RU2693633C1 - Pharmaceutical composition for treating consequences of craniocerebral injury and method for production thereof (embodiments) - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine; pharmaceuticals.

SUBSTANCE: present invention refers to medicine and pharmaceutical industry. Drug for increasing motor activity and improving motor function of extremities after craniocerebral injury contains as active principle a mixture of bis{2-[(2E)-4-hydroxy-4-oxobut-2-enyloyloxy]-N,N-diethylethananium}butanedioate (DEAE) and calcium hydrophosphate with content of DEAE in the initial mixture of 0.6 to 85 wt. %. Excipients are selected from a group comprising microcrystalline cellulose, lactose, starch, mannitol, sodium starch glycolate, sodium croscarmellose, polyvinylpyrrolidone, magnesium stearate and calcium stearate. Drug is presented in the form of a tablet or capsule. Method for preparing a drug comprises mixing liquid DEAE with calcium hydrophosphate and excipients while stirring, separation of precipitated crystals by filtration and drying thereof under vacuum or introduction into liquid DEAE as a seed of crystals obtained by holding liquid DEAE at temperature of 0±1 °C for 2–3 months, recrystallization of residue and its mixing with calcium hydrophosphate and auxiliary substances.

EFFECT: medicinal agent according to the invention combines efficacy in treating the consequences of craniocerebral injury with ease of use of the preparation in a solid dosage form for oral administration.

7 cl, 7 tbl, 9 ex

Description

Настоящее изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности, а именно к пероральным лекарственным формам, содержащим химические соединения для лечения последствий черепно-мозговой травмы (ЧМТ) и способам их получения.The present invention relates to medicine and the pharmaceutical industry, namely to oral dosage forms containing chemical compounds for the treatment of the effects of traumatic brain injury (TBI) and methods for their preparation.

Под черепно-мозговой травмой понимается комплекс контактных повреждений (мягких тканей лица и головы, костей черепа и лицевого скелета) и внутричерепных повреждений, имеющих единый механизм и давность образования (httр://ru.wikiреdiа.org/wi-ki/Черепно-мозговая_травма). ЧМТ, как правило, происходит в связи с несчастными случаями и часто приводят к развитию нарушения двигательной активности или умственных способностей, что способствует повышенной заболеваемости пациентов, выживших после аварии.A craniocerebral injury is a complex of contact injuries (soft tissues of the face and head, bones of the skull and facial skeleton) and intracranial injuries that have a single mechanism and duration of formation (http: //ru.wikire.ia.org/wi-ki/Craniocerebral trauma ). TBI, as a rule, occurs due to accidents and often leads to the development of an impaired motor activity or mental abilities, which contributes to an increased incidence of patients who survived the accident.

В настоящее время ЧМТ занимает первое место по наносимому суммарному медико-социальному и экономическому ущербу среди всех видов травм и является одной из главных причин инвалидизации населения. Количество лиц со стойкой нетрудоспособностью в результате перенесенной ЧМТ достигает 25-30%. При этом основной контингент пострадавших - лица трудоспособного возраста (от 20 до 50 лет). Общая летальность при ЧМТ, включая ЧМТ легкой и средней степени тяжести, составляет 5-10%, а при тяжелых формах ЧМТ возрастает до 41-85% (http://neurosklif.ru/Diseases/Head Injury). В связи с этим проблема лечения ЧМТ и ее последствий является актуальной в современной медицине и имеет большое социально-экономическое значение.Currently, TBI takes the first place in terms of total medical, social and economic damage among all types of injuries and is one of the main causes of population disability. The number of persons with permanent disability as a result of postponed TBI reaches 25-30%. At the same time, the main contingent of victims is persons of working age (from 20 to 50 years). The overall mortality rate for TBI, including TBI of mild and moderate severity, is 5-10%, and for severe forms of TBI it increases to 41-85% (http://neurosklif.ru/Diseases/Head Injury). In this regard, the problem of treatment of TBI and its consequences is relevant in modern medicine and has great socio-economic importance.

Среди зарегистрированных и разрешенных к медицинскому применению препаратов на Российском фармацевтическом рынке широкое распространение для лечения последствий ЧМТ получили Глиатилин^® (производитель Италфармако/Фармакор (Италия/Россия)) и его дженериковые версии - Церепро^® (производитель Верофарм (Россия)) и Церетон^® (производитель Сотекс (Россия)), содержащие в качестве действующего вещества холин альфосцерат (RU 2406506, 2010). Холин альфосцерат обладает холиномимети-ческим действием, стимулирует преимущественно центральные холиноре-цепторы. Препарат активирует церебральный кровоток, стимулирует метаболизм ЦНС, возбуждает ретикулярную формацию. У больного повышается настроение, стимулируется умственную деятельность, улучшается концентрация внимания, способность к запоминанию и воспроизведению полученной информации. Наряду с холин альфосцератом в качестве базисных средств фармакотерапии у больных с черепно-мозговой травмой используют другие производные аминоэтанола, в частности, деанолаацеглумат, а также цитиколин. (Регистр лекарственных средств России, 2007 (15). М.: «РЛС», 2007, с. 973). Эти препараты способны оптимизировать холинергическую передачу в ЦНС, снижать выраженность воспаления и окислительного стресса в поврежденных нейронах, а также стимулировать нейро- и ангиогенез. Предлагается также использовать антагонист рецептора NK-1 2-(3,5-бис-трифторметил-фенил)-N-метил-N-(6-морфолин-4-ил-4-орто-то-лилпиридин-3-ил)изо-бутирамида (RU 2304435, 2007); 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината (RU 2252023, 2004).Among the registered and approved for medical use in the Russian pharmaceutical market, Gliatilin ^® (manufactured by Italfarmaco / Pharmacor (Italy / Russia)) and its generic versions - Cerepro ^® (manufactured by Veropharm (Russia)) and Tsereton ^® ( Sotex (Russia) manufacturer, containing choline alfoscerate as an active substance (RU 2406506, 2010). Choline alfoscerat has a cholinomic-mimic effect, mainly stimulates central cholinergic receptors. The drug activates cerebral blood flow, stimulates the metabolism of the central nervous system, stimulates the reticular formation. The patient's mood improves, mental activity is stimulated, concentration of attention, ability to memorize and reproduce the received information improves. Along with choline alfoscerate, other aminoethanol derivatives, in particular, deanolacethlumate, as well as citicoline, are used as the basic means of pharmacotherapy in patients with traumatic brain injury. (Register of medicines of Russia, 2007 (15). M .: "Radar", 2007, p. 973). These drugs are able to optimize cholinergic transmission in the central nervous system, reduce the severity of inflammation and oxidative stress in damaged neurons, and also stimulate neuro-and angiogenesis. It is also proposed to use a receptor antagonist NK-1 2- (3,5-bis-trifluoromethyl-phenyl) -N-methyl-N- (6-morpholin-4-yl-4-ortho-to-lylpyridin-3-yl) from -butyramide (RU 2304435, 2007); 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine succinate (RU 2252023, 2004).

