RU2689335C1 - Agents for inhibiting enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on bile acids - Google Patents
Agents for inhibiting enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on bile acids Download PDFInfo
- Publication number
- RU2689335C1 RU2689335C1 RU2018106010A RU2018106010A RU2689335C1 RU 2689335 C1 RU2689335 C1 RU 2689335C1 RU 2018106010 A RU2018106010 A RU 2018106010A RU 2018106010 A RU2018106010 A RU 2018106010A RU 2689335 C1 RU2689335 C1 RU 2689335C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mmol
- nmr
- dna
- cdcl
- mhz
- Prior art date
Links
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 title claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title description 7
- 101710205182 Tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1 Proteins 0.000 title description 4
- 102100024579 Tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1 Human genes 0.000 title description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- 101100483248 Drosophila melanogaster gkt gene Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 101150041808 TDP1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims abstract description 16
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 101000760764 Homo sapiens Tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1 Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000046366 human TDP1 Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 claims abstract description 3
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 claims abstract description 3
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 abstract 1
- 239000002532 enzyme inhibitor Substances 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 29
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 20
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 18
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 17
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 14
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101150041570 TOP1 gene Proteins 0.000 description 7
- 150000003431 steroids Chemical group 0.000 description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 4
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 4
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 4
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 4
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- -1 low bioavailability Chemical compound 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 Chemical compound COc1ccc(cc1)N1N=CC2C=NC(Nc3cc(OC)c(OC)c(OCCCN4CCN(C)CC4)c3)=NC12 DRSHXJFUUPIBHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 3
- 229910052681 coesite Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052906 cristobalite Inorganic materials 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- ILCQYORZHHFLNL-UHFFFAOYSA-N n-bromoaniline Chemical compound BrNC1=CC=CC=C1 ILCQYORZHHFLNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 229910052682 stishovite Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052905 tridymite Inorganic materials 0.000 description 3
- LUOPZKZFPIQXAL-SBPFXFOVSA-N (4r)-4-[(3r,5r,8r,9s,10s,12s,13r,14s,17r)-3,12-diacetyloxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](OC(C)=O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](OC(C)=O)C1 LUOPZKZFPIQXAL-SBPFXFOVSA-N 0.000 description 2
- CUYKNJBYIJFRCU-UHFFFAOYSA-N 3-aminopyridine Chemical compound NC1=CC=CN=C1 CUYKNJBYIJFRCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RNVYCHNNRVFSDL-UHFFFAOYSA-N 4-(2-aminoethyl)-2,6-ditert-butylphenol Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(CCN)=CC(C(C)(C)C)=C1O RNVYCHNNRVFSDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N N-methylaniline Chemical compound CNC1=CC=CC=C1 AFBPFSWMIHJQDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 2
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 2
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 2
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 2
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 2
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N iodomethane Chemical compound IC INQOMBQAUSQDDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020615 rectal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 2
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 2
- ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 11-deoxycorticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 0.000 description 1
- NMNDQBZTIMGTSF-UHFFFAOYSA-N 11h-indeno[1,2-h]isoquinoline Chemical class C1=CN=CC2=C3CC4=CC=CC=C4C3=CC=C21 NMNDQBZTIMGTSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)C=C1 PXACTUVBBMDKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108020005124 DNA Adducts Proteins 0.000 description 1
- 102000011724 DNA Repair Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010076525 DNA Repair Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 239000012624 DNA alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007018 DNA scission Effects 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N Temozolomide Chemical compound O=C1N(C)N=NC2=C(C(N)=O)N=CN21 BPEGJWRSRHCHSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710183280 Topoisomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000007537 Type II DNA Topoisomerases Human genes 0.000 description 1
- 108010046308 Type II DNA Topoisomerases Proteins 0.000 description 1
- 125000003668 acetyloxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)O[*] 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- VEFXTGTZJOWDOF-UHFFFAOYSA-N benzene;hydrate Chemical compound O.C1=CC=CC=C1 VEFXTGTZJOWDOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000009096 combination chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N de-oxy corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 229940119740 deoxycorticosterone Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- MBABOKRGFJTBAE-UHFFFAOYSA-N methyl methanesulfonate Chemical compound COS(C)(=O)=O MBABOKRGFJTBAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229960004964 temozolomide Drugs 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
- C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
- C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
- C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
- C07J41/0061—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives one of the carbon atoms being part of an amide group
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
- C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к молекулярной биологии, биохимии и медицине, конкретно к применению соединений, представляющим собой производные желчных кислот общей формулы I, включая пространственные изомеры, в том числе оптически-активные формы:The invention relates to molecular biology, biochemistry and medicine, specifically to the use of compounds that are derivatives of bile acids of general formula I, including spatial isomers, including optically active forms:
где, R1=-ОН, -ОАс, O-СН3; R2=-Н, -ОН, -ОАс; R3=-Н, -ОН, -ОАс, -O-СН3;where, R 1 = -OH, -OAc, O-CH 3 ; R 2 = -H, -OH, -OAc; R 3 = —H, —OH, —OAc, —O — CH 3 ;
R4 = адамантил; -фенил, не обязательно замещенный бромом, -метилом; -пиридинил, -(CH2)2-R5, где R5 = фенил, замещенный двумя трет-бутильными группами, или индол, в качестве ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека (Tdp1).R 4 = adamantyl; -phenyl, optionally substituted with bromine, -methyl; -pyridinyl, - (CH 2 ) 2 -R 5 , where R 5 = phenyl, substituted by two tert-butyl groups, or indole, as inhibitors of the human tyrosyl-DNA-
Системы репарации ДНК, ответственные за исправления повреждений и разрывов в молекулах ДНК, играют важнейшую роль в поддержании целостности генома. Однако, повышенная активность подобных систем создает значительные проблемы при лечении целого ряда иммунных, нейродегенеративных и, особенно, опухолевых заболеваний [Lu JYD, et all., 2017, Dexheimer TS, et al., 2008., Laev S, el al., 2016]. Цитотоксические эффекты химио- и радиотерапии, которые используются в клинической практике при лечении злокачественных опухолевых заболеваний, основаны на способности данных методов генерировать повреждения ДНК. Способность опухолевых клеток опознавать повреждения ДНК и запускать механизм репарации может приводить к возникновению резистентности к тем или иным препаратам противораковой терапии. Ингибирование ферментов системы репарации ДНК может повысить эффективность использования уже применяющихся в практике противоопухолевых препаратов [Al Abo М, et al., 2017.] Поэтому поиск ингибиторов ферментов системы репарации ДНК является одним из востребованных направлений исследований в медицинской химии. [Huang Shar-yin N. et al. 2011, Beretta GL, et al., 2010, Geenen JJJ., et al. 2017]DNA repair systems responsible for repairing damage and breaks in DNA molecules play a crucial role in maintaining the integrity of the genome. However, the increased activity of such systems creates significant problems in the treatment of a number of immune, neurodegenerative and, especially, tumor diseases [Lu JYD, et all., 2017, Dexheimer TS, et al., 2008., Laev S, el al., 2016 ]. The cytotoxic effects of chemotherapy and radiotherapy, which are used in clinical practice in the treatment of malignant neoplastic diseases, are based on the ability of these methods to generate DNA damage. The ability of tumor cells to recognize DNA damage and trigger the repair mechanism can lead to the emergence of resistance to certain anticancer drugs. Inhibition of enzymes of the DNA repair system can increase the efficiency of using anticancer drugs already used in practice [Al Abo M, et al., 2017.] Therefore, the search for inhibitors of enzymes of the DNA repair system is one of the sought-after areas of research in medical chemistry. [Huang Shar-yin N. et al. 2011, Beretta GL, et al., 2010, Geenen JJJ., Et al. 2017]
В последние годы [Beretta GL, et al., 2010, Jun J.H. et al. 2018] ведутся активные поиски ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 (Tdp1, фермент класса фосфодиэстераз, расщепляющих фосфодиэфирные связи [Interthal, 2001]), который рассматривается как перспективный фермент-мишень при создании лекарственных препаратов для лечения онкологических и нейродегенеративных заболеваний [Cortes Ledesma, 2009, Dexheimer TS, et al., 2008].In recent years [Beretta GL, et al., 2010, Jun J.H. et al. 2018], an active search is under way for inhibitors of the enzyme tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1 (Tdp1, an enzyme of the phosphodiesterase class that breaks down phosphodiester bonds [Interthal, 2001]), which is considered as a promising target enzyme when creating drugs for the treatment of cancer and neurodegenerative diseases [Cortes Ledesma , 2009, Dexheimer TS, et al., 2008].
Tdp1, в частности, играет важную роль в удалении повреждений ДНК, создаваемых топоизомеразой 1 (Top1) в присутствии ингибиторов Top1 (например, камптотецина и его производных, используемых в клинике), и некоторыми другими противоопухолевыми препаратами [см. обзоры Laev, 2016; Pommier, 2010; Pommier, 2006].Tdp1, in particular, plays an important role in removing DNA damage created by topoisomerase 1 (Top1) in the presence of Top1 inhibitors (for example, camptothecin and its derivatives, used in the clinic), and some other anti-tumor drugs [see Laev reviews, 2016; Pommier, 2010; Pommier, 2006].
Нормальный ферментативный цикл Top1 включает в себя реакции «разрезания» и «сшивки» одной из цепей ДНК. Первоначально, остаток тирозина-723 активного центра фермента Top1 образует переходный ковалентный комплекс с 3'-фосфатом основания ДНК, который приводит к образованию одноцепочечного разрыва и снятию локального напряжения в спирали благодаря вращению «разрезанной» цепи вокруг интактной. Затем целостность ДНК восстанавливается за счет обратной реакции. В нормальных условиях скорость реакции «сшивки» значительно выше, чем скорость расщепления ДНК, однако ингибиторы Top1, такие как камптотецин и его производные, существенно замедляют скорость обратной реакции. Невозможность восстановить структуру ДНК приводит к образованию одноцепочечных разрывов, которые могут превратиться в более токсичные двухцепочечные. [Nguyen ТХ, et al., 2012, Dexheimer TS, et al., 2008].The normal enzyme cycle Top1 includes the reaction of "cutting" and "stitching" one of the DNA chains. Initially, the tyrosine-723 residue of the active center of the Top1 enzyme forms a transient covalent complex with 3'-phosphate of the DNA base, which leads to the formation of a single-stranded break and the removal of local stresses in the helix due to the rotation of the "cut" chain around the intact one. Then the DNA integrity is restored by the reverse reaction. Under normal conditions, the reaction rate of "crosslinking" is significantly higher than the rate of DNA cleavage, however, Top1 inhibitors, such as camptothecin and its derivatives, significantly slow down the rate of the reverse reaction. The inability to restore the structure of DNA leads to the formation of single-stranded breaks, which can turn into more toxic double-stranded. [Nguyen TX, et al., 2012, Dexheimer TS, et al., 2008].
Tdp1 катализирует гидролиз аддуктов ДНК, ковалентно связанных с 3'-фосфатом ДНК, включая пептиды Top1, комплексы Top1-ингибитор, а также 3'-фосфогликоляты и другие. Кроме того, Tdp1 способна отщеплять 5'-аддукты ДНК [Borda, 2015]. В результате, Tdp1 противостоит не только препаратам, направленным на ингибирование Top1 (камптотецины, инденоизохинолины), но также блеомицину, ингибиторам топоизомеразы II (Тор2) (этопозид, доксорубицин) и ДНК-алкилирующими агентами. Предполагается, что именно Tdp1 ответственна за лекарственную устойчивость некоторых видов рака [Dexheimer, 2008; Beretta, 2010]. Эта гипотеза подтверждается рядом исследований, например, известно, что мыши, нокаутные по Tdp1, гиперчувствительны к камптотецину [El-Khamisy, 2009; Das, 2009; Katyal, 2007; Hirano, 2007]. И, наоборот, в клетках с повышенным уровнем экспрессии Tdp1 камптотецин и этопозид вызывают меньше повреждений ДНК [Barthelmes, 2004; Nivens, 2004]. Также показано, что подавление активности Tdp1 делает опухолевые клетки гиперчувствительными к противораковым препаратам с другими механизмами действия: темозоломиду (метилирование пуринов) [Alagoz, 2014], метилметансульфонату (образование апуриновых/апиримидиновых сайтов), блеомицину (одноцепочечные/двухцепочечные разрывы с 3'-фосфогликолятами), перекиси водорода и ионизирующему излучению (разрывы и др. виды повреждений) [Murai, 2012].Tdp1 catalyzes the hydrolysis of DNA adducts covalently bound to 3'-phosphate of DNA, including Top1 peptides, Top1-inhibitor complexes, as well as 3'-phosphoglycolate and others. In addition, Tdp1 is able to cleave DNA 5'-adducts [Borda, 2015]. As a result, Tdp1 is opposed not only to Top1 inhibiting drugs (camptothecins, indenoisoquinolines), but also to bleomycin, topoisomerase II (Tor2) inhibitors (etoposide, doxorubicin) and DNA-alkylating agents. It is assumed that Tdp1 is responsible for the drug resistance of certain types of cancer [Dexheimer, 2008; Beretta, 2010]. This hypothesis is supported by a number of studies, for example, it is known that Tdp1 knockout mice are hypersensitive to camptothecin [El-Khamisy, 2009; Das, 2009; Katyal, 2007; Hirano, 2007]. Conversely, in cells with an increased level of expression of Tdp1, camptothecin and etoposide cause less DNA damage [Barthelmes, 2004; Nivens, 2004]. It is also shown that inhibition of the activity Tdp1 makes tumor cells hypersensitive to anti-cancer drugs with other mechanisms of action: temozolomide (methylation of purines) [Alagoz, 2014], methyl methane sulfonate (education apurine / apyrimidine sites), bleomycin (single-stranded / double-strand breaks at the 3'-fosfoglikolyatami ), hydrogen peroxide and ionizing radiation (breaks and other types of damage) [Murai, 2012].
В литературе описано немного ингибиторов Tdp1, большинство из них обладает умеренным ингибирующим действием [Antony, 2007; Nguyen, 2012; Dexheimer, 2008; Zakharenko, 2015, Zakharenko, 2016; Jun J.H. et al., 2018].Few Tdp1 inhibitors are described in the literature, most of which have a moderate inhibitory effect [Antony, 2007; Nguyen, 2012; Dexheimer, 2008; Zakharenko, 2015, Zakharenko, 2016; Jun J.H. et al., 2018].
Наиболее близким к заявляемому средству - прототипом - является соединение II (NSC 88915), конъюгат дезоксикортикостерона и 4-бромбензолсульфокислоты [Dexheimer T.S. et al., 2009; Nguyen T.X et al. 2012], с достаточно высокими ингибирующими характеристиками в отношении Tdp1 (IC50 7.7 мкМ). Изучение зависимости «структура-активность» показало, что оба структурных фрагмента соединения II являются важными элементами, обуславливающими высокую ингибирующую активность указанного соединения [Dexheimer T.S. et al., 2009]. Однако, в результате исследований был выявлен ряд существенных недостатков соединения II, таких как низкая биодоступность, высокая цитотоксичность и воздействие на нежелательные мишени, связанные, по всей видимости, с гормональной природой стероидного фрагмента.The closest to the claimed means - the prototype - is compound II (NSC 88915), a deoxycorticosterone conjugate and 4-bromobenzenesulfonic acid [Dexheimer TS et al., 2009; Nguyen TX et al. 2012], with sufficiently high inhibitory characteristics against Tdp1 (IC 50 7.7 μM). The study of the dependence "structure-activity" showed that both structural fragments of compound II are important elements causing a high inhibitory activity of this compound [Dexheimer TS et al., 2009]. However, studies have revealed a number of significant deficiencies of compound II, such as low bioavailability, high cytotoxicity, and effects on unwanted targets, apparently related to the hormonal nature of the steroid fragment.
