RU2688693C1 - Способ морфологического определения срока беременности - Google Patents
Способ морфологического определения срока беременности Download PDFInfo
- Publication number
- RU2688693C1 RU2688693C1 RU2018109634A RU2018109634A RU2688693C1 RU 2688693 C1 RU2688693 C1 RU 2688693C1 RU 2018109634 A RU2018109634 A RU 2018109634A RU 2018109634 A RU2018109634 A RU 2018109634A RU 2688693 C1 RU2688693 C1 RU 2688693C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pregnancy
- area
- coefficient equal
- weeks
- endometrium
- Prior art date
Links
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 38
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims abstract description 53
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000007790 scraping Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 40
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 abstract description 3
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 25
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 16
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 210000001136 chorion Anatomy 0.000 description 9
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 8
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 8
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 5
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 5
- 210000004252 chorionic villi Anatomy 0.000 description 4
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 4
- 238000012552 review Methods 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000003562 morphometric effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 2
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 238000011206 morphological examination Methods 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 210000002023 somite Anatomy 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000000421 Lepidium meyenii Nutrition 0.000 description 1
- 240000000759 Lepidium meyenii Species 0.000 description 1
- 206010035138 Placental insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000016117 decidualization Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 235000012902 lepidium meyenii Nutrition 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000011022 operating instruction Methods 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 230000009933 reproductive health Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для определения срока физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре. Для этого фрагменты соскоба из полости матки фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. Полученные препараты помещают на предметный столик светового микроскопа и отбирают участки, содержащие компактный слой гравидарного эндометрия. С помощью видеокамеры, установленной на световом микроскопе, видимое поле зрения выводят на экран компьютера. Затем морфометрически определяют площади 30 или более децидуальных клеток и площади их ядер в 3-х или более полях зрения одного или нескольких препаратов. Далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле: X=К+К1 × ср.Sкл - К2 × ср.Sя, где X - срок беременности в акушерских неделях; К - коэффициент равный 3,414; К1 - коэффициент равный 0,019; cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм; К2 - коэффициент равный 0,008; ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм. Изобретение обеспечивает достоверность и объективность морфологического заключения о сроке физиологически протекавшей беременности в первом триместре в акушерских неделях. 1 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно, к патоморфологии, и позволяет с использованием морфометрии на клеточном и субклеточном уровнях определить срок физиологически протекавшей беременности у женщин в первом триместре (5-12 недель).
Актуальность
По оценкам ВОЗ 41% (или 85 миллионов) беременностей являются нежелательными и ежегодно прерываются, в том числе, путем медицинского аборта в 10% (22 миллиона) случаев. От осложнений нелегального аборта умирают 47000 женщин [Безопасный аборт: рекомендации для системы здравоохранения по вопросам политики и практики. - 2-е изд. - ВОЗ, 2012. - С. 125].
В практике врачей патологоанатомов и судебно-медицинских экспертов возникает необходимость определения срока физиологически протекавшей беременности при морфологическом исследовании материала, полученного после проведения женщинам медицинского аборта хирургическим способом, в случаях с немедицинскими абортами, а также при судебно-медицинской экспертизе трупов беременных женщин в сроки 5-12 недель беременности [Пальцев М.А., Коваленко В.Л., Аничков Н.М. Руководство по биопсийно-секционному курсу: учебное пособие. - М: Медицина, 2002. - 256 с]
При патоморфологическом исследовании соскобов эндометрия ранних сроков беременности определение возраста эмбриона, а значит и срока беременности затруднено вследствие отсутствия однозначного способа, значительного повреждения эмбриона и его внезародышевых структур при медицинских абортах, выполненных путем кюретажа и вакуумаспирации [Внутриутробное развитие человека: руководство для врачей / под ред. А.П. Милованова, С.В. Савельевой. - М.: МДВ, 2006. - 384 с.]. В реальной практике микроскопическим путем определение срока беременности в I триместре в соскобе эндометрия достаточно субъективно. В связи с этим разработка простого, дешевого и доступного в использовании в любых патологоанатомических отделениях, лабораториях и судебно-медицинских бюро морфологического способа определения раннего срока физиологически протекавшей беременности имеет большое значение для практического здравоохранения.
