RU2687127C1 - Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов - Google Patents

Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов Download PDF

Info

Publication number
RU2687127C1
RU2687127C1 RU2018111143A RU2018111143A RU2687127C1 RU 2687127 C1 RU2687127 C1 RU 2687127C1 RU 2018111143 A RU2018111143 A RU 2018111143A RU 2018111143 A RU2018111143 A RU 2018111143A RU 2687127 C1 RU2687127 C1 RU 2687127C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
oil
strain
rhodococcus erythropolis
bacteria
products
Prior art date
Application number
RU2018111143A
Other languages
English (en)
Inventor
Лариса Анатольевна Ерофеевская
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Федеральный исследовательский центр "Якутский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"
Priority to RU2018111143A priority Critical patent/RU2687127C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2687127C1 publication Critical patent/RU2687127C1/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B09DISPOSAL OF SOLID WASTE; RECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09CRECLAMATION OF CONTAMINATED SOIL
    • B09C1/00Reclamation of contaminated soil
    • B09C1/10Reclamation of contaminated soil microbiologically, biologically or by using enzymes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Rhodococcus erythropolis LER-9.2, обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты, депонирован под регистрационным номером VKM Aс-2628D. Штамм бактерий Rhodococcus erythropolis VKM Aс-2628D может быть использован для очистки почв и воды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами в широком диапазоне температур от +2 до +37°C. Изобретение позволяет повысить качество очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов. 3 табл., 4 пр.

