RU2651778C2 - Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока - Google Patents
Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока Download PDFInfo
- Publication number
- RU2651778C2 RU2651778C2 RU2015139735A RU2015139735A RU2651778C2 RU 2651778 C2 RU2651778 C2 RU 2651778C2 RU 2015139735 A RU2015139735 A RU 2015139735A RU 2015139735 A RU2015139735 A RU 2015139735A RU 2651778 C2 RU2651778 C2 RU 2651778C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hemorrhagic shock
- serping1
- tranexamic acid
- rhserping1
- solution
- Prior art date
Links
- 208000032456 Hemorrhagic Shock Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 206010049771 Shock haemorrhagic Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 title 1
- 229960000401 tranexamic acid Drugs 0.000 claims abstract description 89
- GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N tranexamic acid Chemical compound NC[C@H]1CC[C@H](C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-LJGSYFOKSA-N 0.000 claims abstract description 72
- 108700040183 Complement C1 Inhibitor Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 101150097162 SERPING1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims abstract description 15
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 7
- 102000017529 Serpin domains Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108050005787 Serpin domains Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102100027637 Plasma protease C1 inhibitor Human genes 0.000 claims abstract 4
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003147 reserpine Drugs 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 21
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 73
- 102000055157 Complement C1 Inhibitor Human genes 0.000 description 53
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 33
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 28
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 27
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 24
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 23
- 229960003375 aminomethylbenzoic acid Drugs 0.000 description 23
- QCTBMLYLENLHLA-UHFFFAOYSA-N aminomethylbenzoic acid Chemical compound NCC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 QCTBMLYLENLHLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 21
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 21
- GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N Tranexamic acid Chemical compound NCC1CCC(C(O)=O)CC1 GYDJEQRTZSCIOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000001567 anti-fibrinolytic effect Effects 0.000 description 18
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 18
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 16
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 15
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 108050006955 Tissue-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 13
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 12
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 10
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 10
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 10
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 10
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 10
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 10
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 10
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 9
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 9
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 9
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 8
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 8
- 101001081555 Homo sapiens Plasma protease C1 inhibitor Proteins 0.000 description 8
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 8
- 102000044507 human SERPING1 Human genes 0.000 description 8
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 8
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 8
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 8
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 7
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 7
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 7
- 230000034994 death Effects 0.000 description 7
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 6
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 6
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229940009550 c1 esterase inhibitor Drugs 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 5
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 5
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- -1 oxygen radicals Chemical class 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 4
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 3
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 3
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 3
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 3
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 3
- 230000008822 capillary blood flow Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 3
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 3
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 3
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N Ala-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 208000028185 Angioedema Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 2
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 2
- 102100021935 C-C motif chemokine 26 Human genes 0.000 description 2
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 2
- 108010028774 Complement C1 Proteins 0.000 description 2
- 102100025406 Complement C1s subcomponent Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010080805 Factor XIa Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000897493 Homo sapiens C-C motif chemokine 26 Proteins 0.000 description 2
- 206010058558 Hypoperfusion Diseases 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 description 2
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 206010053476 Traumatic haemorrhage Diseases 0.000 description 2
- VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N Val-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VPGCVZRRBYOGCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 2
- 239000000504 antifibrinolytic agent Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940075791 berinert Drugs 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 230000004856 capillary permeability Effects 0.000 description 2
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 2
- DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N diclofenac Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1NC1=C(Cl)C=CC=C1Cl DCOPUUMXTXDBNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001259 diclofenac Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 2
- 229940028467 lysteda Drugs 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008383 multiple organ dysfunction Effects 0.000 description 2
- 230000018341 negative regulation of fibrinolysis Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- WSHJJCPTKWSMRR-RXMQYKEDSA-N penam Chemical compound S1CCN2C(=O)C[C@H]21 WSHJJCPTKWSMRR-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- CLTMYNWFSDZKKI-UHFFFAOYSA-N 2-(aminomethyl)benzoic acid Chemical class NCC1=CC=CC=C1C(O)=O CLTMYNWFSDZKKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010444 Acidosis Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010070545 Bacterial translocation Diseases 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 description 1
- 206010017982 Gastrointestinal necrosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010062713 Haemorrhagic diathesis Diseases 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019860 Hereditary angioedema Diseases 0.000 description 1
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010021137 Hypovolaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 201000008197 Laryngitis Diseases 0.000 description 1
- 102100026061 Mannan-binding lectin serine protease 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710117390 Mannan-binding lectin serine protease 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100026046 Mannan-binding lectin serine protease 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710117460 Mannan-binding lectin serine protease 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010027417 Metabolic acidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 102100034869 Plasma kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 208000018525 Postpartum Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010039203 Road traffic accident Diseases 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 1
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102000003141 Tachykinin Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003501 anti-edematous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940082620 antifibrinolytics Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000007375 bacterial translocation Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 208000030304 gastrointestinal bleeding Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 208000006750 hematuria Diseases 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003960 inflammatory cascade Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000005027 intestinal barrier Anatomy 0.000 description 1
- 230000007358 intestinal barrier function Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000004789 organ system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 230000033885 plasminogen activation Effects 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 238000011471 prostatectomy Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000037974 severe injury Diseases 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 108060008037 tachykinin Proteins 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 206010044008 tonsillitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000029534 trypsinogen activation Effects 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и касается способа лечения геморрагического шока или массивной кровопотери у млекопитающих, который включает введение млекопитающему транексамовой кислоты в количестве от 0,005 до 0,5 г/кг массы тела в комбинации с рекомбинантным полноразмерным SERPING1 или его серпиновым доменом в количестве от 10 до 900 ME/кг массы тела. Изобретение обеспечивает значительное снижение смертности от геморрагического шока или массивной кровопотери. 5 з.п. ф-лы, 8 пр., 10 ил., 4 табл.
Description
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к лечению геморрагического шока и кровотечений с использованием комбинации антифибринолитика, выбранного из группы, включающей транексамовую, аминометилбензойную или ε-аминокапроновую кислоты, и полипептида, обладающего активностью SERPING1.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Тяжелые травмы являются одной из проблем здравоохранения. По статистике ВОЗ ежегодно в мире тяжелую травму получает 10 млн. человек, 250 тыс. из них погибает от шока («ВОЗ | Дорожно-транспортные травмы», WHO. [Online]. http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs358/ru). Основной причиной смерти таких пациентов является неконтролируемое посттравматическое кровотечение («Интенсивная терапия», №6,2014 г, стр. 5). Уровень травматизма в РФ составляет 8730,3 случаев на 100 тыс. взрослого населения. При этом 80% смертей от травм на дорогах связаны с неоказанием помощи в течение первого часа («Травмы, первая медицинская помощь при травмах, виды травматизма, последствия травм». [Online], http://www.medicinform.net/medhelp/medhelp6.htm).
Геморрагический шок наступает, когда острая кровопотеря превышает примерно 20% от нормального объема крови. Главной особенностью геморрагического шока является уменьшение объема циркулирующей крови, что приводит к гипоперфузии основных систем органов. Гипоперфузия приводит к недостатку питательных веществ и вызывает локальную ишемию тканей, что ведет к прогрессирующему повреждению многих органов и их последующей дисфункции. (Keith 1986). При реанимации путем замещения внутрисосудистого объема кровью или физиологическими растворами, происходит дальнейшее повреждение, вызванное реперфузией (Keith 1986).
Коагулопатия, ассоциированная с травмой и геморрагическим шоком, диагностируется у одной трети пациентов с травматическими кровотечениями при поступлении в лечебные учреждения. Травмированные пациенты с коагулопатией имеют значительно более высокую смертность в сравнении с пациентами с похожими травмами без коагулопатии. При травме и индуцированной геморрагическим шоком коагулопатии, в ходе реанимационных предприятий, как правило, применяется инфузионно-трансфузионная терапия. Однако наиболее эффективные меры, такие как протокол 1:1:1, который представляет собой комбинацию эритроцитарной массы, свежезамороженной плазмы крови и тромбоцитов, доступен только в стационарных пунктах квалифицированной медицинской помощи, таких как больницы. Кроме того, применение протокола 1:1:1 ограничивается сроком хранения отдельных компонентов. Рекомендуемый срок хранения эритроцитарной массы составляет 8 дней, а тромбоцитов - 5 дней. Более эффективной является трансфузия теплой свежей донорской крови, однако ее доступность еще более ограничена. (Vymazal 2015). Между тем, при лечении геморрагического шока чрезвычайно важно предпринять терапевтические меры как можно скорее, как правило, не позднее чем через 3 часа после начала массивного кровотечения. Во многих обстоятельствах, таких как дорожно-транспортные происшествия или ранения в ходе боевых действий, квалифицированная медицинская помощь доступна слишком поздно для эффективного лечения геморрагического шока. Поэтому для неотложной медицинской помощи, в машинах скорой помощи или пунктах сбора раненых необходимо наличие эффективного терапевтического средства для лечения геморрагического шока и вызванной травмой коагулопатии.
Во время геморрагического шока и реанимации также сильно повреждается желудочно-кишечный тракт. Происходит некроз кишечника и наблюдаются последующая бактериальная транслокация с выбросом эндотоксинов (Tamion, Richard et al., 1997). Это, как правило, приводит к значительному увеличению уровня воспалительных цитокинов, которые могут усилить полиорганную дисфункцию.
Поэтому существует потребность в создании терапевтического средства, которое не только позволяет эффективно лечить геморрагический шок, но и противодействует таким угрожающим жизни проявлениям геморрагического шока, как коагулопатия и секреция воспалительных цитокинов, проницаемость эпителия кишечника для бактерий и бактериальных эндотоксинов, снижает общую смертность после значительных кровотечений, и при этом может применяться при лечении геморрагического шока в полевых условиях.
