RU2656667C1 - Method for producing modified crystals of magnetite - Google Patents

Method for producing modified crystals of magnetite Download PDF

Info

Publication number
RU2656667C1
RU2656667C1 RU2017146340A RU2017146340A RU2656667C1 RU 2656667 C1 RU2656667 C1 RU 2656667C1 RU 2017146340 A RU2017146340 A RU 2017146340A RU 2017146340 A RU2017146340 A RU 2017146340A RU 2656667 C1 RU2656667 C1 RU 2656667C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
magnetite
crystals
mixture
dispersion
water
Prior art date
Application number
RU2017146340A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Александр Георгиевич Мажуга
Тимур Радикович Низамов
Виктория Игоревна Уварова
Original Assignee
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС" filed Critical Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС"
Priority to RU2017146340A priority Critical patent/RU2656667C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2656667C1 publication Critical patent/RU2656667C1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/26—Iron; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/10—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person
    • A61K41/13—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person by ultrasonic waves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0063—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres
    • A61K49/0065—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the luminescent/fluorescent agent having itself a special physical form, e.g. gold nanoparticle
    • A61K49/0067—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the luminescent/fluorescent agent having itself a special physical form, e.g. gold nanoparticle quantum dots, fluorescent nanocrystals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0063—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres
    • A61K49/0069—Preparation for luminescence or biological staining characterised by a special physical or galenical form, e.g. emulsions, microspheres the agent being in a particular physical galenical form
    • A61K49/0089—Particulate, powder, adsorbate, bead, sphere
    • A61K49/0091—Microparticle, microcapsule, microbubble, microsphere, microbead, i.e. having a size or diameter higher or equal to 1 micrometer
    • A61K49/0093—Nanoparticle, nanocapsule, nanobubble, nanosphere, nanobead, i.e. having a size or diameter smaller than 1 micrometer, e.g. polymeric nanoparticle
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1818—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1821—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles
    • A61K49/1824—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles
    • A61K49/1827—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes particles, e.g. uncoated or non-functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised microparticles or nanoparticles coated or functionalised nanoparticles having a (super)(para)magnetic core, being a solid MRI-active material, e.g. magnetite, or composed of a plurality of MRI-active, organic agents, e.g. Gd-chelates, or nuclei, e.g. Eu3+, encapsulated or entrapped in the core of the coated or functionalised nanoparticle
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
    • B82B3/00—Manufacture or treatment of nanostructures by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
    • B82B3/0009—Forming specific nanostructures
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y40/00—Manufacture or treatment of nanostructures
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C30—CRYSTAL GROWTH
    • C30B—SINGLE-CRYSTAL GROWTH; UNIDIRECTIONAL SOLIDIFICATION OF EUTECTIC MATERIAL OR UNIDIRECTIONAL DEMIXING OF EUTECTOID MATERIAL; REFINING BY ZONE-MELTING OF MATERIAL; PRODUCTION OF A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; SINGLE CRYSTALS OR HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; AFTER-TREATMENT OF SINGLE CRYSTALS OR A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; APPARATUS THEREFOR
    • C30B29/00—Single crystals or homogeneous polycrystalline material with defined structure characterised by the material or by their shape
    • C30B29/10—Inorganic compounds or compositions
    • C30B29/16—Oxides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C30—CRYSTAL GROWTH
    • C30B—SINGLE-CRYSTAL GROWTH; UNIDIRECTIONAL SOLIDIFICATION OF EUTECTIC MATERIAL OR UNIDIRECTIONAL DEMIXING OF EUTECTOID MATERIAL; REFINING BY ZONE-MELTING OF MATERIAL; PRODUCTION OF A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; SINGLE CRYSTALS OR HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; AFTER-TREATMENT OF SINGLE CRYSTALS OR A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; APPARATUS THEREFOR
    • C30B29/00—Single crystals or homogeneous polycrystalline material with defined structure characterised by the material or by their shape
    • C30B29/60—Single crystals or homogeneous polycrystalline material with defined structure characterised by the material or by their shape characterised by shape
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C30—CRYSTAL GROWTH
    • C30B—SINGLE-CRYSTAL GROWTH; UNIDIRECTIONAL SOLIDIFICATION OF EUTECTIC MATERIAL OR UNIDIRECTIONAL DEMIXING OF EUTECTOID MATERIAL; REFINING BY ZONE-MELTING OF MATERIAL; PRODUCTION OF A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; SINGLE CRYSTALS OR HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; AFTER-TREATMENT OF SINGLE CRYSTALS OR A HOMOGENEOUS POLYCRYSTALLINE MATERIAL WITH DEFINED STRUCTURE; APPARATUS THEREFOR
    • C30B30/00—Production of single crystals or homogeneous polycrystalline material with defined structure characterised by the action of electric or magnetic fields, wave energy or other specific physical conditions
    • C30B30/06—Production of single crystals or homogeneous polycrystalline material with defined structure characterised by the action of electric or magnetic fields, wave energy or other specific physical conditions using mechanical vibrations

Abstract

FIELD: chemistry.
SUBSTANCE: invention relates to inorganic chemistry and to a method for producing modified crystals of magnetite Fe3O4, containing a fluorescent dye on the surface, which allows visualizing and monitoring their behavior both in a living cell and in a living organism in vivo. Such crystals can be used as drug delivery vehicles and T2-contrast agents. Method for producing modified crystals of magnetite comprises mixing 138 pts.wt. of magnetite crystals and 1 pts.wt. of cholesterol mixture, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(bis(2-hydroxydodecyl)amino)ethyl)(2-hydroxydecyl)amino)ethyl)piperazin-1-yl)ethylazanediyl)didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycerymethoxy(polyethylene glycol)-2000, taken in a weight ratio 15:7:75:3, respectively, initially with 60,000 pts. wt. of chloroform, followed by 82,240 pts. wt. of N-methyl-2-pyrrolidone, treatment of the mixture with ultrasound, removing chloroform and adding water thereto, followed by dialysis of the resulting dispersion of the modified crystals of magnetite against water, wherein crystals of magnetite are used as crystals, wherein the crystals of magnetite are obtained by mixing octadecene with iron(III) oleate or iron(III) acetylacetonate, oleic acid and sodium oleate, heating the mixture to 70 °C and its aging at this temperature for 30 minutes, reheating the mixture in an inert gas atmosphere from 70 °C to 320 °C, holding it at this temperature and cooling the mixture to room temperature, carried out in an inert gas atmosphere, introducing into the isopropanol system, separating the crystals of magnetite, dispersing them in a non-polar high boiling organic solvent selected from the group consisting of dibenzyl ether, octadecene and trioctylamine, in the presence of oleic acid and sodium oleate, heating the resulting dispersion to a temperature of 290–350 °C in an inert gas atmosphere, followed by the dropwise addition of a solution of iron(III) oleate to the heated dispersion, in a non-polar high boiling organic solvent for 1 to 10 hours and cooling the dispersion to room temperature carried out in an inert gas atmosphere, reintroduction into the isopropanol system and separation of magnetite, and further dialysis, the dispersion is concentrated, adding thereto a solution in dimethyl sulfoxide of a fluorescent dye selected from the group consisting of 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindodicarbocyanine, 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyanionide and 9-(diethylamino)benzo[a]phenoxazin-5-one, the modified magnetite is separated by centrifugation, then it is washed with a mixture of water and dimethylsulfoxide, then with water. Magnetization of saturation of magnetite in comparison with the prototype increases by 2.09–2.51 times, the velocity value r2-relaxivity increases by 1.22–1.38 times.
EFFECT: invention allows producing crystals of magnetite with improved magnetic properties.
1 cl, 4 ex

Description

Изобретение относится к области неорганической химии и касается способа получения модифицированных кристаллов магнетита (Fe3O4), содержащих на поверхности флуоресцентный краситель, что дает возможность визуализировать и отслеживать их поведение, как в живой клетке, так и в живом организме in vivo. Такие кристаллы могут найти применение в качестве средств доставки лекарств и Т2-контрастных агентов.The invention relates to the field of inorganic chemistry and relates to a method for producing modified crystals of magnetite (Fe 3 O 4 ) containing a fluorescent dye on the surface, which makes it possible to visualize and track their behavior, both in a living cell and in a living organism in vivo. Such crystals may find application as drug delivery vehicles and T2 contrast agents.

Известен способ получения модифицированных кристаллов магнетита путем смешения дисперсии кристаллов магнетита сферической формы, имеющих размер 26-38 нм, в хлороформе с раствором, содержащим смесь 1,2-диолеоил-3-триметиламмоний-пропана и холестерина в хлороформе, добавлением в полученную смесь дистиллированной воды, обработки смеси ультразвуком, удаления хлороформа и повторной обработки смеси ультразвуком (Namiki Y. et al. A novel magnetic crystal-lipid nanostructure for magnetically guided in vivo gene delivery // Nature Nanotechnology. 2009. V. 4, P. 598-606). Данный способ получения модифицированных кристаллов магнетита имеет такие признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого способа, как смешение дисперсии кристаллов магнетита в хлороформе с раствором в хлороформе смеси холестерина и липида, добавления в нее воды и обработки смеси ультразвуком.A known method for producing modified magnetite crystals by mixing a dispersion of spherical magnetite crystals having a size of 26-38 nm in chloroform with a solution containing a mixture of 1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium propane and cholesterol in chloroform by adding distilled water to the resulting mixture , sonicating the mixture, removing chloroform and sonicating the mixture (Namiki Y. et al. A novel magnetic crystal-lipid nanostructure for magnetically guided in vivo gene delivery // Nature Nanotechnology. 2009. V. 4, P. 598-606) . This method of obtaining modified magnetite crystals has such features that coincide with the essential features of the proposed method, such as mixing a dispersion of magnetite crystals in chloroform with a solution of a mixture of cholesterol and lipid in chloroform, adding water to it, and treating the mixture with ultrasound.

Недостатками данного способа является то, что полученные модифицированные кристаллы магнетита не содержат флуоресцентного красителя, необходимого для визуализации, и обладают относительно невысокими магнитными свойствами, что затрудняет проведение с их помощью эффективной МРТ-диагностики и осложняет удаленное манипулирование ими во внешнем магнитном поле.The disadvantages of this method is that the obtained modified magnetite crystals do not contain the fluorescent dye necessary for imaging and have relatively low magnetic properties, which makes it difficult to conduct effective MRI diagnostics with their help and complicates their remote manipulation in an external magnetic field.

