RU2694547C1 - Средство, обладающее избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности - Google Patents
Средство, обладающее избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2694547C1 RU2694547C1 RU2018105419A RU2018105419A RU2694547C1 RU 2694547 C1 RU2694547 C1 RU 2694547C1 RU 2018105419 A RU2018105419 A RU 2018105419A RU 2018105419 A RU2018105419 A RU 2018105419A RU 2694547 C1 RU2694547 C1 RU 2694547C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- extract
- tumor cells
- resistance
- concentration
- Prior art date
Links
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 58
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 230000009471 action Effects 0.000 title abstract description 21
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 100
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 37
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 claims abstract description 19
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 abstract description 2
- 241000959048 Gratiola Species 0.000 abstract 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 163
- 210000004957 autophagosome Anatomy 0.000 description 27
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 20
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 18
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- JKCSODVERGVDLT-UHFFFAOYSA-N CBL0137 Chemical compound CC(=O)C1=CC=C2N(CCNC(C)C)C3=CC=C(C(C)=O)C=C3C2=C1 JKCSODVERGVDLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100497384 Drosophila melanogaster CASK gene Proteins 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 6
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 6
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 6
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 230000002886 autophagic effect Effects 0.000 description 5
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 5
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 5
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 5
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 3
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 3
- 240000007316 Xerochrysum bracteatum Species 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 3
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 3
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 2
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001185271 Gratiola officinalis Species 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003624 condensation of chromatin Effects 0.000 description 2
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 231100000613 environmental toxicology Toxicity 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- JVAXTYZSDXFKMH-BBPWPQMYSA-M frondoside a Chemical compound [Na+].O[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO3)O)[C@H](O[C@H]3[C@@H](OC[C@H]([C@@H]3O)OS([O-])(=O)=O)OC3C([C@@H]4CC=C5[C@]6(C)C[C@@H](C7C6(C(O[C@]7(CCCC(C)C)C)=O)CC[C@@H]5[C@@]4(C)CC3)OC(C)=O)(C)C)O[C@@H]2C)O)OC[C@H]1O JVAXTYZSDXFKMH-BBPWPQMYSA-M 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000006882 induction of apoptosis Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- JVNAFTWQOXCOPF-KQZZSBMGSA-N (2r,3r,26r,27r)-2,27-diamino-3-hydroxy-26-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoctacosan-11-one Chemical compound C[C@@H](N)[C@H](O)CCCCCCCC(=O)CCCCCCCCCCCCCC[C@H]([C@@H](C)N)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JVNAFTWQOXCOPF-KQZZSBMGSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101000827785 Homo sapiens Alpha-fetoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000725401 Homo sapiens Cytochrome c oxidase subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000605127 Homo sapiens Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000848653 Homo sapiens Tripartite motif-containing protein 26 Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- AGJOOKRGJXJXTE-SAAFPTPOSA-N Monanchocidin A, rel- Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F.O1[C@H](/C=C/CC)CC[C@@]11NC(N[C@@]2(O[C@@H](C)CCC2)[C@H](C(=O)OC(CC)CCCCCCCCCCCCC[C@H]2C(N(CCCN)[C@@H](O)[C@@](O)(CCN)O2)=O)[C@@H]2CC3)=[N+]2[C@H]3C1 AGJOOKRGJXJXTE-SAAFPTPOSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 206010059605 Necrobiosis Diseases 0.000 description 1
- 208000015906 Necrobiotic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000031016 anaphase Effects 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000003817 anthracycline antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940093797 bioflavonoids Drugs 0.000 description 1
- 150000001716 carbazoles Chemical class 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006637 cytoprotective autophagy Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N gemcitabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1C(F)(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SDUQYLNIPVEERB-QPPQHZFASA-N 0.000 description 1
- 229960005277 gemcitabine Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 102000046101 human AFP Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004142 macroautophagy Effects 0.000 description 1
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- FQFXDYSGIBBHLU-QWFGDTPKSA-N monanchocidin A Natural products CCC=C[C@@H]1CC[C@]2(C[C@H]3CC[C@H]4[C@@H](C(=O)O[C@H](CC)CCCCCCCCCCCCC[C@@H]5O[C@](O)(CCN)[C@H](O)N(CCCN)C5=O)[C@@]6(CCC[C@H](C)O6)NC(=N2)N34)O1 FQFXDYSGIBBHLU-QWFGDTPKSA-N 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000015629 regulation of autophagy Effects 0.000 description 1
- JVNAFTWQOXCOPF-UHFFFAOYSA-N rhizochalin Natural products CC(N)C(O)CCCCCCCC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(C(C)N)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O JVNAFTWQOXCOPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 1
- 230000016853 telophase Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 206010044412 transitional cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 208000023747 urothelial carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D11/00—Solvent extraction
- B01D11/02—Solvent extraction of solids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению средства, обладающего избирательным действием на опухолевые клетки, вызывающего в них апоптоз, блокирующего развитие аутофагии и препятствующего формированию их резистентности к терапии. Применение вещества, представляющего собой сухой экстракт листьев аврана лекарственного, полученного путем измельчения листьев, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее, в качестве средства, обладающего избирательным действием на опухолевые клетки, вызывающего в них апоптоз, блокирующего развитие аутофагии и препятствующего формированию их резистентности к терапии. Вышеописанное применение является эффективным в качестве средства, обладающего избирательным действием на опухолевые клетки, вызывающего в них апоптоз, блокирующего развитие аутофагии и препятствующего формированию их резистентности к терапии. 10 ил., 4 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к созданию лекарственных средств на основе новогаленового препарата, содержащего биофлавоноиды и обладающего одновременно избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности.
Средство может быть использовано как самостоятельное - для профилактики и лечения злокачественных новообразований в терапии злокачественных новообразований, так и при создании комбинированных химиопрепаратов. Предложен упаренный экстракт листьев аврана лекарственного, получаемый путем экстрагирования 95% этиловым спиртом листьев аврана лекарственного, при определенных условиях, с очисткой хлороформом от ядовитых веществ и последующей отгонкой растворителя и упаривания.
В настоящее время поиск новых лекарственных препаратов для борьбы со злокачественными новообразованиями является приоритетным направлением современной медицины. При этом фундаментальной проблемой практической онкологии является высокая токсичность и низкая избирательность действия противоопухолевых препаратов известных классов.
Особое значение имеют препараты на основе растительного сырья, содержащего флавоноиды, с низким токсическим действием. Экстракт лекарственного растительного сырья (ЛРС) представляет собой многокомпонентную композицию биологически активных веществ с поливалентным действием, формирующую ее так называемый «шрапнельный» эффект (Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «ОФОРТ» САМГМУ, 2004. 1180 с.). Низкая токсичность и большая биодоступность таких композиций, представляющих собой продукты жизнедеятельности живых организмов, объясняется их принципиально большим «родством» человеческому организму, по сравнению с синтетическими препаратами. Поливалентность лечебного действия и взаимное потенцирование эффектов действующих веществ у препаратов из ЛРС служит их несомненным достоинством при комплексной и комбинированной химиотерапии (Гольдберг Е.Д., Зуева Е.П. «Препараты из растений в комплексной терапии злокачественных новообразований» Томск, 2000).