SERPING1, также известный как ингибитор эстеразы С1 или С1-ингибитор, является членом семейства ингибиторов сериновых протеаз, серпинов. Посредством ингибирования C1s и C1r, субкомпонентов комплекса С1 классического пути активации (Arlaud, Reboul, Sim & Colomb, 1979; Nilsson, Sjoholm & Wiman, 1983; Nilsson & Wiman, 1983; RatnoffSchena et al., 1980; 1969; Sim, Arlaud & Colomb, 1980), SERPING1 играет ключевую роль в регуляции активности системы комплемента. SERPING1 также регулирует кинин-калликриеновую систему, ингибирует калликреин, фактор XIa и фактор XIIa (Aasen, Erichsen, Gallimore & Amundsen, 1980; Cullmann, Kovary, Dick, Czarnetzki & Echternach-Happle, 1982; Harpel & Cooper, 1975; Harpel, 1970; Ratnoff, 1969; Revak & Cochrane, 1976; Schapira, Scott & Colman, 1981; van der Graaf, Koedam & Bouma, 1983). SERPING1 опосредованно предотвращает активацию плазминогена через ингибирование калликреина и фактора XIIa, а также напрямую ингибирует плазмин в крови (Beattie, Ogston, Bennett, & Douglas, 1976; Haselager, Goote & Vreeken, 1976), что, в свою очередь, снижает фибринолиз (Travis & Salvesen, 1983), который является ключевой особенностью поздней стадии коагулопатии при тяжелом, жизнеугрожающем геморрагическом шоке. Опосредованное SERPING1 ингибирование калликреина, в свою очередь, снижает концентрацию в плазме брадикинина, вазоактивного пептида, который увеличивает проницаемость капилляров и экстравазацию плазмы. Действуя таким образом, SERPING1 противодействует эдеме и уменьшает отек, а также снижает индуцированную геморрагическим шоком проницаемость эндотелиальной ткани (Cheng et al., 2008; Schmidt, Stenzel, Gebhard, Martin & Schmidt, 1999). В противном случае, проницаемость эндотелия часто приводит к повреждению тканей и сепсису.
В модели контролируемой кровопотери у свиней, SERPING1 существенно снижал повреждения тканей почек, кишечника и легких в дозозависимой манере (100 и 250 МЕ/кг). Кроме того, rhSERPING1 в дозе 250 МЕ/кг заметно снизил метаболический ацидоз и уровень циркулирующего TNF-α (Dalle Lucca, Li et al., 2012).
Указанные свойства С1-эстеразного ингибитора свидетельствуют о возможности его использования в заместительной терапии при ангионевротических отеках, для профилактики и лечения сепсиса, в том числе септического шока, для профилактики и лечения полиорганной дисфункции, синдрома повышенной проницаемости капилляров при сепсисе и септическом шоке, для профилактики и лечения острого респираторного дистресс-синдрома, для адъювантной терапии при атеросклеротическом поражении сосудов, для профилактики и лечения ишемического инсульта и его осложнений, острого нарушения мозгового кровообращения, профилактики и лечения шоковых состояний в операционном и послеоперационном периодах при аортокоронарном шунтировании, для предупреждения и лечения шоковых состояний при проведении транслюминальной ангиопластики, для профилактики и лечения синдрома реперфузии после аортокоронарного шунтирования и транслюминальной ангиопластики в комбинации с прямыми антикоагулянтами, для профилактики и лечения реакции отторжения при трансплантации органов и тканей (в том числе - костного мозга), для лечения или предупреждения системных ревматологических заболеваний, протекающих с активацией комплемента (системная красная волчанка, системная склеродеромия, дерматомиозит, ревматоидный артрит и т.д.), для профилактики и лечения осложнений у больных с травматологическими повреждениями различной локализации, для адъювантной терапии любых состояний, в том числе - новообразований, протекающих с активацией системы комплемента (Davis, Cai et al., 2007, Liu, Lu et al., 2007, Davis, Mejia et al., 2008, Davis, Lu et al., 2010, Vo, Zeevi et al., 2015).
Коммерчески доступные препараты Беринерт и Синрайз, на основе ингибитора С1-эстеразы выделенного из человеческой плазмы крови, одобрены для лечения ангионевротического отека.
Производство SERPING1 может быть осуществлено различными способами. Получение pdSERPING1 (плазменного SERPING1) путем последовательной очистки из плазмы крови человека подробно описано, например, в международной заявке WO 2001046219 или патенте RU 2256464. Также описано производство рекомбинантного человеческого SERPING1 (rhSERPING1) из молока трансгенных животных (van Veen, Koiter et al., 2012) (патент US 7067713). Кроме того, rhSERPING1 может быть произведен в различных хозяевах в культуре эукариотических клеток (как описано, например, в WO 2011116291) или в прокариотах, с использованием общепринятых в настоящее время методов генетической инженерии. При этом С1-ингибитор может быть использован как в нативной форме, так и в виде активного фрагмента, полученного рекомбинантным или иным способом и сохраняющего функциональные способности, а также в виде мутантных форм, например, таких, как предложены в WO 2010002453.
В качестве антифибринолитических средств, применяемых при кровотечениях, в настоящее время используются три препарата, обладающих общими функциональными особенностями и механизмом действия. Это транексамовая, ε-аминокапроновая и аминометилбензойная кислоты.
Транексамовая кислота является синтетическим производным аминокислоты лизина и обладает антифибринолитической активностью вследствие обратимого связывания с плазминогеном, предотвращая его взаимодействие с фибрином и, таким образом, препятствует лизису фибринового сгустка. Лизиновые аминокислотные остатки белковой молекулы фибрина опосредуют связывание фибрина с лизин-связывающими сайтами молекулы плазминогена (Ferring Pharmaceuticals Inc. Lysteda (tranexamic acid) tablets: US prescribing information [online]. Available from URL: http://lvsteda.com/assets/pdf/PI_FERRING2010.pdf [Accessed 2012 Feb. 23], (Dunn and Goa 1999)). Транексамовая кислота связывается с высокой аффинностью (константа диссоциации [Kd]=1.1 ммоль/л) с одним из лизинсвязывающих сайтов плазминогена и с низкой аффинностью ([Kd]=1.1 ммоль/л) с другими 4 или 5 сайтами (Ferring Pharmaceuticals Inc. Lysteda (tranexamic acid) tablets: US prescribing information [online]. Available from URL: http://lvsteda.com/assets/pdf/PI_FERRING2010.pdf [Accessed 2012 Feb 23]).
Транексамовая кислота практически полностью блокирует связывание плазминогена или тяжелой цепи плазмина с фибрином, в основном путем связывания с высокоаффинным лизинсвязывающим сайтом плазминогена. Несмотря на то, в присутствие активатора плазминогена, такого как тканевый активатор плазминогена, плазминоген все еще может быть конвертирован в плазмин, после связывания с транексамовой кислотой он не может взаимодействовать и разрушать фибрин (Dunn and Goa 1999). Транексамовая кислота также блокирует связывание α2-антиплазмина с плазмином и его инактивацию плазмина. Кроме ингибирования плазмина, транексамовая кислота также конкурентно ингибирует активацию трипсиногена энтерокиназой, неконкуретно ингибирует трипсин и слабо ингибирует тромбин (Dunn and Goa 1999).
По результатам различных фибринолитических тестов сила связывания транексамовой кислоты с плазминогеном примерно в 6-10 раз больше, чем у другого синтетического производного лизина, ε-аминокапроновой кислоты, также являющейся антифибринолитическим препаратом (Dunn and Goa 1999). Лизинсвязывающие сайты плазминогена находятся в разных, так называемых доменах kringle, которые являются областью полипептидной цепи, состоящих из бета-структур, которые стабилизируются тремя дисульфидными связями. Как транексамовая, так и ε-аминокапроновая кислоты взаимодействуют с низкоаффинным лизинсвязывающим сайтом пятого домена kringle, который, по всей видимости, нужен для начальной ассоциации плазминогена с фибрином (Dunn and Goa, 1999). Высокоаффинный лизинсвязывающий первый домен kringle необходим для связывания карбокси-концевого лизинового остатка, который присутствует в фибрине только после его частичного гидролиза (Anonick, Vasudevan et al., 1992).
Аминометилбензойная кислота («Амбен») по механизму действия близка к ε-аминокапроновой кислоте; угнетает фибринолиз путем конкурентного торможения плазминогенактивирующего фермента и угнетения образования плазмина (Реестр лекарственных средств РФ http://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_342.htm, (Langenbach, 2006)). По сравнению сеаминокапроновой кислотой аминометилбензойная кислота более активна, но в два раза менее активна, чем транексамовая кислота (DOBROKHOTOVA, DZHOBAVA et al., 2013) (Verstraete, 1985).
Таким образом, все три препарата оказывают сходное фармакологическое действие, являются синтетическими аналогами аминокислот, действуют по одному механизму, насыщая лизинсвязывающие сайты плазминогена, и имеют общие показания к применению и пути элиминации. Общим недостатком указанных препаратов является возможность появления тромбозов и тромбоэмболических заболеваний при их применении.
Наиболее эффективным средством лечения геморрагического шока для применения в условиях, когда стационарные медицинские учреждения недоступны, в настоящее время является транексамовая кислота.
Транексамовая кислота значительно снижает общую смертность и смерть из-за кровотечения у пациентов с сильными кровотечениями, вызванными травмами, особенно при введении в ранние сроки после травмы (collaborators, Shakur et al. 2010, collaborators, Roberts et al. 2011, Ker, Kiriya et al. 2012, Roberts, Prieto-Merino et al. 2014). Транексамовая кислота в настоящее время используется как препарат выбора военными медиками в США и Великобритании для лечения тяжелых боевых травм и кровотечений.
В США FDA (US Food and Drug Administration) транексамовая кислота также одобрена для перорального введения женщинам с тяжелыми менструальными кровотечениями и внутривенно для профилактики стоматологических кровотечений у пациентов с гемофилией. Однако транексамовая кислота часто используется не по прямому назначению, чтобы уменьшить кровотечение, вызванное различными причинами, в том числе травмой и хирургическими вмешательствами.
В РФ применение транексамовой кислоты одобрено по следующим показаниям: кровотечения или риск кровотечений на фоне усиления фибринолиза (злокачественные новообразования поджелудочной и предстательной желез, операции на органах грудной клетки, послеродовые кровотечения, ручное отделение последа, лейкоз, заболевания печени, предшествующая терапия стрептокиназой - случаи генерализованного фибринолиза; маточные, носовые, желудочно-кишечные кровотечения, гематурия, кровотечения после простатэктомии, конизации шейки матки по поводу карциномы, экстракции зуба у больных с геморрагическим диатезом - случаи местного фибринолиза), наследственный ангионевротический отек, аллергические заболевания (экзема, аллергические дерматиты, крапивница, лекарственная и токсическая сыпь), воспалительные заболевания (тонзиллит, фарингит, ларингит, стоматит, афты слизистой оболочки полости рта) (http://medi.ru/doc/x0937.htm).
