RU2675110C1 - Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность - Google Patents
Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность Download PDFInfo
- Publication number
- RU2675110C1 RU2675110C1 RU2018112564A RU2018112564A RU2675110C1 RU 2675110 C1 RU2675110 C1 RU 2675110C1 RU 2018112564 A RU2018112564 A RU 2018112564A RU 2018112564 A RU2018112564 A RU 2018112564A RU 2675110 C1 RU2675110 C1 RU 2675110C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- intestinal mucosa
- strain
- inflammatory
- fluorouracil
- Prior art date
Links
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 title claims abstract description 22
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 title claims abstract description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 13
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 title 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 12
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 9
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 claims description 37
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 claims description 29
- 201000010927 Mucositis Diseases 0.000 claims description 29
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 23
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 abstract description 14
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 19
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 18
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 13
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 9
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 8
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 7
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 7
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 5
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 5
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- ALLWOAVDORUJLA-UHFFFAOYSA-N Rebamipida Chemical compound C=1C(=O)NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(=O)O)NC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 ALLWOAVDORUJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 3
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 229950004535 rebamipide Drugs 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 2
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002520 cambial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 206010043275 Teratogenicity Diseases 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000005497 Thymidylate Synthase Human genes 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 241001672648 Vieira Species 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 230000002790 anti-mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000009702 cancer cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108010071626 caseinase Proteins 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000008809 cell oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000001120 cytoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000002178 gastroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 235000021474 generally recognized As safe (food) Nutrition 0.000 description 1
- 235000021473 generally recognized as safe (food ingredients) Nutrition 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 244000005702 human microbiome Species 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000007688 immunotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000386 immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000004207 intestinal integrity Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000008756 pathogenetic mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021085 polyunsaturated fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000009993 protective function Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000003790 pyrimidine antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 150000005839 radical cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000006950 reactive oxygen species formation Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000211 teratogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/28—Dragees; Coated pills or tablets, e.g. with film or compression coating
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию, включающую штамм Lactobacillus brevis 47f, обладающую противовоспалительной активностью в отношении клеток слизистой оболочки кишечника. Изобретение обеспечивает восстановление архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки, восстановление пролиферации клеток эпителия слизистой оболочки кишечника, продуцирование антиоксидантных веществ, приводящих к снижению уровня процессов свободнорадикального окисления, что помогает предотвратить развитие воспалительного процесса. 6 з.п. ф-лы, 4 пр., 6 табл., 4 ил.
Description
Область техники
Изобретение относится к пробиотическим фармацевтическим композициям, обладающим противовоспалительным действием в отношении слизистой оболочки кишечника, и состоит из штамма L. brevis 47f, продуцирующего антиоксидантные вещества, подавляющие свободнорадикальные процессы. Фармацевтическая композиция может быть использована для лечения и предотвращения воспалительных процессов слизистой оболочки кишечника, в частности при сопровождении химио- и лучевой терапии онкологических заболеваний, в том числе и мукозита.
Уровень техники
Одним из наиболее распространенных и тяжело протекающих побочных действий противораковых препаратов является лекарственная энтеропатия, приводящая к тяжелым воспалительным процессам. Химиотерапия является важнейшим способом лечения больных со злокачественными новообразованиями и используется почти во всех клинических ситуациях, показания к ней постоянно расширяются, совершенствуются препараты, изучаются их комбинации и сочетания с хирургическим и лучевым методами. Противоопухолевые препараты действуют и на неопухолевые клетки и особенно на делящиеся. Например, на постоянно обновляющийся эпителий кишечника, что приводит к лекарственной энтеропатии, проявляющейся тяжелыми нарушениями водно-солевого обмена (диспепсия, обезвоживание, болевой синдром). Патоморфологически это проявляется картиной мукозита, представляющей собой воспалительные (эритематозные и эрозивно-язвенные) поражения слизистой рта, глотки, пищевода, кишечника и в целом желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).
Воспаление слизистой кишечника проявляется в клинической симптоматике (боль, диарея, нарушения пищеварения, пищевая аллергия и т.п.), что приводит к увеличению продолжительности госпитализации, потребности в нутритивной поддержке и медикаментах, что существенно повышает расходы на лечение. [Телетаева Г.М. 2009. Профилактика и лечение желудочно-кишечных осложнений лекарственной терапии (тошнота и рвота, мукозиты, диарея). Практическая Онкология. Т. 10. No 3: 158-167.]. Проявления лекарственной энтеропатии могут привести к летальному исходу в результате тяжелой нутритивной недостаточности и ее осложнений. Непереносимость химиопрепаратов из-за выраженных клинических проявлений мукозита кишечника ограничивает лечение (отсрочка или прерывание курсов химиотерапии, уменьшение доз лекарств, удлинение сроков госпитализации, увеличение расходов на сопроводительную терапию и нутритивную поддержку).