Известен способ получения модифицированных кристаллов магнетита путем диспергирования сферических кристаллов магнетита, имеющих диаметр 4-11 нанометров (нм), в хлороформе под действием ультразвука, добавления в дисперсию раствора дипальмитоилфосфатидилхолина, выпаривания хлороформа из смеси в инертной атмосфере, удаления остаточного растворителя в вакуумной камере, добавления фосфатного буферного раствора, нагрева смеси до 50°C и обработки ее ультразвуком (Gonzales М. & Krishnan K.M. Synthesis of magnetoliposomes with monodisperse iron oxide nanocrystal cores for hyperthermia // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. 2005. V. 293, P. 265-270). Данный способ получения модифицированных кристаллов магнетита имеет такие признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого способа, как смешение дисперсии кристаллов магнетита в хлороформе с раствором липида в хлороформе, удаление из смеси хлороформа и воздействие на смесь ультразвука.A known method of producing modified magnetite crystals by dispersing spherical magnetite crystals having a diameter of 4-11 nanometers (nm) in chloroform under the influence of ultrasound, adding a solution of dipalmitoylphosphatidylcholine to the dispersion, evaporating chloroform from the mixture in an inert atmosphere, removing residual solvent in a vacuum chamber, adding phosphate buffer solution, heating the mixture to 50 ° C and treating it with ultrasound (Gonzales M. & Krishnan KM Synthesis of magnetoliposomes with monodisperse iron oxide nanocrystal cores for hyperthermia // Journal of Magnetism and Magnetic Materials. 2005. V. 293, P. 265-270). This method of obtaining modified magnetite crystals has such features that coincide with the essential features of the proposed method, such as mixing a dispersion of magnetite crystals in chloroform with a solution of lipid in chloroform, removing chloroform from the mixture and exposure to the mixture of ultrasound.

Недостатками данного способа является то, что полученные модифицированные кристаллы магнетита не содержат флуоресцентного красителя, необходимого для визуализации, и обладают относительно невысокими магнитными свойствами, что затрудняет проведение с их помощью эффективной МРТ-диагностики и осложняет удаленное манипулирование ими во внешнем магнитном поле.The disadvantages of this method is that the obtained modified magnetite crystals do not contain the fluorescent dye necessary for imaging and have relatively low magnetic properties, which makes it difficult to conduct effective MRI diagnostics with their help and complicates their remote manipulation in an external magnetic field.

Наиболее близким к заявляемому является известный способ получения модифицированных кристаллов оксида железа, в котором используют исходную навеску оксида, обладающего магнитными свойствами, содержащую 5 мг по железу. В данном техническом решении нет уточнений относительно того, какой из магнитных оксидов железа, обладающих гидрофобными свойствами, был использован (γ-Fe2O3 или Fe3O4). Следовательно, описанная в известном техническом решении модификация оксида железа является универсальной и может быть применима в том числе и для используемого в предлагаемом способе магнетита. Проведенный расчет показывает, что 5 мг по железу содержится в 6,91 мг магнетита. Таким образом, известный способ получения модифицированных кристаллов магнетита осуществляют путем смешения 6,91 мг (138 мас. ч. (мас. ч.)) магнетита, имеющих размер 16 нм, и 0,05 мг (1 мас. ч.) смеси холестерина, фосфолипида DSPC, имеющего название по химической номенклатуре 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p6517?lang=en&region=RU), липидоида С12-200, имеющего название по химической номенклатуре 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ол (https://www.***.com/patents/WO2011017548A1?cl=en) и липида mPEG2000-DMG, имеющего название по химической номенклатуре 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоль)-2000 (https://www.nofamerica.corn/store/index.php?dispatch=products.view&product_id=329), взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, вначале с 2 мл (60000 мас. ч.) хлороформа, затем с 4 мл (82240 мас. ч.) N-метил-2-пирролидона, обработки смеси ультразвуком, удаления хлороформа и добавления в нее воды с последующим диализом полученной дисперсии модифицированных кристаллов против воды (Jiang S., Eltoukhy A.A., Love K.T., Langer R. & Anderson, D.G. Lipidoid-coated iron oxide nanoparticles for efficient DNA and siRNA delivery // Nano Letters, 2013. V. 13, P. 1059-1064 - прототип). Данный способ получения модифицированных кристаллов магнетита имеет такие признаки, совпадающие с существенными признаками предлагаемого способа, как смешение 138 мас. ч. кристаллов магнетита и 1 мас. ч. смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, вначале с 60000 мас. ч. хлороформа, затем с 82240 мас. ч. N-метил-2-пирролидона, обработка смеси ультразвуком, удаление хлороформа и добавление в нее воды с последующим диализом полученной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита против воды.Closest to the claimed is a known method for producing modified crystals of iron oxide, which use the initial sample of oxide having magnetic properties containing 5 mg of iron. In this technical solution there is no clarification as to which of the magnetic iron oxides with hydrophobic properties was used (γ-Fe 2 O 3 or Fe 3 O 4 ). Therefore, the modification of iron oxide described in the known technical solution is universal and can be applied, including for magnetite used in the proposed method. The calculation shows that 5 mg of iron is contained in 6.91 mg of magnetite. Thus, the known method for producing modified crystals of magnetite is carried out by mixing 6.91 mg (138 parts by weight (parts by weight)) of magnetite having a size of 16 nm and 0.05 mg (1 part by weight) of a mixture of cholesterol , phospholipid DSPC, named after the chemical nomenclature of 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/p6517?lang=en&region=RU), lipid C12 -200, named after the chemical nomenclature 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1- il) ethylazanediyl) didodecan-2-ol (https://www.***.com/patents/WO2011017548A1?cl=en) and lipid mPEG2000-DMG, named after the chemical nomenclature of 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000 (https: //www.nofamerica.corn/store/index.php? dispatch = products.view & product_id = 329), taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, first with 2 ml (60,000 parts by weight) of chloroform, then with 4 ml (82,240 parts by weight) of N-methyl-2-pyrrolidone, processing mixtures by ultrasound, removing chloroform and adding water to it, followed by dialysis of the resulting dispersion of modified crystals against water (Jiang S., Eltoukhy AA, Love KT, Langer R. & Anderson, DG Lipidoid-coated iron oxide nanoparticles for efficient DNA and siRNA delivery / / Nano Letters, 2013. V. 13, P. 1059-1064 - prototype). This method of obtaining modified crystals of magnetite has such features that match the essential features of the proposed method, as a mixture of 138 wt. including crystals of magnetite and 1 wt. including a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2 -hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, initially with 60,000 wt. including chloroform, then with 82240 wt. including N-methyl-2-pyrrolidone, sonicating the mixture, removing chloroform and adding water to it, followed by dialysis of the resulting dispersion of modified magnetite crystals against water.

Недостатками данного способа является то, что полученные модифицированные кристаллы магнетита не содержат флуоресцентного красителя, необходимого для визуализации, и обладают относительно невысокими магнитными свойствами (см. контрольный пример 4), что затрудняет проведение с их помощью эффективной МРТ-диагностики и осложняет удаленное манипулирование ими во внешнем магнитном поле.The disadvantages of this method is that the obtained modified magnetite crystals do not contain the fluorescent dye necessary for imaging and have relatively low magnetic properties (see control example 4), which makes it difficult to carry out effective MRI diagnostics with them and complicates their remote manipulation during external magnetic field.

Задача изобретения заключается в разработке способа получения модифицированных кристаллов магнетита, лишенного вышеуказанных недостатков.The objective of the invention is to develop a method for producing modified crystals of magnetite, devoid of the above disadvantages.

Технический результат изобретения заключается в придании кристаллам флуоресцентных свойств и улучшении магнитных свойств кристаллов за счет увеличения их намагниченности насыщения и повышения скорости их r2-релаксивности.The technical result of the invention consists in imparting fluorescent properties to crystals and improving the magnetic properties of crystals by increasing their saturation magnetization and increasing their r 2 relaxation rate.

Предварительно были проведены эксперименты с различными исходными кристаллами магнетита, с различным составом модифицирующего покрытия на кристаллах и разными вводимыми флуоресцентными красителями, которые показали, что указанный технический результат достигается в том случае, когда в способе получения модифицированных кристаллов магнетита путем смешения 138 мас. ч. кристаллов магнетита и 1 мас. ч. смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, вначале с 60000 мас. ч. хлороформа, затем 82240 мас. ч. N-метил-2-пирролидона, обработки смеси ультразвуком, удаления хлороформа и добавления в нее воды с последующим диализом полученной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита против воды, в качестве кристаллов используют кристаллы магнетита, полученные путем смешения октадецена с олеатом железа(III) или ацетилацетонатом железа(III), олеиновой кислотой и олеатом натрия, нагрева смеси до 70°C и ее выдерживания при этой температуре в течение 30 мин, повторного нагрева смеси в атмосфере инертного газа с 70°C до 320°C, ее выдерживания при этой температуре и охлаждения смеси до комнатной температуры, проводимыми в атмосфере инертного газа, введения в систему изопропанола, отделения кристаллов магнетита, их диспергирования в неполярном высококипящем органическом растворителе, выбранном из группы, включающей дибензиловый эфир, октадецен и триоктиламин, в присутствии олеиновой кислоты и олеата натрия, нагрева полученной дисперсии до температуры 290-350°C в атмосфере инертного газа с последующим введением в нагретую дисперсию по каплям раствора олеата железа(III) в неполярном высококипящем органическом растворителе в течение 1-10 ч и охлаждения дисперсии до комнатной температуры, проводимыми в атмосфере инертного газа, повторного введения в систему изопропанола и отделения магнетита, а после диализа дисперсию концентрируют, добавляют в нее раствор в диметилсульфоксиде флуоресцентного красителя, выбранного из группы, включающей 1,1-диоктадецил-3,3,3,3 тетраметилиндодикарбоцианин, 1,1-диоктадецил-3,3,3,3-тетраметилиндотрикарбоцианионид и 9-(диэтиламино)бензо[а]феноксазин-5-он, отделяют модифицированный магнетит методом центрифугирования, затем его промывают смесью воды и диметилсульфоксида, потом водой.Previously, experiments were carried out with different initial crystals of magnetite, with a different composition of the modifying coating on the crystals and different introduced fluorescent dyes, which showed that the specified technical result was achieved when, in the method for producing modified magnetite crystals by mixing 138 wt. including crystals of magnetite and 1 wt. including a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2 -hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, initially with 60,000 wt. including chloroform, then 82240 wt. including N-methyl-2-pyrrolidone, sonicating the mixture, removing chloroform and adding water to it, followed by dialysis of the obtained dispersion of modified magnetite crystals against water, use magnetite crystals obtained by mixing octadecene with iron (III) oleate or iron (III) acetylacetonate, oleic acid and sodium oleate, heating the mixture to 70 ° C and keeping it at this temperature for 30 minutes, re-heating the mixture in an inert gas atmosphere from 70 ° C to 320 ° C, keeping it at this temperature the temperature and cooling the mixture to room temperature, carried out in an inert gas atmosphere, introducing isopropanol into the system, separating the magnetite crystals, dispersing them in a non-polar high boiling organic solvent selected from the group consisting of dibenzyl ether, octadecene and trioctylamine in the presence of oleic acid and sodium oleate heating the resulting dispersion to a temperature of 290-350 ° C in an inert gas atmosphere, followed by introducing into the heated dispersion a solution of iron (III) oleate in a non-polar organic solvent for 1-10 hours and cooling the dispersion to room temperature, carried out in an inert gas atmosphere, reintroducing isopropanol and separating magnetite into the system, and after dialysis the dispersion is concentrated, a solution of dimethyl sulfoxide of a fluorescent dye selected from the group is added to it including 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3 tetramethylindodicarbocyanine, 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyanionide and 9- (diethylamino) benzo [a] phenoxazin-5-one, the modified magnetite is separated cent method ifugirovaniya, then it is washed with a mixture of water and dimethylsulfoxide, and then water.

