RU2659240C2

RU2659240C2 - Method for obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients

Info

Publication number: RU2659240C2
Application number: RU2016119758A
Authority: RU
Inventors: Любовь Сергеевна Дышлюк; Станислав Алексеевич Сухих; Ирина Сергеевна Милентьева; Александр Юрьевич Просеков; Ольга Олеговна Бабич; Михаил Владимирович Шишин; Лидия Анатольевна Астахова; Вячеслав Федорович Долганюк
Priority date: 2016-05-23
Filing date: 2016-05-23
Publication date: 2018-06-29
Also published as: RU2016119758A

Abstract

FIELD: food industry.

SUBSTANCE: invention relates to food industry, in particular to creation of functional food based on symbiotic syndicates of probiotic bacteria and biologically active peptides for aftercare of oncologic patients. Method of obtaining a functional food for aftercare of oncologic patients includes obtaining of biologically active peptides from milk proteins, as well as syndicate of probiotic bacteria isolated from human gastro-intestinal tract, followed by mixing of functional food components. In this process, obtaining of biologically active peptides from milk proteins is carried out according to scheme, which includes the following steps: acceptance, quality control, preparation of raw materials, addition of phosphates, dissolution of casein, adjusting pH to 7.5, pasteurization at temperature of 74±2 °C with holding of 15–20 s to destroy microorganisms contained in casein, cooling to 37 ±2 °C, introduction of enzymatic system, including trypsin, chymotrypsin and thermolysin. Further, successive stages of extraction and purification of biologically active peptides are carried out by ultrafiltration, preparative electrophoresis and reverse phase highly efficient liquid chromatography. Then, to achieve necessary consistency of biologically active peptides, they are concentrated in vacuum evaporator device to mass fraction of dry matter from 40 to 45 %.

EFFECT: invention makes it possible to obtain a functional food for aftercare of oncologic patients, which has pronounced antineoplastic, antioxidant and immunomodulatory properties.

6 cl, 1 dwg, 3 tbl, 5 ex

Description

Изобретение относится к медицине, биотехнологии и пищевой промышленности, в частности к созданию функциональных продуктов питания для реабилитации онкологических больных на основе симбиотических консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов.The invention relates to medicine, biotechnology and the food industry, in particular to the creation of functional food products for the rehabilitation of cancer patients based on symbiotic consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides.

Питание является очень важной составляющей здоровья человека. У больного с онкологическим заболеванием в организме происходят изменения метаболических процессов, поэтому ему требуется особый питательный рацион.Nutrition is a very important component of human health. In a patient with an oncological disease, metabolic processes occur in the body, therefore, he needs a special nutritious diet.

Онкологические пациенты нуждаются в повышенном потреблении белковой пищи. Имеющиеся на сегодняшний день данные свидетельствуют о том, что пептидная диета наиболее эффективно поддерживает работу печени и, следовательно, способствует синтезу белков. Биологически активные пептиды, используемые в качестве пребиотиков, представляют собой короткие цепочки из аминокислот и обладают иммуномодифицирующими и противоопухолевыми свойствами.Cancer patients need an increased intake of protein foods. Currently available data indicate that the peptide diet most effectively supports the liver and, therefore, promotes the synthesis of proteins. Biologically active peptides used as prebiotics are short chains of amino acids and possess immunomodifying and antitumor properties.

Систематическое употребление пробиотиков в питании стимулирует иммунную систему организма, подавляет патогенную и условно-патогенную микрофлору, оказывает противоопухолевый и другие положительные эффекты на организм человека.The systematic use of probiotics in food stimulates the body's immune system, suppresses pathogenic and conditionally pathogenic microflora, and has antitumor and other positive effects on the human body.

На сегодняшний день созданию новых функциональных продуктов питания для обеспечения населения необходимыми полезными веществами, придающими им лечебные и профилактические свойства, уделяется особое внимание.Today, special attention is paid to the creation of new functional food products to provide the population with necessary useful substances that give them therapeutic and preventive properties.

Так, известен пищевой лечебно-профилактический функциональный продукт (RU, патент 2453132, опубл. 20.06.2012), обладающий иммуномодулирующим действием. Получение пищевого функционального продукта заключается в смешивании в следующем соотношении исходных компонентов, мас. %: растительных фосфолипидов - 6,00; витамина Е - 0,40; β-каротина - 0,10 и отдельно аскорбиновой кислоты - 2,50; витамина В₁ - 0,06; витамина В₂ - 0,04; витамина В₆ - 0,10; сульфата железа - 0,05; сухого водорастворимого экстракта шиповника - 45,00; сухого водорастворимого экстракта корня солодки голой - 43,75; заменителя сахара - 2,00.So, it is known food therapeutic and prophylactic functional product (RU, patent 2453132, publ. 20.06.2012), which has an immunomodulating effect. Getting food functional product consists in mixing in the following ratio of starting components, wt. %: plant phospholipids - 6.00; vitamin E - 0.40; β-carotene - 0.10 and separately ascorbic acid - 2.50; vitamin B ₁ - 0.06; vitamin B ₂ - 0.04; vitamin B ₆ - 0.10; iron sulfate - 0.05; dry water-soluble rosehip extract - 45.00; dry water-soluble extract of licorice root naked - 43.75; sugar substitute - 2.00.

Недостатком известного продукта являются недостаточно высокие иммуномодулирующие свойства.A disadvantage of the known product is insufficiently high immunomodulating properties.

Известен продукт детского питания для иммуномодулирующего эффекта (RU, патент 2402226, опубл. 27.10.2010). Основу иммуномодулирующей леденцовой карамели составляет экстракт из слоевища лишайника семейства пармелиевых Xanthoparmelia camtschadalis - 67%, к которому добавлены, сахар-песок - 22%, патока - 10%, лимонная кислота - 0,7%, эссенция - 0,3%.Known baby food product for immunomodulating effect (RU, patent 2402226, publ. 10.27.2010). The basis of immunomodulating candy caramel is the extract from the thallus of the lichen of the parmesan family Xanthoparmelia camtschadalis - 67%, to which are added granulated sugar - 22%, molasses - 10%, citric acid - 0.7%, essence - 0.3%.