В акушерстве и гинекологии существует несколько способов определения ранних сроков беременности.
Используют календарь беременности. При этом ориентируются на дату последней менструации. Женщина должна точно знать дату последней менструации, которая будет являться точкой отсчета наступления беременности в (акушерских неделях) [Акушерство: национальное руководство / под ред. Э.К. Айломазяна, В.И. Кулакова, В.Е. Радзинского, Г.М. Савельевой. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2011. - 1200 с.].
Широкую популярность получили цифровые тесты "Clearblue" с помощью которых определяют не только беременность, но и на основании концентрации ХГЧ (хорионического гонадотропина человека) в моче определяют предполагаемый срок гестации [Теребнева Л.А. История тестов на беременность и современные способы определения беременности малого срока // Гинекология. - 2015 - Т. 17, №2. - С. 50-54].
Разработаны online калькуляторы, позволяющие определить срок беременности на основании ответов на вопросы предлагаемой анкеты на интернет-сайте [Momberg М., Harries J., Constant D. Self-assessment of eligibility for early medical abortion using m-Health to calculate gestational age in Cape Town, South Africa: a feasibility pilot study // Reproductive Health. - 2016. - p. l3:40. DOI 10.1186/s12978-016-0160-x].
К рутинным методам диагностики относят УЗИ. При измерении среднего внутреннего диаметра плодного яйца, копчико-теменного размера эмбриона и оценке состояния желточного мешка определяют срок беременности [Елекенова А.Б., Шишкина Т.М. Ультразвуковая диагностика в ранние сроки беременности: обзор литературы // Вестник АГИУВ. - 2011. - №3 - С. 6-7].
Известен способ определения срока беременности по формуле включающий следующие данные: месяц беременности, дата обследования, первый день последней менструации, где k=0 при n=0-2, k=1 при n=3, k=2 при n=4-8, k=3 при n=9-10, при этом, x - срок беременности; к - коэффициент погрешности; n - месяц беременности; m1 - число даты обследования, m2 - первый день последней менструации [Трусиков М.С. Альтернативный метод определения срока беременности // Актуальные вопросы современной медицины: сборник материалов 72-й итоговой научной конференции молодых ученых и студентов. - г.Хабаровск: Дальневосточного государственного медицинского университета, 2015. - С. 78-80].
Однако, все перечисленные методы не используют при морфологическом исследовании соскобов из полости маки в патологоанатомической и судебно-медицинской практике.
При морфологическом исследовании в патоморфологии и судебной медицине для определения ранних сроков физиологически протекавшей беременности используют метод измерения длины эмбриона, подсчета числа его сомитов и спинальных ганглиев, измерение длины стопы и размеров почек. Для определения гестационного возраста также принято объединять все имеющиеся параметры [Внутриутробное развитие человека: руководство для врачей / под. ред. А.П. Милованова, С.В. Савельевой. - М.: МДВ, 2006. - 384 с.].
Возможно использование опыта изучения ворсин формирующейся плаценты в материале медицинских абортов для уточнения срока физиологически протекавшей беременности в зависимости от темпов ангио-, васкулогенеза и эритропоэза [Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод: руководство для врачей. - Москва. Медицина, - 1999. 448 с; Морфогенез плаценты человека в I триместре беременности / А.П. Милованов, Л.М. Ерофеева, И.А. Золотухина, Н.В. Александрович. // Морфология. - 2011. - Т. 139, №2 - С. 72-76.].
Недостатками данных методов являются, зачастую отсутствие в соскобах из полости матки, как самого эмбриона, так и его фрагментов и внезародышевых структур, необходимых для определения срока беременности.