Так, как ЧМТ сопровождается накоплением в цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) токсических для ЦНС метаболитов (средне молекулярных олигопептидов, оксигемоглобина, билирубина и серотонина), появляющихся в результате деструкции мозговой ткани и кровоизлияния в субарахноидальное пространство, то перспективным в лечении ЧМТ является детоксикация ЦСЖ. В качестве лечения применяют осмодиуретики (маннитол, рео-глюман), барбитураты (тиопентал натрия, фенобарбитал), глюкокортикоиды (дексазон). (RU 2252023, 2004). Для лечения тяжелой ЧМТ, на фоне комплексной патогенетической терапии дополнительно эндолюмбально вводят пирацетам в дозе 600-800 мг (RU 2026071, 1995).So, as TBI is accompanied by accumulation in the cerebrospinal fluid (CSF) of toxic for the central nervous system metabolites (medium molecular oligopeptides, oxyhemoglobin, bilirubin and serotonin) resulting from the destruction of brain tissue and hemorrhage into the subarachnoid space, which is an event in the treatment of an MHC treatment. Osmodiuretics (mannitol, reo-gluman), barbiturates (sodium thiopental, phenobarbital), glucocorticoids (dexazone) are used as treatment. (RU 2252023, 2004). For the treatment of severe TBI, against the background of complex pathogenetic therapy, endolyumbalno is additionally administered to piracetam at a dose of 600-800 mg (RU 2026071, 1995).

Недостатками таких препаратов являются длительные сроки лечения, низкая эффективность и большая возможность осложнений.The disadvantages of such drugs are long periods of treatment, low efficiency and a greater possibility of complications.

Наиболее широко в практической медицине для лечения последствий ЧМТ в качестве лекарственного препарата используют мексидол (3-окси-6-метил-2-этилпиридин сукцинат). Действие мексидола заключается в антиоксидантном и мембранопротекторном эффектах. Мексидол существенно уменьшает повреждение липопротеиновых структур, восстанавливая активность эндогенной антиоксидантной системы [Смирнова И.Н., Федорова Т.Н., Танашян М.М., Суслина З.А. Клиническая эффективность и антиоксидантная активность мексидола при хронических цереброваскулярных заболеваниях // Нервные болезни. 2006. №1. - С. 33-36].Mexidol (3-hydroxy-6-methyl-2-ethylpyridine succinate) is used most widely in medical practice for treating the effects of TBI. The action of Mexidol is the antioxidant and membrane-protective effects. Mexidol significantly reduces damage to lipoprotein structures, restoring the activity of the endogenous antioxidant system [Smirnova I.N., Fedorova TN, Tanashyan M.M., Suslina Z.A. Clinical efficacy and antioxidant activity of Mexidol in chronic cerebrovascular diseases // Nervous diseases. 2006. №1. - p. 33-36].

Недостатками мексидола является недостаточная эффективность и опасность его применения при отеке мозга, остром повышении внутричерепного давлении, а также при нарушении функции почек. Не следует назначать препарат внутрь одновременно с его инфузией. (Универсальный справочник лекарственных средств (http://lekarstwo.ru/preparati/ nimodipine.htm).The disadvantages of Mexidol are insufficient efficacy and the danger of its use in brain swelling, an acute increase in intracranial pressure, and also in renal dysfunction. Do not prescribe the drug inside at the same time as its infusion. (Universal reference drugs (http://lekarstwo.ru/preparati/nimodipine.htm).

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является ранее синтезированное в ФГБОУ ВО СПХФА Минздрава России вещество - бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-енои-локси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоата (далее - ДЭАЭ) (RU 2600315, 2015), которое обладало нейропротекторным действием при использовании в качестве активного вещества, входящего в состав лекарственного средства на модели гипоксии (RU 2588365, 2016).The closest to the technical nature of the claimed invention is previously synthesized in the FSBEI HE SPHFA of the Ministry of Health of Russia substance - bis {2 - [(2E) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoxy-loxy] -N, N-diethylethanamine} butanedioate (hereinafter - DEAE) (RU 2600315, 2015), which had a neuroprotective effect when used as an active substance that is part of the drug on a hypoxia model (RU 2588365, 2016).

Полученное вещество представляло собой бесцветную или желтоватую некристаллизующуюся жидкость, обладающую неудовлетворительными технологическими свойствами, в частности, выраженной гигроскопичностью и невысокой температурой плавления, что осложняло хранение препарата длительное время, в частности, могло приводить к изменению фармакопейных и потребительских характеристик лекарственных форм (внешний вид, прочность и т.п.). Кроме того препарат не мог использоваться в таких наиболее удобных формах для перорального применения, как таблетки, капсулы и т.п., позволяющих сочетать необходимый терапевтический эффект и высокую точность дозирования и стабильность при хранении.The resulting substance was a colorless or yellowish non-crystallizing liquid with unsatisfactory technological properties, in particular, pronounced hygroscopicity and low melting point, which complicated storage of the drug for a long time, in particular, could lead to changes in the pharmacopoeial and consumer characteristics of the dosage forms (appearance, strength etc.). In addition, the drug could not be used in such the most convenient forms for oral administration, such as tablets, capsules, etc., allowing to combine the necessary therapeutic effect and high dosing accuracy and storage stability.

Задачей решаемой авторами, являлось созданием на основе ДЭАЭ препарата, сочетающего повышенную эффективность и безопасность при лечении последствий ЧМТ с получением оптимальной лекарственной формы на основе перевода активного начала в твердое состояние.The problem solved by the authors was the creation of a drug on the basis of DEAE, combining increased efficacy and safety in treating the effects of TBI with obtaining the optimal dosage form based on the translation of the active principle into a solid state.