Задачей изобретения является создание более эффективного ингибитора Tdp1 нового структурного типа.The objective of the invention is to create a more effective inhibitor of Tdp1 new structural type.
Поставленная техническая задача решается применением соединений, представляющих амиды желчных кислот, в том числе с дополнительной модификацией функциональных групп стероидного остова, общей формулы I, у которых выявлена биологическая активность, заключающаяся в подавлении активности Tdp1.The technical problem is solved by the use of compounds representing amides of bile acids, including with additional modification of the functional groups of the steroid backbone, of general formula I, which revealed biological activity consisting in suppressing Tdp1 activity.
Для получения соединений общей формулы I в качестве исходных соединений использовались доступные желчные кислоты: дезоксихолевая кислота (III-(ДХ)) (R2=H, R3=αOH), хенодезоксихолевая кислота (III-(ХДХ)) (R2=αOH, R3=H), и урсодезоксихолевая кислота (III-(УДХ)) (R2=βOH, R3=H).To obtain compounds of general formula I, available bile acids were used as starting compounds: deoxycholic acid (III- (DC)) (R 2 = H, R 3 = αOH), chenodesoxycholic acid (III- (CDC)) (R 2 = αOH , R 3 = H), and ursodeoxycholic acid (III- (UDH)) (R 2 = βOH, R 3 = H).
Схема синтеза соединения общей формулы I приведена на Фиг. 1.A synthesis scheme for the compound of general formula I is shown in FIG. one.
На первом этапе может осуществляться модификация гидроксильных групп стероидного остова: взаимодействие с уксусным ангидридом в уксусной кислоте приводит к образованию диацетоксипроизводных общей формулы IV, а с йодистым метилом с присутствии гидрида натрия - диметоксипроизводного (соединение V-в). Формирование амидной группы может быть осуществлено через промежуточное образование хлорангидрида, взаимодействием карбоксильной группы с хлористым оксалилом, и последующим взаимодействием с соответствующим амином, например, триптамином (соединения с индексом 1), 4-(2-аминоэтил)-2,6-ди-t-бутилфенолом (индекс 2), 1-аминоадамантаном (индекс 3), анилином (индекс 4), n-броманилином (индекс 5), n-метиланилином (индекс 6) и м-аминопиридином (индекс 7). Получение амидных производных желчных кислот (соединения с индексом б), содержащих в стероидном остове гидроксильные группы, осуществляли взаимодействием диацетоксиамидов (соединения с индексом а) с гидроксидом калия в метаноле.At the first stage, the modification of the hydroxyl groups of the steroid backbone can be carried out: interaction with acetic anhydride in acetic acid leads to the formation of diacetoxy derivatives of general formula IV, and with methyl iodide with the presence of sodium hydride - dimethoxy derivative (compound V-in). The formation of the amide group can be carried out through the intermediate formation of the acid chloride, the interaction of the carboxyl group with oxalyl chloride, and the subsequent interaction with the corresponding amine, for example, tryptamine (compounds with the index 1), 4- (2-aminoethyl) -2,6-di-t -butylphenol (index 2), 1-aminoadamantane (index 3), aniline (index 4), n-bromoaniline (index 5), n-methylaniline (index 6) and m-aminopyridine (index 7). The preparation of amide derivatives of bile acids (compounds with b index) containing hydroxyl groups in the steroid backbone was carried out by the interaction of diacetoxy amides (compounds with index a) with potassium hydroxide in methanol.
Результаты тестирования соединений формулы I на способность ингибировать фермент Tdp1 приведены в таблице.The results of testing compounds of formula I for the ability to inhibit the Tdp1 enzyme are shown in the table.
Показано, что амидные производные, имеющие дополнительную модификацию гидроксильных групп стероидного остова (ацетоксигруппы (соединения с индексом а) и метоксигруппы (соединения с индексом в)), проявляют более выраженную активность в отношении ингибирования фермента Tdp1 по сравнению с их аналогами, имеющими не замещенную гидроксигруппу (соединения с индексом б).It was shown that amide derivatives with an additional modification of the hydroxyl groups of the steroid backbone (acetoxy groups (compounds with index a) and methoxy groups (compounds with index b)) show a more pronounced activity in relation to the inhibition of the enzyme Tdp1 compared to their analogues having an unsubstituted hydroxy group (compounds with index b).
Технический результат: найден новый класс эффективных ингибиторов Tdp1 с хорошими ингибирующими характеристиками (IC50 для одноцепочечной ДНК от 0.1 до 7 мкМ).Technical result: a new class of effective Tdp1 inhibitors with good inhibitory characteristics was found (IC 50 for single-stranded DNA from 0.1 to 7 μM).
Соединения общей формулы I, после проведения углубленных фармакологических исследований, могут использоваться для дальнейшей разработки новых высокоэффективных противораковых средств.The compounds of general formula I, after carrying out in-depth pharmacological studies, can be used to further develop new highly effective anticancer drugs.
Поскольку ингибиторы ферментов репарации ДНК используются в "коктейлях" с известными противоопухолевыми препаратами, обладающими очень высокой цитотоксичностью, важно, чтобы применение новых соединений в лекарственных формах не приводило бы к дополнительной токсической нагрузке на организм. Анализ цитотоксичности предлагаемых соединений проводили на линиях клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 и карциномы прямой кишки человека НСТ-116. Индуцированную соединениями клеточную гибель оценивали с помощью стандартного МТТ-теста [Mosmann, 1983]. В качестве контроля использовали клетки, которые выращивали в присутствии 1% DMSO.Since inhibitors of DNA repair enzymes are used in "cocktails" with known antitumor drugs with very high cytotoxicity, it is important that the use of new compounds in dosage forms would not lead to an additional toxic load on the body. Analysis of the cytotoxicity of the proposed compounds was performed on human breast adenocarcinoma cell lines MCF-7 and human rectal carcinoma HCT-116. Compound-induced cell death was assessed using the standard MTT test [Mosmann, 1983]. Cells grown in the presence of 1% DMSO were used as controls.
Токсичность испытанных соединений (I-а1(УДХ), I-а4(ДХ), I-а5(ДХ)) отсутствовала или была незначительна во всем диапазоне изученных концентраций (до 100 мкМ) (см. рисунок). Во всех случаях не была достигнута концентрация, соответствующая гибели 50% клеток.The toxicity of the compounds tested (I-a1 (UDH), I-a4 (DC), I-a5 (DC)) was absent or insignificant over the entire range of concentrations studied (up to 100 μM) (see figure). In all cases, the concentration was not reached, corresponding to the death of 50% of the cells.
Влияние предлагаемых соединений на выживаемость клеток линий MCF-7 (А) и НСТ-116 (Б), приведено на фиг. 2.The effect of the proposed compounds on the survival of cell lines MCF-7 (A) and HCT-116 (B) is shown in FIG. 2
Таким образом, предлагаемые соединения, являющиеся низкотоксичными эффективными ингибиторами тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1, можно рассматривать как перспективные агенты для комбинированной химиотерапии онкологических заболеваний.Thus, the proposed compounds, which are low-toxic effective inhibitors of tyrosyl-
Ниже приводятся конкретные примеры реализации заявляемого технического решения.Below are specific examples of the implementation of the proposed technical solution.
Пример 1. Синтез 3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-овой кислоты (IV-а(ДХ))Example 1. Synthesis of 3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-oic acid (IV-a (DC))
Дезоксихолевую кислоту (III-(ДХ)) (25.0 г, 63.8 ммоль) кипятили в АсОН (200 мл) несколько дней (до полной этерификации 3-ОН-группы и 90% этерификации 12-ОН-группы; ход реакции контролировали 1Н ЯМР). Добавили в реакционную смесь бензол (80 мл) и отогнали азеотроп бензол-вода с использованием насадки Дина-Старка. Затем в добавили в реакционную смесь Ac2O (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре до полной конверсии. Реакционную смесь разбавили водой (70 мл) и выдержали 8 часов при 50°С (для разложения смешанного ангидрида уксусной и дезоксихолевой кислот), охладили до комнатной температуры и вылили в воду, далее экстрагировали смесью CH2Cl2 - t-BuOMe. Органическую фазу промыли насыщенными водными растворами NaHCO3 и NaCl (нас), сушили над безводным MgSO4. Удалили растворитель на роторном испарителе, получили сырой продукт в виде желтой аморфной массы (33.3 г). Сырой продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили IV-а(ДХ) (28.7 г, выход 95%) в виде белого твердого аморфного вещества. Т. пл 71.1°C (разложение; лит. 92-93°C [
1H ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=11.18 (ш.с, 1H, ОН), 5.04 (с, 1Н, Н-12), 4.66 (м, 1Н, Н-3), 2.35 (м, 1H, Н-23), 2.20 (м, 1H, Н-23'), 2.07 (с, 3H, CH3-28), 1.99 (с, 3H, CH3-26), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.78 (д, 3H, J=6.2, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=179.98 (с, С-24), 170.54 (с, С-25), 170.41 (с, С-27), 75.76 (д, С-12), 74.09 (д, С-3), 49.27 (д, С-14), 47.40 (д, С-17), 44.85 (с, С-13), 41.65 (д, С-5), 35.50 (д, С-8), 34.54 (т, С-1), 34.48 (д, С-20), 34.23 (д, С-9). 33.87 (с, С-10), 32.08 (т, С-4), 30.80 (т, С-23), 30.42 (т, С-22), 27.17 (т, С-16), 26.72 (т, С-6), 26.46 (т, С-2), 25.70 (т, С-7), 25.48 (т, С-11), 23.26 (т, С-15), 22.92 (к, С-19), 21.33 (к, С-26), 21.24 (к, С-28), 17.33 (к, С-21), 12.26 (к, С-18). 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz): δ = 11.18 (msh, 1H, OH), 5.04 (s, 1H, H-12), 4.66 (m, 1H, H-3), 2.35 (m, 1H, H-23), 2.20 (m, 1H, H-23 '), 2.07 (s, 3H, CH 3 -28), 1.99 (s, 3H, CH 3 -26), 0.87 (s, 3H, CH 3 -19), 0.78 (d, 3H, J = 6.2, CH 3 -21), 0.69 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 75 MHz): δ = 179.98 (s, C-24), 170.54 (s, C-25), 170.41 (s, C-27), 75.76 (d, C-12), 74.09 (d, s-3), 49.27 (d, s-14), 47.40 (d, s-17), 44.85 (s, s-13), 41.65 (d, s-5), 35.50 (d, s- 8), 34.54 (t, C-1), 34.48 (d, C-20), 34.23 (d, C-9). 33.87 (s, C-10), 32.08 (t, C-4), 30.80 (t, C-23), 30.42 (t, C-22), 27.17 (t, C-16), 26.72 (t, C -6), 26.46 (t, C-2), 25.70 (t, C-7), 25.48 (t, C-11), 23.26 (t, C-15), 22.92 (c, C-19), 21.33 (к, С-26), 21.24 (к, С-28), 17.33 (к, С-21), 12.26 (к, С-18).
Пример 2. Синтез 3α,7α-диацетокси-5β-холан-24-овой кислоты (IV-а(ХДХ))Example 2. Synthesis of 3α, 7α-diacetoxy-5β-cholan-24-oic acid (IV-a (CD))
К раствору хенодезоксихолевой кислоты (III-(ХДХ)) (1 г, 2.55 ммоль) и DMAP (0.03 г, 0.255 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) по каплям прибавили смесь Ac2O (0.6 мл, 6.4 ммоль) и NEt3 (0.9 мл, 6.4 ммоль) при комнатной температуре и перемешивании. Ход реакции контролировали ТСХ и ЯМР 1Н. По окончании реакции в реакционную смесь добавили Et2O и промыли последовательно водой, 5%-ным водным раствором HCl, насыщенными растворами NaHCO3 и NaCl. Органическую фазу сушили над безводным MgSO4 и удалили растворитель на роторном испарителе. Получили сырой продукт IV-а(ХДХ) - стеклообразное (аморфное) желтоватое вещество, который использовали в следующих превращениях без дополнительной очистки. Выход количественный (1.27 г).To a solution of chenodeoxycholic acid (III- (CDC)) (1 g, 2.55 mmol) and DMAP (0.03 g, 0.255 mmol) in CH 2 Cl 2 (15 ml) was added dropwise a mixture of Ac 2 O (0.6 ml, 6.4 mmol) and NEt 3 (0.9 ml, 6.4 mmol) at room temperature and stirring. The progress of the reaction was monitored by TLC and NMR of 1 N. At the end of the reaction, Et 2 O was added to the reaction mixture and washed successively with water, 5% aqueous HCl, and saturated solutions of NaHCO 3 and NaCl. The organic phase was dried over anhydrous MgSO 4 and the solvent was removed on a rotary evaporator. Got crude product IV-a (CDC) - glassy (amorphous) yellowish substance, which was used in the following transformations without further purification. The yield is quantitative (1.27 g).
1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=4.81 (м, 1Н, Н-7), 4.51 (м, 1Н, Н-3), 2.42 (м, 1H, Н-23), 2.30 (м, 1H, Н-23'), 2.15 (с, 3H, CH3-28), 1.98 (с, 3H, CH3-26), 0.86 (с, 3H, CH3-19), 0.58 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3,100 МГц): δ=178.17 (с, С-24), 170.41 (с, С-25), 170.19 (с, С-27), 73.90 (д, С-3), 70.95 (д, С-7), 55.41 (д, С-17), 50.12 (д, С-14), 42.45 (с, С-13), 40.67 (д, С-5), 39.20 (т, С-12), 37.61 (д, С-8), 34.81, 34.62, 34.52, 34.34, 33.78, 31.92, 31.03, 29.87, 27.76, 26.51, 23.26, 22.42, 21.33 (к, С-19), 21.22 (к, С-26), 20.37 (к, С-28), 18.00 (к, С-21), 11.44 (к, С-18). 1 H NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 4.81 (m, 1H, H-7), 4.51 (m, 1H, H-3), 2.42 (m, 1H, H-23), 2.30 (m, 1H, H-23 '), 2.15 (s, 3H, CH 3 -28), 1.98 (s, 3H, CH 3 -26), 0.86 (s, 3H, CH 3 -19), 0.58 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 100 MHz): δ = 178.17 (s, C-24), 170.41 (s, C-25), 170.19 (s, C-27), 73.90 (d, C-3), 70.95 (d, C-7), 55.41 (d, C-17), 50.12 (d, C-14), 42.45 (s, C-13), 40.67 (d, C-5), 39.20 (t, C- 12), 37.61 (d, C-8), 34.81, 34.62, 34.52, 34.34, 33.78, 31.92, 31.03, 29.87, 27.76, 26.51, 23.26, 22.42, 21.33 (c, C-19), 21.22 (c, C -26), 20.37 (c, C-28), 18.00 (c, C-21), 11.44 (c, C-18).