Description

Изобретение относится к области микробиологии и представляет собой новый бактериальный штамм Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D - деструктор нефти и нефтепродуктов, который может быть использован для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, керосин авиационный, бензин).
Уровень техники.
Известны штаммы: Serratia odorifera А 36 (1. Патент RU №2157839. Штамм бактерий Serratia odorifera А 36 ГКМ ВИЗР N 100 для окисления углеводородов нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/26, В09С 1/10 C12N 1/26, C12R1:425. Заявка: 99111625/13, 31.05.1999. Опубликовано: 20.10.2000. Патентообладатели: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Сабаляускас Ю., Диджяпетрис А., Янкявичус К. Авторы: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И., Чумакова А.Я., Сабаляускас Ю., Диджяпетрис А., Янкявичус К.); Kurthia zopfii 7-204 (2. Патент RU №2270063. Штамм бактерий Kurthia zopfii, обладающий свойством утилизировать нефть, нефтепродукты и ароматические полициклические углеводороды. С2, В09С 1/10, C02F 3/34, C12N 1/20, C12R 1/01. Заявка: 2003106326/13, 07.03.2003. Опубликовано: 20.01.2005. Патентообладатель: ООО ПКФ "БИГОР". Авторы: Бирюков В.В., Биттеева М.Б., Щеблыкин И.Н., Осипова В.Г., Коваленко Н.В., Гайтан В.И., Лобов Ю.А., Стехновская Л.Д., Разживин А.В., Барбот B.C., Васильев В.Н.); Pseudomonas putida 36 (3. Авторское свидетельство СССР №1076446, Штамм Pseudomonas putida 36, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. А1, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20 C02F 3/34, C02F 101:32, C12N 1/20, C12R 1:40. Заявка: 3474745, 22.07.1982. Опубликовано: 28.02.1984. Заявитель: Западно-Сибирский научно-исследовательский геологоразведочный нефтяной институт. Авторы: Дядечко В.Н., Толстокорова Л.Е., Морозова Т.Н.); Acinetronacter sp. НВ-1 (4. Патент RU №2077579. Штамм бактерий Acinetobacter species, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1.01, C12N 1/20, В09С 101:00. Заявка: 94043331/13, 06.12.1994. Опубликовано: 20.04.1997. Заявитель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии. Авторы: Жиркова Н.А., Кобелев B.C., Холоденко В.П. Патентообладатель: Государственный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии); Pseudomonas alcaligenes E7 (5. Патент RU N 2134723. Штамм бактерий Pseudomonas alcaligenes Е7, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12N 1/20, C12R 1:38. Заявка: 98105707/13, 25.03.1998. Опубликовано: 20.08.1999. Заявитель: Государственный научный центр прикладной микробилогии. Авторы: Ермоленко З.М., Холоденко В.П., Чугунов В.А. Патентообладатель: Государственный научный центр прикладной микробилогии).
Недостатком штаммов является то, что они утилизируют нефть при сравнительно высоких температурах.
Известен консорциум нефтеокисляющих микроорганизмов в составе: Pseudomonas putida ПИ Ко-1, Pseudomonas fluorescens ПИ-896, Micrococcus sp. ПИ Ку-1, Burkholderia caryophylli Jap-3, Serratia odorifera Jap-1 при весовом соотношении 3-12 мас. % каждого микроорганизма, при этом совместно с суспензией биопрепарата в загрязненную среду вводят ризоторфин в количестве 30-120 г/м2 (6. Патент RU 2191643. Способ очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами. C1, В09С 1/10, C12N 1/20, C12N 1/20. C12R 1:01. Заявка: 2001119562/13, 09.07.2001. Опубликовано: 27.10.2002. Заявитель. Закрытое акционерное общество "Полиинформ". Авторы: Саксон В.М., Кузнецов С.А., Бойкова И.В., Новикова И.И. Патентообладатель: Закрытое акционерное общество "Полиинформ"). Недостатком является то, что при приготовлении рабочей суспензии микроорганизмов температура поддерживается на уровне +18+22°C, т.е. микроорганизмы, входящие в состав консорциума, не способны к деградации нефтепродуктов при пониженных положительных температурах (+2°C).
Известен штамм бактерий Bacillus subtilis Колыма 7/2 (7. Патент RU 2446900. Способ очистки мерзлотных почв от нефти спорообразующими бактериями Bacillus subtilis. С2. В09С 1/10 (2006.01). Заявка: 2010129158/13, 13.07.2010. Опубликовано: 10.04.2012. Авторы: Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Неустроен М.М.. Сазонов Н.Н., Парникова С.И., Степанова A.M. Патентообладатель: Государственное научное учреждение Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии), обладающий способностью снижать концентрацию нефти до 0,48% в течение 3 месяцев летнего периода.
Однако штамм осуществляет деградацию только нефти и не способен утилизировать нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, керосин авиационный, бензин), в том числе в условиях широкого диапазона температур от +2 до +37°C.