Технический результат достигался использованием для этой цели лекарственной композиции, состоящей из ДЭАЭ и кальция гидрофосфата при содержании в смеси ДЭАЭ от 0,5 до 85% масс.The technical result was achieved by using for this purpose a medicinal composition consisting of DEAE and calcium hydrogen phosphate when the content of DEAE in the mixture is from 0.5 to 85% by weight.

Кальция гидрофосфат в данной композиции с одной стороны, выполняя функцию влагорегулятора, обеспечивает снижение гигроскопичности массы, способствуя ее кристаллизации, а с другой стороны, в результате комбинации ДЭАЭ с частицами гидрофосфата кальция происходит активация активного начала, что влияет на скорость протекания процессов в организме.Calcium hydrogen phosphate in this composition, on the one hand, performing the function of a moisture regulator, reduces the hygroscopicity of the mass, contributing to its crystallization, and on the other hand, as a result of the combination of DEAE with calcium hydrogen phosphate particles, the active principle is activated, which affects the rate of the body processes.

Композиция может использоваться как самостоятельно, так и в смеси со вспомогательными веществами. Использование композиции с содержанием ДЭАЭ менее 0,5% малоэффективно, а при содержании более 85% могут возникать технологические сложности при получении твердой формы композиции.The composition can be used both independently and in a mixture with excipients. Using a composition with a DEAE content of less than 0.5% is ineffective, and if it is more than 85%, there may be technological difficulties in obtaining the solid form of the composition.

Кальций гидрофосфат может использоваться при получении композиции, как в виде безводного порошка, так и виде кристаллогидратов, например, дигидрата. Лактоза может применяться в виде различных форм, например, безводной или дигидрата.Calcium hydrogen phosphate can be used in the preparation of the composition, either as an anhydrous powder or as a crystalline hydrate, for example, a dihydrate. Lactose can be used in various forms, for example, anhydrous or dihydrate.

В качестве вспомогательных веществ для получения фармацевтической композиции ДЭАЭ возможно использование добавок, разрешенных к применению в фармацевтической практике [Фармацевтическая разработка: концепция и практические рекомендации. Научно-практическое руководство для фармацевтической отрасли / под ред. Быковского С.Н., Василенко И.А. и др. - М.: Изд-во Перо, 2015. - 472 с., Алексеев К.В., Кедик С.А., Блынская Е.В. и др. Фармацевтическая технология. Твердые лекарственные формы / под ред. С.А. Кедика. - М.: Изд-во ИФТ. - 2011. - 662 с., Алексеев К.В., Грицкова И.А., Кедик С.А. Полимеры для фармацевтической технологии / под ред. С.А. Кедика. - М.: Изд-во ИФТ. - 2011. - 511 с]. К их числу относятся, в частности, следующие группы веществ:As auxiliary substances for the preparation of the DEAE pharmaceutical composition, the use of additives permitted for use in pharmaceutical practice is possible [Pharmaceutical development: concept and practical recommendations. Scientific and practical guide for the pharmaceutical industry / ed. Bykovsky S.N., Vasilenko I.A. and others - M .: Publishing house Perot, 2015. - 472 pp., Alekseev KV, Kedik SA, Blynskaya E.V. and others. Pharmaceutical technology. Solid dosage forms / ed. S.A. Kedika. - M .: Izd-in IFT. - 2011. - 662 p., Alekseev K.V., Gritskova I.A., Kedik S.A. Polymers for pharmaceutical technology / ed. S.A. Kedika. - M .: Izd-in IFT. - 2011. - 511 p.]. These include, in particular, the following groups of substances:

- наполнители: многоатомные спирты, аминокислоты, карбонаты и гидрокарбонаты щелочных и щелочноземельных металлов, органические кислоты, производные целлюлозы;- fillers: polyhydric alcohols, amino acids, carbonates and hydrogen carbonates of alkali and alkaline earth metals, organic acids, cellulose derivatives;

- дезинтегранты: различные крахмалы и их производные, натрия крос-кармеллоза, поливинилпирролидон;- disintegrants: various starches and their derivatives, sodium cross-carmellose, polyvinylpyrrolidone;

- опудривающие: соли стеариновой кислоты, кремния диоксид (аэро-сил),- dusting: salts of stearic acid, silicon dioxide (aero-sil),

- связующие: метилцеллюлоза, поливинилпирролидон, гидроксипро-пилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, сополимер винилпирролидона и винилацетата и др., спирты;- binders: methylcellulose, polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, carboxymethylcellulose, copolymer of vinylpyrrolidone and vinyl acetate, etc., alcohols;

- корригирующие вещества и ароматизаторы.- corrective substances and flavors.

Использование в настоящей фармацевтической композиции лактозы и крахмала в качестве наполнителей обеспечивает лекарственной форме получение необходимой массы и требуемых технологических свойств, в частности, увеличения сыпучести порошка и улучшения смачиваемости таблетки.The use of lactose and starch as fillers in the present pharmaceutical composition provides the dosage form with obtaining the required mass and the required technological properties, in particular, increasing the flowability of the powder and improving the wettability of the tablet.

Использование в качестве лубриканта магния стеарата в количестве до 1,0% уменьшает трение на контактных участках при прессовании таблеток. Вместо магния стеарата могут также применяться тальк, кальция стеарат, кислота стеариновая и любые другие антифрикционные вещества, приемлемые для этих целей.Use as a magnesium lubricant stearate in an amount of up to 1.0% reduces friction on contact areas during pressing of tablets. Instead of magnesium stearate, talc, calcium stearate, stearic acid and any other anti-friction substances acceptable for this purpose can also be used.

При этом наилучшие результаты достигались при использовании композиции следующего состава (% масс.): ДЭАЭ - 10-20; лактоза - 5-20; крахмал - 15-25; магния стеарат - 0,5-1,0; кальция гидрофосфат - остальное.The best results were achieved when using the composition of the following composition (% wt.): DEAE - 10-20; lactose - 5-20; starch - 15-25; magnesium stearate - 0.5-1.0; calcium phosphate - the rest.