Недостатком известного продукта следует признать использование редкого сырья - экстракта из слоевища лишайника семейства пармелиевых Xanthoparmelia camtschadalis.A disadvantage of the known product should be recognized as the use of rare raw materials - extract from the thallus of the lichen of the Xanthoparmelia camtschadalis parmelia family.

Известно мороженое (RU, патент 2294647, опубл. 10.03.2007) с повышенными пробиотическими, профилактическими и биологическими свойствами. В состав мороженого помимо молока, сливок, сахара-песка, стабилизатора, также вносят бакконцентрат, который включает культуры микроорганизмов Bifidobacterium longum В 379 М, Lactobacillus acidophilus 97, Propionibacterium shermanii 12 AE, в соотношении 1:1:1.It is known ice cream (RU, patent 2294647, publ. 10.03.2007) with increased probiotic, preventive and biological properties. In addition to milk, cream, granulated sugar, stabilizer, the composition of ice cream also contains a concentrate, which includes cultures of microorganisms Bifidobacterium longum B 379 M, Lactobacillus acidophilus 97, Propionibacterium shermanii 12 AE, in the ratio 1: 1: 1.

Недостатком данного продукта можно считать невысокую пищевую и биологическую ценность.The disadvantage of this product can be considered low nutritional and biological value.

Известен жидкий ферментированный и пастеризованный натуральный продукт (RU, патент 2452243, опубл. 10.06.2012), изготовленный на основе фруктов, овощей, бобовых, трав и/или орехов и содержащий живые пробиотические микроорганизмы в количестве от 10⁵ до 10¹⁵ клеток/мл и неживые пробиотические микроорганизмы. Микроорганизмы находятся в натуральном продукте в виде смеси бактерий Lactobacillus rhamnosus с другими пробиотическими микроорганизмами.Known liquid fermented and pasteurized natural product (RU, patent 2452243, publ. 10.06.2012), made on the basis of fruits, vegetables, legumes, herbs and / or nuts and containing live probiotic microorganisms in an amount of from 10 ⁵ to 10 ¹⁵ cells / ml and non-living probiotic microorganisms. Microorganisms are found in a natural product as a mixture of the bacteria Lactobacillus rhamnosus with other probiotic microorganisms.

Основной недостаток продукта заключается в том, что, несмотря на относительно широкий спектр действия, он недостаточно эффективен к иммуностимулирующим механизмам в организме.The main disadvantage of the product is that, despite the relatively wide spectrum of action, it is not effective enough to immune-stimulating mechanisms in the body.

Известен штамм Bifidobacterium longum infantis для приготовления пробиотика (RU, патент 2308483, опубл. 20.10.2007), выделенный из иссеченного и промытого желудочно-кишечного тракта человека. Препарат с данным штаммом может применяться при профилактике или лечении нежелательной воспалительной активности. Штамм Bifidobacterium оказывает существенное противовоспалительное действие после перорального потребления и вызывает изменения в иммунологическом маркере при введении в систему, содержащую клетки, которые взаимодействуют с иммунной системой. А также предложен препарат (RU, патент 2308483, опубл. 20.10.2007), содержащий штамм Bifidobacterium, который может включать другой пробиотический материал - Lactobacillus salivarius, выделенный из иссеченного и промытого желудочно-кишечного тракта человека.A known strain of Bifidobacterium longum infantis for the preparation of a probiotic (RU, patent 2308483, publ. 20.10.2007), isolated from excised and washed human gastrointestinal tract. A drug with this strain can be used in the prevention or treatment of undesirable inflammatory activity. The Bifidobacterium strain has a significant anti-inflammatory effect after oral consumption and causes changes in the immunological marker when introduced into a system containing cells that interact with the immune system. And also proposed a preparation (RU, patent 2308483, publ. 20.10.2007) containing a strain of Bifidobacterium, which may include another probiotic material - Lactobacillus salivarius, isolated from excised and washed human gastrointestinal tract.

Недостатком известных препаратов можно считать узкий спектр действия предлагаемого штамма.A disadvantage of the known drugs can be considered a narrow spectrum of action of the proposed strain.

Предложена фармацевтическая композиция (RU, патент 2362579, опубл. 27.07.2009), обладающая противоопухолевым действием, содержащая в качестве действующего вещества эффективное количество пептида глутамил-аспартил-глицин формулы: H-Glu-Asp-Gly-OH и фармацевтически приемлемый носитель. Пептид получают классическим методом пептидного синтеза в растворе.A pharmaceutical composition is proposed (RU, patent 2362579, publ. 07/27/2009) having an antitumor effect, containing as an active substance an effective amount of a glutamyl-aspartyl-glycine peptide of the formula: H-Glu-Asp-Gly-OH and a pharmaceutically acceptable carrier. The peptide is obtained by the classical method of peptide synthesis in solution.

Недостатком предложенной композиции следует признать трудоемкость процедуры получения биопептида.The disadvantage of the proposed composition should be recognized as the complexity of the procedure for producing a biopeptide.

Предлагается пептид структуры Tyr-Ser-Leu (RU, патент 2305107, опубл. 27.08.2007), характеризующийся аминокислотнойA peptide of the structure Tyr-Ser-Leu (RU, patent 2305107, publ. 08.27.2007), characterized by amino acid

последовательностью SEQ ID No: 16, и фармацевтическая композиция на его основе для стимулирования противоопухолевого иммунного ответа. Фармацевтическая композиция состоит из эффективного количества пептида и фармацевтически приемлемого носителя.the sequence of SEQ ID No: 16, and a pharmaceutical composition based thereon for stimulating an antitumor immune response. A pharmaceutical composition consists of an effective amount of a peptide and a pharmaceutically acceptable carrier.