Известен способ морфологического исследования соскобов из полости матки от женщин, прервавших физиологически протекавшую беременность в I триместре путем медаборта. Полученный материал подвергают патологоанатомическому исследованию. Проводят макроскопическое описание эмбриона, эндометрия, ворсинчатого хориона. Определяют размеры эмбриона и его органов (длина стопы, размер почек), подсчитывают число его сомитов. Отбирают необходимое количество кусочков гравидарного эндометрия и ворсинчатого хориона, которые помещают в нейтральный 10% формалин на 24-48 часов при комнатной температуре. Фиксированные кусочки подвергают обезвоживанию в спиртах восходящей концентрации и заливают в парафин. С полученных парафиновых блоков готовят срезы толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином для проведения обзорной гистологии [Саркисов Д.С, Перов Ю.Л. Микроскопическая техника: руководство для врачей и лаборантов. - Москва, 1996, - 548 с]. При микроскопическом исследовании оценивают микроструктуры гравидарного эндометрия и ворсинчатого хориона. В эндометрии оценивают децидуализацию, формирование которой начинается после оплодотворения яйцеклетки. Клетки стромы эндометрия приобретают округлые и полигональные очертания, так называемые предецидуальные клетки. На 5-7 день после имплантации бластоцисты клетки эндометрия становятся децидуальными. Отличаются более крупными размерами, имеют округлые или овальные ядра с мелкодисперсным хроматином и эозинофильной цитоплазмой. По мере прогрессирования беременности децидуальные клетки дифференцируются и становятся крупнее, эпителиоидного вида с четкими контурами, содержат везикулярные ядра и светлую цитоплазму с мелкими вакуолями. Наряду с усиленной трансформацией клеток эндометрия отмечаются изменения со стороны эндометриальных желез. Оценивают степень извитости желез, ширину их просвета, толщину эпителиальной выстилки, изменения в ядрах эпителиальных клеток, а также содержимое просвета желез. Во время беременности изменению подвергаются и спиральные артерии. Происходит утолщение их стенок и повышается извитость в виде «клубков». На протяжении первого триместра беременности происходит развитие первичных ворсин хориона через вторичные к третичным. В мезенхимальной строме третичных ворсин хориона в ранние сроки беременности выделяют этапы ангио- и васкулогенеза. Каждому сроку беременности соответствует своя морфологическая картина [Кондриков Н.И. Патология матки. - М.: Практическая медицина, 2008. - 334 с; Внутриутробное развитие человека: руководство для врачей / под. ред. А.П. Милованова, СВ. Савельевой. - М.: МДВ, 2006. - 384 с; Морфогенез плаценты человека в I триместре беременности / А.П. Милованов, Л.М. Ерофеева, И.А. Золотухина, Н.В. Александрович. // Морфология. - 2011. - Т. 139, №2 - С. 72-76].
Указанный способ выбран нами в качестве ближайшего аналога (прототипа).
Однако следует учитывать, что для определения срока физиологически протекавшей беременности по данному способу, использование только морфологических параметров при обзорной гистологии недостаточно корректно в связи с похожими, хоть и неидентичными, изменениями исследуемых структур в разные сроки беременности, что может привести к большой погрешности при постановке диагноза, особенно неопытным морфологом. Для определения срока гестации требуется полная морфологическая картина, включающая фрагменты гравидарного эндометрия и ворсинчатого хориона. Срок беременности определяется в эмбриональных неделях.
Заявляемым техническим результатом является достоверность, объективность и улучшение качества морфологического заключения о сроке физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре при морфометрическом исследовании соскоба из полости матки независимо от наличия или отсутствия в нем зародыша или эмбриона и его провизорных органов, несмотря на повреждающее действие кюретки и вакуумаспиратора при заборе материала. Предлагаемый способ позволяет определять срок беременности в акушерских неделях и при этом для исследования требуются только фрагменты компактного слоя гравидарного эндометрия.
Технический результат достигается путем проведения морфометрического исследования децидуальных клеток компактного слоя гравидарного эндометрия, при этом с помощью видеокамеры, установленной на световом микроскопе выводят изображение, видимого поля зрения на экран монитора, подключенного к компьютеру, затем морфометрически определяют площади 30 или более дцидуальных клеток и площадь их ядер в 3-х или более полях зрения, одного или нескольких препаратов, далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле:
X = К + К1 × cp.Sкл-К2 × ср.Sя, где
X - срок беременности в акушерских неделях;
K - коэффициент равный 3,414;
К1 - коэффициент равный 0,019;
ср.Sкл - средняя площадь клетки в мкм;
К2 - коэффициент равный 0,008;
ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм.