Данная композиция позволяет получить сухую смесь с отличной сыпучестью, высокой прочностью, низким влагопоглощением и незначительным образованием пылевидной фракции в процессе производства и лекарственные формы на ее основе с необходимой распадаемостью, растворением, прочностью и приемлемым внешним видом.This composition allows to obtain a dry mixture with excellent flowability, high strength, low moisture absorption and a slight formation of dust-like fraction in the production process and dosage forms based on it with the necessary disintegration, dissolution, strength and acceptable appearance.

Заявляемый способ получения лекарственного средства по первому варианту включает в себя смешение жидкого ДЭАЭ, полученного по патенту RU 2600315, с кальция гидрофосфатом и вспомогательными веществами при перемешивании, отделение выпавших кристаллов фильтрованием и их сушкой под вакуумом. Способ позволяет получить порошкообразный продукт, обладающий высокой активностью при лечении последствий ЧМТ.The inventive method of obtaining a medicinal product in the first embodiment includes mixing liquid DEAE, obtained according to patent RU 2600315, with calcium hydrophosphate and excipients with stirring, separating the precipitated crystals by filtration and drying them under vacuum. The method allows to obtain a powdered product with high activity in the treatment of the effects of TBI.

По второму варианту в жидкий ДЭАЭ вводят качестве затравки кристаллы, полученные путем выдерживания жидкого ДЭАЭ при температуре 0±1°С в течение 2-3 месяцев. Выпадающие при этом кристаллы перекристаллизовывают, смешивают с кальция гидрофосфатом и вспомогательными веществами, выбранными из группы, включающей микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, крахмал, манит, натрия крахмал гликолят, натрия кросс-кармеллозу, поливинилпирролидон, магния стеарат и кальция стеарат и далее используют для получения пероральной лекарственной формы.According to the second variant, crystals obtained by keeping liquid DEAE at a temperature of 0 ± 1 ° C for 2-3 months are injected into the liquid DEAE. The crystals precipitated in this case are recrystallized, mixed with calcium hydrophosphate and auxiliary substances selected from the group consisting of microcrystalline cellulose, lactose, starch, mannitol, sodium starch glycolate, sodium cross-carmellose, polyvinylpyrrolidone, magnesium stearate and calcium teretete. dosage form.

Полученный целевой продукт представляет собой белый аморфный порошок, очень легко растворимый в воде, легко растворимый в спирте этиловом, практически нерастворимый в этилацетате.The obtained target product is a white amorphous powder, very easily soluble in water, easily soluble in ethyl alcohol, practically insoluble in ethyl acetate.

При этом проведенные исследования методами ¹Н- и ¹³С-ЯМР-спектроскопии показали, что химическая структура ДЭАЭ остается неизменной. В то же время предварительное смешение ДЭАЭ с кальция гидрофосфатом (вариант 1) придает лекарственному средству большую стабильность и меньшую гигроскопичность, что обеспечивает соответствие фармакопейным требованиям и его большую эффективность при лечении последствий ЧМТ.In this case, the studies performed by the methods of ¹ H- and ¹³ C-NMR spectroscopy showed that the chemical structure of DEAE remains unchanged. At the same time, the preliminary mixing of DEAE with calcium phosphate (option 1) gives the drug greater stability and less hygroscopicity, which ensures compliance with pharmacopoeial requirements and its greater effectiveness in treating the effects of TBI.

Сущность и преимущества заявляемого изобретения иллюстрируются следующими примерами.The nature and advantages of the claimed invention are illustrated by the following examples.

Пример 1. ДЭАЭ - содержащую жидкость, полученную по RU 2600315, выдерживали при температуре 0±1°С в течение 2 месяцев. Выпавшие при этом кристаллы сушили и вносили в качестве затравки в исходную ДЭАЭ - содержащую жидкость, после чего проводили ее кристаллизацию при перемешивании реакционной массы в течение 180±30 минут. Полученные кристаллы отфильтровывали в вакууме водоструйного насоса. Осадок промывали на фильтре дихлорметаном, сушили в сушилке полочного типа при температуре 45-50°С в течение 4-5 часов и использовали для дальнейших экспериментов 0,5 г ДЭАЭ-содержащей жидкости, полученной по патенту RU 2600315, тщательно смешивали с 0,05 г затравки, полученной по примеру 1, 82,5 г кальция гидрофосфата дигидратом и 15 г крахмала прежелатинизированного. Полученную композицию 1, содержащую 0,5% ДЭАЭ направляли на биологические испытания.Example 1. DEAE - containing liquid, obtained according to RU 2600315, kept at a temperature of 0 ± 1 ° C for 2 months. The crystals precipitated in this case were dried and introduced as seed into the initial DEAE - containing liquid, after which it was crystallized with stirring of the reaction mass for 180 ± 30 minutes. The resulting crystals were filtered under water jet vacuum. The precipitate was washed on the filter with dichloromethane, dried in a shelf-type dryer at a temperature of 45-50 ° C for 4-5 hours and used for further experiments 0.5 g of DEAE-containing liquid obtained according to RU 2600315, thoroughly mixed with 0.05 g of the seed obtained in example 1, 82.5 g of calcium hydrogen phosphate dihydrate and 15 g of pregelatinized starch. The resulting composition 1 containing 0.5% DEAE was sent for biological tests.

Пример 2. 25 г кальция гидрофосфата моногидрата, 6 г ДЭАЭ, синтезированного по RU 2600315, 5 г поливинилпирролидона поперечно сшитого, 7,7 г крахмала картофельного тщательно перемешивали, увлажняли достаточным количеством 5% раствором картофельного клейстера и гранулировали, после чего опудривали 0,45 г магния стеарата. Полученную композицию 2, содержащую 13,3% ДЭАЭ направляли на биологические испытания.Example 2. 25 g of calcium hydrophosphate monohydrate, 6 g of DEAE, synthesized according to RU 2600315, 5 g of polyvinylpyrrolidone cross stitched, 7.7 g of potato starch were thoroughly mixed, moistened with a sufficient amount of 5% solution of potato paste and granulated, then powdered 0.45 g magnesium stearate. The resulting composition 2, containing 13.3% DEAE sent for biological testing.