Воспалительный процесс приводящий к мукозиту происходит следующим образом. В норме бокаловидные клетки эпителия слизистой оболочки тонкого кишечника продуцируют гликопротеин муцин, который образует гелеобразную среду, защищающую орган от атаки кишечной микрофлоры. Некоторые из противоопухолевых препаратов, включая 5-фторурацил, вызывают нарушения в функционировании и апоптоз бокаловидных клеток, что и приводит к истончению муцинового слоя. Это позволяет бактериям (находящимся в просвете кишечника или адсорбированным на слизистой оболочке) взаимодействовать с рецепторами врожденного иммунитета (Toll-подобными рецепторами) на поверхности эпителиоцитов. В результате запускаются каскады внутриклеточных сигналов, конвергирующих к активации транскрипционного фактора NFkB - механизма индукции генов воспаления. Развитие воспаления сопровождается накоплением окисленных молекул ("кислородный взрыв") и повреждением клеток слизистой оболочки, приводящим к мукозиту. Таким образом, меры предотвращения мукозита должны быть направлены на ограничение процессов, приводящих к воспалению, главным из которых является ограничение образования активных форм кислорода и свободнорадикального окисления биомолекул в клетках кишечника.
Основные процессы, приводящие к развитию мукозита кишечника, исследованы на экспериментальной модели с использованием 5-фторурацила (5-ФУ) [Song М.K., Park M.Y, Sung M.K.J. 2013. 5-Fluorouracil-induced changes of intestinal integrity biomarkers in BALB/c mice. Cancer Prev. V.18: 322-329]. В клинической онкологической практике 5-ФУ применяется при лечении рака различной локализации: рак толстой и прямой кишки, рак молочной железы, пищевода, желудка, поджелудочной железы, и др. 5-ФУ является противоопухолевым препаратом из группы антиметаболитов, ведет к изменению структуры РНК и подавлению деления патологических опухолевых клеток (антагонист пиримидинов). 5-ФУ ингибирует процесс деления клеток путем блокирования синтеза ДНК (вследствие угнетения активности фермента тимидилатсинтетазы) и образования структурно несовершенной РНК (вследствие внедрения фторурацила в ее структуру). Цитотоксическое действие 5-ФУ проявляется не только в отношении опухолевых клеток, но и касается наиболее часто делящихся клеток эпителиальных тканей и костного мозга [Телетаева Г.М. 2009. Профилактика и лечение желудочно-кишечных осложнений лекарственной терапии (тошнота и рвота, мукозиты, диарея). Практическая Онкология. Т. 10.No 3: 158-167.]
Одним из подходов для предотвращения тяжелого осложнения химиотерапии мукозита кишечника является использование противовоспалительных свойств пробиотиков - продуцентов веществ, обладающих антиоксидантной активностью [Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review // V. Mishra, et. al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 6914]
Показано, что ряд пробиотических компонентов микрофлоры кишечника обладает антиоксидантными (Probiotics and Oxidative Stress T. Kullisaar. E Songisepp and M. Zilmer. University of Tartu, Bio-competence Centre of Healthy Dairy products LCC, Estonia, 2012) Lin J, Zou Y, Cao K, Ma C, Chen Z (2016) The impact of heterologous catalase expression and superoxide dismutase overexpression on enhancing the oxidative resistance in Lactobacillus casei. J Ind Microbiol Biotechnol 43:703-711. doi: 10.1007/s10295-016-1752-8; Lyu C, Hu S, Huang J, Luo M, Lu T, Mei L, Yao S (2016) Contribution of the activated catalase to oxidative stress resistance and γ-aminobutyric acid production in Lactobacillus brevis. Int J Food Microbiol 238:302-310. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2016.09.023, антимутагенными и противоопухолевыми свойствами (Effects of Lactobacillus strains on cancer cell proliferation and oxidative stress in vitro. S.S. Choi, Y. Kim, K.S. Han, S. You, S. Oh and S.H. Kim. Letters in Applied Microbiology 42 (2006) 452-458). Пробиотические микроорганизмы, в частности лактобациллы, являются продуцентами антиоксидантных веществ: глутатионпероксидазы, цистеина, цистаемина и различных низкомолекулярных тиолов (Antioxidative potential of lactobacilli isolated from the gut of Indian people. Achuthan, AA.. et. al. // Mol. Biol. Rep. 2012, 39, 7887-97; Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review IN. Mishra, et. al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 63(14); Falony G, Joossens M, Vieira-Silva S, Wang J, Darzi Y, Faust K, Kurilshikov A et al (2016) Population-level analysis of gut microbiome variation. Science352:560-564. doi: 10.1126/science.aad3503).