Большую эффективность в условиях низких положительных температур показал штамм Rhodococcus erythroplis Е-15 (8. Патент RU N 2019527. Способ очистки почв от нефтяных загрязнений. C1, C02F 3/34, Е02В 15/04, C09K 17/00. Заявка: 93017464/26, 30.04.1993. Опубликовано: 15.09.1994. Заявитель: Северный государственный научно-исследовательский и проектно-конструкторский геологический центр. Авторы: Коронелли Т.В., Аракелян Э.И., Комарова Т.И., Ильинский В.В. Патентообладатель: Северный государственный научно-исследовательский и проектно-конструкторский геологический центр), но процесс биодеградация нефти протекает медленно и только при добавлении нитроаммофоски или нитроаммофоски и натриевой селитры.
Известен консорциум штаммов углеводородокисляющих микроорганизмов Rhodococcus erythropolis IT ВКМ Ac-1769 и Pseudomonas fluorescens ВКМ B-6847 (9. Патент РФ №2428471. Экобиопрепарат «Центрум-MMS» для очистки от нефти и нефтепродуктов. C12N 1/26, C02F 3/34, В09С 1/10. Дата подачи заявки: 11.05.2010. Опубликовано: 10.09.2011. Авторы: Забокрицкий А.Н., Забокрицкий Н.А., Минягин М.С. Патентообладатель: Забокрицкий А.Н.), входящих в состав экобиопрепарата «Центрум-MMS», предназначенного для очистки от загрязнителей углеводородной природы, в первую очередь от нефти и горюче смазочных веществ и позволяющего повысить эффективность очистки объектов окружающей среды от нефти и нефтепродуктов.
Недостатком известного изобретения является то, что культивирование микроорганизмов различной таксономической и видовой принадлежности, а также различающихся по скорости роста, субстратной специфичности, температурному оптимуму роста приводит к их конкурентной борьбе и снижает их выживаемость, и как следствие усложняет и делает процесс выращивания более материально и энергозатратным.
В качестве прототипа служит штамм бактерий Rhodococcus sp. ВКМ Ac-2626D, обладающий утилизирующей способностью по отношению к нефти и нефтепродуктам в широком диапазоне температур (от +4 до +30°C) (10. Патент RU №2558299. Штамм бактерий Rodococcus sp. - деструктор нефти и нефтепродуктов. C1, C12N 1/20, C02F 3/34, В09С 1/10, C12R 1/07. Заявка: 2014138257/10, 22.09.2014. Опубликовано: 27.07.15 г. Бюл. №21. Авторы: Ерофеевская Л.А., Чернявский В.Ф. Патентообладатель: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук).
Недостатком является не способность штамма развиваться при более низких (+2°C) и более высоких (+37°C) положительных температурах, что могло бы обеспечить более широкое применение штамма и его использование в регионах с различными климатическими условиями, кроме того, не выявлена его способность утилизировать бензин и керосин авиационный.
Задачей изобретения является расширение номенклатуры штаммов, обладающих утилизирующей способностью по отношению, как к нефти, так и нефтепродуктам (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в относительно короткие сроки, в широком диапазоне температур от +2 до +37°C, которые могут быть использованы для очистки объектов окружающей среды от загрязнений, как нефтью, так и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).
Поставленная задача решена тем, что получен новый бактериальный штамм бактерий Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D, обладающий способностью быстро утилизировать нефть и нефтепродукты (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин).
Штамм может быть использован для очистки объектов окружающей среды, загрязненных нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, масло гидравлическое, керосин авиационный, бензин), в широком диапазоне температур от +2 до +37°C, в относительно короткие сроки (3-60 суток).
Заявляемый штамм бактерий Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D (авторский номер LER-9.2) выделен из проб снежного покрова, загрязненного нефтепродуктами (бензин, дизельное топливо), отобранных с территории автозаправочной станции «АЗС «Парiтет», ул. Автострада 50 лет Октября 10/1а, г. Якутск, Республика Саха (Якутия).
Штамм идентифицирован и депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов (ВКМ) Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) под регистрационным номером VKM As-2628D.
Полученный штамм Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D характеризуется следующими признаками.
Морфологические признаки.
Грамположительные, не подвижные палочки; спор и капсул не образуют.
Кулътуральные характеристики.
На мясопептонном агаре (МПА) (масс. %: ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, pH 7,0-7,2) и ГРМ агаре (на основе гидролизата рыбной муки), масс. %: гидролизат рыбной муки - 1,2; пептон ферментативный - 1,2; натрий хлористый - 0,6; агар - 1,0; вода дистиллированная остальное; pH 7,1-7,5, формирует бежевые, выпуклые, блестящие колонии, диаметром 1-5 мм; консистенция мягкая, легко снимаются с поверхности агара, легко размазываются.