Предлагаемый способ является новым и не описан в патентной и научно-технической литературе. Способ получения используемых в предлагаемом техническом решении исходных кристаллов магнетита также является новым и не описан в патентной и научно-технической литературе.The proposed method is new and is not described in the patent and scientific literature. The method of obtaining used in the proposed technical solution of the initial crystals of magnetite is also new and is not described in the patent and scientific literature.

Исходные кристаллы магнетита в предлагаемом способе получают в два этапа с использованием на втором этапе синтеза неполярного высококипящего органического растворителя, выбранного из группы, включающей дибензиловый эфир, октадецен и триоктиламин. Если на этой стадии предложенного способа синтеза вместо неполярного высококипящего органического растворителя использовать полярный высококипящий органический растворитель, то технический результат изобретения не достигается.The initial crystals of magnetite in the proposed method are obtained in two stages using a non-polar high boiling organic solvent selected from the group consisting of dibenzyl ether, octadecene and trioctylamine in the second stage of synthesis. If at this stage of the proposed synthesis method instead of a non-polar high boiling organic solvent, a polar high boiling organic solvent is used, the technical result of the invention is not achieved.

В предложенном техническом решении при получении исходных кристаллов магнетита в качестве органического соединения трехвалентного железа можно использовать олеат железа(III) или ацетилацетонат железа(III). При этом концентрация органического соединения железа(III) в неполярном высококипящем органическом растворителе может варьироваться и составлять, например, 0,02-0,10 моль/л. Концентрации олеиновой кислоты и олеата натрия также могут варьироваться и составлять, например, 0,02-0,10 моль/л и 0,06-0,3 моль/л, соответственно.In the proposed technical solution, upon receipt of the initial magnetite crystals, iron (III) oleate or iron (III) acetylacetonate can be used as an organic compound of ferric iron. In this case, the concentration of the organic compound of iron (III) in a non-polar high-boiling organic solvent can vary and be, for example, 0.02-0.10 mol / L. The concentration of oleic acid and sodium oleate can also vary and be, for example, 0.02-0.10 mol / L and 0.06-0.3 mol / L, respectively.

В предлагаемом способе оптимальная температура первоначального нагрева смеси органического соединения железа(III), олеиновой кислоты, олеата натрия и октадецена, равная 70°C, и оптимальная продолжительность первоначального нагрева вышеуказанной смеси при 70°C, равная 30 мин, были установлены экспериментально. При этом скорость нагрева смеси зависит от мощности электрической плитки, нагревающей используемую при осуществлении способа масляную баню, и может составлять, например, 2-6°C/мин. Следует отметить, что проводить вышеуказанные стадии синтеза кристаллов магнетита можно в присутствии воздуха. После проведения вышеуказанных стадий синтеза необходимо повторно нагреть реакционную смесь от 70°C до 320°C. При этом скорость нагрева смеси может быть различна и составлять, например, 2-6°C/мин, причем данную стадию синтеза кристаллов магнетита необходимо проводить в атмосфере любого инертного газа, например, такого, как азот, аргон и т.д. После нагрева смеси до 320°C реакционную смесь необходимо выдержать при данной температуре в атмосфере инертного газа в течение определенного времени, например, в течение 25-60 мин, при этом данную операцию также необходимо проводить в атмосфере инертного газа. Затем реакционную смесь необходимо охладить до комнатной температуры в атмосфере инертного газа. Продолжительность охлаждения реакционной смеси может также быть различной и составлять, например, 30-120 мин. Если вышеуказанные стадии синтеза проводить не в атмосфере инертного газа, а, например, в присутствия воздуха или хотя бы одну из вышеуказанных стадий синтеза вообще не проводить, то технический результат изобретения не достигается.In the proposed method, the optimal initial heating temperature of a mixture of an organic compound of iron (III), oleic acid, sodium oleate and octadecene, equal to 70 ° C, and the optimal duration of the initial heating of the above mixture at 70 ° C, equal to 30 minutes, were experimentally established. Moreover, the heating rate of the mixture depends on the power of the electric stove heating the oil bath used in the implementation of the method, and may be, for example, 2-6 ° C / min. It should be noted that the above stages of the synthesis of magnetite crystals can be carried out in the presence of air. After carrying out the above synthesis steps, it is necessary to reheat the reaction mixture from 70 ° C to 320 ° C. In this case, the heating rate of the mixture can be different and, for example, be 2-6 ° C / min, and this stage of the synthesis of magnetite crystals must be carried out in the atmosphere of any inert gas, for example, such as nitrogen, argon, etc. After heating the mixture to 320 ° C, the reaction mixture must be maintained at a given temperature in an inert gas atmosphere for a certain time, for example, for 25-60 minutes, while this operation must also be carried out in an inert gas atmosphere. Then the reaction mixture must be cooled to room temperature in an inert gas atmosphere. The duration of the cooling of the reaction mixture may also be different and, for example, be 30-120 minutes. If the above stages of the synthesis are carried out not in an inert gas atmosphere, but, for example, in the presence of air or at least one of the above stages of the synthesis is not carried out at all, the technical result of the invention is not achieved.

После охлаждения смеси до комнатной температуры в предложенном способе в систему необходимо ввести изопропанол для декантации полученных кристаллов магнетита, причем для выполнения этой стадии синтеза атмосфера инертного газа не требуется и ее можно проводить в присутствии воздуха. При этом количество вводимого изопропанола может варьироваться и составлять, например, 200-400% от объема реакционной смеси.After cooling the mixture to room temperature in the proposed method, it is necessary to introduce isopropanol into the system to decant the obtained magnetite crystals, moreover, inert gas atmosphere is not required for this stage of synthesis and it can be carried out in the presence of air. In this case, the amount of isopropanol introduced can vary and make up, for example, 200-400% of the volume of the reaction mixture.

После введения изопропанола кристаллы магнетита необходимо отделить с использованием традиционно применяемых для этих целей методов, например, таких, как центрифугирование или магнитная декантация. Второй этап синтеза исходных кристаллов магнетита необходим для контролированного увеличения размера кристаллов.After the introduction of isopropanol, magnetite crystals must be separated using methods traditionally used for these purposes, such as centrifugation or magnetic decantation. The second stage of the synthesis of the initial magnetite crystals is necessary for a controlled increase in crystal size.

В предлагаемом техническом решении на втором этапе синтеза отделенные кристаллы диспергируют в неполярном высококипящем органическом растворителе, выбранном из группы, включающей дибензиловый эфир, октадецен и триоктиламин. При этом в неполярный высококипящий органический растворитель необходимо добавить олеиновую кислоту и олеат натрия. На этой стадии синтеза концентрации олеиновой кислоты и олеата натрия в неполярном высококипящем органическом растворителе могут варьироваться и составлять, например, 0,02-0,10 моль/л и 0,06-0,30 моль/л, соответственно.In the proposed technical solution, at the second stage of the synthesis, the separated crystals are dispersed in a non-polar high-boiling organic solvent selected from the group consisting of dibenzyl ether, octadecene and trioctylamine. In this case, oleic acid and sodium oleate must be added to a non-polar high-boiling organic solvent. At this stage of the synthesis, the concentrations of oleic acid and sodium oleate in a non-polar high boiling organic solvent can vary and amount to, for example, 0.02-0.10 mol / L and 0.06-0.30 mol / L, respectively.

На второй стадии синтеза концентрация дисперсии ранее полученных кристаллов магнетита в смеси неполярного высококипящего органического растворителя, олеиновой кислоты и олеата натрия также может варьироваться и составлять, например, 3,20-15,5 г/л. В предлагаемом способе после диспергирования кристаллов магнетита полученную дисперсию нагревают до температуры 290-350°C в атмосфере любого инертного газа, например, аргона. Затем в нагретую дисперсию в атмосфере инертного газа по каплям вводят раствор олеата железа(III) в неполярном высококипящем органическом растворителе в течение 1-10 ч. При этом концентрация олеата железа(III) в вышеуказанном растворителе может варьироваться и составлять, например, 0,04-0,50 моль/л. Если в предлагаемом способе любую из вышеуказанных стадий синтеза кристаллов магнетита не проводить, или их проводить в других условиях, например, вводить раствор олеата железа(III) не по каплям в течение 1-10 ч, а ввести его за один прием, то предлагаемый способ утрачивает работоспособность.At the second stage of the synthesis, the concentration of the dispersion of the previously obtained magnetite crystals in a mixture of a non-polar high-boiling organic solvent, oleic acid and sodium oleate can also vary and make up, for example, 3.20-15.5 g / l. In the proposed method, after dispersing the crystals of magnetite, the resulting dispersion is heated to a temperature of 290-350 ° C in the atmosphere of any inert gas, for example, argon. Then, a solution of iron (III) oleate in a non-polar high-boiling organic solvent is introduced dropwise into a heated dispersion in an inert gas atmosphere for 1-10 hours. The concentration of iron (III) oleate in the above solvent may vary and be, for example, 0.04 -0.50 mol / l. If in the proposed method any of the above stages of the synthesis of magnetite crystals is not carried out, or they are carried out under other conditions, for example, a solution of iron (III) oleate is not added dropwise within 1-10 hours, but it is administered in one go, then the proposed method loses performance.