Важной задачей терапии опухолевых заболеваний, как известно, является максимальное сохранение нормальных, неопухолевых клеток при максимальном негативном воздействии на опухолевые клетки. Значительные преимущества будут иметь лекарственные средства, избирательно воздействующие на опухолевые клетки и не оказывающие повреждающего действия на здоровые клетки.
Преимущества также будут иметь противоопухолевые средства, запускающие программированную клеточную гибель (ПКГ), такую, как апоптоз (восстановление внутреннего механизма саморазрушения раковой клетки), в результате которого противовоспалительного последствия некротического распада опухоли для здоровых клеток будет существенно меньше или совсем исключено.
Кроме того, после Нобелевской премии 2016 г., полученной Ёсинори Осуми, исследовавшим аутофагию в дрожжевых клетках с помощью генетического подхода, и выяснения молекулярных механизмов индукции, протекания и регуляции аутофагии, стало очевидно, что индукцию аутофагии можно генетически контролировать, что открыло другой подход к созданию эффективных противоопухолевых средств, а именно: разработка лекарственных средств, ингибирующих аутофагию.
Как известно, аутофагия (как один из возможных путей ПКГ) - это процесс, при котором внутренние компоненты клетки доставляются внутрь ее лизосом или вакуолей и подвергаются в них деградации. Если в неопухолевых клетках макроаутофагия инициируется токсическим стрессом, в условиях обеднения среды питательными веществами и т.п.и направлена на избавление клеток от ненужных органелл, а также и организма от ненужных клеток (Farrugia G, Balzan R. Oxidative Stress And Programmed Cell Death In Yeast (Front Oncol). - 2012. - T. 2, вып. 64. - DOI:10.3389/fonc.2012.00064), то в опухолевых клетках макроаутофагия может способствовать их резистентности химиотерапии за счет деградации поврежденных в результате воздействия органелл и других компонентов клетки, что приводит к быстрой прогрессии заболевания. Поэтому необходим поиск лекарственных средств, способныхпреодолевать формирование резистентности опухолевых клеток.
Известно противоопухолевое действие кураксина CBL0137, продемонстрированное в системах in vitro и in vivo (на мышах линии BALB/c) в отношении аденокарциномы толстой кишки (Акатол) (Фетисов Т.И., Тилов Л.Р., Лесовая Е.А., Антошина Е.Е., Горькова Т.Г., Труханова Л.С., Морозова О.В., Шипаева Е.В., Иванов Р.В., Пурмаль А.А., Белицкий Г.А., Якубовская М.Г., Гудков А.В., Гурова К.В., Кирсанов К.И. Противоопухолевое действие кураксина CBL0137 на моделях аденокарциномы толстой кишки // Успехи молекулярной онкологии. 2016. Т. 3, вып. 3. С. 67-72). Кураксины представляют собой низкомолекулярные карбазольные производные, обладающие афинностью к ДНК, способные одновременно активировать р53-зависимый апоптоз и ингибировать NF-kB-зависимый сигнальный путь. Наблюдалось значительное тормозящее действие CBL0137 на рост данной аллографтной опухоли: на 37-е сутки после перевивки опухоли при пероральном введении препарата в дозах5, 10, 15 и 20 мг/кг в день торможение роста опухоли составило 53, 50, 56 и 74% соответственно. Значимое увеличение продолжительности жизни наблюдалось во всех группах животных, получавших CBL0137. Максимальный эффект (81,7%) был получен при введении препарата в дозе 20 мг/кг в день. В экспериментах in vitro при обработке клеток аденокарциномы толстой кишки человекаНТС116 наблюдался значительный цитотоксический эффект.CBL0137 проявил способность ингибировать экспрессию генаСОХ2, обладающего антиапоптотическим действием и способностью стимулировать неоангиогенез и метастазирование.
Недостатком средства является наличие у него только апоптотического действия и отсутствие избирательной активности к опухолевым клеткам. Кроме того, для кураксина CBL0137 не известна способность препятствовать формированию резистентности опухолевых клеток за счет ингибирования аутофагии.
Известно противоопухолевое действие фталоцианинов, антрациклиновых антибиотиков, растительных алкалоидов и векторных белков: эпидермального фактора роста и альфа-фетопротеина человека (Фельдман Н. Б. Разработка противоопухолевых препаратов направленного действия на основе пептидных векторов и антиангиогенных агентов. 03.01.04 - Биохимия. Автореф. дисс. насоиск. уч. степ. докт. биол. наук. Москва-2007. 50 с.). Разработанные схемы избирательного транспорта путем рецептор опосредованного эндоцитоза в опухолевые клетки в составе конъюгатов с векторными полипептидами, позволяющие существенно снижать негативное воздействие на неопухолевые здоровые клетки человека значительно увеличивают терапевтическую активность противоопухолевых препаратов.
Недостатком данных средств служит, прежде всего, повышенная затратность при создании конъюгатов с векторными полипептидами, а также отсутствие способности препятствовать формированию резистентности опухолевых клеток за счет ингибирования аутофагии.
Наиболее близкими к заявленному средству относятся противоопухолевые средства из низкомолекулярных соединений, выделенных из морских беспозвоночных, проявляющих цитотоксические свойства в отношении опухолевых клеток, таких, как морской тритепеновый гликозид Фрондозид А, агликон ризохалина Ризохалинин и Алкалоид монанхоцидин А (Дышловой С.А. Изучение аспектов механизмов противоопухолевого действия некоторых низкомолекулярных соединений, выделенных из морских беспозвоночных. 03.01.04 - Биохимия. Автореф. дисс. на соиск. уч. степ. докт. биол. наук. Владивосток - 2017. 50 с.). Для данных соединений был описан новый механизм реализации противоопухолевой активности экстракта - за счет подавления аутофагической активности в опухолевой клетке. Механизмы действия Фрондозида А и Ризохалинина, активных в моделях лекарственно-устойчивого рака простаты человека in vitro и in vivo, включают в себя ингибирование цитопротекторной аутофагии с одновременной активацией апоптоза опухолевых клеток за счет индукции каспаза- и р53-независимого апоптоза клеток уротелиальной карциномы человека in vitro и способен усиливать цитотоксические эффекты цисплатина и гемцитабина. Алкалоид монанхоцидин А индуцирует цитотоксическую аутофагию и пермеабилизацию лизосомных мембран опухолевых клеток, подавляет миграцию, а также способен преодолевать лекарственную устойчивость опухолевых клеток.