Недостатком известной композиции являются недостаточно высокие противоопухолевые свойства.A disadvantage of the known composition is not sufficiently high antitumor properties.

Известен лекарственный препарат (RU, заявка 94040451, опубл. 20.09.1996), содержащий живую культуру молочнокислых бактерий Streptococcus faecium 3185-М ВКПМ В-3491 и Streptococcus faecium М ВКПМ В-3490, производимые в виде сухого концентрата монокультур и смешиваемые в соотношении 0,6…1,4:0,6…1,4 по количеству жизнеспособных клеток. Предлагаемый лекарственный препарат обладает высокой биологической активностью, в том числе иммуностимулирующей способностью и способностью к подавлению патогенной и условно-патогенной микрофлоры.Known drug (RU, application 94040451, publ. September 20, 1996) containing a live culture of lactic acid bacteria Streptococcus faecium 3185-M VKPM B-3491 and Streptococcus faecium M VKPM B-3490, produced in the form of a dry monoculture concentrate and mixed in the ratio 0 , 6 ... 1.4: 0.6 ... 1.4 by the number of viable cells. The proposed drug has a high biological activity, including immunostimulating ability and the ability to suppress pathogenic and conditionally pathogenic microflora.

Недостатком предлагаемого препарата является ограниченный видовой состав микроорганизмов.The disadvantage of the proposed drug is the limited species composition of microorganisms.

В ходе проведения патентного поиска не выявлено техническое решение, которое может быть признано ближайшим аналогом.During the patent search, no technical solution was identified that could be recognized as the closest analogue.

Техническая задача, решаемая использованием разработанного способа, состоит в расширении ассортимента продуктов питания функционального назначения для онкологических больных в период реабилитации.The technical problem solved by using the developed method is to expand the range of functional foods for cancer patients during the rehabilitation period.

Технический результат, достигаемый при реализации разработанного способа, состоит в получении функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных, состоящего из пробиотических бактерий - представителей нормальной кишечной микрофлоры человека и биологически активных пептидов, выделенных из белков молока, с выраженными противоопухолевыми, антиоксидантными и иммуномодулирующими свойствами.The technical result achieved by the implementation of the developed method consists in obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients, consisting of probiotic bacteria - representatives of the normal human intestinal microflora and biologically active peptides isolated from milk proteins, with pronounced antitumor, antioxidant and immunomodulating properties.

Для достижения указанного технического результата предложено использовать разработанный способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных, согласно которому сначала проводят выделение биологически активных пептидов из белков молока путем внесения в него фосфатов, пастеризацию при температуре 74±2°С с выдержкой 15-20 секунд с целью уничтожения микроорганизмов, содержащихся в казеине, охлаждения до температуры 37+2°С, внесения энзиматической системы, и дальнейшего выделения и очистки биологически активных пептидов посредством ультрафильтрации, препаративного электрофореза и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Для достижения необходимой консистенции биологически активных пептидов их сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45% и проводят распылительную сушку с температурой воздуха на входе 175±5°С, на выходе 90±5°С.To achieve the specified technical result, it is proposed to use the developed method for obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients, according to which the biologically active peptides are first extracted from milk proteins by adding phosphates to it, pasteurization at a temperature of 74 ± 2 ° C with an exposure of 15-20 seconds the purpose of the destruction of microorganisms contained in casein, cooling to a temperature of 37 + 2 ° C, the introduction of an enzymatic system, and further isolation and purification biologically active peptides by ultrafiltration, preparative electrophoresis and reverse phase high performance liquid chromatography. To achieve the required consistency of biologically active peptides, they are concentrated in a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45% and spray drying is carried out with an air temperature of 175 ± 5 ° С at the inlet and 90 ± 5 ° С at the outlet.

С целью получения консорциума пробиотических бактерий проводят первичное выделение бактерий из фекалий человека, их культивирование на жидкой питательной среде в анаэробных условиях при Т=37,0±2,0°С, рН 7,2±0,2 в течение 12,0 ч, с последующим центрифугированием и лиофилизацией. Далее проводят смешивание компонентов функционального продукта (консорциум пробиотических бактерий и биологически активный пептид), готовый продукт фасуют и упаковывают.In order to obtain a consortium of probiotic bacteria, the primary isolation of bacteria from human feces is carried out, their cultivation on a liquid nutrient medium under anaerobic conditions at T = 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.2 ± 0.2 for 12.0 hours followed by centrifugation and lyophilization. Next, the components of the functional product are mixed (a consortium of probiotic bacteria and a biologically active peptide), the finished product is packaged and packaged.

Разработанный способ реализуют следующим образом.The developed method is implemented as follows.

Выделение биологически активных пептидов осуществляют из белков молока. Проводят приемку сырья и оценку его качества (показатели качества и безопасности сырого молока должны соответствовать требованиям, установленным в Техническом регламенте Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» TP ТС 033/2013, принятом решением Совета Евразийской экономической комиссии от 9 октября 2013 года №67). Вносят фосфорнокислый натрий (35%-ный раствор) до достижения рН молока 7,5 и проводят пастеризацию при температуре 74±2°С с выдержкой 15-20 секунд с целью уничтожения микроорганизмов, содержащихся в казеине, охлаждают до температуры 37+2°С, вносят энзиматическою систему, включающую трипсин, химотрипсин и термолизин в соотношении 1:1:1.The selection of biologically active peptides is carried out from milk proteins. Acceptance of raw materials and assessment of their quality are carried out (quality and safety indicators of raw milk must meet the requirements established in the Technical Regulation of the Customs Union “On the Safety of Milk and Dairy Products” TP TS 033/2013, adopted by the Council of the Eurasian Economic Commission on October 9, 2013 No. 67). Sodium phosphate (35% solution) is added until the milk pH is 7.5 and pasteurization is carried out at a temperature of 74 ± 2 ° C for 15-20 seconds to kill microorganisms contained in casein, cooled to a temperature of 37 + 2 ° C , make the enzymatic system, including trypsin, chymotrypsin and thermolysin in a ratio of 1: 1: 1.