Крупное рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое, многонациональное клиническое испытание CRASH-2 (Clinical Randomization of an Antifibrinolytic in Significant Hemorrhage 2 - клиническая рандомизации антифибринолитка при значительном кровотечении) оценивало эффективность раннего использования транексамовой кислоты на взрослых пациентах с травмой (collaborators, Shakur et al., 2010). Исходя из результатов данного исследования транексамовая кислота существенно снижала смертность по всем причинам в течение 4 недель (первичная конечная точка испытания) и риск смерти вследствие кровотечения. Смертность по всем причинам в группе плацебо составляла 16%, тогда как в группе с применением транексамовой кислоты - 14,5%. Смертность в результате кровотечения в группе плацебо составляла 5,7%, а в группе с применением транексамовой кислоты - 4,9%.
Вторичный анализ CRASH-2 (Roberts, Prieto-Merino et al., 2014), сфокусированный на механизме действия транексамовой кислоты у пациентов с кровотечением, позволил сделать заключение о том, что наибольший эффект транексамовая кислота оказывает на снижение смертности в первый день после травмы. Транексамовая кислота, будучи примененной в первые 3 ч после травмы, снижает общую смертность в первый день и увеличивает последующее выживание на 20%.
Тем не менее, несмотря на значительное количество проведенных исследований, до сих пор никто не изучал применение транексамовой кислоты в комбинации с С1-ингибитором.
К недостаткам известных средств относится недостаточное снижение смертности, нежелательные побочные эффекты, вызванные реперфузией при применении стандартной инфузионно-трансфузионной терапии, характеризующиеся ранней активацией нейтрофилов и формированием свободных радикалов (Ioannou, Dalle Lucca et al., 2011). Секреция протеолитических ферментов, продуцируемых нейтрофилами, может приводить к дальнейшему повреждению тканей. Более того, образующиеся кислородные радикалы играют существенную роль в повреждении эндотелия после реперфузии и могут приводить к удлинению периода лечения раны. Широкое применение SERPING1, полученного из плазмы крови человека, осложняется его высокой стоимостью.
Таким образом, сохраняется потребность в эффективных средствах лечения геморрагического шока и сопровождающих его явлений. В настоящее время отсутствует разработанный метод, включающий в себя совместное применение антифибринолитика, выбранного из группы, включающей транексамовую, аминометилбензойную или ε-аминокапроновую кислоты, и полипептида, обладающего активностью SERPING1, для терапии геморрагического шока. Насколько известно авторам изобретения, не опубликовано ни одного примера, доказывающих повышенную эффективность подобной комбинации или просто показывающих совместное использование антифибринолитика из группы аминокислот и SERPING1 для терапии геморрагического шока.
Техническим результатом настоящего изобретения является расширение арсенала средств для лечения геморрагического шока посредством создания комбинации, включающей терапевтически эффективные количества полипептида, обладающего активностью SERPING1 и антифибринолитика, выбранного из группы, включающей транексамовую, аминометилбензойную или ε-аминокапроновую кислоты или их аналоги.
Указанная комбинация также позволяет предотвратить развитие или снизить остроту таких нежелательных явлений, непосредственно связанных с геморрагическим шоком, как коагулопатия, воспаление, отек, повреждение тканей, в частности эпителия кишечника, и связанную с этим транслокацию бактерий и бактериальных эндотоксинов. Заявленный способ позволяет проводить лечение геморрагического шока и сильных кровотечений в экстренных ситуациях и условиях, когда пациент не может быть доставлен в стационарное лечебное учреждение, то есть когда доступна только инфузионная терапия на основе кристаллоидов, коллоидов и другие инъекционные медикаменты, но не переливание донорской крови или комбинации эритроцитарной массы, свежезамороженной плазмы крови и тромбоцитов в условиях высококвалифицированной медицинской помощи.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Заявители впервые обнаружили, что комбинированное применение полипептида, обладающего активностью SERPING1 и антифибринолитика, выбранного из группы, включающей транексамовую, аминометилбензойную или ε-аминокапроновую кислоты или их аналоги, обеспечивает синергетический эффект, за счет которого улучшается выживаемость млекопитающих в условиях геморрагического шока.
В настоящем изобретении предложена комбинация, состоящая из терапевтически эффективных количеств полипептида, обладающего активностью SERPING1 и антифибринолитика, выбранного из группы, включающей транексамовую, аминометилбензойную или ε-аминокапроновую кислоты или их аналогов, применение данной комбинации для лечения геморрагического шока, а также способы лечения геморрагического шока с использованием данной комбинации и наборы для лечения, содержащие указанную комбинацию.
В соответствии с представленным изобретением, термин «полипептид, обладающий активностью SEPRING1» (далее SEPRING1 или C1INH) относится к белкам или их фрагментам, функционирующим как ингибиторы сериновых протеаз и ингибирующих протеазы, связанные с системой комплемента, предпочтительно протеазы C1r и C1s, а также протеазы MASP-1 и MASP-2, связанные с калликреин-кининовой системой, предпочтительно плазменный калликреин и фактор XIIa, и протеазы, связанные системой свертывания крови, предпочтительно фактор XIa. В настоящем изобретении «полипептид, обладающий активностью SEPRING1», может представлять собой С1-ингибитор как в нативной форме, так и в виде функционально активного фрагмента, или полипептида, содержащего мутации, и при этом сохраняющего функциональную активность.
В соответствии с представленным изобретением, в одном из вариантов SEPRING1 может быть модифицирован для улучшения биодоступности и/или периода полувыведения, для улучшения эффективности и/или снижения потенциальных побочных эффектов. Такие модификации могут быть выполнены рекомбинантным способом, химическим конъюгированием или другими известными специалисту в данной области способами. Примерами подобных модификаций могут быть гликозилирование, гибридный (химерный) белок, где С1-ингибитор слит с другим белком или полипептидом, таким как, например, альбумин или Fc-фрагмент иммуноглобулина. То есть речь идет о таких производных, которые сохраняют активность на уровне исходного белка. Примеры возможных модификаций описаны, например, в ЕР 1984503, US 20130108629.
Как понятно специалистам в данной области, любая форма SERPING1, которая сохраняет активность SERPING1, может быть использована в соответствии с настоящим изобретением.
Предпочтительно, терапевтически эффективное количество SERPING1 включает в себя дозировку от примерно 10 до примерно 900 ME/кг массы тела животного или человека и наиболее предпочтительно от около 80 до около 280 ME на кг массы тела.
Предпочтительно терапевтически эффективное количество антифибринолитика составляет от примерно 0,005 до 0,5 г/кг массы тела животного или человека и наиболее предпочтительно от около 0,01 г до 0,05 г/кг массы тела. Наиболее предпочтительно использование в качестве антифибринолитика транексамовой кислоты.
Комбинация может быть выполнена в виде фармацевтической композиции, включающей терапевтически эффективные количества SERPING1 и антифибринолитика, а также фармацевтически приемлемые добавки, разбавители, растворители, обычно используемые в фармацевтической химии.
Например, в качестве добавок могут применяться стабилизаторы, антиоксиданты, буферные агенты, наполнители, как это показано, например, в «Handbook of Pharmaceutical Excipients» (Rowe, Sheskey et al., 2012). Стандартные методы фармацевтических формуляций известны специалистам в данной области (Remington 1995).
В одном из вариантов фармацевтическая комбинация представляет собой раствор для внутривенного введения, содержащий терапевтически эффективные количества SERPING1 и транексамовой кислоты.
В другом варианте фармацевтическая комбинация представляет собой раствор для внутривенного введения, содержащий терапевтически эффективные количества SERPING1 и аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты.
В качестве дополнительных компонентов композиции могут содержать такие добавки как маннитол, крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, стеарат натрия, моностеарат глицерина, хлорид натрия, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и тому подобное. В определенных вариантах фармацевтическая комбинация может содержать стабилизирующие рН буферные агенты, такие как цитрат или фосфат натрия, увлажнители и эмульгаторы, такие как полисорбат или плюроник. В определенных вариантах фармацевтическая комбинация может содержать стабилизаторы, такие как гистидин, аргинин или консерванты, такие как бензиловый спирт, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или альфа-токоферол, технологические вспомогательные вещества, красители, разбавители, такие как физиологический раствор (0,9% хлорид натрия) и другие известные добавки.
В одном из вариантов фармацевтические комбинации по изобретению могут быть приготовлены в виде композиции путем смешивания растворов транексамовой и/или аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты и SEPvPING1 при подходящем рН, с физиологически приемлемыми носителями. рН композиции может варьировать от примерно 6 до примерно 8. Композиции готовят, дозируют и вводят в соответствии с принципами надлежащей медицинской практики. Учитываемые факторы в связи с этим включают конкретное расстройство и клиническое состояние индивидуального пациента, причину расстройства, способ введения, режим введения и другие факторы, известные практикующим врачам.
В качестве примера, композиция для внутривенного введения может быть приготовлена путем растворения соединений по изобретению в подходящем буферном растворе, например, в натрий-фосфатном буфере с рН=6,5-7,5, добавления регулятора осмолярности, например, хлорида натрия, а также маннита в качестве стабилизатора. Полученный раствор может быть профильтрован с использованием, например, фильтра 0,22 микрон для удаления примесей и загрязнений. Полученный раствор может использоваться как таковой или быть подвергнут лиофилизации с использованием стандартных методов.
Фармацевтическая композиция для применения может быть упакована множеством различных способов в зависимости от того, предназначена ли она для проведения экстренных мероприятий в амбулаторных или полевых условиях. Как правило, изделие для отпуска включает в себя набор, содержащий контейнер с помещенной в него фармацевтической композицией в подходящей форме и контейнер с растворителем. Подходящие контейнеры известны специалистам в данной области и включают флаконы (пластиковые и стеклянные), ампулы и т.п. Контейнер может также иметь устойчивое к внешним воздействиям приспособление для предотвращения неосторожного доступа к содержимому упаковки. Дополнительно, контейнер имеет закрепленную на нем этикетку, на которой описано содержимое контейнера. Этикетка может также содержать соответствующие предостережения.
Предпочтительно фармацевтическая комбинация представляет собой набор, состоящий из фармацевтической композиции, включающей лиофилизат С1-ингибитора в смеси с порошком транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты и необходимыми фармацевтически приемлемыми добавками, в комплекте с растворителем или разбавителем. Наиболее предпочтительно использование транексамовой кислоты.
