RU2657609C1 - Method for determining the dna fragmentation index of spermatozoa in producer animals - Google Patents
Method for determining the dna fragmentation index of spermatozoa in producer animals Download PDFInfo
- Publication number
- RU2657609C1 RU2657609C1 RU2017128368A RU2017128368A RU2657609C1 RU 2657609 C1 RU2657609 C1 RU 2657609C1 RU 2017128368 A RU2017128368 A RU 2017128368A RU 2017128368 A RU2017128368 A RU 2017128368A RU 2657609 C1 RU2657609 C1 RU 2657609C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sperm
- dna
- spermatozoa
- orange
- sample
- Prior art date
Links
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 10
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 230000009027 insemination Effects 0.000 claims abstract description 6
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 4
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims abstract 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 6
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 239000004904 UV filter Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229940070353 protamines Drugs 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N1/31—Apparatus therefor
- G01N1/312—Apparatus therefor for samples mounted on planar substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
- G01N21/6458—Fluorescence microscopy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения индекса фрагментации ДНК сперматозоидов в замороженной сперме животных-производителей.The invention relates to the field of biotechnology and can be used to determine the index of sperm DNA fragmentation in frozen semen of animal producers.
Данный метод является технологически современным анализом маркеров апоптоза и играет важную роль в регуляции фертильности, которую нужно учитывать как при естественном осеменении, так и при искусственном осеменении сельскохозяйственных животных.This method is a technologically advanced analysis of apoptosis markers and plays an important role in the regulation of fertility, which must be taken into account both during natural insemination and artificial insemination of farm animals.
Фрагментация ДНК в сперматозоидах характеризуется двухцепочечными и одноцепочечными разрывами молекулы ДНК. Это связано с дефицитом содержания в хромосомах специальных транспортных белков-протаминов, защищающих ДНК от внешних повреждений. Фрагментация ДНК сперматозоидов оказывает влияние не только на фертильность, но и на ранние этапы эмбрионального развития плода, особенно на формирование бластоцисты в предимплантационный период эмбрионального развития (т.е. до нидации зародыша к стенке матки).DNA fragmentation in sperm is characterized by double-stranded and single-stranded breaks of the DNA molecule. This is due to a deficiency in the content of special transport proteins-protamines in the chromosomes that protect DNA from external damage. Fragmentation of sperm DNA affects not only fertility, but also the early stages of fetal development, especially blastocyst formation during the pre-implantation period of embryonic development (i.e., before the nucleation of the embryo to the uterine wall).
Заявленный способ позволяет определить степень повреждения нитей ДНК (измерения количества разрывов ДНК) в сперматозоидах.The claimed method allows to determine the degree of damage to DNA strands (measuring the number of DNA breaks) in sperm.
Исследование структуры хроматина проводят с помощью окрашивания ДНК флюрохромами. Окрашивание клеток флуоресцентными красителями, т.е. ДНК флюрохромами, происходит благодаря способности флюрохрома избирательно окрашивать двуспиральные нуклеиновые кислоты в самом сперматозоиде. Окрашивание сперматозоидов осуществляют акридиновым оранжевым.The study of chromatin structure is carried out using DNA staining with fluorochromes. Staining cells with fluorescent dyes, i.e. DNA with fluorochromes occurs due to the ability of fluorochrome to selectively stain double-stranded nucleic acids in the sperm itself. Sperm staining is carried out with acridine orange.
Уровень техники, аналоги. Существует аналогичный метод в медицине, описанный в руководстве ВОЗ «Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека» пятое издание 2012 г., с. 164, но в ветеринарной медицине аналогов нет. Особенность заявленного изобретения заключается в том, что способ позволяет определить индекс фрагментации ДНК у животных-производителей.The prior art, analogues. There is a similar method in medicine, described in the WHO manual “WHO Guidelines for the Study and Treatment of Human Ejaculate,” fifth edition of 2012, p. 164, but there are no analogues in veterinary medicine. A feature of the claimed invention lies in the fact that the method allows to determine the index of DNA fragmentation in animal producers.