Лактобациллы являются пробиотическими микроорганизмами и считаются безопасными (GRAS - generally regaded as safe), они широко используются в функциональных пищевых продуктах, биологически активных добавках, лекарственных средствах. Пробиотики, и лактобациллы в частности, все чаще используются в комбинированном лечении начальных стадий различных заболеваний (язвенного колита, синдрома воспаленного кишечника, аллергических заболеваний). Существует большой интерес к пробиотикам - естественным симбионтам человека, синтезирующим биологически активные вещества, в том числе антиоксиданты (Tang W, Xing Z, Li С, Wang J, Wang Y (2017) Molecular mechanisms and in vitro antioxidant effects of Lactobacillus plantarum MA2. Food Chem 221:1642-1649. doi: 10.1016/j.foodchem.2016.10.124);. A bioluminescent test system reveals valuable antioxidant properties of lactobacillus strains from human microbiota. Marsova M.V., Abilev S.K., Poluektova E.U., Damlenko V.N. // World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2018, 34:27 doi.org/10.1007/sll274-018-2410-2).
Использование микроорганизмов, являющихся естественными симбионтами человека, в качестве источника антиоксидантов (АО), имеет ряд преимуществ перед другими способами повышения антиоксидантного статуса организма. В отличие от химических фармацевтических препаратов, применение пробиотиков позволяет поддерживать постоянную продукцию АО в физиологических дозах непосредственно в слизистой толстого кишечника, исключая воздействие желудочного сока и желчи и возможную модификацию АО молекул. Такой подход особенно перспективен при лечении воспалительных заболеваний кишечника, спровоцированных приемом токсичных лекарственных средств. (Probiotics as potential antioxidants: A Systematic Review // V. Mishra, et. al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 03/2015; 63(14); Health benefits of probiotics: are mixtures more effective than single strains? Chapman, СМ.; Gibson, GR.; Rowland, I. // EurJ Nutr. 2011, 50, 1-17; Antioxidative potential of lactobacilli isolated from the gut of Indian people. Achuthan, AA.. et. al. // Mol. Biol. Rep. 2012, 39, 7887-97; Kleniewska P, Hoffmann A, Pniewska E, Pawliczak R (2016) The influence of probiotic Lactobacillus casei in combination with prebiotic inulin on the antioxidant capacity of human plasma. Oxidative Medicine and Cellular Longevity: 1340903. doi: 10.1155/2016/1340903).
Среди литературных и патентных данных мы не обнаружили сведения о пробиотических средствах на основе лактобацилл, апробированных на экспериментальной модели 5-ФУ-индуцированного мукозита. На данный момент не существует фамацевтической композии (ФК) на основе пробиотика для терапии и профилактики мукозита, индуцированного противоопухолевыми препаратами, в частности 5-ФУ.
Раскрытие изобретения
Рисунок 1. Воспаление тонкой кишки, сопровождающееся картиной мукозита, у мыши, получавшей 5-фторурацил.
Рисунок 2. Восстановление структуры эпителия тонкой кишки при введении ФК, включающей L. brevis 47, и последующим введением 5-фторурацила.
Рисунок 3. Мукозит толстой кишки в ответ на введение 5-фтоурацила.
Рисунок 4. Защитный эффект ФК, против мукозита толстой кишки, вызванного введением 5-фторурацила.
Технический результат
Предлагаемая фармацевтическая композиция на основе штамма L. brevis 47f отличается:
1. Способностью восстанавливать нарушения архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки (Пример 3, рисунок 1, 2, 3, 4)
2. Способностью восстанавливать пролиферацию клеток эпителия слизистой оболочки кишечника (Пример 3, рисунок 2).
3. Способностью продуцировать антиоксидантные вещества, приводящие к снижению уровня процессов свободнорадикального окисления, что помогает предотвратить развитие воспалительного процесса.