На среде Сабуро (состав, г/л: пептон - 10,0 мальтоза - 40,0; агар - 12,0±2,0; вода очищенная до 1 л), формирует бежево-розоватые блестящие колонии.
На агаризованной среде Мюнца (11. Керстен Д.К. Морфологические и культуральные свойства индикаторных микроорганизмов нефтегазовой съемки - Микробиология, 1963, №5 - С. 1024-1030) с нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, газовый конденсат, бензин, керосин авиационный) следующего состава: (масс. %) KNO3 - 0,4; MgSO4 ⋅ 7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; агар - 2,0; нефть или нефтепродукты - 1,0; вода дистиллированная - остальное, pH - 7,2, растет в виде бежевых выпуклых колоний диаметром 1 мм.
В мясо-пептонном бульоне промышленного производства образует муть с обильным придонным осадком.
Отношение к кислороду: аэробы.
Растет в диапазоне pH 5,5-8,5, при температуре от +2 до +37±1°C.
Используемые источники углерода: сорбит.
Проверенные не используемые источники углерода: лактоза, глюкоза, цитрат натрия, малонат натрия.
Другие проверенные тесты: оксидаза-отрицательный, не декарбоксилирует лизин и орнитин, не способен расщеплять фенилаланин, индол-отрицательный, с ероводород не продуцирует, активный в отношении инозита, уреаза-отрицательный, тест с
Figure 00000001
- отрицательный.
Штамм не вирулентный, не токсичный, не токсигенный (проверка проведена на белых мышах).
Штамм не патогенен для растений (проверка на фитотоксичность проведена на семенах овса посевного (
Figure 00000002
sativa) сорт «Скакун», пшеницы (Triticum) сорт «Приленская-19» и клевера лугового (Trifolium pretense).
Штамм может поддерживаться регулярными пересевами (1 раз в 14 дней) на скошенном МПА или храниться в лиофилизированном состоянии в ампулах в условиях холодильника.
При секвенировании вариабельных участков 16S rDNA получена следующая собранная нуклеотидная последовательность для исследуемого штамма:
Figure 00000003
Результаты определения родовой принадлежности штаммов и процента сходства с ближайшими известными видами, представлены в таблице №1.
Figure 00000004
Штамм может быть получен в лаборатории №2 Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук (ИПНГ СО РАН), по адресу: 677980, Республика Саха (Якутия), г. Якутск, ул. Октябрьская, 1.
Изобретение поясняется следующими примерами.
Пример 1. Выделение и культивирование штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D
Штамм бактерий Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D выделен из снежного покрова, загрязненного нефтепродуктами (бензин, дизельное топливо), методом накопительных культур на минеральной среде с нефтью с последующим пересевом на МПА.
Для этого, пробу снежного покрова поместили в стерильную емкость с крышкой для оттаивания до жидкого состояния.
Оттаивание пробы проводили при комнатной температуре.
После чего, соблюдая правила асептики, 10 мл оттаявшей пробы, при помощи пипетки Пастера, вносили в колбы емкостью 250 мл, с содержанием 100 мл, заранее подготовленной минеральной среды следующего состава: (масс. %) KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; вода дистиллированная - остальное, pH 7,2.
В качестве источника углерода и энергии использовали нефть, которую вносили в подготовленную среду в количестве 1000 мг на 1,0 дм3 среды.
Инкубация проводилась в качалочных условиях на установке «УВМТ-12-250» при 200 об/мин и температуре +20±1°C.
Рост бактерий наблюдали уже через 24 часа инкубации по образованию мутной эмульсии и дезинтеграции слоя нефти.
Чистая культура бактерий получена путем культивирования при выше перечисленных условиях и многократных пересевов (более 10) накопительной культуры на чашки Петри с МПА (масс. %): ферментативный пептон - 1,0; натрий хлористый - 0,5; агар - 1,0; вода мясная - остальное, pH 7,0-7,2.
Далее посевы инкубировали в стационарных условиях при различных температурах (+2, +4, +10, +20, +30 и +37°C).
Рост бежевых, выпуклых, блестящих колоний, диаметром 1-5 мм на МПА наблюдали:
- через 18-24 ч., при культивировании культуры при температурах +10 и +20°C;
- через 48-72 ч., при культивировании культуры при температурах +30 и +37°C;
- через 18-20 суток при культивировании культуры при температурах +2 и +4°C.
По культурально-морфологическим и биохимическим признакам, а также по результатам проведенного анализа нуклеотидных последовательностей гена 16SpPHK и ключевых фенотипических признаков, согласно таксономическим описаниям, приведенным в Определителе Берги (12. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology Book Review Int. J. of Syst. Bact; July 1985, p. 408.), полученная культура бактерий идентифицированна, как Rhodococcus erythropolis.