В настоящее время стандартным методом для исследования фрагментации ДНК в сперматозоидах является определение структуры хроматина по Эвенсону (SCSA: Sperm Chromatin Staicture Assay; Evenson et al., 1980; 2000; Evenson and Jost, 1994). Исследование структуры хроматина проводят с помощью окрашивания ДНК флюрохромами. Окрашивание клеток флуоресцентными красителями, т.е. ДНК флюрохромами, происходит благодаря способности флюрохрома избирательно окрашивать двуспиральные нуклеиновые кислоты в самом сперматозоиде. Данный метод выбран нами в качестве ближайшего аналога.Currently, the standard method for studying DNA fragmentation in spermatozoa is to determine chromatin structure according to Evenson (SCSA: Sperm Chromatin Staicture Assay; Evenson et al., 1980; 2000; Evenson and Jost, 1994). The study of chromatin structure is carried out using DNA staining with fluorochromes. Staining cells with fluorescent dyes, i.e. DNA with fluorochromes occurs due to the ability of fluorochrome to selectively stain double-stranded nucleic acids in the sperm itself. We have chosen this method as the closest analogue.
Метод SCSA, хотя и является надежным и высоко воспроизводимым, является дорогим методом, трудным для выполнения и не очень подходящим для рутинных лабораторных исследований (De Jonge, 2002). По этой причине качество ДНК сперматозоидов до сих пор широко не определяется, несмотря на то, что подтверждено его клиническое значение при изучении бесплодия.The SCSA method, although reliable and highly reproducible, is an expensive method, difficult to implement, and not very suitable for routine laboratory studies (De Jonge, 2002). For this reason, the quality of sperm DNA is still not widely determined, despite the fact that its clinical significance has been confirmed in the study of infertility.
Техническим результатом заявленного изобретения является возможность определения индекса фрагментации ДНК, простота, доступная стоимость, минимальные манипуляции с клетками.The technical result of the claimed invention is the ability to determine the index of DNA fragmentation, simplicity, affordable cost, minimal manipulation of cells.
Технический результат заявленного изобретения достигается за счет того, что спермопробу размораживают, подготавливают мазок к исследованию, фиксируют мазок спиртовым раствором уксусной кислоты в течение 1 часа в холодильной камере при постоянной температуре +5°С. Приготавливают краситель смешиванием 40 мл раствора лимонной кислоты, 2,5 мл раствора гидрофосфата натрия и 10 мл 1%-ного акридин оранжевого. Образцы погружают в краситель на 5-7 мин, далее мазок подсушивают на воздухе в течение 1-2 мин, микроскопируют. Проводят отдельный подсчет сперматозоидов с фрагментированной ДНК и нормальных, при этом сперматозоиды с фрагментированной ДНК окрашиваются в красный, желтый или оранжевый цвета, нормальные - в зеленый цвет. Количество сперматозоидов с фрагментированными участками ДНК IFn, % вычисляют по формуле 
Заявленный способ основан на метахроматических свойствах красителя, который изменяет флюоресценцию от зеленого до красного. Он заключается в окрашивании клеток ДНК флюрохромом, после - индуцированной слабой кислотой. Клетки флюоресцируют зеленым при связывании красителя с нормальной двунитевой молекулы ДНК и красным при взаимодействии с однонитевыми ДНК и РНК. При индексе фрагментации ДНК более 30% сперматозоидов уровень фертильности семени значительно снижается.The claimed method is based on the metachromatic properties of a dye that changes fluorescence from green to red. It consists in staining DNA cells with fluorochrome, and then - induced with weak acid. Cells fluoresce green when the dye binds to a normal double-stranded DNA molecule and red when interacting with single-stranded DNA and RNA. With a DNA fragmentation index of more than 30% of sperm, the level of seed fertility is significantly reduced.
Осуществление изобретения.The implementation of the invention.
Проводят размораживание спермопробы, подготавливают мазок спермопробы к исследованию.Thaw sperm samples, prepare a smear of sperm samples for examination.
Капля спермы должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1-1,5 см до его края. После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска. Фиксацию мазка производят спиртовым раствором уксусной кислоты (1 часть уксусной кислоты ледяной и 3 части 96%-ного этилового спирта) в течение 1 часа в холодильной камере при постоянной температуре +5°C.A drop of sperm should be small and proportionate so that the entire smear fits on the glass, not reaching 1-1.5 cm to its edge. After preparation, the smears should be quickly dried in air until the damp shine disappears. The smear is fixed with an alcoholic solution of acetic acid (1 part of glacial acetic acid and 3 parts of 96% ethyl alcohol) for 1 hour in a refrigerator at a constant temperature of + 5 ° C.
Приготовление красителя. Preparation of dye.