Примером лиофилизата С1-ингибитора может быть лиофилизат раствора, состоящего из следующих компонентов: 20-40 мг/мл С1-ингибитора; 40-60 мг/мл трегалозы; 2-10 мг/мл NaCl; 1,78 мг/мл Na2HPO4; 1,38 мг/мл NaH2PO4, рН 6,8. Примером растворителя может быть вода для инъекций, а примерами разбавителя - 0,9% раствор хлорида натрия или раствор Рингера.
Другой предпочтительный вариант комбинации представляет собой набор, состоящий из фармацевтической композиции, включающей лиофилизат С1-ингибитора в комплекте с раствором транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты, где оба компонента набора также могут содержать фармацевтически приемлемые добавки. Например, лиофилизат С1-ингибитора может быть получен любым стандартным способом из раствора, содержащего 20-40 мг/мл С1-ингибитора; 40-60 мг/мл трегалозы; 2-10 мг/мл NaCl; 15-30 мМ Na3PO4, рН 6,8. Аминокислота, такая как транексамовая, аминометилбензойная и/или ε-аминокапроновая, может быть использована в качестве раствора в воде для инъекций с концентрацией от 10 до 150 мг/мл. Предпочтительно, 50-100 мг/мл. После растворения лиофилизата С1-ингибитора в растворе соответствующей кислоты, композиция может быть дополнительно разбавлена 0,9% раствором хлорида натрия или раствором Рингера.
В некоторых случаях комбинация может быть представлена в виде набора для последовательного введения, содержащего флакон с раствором транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты и флакон с раствором С1-ингибитора, где оба компонента набора присутствуют в эффективных количествах, указанных выше, а также могут содержать фармацевтически приемлемые добавки.
Формы, содержащие лиофилизат, являются предпочтительными для использования в сложных полевых условиях, т.к. потенциально обладают максимальным сроком хранения в сравнении с комбинацией в форме раствора/растворов для введения, которая, несмотря на большее удобство в применении, как правило, требует более строгих условий для хранения.
Одним из основных преимуществ предложенной комбинации является удобство одновременного использования двух активных компонентов, обладающих синергетическим действием в случае одновременного введения пациенту, то есть имеющими больший терапевтический эффект, выражающийся в снижении риска смерти в результате геморрагического шока, чем каждый из них по отдельности или если бы они были введены тому же пациенту, но с существенной (в несколько часов) разницей во времени. Важно отметить, что данная комбинация позволяет сохранять активные компоненты в течение длительного срока годности в недостаточно контролируемых условиях хранения. Более того, данная комбинация заранее включает в себя максимальную терапевтически эффективную и безопасную дозировку обоих компонентов, что позволяет снизить риск врачебной ошибки, связанной с дозировкой.
Указанная комбинация может применяться для введения пациентам с геморрагическим шоком, а также для лечения кровотечений, потенциально могущих привести к геморрагическому шоку.
В соответствии с настоящим изобретением, SERPING1 или его аналоги, или производные, такие как химерные или слитые белки, или его функционально активный фрагмент в сочетании с антифибринолитиком, выбранном из транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты, вводят пациентам, после появления симптомов, связанных с геморрагическим шоком.
Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения геморрагического шока, который позволяет снизить риск смерти, включающий в себя введение млекопитающему (животному или человеку), испытывающему шок, комбинации терапевтически эффективных количеств SERPING1 и транексамовой кислоты. В другом варианте, млекопитающему, испытывающему шок, вводят комбинацию терапевтически эффективных количеств SERPING1 и аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты.
Введение может осуществляться посредством внутривенного введения путем трансфузии, вместе с кристаллоидными растворами в ходе стандартной терапии для замещения объема кровопотери, а также болюсным способом путем внутривенной инъекции.
В наиболее предпочтительном варианте способ предусматривает одновременное введение SERPING1 и транексамовой кислоты в виде раствора для инъекций.
Однако допустимо последовательное введение указанных препаратов в течение короткого промежутка времени в пределах 1 часа. Предпочтительно, интервал между введением препаратов составляет 0-30 мин.
Предпочтительно, терапевтически эффективное количество SERPING1, вводимое пациенту, включает в себя дозировку от примерно 10 до примерно 900 МЕ/кг массы тела животного или человека и наиболее предпочтительно от около 80 до около 280 МЕ/кг массы тела. Предпочтительно терапевтически эффективное количество транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты составляет от примерно 0,005 до 0,5 г/кг массы тела животного или человека и наиболее предпочтительно от около 0,01 г до 0,05 г/кг массы тела.
Авторы настоящего изобретения впервые показали, что комбинированное применение SERPING1 и антифибринолитика, выбранного из транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты имеет значительно более сильный защитный эффект при геморрагическом шоке и острой массивной кровопотере, чем SERPING1 или один из упомянутых антифибринолитиков, например, транексамовая кислота, используемые по отдельности. Комбинированное применение SERPING1 и транексамовой, аминометилбензойной и/или ε-аминокапроновой кислоты улучшает выживаемость при геморрагическом шоке путем нормализации гемостаза (препятствуя развитию коагулопатии), путем противодействия воспалению, предотвращения повреждения тканей, минимизации шока, а также минимизации связанной с геморрагическим шоком транслокации из кишечника бактерий и бактериальных эндотоксинов.
В подтверждение вышеизложенного авторы показали, что заявленная комбинация существенно более эффективна в повышении выживаемости опытных животных в модели острой кровопотери и геморрагического шока, чем стандартная инфузионная терапия кристаллоидами или каждый из активных компонентов комбинации по отдельности. Также авторы показали, что одним из возможных механизмов действия заявленной комбинации может быть подавление связанного с коагулопатией гиперфибринолиза, на модели вторичного фибринолиза in vitro. Далее, авторы продемонстрировали, на модели отека in vivo и индуцированного эндотоксинами выброса цитокинов ex vivo/in vitro, что дополнительным преимуществом данной терапии может быть противодействие SERPING1 воспалительному процессу, проницаемости сосудов и цитокиновому шторму. Наконец, авторы показали, что в модели геморрагического шока in vivo, на крысах, заявленная комбинация эффективно противодействует разрушению эпителия кишечника, что, как следствие, приводит к снижению риска транслокации бактерий и их токсинов и наступлению септического шока.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. Воздействие rhSERPING1 на выброс воспалительных цитокинов в модели ex vivo/in vitro на цельной крови. Гистограмма отражает общее количество (AUC, пг/мл за 24 ч) ИЛ-6 (А) или ИЛ-1β (Б), выброшенное за 24 ч после индукции с помощью ЛПС (ЛПС - бактериальные полисахариды); rhC1INH23-500 - зрелый полноразмерный rhSERPING1, аминокислотные остатки 23-500; C1INH120-500 - усеченный по амино-концу rhSERPING1, содержащий серпиновый домен, аминокислотные остатки 120-500; rhC1INH23-122 - усеченный по карбокси-концу rhSERPING1, без серпинового домена, аминокислотные остатки 23-122; rhC1INH465ART/VKV - rhSERPING1 с мутациями в активном центре (аминокислотные остатки 465-467 Ala-Arg-Thr заменены на Val-Lys-Val), что привело к потери активности ингибитора сериновых протеаз; ЧСА - очищенный человеческий сывороточный альбумин.
Фиг. 2. Уменьшение отека лапы мыши, индуцированного каррагинаном, под воздействием rhSERPING1. Капиллярный кровоток в месте отека измеряли методом лазер-Допплеровской флоуметрии. Ось Y - 100% нормальный кровоток в здоровой лапе.
Фиг. 3. График выживаемости Каплана-Маейра для каждой экспериментальной группы: контроль - геморрагический шок без вмешательства (без инфузионной терапии); Раствор Рингера - инфузионная терапия раствором Рингера для компенсации гиповолемии; C1INH - rhSERPING1 (168 МЕ/кг); ТХА - транексамовая кислота (0,15 г/кг). Все крысы, прожившие 14 часов после геморрагического шока, были живы к 72 ч после геморрагического шока (время эвтаназии).
Фиг. 4. (А) Гистограмма выживания животных в каждой из экспериментальных групп геморрагического шока (группы приведены, как показано на Фиг. 3) через 72 ч после геморрагического шока. (С) Выживание животных на 72 ч после геморрагического шока, которым ввели комбинацию rhSERPING1 (C1INH) и транексамовой кислоты, зависит от дозы rhSERPING.
Фиг. 5. Типичные микрофотографии срезов тощей кишки, окрашенные гематоксилином и эозином. Стрелки указывают на бокаловидные клетки, наконечники - на полости Грюнхагена, являющиеся признаками дегенерации ворсинок. (А) - контроль, показывающий нормальный эпителий кишечника. (В) Группа с геморрагическим шоком, при реанимации раствором Рингера. (С) Группа с геморрагическим шоком, при реанимации раствором Рингера и транексамовой кислотой; (D) Группа с геморрагическим шоком, при реанимации раствором Рингера и rhSERPING1; (Е) Группа с геморрагическим шоком, при реанимации раствором Рингера и комбинацией rhSERPING1 с транексамовой кислотой.
Фиг. 6. Количественная оценка повреждения эпителия кишечника у животных с геморрагическим шоком и разными вариантами терапии. (А) Повреждения эпителия слизистой оболочки по шкале Чиу/Парк. (В) Количество бокаловидных клеток на срезе ворсинки. Экспериментальные группы обозначены как в Фиг. 3.
Фиг. 7. Тромбоэластограмма активированной нормальной плазмы крови человека. (А) Формирование сгустка в активированной плазме (контроль) (Б) Лизис сгустка, вызванный добавлением тканевого активатора плазминогена (t-РА/т-ПА). (В) Добавление транексамовой кислоты к активированной плазме крови человека не изменяет параметров свертываемости (образования сгустка) в активированной плазме.
Фиг. 8. Тромбоэластограмма активированной нормальной плазмы крови человека при добавлении т-ПА и rhSERPING1. (A) rhSERPING1 по отдельности не оказывает влияния на идуцированный т-ПА фибринолиз in vitro. (Б) Частичное ингибирование фибринолиза, индуцированного т-ПА, с помощью транексамовой кислоты (ТХА). (В) Ингибирование транексамовой кислотой лизиса сгустка, вызванного т-ПА, потенциируется добавлением rhSERPING1.
Фиг. 9. Усеченный по амино-концу rhSERPING1 (rhC1INH120-500), сохраняющий серпиновый домен, также имеет способность усиливать антифибринолитический эффект транексамовой кислоты. Наложение тромбоэластограмм. Каждая тромбоэластограмма была записана из активированной нормальной плазмы крови человека, в которй лизис сгустка был инициирован с помощью т-ПА.