Ферментативный гидролиз ведут при температуре 37+2°С в течение 8,00±0,05 ч при рН 7,5±0,1, фермент-субстратное соотношение 1:50. С целью инактивации комплекса ферментов и удаления патогенной микрофлоры полученный гидролизат подогревают до 95±2°С в течение 30 с. Enzymatic hydrolysis is carried out at a temperature of 37 + 2 ° C for 8.00 ± 0.05 hours at a pH of 7.5 ± 0.1, the enzyme-substrate ratio of 1:50. In order to inactivate the complex of enzymes and remove pathogenic microflora, the resulting hydrolyzate is heated to 95 ± 2 ° C for 30 s.

Выделение и очистку биологически активных пептидов осуществляют путем последовательных стадий ультрафильтрации, препаративного электрофореза и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. На первой стадии очистки ферментативные гидролизаты казеина подвергают ультрафильтрации с использованием мембран с диаметром пор 10 и 15 кДа при рН 6,0-6,5. Полученный материал, содержащий пептиды и низкомолекулярные белки с молекулярными массами менее 10-12 кДа, наносят на электрофоретическую колонку (предварительно добавив в пробу мочевину до концентрации 3 М) для разделения белков с помощью препаративного электрофореза.Isolation and purification of biologically active peptides is carried out by successive stages of ultrafiltration, preparative electrophoresis and reverse phase high performance liquid chromatography. In the first stage of purification, casein enzymatic hydrolysates are ultrafiltered using membranes with pore diameters of 10 and 15 kDa at pH 6.0-6.5. The resulting material containing peptides and low molecular weight proteins with molecular weights of less than 10-12 kDa is applied to an electrophoretic column (after adding urea to a concentration of 3 M in the sample) for protein separation using preparative electrophoresis.

Препаративный электрофорез при непрерывной элюции белков проводят в 12,5%-ном полиакриламидном геле в кислой буферной системе в присутствии мочевины. Элюированные с колонки белковые фракции анализируют с помощью аналитического электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия. Содержащиеся в белковых фракциях пептиды разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.Preparative electrophoresis during continuous elution of proteins is carried out in a 12.5% polyacrylamide gel in an acidic buffer system in the presence of urea. Protein fractions eluted from the column are analyzed by analytical electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate. The peptides contained in the protein fractions were separated using several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min.

Для достижения необходимой консистенции биологически активных пептидов их сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45% и сушат в распылительной сушилке с температурой воздуха на входе 175±5°С, на выходе 90±5°С.To achieve the required consistency of biologically active peptides, they are concentrated in a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45% and dried in a spray dryer with an air temperature of 175 ± 5 ° С at the inlet and 90 ± 5 ° С at the outlet.

Источником выделения пробиотических бактерий являются фекалии взрослого здорового субъекта, который в течение 3 месяцев перед выделением не принимает ни антибиотические, ни пробиотические препараты.The source of probiotic bacteria is the feces of an adult healthy subject who does not take antibiotic or probiotic drugs for 3 months before isolation.

Подготовку содержимого кишечника проводят следующим образом: 1 г фекалий вносят в 9 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия (NaCl) и тщательно суспендируют путем встряхивания в течение 20-30 минут. Затем отстаивают и через 1 час из надосадочной жидкости готовят разведения в изотоническом растворе хлорида натрия 10², 10³, 10⁴, 10⁵. Из разведений 10³, 10⁴, 10⁵ делают посев бактериологической петлей на питательные среды.Preparation of intestinal contents is carried out as follows: 1 g of feces is introduced into 9 ml of a sterile isotonic solution of sodium chloride (NaCl) and carefully suspended by shaking for 20-30 minutes. Then they defend and after 1 hour, dilutions in an isotonic sodium chloride solution 10 ² , 10 ³ , 10 ⁴ , 10 ⁵ are prepared from the supernatant. From dilutions of 10 ³ , 10 ⁴ , 10 ⁵ make inoculation with a bacteriological loop on a nutrient medium.

Для первичного выделения бактерий родов Bifidobacterium, Lactobacillus, Streptococcus и Enterococcus используют бифидум-среду, среду МРС, селективный агар для стрептококков, среду Сланец-Бартли для энтерококков. Культивирование бактерий осуществляют на агаризованных питательных средах в анаэробном режиме при температуре 37°С в течение 24,0 часов. С суммарных газонов на чашках Петри с видимым ростом микроорганизмов проводят истощающие рассевы. Выделенные микроорганизмы культивируют в жидких питательных средах в анаэробном режиме при температуре 37°С в течение 1,20-24,0 часов до достижения концентрации микроорганизмов 1,0⋅10⁸ КОЕ/мл.For the primary isolation of bacteria of the genera Bifidobacterium, Lactobacillus, Streptococcus and Enterococcus, bifidum medium, MPC medium, selective agar for streptococci, and Slate-Bartley medium for enterococci are used. The cultivation of bacteria is carried out on agarized nutrient media in anaerobic mode at a temperature of 37 ° C for 24.0 hours. Exhaustive screenings are carried out from the total lawns on Petri dishes with visible growth of microorganisms. The isolated microorganisms are cultured in liquid nutrient media under anaerobic conditions at a temperature of 37 ° C for 1.20-24.0 hours until the microorganism concentration reaches 1.0-10 ⁸ CFU / ml.

По окончании культивирования биомассу отделяют от культуральной жидкости центрифугированием при 8000 об/мин в течение 20 минут.At the end of the cultivation, the biomass is separated from the culture fluid by centrifugation at 8000 rpm for 20 minutes.