Новизна способа
Морфометрия децидуальных клеток компактного слоя гравидарного эндометрия использовалась для определения степени эндометриальной недостаточности при самопроизвольном прерывании беременности [Морфологические параметры дифференциальной диагностики эндометриальной и плацентарной недостаточности при ранних самопроизвольных абортах: усовершенствованная медицинская технология / Р.А. Кузнецов и др. - Иваново, 2009. - 13 с.].
Применение морфометрии децидуальных клеток эндометрия и их ядер для определения срока физиологически протекавшей беременности из доступных литературных источников не выявлено.
Среди гистологов и патоморфологов принято указывать срок беременности в эмбриональных неделях (рассчитан по овуляции), акушеры-гинекологи используют срок беременности, рассчитанный по первому дню последней менструации, т.е. срок беременности указывают в акушерских неделях, что уже предполагает разницу в 2 недели при его определении, а значит, диагноз врача акушера-гинеколога и заключительный патологоанатомический диагноз будут отличаться.
Предлагаемый метод позволяет определять срок беременности в акушерских неделях, что очень важно как для акушеров-гинекологов, так и для судебно-медицинских экспертов и патоморфологов.
В связи с вышеизложенным для объективизации морфологического определения срока физиологически протекавшей беременности предлагаем использовать расчет одновременно двух морфометрических параметров - площадь децидуальных клеток компактного слоя гравидарного эндометрия и площадь их ядер.
Способ осуществляется следующим образом.
Фрагменты соскоба из полости матки фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее, согласно методике руководства, материал обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и заливают в парафин. С полученных парафиновых блоков делают срезы толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином [Саркисов Д.С., Перов Ю.Л. Микроскопическая техника: руководство для врачей и лаборантов. - Москва, 1996. - 548 с.].
Полученные препараты по одному помещают на предметный столик светового микроскопа и отбирают срезы, содержащие участки компактного слоя гравидарного эндометрия. В случайном порядке выбирают поле зрения в одном из отобранных срезов и проводят морфометрию. Для этого видимое изображение поля зрения в микроскопе, оснащенного видеокамерой, выводят на экран компьютера, используя программу «ВидеоТест-Мастер Морфология 4.0» (Система анализа изображений Видео ТестТ: паспорт, техническое описание, инструкция по эксплуатации. - СПб., 2003) для проведения морфометрии микроструктур в гистологических препаратах. Используют, предложенную программой панель инструментов, обводят контур клетки и ее ядра. Программа выдает значение площади клетки и ее ядра в мкм. Подобным образом измерение проводят в 30 или более клетках и их ядрах, в трех или более полях зрения одного или нескольких препаратов. Затем рассчитывают средние значения площади клетки и ядра. Полученные результаты переносят в формулу:
X = К + К1 × cp.Sкл - К2 × ср.Sя, где
X - срок беременности в акушерских неделях;
K - коэффициент равный 3,414;
К1 - коэффициент равный 0,019;
cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм;
К2 - коэффициент равный 0,008;
ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм.
Количество предлагаемых полей зрения, децидуальных клеток и их ядер подобрано, основываясь на собственный опыт.
Отличительные признаки способа
Предложен способ определения срока беременности, заключающийся в том, что с помощью видеокамеры установленной на световом микроскопе видимое поле зрения выводят на экран компьютера, затем морфометрически определяют площади 30 или более децидуальных клеток и площади их ядер в 3-х или более полях зрения одного или нескольких препаратов, далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле:
X = К + К1 × cp.Sкл - К2 × ср.Sя, где
X - срок беременности в акушерских неделях;
K - коэффициент равный 3,414;
К1 - коэффициент равный 0,019;
ср.Sкл - средняя площадь клетки в мкм;
К2 - коэффициент равный 0,008;
cp.Sя - средняя площадь ядра в мкм.
Сущность способа поясним следующими примерами.
Пример 1.
Женщина И. 25 лет. Маточная беременность в гестационном сроке 8-9 акушерских недель (по УЗИ 6-7 недель). Беременность 2-я не желанная. Выполнен медицинский аборт путем выскабливания полости матки с использованием вакуумаспиратора. Полученный соскоб из полости матки направлен в патологоанатомическое отделение.