Фиг. 10. Количественная оценка тромбоэластограмм. Показано время лизиса сгустка, от R (время реакции начала образования сгустка) до полного лизиса сгустка.
Перечень последовательностей
SEQ ID №1 - последовательность полноразмерного rhSERPING1, белка-предшественника с отщепляемым лидерным пептидом. Лидерный пептид - аминокислотные остатки 1-22; зрелый белок аминокислотные остатки 23-500.
SEQ ID №2 - последовательность rhC1INH23-122, усеченного по карбокси-концу rhSERPING1, без серпинового домена. Белок-предшественник с отщепляемым лидерным пептидом. Лидерный пептид аминокислотные остатки 1-22; зрелый белок - аминокислотные остатки 23-122
SEQ ID №3 - C1INH120-500 - усеченный по амино-концу rhSERPING1, содержащий серпиновый домен. Белок-предшественник с отщепляемым лидерным пептидом. Лидерный пептид - аминокислотные остатки 1-22; зрелый белок соответствует аминокислотным остаткам 120-500 в предшественнике полноразмерного rhSERPING1
SEQ ID №4 - последовательность rhC1INH465ART/VKV - rhSERPING1 с мутациями в активном центре (аминокислотные остатки 465-467 Ala-Arg-Thr заменены на Val-Lys-Val). Белок-предшественник с отщепляемым лидерным пептидом. Лидерный пептид - аминокислотные остатки 1-22; зрелый белок - аминокислотные остатки 23-500.
Настоящее изобретение иллюстрируется приведенными ниже примерами.
ПРИМЕР 1. Получение рекомбинантного человеческого SERPING1 (rhSERPING1) и его вариантов
Экспрессия рекомбинантного человеческого SERPING1 (rhSERPING1) и его модифицированных форм (см. Таблицу 1) осуществлялась путем введения экспрессионной плазмиды pRA810, содержащей последовательность ДНК, кодирующую человеческий SERPING1 под контролем сильного промотора, в клеточную линию-хозяина, посредством трансфекции клеток. В качестве способа трансфекции применяли электропорацию. В результате чего введенная последовательность стабильно интегрирована в геном хозяина. Клеточная линия-хозяин представляла собой субклон линии клеток яичников китайского хомячка СНО-К1, приспособленный к выращиванию в виде суспензии в бессывороточной среде. Экспрессионная плазмида также несла ген устойчивости к пуромицину и обеспечивала устойчивость трансфицированной клеточной линии к селективному маркеру - антибиотику пуромицину.
Для идентификации и выделения клеток, продуцирующих rhSERPING1, после трансфекции и добавления селективного антибиотика в культуральную среду, суспензия клеток разбавлялась и рассевалась таким образом, чтобы изолировать популяции, выросшие из единичных клеток, то есть клеточные клоны. После выделения клоны выращивались до состояния конфлюэнтности, и содержание rhSERPING1 в супернатанте оценивалось методом иммуноферментного анализа, для идентификации клеток, секретирующих rhSERPING1.
Клеточные клоны, секретирующие rhSERPING1 на высоком уровне, размножали и хранили с помощью криоконсервации.
Для производства белка rhSERPING1 клон клеток, стабильно экспрессирующий rhSERPING1, выращивали в одноразовом пластиковом мешке-биореакторе, который перемешивался с помощью качающейся платформы. Использовался биоректор Cultibag 20L Perf (Sartorius, Германия). Для роста клеток и продукции белка использовалась бессывороточная среда SFM4CHO (HyClone, США), содержащая 6 мМ L-глутамин, 0,1% Pluronic F68. Для культивирования использовали режим перфузии, где в процессе фильтрации примерно 80% культуральной среды в течение 24-часового цикла заменялось на свежую среду. В течение 22 дней производственного процесса клеткам непрерывно подавалась свежая ростовая среда, а использованная среда, содержащая rhSERPING1, отделялась от клеточной биомассы и сохранялась. При этом клетки оставались в мешке-биореакторе. Отделенная от клеток среда, содержащая rhSERPING1, собиралась каждый день и использовалась для очистки rhSERPING1 с помощью четырехступенчатой хроматографии. Этапы хроматографии приведены ниже.
I. Аффинная хроматография на основе иммобилизованных ионов металлов (IMAC - Immobilized metal ion affinity chromatography). Собранную с разных дней процесса биосинтеза культуральную среду загружали в хроматографическую колонку IMAC Sepharose, предварительно промытую 100 мМ ZnCl2 в количестве 2 объемов колонки и уравновешенную 20 мМ Tris, рН 7.2. Далее колонку промывали сначала 5 объемами 20 мМ Tris, рН 7.2 и затем 5 объемами 50 мМ Tris, 15 мМ имидазол, рН 7.5. Белки, связанные с колонкой, элюировали раствором 20 мМ Tris, 150 мМ имидазол, рН 7.2.
II. Хроматография на гепариновой сефарозе. Белковую фракцию с этапа I загружали на колонку гепарин-сефароза, предварительно промытую 20 мМ Tris, 5 мМ фосфатом натрия, рН 7.2. Затем колонку промывали тремя объемами 20 мМ Tris, 5 мМ фосфата натрия. Далее, связавшиеся с колонкой белки элюировали 20 мМ Tris, 0.2 М NaCl, рН 7.2.
III. СНТ-хроматография на керамическом гидроксиапатите. Собранные фракции с этапа II загружали на колонку СНТ, предварительно промытую одним объемом 0.5 М NaOH, одним объемом 200 мМ Tris, рН 7.2 и уравновешенную 20 мМ Tris, 5 мМ фосфат натрия, рН 7.2. Далее колонку промывали тремя объемами 20 мМ Tris, 5 мМ фосфат натрия, рН 7.2. Затем белки, связанные с колонкой, элюировали 4 объемами 200 мМ Tris, 5 мМ фосфата натрия, 200 мМ NaCl, рН 8.5.
IV. Анионобменная хроматография на Q-сефарозе. Фракцию элюции с этапа III разводили водой для достижения проводимости раствора 6 mS/cm и загружали на колонку с Q-сефарозой, предварительно уравновешенную двумя объемами 20 мМ фосфата натрия, рН 6.8. Далее колонку промывали тремя объемами of 20 мМ фосфата натрия, рН 6.8 и затем связанные белки элюировали 20 мМ фосфата натрия, 0.25 М NaCl, рН 6.8.
После IV стадии очистки и соответствующего разбавления раствор rhSERPING1 имел следующие характеристики (Табл. 2):
Аналогичным образом получали и очищали модифицированные формы SERPING1, приведенные в Таблице 1. Полученные составы использовались для проведения дальнейших экспериментов и введения животным.
ПРИМЕР 2. Ингибирование сериновой протеазы
Для определения специфической активности rhC1INH23-500 и его модифицированных форм, полученных в Примере 1, и оценки способности ингибировать эстеразу C1q использовали стандартную методику хромогенного анализа. Для проведения эксперимента использовали набор TECHNOCHROM C1INH, # 5345003 (Technoclone Gmbh). Данный способ основан на ингибировании избыточного количества образующегося комплекса С1-эстеразы с С1 эстеразным ингибитором, за которым следует гидролиз хромогенного субстрата избытком С1-эстеразы. Количество паранитроанилина, высвобождающееся при гидролизе, и измеренного при длине волны 405 нм, обратно пропорционально активности С1-ингибитора, присутствующего в реакционной среде.
Специфическая активность очищенных rhC1INH23-500, и rhC1INH120-500, полученных в Примере 1, составляла 5,0-12,0 МЕ/мг общего белка. Специфическая активность белков rhC1INH23-122 и rhC1INH465ART/VKV равнялась нулю, что являлось результатом делеции серпинового домена или мутации его активного центра.
ПРИМЕР 3. Ингибирование воспалительных цитокинов на ex vivo модели септического шока.
Для каждого отдельного эксперимента использовали 25 мл цельной крови, взятой у 6 здоровых добровольцев. В качестве антикоагулянта к цельной крови добавляли 5 мМ ЭДТА. Цельную кровь равномерно распределяли в тестовые пробирки, куда заранее были добавлены либо растворы белков, либо эквивалентный объем физиологического раствора. В качестве контроля использовали человеческий сывороточный альбумин (ЧСА) (Baxter). Конечная концентрация белков (альбумина (контрольный белок), pdSERPING1 (Беринерт), rhC1INH23-500, а также модифицированных (усеченных или с аминокислотными заменами) вариантов rhSERPING1 (полученных в Примере 1), приведенных в Таблице 1, в цельной крови составляла 22 нМ.
После предварительного инкубирования при 37°С в течение 30 мин на орбитальном шейкере (60° угол поворота оси и скорость вращения 9 об/мин), к смеси, состоящей из цельной крови и белков, добавляли бактериальные липополисахариды (ЛПС E.coli O55 : В5 (#L6629, Сигма)) до конечной концентрации 1 нМ. Таким образом, индуцировали воспалительное высвобождение цитокинов из макрофагов и нейтрофилов. После этого всю смесь оставляли в одинаковых условиях инкубации (описанных выше) и образцы для анализа отбирали после 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 24 ч.
Плазму крови отделяли центрифугированием и хранили при -20°С. Концентрацию цитокинов в замороженной плазме определяли методом ИФА (Quantikine SixPak, R&D Systems). Для анализа цитокинового шторма определялись концентрации следующих цитокинов: ФНО-альфа, ИЛ-1β/ИЛ-1F2, ИЛ-6. Добавление rhC1INH23-500 или C1INH120-500 к цельной крови значительно снижало ЛПС-индуцированный выброс ИЛ-6 (Фиг. 1). Несмотря на то, что выброс ИЛ-1β не подавлялся полноразмерным rhSERPING (rhC1INH23-500), амино-концевой фрагмент rhSERPING (rhC1INH23-122) значительно снизил уровень ИЛ-1β. Уровень ФНО-альфа не изменялся значительно после добавления rhSERPING1 (или его вариантов) в модели цитокинового шторма.
Таким образом, добавление rhC1INH23-500 или его вариантов, сохраняющих функциональную активность, подавляет высвобождение определенных воспалительных цитокинов, а именно ИЛ-6 и ИЛ-ip, которые привлекают нейтрофилы в места инфекции и воспаления, вызывая дальнейшее увеличение воспаления. Более того, выше перечисленные провоспалительные цитокины играют важную роль в развитии септического шока, который часто является последствием геморрагического шока.