Культуры микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека, хранятся в сублимационно-высушенном состоянии в ампулах при температуре 4±2°С не менее 24 месяцев. Параметры сублимационной сушки: температура замораживания в защитной среде, содержащей 5% глицерина, -25°С при продолжительности 90 минут; температура сушки 30°С; продолжительность сушки 6 часов; тепловая нагрузка 5,45 кВт/м²; остаточное давление 0,6-0,8 кПа, толщина слоя сушки - 2 мм.Cultures of microorganisms isolated from the human gastrointestinal tract are stored in a freeze-dried state in ampoules at a temperature of 4 ± 2 ° C for at least 24 months. Freeze-drying parameters: freezing temperature in a protective medium containing 5% glycerol, -25 ° C for a duration of 90 minutes; drying temperature 30 ° C; drying time 6 hours; thermal load of 5.45 kW / m ² ; residual pressure 0.6-0.8 kPa, drying layer thickness 2 mm.

Лиофилизированные культуры микроорганизмов, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул в определенном соотношении в пробирки с питательными средами, соответствующими культивированию консорциумов пробиотических бактерий.Lyophilized cultures of microorganisms isolated from the human gastrointestinal tract are restored by transferring the contents of the ampoules in a certain ratio to test tubes with nutrient media corresponding to the cultivation of consortia of probiotic bacteria.

Для получения функционального продукта питания проводят смешивание компонентов в соответствии с рецептурой: консорциум пробиотических бактерий + биологически активный пептид.To obtain a functional food product, the components are mixed in accordance with the recipe: a consortium of probiotic bacteria + biologically active peptide.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1Example 1

Для получения биологически активных пептидов при температуре 37+2°С, рН 7,5±0,1 и фермент-субстратном соотношении 1:50 проводят ферментативный гидролиз подготовленного молока энзиматической системой, включающей трипсин, химотрипсин и термолизин в течение 8,00±0,05 ч. Полученный гидролизат подогревают до 95±2°С в течение 30 с.To obtain biologically active peptides at a temperature of 37 + 2 ° C, pH 7.5 ± 0.1 and an enzyme-substrate ratio of 1:50, enzymatic hydrolysis of the prepared milk is carried out by an enzymatic system including trypsin, chymotrypsin and thermolysin for 8.00 ± 0 , 05 h. The resulting hydrolyzate is heated to 95 ± 2 ° C for 30 s.

Для очистки ферментативные гидролизаты казеина подвергаются ультрафильтрации с использованием мембран с диаметром пор 10 и 15 кДа при рН 6,0-6,5. Полученный материал наносят на электрофоретическую колонку. Препаративный электрофорез при непрерывной элюции белков проводят в 12,5%-ном полиакриламидном геле в кислой буферной системе в присутствии мочевины. Элюированные с колонки белковые фракции анализируют с помощью аналитического электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия. Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Leu-Leu-Tyr и Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.For purification, casein enzymatic hydrolysates are ultrafiltered using membranes with pore diameters of 10 and 15 kDa at a pH of 6.0-6.5. The resulting material is applied to an electrophoretic column. Preparative electrophoresis during continuous elution of proteins is carried out in a 12.5% polyacrylamide gel in an acidic buffer system in the presence of urea. Protein fractions eluted from the column are analyzed by analytical electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate. The peptides Leu-Leu-Tyr and Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu contained in the protein fractions were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions, at a flow rate of 0.8 ml / min.

Полученные биологически активные пептиды сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45% и сушат в распылительной сушилке с температурой воздуха на входе 175±5°С, на выходе - 90±5°С.The obtained biologically active peptides are concentrated in a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45% and dried in a spray dryer with an air temperature of 175 ± 5 ° С at the inlet and 90 ± 5 ° С at the outlet.

Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 5,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 0,2; аммония цитрат - 1,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 20,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2; агар-агар - 15,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 6,8±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are restored by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamobius 1: 1, para 1: para : 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 5.0; papain digest of soy flour - 10.0; sodium hydrogen phosphate - 1.0; Twin-80 - 0.2; ammonium citrate - 1.0; cysteine hydrochloride - 0.5; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.5; glucose - 10.0; meat extract - 20.0; manganese sulfate - 0.05; sodium azide - 0.2; agar-agar - 15.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 6.8 ± 0.2 for 12.0 hours.

По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при следующих параметрах: температура замораживания в защитной среде, содержащей 5% глицерина, -25°С при продолжительности 90 минут; температура сушки 30°С; продолжительность сушки 6 часов; тепловая нагрузка 5,45 кВт/м²; остаточное давление 0,6-0,8 кПа, толщина слоя сушки - 2 мм.At the end of cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the following parameters: freezing temperature in a protective medium containing 5% glycerol, -25 ° C for a duration of 90 minutes; drying temperature 30 ° C; drying time 6 hours; thermal load of 5.45 kW / m ² ; residual pressure 0.6-0.8 kPa, drying layer thickness 2 mm.

Для получения функционального продукта питания проводят смешивание консорциума пробиотических бактерий и биологически активных пептидов в соответствии с рецептурой, мас. %:To obtain a functional food product, a consortium of probiotic bacteria and biologically active peptides is mixed in accordance with the recipe, wt. %:

консорциум пробиотических бактерий - 25,0;consortium of probiotic bacteria - 25.0;

пептид Leu-Leu-Tyr - 37,5;Leu-Leu-Tyr peptide - 37.5;

пептид Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu - 37,5.peptide Trp-Tre-Ala-Glu-Glu-Lys-Glu-Leu - 37.5.

Для полученного функционального продукта питания в экспериментах in vitro и in vivo определяли противоопухолевые, антиоксидантные и иммуномодулирующие свойства.For the obtained functional food product, the antitumor, antioxidant and immunomodulating properties were determined in vitro and in vivo experiments.

Результаты определения противоопухолевых свойств функционального продукта питания представлены в таблице 1.The results of determining the antitumor properties of a functional food product are presented in table 1.

Результаты определения антиоксидантных свойств функционального продукта питания представлены на фиг. 1.The results of determining the antioxidant properties of a functional food product are presented in FIG. one.

