Таблица 2 - Результаты контроля субстанции ПРФ, полученной из оригинального штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884
Figure 00000003
Figure 00000004
Полученную субстанцию ПРФ используют для получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной. Для этого готовят раствор субстанции, ПРФ активируют растворами 1-циано-4-диметил-аминопиридиния тетрафторобората (ЦДАФ) и триэтиламина и смешивают со столбнячным анатоксином, модифицированным раствором
этилдиметиламинопролинкарбодиимида (ЭДАК). Полученный конъюгат концентрируют и проводят его диафильтрацию на ультрафильтрационной установке с кассетой 100 кДа. Далее предварительно фильтруют через мембрану 0,45 мкм и очищают на хроматографической колонке с сорбентом «Сефадекс G-25». Собранный элюат подвергают стерилизующей фильтрации через мембрану 0,22 мкм и контролируют.
Полученный конъюгат ПРФ со столбнячным анатоксином контролируют по показателям «Описание», «Подлинность», «рН», «Белок», «Соотношение ПРФ к белку», «Концентрация ПРФ», «Свободный ПРФ», «Свободный белок», «Распределение молекул ПРФ по размеру», «Стерильность», «ЭДАК», «ЦДАФ», «Бактериальные эндотоксины».
Результаты контроля полученного конъюгата ПРФ со столбнячным анатоксином соответствует по всем показателям нормативным значениям.
Полученный промежуточный продукт используют на стадии сведения вакцины: используют рассчитанное количество промежуточного продукта (конъюгата), стерильного 0,5 М раствора сахарозы, стерильного 0,1 М раствори трис-HCl и стерильной воды для инъекций. Розлив сведенной вакцины (доза розлива - 0,6 мл) осуществляют в предварительно подготовленные флаконы 2R. Вакцину лиофильно высушивают при заданных параметрах и передают на стадию упаковки и маркировки. Контроль готовой продукции проводят согласно НД по следующим показателям: «Описание», «Подлинность», «Растворимость», «Механические включения», «рН», «Вода», «Точность розлива», «Фосфор», «Капсульный полисахарид», «Стерильность», «Аномальная токсичность», «Пирогенность», «Сахароза». По всем показателям полученная вакцина гемофильная тип b конъюгированная соответствует требования нормативной документации.
Пример 2. Получение вакцины гемофильной тип b конъюгированной из штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 осуществляют как описано в примере 1.
Интенсифицируют образование полисахарида ПРФ добавлением в питательную среду 0,5% раствора рибозы, что приводит к увеличению еще на 32% концентрации образуемого ПРФ (до 528-594 мкг/мл).
Фильтрат после отделения биомассы концентрируют (в 10 раз) и подвергают диафильтрации на ультрафильтрационной установке с номинальным отсечением по молекулярной массе 30 к Да.
Супернатант после экстракции этиловым спиртом и отделения осадка фильтруют через угольные глубинные фильтры с диаметром пор 0,5-1,0 мкм, после чего определяют оптическую плотность полученного фильтрата (при длине волны 275 нм).
Приведенные дополнительные технологические этапы позволяют увеличить содержание ПРФ в субстанции с 0,74 до 0,95 мг/мг субстанции, а также снизить количество нуклеиновых кислот и белка с 0,8 до 0,1%, количество эндотоксинов - со значения менее 25 ЕЭ в 1 мкг ПРФ до менее 5 ЕЭ в 1 мкг ПРФ.
Вакцина гемофильная тип b конъюгированная из штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 успешно прошла доклинические исследования на половозрелых и неполовозрелых животных, в ходе которых была доказана ее безопасность и иммуногенность в сравнении с препаратам сравнения «Акт-ХИБ®» (производства Sanofi Pasteur, Франция) и «Вакцина гемофильная тип b конъюгированная, лиофилизат для приготовления раствора для внутримышечного введения 0,5 мл/доза» (производства ФБУН Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии).
Способ позволяет получить вакцину гемофильную тип b конъюгированную из оригинального штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884, обладающую протективной активностью, не уступающую существующим конъюгированным вакцинам и сохраняющую стабильность всех показателей качества в течение установленного срока годности (1,5 года).

Claims (10)

1. Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной, включающий следующие этапы:
- культивирование штамма Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 на жидкой питательной среде следующего состава (г/л): глюкоза - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,0; пептон - 15,0; NH4Cl - 0,7; Na2HPO4 - 2,5; КСl - 0,5; NaCl - 3,3; L-глутаминовая кислота - 1,2; L-цистеин - 0,015; НАД - 0,02; гемин - 0,04,
- добавление в питательную среду для культивирования Haemophilus influenzae тип b «ГКПМ-Оболенск» В-7884 рибозы,
- инактивацию культуры при помощи нагревания до 55±5°С и выдерживания 15±3 мин,
- центрифугирование для отделения биомассы с последующей фильтрацией через каскад глубинных фильтров с диаметром пор от 3,0-0,8 до 0,3-0,1 мкм,
- выделение полирибозилрибитолфосфата (ПРФ) путем осаждения 10%-ным раствором цетилтриметиламмония бромида (ЦТАБ), концентрирование и очистку,
- осветление путем фильтрации через угольные глубинные фильтры с диаметром пор 0,5-1,0 мкм,
- активацию полученной субстанции растворами 1-циано-4-диметил-аминопиридиния тетрафторобората (ЦДАФ) и триэтиламина и смешивание со столбнячным анатоксином, модифицированным раствором этилдиметиламинопролинкарбодиимида (ЭДАК), не сорбированным на геле гидроокиси или фосфата алюминия,
- очистку, стерилизацию, добавление фармацевтически приемлемых носителей, розлив и лиофильную сушку.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что после отделения биомассы осуществляют стадию концентрирования нативного раствора ПРФ 10% раствором цетилтриметиламмония бромида.
RU2019112197A 2019-04-22 2019-04-22 Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной RU2704452C1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019112197A RU2704452C1 (ru) 2019-04-22 2019-04-22 Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной
EA202190638A EA202190638A1 (ru) 2019-04-22 2020-04-20 Способ получения вакцины гемофильной тип в конъюгированной
PCT/RU2020/050077 WO2020218949A1 (ru) 2019-04-22 2020-04-20 Способ получения вакцины гемофильной тип в конъюгированной