ПРИМЕР 4. Модель индуцированного каррагинаном отека задней лапы мыши.
Для изучения противовоспалительного и противоотечного действия rhSERPING1 была использована модель воспалительного отека задней лапы мыши, вызванного введением каррагинана. В данной модели основные признаки воспаления, такие как отек, гипералгезия, и эритема - проявляются сразу же после подкожной инъекции каррагинана. Данные симптомы обусловлены действием таких провоспалительных агентов, как брадикинин, гистамин, тахикинины, система комплемента, а также реактивные формы кислорода и азота. Такие агенты могут образовываться непосредственно в месте воспаления, при этом нейтрофилы охотно мигрируют в участки воспаления и могут выделять реактивные формы кислорода и другие провоспалительные вещества. В используемой модели воспалительная реакция обычно определяется по увеличению в размере задней лапки (по отеку), в которую вводился каррагинан. Максимальный отек развивается уже через 10 мин после введения каррагинана и в это же время происходит выброс специфических молекул, характерных для воспалительного каскада. Степень отека также может оцениваться путем измерения капиллярного кровотока в лапе - чем сильнее отек, тем слабее кровоток. В проведенных экспериментах отек индуцировали путем подкожной инъекции 100 мкл 1% каррагинана (λ-каррагинан тип IV, Sigma) в физиологическом растворе в правую заднюю лапу. Левая задняя лапа была использована в качестве контроля. Сразу после инъекции каррагинана, внутривенно вводили rhSERPING1 (500 МЕ/кг) или pdSERPING1 (500 МЕ/кг, препарат Беринерт, производства Behring) или диклофенак (3 мг/кг, производства Хемофарм АД, Сербия) или раствор Рингера в качестве отрицательного контроля. Динамика капиллярного кровотока в лапе в течение 3 ч измерялась с методом лазер-Допплера. Через 24 ч после введения каррагинана измеряли уровень провоспалительного цитокина ИЛ-6.
У животных, получившие в качестве терапии rhSERPING1 или pdSERPING1, отек спадал существенно быстрее, чем в случае применения нестероидного противовоспалительного препарата диклофенак. У животных в контроле, инъецированных только раствором Рингера, снижение отека не наблюдалось (Фиг. 2). Кроме того, у животных, получившие в качестве терапии rhSERPING1 или pdSERPING1, наблюдался более низкий уровень (в 10 раз меньше) ИЛ-6, по сравнению с контрольной группой животных, которым вводился раствор Рингера.
ПРИМЕР 5. Фармацевтическая комбинация SERPING1 и транексамовой кислоты.
Фармацевтические композиции для введения были приготовлены следующим образом.
А. Раствор для введения
Готовят следующий состав:
Рассчитанное количество трегалозы и хлорида натрия взвешивают и растворяют при перемешивании в необходимом количестве 20 мМ натрий-фосфатного буфера с рН=6,8. Затем к раствору добавляют рассчитанное количество порошка транексамовой, аминометилбензойной или ε-аминокапроновой кислоты, перемешивают и проверяют рН. При необходимости рН доводят до значения 6,8 с использованием раствора 1М NaOH или 1М HCl. К полученному раствору добавляют необходимое количество rhSERPING1, полученного в Примере 1, и осторожно перемешивают. Раствор доводят до определенного объема водой для инъекций, фильтруют через 0,22-микронный мембранный фильтр и собирают в контейнер в стерильных условиях.
Полученная жидкая композиция может вводиться любым способом внутривенно: струйно, капельно, болюсно; композиция может быть разбавлена раствором Рингера и другими кристаллоидами. Таким образом, последующее введение может осуществляться либо параллельно с инфузионной терапией (капельница), либо независимо от инфузионной терапии.
Б. Растворы для последовательного введения.
Готовят раствор препарата, способом, описанным в разделе А, но без добавления транексамовой, аминометилбензойной или ε-аминокапроновой кислоты, помещают в стерильные флаконы и запечатывают. Отдельно готовят раствор транексамовой, аминометилбензойной или ε-аминокапроновой кислоты в концентрации 50 мг/мл. Препарат вводится внутривенно, последовательно (до или после) или одновременно с внутривенным введением раствора транексамовой, аминометилбензойной или ε-аминокапроновой кислоты.
В. Лиофилизированный порошок
Раствор для внутривенного введения, полученный в разделе А, лиофилизируют с использованием следующего способа:
Аликвоты раствора по 45 мл помещаются в стеклянные апирогенные флаконы, которые не плотно закрываются апирогенными пробками, чтобы допустить выход воздуха. Флаконы далее помещаются в камеру лиофильной сушки (Labconco FreeZone 6 Plus), где происходит лиофилизация при минус 40°С в течение 16 часов. Дополнительный цикл сушки происходит в течение 8 часов в той же камере с выключенным охлаждением. Флаконы далее укупориваются бутиловыми резиновыми пробками и запечатываются алюминиевыми колпачками.
Восстановление раствора проводят при комнатной температуре добавлением во флакон необходимого количества воды для инъекций, физиологического раствора или раствора Рингера и тщательного взбалтывания до полного растворения содержимого флакона. Дальнейшее введение пациенту осуществляется, как описано в разделе А.
Г. Набор с растворителем
Готовят раствор препарата, способом, описанным в разделе А, но без добавления транексамовой, аминометилбензойной или ε-аминокапроновой кислоты, и проводят его лиофилизацию в условиях, описанных в разделе Б. Готовый лиофилизат помещают в стерильные флаконы и запечатывают.
Раствор транексамовой, аминометилбензойной или ε-аминокапроновой кислоты с концентрацией 10-100 мг/мл готовят путем растворения порошка соответствующей кислоты в воде для инъекций при перемешивании. Полученный раствор фильтруют через стерильный фильтр и разливают по флаконам.
Для получения раствора rhSERPING1 с аминокислотой, при помощи шприца набирают раствор соответствующей кислоты, вводят во флакон с лиофилизатом и осторожно перемешивают до полного растворения содержимого флакона.
Во всех случаях (А, Б, В, Г) приготовленный раствор rhSERPING1 с аминокислотой может быть дополнительно разбавлен 0,9% раствором хлорида натрия или раствором Рингера до требуемой концентрации.
ПРИМЕР 6. Оценка эффективности заявленной композиции на крысиной модели геморрагического шока.
Для проведения эксперимента использовали крыс породы Sprague-Dawley, полученных в питомнике SPF-категории «Пущино» (Пущино, РФ), возрастом 12-16 недель, с массой 350-400 г.
Крыс вводили в наркоз и вызывали геморрагический шок путем надреза бедренной артерии. Объем кровопотери, длившейся 20-25 минут, составлял 50% от расчетного общего объема циркулирующей крови (ОЦК). ОЦК для крыс вычисляли по уравнению:
ОЦК в миллилитрах = 0.77 + (0.06 × вес тела в граммах)
Кровотечение останавливали путем наложения лигатуры после эксфузии 50% ОЦК. Через 30 минут после завершения эксфузии начинали процесс реперфузии (инфузионной терапии). Все крысы путем рандомизации были поделены на 7 экспериментальных групп, минимальное количество животных в каждой группе составляло 10 особей.
В экспериментальной группе номер 1 (10 животных): реанимация проводилась внутривенным введением раствора Рингера в соотношении 2:1 (объем раствора Рингера: объем кровопотери).
В экспериментальной группе номер 2 (11 животных): реанимация проводилась внутривенным введением раствора Рингера в соотношении 2:1 (объем раствора Рингера: объем кровопотери), содержащим человеческий SERPING1 очищенный из плазмы крови (препарат Berinert) в дозировке 168 МЕ/кг.
В экспериментальной группе номер 3 (11 животных): реанимация проводилась внутривенным введением раствора Рингера в соотношении 2:1 (объем раствора Рингера: объем кровопотери), содержащим рекомбинантный человеческий SERPING1 (rhC1INH23-500) в дозировке 168 МЕ/кг.
В экспериментальной группе номер 4 (11 животных): реанимация проводилась внутривенным введением раствора Рингера в соотношении 2:1 (объем раствора Рингера: объем кровопотери), содержащим транексамовую кислоту в дозировке 0,015 г/кг.
В экспериментальной группе номер 5 (11 животных): реанимация проводилась внутривенным введением раствора Рингера в соотношении 2:1 (объем раствора Рингера: объем кровопотери), содержащим рекомбинантный человеческий SERPING1 (rhC1INH23-500) в дозировке 168 МЕ/кг и транексамовую кислоту в дозировке 0,015 г/кг.
В экспериментальной группе номер 6 (10 животных): реанимация проводилась внутривенным введением раствора Рингера в соотношении 2:1 (объем раствора Рингера: объем кровопотери), содержащим рекомбинантный человеческий SERPING1 (rhC1INH23-500) в дозировке 84 МЕ/кг и транексамовую кислоту в дозировке 0,015 г/кг
В экспериментальной группе номер 7 (10 животных): реанимационные предприятия не проводились.
Реперфузию животных осуществляли через бедренную вену либо раствором Рингера, либо раствором Рингера, содержащим SERPING1 или транексамовую кислоту, либо раствором Рингера содержащим вместе SERPING1 и транексамовую кислоту. Объем реперфузии равнялся примерно 200% объема эксфузии. Скорость реперфузии составляла примерно 1,2 мл/мин. Контрольную группу животных подвергали эксфузии без последующей реперфузии. После окончания реперфузии на бедренную вену также была наложена лигатура.
С момента наступления наркоза, во время эксфузии, во время и после реперфузии мониторингу подвергались следующие физиологические параметры: частота дыхания и сердечных сокращений, насыщение кислородом, электрокардиограмма. В случае, когда физиологические параметры свидетельствовали о наступающем коллапсе животного, эксфузия временно прекращалась и животным проводилась искусственная вентиляция легких. После стабилизации физиологических параметров, эксфузия завершалась.
Параллельные группы животных, после пробуждения от наркоза, и в случае, если смерть не наступала под наркозом, наблюдали в течение 72 часов после завершения эксфузионно-реперфузионных предприятий. Фиксировали смертность в течение 72 часов, после чего животных подвергали эвтаназии.