Недостатком данных средств является отсутствие избирательной активности к опухолевым клеткам, что в отношении средств, содержащих алкалоиды и гликозиды, является важным, так как они, как правило, токсичны. Отсутствие избирательного действия в отношении опухолевых клеток делает данные средства недостаточно эффективными для противоопухолевой терапии.
Нами впервые получено средство, обладающее противоопухолевым и иммуномодулирующим действием (Патент на изобретение RUS 2519769 21.03.2013. Средство, обладающее противоопухолевым и иммуномодулирующим действием. Полуконова Н.В., Наволокин Н.А., Дурнова Н.А., Маслякова Г.Н., Бучарская А.Б.), нетоксичное, обладающее избирательным действием по отношению к опухолевым клеткам, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности, представляющее собой упаренный экстракт листьев аврана лекарственного путем измельчения, полученный путем измельчения их, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее.
Всесторонние испытания, направленные на определение путей и механизмов, за счет которых реализуется противоопухолевый эффект экстракта аврана привели к открытию у него способности избирательно действовать на опухолевые клетки, одновременно активировать их апоптоз и препятствовать формированию их резистентности.
Сравнительная реакция неопухолевых (SPEV) и опухолевых клеток (Hela) в тесте «живые и мертвые»
Для исследования противоопухолевой активности экстракта аврана выбраны культуры неопухолевых (SPEV) и опухолевых клеток рака шейки матки Hela в тесте «живые и мертвые» при двойном окрашивании флуоресцентными красителями: акридинового оранжевого (окрашивающий в зеленый цвет только живые клетки) и йодистого пропидия (интеркалирующий через разрушенную мембрану ядра погибающих или уже погибших клеток и окрашивающий их в красно-оранжевый цвет). Применение одновременно двух красителей позволяет выявлять количество погибших (окрашивание в красный цвет) и живых клеток (окрашивание в зеленый цвет) с аутофагосомами и клеток, в которых запустился апоптоз. Были выбраны следующие концентрации экстракта: 0,375 мг/мл, 0,75 мг/мл, 1,5 мг/мл, 3 мг/мл, 6 мг/мл, 12 мг/мл, 24 мг/мл.
Под действием экстракта на клети SPEV наблюдали нелинейную зависимость: среднее количество клеток (СКК) при концентрациях от 0,375 мг/мл до 1,5 мг/мл было ниже, чем в контроле, а, начиная с концентрации 3 мг/мл, было выше, чем в контроле (табл. 1). В отношении клеток Hela, наоборот, наблюдалась линейная зависимость: с увеличением концентрации экстракта СКК становилось меньше, и возрастало количество мертвых клеток (табл. 1).
На фиг. 1 представлена клеточная культура Hela под действием экстракта аврана в двух концентрациях: 0,75 мг/мл (А) и 3 мг/мл (Б); в концентрации 0,75 мг/мл экстракт обладает выраженной апоптотической активностью, а в концентрации 3 мг/мл большая часть клеток погибла и окрашена в красный цвет. На фиг. 2 представлено сравнение процентного содержания мертвых клеток SPEV и Hela под действием экстракта аврана: по вертикали отмечен процент мертвых клеток, по горизонтали - исследованные концентрации. Видно, что при воздействии на SPEV концентрации до 1,5 мг/мл мертвые клетки отсутствовали, в то время, как при воздействии на Hela гибель клеток наблюдалась даже при минимальных концентрациях. Следовательно, опухолевые клетки оказались более чувствительными действию даже небольших концентраций экстракта аврана.
В экспериментах мы наблюдали эффекты каропикноза и кариорексиса. Эффект кариопикноза мы рассматривали, как один из этапов апоптоза или некробиоза клетки, предшествующих кариорексису и кариолизису. В результате кариопикноза ядро клетки уменьшалось в объеме, ядро таких клеток интенсивнее окрашивалось красителем, и эффект легко идентифицировался. В результате кариорексиса оболочка ядра клетки разрушалась и проникающие в цитоплазму клетки нуклеиновые кислоты образовывали отдельные глыбки или т.н. апоптотические тельца. По этим двум эффектам можно было устанавливать количество клеток, погибающих апоптозом.
Примечание: * достоверные отличия при р<0.05 и Т > между экспериментальной группой и контролем с помощью критерия Крамера-Уэлча.
Цитотоксичность экстракта аврана в культурах SPEV и Hela была отмечена при разных концентрациях: у клеток SPEV только при концентрации 4 мг/мл, у Hela уже при 0,375 мг/мл (табл. 1), что также свидетельствует об избирательной активности экстракта в отношении к опухолевым клеткам. При этом подавляющее большинство погибших опухолевых клеток при 0,375-1,5 мг/мл находилась на стадии пикноза, что свидетельствовало также и о высокой апоптотической активности экстракта.
Методом пробит анализа (Коросов А.В., Калинкина Н.М. Количественные методы экологической токсикологии Учебно-методическое пособие. - Петрозаводск: ПетрГУ, КНЦ, 2003. - 56 с.), учитывая все изученные концентрации экстракта на клеточные культуры SPEV и Hela, были рассчитаны концентрации, при которых в течение 24 ч после инкубации с экстрактом мертвых клеток оказывалось 50% (табл. 2). LC50 экстракта аврана в культуре Hela=0,375 мг/мл, а в культуре SPEV=2,5 мг/мл. Опухолевые клетки в шесть раз чувствительнее к действию экстракта, чем неопухолевые, что согласуется с данными по его цитотоксичности.
Таким образом, под действием экстракта аврана на культуру SPEV наблюдали нелинейную зависимость: малые концентрации вызывали уменьшение СКК. Чувствительность опухолевых клеток к экстракту была значительно выше, чем к неопухолевым, и была обусловлена концентрацией: с ее увеличением уменьшалось СКК и возрастало количество мертвых клеток. При этом экстракт уже при минимальной из исследованных концентраций (0,375 мг/мл) оказывал и цитостатическую, и цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток, обладая также и выраженным апоптотическим действием.
Далее для выявления общих тенденций клеточной гибели, в т.ч. и ПГК (апоптоза и аутофагии) под действием экстракта аврана нами были исследованы морфофункциональные изменения только в опухолевых клетках Неla через 24 ч в следующем диапазоне концентраций: 0,0937 мг/мл; 0,1875 мг/мл; 0,375 мг/мл; 0,75 мг/мл; 1,5 мг/мл; 3 мг/мл; 6 мг/мл.