Перечисленные особенности предлагаемой фармацевтической композиции установлены на модели мукозита - воспалительного процесса, индуцированного у мышей противоопухолевым препаратом 5-фторурацилом. В качестве препарата сравнения был использован гастропротектор Ребамипид (Маклеодз Фармасьютикалз, Индия), который по всем показателям уступал заявляемой ФК.
На модели экспериментального мукозита показано, что 5-фторурацил вызывает в слизистой оболочке кишечника мышей изъязвления, истончение ворсин, снижение количества бокаловидных (слизеобразующих) клеток, резкое падение пролиферативной активности энтероцитов. Происходит развитие мукозита. Применение штамма Lactobacillus brevis 47f в комбинации с 5-фторурацилом способствует восстановлению нарушений структуры эпителия тонкой и толстой кишки, способствует пролиферации клеток эпителия слизистой оболочки кишечника, приводящей к восстановлению продуцирующих муцин бокаловидных клеток. Для определения антиоксидантной активности веществ, выделяемых штаммом Lactobacillus brevis 47f, в опытах на мышах использовали стандартный метод определения малонового диальдегида в крови и в других тканях, являющегося индикатором свободнорадикальных процессов.
Характеристика свойств и источников выделения штамма, фармацевтической композиции
Штамм L. brevis 47f выделен из фекалий здоровой женщины в возрасте 38 лет, которая на момент обследования была клинически здорова, не имела в анамнезе инфекционных и соматических заболеваний желудочно-кишечного тракта и других систем органов, в 2010 г. Ферментирует различные сахара и спирты, фенотипически апатогенен, т.е. не обладает гемолитической, протеазной, ДНК-азной, РНК-азной и казеиназной активностью. Не является зоопатогенными, не является фитопатогенными, не представляет опасности по другим причинам.
Штамм L. brevis 47f при культивировании на твердой среде MRS в течение 48 часов образует колонии S-формы с диаметром 2 мм, выпуклые, гладкие, белого цвета с ровными краями. При культивировании в жидкой среде MRS в течение 18 и более часов происходит равномерное помутнение среды по всему ее объему, кроме зоны аэробиоза, с образованием осадка. При микроскопировании обнаруживаются одиночные грамположительные палочки правильной формы с округлыми концами, 2-5 мкм. Проявляет высокую антагонистическую активность по отношению к патогенным и условно-патогенным штаммам микроорганизмов (Staphylococcus aureus АТСС 25923, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Shigella sonnei I фазы 941, Bacillus subtillis 534, E.coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae K1 5054).
Антиоксидантная активность штамма Lactobacillus brevis 47f была определена методом тролоксного эквивалента in vitro с использованием набора (Sigma-Aldrich), позволяющего регистрировать образование катион-радикала. Культуральная жидкость и бесклеточные экстракты показали радикал-инактивирующу способность от 1.87 до 2.23 mM в торолоксовм эквиваленте [М. Marsova, S. Abilev, E. Poluektova, V Danilenko / World Journal of Microbiology and Biotechnology (2018) 34:27]
Штамм L. brevis 47f депонирован в ВКПМ (г. Москва) 26.03.2015 г. В-12237. Штамм L. brevis 47f представлен известной нуклеотидной последовательностью генома. Последовательность генома охарактеризована и депонирована в международную базу GenBank (LBHR00000000). Установлено наличие генов, отвечающих за синтез белков антиоксидантов. (Пример 1)
Биотехнология производства и хранения ФК
Культура пробиотического штамма L. brevis 47f выращивается в ферментере при анаэробных условиях в среде MRS до концентрации 108-109 КОЕ, переносится в защитную среду для высушивания (раствор, содержащий 1% желатина (желатин пищевой марки К-13 ГОСТ 11293-89), 10% сахарозы (сахар белый ГОСТ Р 53396-2009)), лиофилизируется, смешивается со вспомогательными веществами (магния стеарат - антислеживающий агент) и стерильно расфасовывается в кишечнорастворимые капсулы. Жизнеспособность штамма в составе ФК сохраняется неизменной в течение 18 месяцев (108 КОЕ). Более длительное хранение не тестировалось.
Исследование токсичности ФК
Определение различных видов токсичности было проведено при использовании различных доз штамма L. brevis 47f в составе ФК на беспородных белых мышах (106-1010 КОЕ), крысах линии Вистар (106-1010 КОЕ) и кроликах породы Шиншилла (109-1012 КОЕ) при внутрижелудочном и внутрибрюшинном способах введения. Были проверены следующие виды токсичности: острая, хроническая, иммунотоксичность, мутагенность и тератогенность.