Результаты оценки влияния функционального продукта питания на гуморальный иммунный ответ представлены в таблице 2.The results of evaluating the effect of a functional food product on the humoral immune response are presented in table 2.

Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in the table in table 3.

Пример 2Example 2

Биологически активные пептиды из белков молока выделяют аналогично примеру 1.Biologically active peptides from milk proteins isolated analogously to example 1.

Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp и Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.Peptides Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp and Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu contained in the protein fractions were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a concentration gradient of acetonitrile with using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min.

Полученные биологически активные пептиды сгущают и подвергают распылительной сушке при параметрах, указанных в примере 1.The obtained biologically active peptides are concentrated and subjected to spray drying at the parameters specified in example 1.

Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei (соотношение 1:1:1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: протеозопептон - 15,0; папаиновый перевар соевой муки - 10,0; натрия гидрофосфат - 1,5; Твин-80 - 1,0; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 2,5; глюкоза - 10,0; мясной экстракт - 10,0; натрия азид - 0,2; агар-агар - 15,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,0±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are reconstructed by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivariusaciocacactocobactococactobococactocobococactococactococactocobococactococactococactococactus, and Streococactus : 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1) into a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: proteozopeptone - 15.0; papain digest of soy flour - 10.0; sodium hydrogen phosphate - 1.5; Twin-80 - 1.0; ammonium citrate - 2.0; cysteine hydrochloride - 1.0; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.2; sodium chloride - 2.5; glucose - 10.0; meat extract - 10.0; sodium azide - 0.2; agar-agar - 15.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.0 ± 0.2 for 12.0 hours.

По окончании культивирования консорциум пробиотических бактерий подвергают сублимационной сушке при параметрах, указанных в примере 1.At the end of the cultivation, a consortium of probiotic bacteria is freeze-dried at the parameters specified in example 1.

консорциум пробиотических бактерий - 50,0;consortium of probiotic bacteria - 50.0;

пептид Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp - 25,0;Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp peptide 25.0;

пептид Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu - 25,0.Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu peptide - 25.0.

Пример 3Example 3

Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Lys-Glu-Asn и Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.The peptides contained in the protein fractions Lys-Glu-Asn and Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val are separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions, at a flow rate of 0.8 ml / min.

Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 5,0; протеозопептон - 3,0; панкреатический гидролизат казеина - 25,0; папаиновый перевар соевой муки - 7,5; натрия гидрофосфат - 2,0; лактоза - 2,0; аммония цитрат -2,0; цистеина гидрохлорид - 0,5; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,2; натрия хлорид - 4,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,02; натрия азид - 0,1; агар-агар - 15,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,0±0,2 в течение 12,0 ч.For consortium probiotic bacteria lyophilized culture isolated from the human gastrointestinal tract is reduced by transferring the contents of the vials with the bacteria species Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (ratio 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 5.0; proteozopeptone - 3.0; casein pancreatic hydrolyzate - 25.0; papain digest of soy flour - 7.5; sodium hydrogen phosphate - 2.0; lactose - 2.0; ammonium citrate -2.0; cysteine hydrochloride - 0.5; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.2; sodium chloride - 4.0; glucose - 5.0; meat extract - 15.0; manganese sulfate - 0.02; sodium azide - 0.1; agar-agar - 15.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.0 ± 0.2 for 12.0 hours.

пептид Lys-Glu-Asn - 25,0;Lys-Glu-Asn peptide - 25.0;

пептид Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val - 25,0.Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val peptide - 25.0.

Результаты оценки влияния функционального продукта питания на фагоцитоз представлены в таблице 3.The results of evaluating the effect of a functional food product on phagocytosis are presented in table 3.

Пример 4Example 4

Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile и Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.The peptides contained in the protein fractions Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile and Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a concentration gradient acetonitrile using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min.

Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 5,0; панкреатический гидролизат казеина - 30,0; папаиновый перевар соевой муки - 5,0; натрия гидрофосфат - 1,0; Твин-80 - 1,0; лактоза - 2,5; аммония цитрат - 2,0; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 0,5; кислота аскорбиновая - 0,5; натрия ацетат - 0,3; натрия хлорид - 2,0; глюкоза - 7,5; мясной экстракт - 10,0; марганца сульфат - 0,05; натрия азид - 0,2; агар-агар - 12,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,2±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are reconstructed by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium lobacis 1: 1 ratio: 1: 1 : 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 5.0; casein pancreatic hydrolyzate - 30.0; papain digest of soy flour - 5.0; sodium hydrogen phosphate - 1.0; Twin-80 - 1.0; lactose - 2.5; ammonium citrate - 2.0; cysteine hydrochloride - 1.0; magnesium chloride - 0.5; ascorbic acid - 0.5; sodium acetate - 0.3; sodium chloride - 2.0; glucose - 7.5; meat extract - 10.0; manganese sulfate - 0.05; sodium azide - 0.2; agar-agar - 12.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.2 ± 0.2 for 12.0 hours.

консорциум пробиотических бактерий - 30,0;consortium of probiotic bacteria - 30.0;

пептид Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile - 35,0;peptide Tyr-Pro-Pro-Pro-Gly-Pro-Ile - 35.0;

пептид Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu - 35,0.Lys-Val-Leu-Pro-Val-Pro-Glu peptide - 35.0.