90% животных, получавших комбинацию SERPING1 и транексамовой кислоты в растворе Рингера, выживало по крайней мере (более) 72 часов, в то время как только 20% животных из группы, получавшей раствор Рингера, выжило в течение такого же времени. В группе, получавшей транексамовую кислоту в растворе Рингера, в течение 72 часов выжило 36,4%. В группах, получавших раствор Рингера, содержащий SERPING1 из плазмы крови человека или рекомбинантный SERPING1, в течение 72 часа выжило 54,5% животных, при этом разницы между группами, получавшими рекомбинантный и плазменный SERPING1, обнаружено не было. В группе без реанимации ни одно из животных не выжило более 1 часа. Двукратное снижение дозы rhSERPING1 (с 168 МЕ/кг до 84 МЕ/кг) в комбинации с транексамовой кислотой, привело к примерно двукратному снижению выживаемости (с 90 до 50%) (Фиг. 3, 4).
Таким образом был показан синергетический эффект комбинации rhSERPING1 и транексамовой кислоты, которая имеет наибольший эффект снижения смертности в модели геморрагического шока на крысах.
ПРИМЕР 7. Эффективность заявленной комбинации в снижении повреждения эпителия кишечника в модели геморрагического шока на крысах.
Крысы были рандомизированно разделены на 5 экспериментальных групп по 5 животных в каждой. Крыс вводили в наркоз и вызывали геморрагический шок в четырех группах, способом, описанным в Примере 6. Контрольная группа, без геморрагического шока, была наркотизирована, но у нее не вызывалось кровотечение и геморрагический шок. Описание терапии экспериментальных групп приведено в Таблице 4.
Животные в каждой экспериментальной группе были подвергнуты эвтаназии через 4 часа после окончания эксфузионно-инфузионных мероприятий. Сегменты тонкого кишечника, включающие тощую и подвздошную кишку, были промыты холодным физиологическим раствором, зафиксированы в 20% забуференном формалине и 3% глутаровом альдегиде.
Вырезанные сегменты тонкой кишки заливали парафином, делали срезы (5 мкм) и окрашивали гематоксилин-эозином. Срезы анализировали с помощью светового микроскопа. Окрашенные срезы были закодированы и проанализированы. Повреждения кишечного эпителия классифицировались в соответствии со шкалой Чиу-Парк (Chiu, McArdle et al. 1970): 1-я степень - появление субэпителиальных полостей Грюнхагена и вакуолизация кончиков ворсинок; 2-я степень - расширение субэпителиального пространства с умеренным отслоением эпителия от lamina propria; 3-я степень - массивное отслоение эпителия и увеличение вакуолизации от кончика к середине ворсинок; 4-я степень - отслоение эпителия и вакуолизация от кончика до нижней части ворсинок; 5 степень - полное оголение ворсинки, изъязвление слизистой оболочки и lamina propria. Кроме того, два других признака кишечного повреждения были приняты во внимание - уменьшение количества или исчезновение бокаловидных клеток, и уменьшение длины при увеличении толщины ворсинки. Бокаловидные клетки выделяют слизь, которая образует защитный барьер кишечника. Уменьшение в длине ворсинок и увеличение толщины ворсинки является указанием отека.
Кишечник из группы 2 (геморрагический шок и реанимация раствором Рингера) показал наиболее серьезное повреждение (Средняя степень 4±1,2) (Фиг. 5), с часто встречающимся полным оголением или потерей ворсинок, увеличенной целлюляризацией или распадом lamina propria; уменьшением количества или полной потерей бокаловидных клеток. При применении транексамовой кислотой значительно снижался ущерб кишечника (средняя степень 1,9±0,7). Применение rhSERPING1 также снижало повреждение кишечника, примерно в такой же степени (средняя степень 1,7±0,5). Несмотря на в основном сохранившийся слизистый эпителий, ворсинки в группе с терапией rhSERPING1 были заметно короче и тоньше, чем в группе контроля без геморрагического шока или в группе с терапией транексамовой кислотой. В группе с комбинированным применением rhSERPING1 и транексамовой кислоты, повреждение слизистой оболочки было наименее выражено среди групп с геморрагическим шоком (средняя степень 0,4±0,7) (Фиг. 5, 6).
Таким образом, комбинация rhSERPING1 и транексамовой кислоты защищает кишечный эпителий значительно лучше, чем rhSERPING1 (Р=0,012) или транексамовая кислота (Р=0,038) в одиночку.
ПРИМЕР 8. Синергетический эффект комбинации rhSERPING1 и транексамовой кислоты в отношении фибринолиза in vitro.
Для того чтобы проверить, достигается ли синергетический эффект комбинации rhSERPING1 и транексамовой кислоты в отношении вторичного фибринолиза, было проведено исследование in vitro методом тромбоэластографии на объединенных пробах человеческой плазмы крови здоровых доноров.
Для инициации образования сгустка по пути контактной активации, 20 мкл 0,5 М CaCl2 и 20 мкл каолин-кефалиновой смеси (производства РЕНАМ, РФ) добавляли к 260 мкл цитрированных образцов плазмы (нормальная плазма крови собранная и объединенная от здоровых доноров, РЕНАМ, РФ) в кювете для тромбоэластографии. После добавления 60 мкл фосфатно-солевого буфера, кювету помещали для немедленного измерения в тромбоэластограф Mono ТЕМ-А (Framar Hemologix, Италия).
На Фиг. 7А приведена типичная тромбоэластограмма образования сгустка в активированной человеческой плазме. Добавление транексамовой кислоты до концентрации 1,43 мкг/мл к активированной плазме не изменило значимо параметров тромоэластограммы (Фиг. 7С).
Чтобы инициировать фибринолиз, фармакологический препарат рекомбинантного тканевого активатора плазминогена, т-ПА (t-PA) (Ревелиза, производства Генериум, Россия) был добавлен до конечной концентрации 55 мкг/мл (0,57 МЕ/мл). При этом тромбоэластография показала быстрый фибринолиз после начального формирования сгустка (Фиг. 7Б). Добавление rhSERPING (rhC1INH23-500) до конечной концентрации 2,5 мг/мл не изменило активированный т-ПА фибринолиз (Фиг. 8А), в то время как добавление транексамовой кислоты (1,43 мкг/мл) значительно ингибировало т-ПА-зависимый фибринолиз (Фиг. 8Б), что нашло свое отражение в длительности стабильности сгустка на тромбоэластограмме. Когда rhSERPING (rhC1INH23-500) был использован в сочетании с транексамовой кислотой (конечные концентрации 2,5 мг/мл и 1,43 мкг/мл соответственно), степень ингибирования фибринолиза была примерно в два раза сильнее по сравнению применением одной только транексамовой кислоты (Фиг. 8С). При сочетанном применении rhSERPING1 (rhC1INH23-500) и транексамовой кислоты время до полного растворения сгустка было в два раза больше, что хорошо видно на Фиг. 10. RhSERPING1 (CIINH120-500), усеченный по амино-концу, содержащий серпиновый домен, имел схожий эффект, а именно: в случае фибринолиза, инициированного т-ПА, время лизиса сгустка, в случае добавления вместе с транексамовой кислотой, было существенно больше, чем в случае применения транексамовой кислоты или RhSERPING1 (C1INH120-500), усеченный по амино-концу, по отдельности (Фиг. 9, 10).
Таким образом, пример показывает:
1. Установлено действие антифибринолитика, например, такого как транексамовая кислота, выраженное в замедлении процесса фибринолиза, вызванного т-ПА (0,57 МЕ/мл).
2. Вышеуказанный эффект не наблюдается при добавлении rhSERPING1.
3. rhSERPING1 и транексамовая кислота, примененные вместе, обладают синергетическим действием по ингибированию вторичного фибринолиза в плазме крови.
4. RhSERPING1 (C1INH120-500), усеченный по амино-концу, содержащий серпиновый домен, также эффективно потенциирует антифибринолитическое действие транексамовой кислоты.
Список литературы
Anonick, Р.K., J. Vasudevan and S.L. Gonias (1992). "Antifibrinolytic activities of alpha-N-acetyl-L-lysine methyl ester, epsilon-aminocaproic acid, and tranexamic acid. Importance of kringle interactions and active site inhibition." Arterioscler Thromb 12(6): 708-716.
Chiu, C.J., A.H. McArdle, R. Brown, H.J. Scott and F.N. Gurd (1970). "Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal." Arch Surg 101(4): 478-483.
collaborators, С.-., I. Roberts, H. Shakur, A. Afolabi, K. Brohi, T. Coats, Y. Dewan, S. Gando, G. Guyatt, B. J. Hunt, C. Morales, P. Perel, D. Prieto-Merino and T. Woolley (2011). "The importance of early treatment with tranexamic acid in bleeding trauma patients: an exploratory analysis of the CRASH-2 randomised controlled trial." Lancet 377(9771): 1096-1101, 1101 e1091-1092.
collaborators, C.-t, H. Shakur, I. Roberts, R. Bautista, J. Caballero, T. Coats, Y. Dewan, H. El-Sayed, T. Gogichaishvili, S. Gupta, J. Herrera, B. Hunt, P. Iribhogbe, M. Izurieta, H. Khamis, E. Komolafe, M.A. Marrero, J. Mejia-Mantilla, J. Miranda, C. Morales, O. Olaomi, F. Olldashi, P. Perel, R. Peto, P.V. Ramana, R.R. Ravi and S. Yutthakasemsunt (2010). "Effects of tranexamic acid on death, vascular occlusive events, and blood transfusion in trauma patients with significant haemorrhage (CRASH-2): a randomised, placebo-controlled trial." Lancet 376(9734): 23-32.
Dalle Lucca, J.J., Y. Li, M. Simovic, A.E. Pusateri, M. Falabella, M.A. Dubick and G.C. Tsokos (2012). "Effects of CI inhibitor on tissue damage in a porcine model of controlled hemorrhage." Shock 38(1): 82-91.
Davis, A.E., 3rd, S. Cai and D. Liu (2007). "CI inhibitor: biologic activities that are independent of protease inhibition." Immunobiology 212(4-5): 313-323.
Davis, A.E., 3rd, F. Lu and P. Mejia (2010). "C1 inhibitor, a multi-functional serine protease inhibitor." Thromb Haemost 104(5): 886-893.
Davis, A.E., 3rd, P. Mejia and F. Lu (2008). "Biological activities of C1 inhibitor." Mol Immunol 45(16): 4057-4063.
DeLano, F.A., D.B. Hoyt and G.W. Schmid-Schonbein (2013). "Pancreatic digestive enzyme blockade in the intestine increases survival after experimental shock." Sci Transl Med 5(169): 169ra111.