Согласно способу прототипу проводят макроскопическое исследование полученного материала. Выбирают фрагменты эмбриона, эндометрия и ворсинчатого хориона. Линейное измерение эмбриона не представляется возможным, поскольку ему нанесены значительные повреждения при проведении вакуумаспирации. Из фрагментированных частей эмбриона обнаружена стопа. Измеряют ее длину - 3 мм, что соответствует 6-7 недельному эмбриональному сроку беременности. Выбранные кусочки гравидарного эндометрия и ворсинчатого хориона фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре, после чего обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и заливают в парафин. Для проведения гистологического исследования с полученных парафиновых блоков делают срезы толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. Изготовленные препараты помещают на предметный столик светового микроскопа и проводят гистологическое исследование.
При гистологическом исследовании по способу прототипу выявляют участки гравидарного эндометрия и ворсинчатого хориона, в компактном слое эндометрия - децидуальные клетки. В строме эндометрия выявляют инвазию цитотрофобласта (ICT и VCT), сопровождающуюся отложением фибриноида и перестройкой спиральных артерий. Ворсинчатый хорион представлен стволовыми и третичными мезенхимальными васкуляризированными (3-4 сосуда) ворсинами хориона. Цитотрофобластический покров сплошной двухслойный.
Используя морфологическое описание эндометрия и ворсинчатого хориона по прототипу можно предположить, что выявленная морфологическая картина соответствует 6-7 неделям эмбрионального срока гестации.
При определении срока беременности согласно предлагаемому способу отбирают фрагменты гравидарного эндометрия и фиксируют их в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее материал обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и заливают в парафин. С парафиновых блоков делают срезы толщиной 4-5 мкм, помещают их на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином.
Проводят гистологическое исследование полученного материала с использованием светового микроскопа, оснащенного видеокамерой, подключенной к компьютеру. Первое предметное стекло помещают на предметный столик микроскопа, находят компактный слой гравидарного эндометрия. В выбранное поле зрения попадают 7 децидуальных клеток. Используют видеокамеру и переводят изображение на компьютер, оснащенный программой «ВидеоТестТ-Мастер Морфология 4.0» для проведения морфометрии. Пользуясь меню программы вычисляют площади каждой клетки и их ядер.
Поскольку размер фрагмента эндометрия позволяет, то передвинув стекло на предметном столике, случайным образом выбирают другое поле зрения, в которое попадают 5 децидуальных клеток и их ядер. Указанным выше способом проводят их морфометрию. Берут следующий препарат, выбирают поле зрения, в котором проводят морфометрию 10 децидуальных клеток и их ядер. Переводят объектив на второе поле зрения и определяют площадь еще 10 клеток и их ядер. Берут следующий (третий) препарат и проводят морфометрию еще 9 децидуальных клеток и их ядер. Далее вычисляют среднее значение площади клетки (cp.Sкл) и площади ядра (ср.Sя). Полученные результаты представлены в таблице №1.
Срок беременности вычисляют путем внесения полученных данных в формулу:
X = К + К1 × cp.Sкл - К2 × ср.Sя, где
X - срок беременности в акушерских неделях;
K - коэффициент равный 3,414;
К1 - коэффициент равный 0,019;
ср.Sкл - средняя площадь клетки в мкм;
К2 - коэффициент равный 0,008;
ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм;
Х = 3,414+0,019×337,5-0,008×77,5;
X = 9,2 акушерским неделям беременности.
Таким образом, расчет ср.Sкл и cp.Sя децидуальных клеток компактного слоя гравидарного эндометрия позволил уточнить срок беременности в акушерских неделях, что не противоречит указанному сроку врача акушера-гинеколога в направлении. Результаты морфометрии расходятся с морфологическими критериями на 2 недели.
Пример 2.
Труп неизвестной молодой женщины после автокатастрофы доставлен в бюро судебно-медицинской экспертизы. При проведении аутопсии в полости матки обнаружены остатки плодного яйца, в виде оболочек.
По способу прототипу при макроскопическом исследовании эмбрион и ворсинчатый хорион выявить не удается, ввиду значительных повреждений. На гистологическое исследование берут фрагменты гравидарного эндометрия и фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее кусочки обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и заливают в парафин. С парафиновых блоков делают срезы толщиной 4-5 мкм, помещают их на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. При обзорной гистологии в эндометрии обнаружены предецидуальные и децидуальные клетки, трансформация эндометриальных желез, хорошо спирализованные артерии. Ввиду отсутствия эмбриона и ворсинчатого хориона, точный срок беременности установить не представляется возможным. В протоколе пишут: маточная беременность раннего срока.