В мерной колбе вместимостью 100 см3 смешивают 40 мл раствора лимонной кислоты, 2,5 мл раствора гидрофосфата натрия и 10 мл 1%-го акридин оранжевого.In a volumetric flask with a capacity of 100 cm 3 mix 40 ml of citric acid solution, 2.5 ml of sodium hydrogen phosphate solution and 10 ml of 1% orange acridine.
Срок хранения раствора в темном месте при комнатной температуре - не более 5 дней.The shelf life of the solution in a dark place at room temperature is no more than 5 days.
Проведение анализа. Analysis.
Погружаем образец в краситель на 5-7 мин. Споласкиваем дистиллированной водой 2-3 мин. Мазок подсушиваем на воздухе в течение 1-2 мин. Затем микроскопируем с использованием УФ-фильтра со спектром длины волны 530 нм при увеличении 300×, 600×. Необходимо исследовать 100 сперматозоидов, посчитывая отдельно сперматозоиды с фрагментированной ДНК и нормальные, подсчет проводится визуально. Сперматозоиды с фрагментированной ДНК окрашиваются в красный, желтый или оранжевый цвета, нормальные - в зеленый цвет.Immerse the sample in the dye for 5-7 minutes. Rinse with distilled water for 2-3 minutes. Dry the smear in air for 1-2 minutes. Then we microscope using a UV filter with a wavelength spectrum of 530 nm at a magnification of 300 ×, 600 ×. It is necessary to examine 100 sperm, separately counting sperm with fragmented DNA and normal, counting is carried out visually. Spermatozoa with fragmented DNA are stained red, yellow or orange; normal sperm are green.
Проводим учет результатов.We carry out the accounting of results.
Количество сперматозоидов с фрагментированными участками ДНК IFn, % вычисляют по формулеThe number of sperm with fragmented DNA fragments IF n ,% is calculated by the formula
где С+ - количество сперматозоидов, окрашенных в красный, желтый и оранжевые цвета, шт;where C + is the number of sperm stained in red, yellow and orange, pcs;
С- - количество сперматозоидов, окрашенных в зеленый цвет, шт.C - - the number of sperm stained in green, pcs.
За окончательный результат, округленный до третьего десятичного знака, принимают среднеарифметическое значение результатов не менее чем трех измерений, выполненных в условиях повторяемости по ГОСТ ИСО 5725-1. Допускаемые расхождения между результатами определений не должны превышать 10%.For the final result, rounded to the third decimal place, the arithmetic mean of the results of at least three measurements taken under repeatability conditions in accordance with GOST ISO 5725-1 is taken. Allowable discrepancies between the results of the determination should not exceed 10%.
При выявлении индекса фрагментации более 30% спермопроба выбраковывается и не допускается для искусственного осеменения животных.If a fragmentation index is detected, more than 30% of the sperm sample is rejected and is not allowed for artificial insemination of animals.
Источники информацииInformation sources
1. ГОСТ 32277-2013 Средства воспроизводства. Сперма. Методы испытаний физических свойств и биологического, биохимического, морфологического анализов.1. GOST 32277-2013 Means of reproduction. Sperm. Test methods for physical properties and biological, biochemical, morphological analyzes.
2. Иолчиев Б.С, Багиров В.А, Кленовицкий П.М., Кононов В.П., Таджиева А.В. Индекс фрагментации ДНК хроматина сперматозоидов при оценке качества семени у быков-производителей. Сельскохозяйственная биология №4, 2012 г. 2. Iolchiev B.S., Bagirov V.A., Klenovitsky P.M., Kononov V.P., Tajieva A.V. Sperm chromatin DNA fragmentation index in assessing seed quality in sires. Agricultural Biology No. 4, 2012
3. С.А. Руднева, Е.Е. Брагина, Е.А. Арифулин, Т.М. Сорокина, Л.В. Шилейко, С.А. Ермолева, Л.Ф. Курило, В.Б. Черных. Фрагментация ДНК в сперматозоидах и ее взаимосвязь с нарушением сперматогенеза. 2014 г. 3. S.A. Rudneva, E.E. Bragin, E.A. Arifulin, T.M. Sorokina, L.V. Shileyko, S.A. Ermoleva, L.F. Kurilo, V.B. Blacks. Fragmentation of DNA in sperm and its relationship with impaired spermatogenesis. 2014 year
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017128368A RU2657609C1 (en) | 2017-08-08 | 2017-08-08 | Method for determining the dna fragmentation index of spermatozoa in producer animals |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017128368A RU2657609C1 (en) | 2017-08-08 | 2017-08-08 | Method for determining the dna fragmentation index of spermatozoa in producer animals |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2657609C1 true RU2657609C1 (en) | 2018-06-14 |
Family