DOBROKHOTOVA, Y., E. DZHOBAVA, S. DANELYAN and S. ZALESSKAYA (2013). "Послеродовые кровотечения. Обоснование оптимальной гемостатической фармакотерапии."
Dunn, С.J. and K.L. Goa (1999). "Tranexamic acid: a review of its use in surgery and other indications." Drags 57(6): 1005-1032.
Ioannou, A., J. Dalle Lucca and G.C. Tsokos (2011). "Immunopathogenesis of ischemia/reperfusion-associated tissue damage." Clin Immunol 141(1): 3-14.
Keith, J.C, Jr. (1986). "Effect of lidocaine pretreatment on acute hemorrhagic shock in the anesthetized rat." Circ Shock 19(3): 283-292.
Ker, K., J. Kiriya, P. Perel, P. Edwards, H. Shakur and I. Roberts (2012). "Avoidable mortality from giving tranexamic acid to bleeding trauma patients: an estimation based on WHO mortality data, a systematic literature review and data from the CRASH-2 trial." BMC Emerg Med 12: 3.
Langenbach, C. (2006). "Misoprostol in preventing postpartum hemorrhage: A meta-analysis." International Journal of Gynecology & Obstetrics 92(1): 10-18.
Liu, D., F. Lu, G. Qin, S.M. Fernandes, J. Li and A.E. Davis, 3rd (2007). "C1 inhibitor-mediated protection from sepsis." J Immunol 179(6): 3966-3972.
Remington, J.P. (1995). Remington, the science and practice of pharmacy. Easton, Pa.
London, UK, Mack Pub. Co.
Pharmaceutical Press: v.
Roberts, I., D. Prieto-Merino and D. Manno (2014). "Mechanism of action of tranexamic acid in bleeding trauma patients: an exploratory analysis of data from the CRASH-2 trial." Crit Care 18(6): 685.
Rowe, R.C, P.J. Sheskey, W.G. Cook, M.E. Fenton and American Pharmacists Association. (2012). Handbook of pharmaceutical excipients / edited by Raymond C. Rowe, BPharm, PhD, DSC. FRPharmS. FRSC. CPhvs. MlnstP. chief scientist. Paul J. Sheskev. BSc, RPh. principal research scientist, the Dow Chemical Company. Midland. ML USA, Walter G. Cook, BSc, PhD, research fellow. Materials Science group of Pharmaceutical R&D, Pfizer, Sandwich, Kent. UK. Marian E. Fenton. BSc. MSc, development editor. Royal Pharmaceutical Society of Great Britain, London. UK. London, APhA/Pharmaceutical Press.
Tamion, F., V. Richard, S. Lyoumi, M. Daveau, G. Bonmarchand, J. Leroy, C. Thuillez and J.P. Lebreton (1997). "Gut ischemia and mesenteric synthesis of inflammatory cytokines after hemorrhagic or endotoxic shock." Am J Physiol 273(2 Pt 1): G314-321.
van Veen, H.A., J. Koiter, C.J.M. Vogelezang, N. van Wessel, T. van Dam, I. Velterop, K. van Houdt, L. Kupers, D. Horbach, M. Salaheddine, J.H. Nuijens and M.L.M. Mannesse (2012). "Characterization of recombinant human CI inhibitor secreted in milk of transgenic rabbits." Journal of Biotechnology 162(2-3): 319-326.
Verstraete, M. (1985). "Clinical application of inhibitors of fibrinolysis." Drugs 29(3): 236-261.
Vo, A.A., A. Zeevi, J. Choi, K. Cisneros, M. Toyoda, J. Kahwaji, A. Peng, R. Villicana, D. Puliyanda, N. Reinsmoen, M. Haas and S.C. Jordan (2015). "A phase I/II placebo-controlled trial of CI-inhibitor for prevention of antibody-mediated rejection in HLA sensitized patients." Transplantation 99(2): 299-308.
Vymazal, T. (2015). "Massive hemorrhage management-a best evidence topic report." Ther Clin Risk Manag 11: 1107-1111.
Claims (6)
1. Способ лечения геморрагического шока или массивной кровопотери у млекопитающих, который включает введение млекопитающему транексамовой кислоты в количестве от 0,005 до 0,5 г/кг массы тела в комбинации с рекомбинантным полноразмерным SERPING1 или его серпиновым доменом в количестве от 10 до 900 ME/кг массы тела.
2. Способ по п. 1, где введение осуществляется одновременно.
3. Способ по п. 1, где введение осуществляется последовательно.
4. Способ по п. 1, где интервал между введением рекомбинантного полноразмерного SERPING1 или его серпинового домена и транексамовой кислоты составляет 0-60 мин.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где введение осуществляется внутривенно.
6. Способ по п. 1, где терапевтически эффективное количество транексамовой кислоты составляет от 0,01 до 0,05 г/кг массы тела и терапевтически эффективное количество рекомбинантного полноразмерного SERPING1 или его серпинового домена составляет от 80 до 280 ME/кг массы тела.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015139735A RU2651778C2 (ru) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока |
PCT/RU2016/000626 WO2017048157A1 (ru) | 2015-09-18 | 2016-09-15 | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока и последствий черепно-мозговой травмы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015139735A RU2651778C2 (ru) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018106931A Division RU2663464C1 (ru) | 2018-02-26 | 2018-02-26 | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2015139735A RU2015139735A (ru) | 2017-03-23 |
RU2651778C2 true RU2651778C2 (ru) | 2018-04-23 |
Family
ID=58289514
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015139735A RU2651778C2 (ru) | 2015-09-18 | 2015-09-18 | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2651778C2 (ru) |
WO (1) | WO2017048157A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2675694C1 (ru) * | 2018-01-19 | 2018-12-24 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России) | Нейрореабилитационное средство на основе 6-оксо-1-фенил-2-(фениламино)-1,6-дигидропиримидин-4-олята натрия |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6884792B2 (en) * | 1999-01-08 | 2005-04-26 | Marvin B. Bacaner | Bretylium compositions and kits and their use in preventing and treating cardiovascular conditions |
-
2015
- 2015-09-18 RU RU2015139735A patent/RU2651778C2/ru active
-
2016
- 2016-09-15 WO PCT/RU2016/000626 patent/WO2017048157A1/ru active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6884792B2 (en) * | 1999-01-08 | 2005-04-26 | Marvin B. Bacaner | Bretylium compositions and kits and their use in preventing and treating cardiovascular conditions |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
DALLE LUCCA JJ., et al., Effects of C1 inhibitor on tissue damage in a porcine model of controlled hemorrhage.Shock. 2012, Jul.; 38(1):82-91. doi: 10.1097/SHK.0b013e31825a3522. * |
DALLE LUCCA JJ., et al., Effects of C1 inhibitor on tissue damage in a porcine model of controlled hemorrhage.Shock. 2012, Jul.; 38(1):82-91. doi: 10.1097/SHK.0b013e31825a3522. MUNOZ-SANCHEZ A., et al. [Tranexamic acid therapy decreases mortality of traumatic hemorrhagic shock].[Article in Spanish] Med Intensiva. 2011, Jun-Jul; 35(5):286-7. doi: 10.1016/j.medin.2011.01.012. Epub 2011, Mar 5. * |
MUNOZ-SANCHEZ A., et al. [Tranexamic acid therapy decreases mortality of traumatic hemorrhagic shock].[Article in Spanish] Med Intensiva. 2011, Jun-Jul; 35(5):286-7. doi: 10.1016/j.medin.2011.01.012. Epub 2011, Mar 5. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2017048157A1 (ru) | 2017-03-23 |
RU2015139735A (ru) | 2017-03-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Pabinger et al. | Tranexamic acid for treatment and prophylaxis of bleeding and hyperfibrinolysis | |
Pacheco et al. | An update on the use of massive transfusion protocols in obstetrics | |
Inbal et al. | Coagulation factor deficiencies and pregnancy loss | |
AU2006257073B2 (en) | ADAMTS13-comprising compositions having thrombolytic activity | |
KR101567762B1 (ko) | Fvⅲ 농축물을 포함하는 프로트롬빈 복합체 농축물의 상승적 치료 용도 | |
Ikezoe et al. | Recombinant human soluble thrombomodulin safely and effectively rescues acute promyelocytic leukemia patients from disseminated intravascular coagulation | |
JPH0780783B2 (ja) | 出血障害の治療のための第▲VII▼a因子を含有する治療組成物 | |
Ramaglia et al. | Soluble complement receptor 1 protects the peripheral nerve from early axon loss after injury | |
KR101241434B1 (ko) | 국소 기관, 기관지 또는 폐포의 출혈 또는 객혈의 치료방법 | |
KR20140135219A (ko) | 자간전증의 치료에서의 안티트롬빈의 용도 | |
US20190343930A1 (en) | Method for preventing and treating pathological renal tissue injury | |
RU2651778C2 (ru) | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока | |
JP2017524675A (ja) | 神経外傷性障害において第xii因子インヒビターを使用する療法 | |
RU2663464C1 (ru) | Комбинаторная терапия для лечения геморрагического шока | |
KR20060126762A (ko) | 외상의 말기 합병증을 치료하기 위한 인자 ⅴⅰⅰa의 용도 | |
US11213574B2 (en) | Methods for safe and effective thrombolysis using sequential administration of tissue plasminogen activator and mutant pro-urokinase | |
JP6535036B2 (ja) | 出血性疾患の治療における止血を改善するためのヒトプロトロンビン及び活性化第x因子の組成物 | |
WO1997035609A1 (fr) | Inhibiteur de la neoformation de vaisseaux sanguins renfermant un inhibiteur du mecanisme d'action du facteur tissulaire | |
Heilmann et al. | Successful treatment of life-threatening bleeding after cesarean section with recombinant activated factor VII | |
US20220072110A1 (en) | Plasminogen for treating and preventing microthrombosis | |
CN110114074B (zh) | 用于治疗或预防出血的凝血因子替代产品 | |
JP2002529515A (ja) | ヘパリンにより誘発される血小板減少症の処置法 | |
ES2219094T3 (es) | Uso de proteina c para el tratamiento de la purpura trombocitopenica y el sindrome hemolitico uremico. | |
JP6289511B2 (ja) | 羊水塞栓の治療剤 | |
Draxler et al. | Anti-fibrinolytics |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HE9A | Changing address for correspondence with an applicant | ||
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20220228 |