Полученные результаты позволяют отнести ФК при использовании в терапевтических дозах к нетоксичным лекарственным веществам.
Исследование фармакокинетики ФК
Исследования по изучению фармакокинетики (времени выведения из кишечника животных) проведены на 2-х видах животных: мышах линии BALB/c и на крысах линии Вистар. Препарат вводился перорально в течение 5 дней в дозе 108 КОЕ. После 5-го дня введения ФК ежедневно в течение 20 дней проводился забор фекалий для определения количества пробиотических бактерий при помощи ПНР с праймерами, специфичными для штамма L. brevis 47f. Показано, что ФК на основе штамма L. brevis 47f обнаруживаются в фекалиях крыс и мышей после 1 дня и на протяжении 20 дней после окончания внутрижелудочного введения. На 28-й день эксперимента ФК полностью выводится из организма экспериментальных животных (Пример 2).
Исследование противовоспалительной активности
Введение 5-фторурацила приводит к лекарственной энтеропатии, сопровождающейся картиной мукозита, что выражается в местных и общерезорбтивных проявлениях: нарушения архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки, повреждение эпителиоцитов и торможение пролиферации камбиальных элементов (нарушение репарации эпителия), выраженными нарушениями водно-солевого обмена (диспепсия). В слизистой оболочке кишечника могут возникать изъязвления, лейкоцитарная инфильтрация, картина острой дистрофии эпителия: истончение ворсин, снижение количества бокаловидных (слизеобразующих) клеток, резкое падение пролиферативной активности энтероцитов. В крови регистрируется дисбаланс цитокинов.
У экспериментальных животных, мышей, мукозит вызывали введением 5-фторурацила внутрибрюшинно в объеме 250 мкл в 0,9% водном растворе NaCl (однократная доза 2 мг/кг). Этот препарат применяется в российских клиниках для лечения больных. ФК в дозе 108 КОЕ и препарат сравнения Ребамипид (Маклеодз Фармасьютикалз, Индия) вводили атравматичным зондом (пероральное введение). Вначале животные получали ФК в дни 3, 7 и 14, начиная с 21 дня вводили 5-фторурацил в течение двух дней подряд. Затем наблюдали поведение животных еще 14 дней (всего длительность эксперимента 35 дней). По окончании наблюдения мышей выводили из эксперимента дислокацией шейных позвонков, вскрывали, осматривали органы брюшной полости, иссекали участки тонкой и толстой кишки ножницами. Изучались изменения в морфофункциональных характеристиках кишечника по сравнению с контрольной группой и группами, получавшими препарат сравнения Ребамипид. (Пример 3)
ФК на основе штамма L. brevis 47f, вводимый в монотерапии, не вызывал отклонений показателей гомеостаза (клеточный и биохимический состав крови и мочи, морфология кишечника). В комбинации с 5-фторурацилом ФК проявляет защитный эффект, уменьшая проявления энтеропатии (нормализация физиологических отправлений, сохранение структуры эпителия, поддержание пролиферации энтероцитов), нормализует макро- и микроскопическую картину мукозита (Рисунок 1-4). Препарат сравнения, Ребамипид, показал более слабую, по сравнению с ФК, протективную активность в отношении повреждения слизистой оболочки кишечника в ответ на 5-фторурацил. Ребамипид является гастропротектором. Оказывает цитопротекторное действие путем повышения содержания простагландина Е2 (PGE2) в слизистой желудка, способствует активации ферментов, ускоряющих биосинтез высокомолекулярных гликопротеинов, и повышает содержание слизи на поверхности стенки желудка и кишечника.
Исследование антиоксидантной активности
Малоновый диальдегид (МДА) является интегральным показателем процессов свободнорадикального окисления, возникающего в организме при деградации полиненасыщенных жиров активными формами кислорода, служит маркером оксидативного стресса в организме. Изучение концентрации МДА в крови и в других тканях позволяет оценивать уровень воспалительного процесса, с одной стороны, антиоксидантной защиты, с другой.