Морфофункциональные изменения в опухолевых клетках рака шейки матки человека (Hela) при разных экспозициях экстрактов
Описание клеток в контроле. На фигуре 3 представлены клетки Hela через 24 ч в контроле при двойном флюоресцентном окрашивании акридиновым оранжевым и йодистым пропидием. Видно, что культура клеток Hela представлена неполным ровным монослоем клеток плотно прилегающих друг к другу и занимающих большую часть поверхности. В основном клетки прикреплены к подложке, открепленными от подложки определяли только единичные клетки. Форма клеток веретеновидная, грушевидная или полигональная. Встречали единичные клетки по типу синцития или симпласта. Клетки с гомогенной цитоплазмой и четко оформленным ядром, при окраске акридиновым оранжевым и йодистым пропидием в цитоплазме клеток в приядерной области определяли мелкие оранжевые гранулы лизосомы. Появление мертвых клеток единично. СКК=108,7 (табл. 3).
Примечание: * указаны достоверные отличия с контролем при Т>1.96 и р<0.05
На фиг. 4 А видно, что количество ядрышек варьировало от одного до четырех, чаще два - три, что свидетельствовало об активном синтезе рРНК в ядрышко образующих зонах хромосом. На фиг. 4 Б в единичных клетках были встречены одиночные аутофагосомы, не соединенные с лизосомами. На фигуре 4 В представлена единичная клетка с двумя крупными аутофагосомами, округлой формы и со смещенным к периферии ядром. Апоптотических телец в контроле не выявлено.
После инкубации с экстрактом аврана. На фиг. 5 представлены клетки Hela через 24 ч при концентрации 0,1875 мг/мл: выявлены клетки в основном полигональной формы, фрагментарно представлен монослой, стрелками обозначены аутофагосомы. Активность ядрышковых организаторов сохранялась, количество ядрышек в ядре чаще от двух до трех. СКК по сравнению с контролем при воздействии экстракта при концентрациях от 0,0937 ло 3 мг/мл сократилось в два раза, а при концентрации 6 мг/мл - в три раза, что свидетельствовало о высокой цитостатической активности экстракта. Процент мертвых клеток прямо пропорционально увеличивался, начиная от концентрации 0,1875 мг/мл (табл. 3), т.е. экстракт обладал и значительной цитотоксической активностью. При этом большинство погибших клеток находилась на стадии пикноза, что свидетельствовало о высокой апоптотической активности экстракта.
Максимальная аутофагическая активность экстракта наблюдалась при концентрациях 0,0937 и 0,1875 мг/мл (табл. 3). Образование аутофагосом при концентрации 0,0937 мг/мл свидетельствовало об активном действии экстракта на опухолевые клетки, с помощью аутофагии клетки не только пытались выживать, но и образовывать конгломераты с выраженными цитоплазматическими контактами. При большей концентрации - 0,1875 мг/мл агломерации клеток и цитоплазматические контакты уже не образовывались. Выявлена достаточно четкая тенденция - при резком падении количества клеток с аутофагосомами, резко увеличивается количество мертвых клеток Hela (табл. 3), что подтверждает роль аутофагии при выживании опухолевой клетки в условиях токсического стресса и в т.ч. и противоопухолевой терапии.
На фиг. 6 А видно, что при концентрациях экстракта, начиная с концентрации 0,375 мг/мл форма клеток Hela через 24 ч резко поменялась на овальную, что свидетельствовало об уменьшении связи клеток с подложкой, их откреплении от подложки, клетки лежали отдельными группами, не образуя монослоя. При этом резко сократилось число клеток с аутофагосомами, при концентрации 0,75 мг/мл аутофагосомы не образовывались. Количество ядрышек в ядре сократилось до одного, при этом наблюдалась их более слабая окраска, что свидетельствовало о снижении активности ядрышковых организаторов. На фигуре 6 Б представлены клетки с ярким свечением ядра, что свидетельствовало о конденсации хроматина и запуске апоптоза, но апоптотических телец было немного (табл. 3). На фигуре 6 В представлены единичные клетки с аутофагосомами.
При концентрации 1,5 мг/мл количество мертвых клеток было более 40%. (табл. 3) Непогибшие клетки были открепленными от подложки. Активность ядрышковых организаторов отсутствовала.
На фиг. 7 видно, что при концентрации 3 мг/мл практически все клетки Hela были погибшими; аутофагическая активность отсутствовала. В небольшом количестве выявлены апоптотические тельца.
В результате экстракт аврана уже в первые сутки воздействия обладал цитостатической и цитотоксической активностью. Кроме того, даже минимальные концентрации экстракта способствовали максимальному образованию аутофагосом, что свидетельствовало о его высокой активности в отношении опухолевых клеток. Полученные нами данные в эксперименте in vitro вполне согласуются с данными экспериментов in vivo, проведенных на крысах с перевиваемыми опухолями (Наволокин Н.А., Мудрак Д.А., Полуконова Н.В., Тычина С.А., Байтман Т.П., Корчаков Н.В., Воронков М.О., Бучарская А.Б., Маслякова Г.Н. Сравнение противоопухолевой и антикахексической активности флавоноидсодержащих экстрактов в эксперименте на животных с перевитой саркомой 45 // Российский биотерапевтический журнал. 2016. Т. 15. №1. С. 72-73; Наволокин Н.А., Мудрак Д.А., Полуконова К.В., Бучарская А.Б., Тычина С.А., Корчаков Н.В., Маслякова Г.Н. Патоморфоз перевитого рака почки (РА) у лабораторных крыс при введении флавоноидсодержащего экстракта аврана лекарственного (Gratiolaofficinalis L.) // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2017. Т. 80. №6. С. 19-23; Наволокин НА., Мудрак Д.А., Полуконова Н.В., Бучарская А.Б., Маслякова Г.Н. Влияние экстракта аврана лекарственного (Gratiola officinalis L.) на пролиферативную активность и запуск апоптоза в клетках перевиваемой саркомы 45 лабораторных крыс // В книге: Актуальные вопросы фундаментальной, экспериментальной и клинической морфологии. Материалы Всероссийской конференции молодых специалистов. 2017. С. 85-87; Navolokin N.A., Mudrak D.A., Bucharskaya А.В., Matveeva О. V., Tychina S.A., Polukonova N. V., Maslyakova G.N. Effect of flavonoid-containing extracts on the growth of transplanted sarcoma 45, peripheral blood and bone marrow condition after oral and intramuscular administration in rats // Russian Open Medical Journal. 2017. T. 6. №3. C. 304.) и свидетельствуют о выраженной противоопухолевой активности экстракта.
На фигуре 8А представлена зависимость между процентом клеток с аутофагосомами и концентрацией экстракта аврана, а также между процентом мертвых клеток в культуре Hela и концентрацией экстракта. Для выявления взаимосвязи между процентом клеток с аутофагосомами и концентрацией экстракта аврана был проведен корреляционный анализ методом Спирмана; для оценки взаимосвязи показателей был использован непараметрический критерий Спирмана. В результате анализа была выявлена обратная двусторонняя взаимосвязь средней силы (r=-0.56) высокой статистической значимости (р=0.004) уже в первые 24 ч. эксперимента. На фиг. 8А видно, что при концентрации 0,75 мг/мл экстракт ингибирует процесс образования аутофагосом и начинается резкая гибель опухолевых клеток, следовательно, эта концентрация эффективна в преодолении формирования резистентности опухолевых клеток.