Пример 3. Синтез 3α,7β-диацетокси-5β-холан-24-овая кислота (IV-а(УДХ))Example 3. Synthesis of 3α, 7β-diacetoxy-5β-cholan-24-oic acid (IV-a (UDH))
Аналогично примеру 2 из урсодезоксихолевой кислоты (III-(УДХ)) (1 г, 2.55 ммоль), DMAP (0.03 г, 0.255 ммоль) и Ac2O (0.6 мл, 6.4 ммоль) и NEt3 (0.9 мл, 6.4 ммоль) в CH2Cl2 Analogously to example 2 from ursodeoxycholic acid (III- (UDH)) (1 g, 2.55 mmol), DMAP (0.03 g, 0.255 mmol) and Ac 2 O (0.6 ml, 6.4 mmol) and NEt 3 (0.9 ml, 6.4 mmol) in CH 2 Cl 2
(15 мл) получили IV-a (УДХ) с количественным выходом (1.43 г), который использовали в следующих превращениях без дополнительной очистки.(15 ml) obtained IV-a (UDH) with a quantitative yield (1.43 g), which was used in the following transformations without further purification.
1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=4.70 (м, 1H, Н-7), 4.60 (м, 1Н, Н-3), 1.96 (с, 3H, CH3-28), 1.92 (с, 3H, CH3-26), 0.91 (с, 3H, CH3-19), 0.87 (д, 3H, J=6.3, CH3-21), 0.62 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 100 МГц): δ=179.24 (с, С-24), 170.42 (с, С-25), 170.42 (с, С-27), 73.35 (д, С-7), 73.35 (д, С-3), 54.97, 54.76, 43.36, 41.79, 39.71, 39.66, 39.12, 34.96, 34.75, 34.26, 33.74, 32.62, 30.74, 30.51, 28.19, 26.14, 25.36, 23.00 (к, С-19), 21.60 (к, С-26), 21.17 (к, С-28), 20.97 (т, С-11), 18.13 (к, С-21), 11.86 (к, С-18). 1 H NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 4.70 (m, 1H, H-7), 4.60 (m, 1H, H-3), 1.96 (s, 3H, CH 3 -28), 1.92 (s , 3H, CH 3 -26), 0.91 (s, 3H, CH 3 -19), 0.87 (d, 3H, J = 6.3, CH 3 -21), 0.62 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 100 MHz): δ = 179.24 (s, C-24), 170.42 (s, C-25), 170.42 (s, C-27), 73.35 (d, C-7), 73.35 (d, C-3), 54.97, 54.76, 43.36, 41.79, 39.71, 39.66, 39.12, 34.96, 34.75, 34.26, 33.74, 32.62, 30.74, 30.51, 28.19, 26.14, 25.36, 23.00 (C, C-19) , 21.60 (c, C-26), 21.17 (c, C-28), 20.97 (t, C-11), 18.13 (c, C-21), 11.86 (c, C-18).
Пример 4. Синтез N-(2'-(1H-индол-2-ил)-этил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а1(ДХ))Example 4. Synthesis of N- (2 '- (1H-Indol-2-yl) -ethyl) -3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a1 (DC))
а) Раствор IV-а(ДХ) (0.45 г, 0.95 ммоль) в сухом CH2Cl2 (10 мл) охладили в бане со льдом до 0-5°C, добавили к нему оксалилхлорид (0.49 мл, 5.7 ммоль) и 3 капли ДМФА. Перемешивали 3 часа при охлаждении. В реакционную смесь добавили бензол (5 мл×2 раза) и концентрировали на ротационном испарителе для удаления растворителя и избытка хлористого оксалила. К реакционной смеси добавили CH2Cl2 (10 мл),a) A solution of IV-a (DX) (0.45 g, 0.95 mmol) in dry CH 2 Cl 2 (10 ml) was cooled in an ice bath to 0-5 ° C, oxalyl chloride (0.49 ml, 5.7 mmol) was added to it and 3 drops of DMF. Stirred for 3 hours while cooling. Benzene was added to the reaction mixture (5 ml × 2 times) and concentrated on a rotary evaporator to remove solvent and excess oxalyl chloride. CH 2 Cl 2 (10 ml) was added to the reaction mixture,
б) Полученный раствор хлорангидрида по каплям при интенсивном перемешивании добавили к раствору триптамина (0.3 г, 1.9 ммоль) и NEt3 (0.39 мл, 2.8 ммоль) в CH2Cl3 (10 мл). Реакционную смесь перемешивали 18 часов при комнатной температуре, ход реакции контролировали ТСХ. Растворитель удалили, добавили 50 мл AcOEt и воду, органическую фазу отделили, водную фазу экстрагировали AcOEt (2×30 мл). Объединенную органическую фазу промыли 5%-ным раствором HCl, затем раствором NaHCO3 и раствором NaCl (нас.), сушили над безводным MgSO4. Масса сырого продукта - 0.58 г, выход количественный. Сырой продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом AcOEt (0-10%)), получили 2 фракции различной чистоты массами 0.29 г (97% чистоты по ВЭЖХ) и 0.23 г (94% чистоты) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 90%. Тпл 99.2°C [разложение]. Эл. анал. вычислено для C38H54N2O5: С, 73.75; Н, 8.80; N, 4.53; О, 12.93; найдено С, 73.37; Н, 8.68; N, 4.18. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=8.63 (шс, 1Н, NH-1'), 7.55 (д, 1Н, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.33 (д, 1H, J8',7'=8.0, Н-8'), 7.15 (дд, 1H, J7',6'=7.2, Н-7'), 7.06 (дд, 1H, J6',5'=7.4, Н-6'), 6.97 (с, 1Н, Н-2'), 5.60 (м, 1H, C(O)NH), 5.05 (с, 1H, Н-12(β)), 4.67 (м, 1H, Н-3(β)), 3.54 (м, 2Н, CH2-11'), 2.92 (м, 2Н, CH2-10'), 2.06 (с, 3H, CH3-26), 2.01 (с, 3H, CH3-28), 0.88 (с, 3H, CH3-18), 0.71 (д, 3H, J21,20=6.4, CH3-21), 0.67 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.30 (с, С-24), 170.44 (с, С-25), 170.37 (с, С-27), 136.32 (с, С-9'), 127.25 (с, С-4'), 122.03 (д, С-2'), 121.90 (д, С-7'), 119.32 (д, С-5'), 118.55 (д, С-6'), 112.86 (с, С-3'), 111.16 (д, С-8'), 75.80 (д, С-12), 74.08 (д, С-3), 49.28, 47.64, 44.89, 41.70, 39.67 (т, С-11'), 35.54, 34.67, 34.59, 34.28, 33.90, 33.55, 32.14, 31.47, 27.18, 26.75, 26.50, 25.73, 25.52, 25.19 (т, С-10'), 23.28, 22.92 (к, CH3-С(O)O), 21.32 (к, С-19), 21.25 (к, CH3-С(O)O), 17.49 (к, С-21), 12.29 (к, С-18).b) The resulting solution of the acid chloride was added dropwise with vigorous stirring to a solution of tryptamine (0.3 g, 1.9 mmol) and NEt 3 (0.39 ml, 2.8 mmol) in CH 2 Cl 3 (10 ml). The reaction mixture was stirred for 18 hours at room temperature, the reaction was monitored by TLC. The solvent was removed, 50 ml of AcOEt and water were added, the organic phase was separated, the aqueous phase was extracted with AcOEt (2 × 30 ml). The combined organic phase was washed with 5% HCl solution, then with NaHCO 3 solution and NaCl solution (sat.), Dried over anhydrous MgSO 4 . The mass of the raw product is 0.58 g, the yield is quantitative. The crude product was purified by column chromatography (SiO 2 , CH 2 Cl 2 with an AcOEt gradient (0-10%)), 2 fractions of various purities with masses of 0.29 g (97% purity by HPLC) and 0.23 g (94% purity) were obtained as white solid amorphous substance.
Пример 5. Синтез N-(2'-(1H-индол-2-ил)-этил)-3α,7α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а1(ХДХ))Example 5. Synthesis of N- (2 '- (1H-indol-2-yl) -ethyl) -3α, 7α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a1 (ХДХ))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ХДХ) (1.2 г, 2.5 ммоль), оксалилхлорида (1.3 мл, 15 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (10 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с триптамином (0.8 г, 5.0 ммоль) и NEt3 (7.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.4 г, выход 89%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-1%)), получили I-а1(ХДХ) 1.1 г (60% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 70%. Тпл 98.7°C [разложение]. Эл. анал. вычислено для C38H54N2O5: С, 73.75; Н, 8.80; N, 4.53; О, 12.93; найдено С, 73.54; Н, 8.63; N, 4.55. 1H ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.47 (шс, 1Н, NH-1'), 7.56 (д, 1Н, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.34 (д, 1H, J8',7'=8.1, Н-8'), 7.17 (дд, 1Н, J7',6'=7.6, Н-7'), 7.09 (дд, 1Н, J6',5'=7.4, Н-6'), 6.99 (с, 1H, Н-2'), 5.67 (с, 1Н, C(O)NH), 4.84 (с, 1Н, Н-7(β)), 4.55 (м, 1H, Н-3(β)), 3.56 (д, 2Н, J=5.8, CH2-11'), 2.94 (м, 2Н, CH2-10'), 2.02 (с, 3H, CH3-26), 2.01 (с, 3H, CH3-28), 0.89 (с, 3H, CH3-18), 0.86 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.59 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.49 (с, С-24), 170.54 (с, С-25), 170.37 (с, С-27), 136.25 (с, С-9'), 127.16 (с, С-4'), 121.94 (д, С-2'), 121.89 (д, С-7'), 119.19 (д, С-5'), 118.47 (д, С-6'), 112.66 (с, С-3'), 111.16 (д, С-8'), 74.02 (д, С-3), 71.09 (д, С-7), 55.54 (д, С-17), 50.16 (д, С-14), 42.47 (с, С-13), 40.72 (д, С-5), 39.63, 39.26, 37.66 (д, С-8), 35.22, 34.68, 34.58, 34.41, 33.83, 33.40, 31.56, 31.12, 27.86, 26.58, 25.13 (т, С-10'), 23.35, 22.49, 21.46, 21.33, 20.43, 18.17 (к, С-21), 11.51 (к, С-18).Analogously to Example 4 (point a) from IV-a (CDC) (1.2 g, 2.5 mmol), oxalyl chloride (1.3 ml, 15 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (10 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with tryptamine (0.8 g, 5.0 mmol) and NEt 3 (7.5 mmol) in CH 2 Cl 2 (10 ml). The mass of the crude product 1.4 g, yield 89%. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with MeOH gradient (0-1%)), and I-a1 (HDX) 1.1 g (60% purity by HPLC) was obtained as a white amorphous solid.
Пример 6. Синтез N-(2'-(1H-индол-2-ил)-этил)-3α,7β-диацетокси-5β-холан-24-амид (I-а1(УДХ))Example 6. Synthesis of N- (2 '- (1H-Indol-2-yl) -ethyl) -3α, 7β-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a1 (UDH))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(УДХ) (1.2 г, 2.5 ммоль), оксалилхлорида (1.3 мл, 15 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (10 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с триптамином (0.8 г, 5.0 ммоль) и NEt3 (7.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.52 г, выходAnalogously to Example 4 (point a) from IV-a (UDH) (1.2 g, 2.5 mmol), oxalyl chloride (1.3 ml, 15 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (10 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with tryptamine (0.8 g, 5.0 mmol) and NEt 3 (7.5 mmol) in CH 2 Cl 2 (10 ml). Crude weight 1.52 g, yield
97%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-1%)), получили 2 фракции I-а1(УДХ) различной чистоты массами 0.2 г (>99% чистоты по ВЭЖХ) и 1.05 г (97.5% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 80%. Тпл 107.6°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C38H54N2O5: С, 73.75; Н, 8.80; N, 4.53; О, 12.93; найдено С, 73.68; Н, 8.76; N, 4.31. 1Н ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.36 (шс, 1H, NH-1'), 7.57 (д, 1Н, J5',6'=7.7, Н-5'), 7.35 (д, 1H, J8',7'=8.0, Н-8'), 7.18 (дд, 1H, J7',6'=7.4, Н-7'), 7.09 (дд, 1H, J6',5'=7.4, Н-6'), 7.00 (шс, 1Н, Н-2'), 5.65 (м, 1H, C(O)NH), 4.73 (с, 1H, Н-7(α)), 4.63 (м, 1Н, Н-3(β)), 3.57 (м, 2Н, CH2-11'), 2.95 (м, 2Н, CH2-10'), 2.00 (с, 3H, CH3-26), 1.96 (с, 3H, CH3-28), 0.93 (с, 3H, CH3-18), 0.85 (д, 3H, J21,20=6.2, CH3-21), 0.62 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.46 (с, С-24), 170.52 (с, С-25), 170.44 (с, С-27), 136.25 (с, С-9'), 127.15 (с, С-4'), 121.93 (д, С-2'), 121.93 (д, С-7'), 119.12 (д, С-5'), 118.44 (д, С-6'), 112.60 (с, С-3'), 111.16 (д, С-8'), 73.40 (д, С-7), 73.40 (д, С-3), 54.95, 54.75, 43.32, 41.79, 39.70, 39.66, 39.61, 39.12, 35.10, 34.26, 33.74, 33.39, 32.65, 32.65, 31.54, 28.22, 26.15, 25.38, 25.15 (т, С-10'), 23.00, 21.66, 21.21, 20.96, 18.25 (к, С-21), 11.86 (к, С-18).97%. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-1%)), 2 fractions I-a1 (UDH) of various purities with masses of 0.2 g (> 99% purity by HPLC) and 1.05 g (97.5% purity by HPLC) as a white amorphous solid.