Пример 2. Приготовление бактериального препарата на основе клеток штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D
Изолированные колонии, полученные по примеру 1, пересевают на скошенный МПА и инкубируют 24-48 часов при температуре +20±1°C. Клетки смывают 0,9% раствором NaCl и готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята с титром 1×109 микробных клеток/см по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.
Для получения препарата готовят жидкую минеральную среду с нефтью (нефтепродуктами) следующего состава (масс. %): KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; нефть (нефтепродукты) - 1,0; вода дистиллированная - остальное; pH среды - 7,2.
Культивирование проводят в колбах в качалочных условиях в течение 48-72 часов, при температуре плюс 20±1°C, при 200 об/мин.
Через 48-72 часов получают жидкую мутноватую смесь клеток штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D с титром 1-5×109 клеток/см3, которую можно использовать в качестве препарата для обработки почвы или воды, загрязненной нефтью и нефтепродуктами.
Пример 3. Исследование нефтеокисляющей активности штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D
Клетки штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D смывают 0,9% раствором NaCl со скошенного МПА (по примеру 2), готовят исходную микробную суспензию бактериального изолята, объемом 25 см3, с концентрацией 1×109 микробных клеток/см по оптическому стандарту ГИСК им. A.M. Тарасевича.
Полученный бактериальный изолят штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D культивируют в водной среде с минеральным составом (масс. %): KNO3 - 0,4; MgSO4⋅7H2O - 0,08; NaCl - 0,1; K2HPO4 - 0,14; KH2PO4 - 0,06; вода дистиллированная - остальное; pH среды - 7,2.
В колбочки объемом 200,0 см3 вносят по 100,0 см3 готовой минеральной среды и 1000 мг нефти (нефтепродуктов).
Колбы засевают клетками штамма до концентрации 1×109 клеток/см3.
В качестве контроля ставят такую же колбу со средой, нефтью и без бактерий для определения общих (естественных) потерь.
Опыт проводят в трех повторностях.
Колбы культивируют при температурах +20, +30 и +37°C в течение 3 суток в условиях постоянной аэрации и, при температурах +2, +4 и +10°C - в течение 20 суток.
Биодеградацию нефти и нефтепродуктов определяют спектрометрическим методом, с использованием концентратомера «ИКН-0,25» (13. ФР. 1.31.2007.03234 МВИ 01.02.117. Методка выполнения измерений массовой концентрации нефтепродуктов в питьевых, природных и сточных водах ИК-спектрометрическим методом с использованием концентратомера «ИКН-0,25»).
Данные эксперимента показывают (таблица 2), что в водной среде с минеральными компонентами предлагаемый штамм Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D через 3 суток культивирования, в условиях постоянной аэрации деструкция нефти и нефтепродуктов составила:
- от 64,57 до 69,76%, при температуре +20°C;
- от 45,59 до 48,79%, при температуре +30°C;
- тот 41,98 до 46,36% - при температуре +37°C.
Показатели снижения содержания нефтепродуктов при культивировании в условиях пониженных положительных температур через 20 суток составили:
- от 3,36 до 3,58% - для температуры +2°C;
- от 14,0 до 17,98% - для температуры +4°C;
- от 32,8 до 34,0% - для температуры +10°C.
Figure 00000005
Пример 4. Очистка воды от нефти с помощью клеток штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D
В эксикатор объемом 5,0 дм3 вносят 3,0 дм3 водопроводной воды, отстоявшейся в течение суток при комнатной температуре.
8 воду добавляют 30000 мг сырой неочищенной нефти (нефтепродукта) и 30,0 см3 бактериального изолята штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D, приготовленного по примеру 2, содержащего 1,0-109 клеток/см3 суспензии.
В качестве контроля используют воду в количестве 3,0 дм3 с добавлением 30000 мг нефти (нефтепродукта) и без внесения микробной суспензии бактериального изолята.
Эксперимент проводят в течение 60 суток, поддерживая температуру воды в интервале +15+20°C.
Полученные результаты (таблица 3) показали, что в воде, деструкция нефти под влиянием штамма Rhodococcus erythropolis VKM As-2628D за 60 суток составила 79,26% для нефти и 79,93% для дизельного топлива.
Деструкция в контрольной емкости существенно не изменилась (таблица 3).
Figure 00000006
Таким образом, преимуществом предлагаемого штамма является то, что он обладает высокой утилизирующей способностью по отношению как к нефти, так и к нефтепродуктам в относительно короткие сроки (от 3 до 60 суток), в широком диапазоне температур от +2 до +37°C, который может быть использован для очистки объектов окружающей среды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (дизельное топливо, масло моторное, масло гидравлическое, газовый конденсат, керосин авиационный, бензин).