Исследование было проведено на модели мукозита, вызванного 5-фторурацилом у крыс линии Вистар и мышей линии BALB/c. Изучалось изменение уровня маркера оксидативного стресса МДА в плазме крови и тканях кишечника у животных, получавших фармацевтическую композицию, по сравнению с контрольной группой и группой, получавшей препарат сравнения Ребамипид. Применение 5-фторурацила повышало уровень МДА в плазме крови в 1,1-6,5 раз и в тканях кишечника в 1,2-13 раз, в зависимости от пола животных и получаемого лечения. На модели мукозита кишечника, индуцированного приемом 5-фторурацила показано, что ФК в дозе 108 КОЕ при пероральном введении, снижает концентрацию МДА в плазме крови и тканях кишечника лабораторных животных от 2-х до 3-х раз, (Пример 4).
Пример 1
Пример 2
Изучение фармакокинетики ФК
Исследования по изучению фармакокинетики (времени выведения из кишечника животных) проведены на 2-х видах животных: мышах линии BALB/c и на крысах линии Вистар. Препарат вводился перорально в течение 5 дней в дозе 108 КОЕ. После 5-го дня введения ФК ежедневно в течение 20 дней проводился забор фекалий для определения количества пробиотических бактерий при помощи ПЦР с праймерами, специфичными для штамма L. brevis 47f.
В таблице 3 приведены данные содержание ФК в фекалиях мышей-самок и мышей-самцов во время эксперимента.
*Для наглядности результатов приведены данные через каждые 2 и 4 дня.
В таблице 4 приведены данные содержание ФК в фекалиях крыс-самок и крыс-самцов во время эксперимента.
*Для наглядности результатов приведены данные через каждые 2 и 4 дня.
При внутрижелудочном введении ФК в дозе 1×108 КОЕ на одну особь 2-х видов животных показано, что ФК на основе штамма L. brevis 47f обнаруживаются в фекалиях крыс и мышей после 1 дня и на протяжении 20 дней после окончания внутрижелудочного введения. На 28-й день эксперимента ФК полностью выводится из организма экспериментальных животных.
Пример 3
Исследование противовоспалительной активности
Модель экспериментального мукозита разрабатывали на мышах BALB/c. Масса тела мышей перед началом экспериментов 20-22 г, возраст 10-12 недель. Животные получали 0,9% NaCl (контроль), 5-фторурацил (2 мг/кг), ФК (108 КОЕ) или препарат сравнения ребамипид (150 мг/кг). Последовательность воздействий: вначале вводили ФК (или препарат сравнения) в дни 3, 7 и 14, на 21-й день начинали введение 5-фторурацила (2 мг/кг) ежедневно на протяжении 2 дней. Контрольная когорта получала 0,9% NaCl в дни 3, 7 и 14. Физиологический раствор и 5-фторурацил вводили внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл 1 раз в день. ФК или ребамипид вводили через зонд в пищевод в виде водной суспензии. Животных наблюдали 14 дней после начала введения 5-фторурацила. Общая продолжительность эксперимента 35 дней. В ходе эксперимента ежедневно отслеживали наличие диспепсических симптомов, измеряли вес животных.
Введение 5-фторурацила лабораторным мышам вызывает мукозит, сопровождающейся местными и общерезорбтивными проявлениями: нарушениями архитектоники эпителия тонкой и толстой кишки, повреждением эпителиоцитов и торможением пролиферации камбиальных элементов (нарушение репарации эпителия), выраженными нарушениями водно-солевого обмена (диспепсия). Комбинированное применение ФК и 5-фторурацила предотвращает микроанатомические изменения. Сохраняется структура эпителиоцитов и присутствие бокаловидных клеток в слизистой оболочке толстой кишки, которые повреждаются данным противоопухолевым препаратом. Именно нарушение структуры и функций бокаловидных клеток, в которых образуется и транспортируется в апикальную зону защитный гликопротеин муцин, есть важный патогенетический механизм мукозита в ответ на 5-фторурацил. Следует полагать, что снижение интенсивности кислородного "взрыва" с помощью ФК благоприятно сказывается на состоянии бокаловидных клеток толстой кишки, за счет чего продукция и выведение муцина сохраняют защитную функцию слизистой оболочки кишки.
*препарат сравнения.
Оценка пролиферации, приводящая к восстановлению эпителия слизистой оболочки кишечника, проводилась иммуногистохимическим методом. Для этого использовали моноклональные антитела Ki-67 к гистону Ki-67, имеющийся только в делящихся клетках. Гистон Ki-67 является индикатором нахождения клетки в фазе подготовки к делению и самого деления (стадии пролиферации). Индекс Ki-67 - соотношение Ki-67-позитивных клеток, то есть находящихся в стадии пролиферации, ко всем клеткам, и выражается в процентном соотношении.