ID=62619995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017128368A RU2657609C1 (en) | 2017-08-08 | 2017-08-08 | Method for determining the dna fragmentation index of spermatozoa in producer animals |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2657609C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2730947C1 (en) * | 2020-01-17 | 2020-08-26 | Общество с ограниченной ответственностью "ХалоРУС" | Method for determining integrity of chromatin/dna in spermatozoons |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2191021B1 (en) * | 2007-08-21 | 2015-04-29 | David B. Dr. Brown | Male reproductive health panel and uses thereof |
| RU2568845C1 (en) * | 2014-05-30 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" | Method of assessment of genetic full-value of sperm |
-
2017
- 2017-08-08 RU RU2017128368A patent/RU2657609C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2191021B1 (en) * | 2007-08-21 | 2015-04-29 | David B. Dr. Brown | Male reproductive health panel and uses thereof |
| RU2568845C1 (en) * | 2014-05-30 | 2015-11-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" | Method of assessment of genetic full-value of sperm |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BALLACHEY B.E. et al. The sperm chromatin structure assay. Relationship with alternate tests of semen quality and heterospermic performance of bulls. J Androl. 1988 Mar-Apr; 9(2): 109-15. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2730947C1 (en) * | 2020-01-17 | 2020-08-26 | Общество с ограниченной ответственностью "ХалоРУС" | Method for determining integrity of chromatin/dna in spermatozoons |
| WO2021145794A3 (en) * | 2020-01-17 | 2021-09-10 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Халорус" (Ооо "Халорус") | Method for determining chromatin/dna integrity in spermatozoa |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Selvam et al. | A systematic review on sperm DNA fragmentation in male factor infertility: laboratory assessment | |
| Kazerooni et al. | Evaluation of sperm’s chromatin quality with acridine orange test, chromomycin A3 and aniline blue staining in couples with unexplained recurrent abortion | |
| Varner | Developments in stallion semen evaluation | |
| Evenson | Sperm chromatin structure assay (SCSA®) | |
| Martins et al. | The use of the acridine orange test and the TUNEL assay to assess the integrity of freeze-dried bovine spermatozoa DNA. | |
| Ringertz et al. | Changes in deoxyribonucleoprotein during spermiogenesis in the bull: sensitivity of DNA to heat denaturation | |
| US20080199430A1 (en) | Methods and kits for qualifying sperm cells | |
| Li et al. | Effect of red light on the development and quality of mammalian embryos | |
| Niżański et al. | Use of fluorescent stainings and flow cytometry for canine semen assessment | |
| Alves et al. | An efficient technique to detect sperm reactive oxygen species: the CellRox deep red fluorescent probe | |
| Trzcińska et al. | Apoptotic-like changes in the spermatozoa of fresh and stored boar semen and the quality of embryos produced in vivo | |
| Andraszek et al. | Comparison of different chromatin staining techniques for bull sperm | |
| BR112015022446B1 (en) | METHOD AND TEST WITH MOUSE EMBRYO ON A MOLECULAR BASIS FOR QUALITY CONTROL INTENDED FOR USE WITH IN VITRO FERTILIZATION TECHNOLOGY | |
| Rui et al. | Validation of simple and cost-effective stains to assess acrosomal status, DNA damage and mitochondrial activity in rooster spermatozoa | |
| US10718694B2 (en) | Counterstains for a biological sample | |
| RU2657609C1 (en) | Method for determining the dna fragmentation index of spermatozoa in producer animals | |
| Fernández et al. | Sperm chromatin dispersion (SCD) assay | |
| Dolník et al. | Flow cytometry in assessment of sperm integrity and functionality–a review | |
| Martins et al. | Sperm head morphometry and chromatin condensation are in constant change at seminiferous tubules, epididymis, and ductus deferens in bulls | |
| RU2700454C1 (en) | Method for prediction of boar male sperm quality | |
| Abush et al. | Thawed human sperm quality is influenced by the volume of the cryopreserved specimen | |
| Christensen et al. | Implementation of flow cytometry for quality control in four Danish bull studs | |
| Garner et al. | Comparison of seminal quality in Holstein bulls as yearlings and as mature sires | |
| Adler et al. | The measurement of induced genetic change in mammalian germ cells | |
| Andraszek et al. | Preliminary research on evaluation of sperm morphometry and chromatin structure in the semen of silver fox (Vulpes vulpes) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200809 |