Пример 3. 7 г кальция гидрофосфата дигидрата, тщательно перемешивали, добавляли 3 г целлюлозы микрокристаллической, 3 г лактозы моногидрата, 7,7 г крахмала картофельного, 2 г натрия кроскармеллозы, увлажняли достаточным количеством 7% раствором картофельного клейстера и гранулировали. Полученный гранулят смешивали с 36 г ДЭАЭ, полученной по примеру 1, опудривали 0,6 г кальция стеарата. Полученную композицию 3, содержащую 60% ДЭАЭ направляли на биологические испытания.Example 3. 7 g of calcium hydrophosphate dihydrate, were thoroughly mixed, 3 g of microcrystalline cellulose, 3 g of lactose monohydrate, 7.7 g of potato starch, 2 g of croscarmellose sodium were added, moistened with a sufficient amount of 7% solution of potato paste and granulated. The obtained granulate was mixed with 36 g of DEAE obtained in Example 1, 0.6 g of calcium stearate was powdered. The resulting composition 3, containing 60% DEAE sent for biological testing.

Пример 4. Для оценки нейропротекторной и нейрореабилитационной активности новых композиций при черепно-мозговой травме использовалась модель контролируемого кортикального ушиба (Controlled cortical impact injury model, CCI) у крыс. Все эксперименты проводили в соответствии с Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики», Приказом Минздрава РФ от 01.04.16 г. №199н "Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики". Крыс содержали в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе, со свободным доступом к воде. Все опытные и контрольные животные были взяты из одного привоза и прошли карантин в течение 14 суток.Example 4. To assess the neuroprotective and neurorehabilitation activity of new compositions in traumatic brain injury, the Controlled cortical impact injury model (CCI) in rats was used. All experiments were carried out in accordance with the National Standard of the Russian Federation GOST R-53434-2009 "Principles of good laboratory practice", Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of April 1, 166 No. 1999 "On approval of rules of good laboratory practice". The rats were kept in standard vivarium conditions on a normal diet, with free access to water. All experimental and control animals were taken from one delivery and were quarantined for 14 days.

Исследования были выполнены на белых беспородных крысах самцах весом 250-300 г, полученных из питомника «Рапполово» (Ленинградская область). В контрольной группе было 20 крыс, по 10 в опытных группах, 15 - в группе интактных животных. Все манипуляции, проводимые на животных, были рассмотрены и одобрены на заседании биоэтической комиссии СПХ-ФА.The studies were performed on white outbred rats, males weighing 250-300 g, obtained from the nursery "Rappolovo" (Leningrad region). In the control group there were 20 rats, 10 in experimental groups, 15 in the group of intact animals. All manipulations carried out on animals were reviewed and approved at a meeting of the bioenerical committee of SPH-FA.

ЧМТ моделировали путем нанесения удара по участку сенсомоторной коры. Локализацию зоны сенсомоторной коры определяли по атласу стерео-таксических координат Paxinos G. и Watson С. [Paxinos G., Watson С. The rat brain in stereotaxic coordinates. 7^th edition. - Academic press. - 2013.- P. 12]. Для создания травмы, животных наркотизировали внутрибрюшинным введением раствора хлоралгидрата (400 мг/кг), после чего проводили трепанацию в левой лобной части черепа над зоной моторной коры. Центр трепанационного отверстия находился на 5,0 мм ростральнее и 2,5 мм медиальнее брегмы. После этого в трепанационное отверстие, помещали подвижный стальной поршень диаметром 3 мм с ходом 4 мм, по которому с высоты 10 см ударял скользящий в стальной трубке груз весом 50 г. Высверленную пластину возвращали на место и зашивали разрез кожи [Isaev N.K., Novikova S.V., Stelmashook E.V. et al. Mitochondria-targeted plastoquinone antioxidant skqrl detrauma-induced trauma-induced neurological deficit in rat //Biochemistry (Moscow). - 2012. -Vol. 77, №9. - P. 996-999].TBI was modeled by striking a portion of the sensorimotor cortex. The localization of the sensorimotor cortex zone was determined by the atlas of the stereo-taxic coordinates of Paxinos G. and Watson S. [Paxinos G., Watson C. The rat brain in stereotaxic coordinates. 7 ^th edition. - Academic press. - 2013.- P. 12]. To create an injury, the animals were anesthetized by intraperitoneal administration of a solution of chloral hydrate (400 mg / kg), and then trepanned in the left frontal part of the skull over the area of the motor cortex. The center of the burr hole was 5.0 mm rostral and 2.5 mm medial to the bregma. After that, a rolling steel piston with a diameter of 3 mm with a stroke of 4 mm was placed in the burr hole, from which a load of 50 g hit the steel pipe sliding from a height of 10 cm. Stelmashook EV et al. Mitochondria-targeted plastoquinone antioxidant skqrl detrauma-induced trauma-induced neurological deficit in rat // Biochemistry (Moscow). - 2012. -Vol. 77, No. 9. - P. 996-999].

Пример 5. 54 г кальция гидрофосфата, 10 г лактозы моногидрата, 20 г крахмала картофельного просеивали через сито с диаметром отверстий 0,5 мм и помещали в смеситель трехнаправленного действия. Постепенно при перемешивании добавляли необходимое количество увлажнителя - 10% крахмального клейстера до получения увлажненной, но сыпучей массы. Смесь тщательно перемешивали до равномерного распределения увлажнителя и протирали через сито-гранулятор с диаметром отверстий приблизительно 1,4 мм, после чего высушивали при температуре 65-75°С до остаточного содержания влаги не более 3%, затем добавляли 15 г ДЭАЭ, полученного по примеру 1. После этого в аппарат вносили необходимое количество магния стеарата и опудривали в течение 20 мин. Таблетную массу (далее композиция 4) прессовали с помощью таблетного пресса эксцентрикового или роторного типа (свойства таблетной массы приведены в таблице 1)Example 5. 54 g of calcium hydrogen phosphate, 10 g of lactose monohydrate, 20 g of potato starch were sieved through a sieve with a hole diameter of 0.5 mm and placed in a three-way mixer. Gradually, with stirring, the required amount of humidifier was added - 10% starch paste to obtain a moist but loose mass. The mixture was thoroughly mixed until the humidifier was evenly distributed and rubbed through a sieve granulator with a hole diameter of approximately 1.4 mm, then dried at a temperature of 65-75 ° C to a residual moisture content of not more than 3%, then 15 g of DEAE prepared as in Example 1. After that, the required amount of magnesium stearate was added to the apparatus and powdered for 20 minutes. Tablet weight (hereinafter Composition 4) was pressed using eccentric or rotary type tablet press (the properties of the tablet mass are shown in Table 1)

Пример 6. В условиях примера 5 получали композицию 5, содержащую (% масс.): ДЭАЭ - 13, лактозы моногидрат - 20; крахмал картофельный - 20; маннит - 5, натрия крахмал гликолят - 2, магния стеарат - 0,5; кальция гидрофосфата дигидрат - 39,5. Полученную композицию 5 помещали в капсулы, направляли на биологические испытания.Example 6. In the conditions of example 5 was obtained composition 5, containing (% wt.): DEAE - 13, lactose monohydrate - 20; potato starch - 20; mannitol - 5, sodium starch glycolate - 2, magnesium stearate - 0.5; calcium hydrophosphate dihydrate - 39.5. The resulting composition 5 was placed in capsules, sent for biological tests.