Пример 7. Синтез N-(2''-(3',5'-ди-трет-бутил-4'-гидроксифенил)этил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а2(ДХ))Example 7. Synthesis of N- (2 '' - (3 ', 5'-di-tert-butyl-4'-hydroxyphenyl) ethyl) -3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a2 ( HH))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (0.20 г, 0.42 ммоль), оксалилхлорида (0.22 мл, 2.5 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (10 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с 4-(2-аминоэтил)-2,6-ди-трет-бутилфенолом (0.11 г, 0.44 ммоль) и NEt3 (0.66 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл). Масса сырого продукта 0.29 г. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.85 г I-а2(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 28%. Тпл 98.7°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C44H69NO6: С, 74.64; Н, 9.82; N, 1.98; О, 13.56; найдено С, 74.38; Н, 9.86; N, 2.11. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=6.94 (с, 2Н, Н-2', Н-6'), 5.48 (м, 1H, NH), 5.09 (с, 1Н, ОН), 5.04 (с, 1Н, Н-12(β)), 4.67 (м, 1Н, Н-3(β)), 3.43 (м, 2Н, CH2-16'), 2.69 (м, 2Н, CH2-15'), 2.06 (с, 3H, CH3-26), 2.00 (с, 3H, CH3-28), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.77 (д, 3H, J21,20=6.1, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=173.03 (с, С-24), 170.40 (с, С-25), 170.30 (с, С-27), 152.21 (с, С-4'), 135.94 (с, С-3'), 135.94 (с, С-5'), 129.31 (с, С-1'), 125.18 (д, С-2'), 125.18 (д, С-6'), 75.77 (д, С-12), 74.04 (д, С-3), 49.26, 47.58, 44.86, 41.67, 40.79, 35.52, 35.49, 34.74, 34.57, 34.24, 34.14, 33.88, 33.59, 32.11, 31.53, 30.17 (к, C(CH3)3), 27.25, 26.73, 26.48, 25.70, 25.49, 23.26, 22.92 (к, С-19), 21.31 (к, CH3-С(O)O), 21.23 (к, CH3-С(О)О), 17.49 (к, С-21), 12.28 (к, С-18).Analogously to Example 4 (point a) from IV-a (DX) (0.20 g, 0.42 mmol), oxalyl chloride (0.22 ml, 2.5 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (10 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with 4- (2-aminoethyl) -2,6-di-tert-butylphenol (0.11 g, 0.44 mmol) and NEt 3 (0.66 mmol) in CH 2 Cl 2 (5 ml) . The mass of the crude product was 0.29 g. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with MeOH gradient (0-2%)), 0.85 g of I-a2 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Yield 28%. Mp 98.7 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 44 H 69 NO 6 : C, 74.64; H, 9.82; N, 1.98; O, 13.56; found C, 74.38; H, 9.86; N, 2.11. 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz): δ = 6.94 (s, 2H, H-2 ', H-6'), 5.48 (m, 1H, NH), 5.09 (s, 1H, OH), 5.04 ( s, 1H, H-12 (β)), 4.67 (m, 1H, H-3 (β)), 3.43 (m, 2H, CH 2 -16 '), 2.69 (m, 2H, CH 2 -15' ), 2.06 (s, 3H, CH 3 -26), 2.00 (s, 3H, CH 3 -28), 0.87 (s, 3H, CH 3 -19), 0.77 (d, 3H, J 21.20 = 6.1 , CH 3 -21), 0.69 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 75 MHz): δ = 173.03 (s, C-24), 170.40 (s, C-25), 170.30 (s, C-27), 152.21 (s, C-4 '), 135.94 (s, C-3 '), 135.94 (s, C-5'), 129.31 (s, C-1 '), 125.18 (d, C-2'), 125.18 (d, C-6 '), 75.77 (d, C-12), 74.04 (d, C-3), 49.26, 47.58, 44.86, 41.67, 40.79, 35.52, 35.49, 34.74, 34.57, 34.24, 34.14, 33.88, 33.59, 32.11, 31.53, 30.17 ( c, C ( C H 3 ) 3 ), 27.25, 26.73, 26.48, 25.70, 25.49, 23.26, 22.92 (c, C-19), 21.31 (c, C H 3 -C (O) O), 21.23 (c , C H 3 -C (O) O), 17.49 (c, C-21), 12.28 (c, C-18).
Пример 8. Синтез N-(1'-адамантил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а3(ДХ))Example 8. Synthesis of N- (1'-adamantyl) -3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a3 (DC))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (0.6 г, 1.3 ммоль), оксалилхлорида (0.6 мл, 7.6 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (15 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с адамантиламином (0.26 г, 1.4 ммоль) и NEt3 (2.1 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 0.73 г. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 0.36 г I-а3(ДХ) в виде белого аморфного твердого вещества. Выход 47%. Тпл 120.7°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C38H59NO5: С, 74.84; Н, 9.75; N, 2.30; О, 13.12; найдено С, 74.76; Н, 9.83; N, 2.41. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=5.07 (с, 1H, Н-12(β)), 5.03 (дд, 1Н, J=5.0, NH), 4.66 (м, 1H, Н-3(β)), 2.05 (с, 3H, CH3-26), 2.02 (шс, 3H, Н-3', Н-5', Н-8'), 1.99 (с, 3H, CH3-28), 1.94 (с, 6Н, CH2-2', CH2-6', CH2-9'), 1.63 (м, 6Н, CH2-4', CH2-7', CH2-10'), 0.86 (с, 3H, CH3-19), 0.76 (д, 3H, J21,20=6.5, CH3-21), 0.68 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=172.31 (с, С-24), 170.39 (с, С-25), 170.31 (с, С-27), 75.80 (д, С-12), 74.04 (д, С-3), 51.56, 49.27, 47.67, 44.87, 41.68, 41.55 (т, С-2', С-6', С-9'), 36.22 (т, С-4', С-7', С-10'), 35.53, 34.64, 34.57, 34.53, 34.25, 33.88, 32.11, 31.49, 29.29 (д, С-3', С-5', С-8'), 27.22, 26.74, 26.47, 25.71, 25.49, 23.28, 22.91 (к, С-19), 21.30 (к, CH3-С(O)O), 21.23 (к, CH3-С(O)O), 17.53 (к, С-21), 12.29 (к, С-18).Analogously to example 4 (point a) from IV-a (DX) (0.6 g, 1.3 mmol), oxalyl chloride (0.6 ml, 7.6 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (15 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with adamantylamine (0.26 g, 1.4 mmol) and NEt 3 (2.1 mmol) in CH 2 Cl 2 (10 ml). The mass of the crude product was 0.73 g. The obtained product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 ), and 0.36 g of I-a3 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Exit 47%. Mp 120.7 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 38 H 59 NO 5 : C, 74.84; H, 9.75; N, 2.30; O, 13.12; found C, 74.76; H, 9.83; N, 2.41. 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz): δ = 5.07 (s, 1H, H-12 (β)), 5.03 (dd, 1H, J = 5.0, N H ), 4.66 (m, 1H, H-3 (β)), 2.05 (s, 3H, CH 3 -26), 2.02 (bs, 3H, H-3 ', H-5', H-8 '), 1.99 (s, 3H, CH 3 -28) , 1.94 (s, 6H, CH 2 -2 ', CH 2 -6', CH 2 -9 '), 1.63 (m, 6H, CH 2 -4', CH 2 -7 ', CH 2 -10') , 0.86 (s, 3H, CH 3 -19), 0.76 (d, 3H, J 21.20 = 6.5, CH 3 -21), 0.68 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz): δ = 172.31 (s, C-24), 170.39 (s, C-25), 170.31 (s, C-27), 75.80 (d, C-12), 74.04 (d, C-3), 51.56, 49.27, 47.67, 44.87, 41.68, 41.55 (t, C-2 ', C-6', C-9 '), 36.22 (t, C-4', C-7 ', C-10'), 35.53, 34.64, 34.57, 34.53, 34.25, 33.88, 32.11, 31.49, 29.29 (d, C-3 ', C-5', C-8 '), 27.22, 26.74, 26.47, 25.71, 25.49, 23.28, 22.91 (c, C-19), 21.30 (c, C H 3 –C (O) O), 21.23 (c, C H 3 –C (O) O), 17.53 (c, C -21), 12.29 (к, С-18).
Пример 9. Синтез N-фенил-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а4(ДХ))Example 9. Synthesis of N-phenyl-3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a4 (DC))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (2.0 г, 4.2 ммоль), оксалилхлорида (2.1 мл, 25.2 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (40 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с анилином (0.86 г, 9.2 ммоль) и NEt3 (14 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл). Масса сырого продукта 2.0 г, выход 87%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 3 фракции I-а4(ДХ) различной чистоты массами 0.07 г (98.3% чистоты по ВЭЖХ), 1.4 г (98.9% чистоты по ВЭЖХ) и 0.26 г (97.7% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 75%. Тпл 97.5°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H49NO5: С, 74.01; Н, 8.95; N, 2.54; О, 14.50; найдено С, 73.91; Н, 8.88; N, 2.78. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=7.48 (д, 2Н, J=7.9, Н-2', Н-6'), 7.38 (с, 1H, NH), 7.27 (дд, 2Н, J=J=7.9, Н-3', Н-5'), 7.06 (дд, 1H, J=7.4, Н-4'), 5.06 (с, 1H, Н-12(β)), 4.67 (м, 1H, Н-3(β)), 2.38 (м, 1H, Н-23), 2.19 (м, 1Н, Н-23'), 2.08 (с, 3H, CH3-26), 2.00 (с, 3H, CH3-28), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.81 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.50 (с, С-24), 170.48 (с, С-25), 170.42 (с, С-27), 137.89 (с, С-1'), 128.82 (д, С-3'), 128.82 (д, С-5'), 123.97 (д, С-4'), 119.59 (д, С-2'), 119.59 (д, С-6'), 75.83 (д, С-12), 74.08 (д, С-3), 49.27, 47.71, 44.89, 41.66, 35.51, 34.74, 34.56, 34.24, 33.88, 32.10, 31.33, 27.26, 26.73, 26.48, 25.71, 25.51, 23.29, 22.92 (к, С-19), 21.34 (к, CH3-С(O)O), 21.28 (к, CH3-С(О)О), 17.52 (к, С-21), 12.33(к, С-18).Analogously to Example 4 (point a) from IV-a (DX) (2.0 g, 4.2 mmol), oxalyl chloride (2.1 ml, 25.2 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (40 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with aniline (0.86 g, 9.2 mmol) and NEt 3 (14 mmol) in CH 2 Cl 2 (20 ml). The mass of the raw product 2.0 g, yield 87%. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 ), 3 I-a4 (DC) fractions of various purities were obtained, with masses of 0.07 g (98.3% purity by HPLC), 1.4 g (98.9% purity by HPLC) and 0.26 g (97.7% purity by HPLC) as a white amorphous solid. 75% yield. Mp 97.5 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 34 H 49 NO 5 : C, 74.01; H, 8.95; N, 2.54; Oh, 14.50; found C, 73.91; H, 8.88; N, 2.78. 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz): δ = 7.48 (d, 2H, J = 7.9, H-2 ', H-6'), 7.38 (s, 1H, N H ), 7.27 (dd, 2H, J = J = 7.9, H-3 ', H-5'), 7.06 (dd, 1H, J = 7.4, H-4 '), 5.06 (s, 1H, H-12 (β)), 4.67 (m , 1H, H-3 (β), 2.38 (m, 1H, H-23), 2.19 (m, 1H, H-23 '), 2.08 (s, 3H, CH 3 -26), 2.00 (s, 3H, CH 3 -28), 0.87 (s, 3H, CH 3 -19), 0.81 (d, 3H, J 21.20 = 6.3, CH 3 -21), 0.69 (s, 3H, CH 3 -18) . 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz): δ = 171.50 (s, C-24), 170.48 (s, C-25), 170.42 (s, C-27), 137.89 (s, C-1 '), 128.82 (d, C-3 '), 128.82 (d, C-5'), 123.97 (d, C-4 '), 119.59 (d, C-2'), 119.59 (d, C-6 '), 75.83 (d, C-12), 74.08 (d, C-3), 49.27, 47.71, 44.89, 41.66, 35.51, 34.74, 34.56, 34.24, 33.88, 32.10, 31.33, 27.26, 26.73, 26.48, 25.71, 25.51, 23.29, 22.92 (c, C-19), 21.34 (c, C H 3 -C (O) O), 21.28 (c, C H 3 -C (O) O), 17.52 (c, C-21), 12.33 (q, C-18).
Пример 10. Синтез N-(4'-бромфенил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амид (I-а5(ДХ))Example 10. Synthesis of N- (4'-bromophenyl) -3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a5 (DC))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (2.0 г, 4.2 ммоль), оксалилхлорида (2.1 мл, 25.2 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (20 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с n-броманилином (1.6 г, 9.3 ммоль) и NEt3 (14 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл). Масса сырого продукта 2.45 г, выход 92%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом AcOEt (0-3%)), получили 2 фракции I-а5(ДХ) различной чистоты массами 0.63 г (98.6% чистоты по ВЭЖХ) и 1.41 г (98.2% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 77%. Тпл 109:3°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H48BrNO5: С, 64.75; Н, 7.67; Br, 12.67; N, 2.22; О, 12.68; найдено С, 65.10; Н, 7.75; Br, 13.00; N, 2.35. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=7.43 (с, 1H, NH), 7.38 (м, 4Н, Н-2', Н-3', Н-5', Н-6'), 5.03 (с, 1H, Н-12(β)), 4.67 (м, 1Н, Н-3(β)), 2.37 (м, 1Н, Н-23), 2.18 (м, 1Н, Н-23'), 2.07 (с, 3H, CH3-26), 2.01 (с, 3H, CH3-28), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.80 (д, 3H, J21,20=6.4, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.55 (с, С-24), 170.51 (с, С-25), 170.44 (с, С-27), 136.96 (с, С-1'), 131.76 (д, С-3'), 131.76 (д, С-5'), 121.15 (д, С-2'), 121.15 (д, С-6'), 116.49 (с, С-4'), 75.82 (д, С-12), 74.08 (д, С-3), 49.27, 47.70, 44.90, 41.65, 35.50, 34.72, 34.56, 34.53, 34.24, 33.88, 32.10, 31.23, 27.25, 26.72, 26.48, 25.70, 25.52, 23.28, 22.93 (к, С-19), 21.36 (к, CH3-С(О)О), 21.30 (к, CH3-С(О)О), 17.53 (к, С-21), 12.33 (к, С-18).Analogously to Example 4 (point a) from IV-a (DX) (2.0 g, 4.2 mmol), oxalyl chloride (2.1 ml, 25.2 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (20 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with n-bromoaniline (1.6 g, 9.3 mmol) and NEt 3 (14 mmol) in CH 2 Cl 2 (20 ml). The mass of the crude product 2.45 g, yield 92%. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with an AcOEt gradient (0-3%)), 2 fractions of I-a5 (DC) of various purities with masses of 0.63 g (98.6% purity by HPLC) and 1.41 g (98.2% purity) were obtained by HPLC) as a white amorphous solid. Yield 77%. Mp 109: 3 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 34 H 48 BrNO 5 : C, 64.75; H, 7.67; Br, 12.67; N, 2.22; O, 12.68; found C, 65.10; H, 7.75; Br, 13.00; N, 2.35. 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz): δ = 7.43 (s, 1H, N H ), 7.38 (m, 4H, H-2 ', H-3', H-5 ', H-6'), 5.03 (s, 1H, H-12 (β)), 4.67 (m, 1H, H-3 (β)), 2.37 (m, 1H, H-23), 2.18 (m, 1H, H-23 ') , 2.07 (s, 3H, CH 3 -26), 2.01 (s, 3H, CH 3 -28), 0.87 (s, 3H, CH 3 -19), 0.80 (d, 3H, J 21.20 = 6.4, CH 3 -21), 0.69 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz): δ = 171.55 (s, C-24), 170.51 (s, C-25), 170.44 (s, C-27), 136.96 (s, C-1 '), 131.76 (d, C-3 '), 131.76 (d, C-5'), 121.15 (d, C-2 '), 121.15 (d, C-6'), 116.49 (s, C-4 '), 75.82 (d, C-12), 74.08 (d, C-3), 49.27, 47.70, 44.90, 41.65, 35.50, 34.72, 34.56, 34.53, 34.24, 33.88, 32.10, 31.23, 27.25, 26.72, 26.48, 25.70, 25.52, 23.28, 22.93 (c, C-19), 21.36 (c, C H 3 -C (O) O), 21.30 (c, C H 3 -C (O) O), 17.53 (c, C-21 ), 12.33 (c, C-18).