По предложенному способу достаточно отобрать несколько кусочков гравидарного эндометрия. Материал фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее кусочки обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и заливают в парафин. С парафиновых блоков делают срезы толщиной 4-5 мкм, помещают их на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. Проводят обзорную гистологию при помощи светового микроскопа. На столике микроскопа размещают предметное стекло, случайным образом выбирают поле зрения. Выводят изображение на экран компьютера через видеокамеру, установленную на микроскопе и с помощью программы «ВидеоТестТ-Мастер Морфология 4.0» выполняют морфометрию. В поле зрения компактного слоя гравидарного эндометрия попали 10 децидуальных клеток и ядер. Поскольку на первом препарате нет возможности выбрать второе поле зрения, берут второй препарат. Случайным образом выбирают поле зрения и проводят морфометрию 11 клеток и их ядер. Далее выбирают другое поле зрения и проводят морфометрию еще 9 клеток и их ядер. Несмотря на то, что во второе поле зрения попадает больше клеток и имеются еще не просмотренные препараты, в условиях дефицита времени ограничиваются измерениями 30 клеток и их ядер, поскольку это позволяют условия предложенного способа. Полученные данные приводят к среднему значению. Получены следующие результаты: cp.Sкл = 436,12 мкм, ср.Sя = 80,87 мкм. Срок беременности вычисляют путем внесения полученных данных в формулу:
X = К + К1 × cp.Sкл - К2 × ср.Sя, где
X - срок беременности в акушерских неделях;
K - коэффициент равный 3,414;
К1 - коэффициент равный 0,019;
cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм;
К2 - коэффициент равный 0,008;
ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм;
Х = 3,414+0,019×436,12-0,008×80,87;
X = 11 акушерским неделям беременности.
Таким образом, расчет ср.Sкл и ср.Sя децидуальных клеток компактного слоя гравидарного эндометрия позволил уточнить срок беременности.
Преимущества способа
1. Заявляемый способ прост в исполнении.
2. Исследование может быть проведено в любом патологоанатомическом отделении, лаборатории.
3. Способ является высоко информативным и объективным.
4. Возможность применения способа на биопсийном материале несмотря на отсутствие в соскобах полости матки зародыша или эмбриона и его провизорных органов.
5. Для осуществления способа достаточно фрагмента компактного слоя гравидарного эндометрия.
6. Несмотря на повреждающие факторы, такие как выскабливание полости матки методами кюретажа и вакуумаспирации, которые повреждают структурные компоненты плаценты I триместра беременности, возможно дальнейшее гистологическое исследование эндометрия.
7. Способ позволяет провести объективную диагностику срока беременности на клеточном и субклеточном уровнях.
8. Способ позволяет определить срок беременности в акушерских неделях.
9. Способ позволит оптимизировать сличение заключительных клинического и патологоанатомического диагнозов, а также существенно повысить качество оформления патологоанатомического диагноза.