В предлагаемом техническом решении после введения раствора олеата железа(III) в нагретую дисперсию кристаллов магнетита ее охлаждают до комнатной температуры в течение 30-120 мин в атмосфере инертного газа, затем в систему повторно вводят изопропанол, необходимый для декантации полученных кристаллов магнетита, увеличивших свой размер, причем для выполнения этой стадии синтеза атмосфера инертного газа не требуется и ее можно проводить в присутствии воздуха. При этом количество повторно вводимого изопропанола также может варьироваться и составлять, например, 200-400% от объема реакционной смеси. Затем увеличившие свой размер в процессе второй стадии синтеза кристаллы магнетита отделяются с использованием традиционно применяемых для этих целей методов, например, таких, как центрифугирование или магнитная декантация.In the proposed technical solution, after the solution of iron (III) oleate is introduced into the heated dispersion of magnetite crystals, it is cooled to room temperature for 30-120 min in an inert gas atmosphere, then isopropanol is added to the system to decant the obtained magnetite crystals that have increased in size moreover, to perform this stage of synthesis, an inert gas atmosphere is not required and it can be carried out in the presence of air. The amount of re-introduced isopropanol can also vary and make up, for example, 200-400% of the volume of the reaction mixture. Then, the magnetite crystals that have increased in size during the second stage of synthesis are separated using methods traditionally used for these purposes, such as centrifugation or magnetic decantation.

В предлагаемом техническом решении модифицированные кристаллы магнетита получают путем смешения 138 мас. ч. кристаллов магнетита и 1 мас. ч. смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, вначале с 60000 мас. ч. хлороформа, затем 82240 мас. ч. N-метил-2-пирролидона, обработки смеси ультразвуком, удаления хлороформа и добавления в нее воды с последующим диализом полученной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита против воды. Однако в прототипе полученные таким образом модифицированные кристаллы магнетита используют в качестве носителей для доставки нуклеиновых кислот в клетки биологических объектов. При этом введение в вышеописанные кристаллы флуоресцентных красителей, осуществляемое в предлагаемом техническом решении, ни в прототипе, ни в научно-технической литературе не описано и является новым.In the proposed technical solution, modified magnetite crystals are obtained by mixing 138 wt. including crystals of magnetite and 1 wt. including a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2 -hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, initially with 60,000 wt. including chloroform, then 82240 wt. including N-methyl-2-pyrrolidone, sonicating the mixture, removing chloroform and adding water to it, followed by dialysis of the resulting dispersion of modified magnetite crystals against water. However, in the prototype, the modified magnetite crystals thus obtained are used as carriers for the delivery of nucleic acids to the cells of biological objects. Moreover, the introduction into the above crystals of fluorescent dyes, carried out in the proposed technical solution, neither in the prototype, nor in the scientific and technical literature is described and is new.

При этом также экспериментально было показано, что смешение вышеуказанных количеств магнетита, смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1 -ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, хлороформа и N-метил-2-пирролидона не сопровождается полной адсорбцией холестерина и вышеуказанных липидов на кристаллах магнетита (Love, K. Т. et al. Lipid-like materials for low-dose, in vivo gene silencing // Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010. V. 107, P. 1864-1869).It was also experimentally shown that a mixture of the above amounts of magnetite, a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-Hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecane-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, chloroform and N-methyl-2-pyrrolidone is not accompanied by complete adsorption of cholesterol and the above lipids on magnetite crystals (Love, K. T. et al. Lipid-like materials for low-dose, in vivo gene silencing // Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010. V. 107, P. 1864-1869).

Следует отметить, что в предлагаемом способе можно использовать любой холестерин. Синтез 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола описан (Love, K. Т. et al. Lipid-like materials for low-dose, in vivo gene silencing // Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010. V. 107, P. 1864-1869). Реагенты 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000 коммерчески доступны (http://www.echelon-inc.com/index.php?module=Products&func=detail&id=618 и https://avantilipids.com/product/880150, соответственно).It should be noted that in the proposed method, you can use any cholesterol. Synthesis of 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecane-2 -ola is described (Love, K. T. et al. Lipid-like materials for low-dose, in vivo gene silencing // Proceedings of the National Academy of Sciences, 2010. V. 107, P. 1864-1869). Reagents 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000 are commercially available (http://www.echelon-inc.com/index.php? module = Products & func = detail & id = 618 and https://avantilipids.com/product/880150, respectively).

В данном техническом решении выбор в качестве растворителя хлороформа обусловлен тем, что он хорошо растворяет смесь холестерина и вышеуказанных липидов, обладает низкой температурой кипения и впоследствии может быть легко удален из реакционной системы.In this technical solution, the choice of chloroform as the solvent is due to the fact that it dissolves the mixture of cholesterol and the above lipids well, has a low boiling point and can subsequently be easily removed from the reaction system.

Экспериментально было показано, что N-метил-2-пирролидон не только хорошо смешивается с хлороформом и водой, но и инициирует процесс образования на кристаллах магнетита покрытия, состоящего из холестерина и вышеуказанных липидов.It was experimentally shown that N-methyl-2-pyrrolidone not only mixes well with chloroform and water, but also initiates the formation of coatings on magnetite crystals, consisting of cholesterol and the above lipids.

В предлагаемом техническом решении после введения N-метил-2-пирролидона полученную смесь обрабатывают ультразвуком с получением дисперсии частиц магнетита. Продолжительность обработки смеси ультразвуком может варьироваться и составлять, например, 0,5-7,0 ч. При этом мощность ультразвука также может быть различна и составлять, например, 116-580 Вт.In the proposed technical solution, after the introduction of N-methyl-2-pyrrolidone, the resulting mixture is sonicated to obtain a dispersion of magnetite particles. The duration of processing the mixture with ultrasound can vary and be, for example, 0.5-7.0 hours. In this case, the power of ultrasound can also be different and be, for example, 116-580 watts.

В предложенном способе после обработки смеси ультразвуком полученную дисперсию помещают в круглодонную колбу, хлороформ удаляют на роторном испарителе, затем в колбу добавляют воду, при этом объем введенной воды может варьироваться и составлять, например, 400-600% от объема смеси после упаривания хлороформа. После добавления воды содержимое колбы переносят в мешок для диализа с размером пор, например, 25-50 кДа и проводят диализ дисперсии против воды. Продолжительность диализа может варьироваться и составлять, например, 24-48 ч.In the proposed method, after sonication of the mixture, the obtained dispersion is placed in a round bottom flask, chloroform is removed on a rotary evaporator, then water is added to the flask, while the volume of water introduced can vary and make up, for example, 400-600% of the volume of the mixture after evaporation of chloroform. After adding water, the contents of the flask are transferred to a dialysis bag with a pore size of, for example, 25-50 kDa and the dispersion is dialyzed against water. The duration of dialysis can vary and be, for example, 24-48 hours.

После диализа получают разбавленную водную дисперсию модифицированных кристаллов магнетита, которую концентрируют путем удаления части воды, например, с использованием роторного испарителя или центрифугирования. При этом содержание магнетита в сконцентрированной водной дисперсии может варьироваться и составлять, например, 0,7-2,8 мг/мл. Затем в водную дисперсию модифицированных кристаллов магнетита добавляют раствор в ДМСО одного известного флуоресцентного красителя, выбранного из группы, включающей 1,1-диоктадецил-3,3,3,3 тетраметилиндодикарбоцианин, 1,1-диоктадецил-3,3,3,3-тетраметилиндотрикарбоцианионид и 9-(диэтиламино)бензо[а]феноксазин-5-он. Все вышеуказанные флуоресцентные красители коммерчески доступны. При этом концентрация красителя в ДМСО может варьироваться и составлять, например, 1-5 мг/мл. Экспериментально было показано, что в данных условиях происходит связывание любого из вышеуказанных красителей путем гидрофобного взаимодействия с поверхностью модифицированного магнетита.After dialysis, a dilute aqueous dispersion of modified magnetite crystals is obtained, which is concentrated by removing part of the water, for example using a rotary evaporator or centrifugation. In this case, the magnetite content in the concentrated aqueous dispersion may vary and amount to, for example, 0.7-2.8 mg / ml. A solution of one known fluorescent dye selected from the group consisting of 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3 tetramethylindodicarbocyanine, 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- is then added to the aqueous dispersion of the modified magnetite crystals. tetramethylindotricarbocyanionide and 9- (diethylamino) benzo [a] phenoxazin-5-one. All of the above fluorescent dyes are commercially available. The concentration of the dye in DMSO can vary and be, for example, 1-5 mg / ml. It was experimentally shown that under these conditions, any of the above dyes binds by hydrophobic interaction with the surface of modified magnetite.

Полученный модифицированный магнетит с флуоресцентной меткой отделяют от остальных компонентов смеси методом центрифугирования, после чего отделенный магнетит промывают вначале смесью воды и ДМСО, затем водой. Объемы воды и ДМСО могут варьироваться и составлять, например, вначале 1-5 мл воды и 1-5 мл ДМСО, затем 1-5 мл воды, соответственно.The obtained modified magnetite with a fluorescent label is separated from the other components of the mixture by centrifugation, after which the separated magnetite is washed first with a mixture of water and DMSO, then with water. The volumes of water and DMSO can vary and be, for example, at first 1-5 ml of water and 1-5 ml of DMSO, then 1-5 ml of water, respectively.

Следует отметить, что получить магнетит с флуоресцентной меткой без предварительной модификации магнетита вышеуказанной смесью холестерина и трех липидов не удается.It should be noted that it is not possible to obtain magnetite with a fluorescent label without preliminary modification of magnetite with the above mixture of cholesterol and three lipids.