Пример 11. Синтез N-(n-толил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а6(ДХ)) Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (1.0 г, 2.1 ммоль), оксалилхлорида (1.1 мл, 12.6 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (20 мл). Аналогично примеру 4 
(пункт б) провели реакцию с n-толуидином (0.25 г, 2.3 ммоль) и NEt3 (3.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.2 г, выход количественный. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 1.0 г I-а6(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 84%. Тпл 94.8°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C35H51NO5: С, 74.30; Н, 9.09; N, 2.48; О, 14.14; найдено С, 74.00; Н, 8.72; N, 2.50. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=7.65 (с, 1H, NH), 7.35 (д, 2Н, J=8.4, Н-2', Н-6'), 7.05 (д, 2Н, J=8.3, Н-3', Н-5'), 5.04 (с, 1H, Н-12(β)), 4.65 (м, 1H, Н-3(β)), 2.34 (м, 1Н, Н-23), 2.25 (с, 3H, CH3-7'), 2.15 (м, 1Н, Н-23'), 2.05 (с, 3H, CH3-26), 1.99 (с, 3H, CH3-28), 0.85 (с, 3H, CH3-19), 0.78 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.67 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.49 (с, С-24), 170.43 (с, С-25), 170.36 (с, С-27), 135.39 (с, С-1'), 133.40 (с, С-4'), 129.18 (д, С-3'), 129.18 (д, С-5'), 119.70 (д, С-2'), 119.70 (д, С-6'), 75.79 (д, С-12), 74.02 (д, С-3), 49.21, 47.67, 44.81, 41.59, 35.44, 34.69, 34.49, 34.38, 34.17, 33.81, 32.04, 31.33, 27.18, 26.66, 26.42, 25.64, 25.44, 23.22, 22.86 (к, С-19), 21.27 (к, CH3-С(О)О), 21.21 (к, CH3-С(О)О), 20.64 (к, CH3-7'), 17.45 (к, С-21), 12.25 (к, С-18).(item b) conducted a reaction with n-toluidine (0.25 g, 2.3 mmol) and NEt 3 (3.5 mmol) in CH 2 Cl 2 (10 ml). The mass of the raw product is 1.2 g, the yield is quantitative. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 ), 1.0 g of I-a6 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Yield 84%. Mp 94.8 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 35 H 51 NO 5 : C, 74.30; H, 9.09; N, 2.48; O, 14.14; found C, 74.00; H, 8.72; N, 2.50. 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz): δ = 7.65 (s, 1H, N H ), 7.35 (d, 2H, J = 8.4, H-2 ', H-6'), 7.05 (d, 2H, J = 8.3, H-3 ', H-5'), 5.04 (s, 1H, H-12 (β)), 4.65 (m, 1H, H-3 (β)), 2.34 (m, 1H, H -23), 2.25 (s, 3H, CH 3 -7 '), 2.15 (m, 1H, H-23'), 2.05 (s, 3H, CH 3 -26), 1.99 (s, 3H, CH 3 - 28), 0.85 (s, 3H, CH 3 -19), 0.78 (d, 3H, J 21.20 = 6.3, CH 3 -21), 0.67 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz): δ = 171.49 (s, C-24), 170.43 (s, C-25), 170.36 (s, C-27), 135.39 (s, C-1 '), 133.40 (s, C-4 '), 129.18 (d, C-3'), 129.18 (d, C-5 '), 119.70 (d, C-2'), 119.70 (d, C-6 '), 75.79 (d, C-12), 74.02 (d, C-3), 49.21, 47.67, 44.81, 41.59, 35.44, 34.69, 34.49, 34.38, 34.17, 33.81, 32.04, 31.33, 27.18, 26.66, 26.42, 25.64, 25.44, 23.22, 22.86 (c, C-19), 21.27 (c, C H 3 -C (O) O), 21.21 (c, C H 3 -C (O) O), 20.64 (c, CH 3 - 7 '), 17.45 (c, C-21), 12.25 (c, C-18).
Пример 12. Синтез N-(пиридин-3'-ил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а7(ДХ))Example 12. Synthesis of N- (pyridin-3'-yl) -3α, 12α-diacetoxy-5β-cholan-24-amide (I-a7 (DC))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (1.0 г, 2.1 ммоль), оксалилхлорида (1.1 мл, 12.6 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (20 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с пиридин-3-амином (0.22 г, 2.3 ммоль) и NEt3 (3.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.34 г, выход количественный. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-5%)), получили 0.72 г I-а7(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 62%. Тпл 161.2-161.7°C. Эл. ан. вычислено для C33H48N2O5: С, 71.71; Н, 8.75; N, 5.07; О, 14.47; найдено С, 71.47; Н, 8.52; N, 5.16. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=8.54 (д, 1H, J=2.3, Н-2'), 8.30 (д, 1Н, J=4.6, Н-4'), 8.23 (с, 1H, NH), 8.20 (д, 1Н, J=8.6, Н-6'), 7.26 (дд, 1Н, J=J=4.1, H-5'), 5.07 (с, 1H, H-12(β)), 4.68 (м, 1H, H-3(β)), 2.44 (м, 1H, H-23), 2.25 (м, 1H, H-23'), 2.09 (с, 3H, CH3-26), 2.02 (с, 3H, CH3-28), 0.89 (с, 3H, CH3-19), 0.80 (д, 3H, J21,20=5.8, CH3-21), 0.70 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=172.30 (с, С-24), 170.53 (с, С-25), 170.50 (с, С-27), 144.68 (д, С-4'), 140.71 (д, С-6'), 135.07 (с, С-3'), 127.06 (д, С-2'), 123.64 (д, С-5'), 75.80 (д, С-12), 74.07 (д, С-3), 49.22, 47.65, 44.86, 41.60, 35.45, 34.71, 34.28, 34.20, 33.85, 32.06, 31.16, 29.53, 27.23, 26.68, 26.45, 25.67, 25.50, 23.26, 22.91 (к, С-19), 21.36 (к, CH3-С(O)O), 21.30 (к, CH3-С(O)O), 17.49 (к, С-21), 12.30 (к, С-18).Analogously to Example 4 (point a) from IV-a (DX) (1.0 g, 2.1 mmol), oxalyl chloride (1.1 ml, 12.6 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (20 ml) was obtained. Analogously to Example 4 (item b), the reaction was carried out with pyridin-3-amine (0.22 g, 2.3 mmol) and NEt 3 (3.5 mmol) in CH 2 Cl 2 (10 ml). The mass of the crude product 1.34 g, the yield is quantitative. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-5%)), 0.72 g of I-a7 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Yield 62%. Mp 161.2-161.7 ° C. Al. an calculated for C 33 H 48 N 2 O 5 : C, 71.71; H, 8.75; N, 5.07; O, 14.47; found C, 71.47; H, 8.52; N, 5.16. 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz): δ = 8.54 (d, 1H, J = 2.3, H-2 '), 8.30 (d, 1H, J = 4.6, H-4'), 8.23 (s, 1H , N H ), 8.20 (d, 1H, J = 8.6, H-6 '), 7.26 (dd, 1H, J = J = 4.1, H-5'), 5.07 (s, 1H, H-12 (β )), 4.68 (m, 1H, H-3 (β)), 2.44 (m, 1H, H-23), 2.25 (m, 1H, H-23 '), 2.09 (s, 3H, CH 3 -26 ), 2.02 (s, 3H, CH 3 -28), 0.89 (s, 3H, CH 3 -19), 0.80 (d, 3H, J 21.20 = 5.8, CH 3 -21), 0.70 (s, 3H , CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz): δ = 172.30 (s, C-24), 170.53 (s, C-25), 170.50 (s, C-27), 144.68 (d, C-4 '), 140.71 (d, C-6 '), 135.07 (s, C-3'), 127.06 (d, C-2 '), 123.64 (d, C-5'), 75.80 (d, C-12), 74.07 (d, C-3), 49.22, 47.65, 44.86, 41.60, 35.45, 34.71, 34.28, 34.20, 33.85, 32.06, 31.16, 29.53, 27.23, 26.68, 26.45, 25.67, 25.50, 23.26, 22.91 (C, C- 19), 21.36 (c, C H 3 -C (O) O), 21.30 (c, C H 3 -C (O) O), 17.49 (c, C-21), 12.30 (c, C-18) .
Пример 13. Синтез N-(2-(1Н-индол-2-ил)этил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида I-б1(ДХ)Example 13. Synthesis of N- (2- (1H-indol-2-yl) ethyl) -3α, 12α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide I-B1 (DC)
К раствору I-а1(ДХ) (0.52 мг, 0.84 ммоль) в МеОН (10 мл) по каплям прибавили раствор KOH (0.6 г, 10.7 ммоль) в МеОН (8 мл), кипятили 20 часов, ход реакции контролировали ТСХ. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, добавили AcOEt. Промыли органический слой 5%-ным раствором HCl, затем насыщенными водными растворами NaHCO3 и NaCl, сушили над безводным MgSO4. Масса сырого продукта 0.35 г (выход 77%). Продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом МеОН (0-8%)), получили 2 фракции I-б1 (ДХ) массой 0.07 г (>98% чистоты по ВЭЖХ), и 0.13 г (<98% чистоты по ВЭЖХ). Суммарный выход составил 44%.A solution of KOH (0.6 g, 10.7 mmol) in MeOH (8 ml) was added dropwise to a solution of I-a1 (DC) (0.52 mg, 0.84 mmol) in MeOH (10 ml), boiled for 20 hours, the course of the reaction was monitored by TLC. The reaction mixture was concentrated in vacuo, AcOEt was added. The organic layer was washed with 5% HCl solution, then with saturated aqueous solutions of NaHCO 3 and NaCl, dried over anhydrous MgSO 4 . The mass of the crude product is 0.35 g (yield 77%). The product was purified by column chromatography (SiO2, CH 2 Cl 2 with a MeOH gradient (0-8%)), 2 fractions I-B1 (DC) with a mass of 0.07 g (> 98% purity by HPLC) were obtained, and 0.13 g (<98% purity by HPLC). The total yield was 44%.
1H ЯМР (CDCl3, 300 МГЦ): δ=8.63 (шс, 1H, NH-1'), 7.56 (д, 1H, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.36 (д, 1H, J8',7'=8.2, Н-8'), 7.17 (м, 1Н, Н-7'), 7.08 (м 1H, Н-6'), 7.00 (шс, 1Н, Н-2'), 5.81 (шс, 1H, C(O)NH), 3.90 (с, 1H, Н-12(β)), 3.55 (м, 3Н: Н-3(β), CH2-11'), 2.93 (м, 2Н, CH2-10'), 0.89 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.87 (с, 3H, CH3-18), 0.61 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=173.70 (с, С-24), 136.32 (с, С-9'), 127.23 (с, С-4'), 122.11 (д, С-2'), 121.93 (д, С-7'), 119.23 (д, С-5'), 118.54 (д, С-6'), 112.74 (с, С-3'), 111.27 (д, С-8'), 73.03 (д, С-12), 71.59 (д, С-3), 48.10, 46.91, 46.32, 41.91, 39.60 (т, С-11'), 36.21, 35.83, 35.08, 33.96, 33.50, 33.33, 31.54, 30.26, 28.47, 27.34, 26.98, 25.98, 25.17 (т, С-10'), 23.51, 22.99 (к, С-19), 17.27 (к, С-21), 12.61 (к, С-18). 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz): δ = 8.63 (bs, 1H, NH-1 '), 7.56 (d, 1H, J 5', 6 ' = 7.8, H-5'), 7.36 (d, 1H, J 8 ', 7' = 8.2, H-8 '), 7.17 (m, 1H, H-7'), 7.08 (m 1H, H-6 '), 7.00 (ws, 1H, H-2' ), 5.81 (bs, 1H, C (O) N H ), 3.90 (s, 1H, H-12 (β)), 3.55 (m, 3H: H-3 (β), CH 2 -11 '), 2.93 (m, 2H, CH 2 -10 '), 0.89 (d, 3H, J 21.20 = 6.0, CH 3 -21), 0.87 (s, 3H, CH 3 -18), 0.61 (s, 3H, CH 3 -19). 13 C NMR (CDCl 3 , 75 MHz): δ = 173.70 (s, C-24), 136.32 (s, C-9 '), 127.23 (s, C-4'), 122.11 (d, C-2 ' ), 121.93 (d, C-7 '), 119.23 (d, C-5'), 118.54 (d, C-6 '), 112.74 (s, C-3'), 111.27 (d, C-8 ' ), 73.03 (d, C-12), 71.59 (d, C-3), 48.10, 46.91, 46.32, 41.91, 39.60 (t, C-11 '), 36.21, 35.83, 35.08, 33.96, 33.50, 33.33, 31.54, 30.26, 28.47, 27.34, 26.98, 25.98, 25.17 (t, C-10 '), 23.51, 22.99 (c, C-19), 17.27 (c, C-21), 12.61 (c, C-18) .
Пример 14. Синтез N-(2-(1Н-индол-2-ил)этил)-3α,7α-дигидрокси-5β-холан-24-амида I-б1 (ХДХ)Example 14. Synthesis of N- (2- (1H-indol-2-yl) ethyl) -3α, 7α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide I-B1 (ХДХ)
Аналогично примеру 13 из I-а1(ХДХ) (0.69 г, 1.1 ммоль) и KOH (0.38 г, 6.8 ммоль) в МеОН (25 мл) получили 0.55 г сырого продукта (выход 92%). Продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом МеОН (0-5%)), получили I-б1 (ХДХ) массой 0.22 г (95% чистоты по ВЭЖХ), суммарный выход составил 37%.Analogously to example 13, from I-a1 (HDH) (0.69 g, 1.1 mmol) and KOH (0.38 g, 6.8 mmol) in MeOH (25 ml) received 0.55 g of a crude product (yield 92%). The product was purified by column chromatography (SiO2, CH 2 Cl 2 with a MeOH gradient (0-5%)), obtained I-B1 (CDH) with a mass of 0.22 g (95% purity by HPLC), the total yield was 37%.
1Н ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.73 (шс, 1Н, NH-1'), 7.55 (д, 1Н, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.35 (д, 1Н, J8',7'=7.8, Н-8'), 7.16 (дд, 1H, J7',6'=7.0, J7',8'=7.8, Н-7'), 7.08 (дд, 1H, J6',5'=7.8, Н-6'), 7.00 (шс, 1Н, Н-2'), 5.80 (шс, 1H, C(O)NH), 3.80 (шс, 1Н, Н-7(β)), 3.56 (м, 2Н, CH2-11'), 3.43 (м, 1H, Н-3(β)), 2.93 (м, 2Н, CH2-10'), 0.86 (с, 3H, CH3-18), 0.59 (д, 3H, CH3-21), 0.59 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.82 (с, С-24), 136.32 (с, С-9'), 127.17 (с, С-4'), 122.12 (д, С-2'), 121.85 (д, С-7'), 119.15 (д, С-5'), 118.48 (д, С-6'), 112.55 (с, С-3'), 111.27 (д, С-8'), 71.79 (д, С-3), 68.33 (д, С-7), 55.50 (д, С-17), 50.20 (д, С-14), 42.44 (с, С-13), 41.29, 39.56, 39.49, 39.43, 39.18, 35.27, 35.15, 34.85, 33.31, 32.65, 31.65, 30.86, 30.39, 28.03, 25.14, 23.49, 22.64 (к, С-19), 20.41, 18.22 (к, С-21), 11.60 (к, С-18). 1 H NMR (CDCl 3 , 500 MHz): δ = 8.73 (bs, 1H, NH-1 '), 7.55 (d, 1H, J 5', 6 ' = 7.8, H-5'), 7.35 (d, 1H, J 8 ', 7' = 7.8, H-8 '), 7.16 (dd, 1H, J 7', 6 ' = 7.0, J 7', 8 ' = 7.8, H-7'), 7.08 (dd , 1H, J 6 ', 5' = 7.8, H-6 '), 7.00 (bs, 1H, H-2'), 5.80 (bc, 1H, C (O) N H ), 3.80 (bs, 1H, H-7 (β)), 3.56 (m, 2H, CH 2 -11 '), 3.43 (m, 1H, H-3 (β)), 2.93 (m, 2H, CH 2 -10'), 0.86 ( s, 3H, CH 3 -18), 0.59 (d, 3H, CH 3 -21), 0.59 (s, 3H, CH 3 -19). 13 C NMR (CDCl 3 , 125 MHz): δ = 173.82 (s, C-24), 136.32 (s, C-9 '), 127.17 (s, C-4'), 122.12 (d, C-2 ' ), 121.85 (d, C-7 '), 119.15 (d, C-5'), 118.48 (d, C-6 '), 112.55 (s, C-3'), 111.27 (d, C-8 ' ), 71.79 (d, C-3), 68.33 (d, C-7), 55.50 (d, C-17), 50.20 (d, C-14), 42.44 (s, C-13), 41.29, 39.56 , 39.49, 39.43, 39.18, 35.27, 35.15, 34.85, 33.31, 32.65, 31.65, 30.86, 30.39, 28.03, 25.14, 23.49, 22.64 (c, C-19), 20.41, 18.22 (c, C-21), 11.60 (k, C-18).