В то время, как на фиг 8 Б видно, что при действии противоопухолевого экстракта бессмертника {Ивличев А.В., Мудрак Д.А., Наволокин Н.А., Афанасьева Г.А., Тычина С.А., Корчаков М.О., Полуконова Н.В., Бучарская А.Б., Маслякова Г.Н. Активность перекисного окисления липидов при пероральном введении флавоноидсодержащего экстракта бессмертника песчаного на фоне перевиваемого рака печени РС-1 // Российский биотерапевтический журнал. 2016. Т. 15. №1. С. 42-43; Наволокин Н.А., Мудрак Д.А., Полуконова Н.В., Тычина С.А., Канаева Т.В., Бучарская А.Б., Маслякова Г.Н. Антикахексическая и противоопухолевая активность флавоноидсодержащего экстракта бессмертника песчаного (Helichnysum arenarium) при пероральном введении крысам с перевитой саркомой-45 // Злокачественные опухоли. 2016. №4-S1 (20). С. 329-330) на культуру клеток Hela обратной зависимости между процентом клеток с аутофагосомами и концентрации экстракта не выявлено, что свидетельствует об отсутствии способности этого экстракта препятствовать формированию резистентности опухолевых клеток за счет блокирования на высоких концентрациях аутофагии.
Таким образом, экстракт аврана обладает одновременно избирательным действием на опухолевые клетки, активирует их апоптоз и препятствует формированию их резистентности за счет блокирования на высоких концентрациях аутофагии.
Пример 1
Брали культуры неопухолевых (SPEV) и опухолевых клеток рака шейки матки Hela в тесте «живые и мертвые» при двойном окрашивании флуоресцентными красителями: акридинового оранжевого (окрашивающий в зеленый цвет живые клетки) и йодистого пропидия (интеркалирующий через разрушенную мембрану ядра погибающих или уже погибших клеток и окрашивающий их в красно-оранжевый цвет)и противоопухолевый растительный экстракт аврана лекарственного (экстракт получали способом, указанным в Патенте на изобретение RUS 2482863 15.02.2012. Способ получения сухого экстракта из растительного сырья, обладающего биологической активностью Полуконова КВ., Наволокин НА., Дурнова Н.А., Маслякова Г.К, Бучарская А.Б.).
Опухолевые и неопухолевые клетки были получены из криобанка коллекции клеточных культур лаборатории вирусологии (г. Саратов) научно-исследовательской ветеринарной станции РАСХН. Культивирование проводилось в пластиковых флаконах в среде RPMI4 (10% эмбриональной сыворотки, гентамицин, ампициллин, амфотерицин).
Эксперименты проводили в 96 луночных культуральных планшетах - одна контрольная и пять экспериментальных. Контролем служили клетки в питательной среде без добавления экстракта, выросших в течение суток. В 21 лунку внесли водный раствор экстракта аврана по три лунки каждой концентрации и три лунки были контрольными. Анализировались следующие концентрации: 0,375 мг/мл, 0,75 мг/мл, 1,5 мг/мл, 3 мг/мл, 6 мг/мл, 12 мг/мл, 24 мг/мл.
Клетки культивировали в CO2-инкубаторе при 37°С в течение 24 часов, после чего окрашивали. В качестве красителя использовали йодистый пропидий, проникающий в нежизнеспособные клетки за счет разрушения их мембраны.
Для визуализации клеток использовали режим регистрации флюоресценции. Световой микроскоп Leica DM 2500 с дополнительным галогеновым осветителем Leica CLS 150, позволяющим освещать объект с двух сторон сбоку, для реализации режима темного поля. Захват и анализ изображений проводили с помощью цифровой видеокамеры LeicaDFC 420 С и программного обеспечения LeicaApplicationSuite V 3.1. Конфокальный микроскоп LeicaLSM SP-5 (LeicaMicrosistems, Германия) в режиме регистрации флюоресценции со спектральным сдвигом соответствующим используемым флюорофорам. Для обсчета клеток использовали программное обеспечение ImageJ.
Для анализа клеток в контрольной и экспериментальной культурах были использованы следующие показатели: среднее количество клеток (СКК), процент количество мертвых клеток в результате такого воздействия от количества всех клеток, процент клеток с аутофагосомами от количества только живых клеток, после чего устанавливали корреляцию между двумя последними показателями.
Под действием экстракта на клети SPEV наблюдали нелинейную зависимость: среднее количество клеток (СКК) при концентрациях от 0,375 мг/мл до 1,5 мг/мл было ниже, чем в контроле, а, начиная с концентрации 3 мг/мл, было выше, чем в контроле (табл. 1). В отношении клеток Hela, наоборот, наблюдалась линейная зависимость: с увеличением концентрации экстракта СКК становилось меньше, и возрастало количество мертвых клеток (табл. 1).
На фигуре 1 представлена клеточная культура Hela под действием экстракта аврана в двух концентрациях: 0,75 мг/мл (А) и 3 мг/мл (Б); в концентрации 0,75 мг/мл экстракт обладает выраженной апоптотической активностью, а в концентрации 3 мг/мл большая часть клеток погибла и окрашена в красный цвет. На фигуре 2 представлено сравнение процентного содержания мертвых клеток SPEV и Hela под действием экстракта аврана: по вертикали отмечен процент мертвых клеток, по горизонтали - исследованные концентрации. Видно, что при воздействии на SPEV до концентрации 1,5 мг/мл мертвые клетки отсутствовали, в то время, как при воздействии на Hela гибель клеток наблюдалась даже при минимальных концентрациях. Следовательно, опухолевые клетки оказались более чувствительными действию даже небольших концентраций экстракта аврана.
Цитотоксичность экстракта аврана в культурах SPEV и Hela была отмечена при разных концентрациях: у клеток SPEV только при концентрации 4 мг/мл, у Hela уже при концентрации 0,375 мг/мл (табл. 1), что также свидетельствует об избирательной активности экстракта в отношении к опухолевым клеткам. При этом подавляющее большинство погибших опухолевых клеток при концентрациях от 0,375 до 1,5 мг/мл находилась на стадии пикноза, что свидетельствовало также и о высокой апоптотической активности экстракта.
Методом пробит анализа (Коросов А.В., Калинкина Н.М. Количественные методы экологической токсикологии Учебно-методическое пособие. - Петрозаводск: ПетрГУ, КНЦ, 2003. - 56 с.), учитывая все изученные концентрации экстракта на клеточные культуры SPEV и Hela, были рассчитаны концентрации, при которых в течение 24 ч после инкубации с экстрактом мертвых клеток оказывалось 50% (табл. 2). LC50 экстракта аврана в культуре Hela=0,375 мг/мл, а в культуре SPEV=2,5 мг/мл. Опухолевые клетки в шесть раз чувствительнее к действию экстракта, чем неопухолевые, что согласуется с данными по его цитотоксичности.