Пример 5Example 5

Содержащиеся в белковых фракциях пептиды Lys-Glu и Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp разделяют с помощью нескольких последовательных циклов обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, элюируя пептиды в градиенте концентраций ацетонитрила с использованием различных противоионов, при скорости потока 0,8 мл/мин.The peptides Lys-Glu and Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp contained in the protein fractions were separated by several successive cycles of reverse phase high performance liquid chromatography, eluting the peptides in a gradient of acetonitrile concentrations using various counterions at a flow rate of 0.8 ml / min

Для получения консорциума пробиотических бактерий лиофилизированные культуры, выделенные из желудочно-кишечного тракта человека, восстанавливают путем переноса содержимого ампул с бактериями видов Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Enterococcus faecium (соотношение 1:1:1:1:1:1:1) в чашку Петри с питательной средой состава, г/л: дрожжевой экстракт - 10,0; панкреатический гидролизат казеина - 20,0; натрия гидрофосфат - 2,5; Твин-80 - 0,7; лактоза - 5,0; аммония цитрат - 0,5; цистеина гидрохлорид - 1,0; магния хлорид - 1,0; кислота аскорбиновая - 0,1; натрия ацетат - 0,2; натрия хлорид - 3,0; глюкоза - 5,0; мясной экстракт - 15,0; марганца сульфат - 0,1; натрия азид - 0,2; агар-агар - 12,0. Посевы инкубируют при температуре 37,0±2,0°С, рН 7,0±0,2 в течение 12,0 ч.To obtain a consortium of probiotic bacteria, lyophilized cultures isolated from the human gastrointestinal tract are reconstructed by transferring the contents of ampoules with bacteria of the species Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivariusococococociacepta 1 faca 1: 1: 1: 1: 1) in a Petri dish with a nutrient medium composition, g / l: yeast extract - 10.0; casein pancreatic hydrolyzate - 20.0; sodium hydrogen phosphate - 2.5; Twin-80 - 0.7; lactose - 5.0; ammonium citrate - 0.5; cysteine hydrochloride - 1.0; magnesium chloride - 1.0; ascorbic acid - 0.1; sodium acetate - 0.2; sodium chloride - 3.0; glucose - 5.0; meat extract - 15.0; manganese sulfate - 0.1; sodium azide - 0.2; agar-agar - 12.0. Crops are incubated at a temperature of 37.0 ± 2.0 ° C, pH 7.0 ± 0.2 for 12.0 hours.

пептид Lys-Glu - 35,0;Lys-Glu peptide - 35.0;

пептид Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp - 35,0.Peptide Tre-Gly-Glu-Asn-His-Asp - 35.0.

Из таблицы 1 следует, что функциональные продукты питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученные в соответствии с описанными примерами, характеризуются противоопухолевой активностью по отношению к тестируемым клеточным линиям: лимфомы Беркитта ЛБР2, рака предстательной железы человека DU 145, рака молочной железы человека MDAMB-231 и MCF7, гепатоцеллюлярной карциномы HepG2, рака головного мозга U-87, рака поджелудочной железы человека PANC-1.From table 1 it follows that functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples are characterized by antitumor activity in relation to the tested cell lines: Burkitt’s lymphoma LBR2, human prostate cancer DU 145, breast cancer human MDAMB-231 and MCF7, hepatocellular carcinoma HepG2, brain cancer U-87, human pancreatic cancer PANC-1.

Данные фиг.1 свидетельствуют о том, что функциональные продукты питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученные в соответствии с описанными примерами, характеризуются выраженными антиоксидантными свойствами (величина тролокс-эквивалента/109 клеток находится в диапазоне от 345 до 1488). При этом максимальная антиоксидантная активность обнаружена у функционального продукта, приготовленного по примеру 2 (от 500 до 1545).The data of Fig. 1 indicate that functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples are characterized by pronounced antioxidant properties (the value of trolox equivalent / 109 cells is in the range from 345 to 1488). Moreover, the maximum antioxidant activity was found in the functional product prepared according to example 2 (from 500 to 1545).

Из таблицы 2 видно, что все функциональные продукты питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученные в соответствии с описанными примерами, вызывают увеличение антителообразующих клеток в селезенке крыс в 1,26-1,33 раз по сравнению с контролем. В пересчете на 1 млн спленоцитов исследуемые функциональные продукты питания стимулируют антителогенез. Кроме того, из таблицы 2 видно, что исследуемые продукты ослабляют гиперчувствительностью замедленного типа к эритроцитам барана, что может объясняться наличием у разработанных продуктов противовоспалительного эффекта.Table 2 shows that all functional food products based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples cause an increase in antibody-forming cells in the rat spleen by 1.26-1.33 times compared with the control. In terms of 1 million splenocytes, the studied functional food products stimulate antibody production. In addition, from table 2 it can be seen that the studied products weaken the delayed-type hypersensitivity to sheep erythrocytes, which may be explained by the presence of an anti-inflammatory effect in the developed products.

Из таблицы 3 следует, что при введении лабораторным животным функциональных продуктов питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, полученных в соответствии с описанными примерами, в течение 16 дней наблюдается увеличение числа фагоцитирующих клеток (3,89-5,38%) по сравнению с контролем (2,71%). Активность фагоцитов у животных, получавших исследуемые продукты, аналогична фагоцитарному индексу животных, которым вводят оксиметилурацил (2,02 и 2,54, соответственно). На основании анализа абсолютного фагоцитарного показателя установлено, что все изучаемые функциональные продукты питания обладают способностью стимулировать фагоцитоз.From table 3 it follows that when the laboratory animals introduced functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides obtained in accordance with the described examples, an increase in the number of phagocytic cells (3.89-5.38%) is observed over 16 days compared with control (2.71%). The activity of phagocytes in animals treated with the studied products is similar to the phagocytic index of animals that are injected with oxymethyluracil (2.02 and 2.54, respectively). Based on the analysis of the absolute phagocytic index, it was found that all studied functional food products have the ability to stimulate phagocytosis.

Таким образом, установлено, что разработанные продукты на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, характеризуются выраженными противоопухолевыми, антиоксидантными и иммуномодулирующими свойствами, что позволяет использовать их в качестве функционального питания в восстановительной терапии онкологических больных.Thus, it was found that the developed products based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides are characterized by pronounced antitumor, antioxidant and immunomodulating properties, which allows them to be used as functional nutrition in the rehabilitation therapy of cancer patients.