Модифицированные кристаллы магнетита можно хранить в водной среде или в различных буферных растворах в закрытой стеклянной емкости, например, при 4°C. В этих условиях продолжительность хранения модифицированных кристаллов магнетита составляет не менее 1 мес.Modified magnetite crystals can be stored in an aqueous medium or in various buffer solutions in a closed glass container, for example, at 4 ° C. Under these conditions, the storage time of the modified magnetite crystals is at least 1 month.

Преимущества предложенного способа иллюстрируют следующие примеры.The advantages of the proposed method are illustrated by the following examples.

Пример 1Example 1

В трехгорлую колбу, помещенную в масляную баню и снабженную обратным холодильником, высокотемпературным термометром и системой подачи инертного газа, при комнатной температуре вводят 20,0 мл октадецена, 1,800 г олеата железа(III), 0,570 г олеиновой кислоты и 1,220 г олеата натрия. Затем включают нагрев масляной бани, содержимое колбы нагревают до 70°C со скоростью 6°C/мин и выдерживают при этой температуре в течение 30 мин. После чего в колбу подают ток азота, после дегазации содержимого колбы ее нагревают с 70°C до 320°C со скоростью 2°C/мин с постепенным увеличением мощности плитки. Колбу выдерживают при 320°C в течение 25 мин, затем извлекают из масляной бани и содержимое колбы оставляют остывать до комнатной температуры, проводя эти стадии синтеза в атмосфере азота. Через 30 мин содержимое колбы выливают в химический стакан, содержащий 80,0 мл изопропанола, после чего содержимое стакана перемешивают. Выпавший в осадок кристаллы магнетита отделяют магнитной декантацией, затем их переносят в химический стакан, содержащий 10,0 мл триоктиламина, 0,284 г олеиновой кислоты и 0,912 г олеата натрия, и диспергируют путем перемешивания. Полученную дисперсию переносят в ранее использованную трехгорлую колбу. Содержимое колбы продувают азотом, колбу помещают в масляную баню и нагревают до 350°C со скоростью 2°C/мин, после чего туда в атмосфере азота по каплям вводят раствор 18,000 г олеата железа(III) в 22,0 мл триоктиламина в течение 10 ч. Затем колбу извлекают из масляной бани и охлаждают до комнатной температуры, проводя эти стадии синтеза в атмосфере азота. После чего содержимое колбы переносят в химический стакан, содержащий 200,0 мл изопропанола. Выпавший магнетит отделяют от остальных компонентов реакционной смеси методом магнитной декантации, затем сушат до постоянной массы. Получают 1,701 г кристаллов магнетита.20.0 ml of octadecene, 1.800 g of iron (III) oleate, 0.570 g of oleic acid and 1.220 g of sodium oleate are introduced into a three-necked flask, placed in an oil bath and equipped with a reflux condenser, high-temperature thermometer and inert gas supply system. Then include heating the oil bath, the contents of the flask are heated to 70 ° C at a rate of 6 ° C / min and kept at this temperature for 30 minutes After that, a nitrogen flow is introduced into the flask; after the contents of the flask are degassed, it is heated from 70 ° C to 320 ° C at a rate of 2 ° C / min with a gradual increase in the tile power. The flask was kept at 320 ° C for 25 minutes, then removed from the oil bath and the contents of the flask were allowed to cool to room temperature, performing these synthesis steps in a nitrogen atmosphere. After 30 minutes, the contents of the flask were poured into a beaker containing 80.0 ml of isopropanol, after which the contents of the beaker were mixed. The precipitated magnetite crystals are separated by magnetic decantation, then they are transferred into a beaker containing 10.0 ml of trioctylamine, 0.284 g of oleic acid and 0.912 g of sodium oleate, and dispersed by stirring. The resulting dispersion is transferred to a previously used three-necked flask. The contents of the flask were purged with nitrogen, the flask was placed in an oil bath and heated to 350 ° C at a rate of 2 ° C / min, after which a solution of 18,000 g of iron (III) oleate in 22.0 ml of trioctylamine was dropwise added thereto over 10 h. Then the flask is removed from the oil bath and cooled to room temperature, carrying out these stages of synthesis in a nitrogen atmosphere. Then the contents of the flask are transferred into a beaker containing 200.0 ml of isopropanol. The precipitated magnetite is separated from the remaining components of the reaction mixture by magnetic decantation, then dried to constant weight. 1.701 g of magnetite crystals are obtained.

345 мг (138 мас. ч.) полученных кристаллов магнетита и 2,5 мг (1 мас. ч.) смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, смешивают вначале с 100 мл (60000 мас. ч.) хлороформа, затем с 200 мл (82240 мас. ч.) N-метил-2-пирролидона, после чего полученную смесь обрабатывают в течение 6 ч ультразвуком мощностью 580 Вт. После этого смесь переносят в круглодонную колбу и хлороформ удаляют с помощью роторного испарителя в вакууме при температуре 40°C. Затем в колбу добавляют 1000 мл воды, содержимое колбы переносят в мешок для диализа с размером пор 25 кДа и проводят диализ дисперсии против воды продолжительностью 24 ч. Получают разбавленную водную дисперсию модифицированных кристаллов магнетита, которую концентрируют до 250 мл путем удаления части воды с использованием роторного испарителя. Затем к 1 мл водной сконцентрированной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита с концентрацией 1,38 мг/мл добавляют 1 мкл раствора в ДМСО флуоресцентного красителя 1,1-диоктадецил-3,3,3,3 тетраметилиндодикарбоцианина с концентрацией 1 мг/мл. Полученный модифицированный магнетит с флуоресцентной меткой отделяют от остальных компонентов смеси методом центрифугирования, отделенный магнетит промывают вначале смесью 1 мл воды и 1 мл ДМСО, затем 1 мл воды.345 mg (138 parts by weight) of the obtained magnetite crystals and 2.5 mg (1 parts by weight) of a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- ( 4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxydedecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn -glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, is first mixed with 100 ml (60,000 parts by weight) of chloroform, then with 200 ml (82240 parts by weight) N -methyl-2-pyrrolidone, after which the resulting mixture was treated for 6 hours with ultrasound power of 580 watts. After this, the mixture was transferred to a round bottom flask and chloroform was removed using a rotary evaporator in vacuo at a temperature of 40 ° C. Then 1000 ml of water are added to the flask, the contents of the flask are transferred to a dialysis bag with a pore size of 25 kDa and the dispersion is dialyzed against water for 24 hours. A diluted aqueous dispersion of modified magnetite crystals is obtained, which is concentrated to 250 ml by removing part of the water using rotary evaporator. Then, to a 1 ml aqueous concentrated dispersion of modified magnetite crystals with a concentration of 1.38 mg / ml is added 1 μl of a solution in DMSO of the fluorescent dye 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3 tetramethylindodicarbocyanine with a concentration of 1 mg / ml. The obtained modified magnetite with a fluorescent label is separated from the other components of the mixture by centrifugation, the separated magnetite is washed first with a mixture of 1 ml of water and 1 ml of DMSO, then 1 ml of water.

Модифицированные кристаллы магнетита хранят в водной среде в закрытой стеклянной емкости при 4°C. В этих условиях продолжительность хранения модифицированных кристаллов магнетита составляет не менее 1 мес.Modified magnetite crystals are stored in an aqueous medium in a closed glass container at 4 ° C. Under these conditions, the storage time of the modified magnetite crystals is at least 1 month.

Методом просвечивающей электронной микроскопии было показано, что полученные кристаллы магнетита имеют кубическую форму со стороной 25 нм. С помощью прибора Вибромагнетометр VSM-250 было показано, что у полученных кристаллов намагниченность насыщения равна 78 А*м2/кг. Скорость r2-релаксивности полученных кристаллов магнетита, определенная методом МРТ-томографии, составляет 310 мМ-1*с-1. С помощью дифрактометра Rigaku Smartlab было выявлено, что положение рентгеновских рефлексов полученных кристаллов соответствует справочным значениям рефлексов магнетита. Методом сканирующей ион-проводящей микроскопии с конфокальной приставкой на клетках клеточной линии гепатоцеллюлярной карциномы человека Hep G2 было показано, что при облучении электромагнитным излучением с длиной волны в области 750 нм клеточной культуры с введенными в нее модифицированными кристаллами магнетита наблюдается флуоресценция в области 782 нм благодаря наличию флуоресцентного красителя, связанного с кристаллами магнетита.Using transmission electron microscopy, it was shown that the obtained magnetite crystals have a cubic shape with a side of 25 nm. Using a VSM-250 vibromagnetometer, it was shown that the saturation magnetization of the obtained crystals was 78 A * m 2 / kg. The r 2 relaxation rate of the obtained magnetite crystals, determined by MRI, is 310 mM -1 * s -1 . Using a Rigaku Smartlab diffractometer, it was found that the position of the X-ray reflections of the obtained crystals corresponds to reference values of magnetite reflections. Using scanning ion-conducting microscopy with a confocal attachment on cells of the Hep G2 cell line of human hepatocellular carcinoma, it was shown that when irradiated with electromagnetic radiation with a wavelength of 750 nm in a cell culture with modified magnetite crystals introduced, fluorescence is observed in the region of 782 nm due to the presence of fluorescent dye associated with crystals of magnetite.