Таким образом, чувствительность опухолевых клеток к экстракту аврана была значительно выше, чем к неопухолевым, и была обусловлена концентрацией: с ее увеличением уменьшалось СКК и возрастало количество мертвых клеток. При этом экстракт уже при минимальной из исследованных концентраций (0,375 мг/мл) оказывал и цитостатическую, и цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток, обладая также и выраженным апоптотическим действием.
Пример 2
Брали культуру опухолевых клеток рака шейки матки Hela в тесте «живые и мертвые» при двойном окрашивании флуоресцентными красителями: акридинового оранжевого (окрашивающий в зеленый цвет только живые клетки) и йодистого пропидия (интеркалирующий через разрушенную мембрану ядра погибающих или уже погибших клеток и окрашивающий их в красно-оранжевый цвет) и противоопухолевый растительный экстракт аврана лекарственного (экстракт получали способом, указанным в Патенте на изобретение RUS 2482863 15.02.2012. Способ получения сухого экстракта из растительного сырья, обладающего биологической активностью Полуконова Н.В., Наволокин Н.А., Дурнова Н.А., Маслякова Г.Н, Бучарская А.Б.).
Опухолевые клетки рака шейки матки HELA были получены из криобанка коллекции клеточных культур лаборатории вирусологии (г. Саратов) научно-исследовательской ветеринарной станции РАСХН. Культивирование проводилось в пластиковых флаконах в среде RPMI 4 (10% эмбриональной сыворотки, гентамицин, ампициллин, амфотерицин).
Эксперименты проводили в 96 луночных культуральных планшетах - одна контрольная и пять экспериментальных. Контролем служили клетки в питательной среде без добавления экстракта, выросших в течение суток. В 21 лунку внесли водный раствор экстракта аврана по три лунки каждой концентрации и три лунки были контрольными. Анализировались следующие концентрации: 0,0937, 0,1875, 0,375, 0,75, 1,5, 3,6 мг/мл.
Клетки культивировали в CO2-инкубаторе при 37°С в течение 24 часов, после чего окрашивали. В качестве красителя использовали йодистый пропидий, проникающий в нежизнеспособные клетки за счет разрушения их мембраны.
Для визуализации клеток использовали режим регистрации флюоресценции. Световой микроскоп LeicaDM 2500 с дополнительным галогеновым осветителем Leica CLS 150, позволяющим освещать объект с двух сторон сбоку, для реализации режима темного поля. Захват и анализ изображений проводили с помощью цифровой видеокамеры Leica DFC 420 С и программного обеспечения Leica Applications uite V 3.1. Конфокальный микроскоп Leica LSM SP-5 (Leica Microsistems, Германия) в режиме регистрации флюоресценции со спектральным сдвигом соответствующим используемым флюорофорам. Для обсчета клеток использовали программное обеспечение ImageJ.
Для анализа клеток в контрольной и экспериментальной культурах были использованы следующие показатели: среднее количество клеток (СКК), процент количество мертвых клеток в результате такого воздействия от количества всех клеток, процент клеток с аутофагосомами от количества только живых клеток, после чего устанавливали корреляцию между двумя последними показателями.
Описание клеток в контроле. На фиг. 3 представлены клетки Hela через 24 ч в контроле при двойном флюоресцентном окрашивании акридиновым оранжевым и йодистым пропидием. Видно, что культура клеток Hela представлена неполным ровным монослоем клеток, плотно прилегающих друг к другу и занимающих большую часть поверхности. В основном клетки прикреплены к подложке, открепленными от подложки определяли только единичные клетки. Форма клеток веретеновидная, грушевидная или полигональная. Встречали единичные клетки по типу синцития или симпласта. Клетки с гомогенной цитоплазмой и четко оформленным ядром, при окраске акридиновым оранжевым и йодистым пропидием в цитоплазме клеток в приядерной области определяли мелкие оранжевые гранулы лизосомы. Появление мертвых клеток единично. СКК=108,7 (табл. 3). На фигуре 4 А видно, что количество ядрышек варьировало от одного до четырех, чаще два - три, что свидетельствовало об активном синтезе рРНК в ядрышкообразующих зонах хромосом. На фигуре 4 Б в единичных клетках были встречены одиночные аутофагосомы, не соединенные с лизосомами. На фигуре 4 В представлена единичная клетка с двумя крупными аутофагосомами, округлой формы и со смещенным к периферии ядром. Апоптотических телец в контроле не выявлено.
После инкубации с экстрактом аврана. На фиг. 5 представлены клетки Hela через 24 ч при концентрации 0,1875 мг/мл: выявлены клетки в основном полигональной формы, фрагментарно представлен монослой, стрелками обозначены аутофагосомы. Активность ядрышковых организаторов сохранялась, количество ядрышек в ядре чаще от двух до трех. СКК по сравнению с контролем при воздействии экстракта при 0,0937-3 мг/мл сократилось в два раза, а при 6 мг/мл - в три раза, что свидетельствовало о высокой цитостатической активности экстракта. % мертвых клеток прямо пропорционально увеличивался, начиная от концентрации 0,1875 мг/мл (табл. 3), т.е. экстракт обладал и значительной цитотоксической активностью. При этом большинство погибших клеток находилась на стадии пикноза, что свидетельствовало о высокой апоптотической активности экстракта. В диапазоне концентраций от 3 до 6 мг/мл при максимальной гибели клеток установить, каким именно образом происходила гибель, было невозможно.
Максимальная аутофагическая активность экстракта наблюдалась при концентрации 0,0937 и концентрации 0,1875 мг/мл (табл. 3). Образование аутофагосом при концентрации 0,0937 мг/мл свидетельствовало об активном действии экстракта на опухолевые клетки, с помощью аутофагии клетки не только пытались выживать, но и образовывать конгломераты с выраженными цитоплазматическими контактами. При большей концентрации - 0,1875 мг/мл агломерации клеток и цитоплазматические контакты уже не образовывались. Выявлена достаточно четкая тенденция - при резком падении количества клеток с аутофагосомами, резко увеличивается количество мертвых клеток Hela (табл. 3), что подтверждает роль аутофагии при выживании опухолевой клетки в условиях токсического стресса и в т.ч. и противоопухолевой терапии.
На фигуре 6 А видно, что при концентрациях экстракта, начиная с концентрации 0,375 мг/мл форма клеток Hela через 24 ч резко поменялась на овальную, что свидетельствовало об уменьшении связи клеток с подложкой, их откреплении от подложки, клетки лежали отдельными группами, не образуя монослоя. При этом резко сократилось число клеток с аутофагосомами, при концентрации 0,75 мг/мл аутофагосомы не образовывались. Количество ядрышек в ядре сократилось до одного, при этом наблюдалась их более слабая окраска, что свидетельствовало о снижении активности ядрышковых организаторов. На фигуре 6 Б представлены клетки с ярким свечением ядра, что свидетельствовало о конденсации хроматина и запуске апоптоза, но апоптотических телец было немного (табл. 3). На фигуре 6 В представлены единичные клетки с аутофагосомами.