Получены предварительные результаты клинических исследований, свидетельствующие о том, что включение в рацион питания больных колоректальным раком функциональных продуктов питания на основе консорциумов пробиотических бактерий и биологически активных пептидов, выделенных из белков молока, полученных в соответствии с примерами 1-5, приводит к положительной динамике в бактериальном составе микрофлоры желудочно-кишечного тракта у онкологических больных, что выражается в увеличении количества полезной микрофлоры (бифидобактерий, лактобактерий, молочнокислых бактерий, энтерококков, эшерихий с нормальной ферментацией) и уменьшении содержания условно-патогенных бактерий (Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp., Proteus spp., Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Clostridium).Preliminary results of clinical studies have been obtained, indicating that the inclusion in the diet of patients with colorectal cancer of functional foods based on consortia of probiotic bacteria and biologically active peptides isolated from milk proteins obtained in accordance with examples 1-5, leads to a positive dynamics in the bacterial composition of the microflora of the gastrointestinal tract in cancer patients, which is expressed in an increase in the number of beneficial microflora (bifidobacteria, lact bacteria, lactobacilli, enterococci, Escherichia normal fermentation) and reducing the content of opportunistic bacteria (Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp., Proteus spp., Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Clostridium).

Claims

1. Способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных, характеризующийся тем, что получают биологически активные пептиды из белков молока, получают консорциум пробиотических бактерий, выделенных из желудочно-кишечного тракта человека с последующим смешиванием компонентов функционального продукта питания, при этом процесс получения биологически активных пептидов из белков молока осуществляют согласно схеме, включающей следующие операции: приемка, оценка качества, подготовка сырья, внесение фосфатов, растворение казеина, доведение рН до 7,5, пастеризация при температуре 74±2°С с выдержкой 15-20с с целью уничтожения микроорганизмов, содержащихся в казеине, охлаждение до температуры 37±2°С, внесение энзиматической системы, включающей трипсин, химотрипсин и термолизин, далее осуществляют последовательные стадии выделения и очистки биологически активных пептидов путем ультрафильтрации, препаративного электрофореза и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, затем для достижения необходимой консистенции биологически активных пептидов их сгущают на вакуум-выпарной установке до массовой доли сухих веществ от 40 до 45%.1. A method of obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients, characterized in that biologically active peptides are obtained from milk proteins, a consortium of probiotic bacteria isolated from the human gastrointestinal tract is obtained, followed by mixing the components of the functional food product, while the process of obtaining biologically active peptides from milk proteins are carried out according to a scheme that includes the following operations: acceptance, quality assessment, preparation of raw materials, introduction of pho sfatov, dissolving casein, adjusting the pH to 7.5, pasteurization at a temperature of 74 ± 2 ° C with an exposure of 15-20 s in order to destroy microorganisms contained in casein, cooling to a temperature of 37 ± 2 ° C, introducing an enzymatic system including trypsin, chymotrypsin and thermolysin, then carry out sequential stages of isolation and purification of biologically active peptides by ultrafiltration, preparative electrophoresis and reverse phase high performance liquid chromatography, then to achieve the desired consistency of biolo of chemically active peptides, they are concentrated on a vacuum evaporator to a mass fraction of solids from 40 to 45%.

2. Способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных по п. 1, отличающийся тем, что для его получения используют следующие компоненты в определенном соотношении, мас. %:2. A method of obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients according to claim 1, characterized in that the following components are used to obtain it in a certain ratio, wt. %:

консорциум пробиотических бактерий Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1) - 25,0;consortium of probiotic bacteria Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (ratio 1: 1: 1: 1: 1: 1) - 25.0;

пептид Leu-Leu-Tyr - 37,5;Leu-Leu-Tyr peptide - 37.5;

3. Способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных по п. 1, отличающийся тем, что для его получения используют следующие компоненты в определенном соотношении, мас. %:3. A method of obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients according to claim 1, characterized in that the following components are used to obtain it in a certain ratio, wt. %:

консорциум пробиотических бактерий Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei (соотношение 1:1:1:1:1:1:1:1) - 50,0;a consortium of probiotic bacteria Bifidobacterium breve, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus casei (1: 1: 1: 1: 1: 1 ratio

4. Способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных по п. 1, отличающийся тем, что для его получения используют следующие компоненты в определенном соотношении, мас. %:4. A method of obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients according to claim 1, characterized in that the following components are used to obtain it in a certain ratio, wt. %:

консорциум пробиотических бактерий Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1:1)- 50,0;consortium of probiotic bacteria Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus paracasei (1: 1: 1: 1: 1: 1: 1 ratio;

пептид Lys-Glu-Asn - 25,0;Lys-Glu-Asn peptide - 25.0;

пептид Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val-25,0.Leu-Leu-Tyr-Glu-Glu-Pro-Val-Leu-Gly-Pro-Val-Gly-Pro-Pro-Pro-Ile-Ile-Val-25.0 peptide.

5. Способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных по п. 1, отличающийся тем, что для его получения используют следующие компоненты в определенном соотношении, мас. %:5. A method of obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients according to claim 1, characterized in that the following components are used to obtain it in a certain ratio, wt. %:

консорциум пробиотических бактерий Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus paracasei (соотношение 1:1:1:1:1:1) - 30,0;consortium of probiotic bacteria Bifidobacteriu longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Bifidobacterium adolescentis, Lactobacillus paracasei (ratio 1: 1: 1: 1: 1: 1) - 30.0;

6. Способ получения функционального продукта питания для реабилитации онкологических больных по п. 1, отличающийся тем, что для его получения используют следующие компоненты в определенном соотношении, мас. %: консорциум пробиотических бактерий Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Enterococcus faecium (соотношение 1:1:1:1:1:1:1) - 30,0;6. A method of obtaining a functional food product for the rehabilitation of cancer patients according to claim 1, characterized in that the following components are used to obtain it in a certain ratio, wt. %: consortium of probiotic bacteria Lactobacillus reuteri, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Streptococcus agalactiae, Enterococcus faecium (ratio 1: 1: 1: 1: 1: 1: 1;)

пептид Lys-Glu - 35,0;Lys-Glu peptide - 35.0;