Пример 2Example 2

В трехгорлую колбу, помещенную в масляную баню и снабженную обратным холодильником, высокотемпературным термометром и системой подачи инертного газа, при комнатной температуре вводят 15,0 мл октадецена, 0,900 г олеата железа(III), 0,280 г олеиновой кислоты и 0,610 г олеата натрия. Затем включают нагрев масляной бани, содержимое колбы нагревают до 70°C со скоростью 5°C/мин и выдерживают при этой температуре в течение 30 мин. После чего в колбу подают ток аргона и после дегазации содержимого колбы ее нагревают с 70°C до 320°C со скоростью 5°C/мин, затем содержимое колбы выдерживают при 320°C в течение 30 мин, после чего колбу извлекают из масляной бани и оставляют остывать до комнатной температуры в атмосфере аргона. Через 60 мин содержимое колбы выливают в химический стакан, содержащий 30 мл изопропанола, после чего содержимое стакана перемешивают. Выпавшие в осадок кристаллы магнетита отделяют магнитной декантацией, затем их переносят в химический стакан, содержащий 8,0 мл октадецена, 0,057 г олеиновой кислоты и 0,180 г олеата натрия, и диспергируют путем перемешивания. Полученную дисперсию переносят в ранее использованную трехгорлую колбу. Содержимое колбы продувают аргоном, колбу помещают в масляную баню и нагревают со скоростью 5°C/мин до 318°C, после чего туда в атмосфере аргона по каплям вводят раствор 9,00 г олеата железа(III) в 18 мл октадецена в течение 5 ч. Затем колбу извлекают из масляной бани и охлаждают до комнатной температуры, проводя эти стадии синтеза в атмосфере аргона. После этого содержимое колбы переносят в химический стакан, содержащий 110 мл изопропанола. Выпавший магнетит отделяют от остальных компонентов реакционной смеси методом магнитной декантации, затем сушат до постоянной массы. Получают 0,851 г кристаллов магнетита.15.0 ml of octadecene, 0.900 g of iron (III) oleate, 0.280 g of oleic acid and 0.610 g of sodium oleate are introduced into a three-necked flask, placed in an oil bath and equipped with a reflux condenser, high-temperature thermometer and inert gas supply system. Then include heating the oil bath, the contents of the flask are heated to 70 ° C at a rate of 5 ° C / min and maintained at this temperature for 30 minutes After that, an argon current is supplied to the flask and after degassing the contents of the flask it is heated from 70 ° C to 320 ° C at a speed of 5 ° C / min, then the contents of the flask are kept at 320 ° C for 30 minutes, after which the flask is removed from the oil bath and left to cool to room temperature in an argon atmosphere. After 60 minutes, the contents of the flask were poured into a beaker containing 30 ml of isopropanol, after which the contents of the beaker were mixed. The precipitated crystals of magnetite are separated by magnetic decantation, then they are transferred into a beaker containing 8.0 ml of octadecene, 0.057 g of oleic acid and 0.180 g of sodium oleate, and dispersed by stirring. The resulting dispersion is transferred to a previously used three-necked flask. The contents of the flask are purged with argon, the flask is placed in an oil bath and heated at a rate of 5 ° C / min to 318 ° C, after which a solution of 9.00 g of iron (III) oleate in 18 ml of octadecene is added dropwise thereto over 5 h. Then the flask is removed from the oil bath and cooled to room temperature, carrying out these stages of synthesis in an argon atmosphere. After that, the contents of the flask are transferred into a beaker containing 110 ml of isopropanol. The precipitated magnetite is separated from the remaining components of the reaction mixture by magnetic decantation, then dried to constant weight. 0.851 g of magnetite crystals are obtained.

691 мг (138 мас. ч.) полученных кристаллов магнетита и 5 мг (1 мас. ч.) смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, смешивают вначале с 200 мл (60000 мас. ч.) хлороформа, затем с 400 мл (82240 мас. ч.) N-метил-2-пирролидона, после чего полученную смесь обрабатывают в течение 7 ч ультразвуком мощностью 290 Вт. После этого смесь переносят в круглодонную колбу и хлороформ удаляют с помощью роторного испарителя в вакууме при температуре 43°C. Затем в колбу добавляют 1600 мл воды, содержимое колбы переносят в мешок для диализа с размером пор 50 кДа и проводят диализ дисперсии против воды продолжительностью 48 ч. Получают разбавленную водную дисперсию модифицированных кристаллов магнетита, которую концентрируют до 246 мл путем удаления части воды с использованием роторного испарителя. Затем к 1 мл водной сконцентрированной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита с концентрацией 2,8 мг/мл добавляют 1 мкл раствора в ДМСО флуоресцентного красителя 1,1-диоктадецил-3,3,3,3 тетраметилиндодикарбоцианина с концентрацией 2,5 мг/мл. Полученный модифицированный магнетит с флуоресцентной меткой отделяют от остальных компонентов смеси методом центрифугирования, отделенный магнетит промывают вначале смесью 5 мл воды и 5 мл ДМСО, затем 5 мл воды.691 mg (138 parts by weight) of the obtained magnetite crystals and 5 mg (1 parts by weight) of a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxydedecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero -methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, is first mixed with 200 ml (60,000 parts by weight) of chloroform, then with 400 ml (82240 parts by weight) of N-methyl -2-pyrrolidone, after which the resulting mixture was treated for 7 hours with ultrasound power of 290 watts. After this, the mixture was transferred to a round bottom flask and chloroform was removed using a rotary evaporator in vacuum at a temperature of 43 ° C. Then 1600 ml of water was added to the flask, the contents of the flask were transferred to a dialysis bag with a pore size of 50 kDa and the dispersion was dialyzed against water for 48 hours. A diluted aqueous dispersion of modified magnetite crystals was obtained, which was concentrated to 246 ml by removing part of the water using rotary evaporator. Then, to a ml of an aqueous concentrated dispersion of modified magnetite crystals with a concentration of 2.8 mg / ml, 1 μl of a solution of DMSO fluorescent dye 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3 tetramethylindodicarbocyanine with a concentration of 2.5 mg / ml is added. The obtained modified magnetite with a fluorescent label is separated from the other components of the mixture by centrifugation, the separated magnetite is washed first with a mixture of 5 ml of water and 5 ml of DMSO, then 5 ml of water.

Модифицированные кристаллы магнетита хранят в водной среде в закрытой стеклянной емкости при 4°C. В этих условиях продолжительность хранения модифицированных кристаллов магнетита составляет не менее 1 мес.Modified magnetite crystals are stored in an aqueous medium in a closed glass container at 4 ° C. Under these conditions, the storage time of the modified magnetite crystals is at least 1 month.

Методом просвечивающей электронной микроскопии было показано, что полученные кристаллы магнетита имеют кубическую форму со стороной 23 нм. С помощью прибора Вибромагнетометр VSM-250 было показано, что у полученных кристаллов намагниченность насыщения равна 73 А*м2/кг. Значение скорости r2-релаксивности полученных кристаллов магнетита, определенное методом МРТ-томографии, составляет 293 мМ-1*с-1. С помощью дифрактометра Rigaku Smartlab было выявлено, что положение рентгеновских рефлексов полученных кристаллов соответствует справочным значениям рефлексов магнетита. Методом сканирующей ион-проводящей микроскопии с конфокальной приставкой на клетках клеточной линии гепатоцеллюлярной карциномы человека Hep G2 было показано, что при облучении электромагнитным излучением с длиной волны в области 648 нм клеточной культуры с введенными в нее модифицированными кристаллами магнетита наблюдается флуоресценция в области 668 нм благодаря наличию флуоресцентного красителя, связанного с кристаллами магнетита.Using transmission electron microscopy, it was shown that the obtained magnetite crystals have a cubic shape with a side of 23 nm. Using a VSM-250 vibromagnetometer, it was shown that the saturation magnetization of the obtained crystals is 73 A * m 2 / kg. The value of the r 2 relaxivity rate of the obtained magnetite crystals, determined by MRI, is 293 mm -1 * s -1 . Using a Rigaku Smartlab diffractometer, it was found that the position of the X-ray reflections of the obtained crystals corresponds to reference values of magnetite reflections. Using scanning ion-conducting microscopy with a confocal attachment on cells of the Hep G2 cell line of human hepatocellular carcinoma, it was shown that when irradiated with electromagnetic radiation with a wavelength of 648 nm in a cell culture with modified magnetite crystals introduced, fluorescence is observed in the region of 668 nm due to the presence of fluorescent dye associated with crystals of magnetite.

Пример 3Example 3

В трехгорлую колбу, помещенную в масляную баню и снабженную обратным холодильником, высокотемпературным термометром и системой подачи инертного газа, при комнатной температуре вводят 25,0 мл октадецена, 0,177 г ацетилацетоната железа(III), 0,142 г олеиновой кислоты и 0,456 г олеата натрия. Затем включают нагрев масляной бани, содержимое колбы нагревают до 70°C со скоростью 2°C/мин и выдерживают при этой температуре в течение 30 мин. После чего в колбу подают ток аргона и после дегазации содержимого колбы ее нагревают с 70°C до 320°C со скоростью 4°C/мин, затем колбу выдерживают при 320°C в течение 60 мин, после чего колбу извлекают из масляной бани и содержимое колбы оставляют остывать до комнатной температуры, проводя эти стадии синтеза в атмосфере аргона. Через 120 мин содержимое колбы выливают в химический стакан, содержащий 75,0 мл изопропанола, после чего содержимое стакана перемешивают. Выпавшие в осадок кристаллы магнетита отделяют магнитной декантацией, затем их переносят в химический стакан, содержащий 12,0 мл дибензилового эфира, 0,068 г олеиновой кислоты и 0,219 г олеата натрия, и диспергируют путем перемешивания. Полученную дисперсию переносят в ранее использованную трехгорлую колбу. Содержимое колбы продувают аргоном, колбу помещают в масляную баню и нагревают до 290°C со скоростью 6°C/мин. После чего туда в атмосфере аргона по каплям подают раствор 1,368 г олеата железа(III) в 38,0 мл дибензилового эфира в течение 1 ч, затем колбу извлекают из масляной бани и охлаждают до комнатной температуры, проводя эти стадии синтеза в атмосфере аргона, и содержимое колбы переносят в химический стакан, содержащий 100,0 мл изопропанола. Выпавший магнетит отделяют от остальных компонентов реакционной смеси методом магнитной декантации, затем сушат до постоянной массы. Получают 0,155 г кристаллов магнетита.25.0 ml of octadecene, 0.177 g of iron (III) acetylacetonate, 0.142 g of oleic acid and 0.456 g of sodium oleate are introduced into a three-necked flask, placed in an oil bath and equipped with a reflux condenser, a high-temperature thermometer and an inert gas supply system. Then include heating the oil bath, the contents of the flask are heated to 70 ° C at a rate of 2 ° C / min and kept at this temperature for 30 minutes After that, argon current is supplied to the flask and after degassing the contents of the flask it is heated from 70 ° C to 320 ° C at a speed of 4 ° C / min, then the flask is kept at 320 ° C for 60 minutes, after which the flask is removed from the oil bath and the contents of the flask were allowed to cool to room temperature, carrying out these stages of synthesis in an argon atmosphere. After 120 minutes, the contents of the flask were poured into a beaker containing 75.0 ml of isopropanol, after which the contents of the beaker were mixed. The precipitated crystals of magnetite are separated by magnetic decantation, then they are transferred to a beaker containing 12.0 ml of dibenzyl ether, 0.068 g of oleic acid and 0.219 g of sodium oleate, and dispersed by stirring. The resulting dispersion is transferred to a previously used three-necked flask. The contents of the flask are purged with argon, the flask is placed in an oil bath and heated to 290 ° C at a rate of 6 ° C / min. After that, a solution of 1.368 g of iron (III) oleate in 38.0 ml of dibenzyl ether is added dropwise thereto in an argon atmosphere for 1 h, then the flask is removed from the oil bath and cooled to room temperature, performing these synthesis steps in an argon atmosphere, and the contents of the flask are transferred to a beaker containing 100.0 ml of isopropanol. The precipitated magnetite is separated from the remaining components of the reaction mixture by magnetic decantation, then dried to constant weight. 0.155 g of magnetite crystals are obtained.