При концентрации 1,5 мг/мл количество мертвых клеток было более 40%. Не погибшие клетки были открепленными от подложки. Активность ядрышковых организаторов отсутствовала.
На фиг. 7 видно, что при концентрации 3 мг/мл практически все клетки Hela были погибшими; аутофагическая активность отсутствовала. В небольшом количестве выявлены апоптотические тельца.
На фигуре 8 А представлена зависимость между процентом клеток с аутофагосомами и концентрацией экстракта аврана, а также между процентом мертвых клеток в культуре Hela и концентрацией экстракта. Для выявления взаимосвязи между процентом клеток с аутофагосомами и концентрацией экстракта аврана был проведен корреляционный анализ методом Спирмана; для оценки взаимосвязи показателей был использован непараметрический критерий Спирмана. В результате анализа была выявлена обратная двусторонняя взаимосвязь средней силы (r=-0.56) высокой статистической значимости (р=0.004) уже в первые 24 ч. эксперимента. На фиг. 8 А видно, что при концентрации 0,75 мг/мл экстракт ингибирует процесс образования аутофагосом и начинается резкая гибель опухолевых клеток, следовательно, эта концентрация эффективна в преодолении формирования резистентности опухолевых клеток.
Таким образом, экстракт аврана уже в первые сутки воздействия обладал цитостатической и цитотоксической активностью. Кроме того, в первые сутки даже минимальные концентрации экстракта способствовали максимальному образованию аутофагосом, что свидетельствовало о его высокой активности в отношении опухолевых клеток. Установлено, что экстракт аврана препятствует формированию резистентности опухолевых клеток за счет блокирования на высоких концентрациях аутофагии.
Пример 3.
Брали культуру опухолевых клеток карциномы почки (Сакi-1), полученной из банка РОНЦ им. Н.Н. Блохина при окрашивании флуоресцентным красителем Хёхст 33258: (окрашивающим в голубой цвет только живые клетки) и противоопухолевый растительный экстракт аврана лекарственного (экстракт получали способом, указанным в Патенте на изобретение RUS 2482863 15.02.2012. Способ получения сухого экстракта из растительного сырья, обладающего биологической активностью Полуконова К.В., Наволокин Н.А., Дурнова Н.А., Маслякова Г.Н., Бучарская А.Б.).Культивирование проводилось в пластиковых флаконах в среде RPMI 4 (10% эмбриональной сыворотки, гентамицин, ампициллин, амфотерицин).
Контролем служили клетки в питательной среде без добавления экстракта, выросших в течение суток. Анализировались следующие концентрации: 0,0352 мг/мл; 0,176 мг/мл; 0,88 мг/мл. Клетки культивировали в CO2-инкубаторе при 37°С в течение 24 часов, после чего окрашивали.
Для визуализации клеток использовали режим регистрации флюоресценции. Световой микроскоп LeicaDM 2500 с дополнительным галогеновым осветителем Leica CLS 150,. Захват и анализ изображений проводили с помощью цифровой видеокамеры LeicaDFC 420 С и программного обеспечения LeicaApplicationSuite V 3.1. Конфокальный микроскоп LeicaLSM SP-5 (LeicaMicrosistems, Германия) в режиме регистрации флюоресценции со спектральным сдвигом соответствующим используемым флюорофорам. Для обсчета клеток использовали программное обеспечение ImageJ.
Для анализа клеток в контрольной и экспериментальной культурах были использованы следующие показатели: среднее количество живых клеток (СКЖК), процент клеток с апоптозом от количества живых клеток, а также процент клеток в пикнозе и процент клеток с апоптотическими тельцами от количества клеток в апоптозе.
В контроле в клеточной культуре Caki через 24 ч. На фигуре 9 представлены Клетки линии CakiB контроле через 24 часа (А) и через 48 ч (Б) в режиме флюоресценции (при 435-485 нм), окраска красителем Хекст 33258, ув. 200. Признаков апоптоза в клетках не отмечали, СКЖК увеличивалось на 8% (табл. 4).
Различия достоверно отличаются при сравнении значений опытных и контрольной группах при * - P0.05, **-P<0.005, *** - P0.001
Влияние экстрактом аврана. Через 24 ч в культуре клеток Caki под воздействием экстрактом аврана в концентрации 0,0352 мг/мл (табл. 4) наблюдали отсутствие изменения СКЖК, увеличение количества клеток в апоптозе, находящихся преимущественно на стадии пикноза (на 31,5% больше). При действии экстрактом 0,176 мг/мл отмечали отсутствие изменения СКЖК и резкое увеличение количества клеток в апоптозе - на 11,2% (табл. 4), в основном за счет клеток на стадии пикноза (80,7%).
На фигуре 10 А представлены клетки линии Caki под действием экстракта аврана при концентрации 0,88 мг/мл через 24 ч (стрелкой обозначены апоптотические тельца): наблюдали резкое уменьшение на 63,3% СКЖК и резкое увеличение количества клеток в апоптозе на 17,6%, по сравнению с контролем, в основном за счет клеток на стадии пикноза (на 47,5% больше), индекс пролиферации 0,36, а отсутствие клеток на стадиях метафазы, анафазы и телофазы митоза.
Через 48 ч в культуре клеток Caki при действии экстрактом аврана при концентрациях 0,0352, 0,176 и 0,88 мг/мл наблюдали резкое снижение СКЖК на 97%, 99% и 99%, соответственно На фигуре 10 Б представлены клетки линии Caki под действием экстракта аврана при концентрации 0,88 мг/мл через 48 ч (стрелкой обозначен клеточный дебрис), режим флюоресценции при 435-485 нм, окраска красителем Хекст 33258. Ув. 200: отмечали резкое увеличение количества клеток, находящихся в апоптозе, на 22,9% (по 50% в стадии пикноза и апотозных телец) и клеточный дебрис, возникший при полной деградации клеток.
В результате установлена выраженная апоптотическая активность экстракта аврана в отношении культуры опухолевых клеток Caki; показана динамика развития клеточной гибели в результате апоптоза: пикноз ядра, образование апоптотических телец и возникновение клеточного дебриса в результате полной деградации опухолевых клеток.
Таким образом, противоопухолевый экстракт аврана, полученный определенным способом, обладает сразу тремя свойствами: избирательным действием на опухолевые клетки, активирующие их апоптоз и препятствующие формированию их резистентности.
Средство может быть использовано как самостоятельное для лечения злокачественных новообразований, так и при создании комбинированных химиопрепаратов.