Claims (1)

  1. Штамм бактерий Rhodococcus erythropolis VKM Aс-2628D - деструктор нефти и нефтепродуктов.
RU2018111143A 2018-03-28 2018-03-28 Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов RU2687127C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018111143A RU2687127C1 (ru) 2018-03-28 2018-03-28 Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018111143A RU2687127C1 (ru) 2018-03-28 2018-03-28 Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2687127C1 true RU2687127C1 (ru) 2019-05-07

Family

ID=66430630

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018111143A RU2687127C1 (ru) 2018-03-28 2018-03-28 Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2687127C1 (ru)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2019527C1 (ru) * 1993-04-30 1994-09-15 Северный государственный научно-исследовательский и проектно-конструкторский геологический центр Способ очистки почв от нефтяных загрязнений
RU2039714C1 (ru) * 1993-08-25 1995-07-20 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Способ очистки воды и почвы от нефтяных загрязнений
RU2133769C1 (ru) * 1998-03-25 1999-07-27 Государственный научный центр прикладной микробиологии Штамм бактерий rhodococcus species mfn, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов
RU2526496C1 (ru) * 2013-07-01 2014-08-20 Федеральное государственною бюджетное учреждение науки Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук Штамм rhodotorula sp. для очистки почв, вод, сточных вод, шламов от нефти и нефтепродуктов
RU2558299C1 (ru) * 2014-09-22 2015-07-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук ШТАММ БАКТЕРИЙ Rhodococcus sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2019527C1 (ru) * 1993-04-30 1994-09-15 Северный государственный научно-исследовательский и проектно-конструкторский геологический центр Способ очистки почв от нефтяных загрязнений
RU2039714C1 (ru) * 1993-08-25 1995-07-20 Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Способ очистки воды и почвы от нефтяных загрязнений
RU2133769C1 (ru) * 1998-03-25 1999-07-27 Государственный научный центр прикладной микробиологии Штамм бактерий rhodococcus species mfn, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов
RU2526496C1 (ru) * 2013-07-01 2014-08-20 Федеральное государственною бюджетное учреждение науки Институт биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук Штамм rhodotorula sp. для очистки почв, вод, сточных вод, шламов от нефти и нефтепродуктов
RU2558299C1 (ru) * 2014-09-22 2015-07-27 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем нефти и газа Сибирского отделения Российской академии наук ШТАММ БАКТЕРИЙ Rhodococcus sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2523584C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Exiguobacterium mexicanum - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
Mothana et al. Streptomyces sp. 1S1 isolated from Southern coast of the Red Sea as a renewable natural resource of several bioactive compounds
Ma et al. Update on new trend and progress of the mechanism of polycyclic aromatic hydrocarbon biodegradation by Rhodococcus, based on the new understanding of relevant theories: A review
RU2513702C1 (ru) Штамм бактерий bacillus vallismortis - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2687155C1 (ru) Штамм бактерий microbacterium paraoxydans bkm ac-2619d - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2694610C1 (ru) ШТАММ Pseudomonas extremaustralis ARC 38 ВКПМ В-13084 - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
RU2687127C1 (ru) Штамм бактерий rhodococcus erythropolis vkm aс-2628d - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2675940C1 (ru) Штамм бактерий Bacillus sp. ВКМ В-2815D - деструктор нефти и нефтепродуктов
KR101475589B1 (ko) 연안 갯벌에서 분리 동정한 균주 및 이를 이용한 갯벌 유기물 정화제
RU2560272C1 (ru) Штамм бактерий serratia plymuthica -деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2312891C1 (ru) Ассоциация штаммов бактерий, продуцирующих биоэмульгаторы, для деградации нефти и нефтепродуктов в почвах, пресной и морской воде
RU2687131C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ MICROCOCCUS LUTEUS VKM Aс-2627D - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
RU2687154C1 (ru) Штамм бактерий stenotrophomonas sp. вкм в-2818d - деструктор нефти и нефтепродуктов
CN112574918B (zh) 一种氨氮降解菌、微生物菌剂及其应用
RU2687130C1 (ru) Штамм бактерий microbacterium sp. bkm ac-2625d - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2564105C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Exiguobacterium sp. -ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
RU2615464C1 (ru) Препарат для очистки почв и водных объектов от нефти и нефтепродуктов
RU2675938C1 (ru) Штамм бактерий Lisinibacillus fusiformis ВКМ В-2816D - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2675941C1 (ru) Штамм бактерий Bacillus simplex ВКМ В-2817D - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2228952C2 (ru) Штамм бактерий pseudomonas stutzeri mev-s1, используемый для очистки почв, грунтовых и поверхностных вод от нефти и продуктов ее переработки
RU2676850C1 (ru) Штамм бактерий Lisinibacillus sp. ВКМ В-2814D - деструктор нефти и нефтепродуктов
RU2720199C1 (ru) Штамм микроорганизмов Staphylococcus warneri S1 в качестве деструктора углеводородов, содержащихся в почвах, загрязненных нефтью и нефтепродуктами
RU2558299C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Rhodococcus sp. - ДЕСТРУКТОР НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ
RU2257409C1 (ru) Штамм rhodococcus erythropolis для разложения нефти и нефтепродуктов
RU2617950C1 (ru) Штамм бактерий Stenotrophomonas maltophilia - деструктор нефти и нефтепродуктов

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20200329