Пример 15. Синтез N-(2-(1H-индол-2-ил)этил)-3α,7β-дигидрокси-5β-холан-24-амида I-б1(УДХ)Example 15. Synthesis of N- (2- (1H-Indol-2-yl) ethyl) -3α, 7β-dihydroxy-5β-cholan-24-amide I-B1 (UDH)
Аналогично примеру 13 из I-a1 (УДХ) (0.69 г, 1.1 ммоль) и KOH (0.38 г, 6.8 ммоль) в МеОН (25 мл) получили 0.55 г сырого продукта (выход 92%). Продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом МеОН (0-5%)), получили I-б1 (УДХ) массой 0.22 г (95% чистоты по ВЭЖХ), суммарный выход составил 37%. Тпл 114.9°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H50N2O3: С, 76.36; Н, 9.42; N, 5.24; О, 8.98; найдено С, 76.43; Н, 9.64; N, 4.89. 1Н ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.96 (шс, 1H, NH-1'), 7.53 (д, 1H, J5',6'=7.5, Н-5'), 7.33 (д, 1H, J8',7'=8.1, Н-8'), 7.13 (м, 1H, Н-7'), 7.05 (м, 1H, Н-6'), 6.97 (шс, 1Н, Н-2'), 5.97 (м, 1Н, C(O)NH), 3.49 (м, 4Н: Н-3(β), Н-7(α), CH2-11'), 2.91 (м, 2Н, CH2-10'), 0.87 (с, 3H, CH3-18), 0.82 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.58 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, CD3OD, 125 МГц): δ=174.00 (с, С-24), 136.17 (с, С-9'), 127.06 (с, С-4'), 121.98 (д, С-2'), 121.73 (д, С-7'), 119.00 (д, С-5'), 118.35 (д, С-6'), 112.25 (с, С-3'), 111.17 (д, С-8'), 71.00 (д, С-3), 70.95 (д, С-7), 55.49, 54.60, 43.46, 43.33, 42.20, 39.88, 39.49, 39.00, 36.85, 36.65, 35.17, 34.69, 33.82, 33.32, 31.68, 29.85, 28.40, 25.01, 23.17 (к, С-19), 20.94, 18.21 (к, С-21), 11.87 (к, С-18).Analogously to example 13, from I-a1 (UDH) (0.69 g, 1.1 mmol) and KOH (0.38 g, 6.8 mmol) in MeOH (25 ml) received 0.55 g of crude product (yield 92%). The product was purified by column chromatography (SiO2, CH 2 Cl 2 with a MeOH gradient (0-5%)), obtained I-B1 (UDH) weighing 0.22 g (95% purity by HPLC), the total yield was 37%. Mp 114.9 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 34 H 50 N 2 O 3 : C, 76.36; H, 9.42; N, 5.24; O, 8.98; found C, 76.43; H, 9.64; N, 4.89. 1 H NMR (CDCl 3 , 500 MHz): δ = 8.96 (bs, 1H, NH-1 '), 7.53 (d, 1H, J 5', 6 ' = 7.5, H-5'), 7.33 (d, 1H, J 8 ', 7' = 8.1, H-8 '), 7.13 (m, 1H, H-7'), 7.05 (m, 1H, H-6 '), 6.97 (ws, 1H, H-2 '), 5.97 (m, 1H, C (O) N H ), 3.49 (m, 4H: H-3 (β), H-7 (α), CH 2 -11'), 2.91 (m, 2H, CH 2 -10 '), 0.87 (s, 3H, CH 3 -18), 0.82 (d, 3H, J 21.20 = 6.0, CH 3 -21), 0.58 (s, 3H, CH 3 -19). 13 C NMR (CDCl 3 , CD 3 OD, 125 MHz): δ = 174.00 (s, C-24), 136.17 (s, C-9 '), 127.06 (s, C-4'), 121.98 (d, C-2 '), 121.73 (d, C-7'), 119.00 (d, C-5 '), 118.35 (d, C-6'), 112.25 (s, C-3 '), 111.17 (d, C-8 '), 71.00 (d, C-3), 70.95 (d, C-7), 55.49, 54.60, 43.46, 43.33, 42.20, 39.88, 39.49, 39.00, 36.85, 36.65, 35.17, 34.69, 33.82, 33.32, 31.68, 29.85, 28.40, 25.01, 23.17 (к, С-19), 20.94, 18.21 (к, С-21), 11.87 (к, С-18).
Пример 16. Синтез N-(1`-адамантил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б3(ДХ)Example 16. Synthesis of N- (1`-adamantyl) -3α, 12α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide (I-b3 (DC)
Аналогично примеру 13 из I-а3(ДХ) (0.2 г, 0.3 ммоль) и KOH (0.2 г, 3.6 ммоль) в МеОН (5 мл) получили 0.17 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-5%)), получили 0.12 г I-б3(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 71%. Тпл 300.8°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H55NO3: С, 77.66; Н, 10.54; N, 2.66; О, 9.13; найдено С, 77.92; Н, 10.29; N, 2.79. 1Н ЯМР (CDCl3, CD3OD, 400 МГц): δ=3.79Analogously to Example 13, from I-a3 (DC) (0.2 g, 0.3 mmol) and KOH (0.2 g, 3.6 mmol) in MeOH (5 ml) received 0.17 g of crude product. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-5%)), 0.12 g of I-b3 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Yield 71%. Mp 300.8 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 34 H 55 NO 3 : C, 77.66; H, 10.54; N, 2.66; O, 9.13; found C, 77.92; H, 10.29; N, 2.79. 1 H NMR (CDCl 3 , CD 3 OD, 400 MHz): δ = 3.79
(с, 1H, Н-12(β)), 3.38 (м, 1Н, Н3(β)), 1.90 (шс, 3H, Н-3', Н-5', Н-8'), 1.82 (с, 6Н, CH2-2', CH2-6', CH2-9'), 1.51 (с, 6Н, CH2-4', CH2-7', CH2-10'), 0.81 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.74 (с, 3H, CH3-19), 0.51 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, CD3OD, 100 МГц): δ=173.90 (с, С-24), 72.67 (д, С-12), 71.00 (д, С-3), 51.41, 47.64, 46.39, 46.01, 41.72, 40.95 (т, С-2', С-6', С-9'), 35.91 (т, С-4', С-7', С-10'), 35.57, 35.54, 34.97, 34.89, 34.74, 33.12, 31.45, 29.38, 29.01 (д, С-3', С-5', С-8'), 28.09, 27.19, 26.74, 25.80, 23.34, 22.64 (к, С-19), 16.66 (к, С-21), 12.23 (к, С-18).(s, 1H, H-12 (β)), 3.38 (m, 1H, H3 (β)), 1.90 (bs, 3H, H-3 ', H-5', H-8 '), 1.82 (s , 6H, CH 2 -2 ', CH 2 -6', CH 2 -9 '), 1.51 (s, 6H, CH 2 -4', CH 2 -7 ', CH 2 -10'), 0.81 (d , 3H, J 21.20 = 6.3, CH 3 -21), 0.74 (s, 3H, CH 3 -19), 0.51 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , CD 3 OD, 100 MHz): δ = 173.90 (s, C-24), 72.67 (d, C-12), 71.00 (d, C-3), 51.41, 47.64, 46.39, 46.01, 41.72, 40.95 (t, C-2 ', C-6', C-9 '), 35.91 (t, C-4', C-7 ', C-10'), 35.57, 35.54, 34.97, 34.89, 34.74, 33.12, 31.45, 29.38, 29.01 (d, C-3 ', C-5', C-8 '), 28.09, 27.19, 26.74, 25.80, 23.34, 22.64 (c, C-19), 16.66 (к, С-21), 12.23 (к, С-18).
Пример 17. Синтез N-фенил-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б4(ДХ))Example 17. Synthesis of N-phenyl-3α, 12α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide (I-b4 (DC))
Аналогично примеру 14 из I-а4 (ДХ) (0.4 г, 0.7 ммоль) и NaOMe (0.2 г, 3.7 ммоль) в МеОН (10 мл) получили 0.43 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.23 г I-б4(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 68%. Тпл 214.2-216.3°C. Эл. ан. вычислено для C30H45NO3: С, 77.04; Н, 9.70; N, 2.99; О, 10.26; найдено С, 77.32; Н, 9.39; N, 3.12. 1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=8.00 (с, 1H, NH), 7.53 (д, 2Н, J=7.7, Н-2', Н-6'), 7.25 (дд, 2Н, J=J=7.8, Н-3', Н-5'), 7.04 (дд, 1Н, J=7.3, Н-4'), 3.97 (с, 1H, Н-12(β)), 3.56 (м, 1Н, Н-3(β)), 2.38 (м, 1Н, Н-23), 2.22 (м, 1H, Н-23'), 0.95 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.64 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 100 МГц): δ=172.38 (с, С-24), 138.21 (с, С-1'), 128.74 (д, С-3'), 128.74 (д, С-5'), 123.75 (д, С-4'), 119.55 (д, С-2'), 119.55 (д, С-6'), 73.10 (д, С-12), 71.67 (д, С-3), 47.66, 46.41, 46.20, 42.00, 36.19, 35.91, 35.21, 35.03, 34.09, 33.62, 33.45, 30.97, 30.67, 28.15, 27.50, 27.19, 26.09, 23.65, 23.02 (к, С-19), 17.34 (к, С-21), 12.48 (к, С-18).Analogously to Example 14, from I-a4 (DC) (0.4 g, 0.7 mmol) and NaOMe (0.2 g, 3.7 mmol) in MeOH (10 ml) received 0.43 g of crude product. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-2%)), yielding 0.23 g of I-b4 (DC) as a white amorphous solid. Yield 68%. Mp 214.2-216.3 ° C. Al. an calculated for C 30 H 45 NO 3 : C, 77.04; H, 9.70; N, 2.99; O, 10.26; found C, 77.32; H, 9.39; N, 3.12. 1 H NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 8.00 (s, 1H, N H ), 7.53 (d, 2H, J = 7.7, H-2 ', H-6'), 7.25 (dd, 2H, J = J = 7.8, H-3 ', H-5'), 7.04 (dd, 1H, J = 7.3, H-4 '), 3.97 (s, 1H, H-12 (β)), 3.56 (m , 1H, H-3 (β), 2.38 (m, 1H, H-23), 2.22 (m, 1H, H-23 '), 0.95 (d, 3H, J 21.20 = 6.0, CH 3 - 21), 0.87 (s, 3H, CH 3 -19), 0.64 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 100 MHz): δ = 172.38 (s, C-24), 138.21 (s, C-1 '), 128.74 (d, C-3'), 128.74 (d, C-5 ' ), 123.75 (d, C-4 '), 119.55 (d, C-2'), 119.55 (d, C-6 '), 73.10 (d, C-12), 71.67 (d, C-3), 47.66, 46.41, 46.20, 42.00, 36.19, 35.91, 35.21, 35.03, 34.09, 33.62, 33.45, 30.97, 30.67, 28.15, 27.50, 27.19, 26.09, 23.65, 23.02 (c, C-19), 17.34 (c, C -21), 12.48 (c, C-18).
Пример 18. Синтез N-(4'-бромфенил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б5 (ДХ))Example 18. Synthesis of N- (4'-bromophenyl) -3α, 12α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide (I-b5 (DH))
Аналогично примеру 14 из I-а5 (ДХ) (0.39 г, 0.62 ммоль) и NaOMe (0.20 г, 3.7 ммоль) в МеОН (10 мл) получили 0.7 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.25 г I-б5 (ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 74%. Тпл 229.4°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C30H44BrNO3: С, 65.92; Н, 8.11; Br, 14.62; N, 2.56; О, 8.78; найдено С, 65.57; Н, 7.90; Br, 14.62; N, 2.63. 1Н ЯМР (CDCl3, CD3OD, 400 МГц): δ=9.00 (с, 1Н, NH), 7.38 (д, 2Н, J=7.8, Н-2', Н-6'), 7.29 (д, 2Н, J=7.8, Н-3', Н-5'), 3.86 (с, 1H, Н-12(β)), 3.47 (м, 1Н, Н-3(β)), 2.29 (м, 1H, Н-23), 2.15 (м, 1Н, Н-23'), 0.90 (д, 3H, J21,20=5.7, CH3-21), 0.81 (с, 3H, CH3-19), 0.57 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, CD3OD, 100 МГц): δ=173.09 (с, С-24), 137.37 (с, С-1'), 131.42 (д, С-3'), 131.42 (д, С-5'), 121.14 (д, С-2'), 121.14 (д, С-6'), 115.99 (с, С-4'), 72.88 (д, С-12), 71.19 (д, С-3), 47.77, 46.23, 46.11, 41.77, 35.78, 35.65, 35.00, 34.97, 33.85, 33.29, 33.25, 31.10, 29.60, 28.20, 37.25, 26.85, 25.91, 23.45, 22.79 (к, С-19), 16.88 (к, С-21), 12.37 (к, С-18).Analogously to Example 14, from I-a5 (DX) (0.39 g, 0.62 mmol) and NaOMe (0.20 g, 3.7 mmol) in MeOH (10 ml) received 0.7 g of crude product. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-2%)), 0.25 g of I-B5 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Yield 74%. Mp 229.4 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 30 H 44 BrNO 3 : C, 65.92; H, 8.11; Br, 14.62; N, 2.56; O, 8.78; found C, 65.57; H, 7.90; Br, 14.62; N, 2.63. 1 H NMR (CDCl 3 , CD 3 OD, 400 MHz): δ = 9.00 (s, 1H, N H ), 7.38 (d, 2H, J = 7.8, H-2 ', H-6'), 7.29 ( d, 2H, J = 7.8, H-3 ', H-5'), 3.86 (s, 1H, H-12 (β)), 3.47 (m, 1H, H-3 (β)), 2.29 (m , 1H, H-23), 2.15 (m, 1H, H-23 '), 0.90 (d, 3H, J 21.20 = 5.7, CH 3 -21), 0.81 (s, 3H, CH 3 -19) , 0.57 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , CD 3 OD, 100 MHz): δ = 173.09 (s, C-24), 137.37 (s, C-1 '), 131.42 (d, C-3'), 131.42 (d, C-5 '), 121.14 (d, C-2'), 121.14 (d, C-6 '), 115.99 (s, C-4'), 72.88 (d, C-12), 71.19 (d, C -3), 47.77, 46.23, 46.11, 41.77, 35.78, 35.65, 35.00, 34.97, 33.85, 33.29, 33.25, 31.10, 29.60, 28.20, 37.25, 26.85, 25.91, 23.45, 22.79 (C, C-19), 16.88 (c, C-21), 12.37 (c, C-18).