Claims (1)
- Применение вещества, представляющего собой сухой экстракт листьев аврана лекарственного, полученного путем измельчения листьев, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее, в качестве средства, обладающего избирательным действием на опухолевые клетки, вызывающего в них апоптоз, блокирующего развитие аутофагии и препятствующего формированию их резистентности к терапии.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018105419A RU2694547C1 (ru) | 2018-02-13 | 2018-02-13 | Средство, обладающее избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018105419A RU2694547C1 (ru) | 2018-02-13 | 2018-02-13 | Средство, обладающее избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2694547C1 true RU2694547C1 (ru) | 2019-07-16 |
Family
ID=67309158
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018105419A RU2694547C1 (ru) | 2018-02-13 | 2018-02-13 | Средство, обладающее избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2694547C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2734143C1 (ru) * | 2020-03-04 | 2020-10-13 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России) | Способ комбинированной терапии рака печени РС-1 в эксперименте |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2535155C1 (ru) * | 2013-05-21 | 2014-12-10 | Государственное Бюджетное Общеобразовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Саратовский Государственный Медицинский Университет Имени В.И. Разумовского" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Средство, обладающее противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием |
| RU2578440C1 (ru) * | 2015-04-13 | 2016-03-27 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Саратовский Государственный Медицинский Университет Имени В.И. Разумовского" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Средство для лечения опухолевой кахексии |
-
2018
- 2018-02-13 RU RU2018105419A patent/RU2694547C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2535155C1 (ru) * | 2013-05-21 | 2014-12-10 | Государственное Бюджетное Общеобразовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Саратовский Государственный Медицинский Университет Имени В.И. Разумовского" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Средство, обладающее противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием |
| RU2578440C1 (ru) * | 2015-04-13 | 2016-03-27 | Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Саратовский Государственный Медицинский Университет Имени В.И. Разумовского" Министерства Здравоохранения Российской Федерации | Средство для лечения опухолевой кахексии |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| НАВОЛОКИН Н.А. и др. Оценка противоопухолевой и антикахексической активности экстракта Аврана лекарственного (Gratiola officinalis L.) у крыс сперевитой саркомой 45 //Сибирский онкологический журнал, 2016, т.15 N1, стр.37-43. * |
| НАВОЛОКИН Н.А.и др. Морфология внутренних органов и опухоли лабораторных крыс с перевитым раком печени РС-1 при пероральном введении флавоноидсодержащих экстрактов Аврана лекарственного (Gratoola officinalis L.) и кукурузы антоциановой (Zea mays L.) //Саратовский научно-медицинский журнал, 2013, т.9, N2, стр.213-220. * |
| НАВОЛОКИН Н.А.и др. Морфология внутренних органов и опухоли лабораторных крыс с перевитым раком печени РС-1 при пероральном введении флавоноидсодержащих экстрактов Аврана лекарственного (Gratoola officinalis L.) и кукурузы антоциановой (Zea mays L.) //Саратовский научно-медицинский журнал, 2013, т.9, N2, стр.213-220. НАВОЛОКИН Н.А. и др. Оценка противоопухолевой и антикахексической активности экстракта Аврана лекарственного (Gratiola officinalis L.) у крыс сперевитой саркомой 45 //Сибирский онкологический журнал, 2016, т.15 N1, стр.37-43. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2734143C1 (ru) * | 2020-03-04 | 2020-10-13 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России) | Способ комбинированной терапии рака печени РС-1 в эксперименте |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fayyad et al. | Anticancer activity of Spirulina platensis methanolic extracts against L20B and MCF7 human cancer cell lines | |
| Bragadeeswaran et al. | Bioactive potential of sea urchin Temnopleurus toreumaticus from Devanampattinam, Southeast coast of India | |
| RU2694547C1 (ru) | Средство, обладающее избирательным действием на опухолевые клетки, активирующее их апоптоз и препятствующее формированию их резистентности | |
| Gupta et al. | Marine resource: A promising future for anticancer drugs | |
| Ruiz-Torres et al. | Marine invertebrate extracts induce colon cancer cell death via ROS-mediated DNA oxidative damage and mitochondrial impairment | |
| Mathi et al. | In-vitro and in-silico characterization of Sophora interrupta plant extract as an anticancer activity | |
| CN104840482B (zh) | 一种中药有效组分组合物及其用途 | |
| Dwaish | Anti-dermatophytes activity of some algal extracts isolated From Baghdad City-Iraq | |
| Dalkılıç et al. | In vitro cytotoxic effects of Smilax aspera L. roots on cancer cell lines | |
| Alyami et al. | Retama monosperma chemical profile, green synthesis of silver nanoparticles, and antimicrobial potential: a study supported by network pharmacology and molecular docking | |
| Hussein et al. | Cytotoxicity and 1H NMR metabolomics analyses of microalgal extracts for synergistic application with Tamoxifen on breast cancer cells with reduced toxicity against Vero cells | |
| CN105541562B (zh) | 倍半萜醌类化合物Dysiherbols A及其制备方法和用途 | |
| Amini et al. | The p53 modulated cytotoxicity of ophiocoma scolopendrina polysaccharide against resistance ovarian cancer cells | |
| Al-Senosy et al. | In vitro Antiproliferation Effect of Atriplex halimus L. Crude Extract on Human Cell Lines by Induction of Apoptosis and G2/M phase Arrest. | |
| Dofuor et al. | In vitro effects and mechanisms of action of Bidens pilosa in Trypanosoma brucei | |
| Rahmatika et al. | Inhibitory effects of viral infection on cancer development | |
| Homayouni-Tabrizi et al. | Silver–palm pollen nanocomposite exhibits antiproliferative, antioxidant, and proapoptotic properties on MCF-7 breast cancer cells | |
| CN104856980A (zh) | 四氢姜黄素的医药用途 | |
| Kyadari et al. | Antiangiogenic and antiproliferative assessment of cyanobacteria | |
| CN110934944A (zh) | 延龄草总皂苷的提取方法及制药用途 | |
| CN110123815A (zh) | 荷叶碱和荷叶提取物作为制备治疗萎缩性胃炎和/或阻断胃炎癌转化发生药物的应用 | |
| Lalrinzuali et al. | Sonapatha (Oroxylum indicum) mediates cytotoxicity in cultured HeLa cells by inducing apoptosis and suppressing NF-κB, COX-2, RASSF7 and NRF2 | |
| RU2693829C1 (ru) | Способ определения минимальной эффективной концентрации противоопухолевого лекарственного средства, ингибирующего цитопротекторную аутофагию in vitro | |
| Khadija et al. | Effect of ethanolic extract of Chlorella sp. on Entamoeba histolytica parasite in vivo. | |
| RU2664252C1 (ru) | Штамм микроскопического гриба Fusarium equiseti, содержащий биологически активные вещества, проявляющие противоопухолевую и противовирусную активность |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210214 |