Индекс пролиферации определяли путем подсчета количества Ki-67-позитивных клеток на 100 клеток эпителия слизистой оболочки кишечника с последующим вычислением показателя в процентах. В группе интактных животных экспрессия Ki-67 выявлена преимущественно в области крипт тонкого отдела кишечника; индекс пролиферации 84,3±2,3%. В толстом отделе кишечника у интактных мышей индекс пролиферации 54,3±3,4%. У животных, получавших 5-фторурацил, в тонком и толстом отделах кишечника выявлено значительное снижение пролиферативной активности покровного эпителия. Индекс пролиферации в тонком отделе кишечника составляет 14,3±0,4%, а в толстом отделе 2,5±0,2%. У мышей, получавших 5-фторурацил в комбинации с ФК на основе штамма L. brevis 47f с антиоксидантной активностью, наблюдается восстановление пролиферативного пула энтероцитов, индекс пролиферации составил 60±5,3% в тонком кишечнике и 45±2,7%. в толстом отделе кишечника.
Пример 4
Исследование антиоксидантной активности на модели мукозита
Результаты проведенного исследования показали, что применение 5-фторурацила повышает уровень МДА в плазме крови в 1,1-6,5 раз и в тканях кишечника в 1,2-13 раз, в зависимости от пола животных и получаемого лечения. Уровень МДА в плазме крови каждой группы животных в дни 3, 7 и 10 изменяется незначительно, в пределах погрешности. Применение ФК приводит к некоторому снижению базового уровня МДА в плазме крови, ребамипид не снижает его.
Сравнение эффектов ФК и ребамипида показало, что ФК в дозе 108 КОЕ/мышь снижает рост концентрации МДА в плазме крови самцов и самок при индуцированном 5-фторурацилом мукозите кишечника. При применении ФК финальная концентрация МДА в плазме крови и тканях кишечника самцов и самок на 60% ниже, чем при отсутствии лечения.
Claims (7)
1. Фармацевтическая композиция, включающая штамм Lactobacillus brevis 47f, обладающая противовоспалительной активностью в отношении клеток слизистой оболочки кишечника.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, проявляющая активность, обусловленную ингибированием свободнорадикального окисления в пораженной слизистой оболочке кишечника антиоксидантными веществами.
3. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что ингибирование воспалительного процесса происходит в слизистой оболочке кишечника.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что может быть выполнена в твердой или жидкой форме.
5. Фармацевтическая композиция по п. 4, отличающаяся тем, что твердая форма представляет собой таблетку или капсулу.
6. Фармацевтическая композиция по п. 1, проявляющая противовоспалительную активность в отношении мукозита слизистой оболочки кишечника, индуцированного 5-фторурацилом.
7. Фармацевтическая композиция по п. 1, проявляющая противовоспалительную активность в отношении клеток слизистой оболочки как толстого, так и тонкого кишечника.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018112564A RU2675110C1 (ru) | 2018-04-09 | 2018-04-09 | Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2018112564A RU2675110C1 (ru) | 2018-04-09 | 2018-04-09 | Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2675110C1 true RU2675110C1 (ru) | 2018-12-17 |
Family
ID=64753485
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018112564A RU2675110C1 (ru) | 2018-04-09 | 2018-04-09 | Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2675110C1 (ru) |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030215429A1 (en) * | 1998-02-20 | 2003-11-20 | Mendes S.R.L. | Use of bacteria endowed with arginine deiminase to induce apoptosis and/or reduce an inflammatory reaction and pharmaceutical or dietetic compositions containing such bacteria |
EA006037B1 (ru) * | 1999-06-21 | 2005-08-25 | Атьял Фармасеутика Лда | Комбинация молочно-кислых бактерий и ее применение для профилактики и/или лечения инфекций и воспалительных состояний |
WO2012142605A1 (en) * | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Samaritan Health Services | Rapid recolonization deployment agent |
US9579353B2 (en) * | 2011-06-10 | 2017-02-28 | Prothera, Inc. | Pharmaceutical compositions containing pediococcus and methods for reducing the symptoms of gastroenterological syndromes |