Пример 19. Синтез N-(4'-метилбензил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б6(ДХ))Example 19. Synthesis of N- (4'-methylbenzyl) -3α, 12α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide (I-b6 (DC))
Аналогично примеру 14 из I-а6(ДХ) (0.23 г, 0.4 ммоль) и KOH (0.35 г, 6.2 ммоль) в МеОН (10 мл) получили 0.19 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 0.12 г I-б6 (ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 63%. Тпл 117.5°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C31H47NO3: С, 77.29; Н, 9.83; N, 2.91; О, 9.96; найдено С, 77.60; Н, 9.74; N, 2.99. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=7.89 (с, 1Н, NH), 7.40 (д, 2Н, J=8.2, Н-2', Н-6'), 7.05 (д, 2Н, J=8.1, Н-3', Н-5'), 3.96 (с, 1Н, Н-12(β)), 3.57 (м, 1H, Н-3(β)), 2.90 (шс, 2Н, ОН), 2.26 (с, 3H, CH3-7'), 0.96 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.64 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=172.18 (с, С-24), 135.61 (с, С-1'), 133.34 (д, С-4'), 129.23 (д, С-3'), 129.23 (д, С-5'), 119.70 (д, С-2'), 119.70 (д, С-6'), 73.13 (д, С-12), 71.65 (д, С-3), 47.80, 46.40, 46.37, 41.96, 36.19, 35.89, 35.18, 35.02, 34.05, 33.67, 33.43, 31.11, 30.43, 28.25, 27.46, 27.11, 26.07, 23.63, 22.99 (к, С-19), 20.71 (к, CH3-7'), 17.34 (к, С-21), 12.53 (к, С-18).Analogously to Example 14, from I-a6 (DC) (0.23 g, 0.4 mmol) and KOH (0.35 g, 6.2 mmol) in MeOH (10 ml) received 0.19 g of crude product. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 ), 0.12 g of I-b6 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Exit 63%. Mp 117.5 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 31 H 47 NO 3 : C, 77.29; H, 9.83; N, 2.91; Oh, 9.96; found C, 77.60; H, 9.74; N, 2.99. 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz): δ = 7.89 (s, 1H, N H ), 7.40 (d, 2H, J = 8.2, H-2 ', H-6'), 7.05 (d, 2H, J = 8.1, H-3 ', H-5'), 3.96 (s, 1H, H-12 (β)), 3.57 (m, 1H, H-3 (β)), 2.90 (bc, 2H, OH ), 2.26 (s, 3H, CH 3 -7 '), 0.96 (d, 3H, J 21.20 = 6.3, CH 3 -21), 0.87 (s, 3H, CH 3 -19), 0.64 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 75 MHz): δ = 172.18 (s, C-24), 135.61 (s, C-1 '), 133.34 (d, C-4'), 129.23 (d, C-3 ' ), 129.23 (d, C-5 '), 119.70 (d, C-2'), 119.70 (d, C-6 '), 73.13 (d, C-12), 71.65 (d, C-3), 47.80, 46.40, 46.37, 41.96, 36.19, 35.89, 35.18, 35.02, 34.05, 33.67, 33.43, 31.11, 30.43, 28.25, 27.46, 27.11, 26.07, 23.63, 22.99 (c, C-19), 20.71 (c, CH 3 -7 '), 17.34 (q, C-21), 12.53 (q, C-18).
Пример 20. Синтез N-(пиридин-3'-ил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (1-б7(ДХ))Example 20. Synthesis of N- (pyridin-3'-yl) -3α, 12α-dihydroxy-5β-cholan-24-amide (1-b7 (DC))
Аналогично примеру 14 из I-а7 (ДХ) (0.59 г, 1.1 ммоль) и KOH (0.48 г, 8.6 ммоль) в МеОН (20 мл) получили 0.44 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-5%)), получили 0.22 г I-б7(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 44%. Тпл 114.6°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C29H44N2O3: С, 74.32; Н, 9.46; N, 5.98; О, 10.24; найдено С, 73.98; Н, 9.44; N, 5.70. 1Н ЯМР (CDCl3, МеОН, 400 МГц): δ=9.53 (с, 1H, NH), 8.45 (с, 1Н, Н-2'), 8.24 (д, 1H, J=7.9, Н-4'), 8.14 (д, 1H, J=4.2, Н-6'), 7.23 (м, 1H, Н-5'), 3.88 (с, 1H, Н-12(β)), 3.48 (м, 1H, Н-3(β)), 2.36 (м, 1Н, Н-23), 2.22 (м, 1Н, Н-23'), 0.93 (д, 3H, J21,20=5.8, CH3-21), 0.82 (с, 3H, CH3-19), 0.59 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, МеОН, 100 МГц): δ=173.77 (с, С-24), 143.07 (д, С-4'), 139.74 (д, С-6'), 135.97 (с, С-3'), 127.69 (д, С-2'), 123.87 (д, С-5'), 72.91 (д, С-12), 71.19 (д, С-3), 47.84, 46.20, 46.14, 41.79, 35.77, 35.68, 35.00, 34.98, 33.88, 33.27, 33.10, 31.04, 29.62, 28.24, 27.28, 26.85, 25.93, 23.48, 22.82 (к, С-19), 16.89 (к, С-21), 12.41 (к, С-18).Analogously to example 14, from I-a7 (DC) (0.59 g, 1.1 mmol) and KOH (0.48 g, 8.6 mmol) in MeOH (20 ml) received 0.44 g of crude product. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-5%)), and 0.22 g of I-B7 (DC) was obtained as a white amorphous solid. Exit 44%. Mp 114.6 ° C [decomposition]. Al. an calculated for C 29 H 44 N 2 O 3 : C, 74.32; H, 9.46; N, 5.98; O, 10.24; found C, 73.98; H, 9.44; N, 5.70. 1 H NMR (CDCl 3 , MeOH, 400 MHz): δ = 9.53 (s, 1H, N H ), 8.45 (s, 1H, H-2 '), 8.24 (d, 1H, J = 7.9, H-4 '), 8.14 (d, 1H, J = 4.2, H-6'), 7.23 (m, 1H, H-5 '), 3.88 (s, 1H, H-12 (β)), 3.48 (m, 1H , H-3 (β)), 2.36 (m, 1H, H-23), 2.22 (m, 1H, H-23 '), 0.93 (d, 3H, J 21.20 = 5.8, CH 3 -21) , 0.82 (s, 3H, CH 3 -19), 0.59 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , MeOH, 100 MHz): δ = 173.77 (s, C-24), 143.07 (d, C-4 '), 139.74 (d, C-6'), 135.97 (s, C- 3 '), 127.69 (d, C-2'), 123.87 (d, C-5 '), 72.91 (d, C-12), 71.19 (d, C-3), 47.84, 46.20, 46.14, 41.79, 35.77, 35.68, 35.00, 34.98, 33.88, 33.27, 33.10, 31.04, 29.62, 28.24, 27.28, 26.85, 25.93, 23.48, 22.82 (c, C-19), 16.89 (c, C-21), 12.41 (c C-18).
Пример 21. Синтез 3α,12α-диметокси-5β-холан-24-овой кислоты (V-в (ДХ))Example 21. Synthesis of 3α, 12α-dimethoxy-5β-cholan-24-oic acid (V-in (DC))
К раствору ДХК (0.5 г, 1.3 ммоль) в сухом ТГФ (15 мл) прибавили NaH (0.75 г, 31.2 ммоль (57-63% в масле)) перемешивали 10 минут при комнатной температуре, затем к смеси прибавили MeI (0.6 мл, 9.6 ммоль). Реакционную смесь выдержали сутки при 40°C. В реакционную смесь добавили МеОН (5 мл) и 5%-ный раствор HCl, затем экстрагировали смесью CH2Cl2-t-BuOMe. Органическую фазу промыли насыщенными водными растворами Na2S2O3 и NaCl, сушили над безводным MgSO4. Растворитель удалили на роторном испарителе, сырой продукт получили в виде аморфной массы. Сырой продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.41 г V-в (ДХ) (выход 76%) в виде белого твердого вещества. Тпл 180.6-182.2°C. Эл. ан. вычислено для C31H47NO3: С, 74.24; Н, 10.54; О, 15.21; найдено С, 74.42; Н, 10.27, О, 15.21. 1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=3.34 (с, 1Н, Н-12), 3.31 (с, 3H, CH3-26), 3.21 (с, 3H, CH3-25), 3.12 (м, 1Н, Н-3), 2.37 (м, 1H, Н-23), 2.23 (м, 1H, Н-23'), 0.87 (с, 6Н, CH3-21, CH3-19), 0.62 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 100 МГц): δ=180.19 (с, С-24), 82.07 (д, С-12), 80.38 (д, С-3), 55.48 (к, CH3-26), 55.30 (к, CH3-25), 48.66, 46.26, 46.17, 41.91, 35.85, 35.14, 34.88, 34.31, 33.35, 32.35, 30.89, 30.55, 27.22, 27.16, 26.16, 26.58, 25.94, 23.51, 23.13 (к, С-19), 21.78, 17.18 (к, С-21), 12.57 (к, С-18).NaH (0.75 g, 31.2 mmol (57-63% in oil)) was stirred for 10 minutes at room temperature to a solution of DCA (0.5 g, 1.3 mmol) in dry THF (15 ml) and then mixed with MeI (0.6 ml, 9.6 mmol). The reaction mixture was kept for a day at 40 ° C. MeOH (5 ml) and 5% HCl solution were added to the reaction mixture, then extracted with a mixture of CH 2 Cl 2 -t-BuOMe. The organic phase was washed with saturated aqueous solutions of Na 2 S 2 O 3 and NaCl, dried over anhydrous MgSO 4 . The solvent was removed on a rotary evaporator, the crude product was obtained in the form of an amorphous mass. The crude product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-2%)), and 0.41 g of V-c (DC) was obtained (yield 76%) as a white solid. Mp 180.6-182.2 ° C. Al. an calculated for C 31 H 47 NO 3 : C, 74.24; H, 10.54; O, 15.21; found C, 74.42; H, 10.27, O, 15.21. 1 H NMR (CDCl 3 , 400 MHz): δ = 3.34 (s, 1H, H-12), 3.31 (s, 3H, CH 3 -26), 3.21 (s, 3H, CH 3 -25), 3.12 ( m, 1H, H-3), 2.37 (m, 1H, H-23), 2.23 (m, 1H, H-23 '), 0.87 (s, 6H, CH 3 -21, CH 3 -19), 0.62 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 100 MHz): δ = 180.19 (s, C-24), 82.07 (d, C-12), 80.38 (d, C-3), 55.48 (c, CH 3 -26), 55.30 (k, CH 3 -25), 48.66, 46.26, 46.17, 41.91, 35.85, 35.14, 34.88, 34.31, 33.35, 32.35, 30.89, 30.55, 27.22, 27.16, 26.16, 26.58, 25.94, 23.51, 23.13 (k, C-19), 21.78, 17.18 (c, C-21), 12.57 (c, C-18).
Пример 22. Синтез N-(4'-бромфенил)-3α,12α-диметокси-5β-холан-24-амида (V-в5(ДХ))Example 22. Synthesis of N- (4'-bromophenyl) -3α, 12α-dimethoxy-5β-cholan-24-amide (V-b5 (DC))
Аналогично примеру 4 (пункт а) из V-в(ДХ) (0.5 г, 1.2 ммоль), оксалилхлорида (0.5 мл, 5.9 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (15 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с n-броманилином (0.23 г, 1.3 ммоль) и NEt3 (2.1 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл). Масса сырого продукта 0.67 г. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-1%), затем SiO2, н-гексан - AcOEt (2:15, об./об.), получили 0.54 г V-в5(ДХ) в виде белого твердого вещества. Выход 79%. Тпл 168.9-170.4°C. Эл. ан. вычислено для C32H48BrNO3: С, 66.88; Н, 8.42; Br, 13.91; N, 2.44; О, 8.35; найдено С, 67.25; Н, 8.38; Br, 14.28; N, 2.52. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=7.41 (м, 1H, NH), 7.39 (м, 4Н, Н-2', Н-3', Н-5', Н-6'), 3.35 (с, 1Н, Н-12(β)), 3.32 (с, 3H, CH3-26), 3.21 (с, 3H, CH3-25), 3.13 (м, 1H, Н-3(β)), 2.38 (м, 1H, Н-23), 2.22 (м, 1Н, Н-23'), 0.90 (д, 3H, J21,20=6.2, CH3-21), 0.88 (с, 3H, CH3-19), 0.63 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.92 (с, С-24), 137.03 (с, С-1'), 131.75 (д, С-3'), 131.75 (д, С-5'), 121.18 (д, С-2'), 121.18 (д, С-6'), 116.41 (с, С-4'), 82.07 (д, С-12), 80.36 (д, С-3), 55.47 (к, CH3-25), 55.41 (к, CH3-26), 48.74, 46.19, 46.12, 41.90, 35.84, 35.15, 34.88, 34.32, 34.13, 33.38, 32.44, 31.27, 27.32, 27.15, 26.68, 25.94, 23.50, 23.14 (к, С-19), 21.77, 17.37 (к, С-21), 12.59 (к, С-18).Analogously to Example 4 (point a) from V-in (DC) (0.5 g, 1.2 mmol), oxalyl chloride (0.5 ml, 5.9 mmol) a solution of the acid chloride in CH 2 Cl 2 (15 ml) was obtained. Analogously to example 4 (item b), the reaction was carried out with n-bromoaniline (0.23 g, 1.3 mmol) and NEt 3 (2.1 mmol) in CH 2 Cl 2 (5 ml). The mass of the crude product is 0.67 g. The resulting product was purified by column chromatography (SiO 2 , CHCl 3 with a MeOH gradient (0-1%), then SiO 2 , n-hexane - AcOEt (2:15, v / v), obtained 0.54 g V-B5 (DF) as a white solid. Yield 79%. mp 168.9-170.4 ° C. Calculated for C 32 H 48 BrNO 3 : C, 66.88; H, 8.42; Br, 13.91; N , 2.44; O, 8.35; found C, 67.25; H, 8.38; Br, 14.28; N, 2.52. 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz): δ = 7.41 (m, 1H, N H ), 7.39 (m , 4H, H-2 ', H-3', H-5 ', H-6'), 3.35 (s, 1H, H-12 (β)), 3.32 (s, 3H, CH 3 -26), 3.21 (s, 3H, CH 3 -25), 3.13 (m, 1H, H-3 (β)), 2.38 (m, 1H, H-23), 2.22 (m, 1H, H-23 '), 0.90 (d, 3H, J 21.20 = 6.2, CH 3 -21), 0.88 (s, 3H, CH 3 -19), 0.63 (s, 3H, CH 3 -18). 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz): δ = 171.92 (s, C-24), 137.03 (s, C-1 '), 131.75 (d, C-3 '), 131.75 (d, C-5'), 121.18 (d, C-2 '), 121.18 (d, C-6'), 116.41 (s, C-4 '), 82.07 (d, C-12), 80.36 (d, C-3), 55.47 (c, CH 3 -25), 55.41 (c, CH 3 -26), 48.74, 46.19, 46.12, 41.90, 35.84, 35.15, 34.88 34.32, 34.13, 33.38, 32.44, 31.27, 27.32, 27.15, 26.68, 25.94, 23.50, 23.14 (c, C-19), 21.77, 17.37 (c, C-21), 12.59 (c, C-18).