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019112197A RU2704452C1 (ru) 2019-04-22 2019-04-22 Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2704452C1 true RU2704452C1 (ru) 2019-10-28

Family

ID=68500470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019112197A RU2704452C1 (ru) 2019-04-22 2019-04-22 Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной

Country Status (3)

Country Link
EA (1) EA202190638A1 (ru)
RU (1) RU2704452C1 (ru)
WO (1) WO2020218949A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2770877C1 (ru) * 2021-04-08 2022-04-22 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Способ получения антигенной конъюгированной субстанции гемофильного типа b микроба для создания вакцинных препаратов

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7582459B2 (en) * 2003-09-11 2009-09-01 De Staat Der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van Vws Process for producing a capsular polysaccharide for use in conjugate vaccines
RU2378008C2 (ru) * 2002-05-14 2010-01-10 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. Комбинированные вакцины против бактериального менингита для введения через слизистую оболочку

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2992656B1 (fr) * 2012-07-02 2016-10-07 Sanofi Pasteur Procede de production d'antigenes haemophilus influenzae type b
RU2542393C2 (ru) * 2013-05-06 2015-02-20 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" (ФБУН РостовНИИ микробиологии и паразитологии) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГАТА КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА Haemophilus influenzae ТИП b (Hib) C АНТИГЕНАМИ ДЛЯ СОЗДАНИЯ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2378008C2 (ru) * 2002-05-14 2010-01-10 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. Комбинированные вакцины против бактериального менингита для введения через слизистую оболочку
US7582459B2 (en) * 2003-09-11 2009-09-01 De Staat Der Nederlanden, Vert. Door De Minister Van Vws Process for producing a capsular polysaccharide for use in conjugate vaccines

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
САЛИМОВА Е.Л. и др. "Технология получения полирибозилрибитолфосфата в качестве активной фармацевтической субстанции для производства полисахаридных вакцин".// Фармация и фармакология, 2018, том 6, N 1, с.47-53. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2770877C1 (ru) * 2021-04-08 2022-04-22 Федеральное бюджетное учреждение науки "Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии" Способ получения антигенной конъюгированной субстанции гемофильного типа b микроба для создания вакцинных препаратов

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020218949A1 (ru) 2020-10-29
EA202190638A1 (ru) 2022-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9707286B2 (en) Process for detergent-free production of outer membrane vesicles of a gram-negative bacterium
JP5465676B2 (ja) 連鎖球菌属を培養するための発酵プロセスおよび連鎖球菌属由来の莢膜多糖（ｃｐ）を得るための精製プロセス
CA2538691C (en) Process for producing polysaccharide for conjugate vaccine
JPH0720878B2 (ja) 改善された複合体、それらの製造法および該複合体を含有する製剤
KR20210133239A (ko) 박테리아 다당류를 정제하는 방법
EP0407037B1 (en) Process for removing bacterial endotoxin from gram-negative polysaccharides
JP2538224B2 (ja) 百日咳抗原の精製
RU2704452C1 (ru) Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной
NO159394B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av immunogene kapselformede polyosider fra kapselbakterier.
EP0238407B1 (fr) Procédés industriels de fabrication de vaccins ribosomaux et vaccins ribosomaux obtenus
EA043649B1 (ru) Способ получения вакцины гемофильной тип в конъюгированной
CN112641936B (zh) 一种鹅星状病毒纤突蛋白脂质体疫苗及其制备方法和应用
US4235994A (en) High molecular weight meningococcal group C vaccine and method for preparation thereof
RU2770877C1 (ru) Способ получения антигенной конъюгированной субстанции гемофильного типа b микроба для создания вакцинных препаратов
RU2089215C1 (ru) Способ получения менингококкового серогруппы в липоолигосахарида
EP0002645B1 (en) Antigenic complex from neisseria gonorrhoeae, process and vaccine
CN108396042B (zh) 一种小分子可溶性肽聚糖的制备方法
RU2283135C1 (ru) Способ выделения очищенных полисахаридов менингококков серогрупп а и с
RU2096042C1 (ru) Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных
CN114106210A (zh) 一种23价肺炎球菌多糖疫苗的生产工艺
KR20220144393A (ko) 당류의 정제
SU1085040A1 (ru) Способ получени растворимого холерного @ -антигена дл иммунизации продуцентов холерных агглютинирующих сывороток
RU2088244C1 (ru) Способ получения vi-антигена
RU2209081C1 (ru) Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами
CA1187793A (en) Vaccine and method of making