US20170333525A1 (en) * | 2013-02-05 | 2017-11-23 | Ludwig Stocker Hofpfisterei Gmbh | Use of microorganisms for the prevention and treatment of intestinal diseases |
-
2018
- 2018-04-09 RU RU2018112564A patent/RU2675110C1/ru active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030215429A1 (en) * | 1998-02-20 | 2003-11-20 | Mendes S.R.L. | Use of bacteria endowed with arginine deiminase to induce apoptosis and/or reduce an inflammatory reaction and pharmaceutical or dietetic compositions containing such bacteria |
EA006018B1 (ru) * | 1998-02-20 | 2005-08-25 | Атьял Фармасеутика Лда | Штамм молочно-кислых бактерий laktobacillus brevis cd2 dsm11988, синтезирующий аргининдезиминазу, и применение указанного штамма и других бактерий, синтезирующих данный фермент, для индукции апоптоза и/или уменьшения воспалительной реакции, и фармацевтическая композиция, содержащая такие бактерии |
EA006037B1 (ru) * | 1999-06-21 | 2005-08-25 | Атьял Фармасеутика Лда | Комбинация молочно-кислых бактерий и ее применение для профилактики и/или лечения инфекций и воспалительных состояний |
WO2012142605A1 (en) * | 2011-04-15 | 2012-10-18 | Samaritan Health Services | Rapid recolonization deployment agent |
US9579353B2 (en) * | 2011-06-10 | 2017-02-28 | Prothera, Inc. | Pharmaceutical compositions containing pediococcus and methods for reducing the symptoms of gastroenterological syndromes |
US20170333525A1 (en) * | 2013-02-05 | 2017-11-23 | Ludwig Stocker Hofpfisterei Gmbh | Use of microorganisms for the prevention and treatment of intestinal diseases |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sun et al. | The ameliorative effect of Lactobacillus plantarum-12 on DSS-induced murine colitis | |
ES2578081T5 (es) | Composiciones bacterianas para profilaxis y tratamiento de enfermedades degenerativas | |
AU2017211244B2 (en) | Faecalibacterium prausnitzii strain CNCM 1-4573 for the treatment and prevention of gastrointestinal inflammation | |
BR112019015806A2 (pt) | Bactérias ácido-lácticas inovadoras e uso das mesmas | |
JP7126004B2 (ja) | 組成物及びその使用 | |
KR20080081186A (ko) | 새로운 락트산간균 균주 및 헬리코박터 필로리에 대한 그사용 | |
JP2023502708A (ja) | ビフィドバクテリウム・ラクティスbl-99の腸管炎症の抑制における新規な用途 | |
CN116004483A (zh) | 一种预防或治疗腹泻的格氏乳球菌及其应用 | |
CN110339216A (zh) | 可预防及治疗细菌性***炎的乳酸菌组合物 | |
ES2873075T3 (es) | Cepas probióticas de Lactobacillus plantarum para las infecciones del tracto urinario | |
AU2018397320A1 (en) | Serpin production | |
EP4003380A1 (fr) | Souches bacteriennes de faecalibacterium prausnitzii et de christensenella pour le traitement et la prevention d'une inflammation gastro-intestinale | |
Shukla et al. | Comparative analysis of antigiardial potential of heat inactivated and probiotic protein of probiotic Lactobacillus rhamnosus GG in murine giardiasis | |
KR101718577B1 (ko) | 질환의 예방 개선제, 지구력 향상제, 항피로제, 및 이들을 이용한 의약품 및 음식품 | |
US20230355688A1 (en) | Parabacteroides distasonis strains for use thereof in the treatment and prevention of gastrointestinal diseases and of disorders associated with gastrointestinal diseases | |
WO2018112740A1 (zh) | 一种加氏乳杆菌及其培养方法和应用 | |
Pan et al. | Polysaccharide ORP-1 isolated from Oudemansiella raphanipes ameliorates age-associated intestinal epithelial barrier dysfunction in Caco-2 cells monolayer | |
RU2675110C1 (ru) | Фармацевтическая композиция для терапии воспалительных заболеваний слизистых оболочек кишечника на основе штамма Lactobacillus brevis 47f, проявляющая местную противовоспалительную активность | |
CN115612652B (zh) | 植物乳杆菌as21及其在预防溃疡性结肠炎中的应用 | |
WO2019129807A1 (en) | Serpin production | |
WO2019227414A1 (zh) | 一种组合物及其应用 | |
CN114933994A (zh) | 具有缓解溃疡性结肠炎功能的组合物及其应用 | |
CN110892961B (zh) | 一种含乳双歧杆菌bl-99的固体饮料及其应用 | |
Stanojević et al. | Oral treatment with Lactobacillus rhamnosus 64 during the early postnatal period improves the health of adult rats with TNBS-induced colitis | |
Taheri et al. | Therapeutic effects of probiotics and herbal medications on oxalate nephrolithiasis: a mini systematic review |