Пример 23. Исследование влияния предлагаемых соединений на способность ингибировать Tdp1.Example 23. The study of the effect of the proposed compounds on the ability to inhibit Tdp1.
Рекомбинантная тирозил-ДНК-фосфодиэстераза 1 человека (КФ 3.1.4.-) была экспрессирована в системе Escherichia coli (плазмида рЕТ 16B-Tdp1 любезно предоставлена доктором Кальдекотт К.У., Университет Сассекса, Великобритания) и выделена как описано [Interthal, 2001].Recombinant tyrosyl-
В качестве тест-системы для определения ингибирующих свойств предлагаемых соединений использована реакция удаления тушителя флуоресценции Black Hole Quencher 1 (BHQ1) с 3'-конца олигонуклеотида, катализируемая Tdp1. На 5'-конце олигонуклеотида находится (5,6)-FAM - флуорофор, интенсивность флуоресценции которого возрастает при удалении тушителя. Для измерения флуоресценции использовался флуориметр POLARstar OPTIMA производства BMG LABTECH.As a test system for determining the inhibiting properties of the proposed compounds, the Black Hole Quencher 1 (BHQ1) fluorescence quencher removal reaction from the 3'-end of the oligonucleotide catalyzed by Tdp1 was used. At the 5'-end of the oligonucleotide is (5,6) -FAM - a fluorophore, the fluorescence intensity of which increases when the extinguisher is removed. To measure fluorescence, a fluorometer POLARstar OPTIMA manufactured by BMG LABTECH was used.
Реакционные смеси объемом 200 мкл содержали буфер (50 мМ Tris-HCl, рН 8.0; 50 мМ NaCl; 7 мМ меркаптоэтанол), 50 нМ олигонуклеотид и различные концентрации ингибиторов. Реакция запускалась добавлением Tdp1 до конечной концентрации 1.3 нМ. Измерения проводились в линейном диапазоне зависимости скорости реакции от времени (до 8 минут) через каждые 55 секунд. Влияние предлагаемых соединений оценивали по величине IC50 (концентрация ингибитора, при которой активность фермента снижена наполовину). Обсчет значений IC50 проводился с помощью программы MARS Data Analisys 2.0 (BMG LABTECH).The 200 μl reaction mixtures contained buffer (50 mM Tris-HCl, pH 8.0; 50 mM NaCl; 7 mM mercaptoethanol), 50 nM oligonucleotide, and various concentrations of inhibitors. The reaction was started by adding Tdp1 to a final concentration of 1.3 nM. The measurements were carried out in the linear range of the reaction rate versus time (up to 8 minutes) every 55 seconds. The effect of the proposed compounds was evaluated by the IC 50 value (inhibitor concentration at which the enzyme activity is reduced by half). The calculation of the IC 50 values was carried out using the MARS Data Analisys 2.0 (BMG LABTECH) program.
Величины IC50 для изученных соединений приведены в таблице.The IC 50 values for the studied compounds are given in the table.
Пример 24. Цитотоксичность предлагаемых соединений.Example 24. The cytotoxicity of the proposed compounds.
Анализ цитотоксичности предлагаемых соединений проводили на линиях клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 и карциномы прямой кишки человека НСТ-116. Индуцированную соединениями клеточную гибель оценивали с помощью стандартного МТТ-теста [Mosmann, 1983] путем колориметрического измерения количества формазана, конвертированного из 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия бромида (МТТ) клетками, подвергшимися воздействию соединений. Клетки выращивали в среде IMDM, с 40 мкг/мл гентамицина, 100 ед/мл пенициллина, 0,1 мг/мл стрептомицина и 0,25 мкг/мл амфотерицина и в присутствии 10% эмбриональной бычьей сыворотки производства фирмы "Биолот" в атмосфере с 5% CO2. После формирования 50% монослоя в культуральную среду добавляли исследуемые препараты (объем добавляемых реагентов составляет 1/100 общего объема культуральной среды, объем DMSO 1% от конечного объема) и следили за ростом клеточной культуры в течение 3 сут. В качестве контроля использовали клетки, которые выращивали в присутствии 1% DMSO.Analysis of the cytotoxicity of the proposed compounds was performed on human breast adenocarcinoma cell lines MCF-7 and human rectal carcinoma HCT-116. Compound-induced cell death was assessed using the standard MTT test [Mosmann, 1983] by colorimetric measurement of the amount of formazan converted from 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT a) cells exposed to the compounds. Cells were grown in IMDM medium, with 40 μg / ml of gentamicin, 100 units / ml of penicillin, 0.1 mg / ml of streptomycin and 0.25 μg / ml of amphotericin and in the presence of 10% fetal bovine serum manufactured by Biolot in an atmosphere with 5% CO 2 . After the formation of 50% monolayer, the studied drugs were added to the culture medium (the volume of added reagents is 1/100 of the total volume of the culture medium, the volume of DMSO is 1% of the final volume) and the growth of cell culture was monitored for 3 days. Cells grown in the presence of 1% DMSO were used as controls.
Токсичность соединений отсутствовала или была незначительна во всем диапазоне изученных концентраций (до 100 мкМ).The toxicity of the compounds was absent or insignificant over the entire range of concentrations studied (up to 100 μM).
Использованная литература:References:
- Al Abo М, et al., Mol. Cancer Ter.2017 doi:10.1158/1535-7163.MCT-17-0110- Al Abo M, et al., Mol. Cancer Ter.2017 doi: 10.1158 / 1535-7163.MCT-17-0110
- Alagoz M, et al., Nucleic Acids Res., 2014, 42(5):3089-103. doi: 10.1093/nar/gkt1260- Alagoz M, et al., Nucleic Acids Res., 2014, 42 (5): 3089-103. doi: 10.1093 / nar / gkt1260
- Antony, S et al., Nucleic Acids Res. 2007, 35, 4474-4484.- Antony, S et al., Nucleic Acids Res. 2007, 35, 4474-4484.
- Barthelmes HU, et al., J Biol Chem. 2004, 279, 55618-25565.- Barthelmes HU, et al., J Biol Chem. 2004, 279, 55618-25565.
- Beretta GL, et al., Curr. Med. Chem. 2010, 17, 1500-1508.- Beretta GL, et al., Curr. Med. Chem. 2010, 17, 1500-1508.
- Borda MA et al., Mutat Res. 2015, 781, 37-48.- Borda MA et al., Mutat Res. 2015, 781, 37-48.
- Cortes Ledesma F, et al., Nature, 2009, 461, 674-678.- Cortes Ledesma F, et al., Nature, 2009, 461, 674-678.
- Das BB, et al., The EMBO Journal., 2009, 28, 3667-3680.- Das BB, et al., The EMBO Journal., 2009, 28, 3667-3680.
- Dexheimer TS, et al., Anticancer Agents Med Chem. 2008, 8, 381-389.- Dexheimer TS, et al., Anticancer Agents Med Chem. 2008, 8, 381-389.
- Dexheimer T.S. et al., J. Med. Chem. 2009, 52, 7122-7131- Dexheimer T.S. et al., J. Med. Chem. 2009, 52, 7122-7131
- El-Khamisy SF, et al., DNA Repair (Amst)., 2009, 8 760-766.- El-Khamisy SF, et al., DNA Repair (Amst)., 2009, 8 760-766.
- Geenen JJJ, Clin Pharmacokinet. 2017 Oct 23. doi: 10.1007/s40262-017-0587-4. [Epub ahead of print] Review.- Geenen JJJ, Clin Pharmacokinet. 2017 Oct 23. doi: 10.1007 / s40262-017-0587-4. [Epub ahead of print] Review.
- Jun J.H. et al. European Journal of Pharmaceutical Sciences 2018 (111) 337-348- Jun J.H. et al. European Journal of Pharmaceutical Sciences 2018 (111) 337-348
- Hirano R, et al., EMBO J., 2007, 26, 4732-1743.- Hirano R, et al., EMBO J., 2007, 26, 4732-1743.
- Huang Shar-yin N. et al., Expert Opin Ther Pat. 2011 Sep; 21(9): 1285-1292.- Huang Shar-yin N. et al., Expert Opin Ther Pat. 2011 Sep; 21 (9): 1285-1292.
- Interthal H, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2001, 98, 12009-12014.- Interthal H, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2001, 98, 12009-12014.
- Katyal S, et al., EMBO J., 2007, 26, 4720-1731.- Katyal S, et al., EMBO J., 2007, 26, 4720-1731.
- Laev S, et al., Bioorg. Med. Chem., 2016, 24, 5017-5027.- Laev S, et al., Bioorg. Med. Chem., 2016, 24, 5017-5027.
- Lu JYD, et al., PeerJ. 2017, 5:e3933. doi: 10.7717/peerj.3933- Lu JYD, et al., PeerJ. 2017, 5: e3933. doi: 10.7717 / peerj.3933
- Murai J, et al., J Biol Chem. 2012, 287, 12848-12857.- Murai J, et al., J Biol Chem. 2012, 287, 12848-12857.
- Nguyen TX, et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 4457-4478.- Nguyen TX, et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 4457-4478.
- Nivens MC, et al., Cancer Chemother Pharmacol., 2004, 53, 107-115.- Nivens MC, et al., Cancer Chemother Pharmacol., 2004, 53, 107-115.
- 
- Pommier Y. Nat. Rev. Cancer, 2006, 6, 789-802.- Pommier Y. Nat. Rev. Cancer, 2006, 6, 789-802.
- Pommier Y, et al. Chem Biol., 2010, 17, 421-433.- Pommier Y, et al. Chem Biol., 2010, 17, 421-433.
- Zakharenko A, et al., Bioorg. Med. Chem., 2015, 23, 2044-2052.- Zakharenko A, et al., Bioorg. Med. Chem., 2015, 23, 2044-2052.
- Zakharenko A, et al., J. Nat. Prod, 2016, 79, 2961-2967.- Zakharenko A, et al., J. Nat. Prod, 2016, 79, 2961-2967.
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018106010A RU2689335C1 (en) | 2018-02-16 | 2018-02-16 | Agents for inhibiting enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on bile acids |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018106010A RU2689335C1 (en) | 2018-02-16 | 2018-02-16 | Agents for inhibiting enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on bile acids |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2689335C1 true RU2689335C1 (en) | 2019-05-27 |
Family
ID=66636680
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018106010A RU2689335C1 (en) | 2018-02-16 | 2018-02-16 | Agents for inhibiting enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on bile acids |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2689335C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2724878C1 (en) * | 2019-08-08 | 2020-06-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) | Agent for inhibiting human enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on phenylcoumarines, sensitizing tumors to antitumour agents |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2009105179A (en) * | 2006-07-17 | 2010-08-27 | Новартис АГ (CH) | SULFONILAMINOCARBONYL DERIVATIVES OF CHOLIC ACID AMIDES FOR APPLICATION AS IMMUNOMODULATORS |
-
2018
- 2018-02-16 RU RU2018106010A patent/RU2689335C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2009105179A (en) * | 2006-07-17 | 2010-08-27 | Новартис АГ (CH) | SULFONILAMINOCARBONYL DERIVATIVES OF CHOLIC ACID AMIDES FOR APPLICATION AS IMMUNOMODULATORS |
Non-Patent Citations (3)
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2724878C1 (en) * | 2019-08-08 | 2020-06-26 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) | Agent for inhibiting human enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on phenylcoumarines, sensitizing tumors to antitumour agents |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4757139A (en) | 5-fluoro-2'-deoxyuridine derivative, processes for preparing same and antitumor composition containing the same | |
| Maitraie et al. | Synthesis, anti-inflammatory, and antioxidant activities of 18β-glycyrrhetinic acid derivatives as chemical mediators and xanthine oxidase inhibitors | |
| US3822254A (en) | Synthesis of 25-hydroxycholesterol | |
| JPWO2009022702A1 (en) | Process for producing pyripyropene derivative and its intermediate | |
| Rostami-Charati | Efficient synthesis of functionalized hydroindoles via catalyst-free multicomponent reactions of ninhydrin in water | |
| PT2503005E (en) | Cortexolone-17alpha-propionate in hydrate crystalline form iv | |
| Salomatina et al. | Deoxycholic acid as a molecular scaffold for tyrosyl-DNA phosphodiesterase 1 inhibition: A synthesis, structure–activity relationship and molecular modeling study | |
| Dong et al. | In vivo instability of platensimycin and platencin: Synthesis and biological evaluation of urea-and carbamate-platensimycin | |
| Jiang et al. | Synthesis and evaluation of trehalose-based compounds as anti-invasive agents | |
| Ecer et al. | Efficient and shortcut syntheses of some novel eight-membered ring cyclitols starting from cycloocta-1, 3-diene | |
| CA3190433A1 (en) | Methods of making cholic acid derivatives and starting materials therefor | |
| RU2689335C1 (en) | Agents for inhibiting enzyme tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 based on bile acids | |
| Yamansarov et al. | Synthesis and cytotoxicity of new alkyne derivatives of pentacyclic triterpenoids | |
| KR20130040180A (en) | Process for producing pyripyropene derivatives | |
| Qian et al. | Discovery of novel cholic acid derivatives as highly potent agonists for G protein-coupled bile acid receptor | |
| Li et al. | Conjugates of 18β-glycyrrhetinic acid derivatives with 3-(1H-benzo [d] imidazol-2-yl) propanoic acid as Pin1 inhibitors displaying anti-prostate cancer ability | |
| Moni et al. | Synthesis of rapamycin glycoconjugates via a CuAAC-based approach | |
| Ji et al. | New protein tyrosine phosphatase inhibitors from fungus Aspergillus gorakhpurensis F07ZB1707 | |
| Ahmad et al. | A facile method for synthesis of N-acyloxymethyl-5-fluorouracils, as a class of antitumor agents | |
| Li et al. | Multi-gram scale synthesis of a bleomycin (BLM) carbohydrate moiety: exploring the antitumor beneficial effect of BLM disaccharide attached to 10-hydroxycamptothecine (10-HCPT) | |
| Li et al. | Synthesis and Anti‐tumor Evaluation of Novel C‐37 Modified Derivatives of Gambogic Acid | |
| Zhou et al. | Design, synthesis and anti-tumor activities of carbamate derivatives of cinobufagin | |
| Saktrakulkla et al. | Chemistry of ecteinascidins. Part 3: preparation of 2′-N-acyl derivatives of ecteinascidin 770 and evaluation of cytotoxicity | |
| AIMI et al. | Synthesis of lyaloside, a prototypal β-carboline gluco indole alkaloid in rubiaceous plants | |
| Socha et al. | Synthesis of 1-homoaustraline |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210217 |