138 мг (138 мас. ч.) полученных кристаллов магнетита и 1 мг (1 мас. ч.) смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, смешивают вначале с 40 мл (60000 мас. ч.) хлороформа, затем с 80 мл (82240 мас. ч.) N-метил-2-пирролидона, после чего полученную смесь обрабатывают в течение 0,5 ч ультразвуком мощностью 580 Вт. После этого смесь переносят в круглодонную колбу и хлороформ удаляют с помощью роторного испарителя в вакууме при температуре 35°C. Затем в колбу добавляют 480 мл воды, содержимое колбы переносят в мешок для диализа с размером пор 50 кДа и проводят диализ дисперсии против воды продолжительностью 36 ч. Получают разбавленную водную дисперсию модифицированных кристаллов магнетита, которую концентрируют до 197 мл путем удаления части воды с использованием роторного испарителя. Затем к 1 мл водной сконцентрированной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита с концентрацией 1,38 мг/мл добавляют 1 мкл раствора в ДМСО флуоресцентного красителя 9-(диэтиламино)бензо[а]феноксазин-5-он с концентрацией 5 мг/мл. Полученный модифицированный магнетит с флуоресцентной меткой отделяют от остальных компонентов смеси методом центрифугирования, отделенный магнетит промывают вначале смесью 3 мл воды и 3 мл ДМСО, затем 3 мл воды.138 mg (138 parts by weight) of the obtained magnetite crystals and 1 mg (1 parts by weight) of a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxydedecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero -methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, is first mixed with 40 ml (60,000 parts by weight) of chloroform, then with 80 ml (82,240 parts by weight) of N-methyl -2-pyrrolidone, after which the resulting mixture is treated for 0.5 h with ultrasound power of 580 watts. After this, the mixture was transferred to a round bottom flask and chloroform was removed using a rotary evaporator in vacuum at a temperature of 35 ° C. Then, 480 ml of water is added to the flask, the contents of the flask are transferred to a dialysis bag with a pore size of 50 kDa and the dispersion is dialyzed against water for 36 hours. A diluted aqueous dispersion of modified magnetite crystals is obtained, which is concentrated to 197 ml by removing part of the water using rotary evaporator. Then, 1 μl of a solution in DMSO fluorescent dye 9- (diethylamino) benzo [a] phenoxazin-5-one with a concentration of 5 mg / ml is added to 1 ml of an aqueous concentrated dispersion of modified magnetite crystals with a concentration of 1.38 mg / ml. The obtained modified magnetite with a fluorescent label is separated from the other components of the mixture by centrifugation, the separated magnetite is washed first with a mixture of 3 ml of water and 3 ml of DMSO, then 3 ml of water.

Модифицированные кристаллы магнетита хранят в водной среде в закрытой стеклянной емкости при 4°C. В этих условиях продолжительность хранения модифицированных кристаллов магнетита составляет не менее 1 мес.Modified magnetite crystals are stored in an aqueous medium in a closed glass container at 4 ° C. Under these conditions, the storage time of the modified magnetite crystals is at least 1 month.

Методом просвечивающей электронной микроскопии было показано, что полученные кристаллы магнетита имеют кубическую форму со стороной 27 нм. С помощью прибора Вибромагнетометр VSM-250 было показано, что у полученных кристаллов намагниченность насыщения равна 88 А*м2/кг. Скорость r2-релаксивности полученных кристаллов магнетита, определенная методом МРТ-томографии, составляет 332 мМ-1*с-1. С помощью дифрактометра Rigaku Smartlab было выявлено, что положение рентгеновских рефлексов полученных кристаллов соответствует справочным значениям рефлексов магнетита. Методом сканирующей ион-проводящей микроскопии с конфокальной приставкой на клетках клеточной линии гепатоцеллюлярной карциномы человека Hep G2 было показано, что при облучении электромагнитным излучением с длиной волны в области 550 нм клеточной культуры с введенными в нее модифицированными кристаллами магнетита наблюдается флуоресценция в области 633 нм благодаря наличию флуоресцентного красителя, связанного с кристаллами магнетита.Using transmission electron microscopy, it was shown that the obtained magnetite crystals have a cubic shape with a side of 27 nm. Using a VSM-250 vibromagnetometer, it was shown that the saturation magnetization of the obtained crystals is 88 A * m 2 / kg. The r 2 relaxation rate of the obtained magnetite crystals, determined by MRI, is 332 mM -1 * s -1 . Using a Rigaku Smartlab diffractometer, it was found that the position of the X-ray reflections of the obtained crystals corresponds to reference values of magnetite reflections. Using scanning ion-conducting microscopy with a confocal attachment on cells of the cell line of human hepatocellular carcinoma Hep G2, it was shown that when irradiated with electromagnetic radiation with a wavelength in the region of 550 nm of a cell culture with modified magnetite crystals introduced, fluorescence is observed in the region of 633 nm due to the presence of fluorescent dye associated with crystals of magnetite.

Пример 4 (контрольный, по прототипу)Example 4 (control, prototype)

690 мг (138 мас. ч.) сферических кристаллов магнетита с диаметром 16 нм и 5 мг (1 мас. ч.) смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, смешивают вначале с 200 мл (60000 мас. ч.) хлороформа, затем с 400 мл (82240 мас. ч.) N-метил-2-пирролидона, после чего полученную смесь обрабатывают в течение 5 ч ультразвуком мощностью 290 Вт. После этого смесь переносят в круглодонную колбу и хлороформ удаляют с помощью роторного испарителя в вакууме при температуре 43°C. Затем в колбу добавляют 2000 мл воды, содержимое колбы переносят в мешок для диализа с размером пор 50 кДа и проводят диализ дисперсии против воды продолжительностью 48 ч. Получают разбавленную водную дисперсию модифицированных кристаллов магнетита, которую концентрируют до 500 мл путем удаления части воды с использованием роторного испарителя.690 mg (138 parts by weight) of spherical crystals of magnetite with a diameter of 16 nm and 5 mg (1 part by weight) of a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2 - (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxydedecyl) amino) ethyl) (2-hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl -sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, is first mixed with 200 ml (60,000 parts by weight) of chloroform, then with 400 ml (82,240 parts by weight) ) N-methyl-2-pyrrolidone, after which the resulting mixture was treated for 5 hours with ultrasound power of 290 watts. After this, the mixture was transferred to a round bottom flask and chloroform was removed using a rotary evaporator in vacuum at a temperature of 43 ° C. Then, 2000 ml of water is added to the flask, the contents of the flask are transferred to a dialysis bag with a pore size of 50 kDa and the dispersion is dialyzed against water for 48 hours. A diluted aqueous dispersion of modified magnetite crystals is obtained, which is concentrated to 500 ml by removing part of the water using a rotary evaporator.

С помощью прибора Вибромагнетометр VSM-250 было показано, что у полученных кристаллов намагниченность насыщения равна 35 А*м2/кг. Скорость r2-релаксивности полученных кристаллов магнетита, определенная методом МРТ-томографии, составляет 240 мМ-1*с-1.Using a VSM-250 vibromagnetometer, it was shown that the saturation magnetization of the obtained crystals is 35 A * m 2 / kg. The r 2 relaxation rate of the obtained magnetite crystals, determined by MRI, is 240 mM -1 * s -1 .

Таким образом, из приведенных примеров видно, что предлагаемый способ действительно дает возможность получать модифицированные кристаллы магнетита, обладающие флуоресцентными свойствами и улучшенными магнитными свойствами. Так, намагниченность кристаллов магнетита возрастает в 2,09-2,51 раза, а значение скорости r2-релаксивности увеличивается в 1,22-1,38 раза.Thus, it can be seen from the above examples that the proposed method really makes it possible to obtain modified magnetite crystals having fluorescent properties and improved magnetic properties. So, the magnetization of magnetite crystals increases 2.09-2.51 times, and the value of the r 2 relaxation rate increases 1.22-1.38 times.

Claims (1)