Пример 7. В условиях примера 5 получали композицию 6, содержащую (% масс.): ДЭАЭ - 15; целлюлоза микрокристаллическая - 13, лактозы моногидрат - 22; крахмал картофельный - 20; кальция стеарат - 0,8; кальций гидрофосфат - 29,2. Полученной композицией наполняли капсулы и направляли на биологические испытания.Example 7. In the conditions of example 5 was obtained composition 6, containing (% wt.): DEAE - 15; microcrystalline cellulose - 13, lactose monohydrate - 22; potato starch - 20; calcium stearate - 0.8; calcium phosphate - 29.2. The resulting composition was filled capsules and sent for biological tests.

Пример 8. Получали композицию, содержащую (% масс.): ДЭАЭ - 20; кальция гидрофосфат - 10, целлюлоза микрокристаллическая - 27; лактоза безводная - 30, крахмал прежелатинизированный - 12; кальция стеарат - 1. Полученную композицию таблетировали, после чего направляли на биологические испытания.Example 8. Received a composition containing (% wt.): DEAE - 20; calcium phosphate - 10, microcrystalline cellulose - 27; anhydrous lactose - 30, pregelatinized starch - 12; calcium stearate - 1. The resulting composition was tableted, and then sent for biological tests.

Пример 9. Для оценки нейропротекторной и нейрореабилитационной активности новых композиций при черепно-мозговой травме использовалась модель контролируемого кортикального ушиба (Controlled cortical impact injury model, CCI) у крыс, описанная в примере 5.Example 9. To assess the neuroprotective and neurorehabilitation activity of new compositions in traumatic brain injury, we used the model of controlled cortical injury (CCI) in rats, described in example 5.

9.1. Влияние состава композиции на ответ задних и передних конечностей животных на тактильную и проприоцептивную стимуляцию9.1. The influence of the composition on the response of the hind and forelimbs of animals to tactile and proprioceptive stimulation

На 1-е, 3-е и 7-е сутки после операции у животных оценивали выраженность неврологического дефицита в тесте «Стимулирование конечностей». Тест заключался в ответе задних и передних конечностей на тактильную и проприоцептивную стимуляцию. Процесс тестирования состоял из 7 различных испытаний, результаты выражали в сумме баллов. Для оценки нарушений в работе конечностей использовалась следующая система подсчета: 2 балла - крыса полностью выполняла испытание; 1 балл - крыса выполняла испытание с задержкой в более чем 2 с и/или не полностью; 0 баллов - крыса не отвечала на стимулирование конечности. Максимально возможное суммарное количество баллов было равно 14 [Силачев Д.Н. Изучение новых нейропротекторов на модели фокальной ишемии головного мозга: дис. канд. биол. наук. Моск. гос. университет им. М.В. Ломоносова, Москва, 2009]. Все испытуемые лекарственные средства на 7-е сутки давали достоверное улучшение функции передних и задних конечностей в тесте «Стимулирование конечностей». Результаты исследований представлены в таблице 2.On the 1st, 3rd and 7th day after surgery, animals were evaluated for the severity of neurological deficit in the “Limb Stimulation” test. The test was the response of the hind and forelimbs to tactile and proprioceptive stimulation. The testing process consisted of 7 different tests, the results expressed in the amount of points. The following scoring system was used to assess impairments in the work of the extremities: 2 points - the rat fully performed the test; 1 point - the rat performed the test with a delay of more than 2 s and / or not completely; 0 points - the rat did not respond to limb stimulation. The maximum possible total score was 14 [Silachev D.N. The study of new neuroprotectors on the model of focal cerebral ischemia: dis. Cand. biol. sciences. Mosk. state University. Mv Lomonosov, Moscow, 2009]. All the tested drugs on the 7th day gave a significant improvement in the function of the fore and hind limbs in the “Limb Stimulation” test. The research results are presented in table 2.

Наиболее высокий результат показали крысы, получавшие композиции 1 и 4, у которых были менее выраженные двигательные нарушения передних и задних лап, что позволило им набрать большее количество баллов, чем животным контрольной группы соответственно в 1,7 и 1,4 раза на 3-й и 7-й день после травмы. Индивидуальный ЭДЭС, вводимый в дозах 10 мг/кг, также достоверно ускорял восстановление двигательной функции конечностей по сравнению с контролем.The highest result was shown by rats treated with compositions 1 and 4, which had less pronounced motor disorders of the front and hind legs, which allowed them to score more points than the control group animals, respectively, 1.7 and 1.4 times on the 3rd and the 7th day after injury. Individual EDES, administered in doses of 10 mg / kg, also significantly accelerated the restoration of motor function of the limbs compared to the control.

9.2. Влияние заявляемых средств на поведение лабораторных животных после перенесенной ЧМТ9.2. The effect of the proposed funds on the behavior of laboratory animals after suffering TBI

На 3-е сутки после травмы у крыс оценивали общую двигательную активность (ОДА) и поисково-исследовательскую активность (ПИА). ОДА складывалась из горизонтальных и вертикальных перемещений, груминга и заглядываний в норки, а ПИА рассчитывали как сумму вертикальных перемещений и заглядываний.On the 3rd day after injury in rats, total motor activity (ODE) and search and exploration activity (PIA) were evaluated. The ODE consisted of horizontal and vertical movements, grooming and gazing into minks, and the PIA was calculated as the sum of vertical movements and gazes.