Claims (8)
- Способ морфологического определения срока физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре, заключающийся в том, что фрагменты соскоба из полости матки фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином, полученные препараты помещают на предметный столик светового микроскопа и отбирают участки, содержащие компактный слой гравидарного эндометрия, отличающийся тем, что с помощью видеокамеры, установленной на световом микроскопе, видимое поле зрения выводят на экран компьютера, затем морфометрически определяют площади 30 или более децидуальных клеток и площади их ядер в 3-х или более полях зрения одного или нескольких препаратов, далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле:
- X=К+К1 × ср.Sкл - К2 × ср.Sя, где
- X - срок беременности в акушерских неделях;
- К - коэффициент равный 3,414;
- К1 - коэффициент равный 0,019;
- cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм;
- К2 - коэффициент равный 0,008;
- ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018109634A RU2688693C1 (ru) | 2018-03-19 | 2018-03-19 | Способ морфологического определения срока беременности |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018109634A RU2688693C1 (ru) | 2018-03-19 | 2018-03-19 | Способ морфологического определения срока беременности |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2688693C1 true RU2688693C1 (ru) | 2019-05-22 |
Family
ID=66636601
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018109634A RU2688693C1 (ru) | 2018-03-19 | 2018-03-19 | Способ морфологического определения срока беременности |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2688693C1 (ru) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4016250A (en) * | 1974-03-22 | 1977-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for testing for pregnancy |
SU903740A1 (ru) * | 1980-04-09 | 1982-02-07 | Университет дружбы народов им.Патриса Лумумбы | Способ определени срока беременности |
RU2535011C2 (ru) * | 2013-02-20 | 2014-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ дифференциальной диагностики форм первичной плацентарной недостаточности |
-
2018
- 2018-03-19 RU RU2018109634A patent/RU2688693C1/ru active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4016250A (en) * | 1974-03-22 | 1977-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for testing for pregnancy |
SU903740A1 (ru) * | 1980-04-09 | 1982-02-07 | Университет дружбы народов им.Патриса Лумумбы | Способ определени срока беременности |
RU2535011C2 (ru) * | 2013-02-20 | 2014-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ дифференциальной диагностики форм первичной плацентарной недостаточности |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
MOMBERG M. et al. Self-assessment of eligibility for early medical abortion using m-Health to calculate gestational age in Cape Town, South Africa: a feasibility pilot study //Reproductive health, 2016, Т. 13, N 1, С. 40. * |
САРКИСОВ Д. С. и др. Микроскопическая техника: Руководство. М.: Медицина, с.544, 1996. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Morlando et al. | Placenta accreta spectrum disorders: challenges, risks, and management strategies | |
Palacio et al. | Meta-analysis of studies on biochemical marker tests for the diagnosis of premature rupture of membranes: comparison of performance indexes | |
Baergen | Manual of pathology of the human placenta | |
Baergen | Manual of Benirschke and Kaufmann's pathology of the human placenta | |
van den Hoven et al. | Status of sperm morphology assessment: an evaluation of methodology and clinical value | |
US20130302793A1 (en) | Method of making and using a library of biological material | |
Maria Paternoster et al. | Cervical phIGFBP-1 in the evaluation of the risk of preterm delivery | |
Imudia et al. | Retrieval of trophoblast cells from the cervical canal for prediction of abnormal pregnancy: a pilot study | |
Andrade-Rocha | On the origins of the semen analysis: A close relationship with the history of the reproductive medicine | |
Kim et al. | Placental C4d deposition is a feature of defective placentation: observations in cases of preeclampsia and miscarriage | |
Abdelazim et al. | Fetal fibronectin (Quick Check fFN test) versus placental alpha microglobulin-1 (AmniSure test) for detection of premature rupture of fetal membranes | |
Ernst et al. | Pathologic examination of fetal and placental tissue obtained by dilation and evacuation | |
Hezelgrave et al. | Tests to predict imminent delivery in threatened preterm labour | |
Avagliano et al. | Inflammation modulates LC3 expression in human preterm delivery | |
Khooshideh et al. | The accuracy of placental alpha-microglobuline-1 test in diagnosis of premature rupture of the membranes | |
RU2688693C1 (ru) | Способ морфологического определения срока беременности | |
Lewis et al. | Use of imaging software for assessment of the associations among zona pellucida thickness variation, assisted hatching, and implantation of day 3 embryos | |
ES2645482T3 (es) | Aparato y procedimiento para procesar datos clínicos y bioquímicos e imágenes de ultrasonido tridimensionales para predecir la edad ovárica de una mujer y, equipo de ultrasonido de diagnóstico correspondiente | |
Buschmann et al. | Maternal and pregnancy-related death: causes and frequencies in an autopsy study population | |
Rashid | The role of histopathological examination of the products of conception following first-trimester miscarriage in Erbil Maternity Hospital | |
RU2371720C1 (ru) | Способ диагностики бесплодия у мужчин | |
Hatzipetros et al. | Assessment of cells in the ascitic fluid of women with ovarian hyperstimulation syndrome: the clinical implications for subsequent ovarian malignancy | |
Curry et al. | A protocol for the investigation of pregnancy loss | |
Driscoll | Autopsy following stillbirth: a challenge neglected | |
RU2531084C1 (ru) | Способ прогнозирования неразвивающейся беременности |