Способ получения модифицированных кристаллов магнетита, включающий смешение 138 мас. ч. кристаллов магнетита и 1 мас. ч. смеси холестерина, 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, 1,1'-(2-(4-(2-((2-(бис(2-гидроксидодецил)амино)этил)(2-гидроксидецил)амино)этил)пиперазин-1-ил)этилазанедиил)дидодекан-2-ола и 1,2-димиристоил-sn-глицеро-метокси(полиэтиленгликоля)-2000, взятых в массовом соотношении 15:7:75:3, соответственно, вначале с 60000 мас. ч. хлороформа, затем с 82240 мас. ч. N-метил-2-пирролидона, обработку смеси ультразвуком в течение 0,5-7,0 ч с мощностью ультразвука 116-580 Вт, удаление хлороформа и добавление в нее воды объемом 400-600% от объема смеси с последующим диализом полученной дисперсии модифицированных кристаллов магнетита против воды в течение 24-48 ч в диализном мешке с размером пор 25-50 кДа, концентрирования водной дисперсии до концентрации 0,7-2,8 мг/мл под вакуумом, при этом в качестве кристаллов используют кристаллы магнетита, полученные путем смешения октадецена с олеатом железа(III) или ацетилацетонатом железа(III) в диапазоне концентраций 0,02-0,10 моль/л, олеиновой кислотой и олеатом натрия в диапазоне концентраций 0,02-0,10 моль/л и 0,06-0,3 моль/л соответственно, нагрева смеси до 70°С и ее выдерживания при этой температуре в течение 30 мин, повторного нагрева смеси в атмосфере инертного газа с 70°С до 320°С со скоростью от 2 до 6°С/мин, ее выдерживания при этой температуре в течение 25-60 мин и охлаждения смеси до комнатной температуры в течение 30-120 мин, проводимыми в атмосфере инертного газа, введения в систему изопропанола объемом 200-400% от объема реакционной смеси, отделения кристаллов магнетита, их диспергирования в неполярном высококипящем органическом растворителе, выбранном из группы, включающей дибензиловый эфир, октадецен и триоктиламин, до достижения концентрации 3,20-15,5 мг/мл по магнетиту в присутствии олеиновой кислоты и олеата натрия с концентрациями в диапазоне 0,02-0,10 моль/л и 0,06-0,30 моль/л соответственно, нагрева полученной дисперсии до температуры 290-350°С в атмосфере инертного газа со скоростью 2-6°С/мин с последующим введением в нагретую дисперсию по каплям раствора олеата железа(III) в неполярном высококипящем органическом растворителе с концентрацией 0,04-0,50 моль/л в течение 1-10 ч и охлаждения дисперсии до комнатной температуры в течение 30-120 мин, проводимыми в атмосфере инертного газа, повторного введения в систему изопропанола и отделения магнетита, а после диализа дисперсию концентрируют, добавляют в нее раствор в диметилсульфоксиде флуоресцентного красителя, выбранного из группы, включающей 1,1-диоктадецил-3,3,3,3 тетраметилиндодикарбоцианин, 1,1-диоктадецил-3,3,3,3-тетраметилиндотрикарбоцианионид и 9-(диэтиламино)бензо[а]феноксазин-5-он, отделяют модифицированный магнетит методом центрифугирования, затем его промывают смесью воды и диметилсульфоксида, потом водой.A method of obtaining modified crystals of magnetite, comprising mixing 138 wt. including crystals of magnetite and 1 wt. including a mixture of cholesterol, 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, 1,1 '- (2- (4- (2 - ((2- (bis (2-hydroxy-dodecyl) amino) ethyl) (2 -hydroxydecyl) amino) ethyl) piperazin-1-yl) ethylazanediyl) didodecan-2-ol and 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-methoxy (polyethylene glycol) -2000, taken in a mass ratio of 15: 7: 75: 3, respectively, initially with 60,000 wt. including chloroform, then with 82240 wt. including N-methyl-2-pyrrolidone, sonication of the mixture for 0.5-7.0 hours with an ultrasonic power of 116-580 W, removal of chloroform and the addition of water with a volume of 400-600% of the volume of the mixture, followed by dialysis of the resulting dispersion of modified magnetite crystals against water for 24-48 hours in a dialysis bag with a pore size of 25-50 kDa, concentrating the aqueous dispersion to a concentration of 0.7-2.8 mg / ml under vacuum, while magnetite crystals are used as crystals, obtained by mixing octadecene with iron (III) oleate or acetylacetonate iron (III) in the concentration range of 0.02-0.10 mol / L, oleic acid and sodium oleate in the concentration range of 0.02-0.10 mol / L and 0.06-0.3 mol / L, respectively, heating mixture to 70 ° C and keeping it at this temperature for 30 minutes, re-heating the mixture in an inert gas atmosphere from 70 ° C to 320 ° C at a speed of 2 to 6 ° C / min, keeping it at this temperature for 25 -60 min and cooling the mixture to room temperature for 30-120 min, carried out in an inert gas atmosphere, introducing into the system isopropanol with a volume of 200-400% of the reaction volume mixtures, separation of magnetite crystals, their dispersion in a non-polar high-boiling organic solvent selected from the group consisting of dibenzyl ether, octadecene and trioctylamine, to achieve a concentration of 3.20-15.5 mg / ml of magnetite in the presence of oleic acid and sodium oleate with concentrations in the range of 0.02-0.10 mol / L and 0.06-0.30 mol / L, respectively, heating the resulting dispersion to a temperature of 290-350 ° C in an inert atmosphere with a speed of 2-6 ° C / min, followed by the introduction of a solution of iron oleate (III ) in a non-polar high-boiling organic solvent with a concentration of 0.04-0.50 mol / l for 1-10 hours and cooling the dispersion to room temperature for 30-120 minutes, carried out in an inert gas atmosphere, re-introducing isopropanol into the system and separating magnetite, and after dialysis, the dispersion is concentrated, a solution in dimethyl sulfoxide of a fluorescent dye selected from the group consisting of 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3 tetramethylindodicarbocyanine, 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3 Tetramethylindotricarbocyanionide and 9- (diethylamino) benz [A] phenoxazine-5-one, modified magnetite was separated by centrifugation, and then it is washed with a mixture of water and dimethylsulfoxide, and then water.
RU2017146340A 2017-12-27 2017-12-27 Method for producing modified crystals of magnetite RU2656667C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017146340A RU2656667C1 (en) 2017-12-27 2017-12-27 Method for producing modified crystals of magnetite

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2017146340A RU2656667C1 (en) 2017-12-27 2017-12-27 Method for producing modified crystals of magnetite

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2656667C1 true RU2656667C1 (en) 2018-06-06

Family

ID=62560479

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017146340A RU2656667C1 (en) 2017-12-27 2017-12-27 Method for producing modified crystals of magnetite

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2656667C1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2689392C1 (en) * 2018-12-27 2019-05-28 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС" Method of producing modified magnetite crystals
CN110385427A (en) * 2019-07-31 2019-10-29 东南大学 A kind of water soluble nanometer particles and its preparation method and application
RU2704998C1 (en) * 2018-12-27 2019-11-01 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС" Method of reversible inhibition in tumor cells of hepatocellular carcinoma of gene expression coding synthesis of apolipoprotein b

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GONZALEZ, M. et al. Synthesis of magnetoliposomes with monodisperse iron oxide nanocrystal cores for hyperthermia, "Journal of Magnetism and Magnetic Materials", 2005, 293(1), 265-270. *
SHAN JIANG et al. Lipidoid-coated iron oxide nanoparticles for efficient DNA and siRNA delivery, "Nano letters", 2013, 13(3), 1059-1064. *
SHAN JIANG et al. Lipidoid-coated iron oxide nanoparticles for efficient DNA and siRNA delivery, "Nano letters", 2013, 13(3), 1059-1064. GONZALEZ, M. et al. Synthesis of magnetoliposomes with monodisperse iron oxide nanocrystal cores for hyperthermia, "Journal of Magnetism and Magnetic Materials", 2005, 293(1), 265-270. YOSHIHISA NAMIKI et al. A novel magnetic crystal-lipid nanostructure for magnetically guided in vivo gene delivery, "Nature Nanotechnology", 2009, vol. 4, p.p. 598-606. *
YOSHIHISA NAMIKI et al. A novel magnetic crystal-lipid nanostructure for magnetically guided in vivo gene delivery, "Nature Nanotechnology", 2009, vol. 4, p.p. 598-606. *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2689392C1 (en) * 2018-12-27 2019-05-28 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС" Method of producing modified magnetite crystals
RU2704998C1 (en) * 2018-12-27 2019-11-01 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Национальный исследовательский технологический университет "МИСиС" Method of reversible inhibition in tumor cells of hepatocellular carcinoma of gene expression coding synthesis of apolipoprotein b
CN110385427A (en) * 2019-07-31 2019-10-29 东南大学 A kind of water soluble nanometer particles and its preparation method and application
CN110385427B (en) * 2019-07-31 2021-10-19 东南大学 Water-soluble nano particle and preparation method and application thereof

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Soares et al. Iron oxide nanoparticles stabilized with a bilayer of oleic acid for magnetic hyperthermia and MRI applications
RU2656667C1 (en) Method for producing modified crystals of magnetite
Wang et al. Bacterial species-identifiable magnetic nanosystems for early sepsis diagnosis and extracorporeal photodynamic blood disinfection
Sokolova et al. Functionalisation of calcium phosphate nanoparticles by oligonucleotides and their application for gene silencing
JP2020526558A (en) Common and direct methods for preparing oligonucleotide functionalized metal-organic framework nanoparticles
Yu et al. Poly (N-isopropylacrylamide)-gated Fe3O4/SiO2 core shell nanoparticles with expanded mesoporous structures for the temperature triggered release of lysozyme
Wang et al. Gadolinium embedded iron oxide nanoclusters as T 1–T 2 dual-modal MRI-visible vectors for safe and efficient siRNA delivery
De Lázaro et al. Graphene oxide as a 2D platform for complexation and intracellular delivery of siRNA
WO2014057432A9 (en) Multicomponent lipid nanoparticles and processes for the preparation thereof
Cheung-Lau et al. Engineering a well-ordered, functional protein-gold nanoparticle assembly
Cheng et al. Preparation and biological characterization of hollow magnetic Fe 3 O 4@ C nanoparticles as drug carriers with high drug loading capability, pH-control drug release and MRI properties
Yang et al. Role of surface charge in cytotoxicity of charged manganese ferrite nanoparticles towards macrophages
JP2018521975A (en) Nonpyrogenic preparations containing nanoparticles synthesized by magnetotactic bacteria for medical or cosmetic applications
CN109111575B (en) Preparation method and application of metal-organic framework nano-particles
Shubhra et al. Rapid one-pot fabrication of magnetic calcium phosphate nanoparticles immobilizing DNA and iron oxide nanocrystals using injection solutions for magnetofection and magnetic targeting
Ahsan et al. Smart magnetically engineering colloids and biothin films for diagnostics applications
Zhang et al. A new drug carrier with oxygen generation function for modulating tumor hypoxia microenvironment in cancer chemotherapy
Chen et al. Hydrophobically modified carbon dots as a multifunctional platform for serum-resistant gene delivery and cell imaging
Halouane et al. Selective isolation and eradication of E. coli associated with urinary tract infections using anti-fimbrial modified magnetic reduced graphene oxide nanoheaters
CN105126716A (en) Method for preparing sulfydryl modified ferroferric oxide/silicon dioxide magnetic nanoparticles
WO2022257855A1 (en) H-bn/mos2 nanoprobe capable of achieving targeted photothermal and chemical synergistic therapy, preparation method therefor, and application thereof
RU2689392C1 (en) Method of producing modified magnetite crystals
CN115554992B (en) Polymer modified magnetic nano material, preparation method and application thereof
Mieloch et al. The influence of ligand charge and length on the assembly of Brome mosaic virus derived virus-like particles with magnetic core
Lian et al. Synthesis of highly stable cyanine-dye-doped silica nanoparticle for biological applications

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20190408

Effective date: 20190408