В тесте «Открытое поле» группа, получавшая ЭДЭС в дозе 10 мг/кг, а также композиции 1, 4-7 имела достоверно более высокие значения ОДА и ПИА по сравнению с контролемIn the “Open Field” test, the group that received EDES at a dose of 10 mg / kg, as well as compositions 1, 4-7, had significantly higher values of ODE and PIA compared with the control

Кроме того, результаты данных животных были достоверно выше, чем у крыс, получавших холина альфосцерат. Клонидин давал увеличение показателя ОДА по сравнению контроля, однако не превосходил заявляемые композиции.In addition, the results of these animals were significantly higher than in rats treated with choline alfoscerat. Clonidine gave an increase in the ODE in comparison to the control, but did not exceed the claimed composition.

9.3 Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт», (ПКЛ)9.3 Test "Elevated plus maze" (PCL)

Тест «Приподнятый крестообразный лабиринт» проводили на седьмые сутки после травмы. У крыс оценивали время нахождения в открытых (ОР) и закрытых рукавах (ЗР), а также ОДА, складывающуюся из количества заходов в темные/светлые рукава, стоек, выглядываний из темных рукавов, свисаний и грумингов.The test "Elevated plus maze" was performed on the seventh day after injury. In rats, the time spent in open (OR) and closed sleeves (ZR), as well as the ODE, which is the sum of the number of visits to dark / light sleeves, racks, peeping from dark sleeves, dangles and grooming, was estimated.

В данном тесте холина альфосцерат и цитиколин достоверно снижали время в ОР по сравнению с контролем. При этом они также как и ЭДЭС в дозе 10 мг/кг несколько увеличивали продолжительность нахождения в ЗР, но отличия были недостоверными по сравнению с контролем. У крыс, получавших холина альфосцерат и цитиколин, происходило достоверное снижение показателя ОДА по сравнению с контрольными животными. ЭДЭС и композиции 1, 2, снижал данный показатель, но отличия от контроля не были статистически значимыIn this test, choline alfoscerate and citicoline significantly reduced the time in the OR compared to the control. At the same time, they also, like EDES in a dose of 10 mg / kg, somewhat increased the duration of stay in the SR, but the differences were not significant compared with the control. In rats treated with choline alfoscerate and citicoline, there was a significant decrease in the ODE in comparison with control animals. EDES and compositions 1, 2, reduced this indicator, but the differences from the control were not statistically significant

9.4. Влияние заявляемых композиций на двигательную функцию передних и задних конечностей животных после ЧМТ9.4. The effect of the claimed compositions on the motor function of the front and rear extremities of animals after TBI

На седьмые сутки после травмы у животных проводили тесты «Цилиндр» и «Сужающаяся дорожка».On the seventh day after injury, the animals were tested "Cylinder" and "Tapering track".

В тесте «Цилиндр» оценивали асимметрию использования животным передних конечностей в процессе исследования стенок цилиндра. Для тестирования крысу помещали в цилиндр и проводили видео регистрацию движений животного в течение 8-10 минут. Просмотр видеозаписи проводили в покадровом режиме, подсчитывая количество независимого использования латеральной и контралатеральной к месту повреждения конечностей во время исследования стенки цилиндра после подъема на задние лапы, а также одновременное (совместное) использование обеих лап. Данные представляли как процент использования контралатеральной конечности от общего числа поведенческих актов по формуле:In the “Cylinder” test, the asymmetry of the use of an animal's forelimbs during the investigation of the cylinder walls was evaluated. For testing, the rat was placed in a cylinder and video recording of the movements of the animal was performed for 8-10 minutes. Videotaping was carried out in frame mode, counting the number of independent use of the lateral and contralateral to the site of injury to the limbs during the examination of the cylinder wall after lifting onto the hind legs, as well as simultaneous (joint) use of both paws. Data were presented as a percentage of use of the contralateral limb of the total number of behavioral acts by the formula:

(контр+1/2ходновр)/(ипси+контр+одновр)×100,(contra + 1/2 entry) / (ipsi + counter + simultaneously) × 100,

где контр - контралатеральная к месту повреждения конечность, одновр - одновременное использование передних конечностей, ипси - ипсилатеральная к месту повреждения конечность [Силачев Д.Н. Изучение новых нейропротекторов на модели фокальной ишемии головного мозга: дис. канд. биол. наук. Моск. гос. университет им. М.В. Ломоносова, Москва, 2009].where the counter is a contralateral limb to the injury site, while the simultaneous use of the fore limbs, ipsi is the ipsilateral limb to the injury site [Silachev DN The study of new neuroprotectors on the model of focal cerebral ischemia: dis. Cand. biol. sciences. Mosk. state University. Mv Lomonosov, Moscow, 2009].

В тесте «Цилиндр» достоверное улучшение по сравнению с контрольной группой наблюдалось у крыс, получавших ЭДЭС в дозе 10 мг/кг (в 1,8 раза) и композиций 1, 2, 4. Другие ЛС, вводимые травмированным животным не давали увеличения частоты использования контралатеральной конечностиIn the “Cylinder” test, a significant improvement compared with the control group was observed in rats treated with EDES at a dose of 10 mg / kg (1.8 times) and compositions 1, 2, 4. Other drugs administered to injured animals did not increase the frequency of use. contralateral limb

9.5. Тест «Сужающаяся дорожка.9.5. Test "Tapering track.

Тест «Сужающаяся дорожка» использовался для оценки сенсомоторной функции передних и задних конечностей. Установка представляет собой две сужающиеся дорожки длиной 165 см, расположенные друг под другом, причем нижняя имеет бортики для расположения конечностей животного во время соскальзывания с верхней доски. В конце установки располагается черная коробка, являющаяся конечной целью перемещения животного. Точка старта освещается ярким светом, мотивируя крыс бежать к концу доски в черную коробку. Перед моделированием черепно-мозговой травмы животных в течение 3 дней приучали пересекать «сужающуюся дорожку». Во время тестирования движения крыс записывались на видеокамеру. В покадровом режиме просмотра видео для каждой конечности отдельно подсчитывали количество постановок конечности на нижнюю доску (ошибок), количество соскальзываний с верхней доски на нижнюю, а также общее количество шагов. Полученные по трем попыткам данные усреднялись, степень выраженности сенсомоторного дефицита рассчитывалась по формуле в процентах:The “Taper Track” test was used to assess the sensory-motor function of the fore and hind limbs. The installation consists of two tapered paths 165 cm long, located one above the other, with the lower one having sides for positioning the limbs of the animal during the sliding from the top board. At the end of the installation is a black box, which is the ultimate goal of moving the animal. The starting point is illuminated by bright light, motivating the rats to run to the end of the board in a black box. Before modeling the traumatic brain injury, animals were trained to cross the “tapering track” for 3 days. During testing, the movements of the rats were recorded on a video camera. In the frame-by-frame video viewing mode for each limb, the number of limb setups on the bottom board (errors), the number of slips from the top board to the bottom board, as well as the total number of steps were counted separately The data obtained from three attempts were averaged, the severity of sensorimotor deficiency was calculated by the formula in percent:

Ошибки+0,5×Соскальзывания/Общее кол-во шагов×100Errors + 0.5 × Slip / Total number of steps × 100

Заявляемые композиции давали статистически значимое улучшение состояния двигательной функции конечностей в тесте «Стимулирование конечностей». Цитиколин достоверно улучшал моторику передней контралатеральной конечности по сравнению с контролем, однако, не превосходил ДЭ-АЭ. Клонидин давал достоверное улучшение функции передней и задней конечностей, однако, его эффективность была ниже.The inventive compositions gave a statistically significant improvement in the motor function of the extremities in the test "Stimulation of the extremities". Tsitikolin significantly improved the motility of the anterior contralateral limb compared with the control, however, did not exceed DE-AE. Clonidine provided a significant improvement in the function of the fore and hind limbs, however, its effectiveness was lower.

Таким образом, применение заявляемых композиций у животных после черепно-мозговой травмы позволило достичь улучшения состояния моторной функции передней и задней конечностей, расположенных контролатерально к месту повреждения, а также к увеличению показателей общей двигательной (ОДА) и поисково-исследовательской активности (ПИА).Thus, the use of the claimed compositions in animals after craniocerebral trauma allowed to improve the state of the motor function of the fore and hind limbs, located controllably to the injury site, as well as to an increase in the overall motor (ODA) and search and exploration activity (PIA).

Анализ полученных результатов показал, что заявляемая композиция сочетает в себе эффективность при использовании для лечения последствий ЧМТ с удобством использования препарата в твердой лекарственной форме при пероральном применении.Analysis of the results showed that the claimed composition combines efficacy when used for treating the effects of TBI with the convenience of using the drug in a solid dosage form for oral administration.

Claims (7)

1. Лекарственное средство для повышения двигательной активности и улучшения состояния моторной функции конечностей после черепно-мозговой травмы, характеризующееся тем, что в качестве активного начала содержит смесь бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-еноилокси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоата и кальция гидрофосфата с содержанием бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-еноилокси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоата в исходной смеси с гидрофосфатом кальция от 0,6 до 85 % масс., при этом вспомогательные вещества выбраны из группы, включающей микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, крахмал, маннит, натрия крахмал гликолят, натрия кросскармеллозу, поливинилпирролидон, магния стеарат и кальция стеарат.1. Drug to increase motor activity and improve the motor function of the extremities after traumatic brain injury, characterized in that the active principle contains a mixture of bis {2 - [(2Е) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoyloxy ] -N, N-diethylethanamine} butanedioate and calcium hydrophosphate with the content of bis {2 - [(2E) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoyloxy] -N, N-diethylethanamium} butanedioate in the initial mixture with calcium phosphate from 0.6 to 85 wt.%, While the excipients are selected from the group consisting of microcrystalline Cellulose, lactose, starch, mannitol, sodium starch glycolate, sodium crosscarmellose, polyvinylpyrrolidone, magnesium stearate and calcium stearate. 2. Лекарственное средство по п. 1, отличающееся тем, что оно содержит кальция гидрофосфат в виде кальция гидрофосфата дигидрата.2. Drug under item 1, characterized in that it contains calcium phosphate in the form of calcium phosphate dihydrate. 3. Лекарственное средство по п. 1, отличающееся тем, что оно содержит (масс. %): бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-еноилокси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоат - 10-20; лактоза - 5-20; крахмал - 15-25; магния стеарат - 0,1-1,0; кальция гидрофосфат - остальное.3. The drug according to claim 1, characterized in that it contains (wt.%): Bis {2 - [(2E) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoyloxy] -N, N-diethylethanamine} butanedioate - 10-20; lactose - 5-20; starch - 15-25; magnesium stearate - 0.1-1.0; calcium phosphate - the rest. 4. Лекарственное средство по п. 1, отличающееся тем, что оно выполнено в форме таблетки.4. Drug under item 1, characterized in that it is made in tablet form. 5. Лекарственное средство по п. 1, отличающееся тем, что оно выполнено в форме капсулы.5. Drug under item 1, characterized in that it is made in the form of a capsule. 6. Способ получения лекарственного средства по п. 1, заключающийся в смешении жидкого бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-еноилокси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоата с кальция гидрофосфатом и вспомогательными веществами при перемешивании, отделении выпавших кристаллов фильтрованием и их сушке под вакуумом.6. The method of producing a medicinal product according to claim 1, consisting in mixing a liquid bis {2 - [(2E) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoyloxy] -N, N-diethylethanamine} butanedioate with calcium phosphate and auxiliary substances with stirring, separating the precipitated crystals by filtration and drying them under vacuum. 7. Способ получения лекарственного средства по п. 1, заключающийся в тем, что вводят в жидкий бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-еноилокси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоат в качестве затравки кристаллы, полученные путем выдерживания жидкого бис{2-[(2Е)-4-гидрокси-4-оксобут-2-еноилокси]-N,N-диэтилэтанаминия}бутандиоата при температуре 0±1°С в течение 2-3 месяцев, перекристаллизовывают выпавший осадок, а затем смешивают с кальция гидрофосфатом и вспомогательными веществами с получением лекарственного средства по п. 1.7. The method of producing a medicinal product according to claim 1, which consists in introducing the liquid {2 - [(2E) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoyloxy] -N, N-diethylethanaminium} butanedioate into liquid seed crystals obtained by keeping liquid bis {2 - [(2E) -4-hydroxy-4-oxobut-2-enoyloxy] -N, N-diethylethanamine} butanedioate at a temperature of 0 ± 1 ° C for 2-3 months, the precipitated precipitate is recrystallized, and then mixed with calcium hydrophosphate and excipients to form the drug according to claim 1.